Formacin de colores por la accin enzimtica de distintos cromgenos

SUCCINODESHIDROGENASA
Succinico +Sal de tetrazolio(incoloro) =
Fumarico +Formazan(azul)
1.- Cortes en criostato,
2.- Secar e incubar en medio
durante 45 min a 37 C. En el
momento de hacer la tecnica se
mezclan 0.9 ml de la SOLUCION DE
TETRAZOLIO (liquido amarillo) y
0.1 ml del SOLUCION DE SUCCINATO
S0DICO. (liquido blanco)
3.- Lavar brevemente en suero
fisiologico frio.
4.- Escurrir y fijar en formol salino
15- 30 min.
5.- Lavar bien en AD.
6.- Montar en gelatina-glicerina

P
X

H2O
2

P
X

H2O
2

Molcula
coloreada

DAB
(cromgeno)
P
X

H2O

NADPH diaforasa
1.- Cortes por congelacin
en criostato.
2.- Poner en
SOLUCION INCUBADORA
45 min a 37C.
3.- Lavar con suero
fisiologico frio.
4.- Colocar
SOLUCION FORMOL SALINO
15-30 min.
5.- Lavar en AD.
6.- Montar en gelatinaglicerina..

Tras una
fijacin,
preferent
emente
por

Permeabiliza
r el tejido
con un
disolvente
de lpidos

La concentracin de
los sustratos (NADPH y
azul de tetrazolio)
vara segn el tejido o
el proceso de fijacin.

Esta tcnica
permite
detectar
neuronas que
expresan la
enzima
sintasa del
xido ntrico
de una forma
sencilla y
rpida.
Es el

Proceso Para
La Deteccin
De La
Actividad
NADPH

formazn el
producto
coloreado e
insoluble que
se puede
observar con
el
La reaccin es NADPH + tetrazolio =
microscopio
NADP ++ formazn.
ptico,
incluso con el
Se asocia a la enzimas sintasas del xido ntrico en sistema
electrnico.
nervioso y vascular.

P
X

H2O
2

P
X

H2O
2

Molcula
coloreada

DAB
(cromgeno)
P
X

H2O

Formacin de colores por la accin enzimtica de distintos cromgenos

Se basa en la capacidad que tienen algunas enzimas

del tejido de mantener funcional su centro activo tras
el proceso de fijacin.
Reaccin
enzimtica
convierte a
unos
sustratos
solubles e
incoloros
en
productos
insolubles
y
s sustratos
son especficos para el enzima.
coloreados.
Los productos se depositan en el lugar preciso donde se
produjo la reaccin, es decir, donde se localiza el
enzima.
En consecuencia, es muy importante conocer con
exactitud la localizacin histoqumica de las enzimas.