Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
depun pe peretele eprubetei sau la fundul mediului (Streptococcus). Unele bacterii secreta n mediu pigmenti
difuzibili ca de exemplu bacilul piocianic (Ps.aeruginosa).
Cultivarea bacteriilor pe medii solide. Introducerea mediilor de cultura solide a nsemnat
un progres urias n tehnicile de diagnostic, deoarece permite dezvoltarea distincta a microbilor,
sub forma de colonii izolate. O colonie bacteriana este o micropopulatie ce rezulta din nmultirea
unui singur microb pe un mediu, vizibila n general cu ochiul liber.
Cel mai simplu mediu solid este geloza simpla, ce se obtine prin adaugarea la bulion a unei
substanta gelificabile, care de regula este geloza, un polizaharid obtinut din alga marina agaragar. La aceast mediu simplu se pot adauga diferite ingrediente (snge de oaie, ser, ascita,
extract de drojdie etc.) pentru a putea cultiva bacteriile pretentioase.
Caracterele culturale sunt foarte importante n identificarea microbilor. Ele se apreciaza fie
cu ochiul liber, fie cu ajutorul unei lupe. Elementele ce se descriu, n general, sunt dimensiunea,
forma, pigmentul, consistenta, aderenta la mediu, activitatea hemolitica si unele modificari pe
care microorganismele le produc n mediul respectiv.
Coloniile cu aspect neted, cu marginile regulate si care se suspenda omogen n ser
fiziologic se numesc colonii de tip S (smooth), pe cnd coloniile aceleiasi specii, cu suprafata
rugoasa, relief si margini neregulate si care aglutineaza sponatan n ser fiziologic - colonii de tip
R (rough). n general, cu unele exceptii, coloniile S apartin tupinilor virulente, pe cnd cele R sunt
nevirulente.
Cultivarea microbilor pe medii solide permite, de asemenea, numaratoarea de germeni ntrun anumit produs. Acest aspect este deosebit de important deoarece n multe infectii criteriul de
implicare etiologic este numarul bacteriilor n produsul de examinat (infectii urinare).
Medii speciale. Exista situatii n care izolarea unui microb necesita medii deosebite care sa
favorizeze selectarea lui din produse intens contaminate.
Mediile de mbogatire sunt medii lichide care permit nmultirea preferentiala a unui microb
dintr-un amestec. Astfel sunt mediile cu continut mare de clorura de sodiu (1-10%) n care se pot
dezvolta numai bacterii halofile ca, de exemplu, stafilococul (mediul Chapmann lichid) si
enterococul. Unele medii de mbogatire au ca factor electiv anumite substante, ca, de exemplu,
selenitul acid de sodiu, care permite dezvoltarea salmonelelor din materiile fecale. Alte medii se
bazeaza pe propietatea unor germeni de a se dezvolta la un pH mai acid sau mai alcalin dect
majoritatea speciilor bacteriene de interes medical. Astfel, vibrionul holeric se dezvolta la un pH
alcalin (9) iar brucelele la la un pH acid (6).
Medii selective. Daca un mediu de mbogatire se solidifica, rezulta un mediu selectiv care
are avantajul obtinerii microbilor sub forma de colonii izolate. Datorita acestor medii, izolarea si
identificarea bacteriilor este astazi mult simplificata. Mediile selective, care se bazeaza pe
particularitatile metabolice ale unor specii microbiene sau mai ales pe rezistenta naturala a
acestora la antibiotice, sunt utilizate n mod curent n laboratoarele de bacteriologie, deoarece
permit, practic, izolarea dintr-un amestec de microbi, a oricarui microb n cultura pura.
Mediile de diagnostic sunt medii de cultura care evidentiaza anumite proprietati fiziologice
si caractere biochimice ale tulpinilor bacteriene pe baza carora acestea pot fi identificate. Astfel,
de exemplu, numeroase specii bacteriene se recunosc pe baza zaharurilor pe care le
fermenteaza. Mediile de diagnostic cu zaharuri contin zaharul de cercetat si un indicator de pH.
n cazul n care bacteria nsamntata n acest mediu va fermenta zaharul, culoarea mediului se
va schimba dupa cteva ore datorita scaderii pH-ului.
BACTERIILOR
5.1. Temperatura
Temperarura optima de dezvoltare a bacteriilor este cea a habitatului lor natural. n functie
de aceasta temperatura, bacteriile se mpart n psihrofile, care se nmultesc optim la 20C dar si
sub aceasta temperatura, mezofile, cu temperatura optima cuprinsa ntre 20-40C si termofile,
care se nmultesc optim la peste 45C. Bacteriile mezofile sunt cele patogene deoarece se
nmultesc la temperatura organismului, fiind denumite si bacterii homeoterme.
Limitele de temperatura n care aceste bacterii pot sa creasca sunt nsa mai mari si variaza
de la specie la specie. Astfel, gonococul si meningococul nu suporta variatii mai mari de 1-2C
fata de temperatura optima, spre deosebire de enterobacterii, care cresc n limite foarte largi.
Microorganismele sunt sensibile la temperaturile ridicate, aplicatia practica a acestui aspect
fiind sterilizarea.
Temperaturile moderat scazute, ca, de pilda, cea de +4oC din frigidere, nu distrug bacteriile,
dar opresc n general nmultirea lor prelungindu-le viabilitatea. Din acest motiv, majoritatea
produselor biologice sau patologice destinate examenului bacteriologic se pastreaza n aceste
conditii. Totusi, exista tulpini microbiene care se nmultesc si la temperatura frigiderului ca, de
exemplu, tulpinile criogene de Pseudomonas aeruginosa, ce se nmultesc la 0oC si tulpini din
familia Enterobacteriaceae (E.coli) care se n nmultesc la +5oC. Acest aspect trebuie luat n
calcul de catre medicul bacteriolog, mai ales acolo unde implicatia etiologica a unui germene
ntr-o infectie se bazeaza pe criteriul numeric.
Congelarea. Daca o suspensie bacteriana este supusa nghetului la temperaturi nu prea
mici fata de 0oC, cristalizarea apei determina formarea unor spatii ce contin solutii concentrate
de saruri care nu cristalizeaza dect la temperaturi mult mai joase (-20C pentru NaCl de
exemplu), cnd solutiile devin saturate ssi pot cristaliza. Aceste concentratii ridicate de saruri
minerale, la care se adauga cristalele de apa, vor leza structurile bacteriene. Prin nghetare nu
vor fi omorte toate celulele unei suspensii, dar nghetul ssi dezghetul repetat scade foarte mult
numarul de bacterii viabile.
Conservarea prin congelare. Temperatura congelatoarelor casnice (-20C) nu este destul de
scazuta pentru a permite conservarea bacteriilor. Temperatura optima este cea realizata de CO2
(-78C) sau de azotul lichid (-180C). Conservarea bacteriilor, a virusurilor prin congelare este
favorizata de adaosul de glicerol sau dimethilsulfoxid. Acesti agenti chimici induc o solidificare
amorfa, vitroasa care nlocuieste solidificarea prin cristalizare.
Prin liofilizare (desicare brusca la -78oC), care este o metoda de conservare a microbilor, se
extrage practic ntreaga apa libera din celulele bacteriene, ceea ce are ca urmare cresterea
stabilitatii biopolimerilor si ncetarea metabolismului. Bacteriile liofilizate se pastreaza ani de zile.
5.2. pH-ul
Bacteriile se pot dezvolta n limite largi de pH, cele patogene pentru om dezvoltndu-se
optim la un pH de 7,2-7,4. Exista si exceptii ca, de pilda, bacteriile din genul Brucella care cresc
la un pH de 6,0 si vibrionul holeric la pH de 9,0. Lactobacilii, prezenti n flora vaginala normala se
dezvolta chiar si la un pH de 3,9.
Unele bacterii modifica prin procesele metabolice pH-ul mediului. Aceasta modificare poate
opri nmultirea lor sau chiar distruge cultura. Din acest motiv, multe medii au n compozi tia lor
solutii tampon care mentin pH-ul n limite convenabile.
Modificarea de catre o bacterie a pH-lui unui mediu poate avea valoare deosebita n
identificarea unui microb si poate fi sesizata prin adaugarea n mediu a unui indicator de pH.
Foarte multe bacterii se identifica biochimic prin proprietatea lor de a fermenta diferite zaharuri.
Aceasta capacitate se evidentiazaa tocmai prin nsamntarea unei bacterii pe mai multe medii
ce contin fiecare alt zahar si un indicator de pH. n cazul fermentarii, acidifierea va determina
schimbarea culorii mediului.
5.3 Ultrasunetele
Ultrasunetele cu o frecventa peste 20.000 de cicli/s sunt bactericide. Bacteriile si virusurile
sunt distruse de ultrasunete ntr-un interval de o ora. Ultrasonarea microorganismelor se
foloseste mai putin pentru sterilizare, ct pentru a obtine diferite componente bacteriene sau
virale, cum sunt: enzime, pereti celulari, acizi nucleici bacterieni n scopul cercetarii acestora.
5.6. Radiatiile
5.6.1. Razele neionizante