Вы находитесь на странице: 1из 13

УДК 582. 741: 582.742.2 РОЛЬ ЛЕКТИНОВ В ФОРМИРОВАНИИ МИКРОБНОГО КОМПЛЕКСА РИЗОСФЕРЫ ЛЬНА МАСЛИЧНОГО

Е.Н. Войтович, А.Н. Левчук Запорожский национальный университет

Вивчали сортові розходження лектинів насіння льону олійного і їхній вплив на ріст та морфолого-культуральні особливості різосферного мікрооточення. Встановлено вуглеводну специфічність экзолектинов п'яти сортів льону і виявлена висока лектинова активність насіння сорту Ціан та 1174. При вивченні динаміки росту показані два типи зміни ростових характеристик культури мікроорганізмів на наявність лектинів насіння у середовищі. Відзначено ефект стимуляції галактозою лектинової активності мікрофлори. Лектини, вуглеводна специфічність, морфолого-культуральні типи мікроорганізмів, льон олійний, мікрофлора, різосфера, біотична система.

ВВЕДЕНИЕ Лектины – это углеводсвязывающие белки или гликопротеины, присутствующие практически во всех органах и тканях растений и играющие значительную роль во многих физиологических процессах и экологических взаимоотношениях организма [7]. Лектины могут представлять один из видов запасных белков, выполняющих транспортную функцию, регулирующих деление клеток при прорастании семян [7, 14] и обеспечивающие самонесовместимость при опылении [2]. Показана защитная функция лектинов при всех видах стресса: гипотермическом [8], гипертермическом [16], засолении [15, 17], засухе, бактериальной [1, 4, 5, 13], грибной [11, 12] и вирусной инфекции [3]. Особая роль отводится лектинам при образовании и функционировании симбиотических систем „микроорганизм – высшее растение” [1, 4, 5, 13].

В основе такой разноплановой функциональной активности лектинов лежит углеводная специфичность молекул, обуславливающая способность связываться с тем или иным природным рецептором [7]. При формировании почвенных биоценозов одной из предпосылок будущих взаимоотношений между растением и его микробным окружением служит с одной стороны, способность экзогенных лектинов прорастающих семян обратимо связывать углеводы, локализованные либо в клеточной стенке, либо в капсуле микроорганизмов [6], а с другой стороны – аналогичное распознавание со стороны микроорганизмов [5, 11, 12], а также лектин- лектиновые взаимодействия [4]. Выделяясь из прорастающих семян, лектины растений активируют микроорганизмы, способствуя увеличению их количества в почве и ризосфере растения и поддержанию их в физиологически активном состоянии, что необходимо для развития растения [9]. Целью нашей работы было установление функциональной роли лектинов в образовании биотической системы „микроорганизмы - высшее растение” между льном масличным (Linum usitatissimum L.) и его ризосферой.

УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования служили семена льна масличного сортов Айсберг, Антарес, Циан, 1174, К-6080 из коллекции лаборатории селекции льна Института Масличных культур УААН, а также ризосферная микрофлора сорта Айсберг. Выделение лектинов из семян проводили по методике Маличенко [13] в нашей модификации. Активность лектинов определяли реакцией гемагглютинации [12] и выражали в виде титра агглютинации. Углеводную специфичность лектинов определяли по способности 0,6 М растворов углеводов полностью угнетать гемагглютинирующую

активность лектина [12]. Для определения изоэлектрической точки лектина использовали серию буферных растворов. Выделение 20 морфолого-культуральных типов ризосферных микроорганизмов осуществляли методом серийных разведений смыва корней льна и высева шестого разведения на МПА с последующим переводом в чистую культуру. Влияние экзогенных лектинов семян на культуру бактерий изучали путем совместной инкубации газонной культуры микроорганизмов на МПА с семенами трех сортов льна, лектины которых обладают различной углеводной специфичностью. Для изучения влияния углеводов на лектинсинтезирующую способность микроорганизмов использовали оценку гемагглютинирующей активности культуральной жидкости после трехсуточного роста микроорганизмов на арабинозо-, ксилозо-, глюкозо- и галактозосодержащей среде. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ Выделенные из семян льна масличного лектины отличаются не только различной углеводной специфичностью, но и активностью, о чем свидетельствуют данные табл. 1. Наибольшую активность, о степени которой судили по титру агглютинации, проявляются лектины сортов Циан и 1174. Учитывая белковую природу лектинов, одной из основных физико- химических характеристик является значение изоэлектрической точки. Отмечена корреляция между этим показателем и углеводной специфичностью молекул. Так, специфичные к арабинозе лектины имеют ИЭТ=2,9–3,0; специфичные к лактозе – 8,8–8,9, а специфичные к галактозе лектины сорта 1174 имеют ИЭТ в слабокислой области (5,0). Подобное явление описано ранее [12].

Таблица 1. Некоторые характеристики лектинов семян льна масличного

 

Сорт льна

масличного

 

Углеводы

   

агглютинации

 

 

арабиноза

галактоза

         

Титр

ИЭТ

п/п

глюкоза

лактоза

сахароза

ксилоза

мальтоза

манноза

 

Циан

-

 

- +

+

 

-

- -

   

+ 1:2

3,0

 

Антарес

-

 

- +

+

 

+

- +

   

- 1:1

2,9; 8,8

 

К 6080

+

 

- +

+

 

+

- +

   

+ 1:0

3,0

 

1174

+

+ -

 

-

 

+

+ +

   

- 1:4

5,0

 

Айсберг

-

+ +

 

+

 

-

- -

   

- 1:0

8,9

Примечание: „+” – агглютинация; „-- угнетение гемагглютинации

Различающиеся по углеводной специфичности лектинов сорта были

использованы нами для изучения реакции на них ризосферных

микроорганизмов в эксперименте in vitro. Среди выделенных 20

морфолого-культуральних типов микроорганизмов (МКТ) отмечены две

противоположные реакции со стороны микрофлоры: усиление роста (I) и

образование зоны лизиса (II) вокруг семени (рис 1).

Изучение динамики развития каждого из этих типов реакций

показало одинаковый сценарий развития взаимоотношений на первых

стадиях – усиление роста микроорганизмов. На 3-4 сутки у

микроорганизмов II типа в середине зоны усиления роста появляется

полоса лизиса, которая на 7-е сутки полностью замещает зону усиления

роста (рис. 2). Подобное явление позволяет отнести экзогенные лектины

семян к группе митогенов в первом случае и амитогенов в случае

стимуляции выработки клетками бактерий цитотоксических факторов и

запускания программы лизиса [1, 12, 13].

Различия между МКТ микроорганизмов по типу, а также по степени

выраженности той или иной реакции позволили условно разделить их на

группы. Напомним, что изучаемая микрофлора была выделена из ризосферы льна сорта Айсберг, поэтому в первую очередь ожидалось обнаружение реакции стимуляции роста лектинами именно этого сорта. Действительно, подобная реакция отмечена у 85 % МКТ. При этом около 40 % МКТ усиливали свой рост под действием лектинов сорта Айсберг, но лизировались на среде с семенами других сортов и были отнесены к группе сортоспецифичных микроорганизмов. 25 % МКТ усиливали свой рост во всех вариантах, что позволило отнести их к группе видоспецифичной для льна микрофлоры. По 10 % МКТ бактерий лизировались лектинами одного из изучаемых сортов и вошли в группы неспецифичных для сортового микроокружения (рис. 3). Одной из причин обнаружения подобных компонентов микробного ценоза в ризосфере сорта Айсберг может быть тот факт, что отбор почвы проводился в фазе поздней вегетации растений, а изучались взаимоотношения „микроорганизм – семена”. Известно, что лектины одного сорта обладают определённой степенью онтогенетической специфичности. Тот факт, что лишь один МКТ бактерий выявил антагонистическую реакцию (лизис во всех вариантах) указывает на то, что приоритетной при формировании биоценоза является перспектива развития позитивных, а не антагонистических взаимоотношений. Биотическая система „микроорганизмы – высшее растение” формируется и находится в состоянии динамического равновесия в соответствии с потребностями растения на данном этапе его развития. Известно, что лектины микроорганизмов являются вторым компонентом углевод-белковой системы взаимного узнавания партнёров сообщества [4]. От их углеводсвязывающих свойств зависит не только формирование симбиотических и (или) паразитических систем, но также и установление широкого круга взаимосвязей между растениями и ассоциативными микроорганизмами почвенной микрофлоры [10].

Изучение некоторых морфологических особенностей выделенных МКТ микроорганизмов показало преобладание среди специфических для сорта Айсберг форм Граммположительных подвижных неспорообразующих бактерий, тогда как видоспецифические и другие типы бактерии не проявляли подобной выравненности. То есть коррелятивной связи между морфологическими особенностями выделенных МКТ бактерий и их реакцией на лектины семян не обнаружено. Рассмотренные нами культуральные особенности микрофлоры (характер роста на питательной среде и изменение агглютинирующей способности лектинов микроорганизмов углеводами питательной среды) обнаружили 100%-ную стимуляцию синтеза высокоактивных лектинов микроорганизмов галактозой. Глюкоза и ксилоза стимулировали синтез лектинов у 75% микроорганизмов, а арабиноза – лишь у 25%. По всей видимости, галактоза, входящая в состав слизи льняного семени на начальных этапах онтогенеза льна и выделений корня в дальнейшем является основным стимулятором для лектинов микроорганизмов. Таким образом, формирование комплекса почвенного микробиотического окружения растений является не односторонній реакцией, а строго определённым с обеих сторон процессом . При этом специфичность образующегося ценоза во многом определяется многокомпонентными корневыми выделениями, в состав которых входят и углеводы, и экзогенные углеводсодержащие белки – лектины. Дальнейшее изучение этого вопроса позволит расширить представление о лектинах как сигнальных молекулах, способных запускать определённые физиологические процессы, способствующие оптимизации функционирования биотических сообществ.

ВЫВОДЫ

1. Экзолектины льна определяют его почвенную микрофлору и её динамику в процессе роста и развития растения, играя важную роль в формировании и развитии взаимоотношений между высшими растениями и микроорганизмами в почвенных биоценозах. Лектины различных сортов льна отличаются как по активности и углеводной специфичности, так и по физико-химическим свойствам. 2. Основными физиологическими реакциями при установлении подобных взаимоотношений являются лектинзависимые реакции лизиса потенциальных патогенов и привлечение, путем стимуляции роста и активности, потенциальных симбионтов и ассоциаторов. Экзогенным стимулятором синтеза и повышения активности бактериальных лектинов служит входящая в состав слизи семян и корневых выделений галактоза. 3. Микробиологические ризосферные комплексы льна, определяемые лектин-углеводными взаимодействиями с обеих сторон, показывают высокую долю не только видо-, но и сортоспецифичности состава микрофлоры.

ЛИТЕРАТУРА

1. Антонюк Л.Г., Игнатов В.В. О роли агглютинина зародышей

пшеницы в растительно-бактериальном взаимодействии: гипотеза и экспериментальные данные в её поддержку // Физиология растений. 2001. – Т.48, № 3. – С. 427–433. 2. Голынская Е.Л. Фитогемагглютинины генеративных органов растений и их возможное участие в реакции распознавания при взаимодействии пыльцы и пестика //Молекулярная биология. – М.:

Наукова думка, 1979. – Т.23. – С. 34–43.

3.

Евтушенко Е.И. Лектины в вирусологии // Вопросы

вирусологии – 1982. – Т.27, № 2. – С. 132–137.

4. Карпунина

Л.В., Мельникова У.Ю., Вишневецкая О.А.,

Никитина В.Е. Лектины Bacillus polymyxa: локализация, участие во взаимодействии с корнями пшеницы // Микробиология – 1993. – Т.62, вып. 2. – С. 307–313. 5. Карпунина Л.В., Соболева Е.Ф. Изучение влияния агглютининов Rhizobium leguminosarum 252 на активность некоторых ферментов растительной клетки //Микробиология – 2001. – Т.70, № 3.

– С. 348–351. 6. Карпунина Л.В., Мельникова У.Ю., Соболева Е.Ф., Вишневецкая О.А., Никитина В.Е. Изучение адгезивных свойств клеток

Bacillus polymyxa и роль лектинов бацилл в адгезивном процессе //Микробиология – 1999. – Т.68, № 4. – С. 445–448.

7. Кириченко Е.В., Маличенко С.И. Полисахариды клубеньковых

бактерий и лектины бобовых растений как возможные молекулярные

„сигналы” процесса образования и функционирования

азотфиксирующих систем // Физиология и биохимия культурных растений – 1996. – Т. 28, № 4. – С. 211–217.

8. Ковальчук Н.В. Фізіологічна роль фітолектинів // Український

ботан. журн.2000. – Т.57, № 4. – С. 442–445.

9. Комарова Э.М., Трунова Т.И., Выскребенцева Э.И. Динамика

лектиновой активности клеточных стенок апексов озимой пшеницы на протяжении первых суток закаливания // Физиология растений. 1999.

– Т.46, № 4. – С. 159–163.

Мандровская Н.М. Влияние лектина гороха на

и

рост

10. Косенко Л.В

микросимбионтов

гороха

биосинтез

ими

экзогликанов

//

Микробиология. 1998. – Т.67, № 5. – С. 626–630.

11. Ладыгина М.Е., Бабоша А.В. Физиолого-биохимическая природа вирусного патогенеза устойчивости и регуляции антиинфекционной активности // Физиология растений. 1996. – Т.43, № 5. – С. 729–742.

12. Линевич Л.И. Лектины и углевод-белковое узнавание на

разных уровнях организации живого // Успехи биологической химии / Отв. ред. Степаненко Л.И.– М .: Наука,1979. – Т.20. – С. 71–89.

13. Луцик М.Д., Панасюк В.М., Луцик А.Д. Лектины.–Львов:

Вища школа, 1981. 156 с.

14. Маліченко С.М., Маменко М.П., Коць С.Я. Вплив різних за

активністю штамів роду Bradyrhizobium на динаміку лектинової активності кореневих бульбочок і функціонування азотфіксувального

апарату люпіну // Физиология и биохимия культ. Растений. 2002. – Т.34, № 6. – С. 511–515.

15. Феоктісов П.О., Григорюк І.П., Ляшок А.К. Сполученість в

динаміці амілолітичної та лектинової активності в процесі

проростання зернівок озимої пшениці // Физиология и биохимия культурных растений – 2002. – Т.34, № 3. – С. 260–263.

16. Шакирова Ф.М., Безрукова М.В., Шаяхметов И.Ф. Влияние

теплового стресса на динамику накопления АБК и лектина в клетках каллуса пшеницы // Физиология растений – 1995. – Т.42, № 5. – С. 700–

702.

17. Шакирова Ф.М., Безрукова М.В., Хайруллин Р.М., Ямалеев

А.М. Увеличение уровня лектина в проростках пшеницы под влиянием

солевого стресса // Известия РАН. 1993, - 1. – С. 142– 45.

УДК 582. 741: 582.742.2 Войтович Е.Н., Левчук А.Н. Роль лектинов в формировании мікробного комплекса ризосферы льна масличного // „Питання біоіндікації та екології”.– Запоріжжя: ЗНУ, 2005.– Изучали сортовые различия лектинов семян льна масличного и их влияние на рост и морфолого-культуральные особенности ризосферного микроокружения. Установлена углеводная специфичность экзолектинов пяти сортов льна и обнаружена высокая лектиновая активность семян сорта Циан и 1174. При изучении динамики роста показаны два типа изменения ростовых характеристик культуры микроорганизмов на наличие в среде лектинов семян. Отмечен эффект стимуляции галактозой лектиновой активности микрофлоры. Библ. 17. Табл. 1. Рис. 3.

ROLE OF LECTINS IN SHAPING A MICROBIAL COMPLEX OF OIL FLAX RHIZOSPHERES Voitovich E.N., Levchuk A.N. Studied varietal distinctions of oil flax seed lectins and their influence on body height and morphological and culturals singularity of a microenvironment of rhizospheres. Is established carbohydrates specificity of exolectins of five flax varieties and are found high seeds lectin activity variety Cyan and 1174. At study of dynamics of body height two types of a modification of growth performances of culture of microorganisms on presence in medium seed lectins are shown. The effect of stimulation by galactose of activity of a microflora is marked.

100 80 60 40 20 0 Количество МКТ м/о, %
100
80
60
40
20
0
Количество МКТ м/о, %

1174 Циан

20 0 Количество МКТ м/о, % 1174 Циан усиление роста Айсберг Сорт льна

усиление роста

Айсберг Сорт льна

усиление роста Айсберг Сорт льна лизис Рис. 1. Влияние лектинов

лизис

Рис. 1. Влияние лектинов семян льна на рост микроорганизмов.

3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 2 3 4 5 6 7 Диаметр зоны,
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
2
3
4
5
6
7
Диаметр зоны, мм
1 0,5 0 2 3 4 5 6 7 Диаметр зоны, мм зона роста зона лизиса

зона роста

5 6 7 Диаметр зоны, мм зона роста зона лизиса Время, сутки Рис. 2.

зона лизиса

Время, сутки

Рис. 2. Изменение соотношений "зона роста/зона лизиса" под влиянием экзогенных лектинов семян льна

25% 40% 10% 5% 10% 10%
25%
40%
10%
5%
10%
10%

видоспецифичные м/о25% 40% 10% 5% 10% 10% м/о, специфичные для льна сорта Айсберг на поздних

м/о, специфичные для льна сорта Айсберг на поздних стадиях40% 10% 5% 10% 10% видоспецифичные м/о развития м/о-антагонисты м/о,

развития сорта Айсберг на поздних стадиях м/о-антагонисты м/о,

м/о-антагонисты

м/о, неспецифические для сорта 1174стадиях развития м/о-антагонисты м/о, неспецифические для сорта

м/о, неспецифические для сорта Цианм/о, неспецифические для сорта 1174 сортоспецифические м/о Рис. 3.

сортоспецифические м/онеспецифические для сорта Циан Рис. 3. Функциональные типы

Рис. 3. Функциональные типы микроорганизмов