CONSIDERAII GENERALE

ALE PERMEABILITII I
TRANSPORTULUI PRIN
MEMBRANE

 Membranele biologice au permeabilitate selectiv, iar

unele permit trecerea unei substane numai ntr-un sens,
cnd permeabilitatea este ireciproc.
Asupra permeabilitii acestor membrane acioneaz
factori pasivi:

coeficientul de partiie
gradientul osmotic
dimensiunea particulelor
gradientul electric
difuzia prin schimb ionic

factori care tind s micoreze energia liber a celulei

odat cu creterea entropiei, precum i factori activi:
difuzia facilitat
transportul activ

care acioneaz n vederea meninerii biostructurii, adic

spre organizare i deci, nu n direcia nivelrii factorilor de
potenial.

 n cadrul transportului pasiv, atunci cnd

are loc i un transport de ioni, deoarece
mediul intracelular are n general o
ncrctur electric negativ n raport cu
mediul extracelular, pe lng gradientul de
concentraie apare i un gradient de
potenial electric, care imprim ionilor o
energie suplimentar, astfel c suma
acestor
dou
energii,
determin
caracteristicile transportului pasiv.

Transportul prin difuziune

Difuziunea este un fenomen cu caracter universal, prin care materia

e transportat de la un punct la altul, datorit unui gradient de
concentraie.
Mrimea coeficientului de permeabilitate poate da informaii privind
mecanismul molecular al permeabilitii, aceste informaii putnd fi
obinute i corelate prin compararea coeficienilor calculai prin:
variaia parametrilor sistemului (concentraia componentelor, presiune,
temperatur).
variaia proprietilor particulei permeante (greutate molecular,
geometrie molecular, structur chimic).
variaia proprietilor membranei (compoziie lipidic, proteic, sarcina
lipidelor sau proteinelor).

Aceste studii permit o mprire a proceselor de permeabilitate n

dou grupe:
difuzie simpl
difuzie facilitat

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia neelectroliilor.

Cele mai intense cercetri privind permeabilitatea neelectroliilor au

fost efectuate Collander i colaboratorii si, lucrnd pe alge.
Din experienele efectuate, precum i din alte date similare privind
celulele epiteliale i celulele sngelui, s-au dedus urmtoarele:
1) Membrana celular se comport ca o barier lipidic, permeabilitatea fiind
determinat n primul rnd de aceleai fore, care determin repartiia
ntre ap i lipide.
2) Membrana celular acioneaz ca o barier de difuzie care permite
moleculelor mici s treac mai uor dect cele mari.

Aceste rezultate pot fi explicate printr-un model de difuzie simpl, n

care permeabilitatea este mprit n trei etape diferite:
1) Trecerea unei particule din exterior, n faza hidrofob a membranei.
2) Difuzia prin membran.
3) Ieirea din membran n cealalt soluie exterioar.

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia neelectroliilor.
Dac presupunem c fluxul de difuziune a substanei
prin membran se supune legii lui Fick, atunci masa de
substan - dm - transportat n intervalul de timp
elementar - dt - prin membrana de suprafa S se va
putea exprima prin relaia:

dm
dC
= DS
dt
dx
unde D este coeficientul de difuzie ( [D] = m2/s ).
Permeabilitatea crete odat cu coeficientul de partiie
membran / ap i descrete odat cu creterea greutii
moleculare.

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia neelectroliilor.
Modelul de baz al permeabilitii este determinat, n
primul rnd, de caracteristicile fizice i chimice ale
compuilor individuali n soluia apoas i n al doilea
rnd de proprietile membranei.
Exist excepii importante fa de tendina general n
permeabilitatea neelectroliilor:
Moleculele mici hidrofile, ca apa, i n multe membrane ureea i
alte amide, difuzeaz mai uor dect ne ateptm; aceste
excepii indic prezena cilor de trecere hidrofile, canale sau
pori, care pot fi traversate numai de molecule mici.
Moleculele ramificate trec mai uor dect izomerii neramificai;
aceasta se explic prin faptul c o membran, n contrast cu o
faz lipidic omogen, are o structur ordonat, bistratificat.

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia electroliilor.
Cnd o membran separ dou soluii ale aceluiai
electrolit, dar de concentraii diferite, va avea loc un
transfer al electrolitului dinspre soluia mai concentrat
spre cea mai diluat.
Nu este sigur c difuzia simpl are un rol important n
transportul ionilor anorganici. Forele de interaciune
dintre ioni i ap sunt mult mai mari la neelectrolii.
Bistraturile lipidice au o rezisten electric foarte
ridicat i deci sunt puin permeabile fa de ioni.
Pentru ionii organici, bistraturile lipidice
membranele celulare sunt uor permeabile.

deci

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia electroliilor.
Transportul ionic prin difuzie simpl, se gsete n
membranele epiteliale, cu capete terminale care nu sunt
complet nchise, ca n tubii uriniferi, sau n intestinul
subire.
La traversarea acestor membrane o substan nu trebuie
s nving o barier continu de lipide deoarece
membranele celulelor adiacente se apropie una de alta
numai de-a lungul unor fii nguste, n puncte de contact
asemntoare unei suduri n puncte.
Difuziunea, alturi de osmoz, filtrare, ultrafiltrare i
dializ, intervine n fenomenele de transport a
substanelor necesare organismului, sau de eliminare a
produilor de catabolism.

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia electroliilor.
Prin difuziune se realizeaz transferul substanelor
dizolvate n lichidele biologice, dintr-un teritoriu n altul.
Indiferent c vorbim de snge, limf, lichid cefalorahidian,
ultrafiltrat glomerular, lichid interstiial sau intracelular,
difuziunea diferitelor substane solvite (molecule
nedisociate sau ioni) poate decurge pasiv sau activ.
Sensul difuziunii pasive este dictat de diferena de
concentraie, sau presiune parial, dintre teritorii
delimitate de membran.

Transportul prin difuzie simpl.

Difuzia electroliilor.
Osmoza este fenomenul care apare cnd dou soluii,
cu solvent comun i de concentraii diferite, sunt
separate de o membran semipermeabil (permeabil
numai pentru solvent nu i pentru solvit) i cnd solventul
este transportat din teritoriul cu concentraie mai mic
spre teritoriul cu concentraie mai mare.
Consecina fenomenului este apariia unei presiuni
osmotice orientate spre solvent (sau spre teritoriul cu
concentraie mai mic).

Transportul prin difuzie simpl

Membrana biologic i bariera biologic

n organismul uman substanele nutritive sunt introduse n tubul digestiv i la

nivelul intestinului vor suferi un prim pasaj, trecnd n torentul circulator.

Din vasele de snge, ele vor trece n spaiul intercelular i apoi n spaiul
intracelular.

n cursul acestui drum vor fi strbtute mai multe bariere:

a) bariera intestinal, care este o barier pluricelular;
b) bariera capilarului, care este o barier celular, (pereii capilarelor fiind alctuii dintrun singur strat de celule);
c)

membrana celulei i

d) membrana organitelor celulare i membrana nuclear.

Toate aceste bariere biologice posed caracterul de semipermeabilitate,

care nu se limiteaz deci la membranele celulare, ci este un fenomen general,
care guverneaz procesele de transport n interiorul organismului, prin diferite
sisteme (bariere pluricelulare, bariere celulare, membrane celulare i
subcelulare).

Transportul prin difuzie simpl

Legile presiunii osmotice

Legea concentraiei
La temperatur constant, presiunea osmotic este
direct proporional cu concentraia molar a
soluiei:
= K C
unde
K - constant
C - concentraia molar a soluiei
- presiunea osmotic.

Transportul prin difuzie simpl

Legile presiunii osmotice

Legea temperaturii
La concentraie constant, presiunea osmotic
variaz direct proporional cu temperatura absolut
la care se face determinarea :
= K T
unde
K - constant
T - temperatura absolut
- presiunea osmotic.

Transportul prin difuzie simpl

Legile presiunii osmotice

Cnd variaz att concentraia molar ct i temperatura soluiei la

care se face determinarea, legile enunate mai sus, se pot reuni:

=KCT
Sau, echivalent:

V=nKT
( legea Vant Hoff )
unde, n este numrul de moli de substan dizolvat.

Ca urmare a analogiei cu legea gazelor perfecte, se poate trage

urmtoarea concluzie: presiunea osmotic exercitat de substana
solvit este egal cu presiunea exercitat de aceeai substan, n
aceeai cantitate, adus n stare gazoas, care ar ocupa un volum
egal cu volumul soluiei.

Transportul prin difuzie simpl

Legile presiunii osmotice

n cazul existenei unei presiuni osmotice, datorit creia o

substan este vehiculat printr-o membran ce separ dou
compartimente, se efectueaz un lucru mecanic numit travaliu
osmotic:

L=-

Po +
Po

dp
Po
nRT = nRTln
p
P o+

unde Po este presiunea iniial din compartimentul 1.

Dac trebuie vehiculat o cantitate de ap contra unei diferene de

presiune osmotic, atunci este necesar conservarea unei energii
din exterior pentru a efectua travaliul respectiv, pe care n acest
caz l putem numi travaliu contraosmotic.

Transportul prin difuzie simpl

Limitele legilor presiunii osmotice

Osmoza este un fenomen de transport care poate fi

facilitat sau mpiedicat.

Abateri de la legile osmozei pot s apar datorit

polarizrii membranelor celulare (- n interior, + n
exterior), care modific legile osmozei.

O alt abatere de la legile osmozei este generat de

permeabilitatea ireciproc a membranelor celulare (a
barierelor biologice pe un plan mai general).

Deoarece procesele de permeabilitate se produc ntr-un

singur sens (permeabilitate ireciproc) se produc abateri
de la legile osmozei atunci cnd se schimb sensul
transportului.

Transportul prin difuzie simpl

Limitele legilor presiunii osmotice

Legile osmozei se aplic numai la anumite diluii: n cazul

concentraiilor foarte mari sau foarte mici de substan solvit, legile
osmozei nu se mai aplic.

Pentru aplicarea legilor osmozei, exist limite de temperatur. La

temperaturi mai mari de 40C, legile osmozei devin inoperante.

Electroliii nu respect legile osmozei, avnd o presiune osmotic

msurat diferit de presiunea osmotic teoretic.
Abaterea se produce datorit faptului c n soluie electroliii
disociaz, iar prin disociere apar noi particule care contribuie la
presiunea osmotic.
n acest caz, trebuie fcut o corecie, prin introducerea n calcul a
coeficientului i, care depinde de gradul de disociaie al electrolitului:

V=inRT

Transportul prin difuzie simpl

Metode de msurare a presiunii osmotice

1. Metoda osmometrelor

A fost folosit de Vant Hoff

Const n msurarea nlimii la care se ridic

lichidul ntr-un osmometru;

Transportul prin difuzie simpl

Metode de msurare a presiunii osmotice

1. Metoda biologic

Const n msurarea volumului diferitelor celule,

n momentul n care intervin modificri de
concentraie
n
mediul
intracelular
sau
extracelular .

Nu este o metod de precizie (e mai mult

calitativ), dar ea pune n eviden foarte
pregnant faptul c volumul celular este
condiionat de osmoz.

Transportul prin difuzie simpl

Metode de msurare a presiunii osmotice

1. Determinarea punctului crioscopic

Fiecare lichid are un anumit punct de ngheare

(congelare).

Pentru ap, punctul crioscopic se atinge la 0C.

n momentul n care se realizeaz o soluie, prin

adugarea unei anumite substane, punctul crioscopic
se modific (se reduce).

Diferena dintre punctul crioscopic al soluiei i

punctul crioscopic al solventului d o valoare
numit constant crioscopic ( ).

ntre i presiunea osmotic exist o proporionalitate.

Un miliosmol dintr-o anumit substan reprezint

greutatea molecular a acelei substane, exprimat n
miligrame/litru.

Un miliechivalent dintr-un anumit element, este

reprezentat de greutatea sa atomic exprimat n
miligrame, mprit la valena sa.

Macromoleculele prezente n plasm se gsesc sub

form de coloizi.
De aceea presiunea osmotic ce li se datorete se
numete i presiune coloidosmotic.
Valoarea presiunii coloidosmotice este relativ mic,
reprezentnd doar 0,5% din presiunea osmotic total a
plasmei sanguine

Transportul prin difuzie facilitat

Se cunosc procese, n cazul membranelor biologice, n

care transportul moleculelor de solvit nu se realizeaz
mpotriva gradienilor de concentraie sau de potenial, ci,
ca i n cazul transportului pasiv, n acelai sens, cu
deosebire c viteza acestui transport este mult mai
mare dect prevd legile transportului pasiv.

Aceast varietate de transport activ, stabilit nc din

1943 de Danielli, este numit difuzie facilitat, sau
favorizat.

Transportul favorizat are caracteristici

transportul activ i cu difuzia simpl.

Este necesar formarea unor compleci ntre substan i

transportor.

comune

cu

Difuzia facilitat a neelectroliilor

S-a observat c viteza de transport prin membrana hematiei este

mult mai mare pentru unele zaharuri, cum ar fi D-glucoza, fa de
altele ca de exemplu L-glucoza.

Aceasta arat c trebuie s fie un sistem de transport specific n

membran, care recunoate moleculele individuale de glucoz i
accelereaz trecerea lor prin membran.

Modelul transportului include o serie de caracteristici:

1) forma pasiv a transportului;
2) saturaia;
3) existena coeficienilor de cuplu negativ care pot duce la o supraestimare
a permeabilitii pentru glucide, rezultat din msurtori i care cauzeaz
fenomenele de cisinhibiie, trans-stimulare i contratransport de
substane marcate;
4) existena coeficienilor transversali negativi pentru dou zaharuri diferite
care au fenomenele de cisinhibiie, transstimulare i contratransport.

Difuzia facilitat a apei

n ceea ce privete transportul apei prin membrana celular, s-a

artat pentru coeficientul de permeabilitate, determinat prin schimb
izotopic, corespunztor difuziei n condiii de echilibru, (a trecerii apei
n ambele sensuri) c este mai mic dect coeficientul de
permeabilitate osmotic, msurat n situaia n care apare un flux net
de ap prin membran.

Acest flux net de ap va facilita traversarea membranei, deci o

molecul de ap va trece mai uor cnd i alte molecule de ap trec
mpreun cu ea i n acelai sens.

Membranele celulare au permeabilitatea ridicat pentru ap, ceea ce

impune nu existena unui strat lipidic continuu, ci din contr,
existena unor pori umplui cu ap, care traverseaz membrana.

Existena fluxurilor de ap este corelat cu procesul de a tampona

schimbrile de compoziie, care intervin n celul sau n exteriorul ei.

Difuzia facilitat a electroliilor

Membranele celulare sunt dotate cu mecanisme speciale pentru

transportul care accelereaz trecerea ionilor prin bariera de lipide.

Aproape toate membranele celulare au o selectivitate crescut fa

de ioni.

Conductibilitatea sodiului i potasiului la celulele musculare i

nervoase depinde de potenialul electric i de timp.

Se cunosc toxine care pot bloca conductibilitatea anumitor ioni:

tetrodotoxina - TTX - blocheaz conductibilitatea sodiului

tetraetilamoniul - inhib conductibilitatea potasiului

verapamilul - inhib conductibilitatea i asimilarea de Ca++ la

nivelul celulelor din muchiul inimii.

Difuzia facilitat a electroliilor

Dei nu sunt cunoscute toate detaliile mecanismelor specifice de

accelerare a trecerii pasive a ionilor prin membranele celulare, au
fost deduse urmtoarele:

2. Transportul prin purttori

Modelul este pstrat, dei nu are un rol major n transportul fiziologic
de ioni prin membranele celulare.
Studierea ionoforilor, antibiotice de origin bacterian, care
faciliteaz permeaia cationilor anorganici, a evideniat existena
unui transport uniport electrogenic (de ex. transportul K+ sau Rb+
de ctre valinomicin), sau un transport antiport electroneutru
(transportul n sens contrar al K+ i H+ de ctre nigericin).

Difuzia facilitat a electroliilor

1. Pori conductori din punct de vedere electric

Existena porilor selectivi de ioni n membrana celular a

fost discutat mult timp, dei au existat argumente
favorabile privind fluctuaia conductibilitii membranei.

Studierea conductibilitii prin pori s-a fcut prin detecie

direct (experimental) ct i prin observarea altor
caracteristici cum sunt:
zgomotul de curent
difuzia n ir.

Difuzia facilitat a electroliilor

a)

S-a observat c la concentraii mari de polipeptide se

formeaz multe canale ai cror timpi de deschidere pot
coincide parial, astfel nct conductibilitatea total a
membranei este supus unor fluctuaii n timp.
Dac se menine un potenial constant n membran,
aceste fluctuaii sunt percepute ca fluctuaii de curent
sau ca zgomot de curent.
Din distribuia spectral a acestor fluctuaii, n anumite
condiii, conductibilitatea unui canal i durata medie a
canalelor pot fi deduse din calcul.
Pentru apariia zgomotelor de curent este necesar ca
aceste canale s nu fie deschise continuu, ci s se
deschid i s se nchid spontan.

Difuzia facilitat a electroliilor

a)

Difuzia n ir, s-a observat n cazul ionilor de potasiu prin membrane de

axoni gigani, cnd difuzia n interiorul membranei se realizeaz prin grupe
de ioni, explicaia fiind corelat cu presupunerea c membrana are porii de
aa natur nct ionii nu se pot depi unul pe cellalt, ci se deplaseaz n
ir.
Porii conductori din punct de vedere electric, exist n aproape toate
membranele celulare i sunt rspunztori de curgerea pasiv a
cationilor (concluzia stabilit pentru canalele de K+ din celulele nervoase
i musculare).
Existena porilor conductori electrici a fost atestat i pentru nervul motor
al muchilor. Acetia se deschid cnd acetilcolina este eliberat din
membrana principal n interstiiul sinaptic i se nchid spontan, dup scurt
timp. Aceste canale sunt permeabile pentru K+, Na+, Cl-.
Din analiza zgomotului electric se tie, de asemenea, c i conductibilitatea
pentru Ca++ a membranei celulare din muchiul inimii i a unor celule din
ganglioni, este influenat de porii electrici conductibili.
Un rol special este jucat de canalele de Na+ i Ca++ din membranele
excitabile, canale care se deschid datorit unei tensiuni i se nchid
automat dup scurt timp. Porul este nchis la potenialele normale ale
membranei. Dac potenialul membranei scade sub o valoare limit, porul
se deschide i permite ptrunderea ionilor de Na.

Difuzia facilitat a electroliilor

1.

Pori neconductori - difuzia de schimb

Un exemplu n acest sens, este sistemul de
transport al anionilor prin membrana eritrocitelor,
care nlesnete schimbul de cu Cl-.

Transportul prin flux cuplat ntre diferite substane

Fluxurile de transport sunt conduse n primul rnd de

propria lor diferen de potenial electric, dar chiar i
n aceste cazuri au fost observate fenomene de
fluxuri cuplate, n mod deosebit ntre o component
chimic "i" i speciile izotopice C.
Ele au fost observate i n diferite substraturi, care
au structuri moleculare similare (de exemplu Dxiloza i D-glucoza n transportul zahrului).
Aceste fluxuri cuplate se formeaz datorit prii de
recunoatere proteic a unui transport, care nu este
selectiv pentru un singur component.
Acestea permit legturi cu ali compui i trecerea
lor dac au structuri sau mrimi similare.

Transportul prin flux cuplat ntre diferite substane

n plus, fa de aceste cazuri exist n membranele biologice i

o form de flux ntre particulele cu structuri complet diferite
cum sunt:

NaCl i ap

H+ i glucoz

Na+ i aminoacizi.

Transportul activ

Termenul a fost introdus de Overton, de la

observaia c celulele vii pot menine diferene fixe
de concentraie, ntre citoplasm i mediu, pentru
acele substane care pot difuza prin membran.

Acest termen este utilizat pentru situaia cnd

membrana celular lucreaz n procesul de
transport mpotriva gradientului de concentraie.

Transportul activ se desfoar cu un consum

de energie metabolic, fiind asigurat de anumite
substane transportoare, cum ar fi enzimele, sau ali
componeni proteici ai membranei.

Substanele transportoare formeaz mpreun cu

substanele de transport o combinaie complex.

Transportul activ

Compusul penetreaz membrana cu consum de energie,

ulterior complecii se desfac elibernd substana transportat i
refcnd i vectorul.

Se consider c n cea mai mare parte celulele posed un

sistem de repulsie activ pentru Na+ i de absorbie activ
pentru K+, ambele procese fiind cuplate.

n general toate celulele, i mai ales, celulele excitabile

pompeaz sodiul din interior ctre exterior i potasiul ctre
interior, cu consum de energie metabolic celular, fiind aa
numita pomp ionic de sodiu i potasiu.

n literatur sunt descrise i alte pompe, de exemplu cele care

transport Ca++, H2O, Cl-, contribuind la ndeplinirea anumitor
funcii specifice pentru diferite celule.

Transportul activ

Transportul activ al ionilor de Na+ i K+ se explic prin

intermediul ATP-azei.

Celula furnizeaz energie prin intermediul moleculei de ATP.

Eliberarea energiei se realizeaz prin scindare n ADP i P sub
influena unei ATP-aze.

Transportul activ primar

Primul sistem de transport activ recunoscut i descris a fost

transportul de sodiu i potasiu.

Celulele transport activ ioni de sodiu din interior spre exterior

i ioni de potasiu de la exterior spre interior. Transportul celor
doi ioni este un cuplu puternic. Dac partea exterioar este fr
potasiu, fluxul activ de sodiu este inhibat, iar dac partea
intern este fr sodiu, fluxul activ de potasiu este oprit.

Energia necesar transportului este procurat de ATP.

Transportul activ este inhibat de glicozidele digitalice

(ouabaina) fr s afecteze producerea de ATP i utilizarea
acestuia.

Procesul de transport activ poate fi inversat pe o anumit

ntindere.

Transportul activ primar

Alte sisteme de transport, cu clivajul legturilor

macroergice fosfatice:

sistemul de transport al calciului n fibrele musculare; doi

moli de calciu sunt luai pentru un mol de ATP.
Acest sistem funcioneaz n timpul relaxrii muchiului i
ndeprteaz ionul de calciu din plasma celular.

sistemul de fosfotransfer.

transportul activ de hidrogen (sistem redox).

Transportul activ secundar

Un exemplu de transport
activ
secundar
este
resorbia activ a zahrului
prin rinichi i intestin.

membrana
celular
contraluminar conine o
pomp activ de sodiu care
transport ionii din interiorul
celulei n mediul exterior i
un mecanism de transport
activ pentru glucoz.

n
membrana
celular
luminal
s-a
gsit
un
mecanism de contratransport
pentru sodiu-glucoz.

Transportul prin formare de vezicule

Pentru transportul proteinelor i a altor substane

macromoleculare (G = 4000) s-a dezvoltat un mecanism
special de transport.
Substana ce trebuie transportat este nchis ntr-un scule
al membranei celulare, vizibil la microscopul optic sau
electronic.
Acest buzunar este ataat astfel de membran nct intr n
celul (endocitoz) sau este ca o vezicul care face contact cu
celula i i golete coninutul n afar (exocitoz).
Transportul prin majoritatea membranelor epiteliale este
subiectul unor forme de control hormonal sau a altor
mecanisme de control.
Acest control se poate realiza la anumite etape ale funciei
celulare, cum ar fi: la nivelul nucleotidelor ciclice, prin controlul
Ca2+, sau al activitii metabolice i prin modificri n structura
membranei.

"Teoria membranei" n studiul toxicitii

Faptul c membrana celular poate fi sediul unor

importante efecte toxice, a fost evideniat nc din
1950, de Rothstein.

Deoarece membrana celular este bariera exterioar a

celulei, ea este expus la toat concentraia extracelular a
posibilei toxine, nainte de repausul celulei.

Membrana celular poate interveni fizic i chimic, pentru a

limita ptrunderea unor componeni n interior.

Rothstein a accentuat importana corelrii reactivitii

chimice a toxinei, evideniat in vitro, cu efectele fiziologice
in vivo.

"Teoria membranei" n studiul toxicitii

Cnd globulele roii sunt expuse aciunii metalelor grele, se observ

o cretere dramatic a permeabilitii pasive a cationilor, rezultatul
fiind o cretere net a sodiului intracelular i a volumului hematiilor,
ceea ce conduce la hemoliz.
Acest efect a fost citat de Ball pentru prima dat n 1930.
Benesch i colaboratorii n 1950, sugereaz c modificrile
grupurilor sulfhidril determin modificri de permeabilitate, iar
Rothstein i colaboratorii demonstreaz c acesta este un efect
membranar i definete mecanismul.
n studiile lor, ei au folosit compusul mercuric hidrosolubil, sulfonatul
p-cloromercurfenilic (PCMBS), care penetreaz membrana celular
destul de lent, aparent pe calea canalului anionic.
Aciunea asupra eritrocitelor se manifest printr-o rapid inhibiie a
transportului glucozei, urmat de o cretere caracteristic n
permeabilitatea cationilor.
Aceste rezultate au sugerat c locurile ce controleaz
permeabilitatea cationic au fost mai puin accesibile (probabil n
canalul cationic), dect acele locuri care guverneaz transportul
glucidic.

"Teoria membranei" n studiul toxicitii

Compusul mercuric mult mai liposolubil, p-cloromercurbenzoat

(PCMB) i care penetreaz membrana de 100 de ori mai rapid ca
PCMBS, a dat modificri mult mai mici n permeabilitatea cationic,
dect cele produse de PCMBS.
Ambii compui mercurici au fost foarte reactivi fa de sulfhidrilii
membranei, dar numai cel mai hidrosolubil a atins concentraia
suficient, n canalul cationic, pentru a altera permeabilitatea.
Recent, Grinstein i Rothstein au utilizat vezicule membranare
pentru a demonstra c locurile sensibile sunt ntr-adevr localizate
n membran.
Cnd PCMBS a fost adugat, iar adevratul exterior al veziculei se
afla n afar, saltul permeabilitii cationilor a fost mult mai sczut,
dect atunci cnd PCMBS a fost adugat cnd interiorul veziculei se
afla n afar, adic faa citoplasmatic a membranei.
Deci, ei au identificat clar locul alterat n timpul inducerii hemolizei
de ctre metalele grele i au mbogit cu probe, nelegerea
proceselor de membran care controleaz permeabilitatea
cationilor.

Transport de ioni - ATP-az

Dou sisteme sunt descrise, n care o ntreinere a

unei leziuni membranare d natere la deficiene n
mecanismele de control fiziologice.
Na+, K+ - ATP-aza

Se cunoate de muli ani c Na+, K+ - ATP-aza, sau

pompa de sodiu, este foarte sensibil la inhibarea de
ctre compuii organici ai clorului, inhibiia fiind de
natur necompetitiv.
Inhibiia apare prin interaciunea DDT (1,1,1 - tricloro
-2,2 - bis (p-clorofenil)etan) lipo-solubil cu regiunile
hidrofobe ale proteinelor sau a lipidelor nvecinate.

Transport de ioni - ATP-az

Ca2+ - ATP-aza

Kinter i colaboratorii au efectuat studii care

demonstreaz c producerea unei coji de ou subire,
fragil, la un numr de specii de psri slbatice, a
rezultat din toxicitatea membranei.
Acesta este un exemplu notabil, deoarece grosimea
cojii de ou este unul din cazurile, unde prin expunerea
organismului pe termen lung, la o concentraie sczut
de chimicale, prezent n mediul nconjurtor, s-au
produs efecte toxice semnificative.
Constatrile arat c implicat este DDT i/sau
metabolitul su principal, pentru psri, DDE (1,1 dicloro - 2,2 bis (p-clorofenil) etilen).

Inhibiia competitivitii

Sistemul de transport al anionilor organici, din ficat i rinichi, joac

un rol important n eliminarea multor compui strini.

Utilizarea mai multor pesticide anionice, sau metaboliii lor, pot

inhiba competitiv transportul anionilor organici, pe traseul acestui
sistem, n rinichi.

Dei acest sistem a fost cel mai bine studiat n ficat i rinichi, el
este de asemeni prezent n diverse alte locuri.

Unul din acestea este plexul coroidal, a crui funcie este s

faciliteze micarea metaboliilor neurotransmitorului acid, dintr-o
parte n alta a barierei creier - snge, pentru excreia prin rinichi.

Prin urmare, exist posibilitatea ca pesticidele anionice, sau

metaboliii, s poat concura pentru sistemul transportor i s
limiteze deplasarea acestor compui.

Na+ - cuplat n transportul intestinal al glucidelor

Transportul glucozei cuplat cu Na+ , la nivelul

intestinului este influenat de compuii toxici, cum este
mercurul, n trei moduri:
1.
2.
3.

Pot afecta transportul nsi, n mod direct.

Alternativ, ei pot inhiba Na+ - K+ - ATP-aza i
descongestioneaz gradientul de Na+, deci blocheaz
absorbia.
Pot inhiba fosforilarea oxidativ, cu epuizarea ATP-ului,
pierderea gradientului de Na+ i n final a transportului
glucozei.

Utilizarea veziculelor membranare, derivate din

membrana lumenului intestinal, permit cercettorilor s
examineze efectele specifice asupra transportului,
deoarece ele sunt independente de furnizarea de ATP,
iar investigarea poate fi condus la diferii gradieni
ionici, dup necesiti.

Toxinele bacteriene.
Mecanismele celulare de aciune

Elucidarea mecanismelor celulare, de aciune ale

toxinelor bacteriene, rmne o problem complex.

Aceste toxine pot fi convenabil clasificate, fie dup

membrana afectat (fosfolipaze, hemolizine, lizine,
etc), fie prin aciune intracelular.

Cea din urm pare s aib la baz un mecanism

comun de aciune, ce cuprinde:

1.

legarea de receptori specifici, din membranele plasmatice, ale

celulelor senzitive.

2.

adaptarea sau translocarea prin bariera membranar.

3.

interaciunea cu o int intracelular.

Aceste mecanisme sunt n strns interrelaie.

Toxinele bacteriene.
Mecanismele celulare de aciune

Procesul legrii toxinei, sau ptrunderea ei, apare

similar n multe privine, cu acela prin care hormonii
proteici i alte macromolecule eficiente din punct de
vedere biologic, interacioneaz cu celulele.

Deoarece pare improbabil ca celulele mamiferelor s

posede "receptori sinucigai" pentru toxinele
bacteriene, o posibilitate este c aceste toxine
invadeaz parazitar cile moleculelor reinute normal
de ctre celule.

Un suport pentru aceast ipotez deriv din

similaritile structurale ocante ntre exotoxine i
hormonii glicoproteici.

Toxinele bacteriene.
Mecanismele celulare de aciune

Ambele tipuri de molecule etaleaz un dublu lan, sau

o alctuire din dou componente:

lanul A, sau alfa, posed activitate biologic

lanul B, sau beta, mediaz legarea receptorului.

Cercettorii au artat c unele toxine bacteriene,

incluznd toxina difteric, exotoxina A Pseudomonas,
toxina tetanusului, toxina holeric i citotoxina Shigella,
sunt sintetizate sub form de proenzime inactive i
trebuie s sufere despicarea, separarea proteolitic i
reducerea, pentru a elibera fragmentul activ A.

Toxinele bacteriene.
Mecanismele celulare de aciune

Mult mai specific, analogiile secvenei aminoacizilor, au fost

demonstrate ntre lanurile A i B ale toxinei holerice, tirotropina,
hormonul luteal, coriogonodotropina uman, hormonul stimulator
al foliculilor i mai recent interferonul.
Multe din toxinele bacteriene, fie ca molecule intacte, fie ca
fragmente biologic active, trebuie s intre n celul pentru a atinge
intele specifice.
Exemple evidente, includ toxinele: difteria i Pseudomonas A care
blocheaz prin inactivarea unei proteine citoplasmatice, toxina
holeric care stimuleaz adenilat-ciclaza i toxina Shigella care
acioneaz asupra subunitii ribozomiale 60S.
Toxinele sunt molecule relativ mari; toxinele difteria i
Pseudomonas A au greuti moleculare de 60.000 i respectiv
66.000 daltoni, n timp ce toxina holeric are 82.000 daltoni.
Exist cteva precedente, care atest intrarea unor astfel de
molecule mari n celule.