Gabriela Ferreira da Silva

QUALIDADE SSEA TRABECULAR:

CARACTERIZAO POR
MICROTOMOGRAFIA 3D
POR RAIO-X

Trabalho de Concluso de Curso

apresentado Escola de Engenharia de So
Carlos da Universidade de So Paulo
Curso de Engenharia Eltrica
nfase em Eletrnica
ORIENTADOR: Prof. Dr. Jos Marcos Alves

So Carlos
Dezembro - 2008

Dedicatria
Dedico este trabalho primeiramente minha famlia, que sempre me apoiou em
minhas

decises,

guiando-me

para

que

fossem

as

melhores,

incondicionalmente e dando-me a segurana de que tanto precisei.

amando-me
Aos meus

verdadeiros amigos, os conquistados neste perodo da Universidade e os que vm de

antes, de minha cidade natal, e que fizeram destes os melhores e mais divertidos anos
da minha vida.

ii

Agradecimentos
Agradeo aos professores que me ajudaram a chegar at aqui. EESC - USP
por me oferecer um curso de qualidade. Ao Prof. Dr. Jos Marcos Alves pela ateno
e orientao neste trabalho, ao mestrando Alessandro Mrcio Hakme da Silva por
ceder as amostras sseas do seu projeto de

pesquisa para uso na minha

investigao, pelo apoio no aprendizado do uso do microtomgrafo e do software CTAnalyzer e pela

pacincia comigo, e ao Prof. Dr. Ben-Hur Viana Borges por

disponibilizar a infra-estrutura computacional do seu laboratrio para a reconstruo

tomogrfica e quantificao microestrutural das amostras sseas.

iii

Resumo
A osteoporose uma doena do esqueleto caracterizada por baixa massa
ssea e deteriorao da arquitetura do tecido com conseqente aumento da
fragilidade e susceptibilidade fratura. O osso trabecular possui maior superfcie e
metabolismo (formao e reabsoro) mais rpido que o osso cortical. A incidncia de
fraturas causada pela osteoporose maior nas vrtebras lombares, na extremidade
distal do rdio / ulna e na cabea femoral. A massa ssea explica no mximo 65% da
variao na resistncia ssea. A forma e distribuio do tecido trabecular no espao
3D (arquitetura ssea) so responsveis por cerca de 30 a 50% da resistncia
mecnica do osso. A arquitetura, quando quantificada atravs da anisotropia do tecido
(fabric), e incorporada na anlise da resistncia ssea, eleva o entendimento dessa
variao. O objetivo desta investigao foi aprender os conceitos bsicos sobre as
tcnicas de monitoramento da qualidade ssea e determinar os ndices morfomtricos
de amostras de osso trabecular bovino utilizando um microtomgrafo por raio-X de
bancada de alta resoluo.
Palavras chave: Osteoporose, arquitetura ssea, anisotropia, osso trabecular.

iv

Abstract
Osteoporosis is a bone disease that affects all the skeleton. It is characterized
by low bone mass and deterioration of the architecture of the tissue with consequent
increase of the fragility and chance of succeeding fractures. The trabecular bone has a
greater surface and faster metabolism (formation and resorption) than the cortical
bone. The incidence of fractures caused by osteoporosis is bigger in the lumbar
vertebrae, the distal extremity of the radius/ulna and in the femoral head. The bone
mass explains about 65% of the variation in the bone strength. The shape and
distribution of the trabecular tissue in the 3D space (bone architecture) are responsible
for about 30 to 50% of the mechanics strength of the bone. The architecture, when
quantified through the anisotropy of the tissue (fabric), and incorporated in the analysis
of the bone strength improves the understanding of that variation. The aim of this
investigation was to learn the basic concepts about the assessment of bone quality as
well as to carry out morphometric measurements of bovine trabecular bone samples
using a portable and high resolution x-ray microtomograph.

Key words: Osteoporosis, trabecular tissue, anisotropy, bone architecture.

Sumrio
Dedicatria .................................................................................................................... i
Agradecimentos ............................................................................................................ ii
Resumo ........................................................................................................................iii
Abstract ..........................................................................................................................iv
Lista de Figuras .............................................................................................................vi
Lista de Tabelas ..........................................................................................................vii
1.

Introduo ............................................................................................................. 1
1.1

Tecido sseo ................................................................................................. 1

1.2

Qualidade ssea ............................................................................................ 3

2.

Objetivos ............................................................................................................... 6

3.

Microtomografia Computadorizada (CT) ............................................................. 6

4.

3.1

Princpios ........................................................................................................ 6

3.2

Quantificao da Microestrutura ..................................................................... 8

3.2.1

Morfometria ........................................................................................... 8

3.2.2

Conectividade ...................................................................................... 10

3.2.3

Anisotropia........................................................................................... 11

3.2.4

ndice de modelo estrutural (SMI) ........................................................ 13

3.2.5

Porosidade .......................................................................................... 14

Material e Mtodo ............................................................................................... 14

4.1

Obteno de Amostras sseas Trabeculares............................................... 14

4.2

Quantificao Microestrutural ....................................................................... 16

5.

Resultados .......................................................................................................... 19

6.

Discusso e Concluso ....................................................................................... 22

7.

Bibliografia .......................................................................................................... 23

Anexo ......................................................................................................................... 25

vi

Lista de Figuras
Figura 1.1 - Estrutura do osso trabecular do calcneo humano com predominncia de
bastonetes (a) e placas (b) (Hildebrant et al., 1999) .................................................... 2
Figura 1.2 - Colo do fmur com osso trabecular normal (A) e osteoportico (B) ;
vrtebra lombar com osso trabecular normal (C) e osteoportico (D) [2] ....................... 2
Figura 1.3 - Imagem 3D e sees transversais de uma amostra de osso trabecular .... 2
Figura 1.4 - Medida da BMD na coluna vertebral (a) e na cabea femoral (b) .............. 4
Figura 3.1 Principais elementos de um microtomgrafo ............................................. 7
Figura 3.2 Fluxograma da reconstruo tomogrfica ................................................. 7
Figura 3.3 - Magnificao tomogrfica ......................................................................... 8
Figura 3.4 Desenho esquemtico do princpio da determinao de Tb.Th* pela
anlise 3D..................................................................................................................... 9
Figura 3.5 Desenho esquemtico do princpio da determinao de Tb.N* pela anlise
3D ............................................................................................................................... 10
Figura 3.6 Medio do MIL em duas dimenses [17] . ............................................... 11
Figura 3.7 Representao do MIL em duas dimenses por uma elipse [18] .............. 12
Figura 3.8 - Representao do MIL em trs dimenses por um elipside [5] ............... 12
Figura 3.9 Elipses obtidas sobre planos mutuamente ortogonais em trs amostras de
osso trabecular: a) fmur distal; b) rdio distal; c) crista do ilaco [9] ............................ 13
Figura 4.1 - Equipamento para retirada de amostra cbica ......................................... 15
Figura 4.2 - Amostra cbica extrada da regio trabecular .......................................... 15
Figura 4.3 Extrao das amostras cilndricas ........................................................... 15
Figura 4.4 - Microtomgrafo de bancada SkyScan 1172............................................. 16
Figura 4.5 Exemplo de projeo da amostra ssea ................................................. 17
Figura 4.6 Seo reconstruda ................................................................................. 18
Figura 4.7 VOIs radiografos e reconstrudos ............................................................ 18
Figura 5.1 Resultado da anlise 2D da seo 500 (central) ..................................... 19

vii

Lista de Tabelas
Tabela 4.1 - Especificaes do Microtomgrafo SkyScan 1172 .................................. 17
Tabela 5.1 - Anlise Microestrutural 2D (6.7 m de resoluo) ................................... 20
Tabela 5.2 - Anlise Microestrutural 3D (6.7 m de resoluo) ................................... 21

1. Introduo
1.1 Tecido sseo
A osteoporose uma doena do esqueleto caracterizada por baixa massa
ssea e deteriorao da arquitetura do tecido sseo com conseqente aumento da
fragilidade e susceptibilidade fratura. Na osteoporose h um comprometimento da
resistncia mecnica ssea. A sua ocorrncia mais comum em mulheres aps a
menopausa e em pessoas com idade mais avanada.
O esqueleto responsvel pela sustentao do corpo, proteo de rgos,
produo de clulas vermelhas e brancas do sangue e armazenamento de minerais.
Ele deve resistir aos carregamentos externos, tais como o prprio peso do corpo e os
esforos dinmicos. O entendimento da influncia da estrutura nas propriedades
mecnicas do osso trabecular proporciona o desenvolvimento de tcnicas de
monitoramento da qualidade ssea, com impacto no tratamento de doenas como a
osteoporose.
O osso um material compsito constitudo de componentes orgnicos e
inorgnicos. A matriz orgnica constituda basicamente de colgeno (95%) e de
outras protenas no colagenosas (glicoprotenas, fsforoprotenas, prteolipdeos e
mucopolisacrides). A matriz mineral consiste essencialmente de hidroxiapatita
(Ca10(PO4)6(OH)2 , 95%). Esta substncia inicialmente depositada na matriz orgnica
como fosfato de clcio, mas depois se transforma em cristais de apatita.
A arquitetura do tecido sseo varia com a regio do esqueleto, podendo ser
esponjosa, denominada osso trabecular, ou compacta, denominada osso cortical. O
osso trabecular possui microestrutura porosa com elevada rea superficial. A estrutura
porosa composta de trabculas cujo formato varia entre bastonetes e placas

[1]

conforme mostrado na Fig. 1.1. A fig. 1.2 ilustra a aparncia do osso trabecular normal
e osteoportico no colo do fmur e vrtebras da coluna lombar. O osso trabecular
predominantemente encontrado nas extremidades dos ossos longos protegido por
uma camada de osso cortical. tambm encontrado na estrutura interna de outros
ossos, tais como o calcneo, o crnio, a plvis e as vrtebras da coluna vertebral.

Figura 1.1 - Estrutura do osso trabecular do calcneo humano com predominncia de bastonetes
(a) e placas (b) (Hildebrant et al., 1999)

D
A

Figura 1.2 - Colo do fmur com osso trabecular normal (A) e osteoportico (B) ; vrtebra lombar
com osso trabecular normal (C) e osteoportico (D) [2]

A orientao das trabculas sseas em uma amostra de osso trabecular varia

de acordo com a direo [3], conforme mostrado na Fig 1.3. Observa-se que no plano
zy h uma orientao preferencial das trabculas e que nos planos xy e zx no h
orientao preferencial.

Figura 1.Erro! Nenhum texto com o estilo especificado foi encontrado no documento.3 - Imagem 3D e
sees transversais de uma
amostra de osso trabecular

1.2 Qualidade ssea

A resistncia mecnica do osso trabecular foi relacionada sua densidade [4].
Apesar das medidas de densidade freqentemente levarem estimativas razoveis
das propriedades mecnicas, elas no explicam certas variaes observadas nestas
propriedades, nem do conta das organizaes microestruturais de um osso
trabecular, representando assim uma medida escalar incompleta para a previso das
propriedades mecnicas. Goldstein et al (1993) apresenta um exemplo que ilustra este
fato. Duas amostras sseas com fraes de volume (BV/TV= Volume de Tecido
sseo/Volume) prximas entre si de 18% e 19%, respectivamente, apresentaram
propriedades mecnicas que variaram de 30% a uma ordem de magnitude,
dependendo da direo analisada [5].
Os ossos com maior risco de osteoporose so aqueles que possuem maior
quantidade de osso trabecular como as vrtebras da coluna vertebral, o colo do fmur,
costelas, pulso e calcanhares.
Na clnica o mtodo mais utilizado para o monitoramento da qualidade ssea
utiliza raio-X de baixa intensidade, o DEXA (Dual Energy X-ray Absorptiomery)
determina a densidade mineral ssea em uma determinada rea (g/cm2). O resultado
expresso atravs dos parmetros Z-score e T-score mostrados nas equaes 1.1 e
1.2, respectivamente (BMD densidade mineral ssea; SD - desvio padro; SI
mesmo sexo e mesma idade; SJ mesmo sexo e paciente jovem).

Z score( SD) =

T score( SD ) =

( BMD) paciente ( BMD) SI

( SD) SI

(1.1)

( BMD ) paciente ( BMD ) SJ

(1.2)

( SD ) SJ

A qualidade ssea, utilizando-se a BMD, classificada segundo o valor do Tscore: BMD normal (T-score > -1), Osteopenia (-1<T-score<-2.5) e Osteoporose (Tscore <-2.5). A figura 1.4 ilustra as regies em que so medidas a BMD na coluna
vertebral e na cabea femoral.

Figura 1.4 - Medida da BMD na coluna vertebral (a) e na cabea femoral (b)

Alguns fatores podem aumentar a probabilidade de ocorrncia de osteoporose:

a) sexo: em mulheres a osteoporose duas vezes mais comum que em homens; b)
Idade: a BMD diminui com a idade; c) Etnia: caucasianos e asiticos tm maior risco
de osteoporose que negros e hispnicos; d) predisposio gentica; e) pessoas com
menor estrutura so mais susceptveis; f) Fumar; g) uso prolongado de remdios com
corticides; h) mulheres que j sofreram cncer de mama; i) alimentao pobre em
clcio, j) falta de exerccio; k) consumo excessivo de lcool [2].
Outros mtodos de avaliao do tecido sseo so utilizados [6]:

Radiografia

detalhamento.

Magnificada:

uma

radiografia

das

mos

com

maior

Radiogrametria: a determinao da espessura cortical do metacarpo. No

detecta precocemente a osteoporose.

Morfometria (MXA Morphometric X-ray Absorptiometry): Raio-x do trax

e da coluna lombar so analisadas e o tamanho (altura anterior, posterior medial) e

contorno dos corpos vertebrais so determinados por um software. Uma reduo de
15% nesses parmetros caracteriza compresso dos corpos vertebrais.

Medidas de Parmetros do Fmur Proximal: alguns parmetros radiolgicos

do fmur proximal, por exemplo, o comprimento do colo do fmur, tm correlao com

o risco de fratura nessa regio anatmica.

Tomografia Computadorizada: pode ser realizado apenas com instrumentos

modernos de alta resoluo, mas expe o paciente a maiores nveis de radiao.

Imagem por Ressonncia Magntica: este mtodo no envolve exposio

radiao e especialmente adaptado para o exame de medula ssea. a maneira

ideal para se diferenciar entre uma fratura por osteoporose e a de uma devido
metstase.
Bipsias sseas da crista do ilaco podem ser utilizadas para se investigar a
estrutura trabecular analisando-se sees do tecido. Diversos ndices so derivados
dessa

anlise

tcnica

denominada

histomorfometria

2D.

ndices

histomorfomtricos 3D so obtidos de imagens 2D (reconstrues microtomogrficas)

atravs da medida de ndices morfolgicos primrios (BS superfcie ssea
trabecular; BV frao de volume sseo trabecular; TV volume da amostra ssea).
Esses ndices so utilizados para o clculo de ndices histomorfomtricos derivados
utilizando-se conceitos de estereologia e assumindo-se um modelo estrutural
trabecular constante e composto apenas de placas sseas. A estrutura trabecular, no
entanto, se altera devido ao envelhecimento e doenas metablicas. Os ndices
derivados calculados so: Tb.Th espessura trabecular; Tb.Sp espessura das
cavidades contendo medula ssea; Tb.N nmero de trabculas por unidade de
comprimento.
Reconstrues tridimensionais permitem a medida direta dos mesmos ndices
primrios e histomorfomtricos. Estas medidas no so baseadas em um modelo

6
estrutural trabecular constante e incluem a conectividade, o grau de anisotropia e o
ndice de modelo estrutural (SMI), que uma estimativa da quantidade de placas e
bastonetes presentes na estrutura trabecular. A tcnica baseada em microtomografia
tridimensional por raio-X tem sido investigada em laboratrios dos EUA e Europa para
a caracterizao da qualidade ssea trabecular visando o diagnstico da
osteoporose[7].

2. Objetivos
Os objetivos desta investigao so o aprendizado dos conceitos bsicos sobre
as tcnicas de monitoramento da qualidade ssea e a determinao dos ndices
morfomtricos de amostras de osso trabecular bovino utilizando um microtomgrafo
por raio-X de bancada de alta resoluo.

3. Microtomografia Computadorizada (CT)

3.1 Princpios
Imagens tridimensionais de um objeto podem ser adquiridas para anlises
qualitativas e quantitativas da sua microestrutura pela tcnica de microtomografia
computadorizada. A figura 3.1 descreve esquematicamente os principais constituintes
de um microtomgrafo: a) tubo de raio-x com um foco de dimenso micromtrica e um
campo de emisso cnico; b) mesa com movimento de preciso rotacional e
translacional (direes X, Y e Z), onde fixado o objeto a ser analisado; c) detector de
radiao. A figura 3.2 descreve as etapas do processo de obteno da imagem 3D do
objeto. As etapas de caracterizao compreendem:
a)

obteno das projees atravs da rotao do objeto. O ngulo de rotao

determina o nmero de projees (por exemplo, se =1, sero obtidas 360

projees). Uma mdia das projees obtida a cada incremento angular.
b)

pr-processamento e reconstruo 2D das sees do objeto.

c)

segmentao das sees do objeto e reconstruo 3D.

d)

quantificao da microestrutura do objeto utilizando softwares desenvolvidos

para essa finalidade.

Figura 3.1 Principais elementos de um microtomgrafo

Figura 3.2 Fluxograma da reconstruo tomogrfica

As variveis que influem na resoluo da microtomografia esto mostradas

figura 3.3: D1 a distncia da fonte ao objeto, D2 a distncia da fonte ao detetor de
radiao, H altura do objeto, D3 altura do objeto projetado no detetor de radiao,
R a resoluo microtomogrfica e K a dimenso do pixel no detetor. O fator de
magnificao M=(D1+D2/D1). A resoluo R=K/M.

Figura 3.3 - Magnificao tomogrfica

3.2 Quantificao da Microestrutura

A quantificao da microestrutura do osso trabecular pode ser realizada
utilizando-se sees da amostra ssea obtidas por CT (anlise 2D) ou o volume do
objeto a partir da reconstruo tridimensional obtida por CT (anlise 3D) [8]. Em ambas
as quantificaes so utilizados os seguintes ndices primrios: a) rea da superfcie
ssea da amostra (BS); b) volume sseo da amostra (BV); c) volume total da amostra
(TV). Para se comparar amostras com diferentes dimenses utiliza-se ndices
normalizados obtendo-se BV/TV, BS/TV e BS/BV. A quantificao da microestrutura
envolve os parmetros a seguir descritos:
3.2.1

Morfometria

Anlise 2D
Os parmetros histomorfomtricos so calculados assumindo-se que a amostra
ssea possui uma microestrutura constante (composta apenas de placas ou
bastonetes) e utilizando-se tcnicas de estereologia

[9]

. Assumindo-se o modelo de

placas, as seguintes equaes so utilizadas para determinao dos parmetros

morfomtricos [9, 10]:
a)

Espessura Trabecular (Tb.Th): a espessura mdia das trabculas.

Tb.Th = 2 / (BS/BV)

(3.1)

9
b)

Nmero trabecular (Tb.N): o nmero de placas por unidade de comprimento.

Tb.N = (BV/TV)/Tb.Th

c)

(3.2)

Espao trabecular (Tb.Sp): a espessura mdia das cavidades com medula

ssea.
Tb.Sp = (1/TbN) Tb.Th

(3.3)

Anlise 3D
Imagens tridimensionais obtidas por CT permitem a determinao dos
parmetros microestruturais no espao 3D. Estas tcnicas no se baseiam na
existncia de nenhum modelo estrutural e so isentas dos erros devidos ao uso destes
modelos. Os ndices morfolgicos medidos no espao 3D so denotados por um
asterisco. O ndice primrio BS* calculado usando o mtodo de Marching Cubes
que triangulariza a superfcie do tecido sseo [11,12]. O ndice BV* calculado usando
tetraedros correspondentes ao volume relativo superfcie triangularizada [13]. O ndice
TV* determinado atravs de uma contagem de voxels. Para comparar amostras com
tamanhos diferentes os ndices normalizados BV*/TV* e BS*/TV* so utilizados. A
superfcie ssea especfica BS*/BV*. Os seguintes conceitos so utilizados para
determinao dos parmetros morfomtricos [8]:
a)

Tb.Th* (espessura trabecular): a espessura mdia das trabculas

determinada utilizando-se esferas cujo dimetro deve preencher a estrutura da

trabcula, conforme esquematizado na figura 3.4. A espessura mdia calculada para
se obter Tb.Th;

Figura 3.4 Desenho esquemtico do princpio da determinao de

Tb.Th* pela anlise 3D

10
b)

Tb.Sp* (espao trabecular): a espessura mdia das cavidades que contm

medula ssea. Utiliza-se o mesmo princpio da determinao de Tb.Th. nos voxels que
contm a medula ssea.
f)

Tb.N* (nmero trabecular): o inverso da distncia entre os eixos mdios das

trabculas sseas (fig. 3.5).

Figura 3.5 Desenho esquemtico do princpio da determinao

de Tb.N* pela anlise 3D

3.2.2

Conectividade

O parmetro Euler-Poincare ou nmero de Euler um indicador de

conectividade de uma estrutura 3D[14,15]. A conectividade definida como uma medida
do grau que uma estrutura est multiplamente conectada, isto , o nmero mximo de
conexes que podem ser rompidas antes que a estrutura seja separada em duas
partes. O nmero de Euler () para uma estrutura 3D determinado pela equao 3.5:

= o 1 2

(3.5)

o o nmero de partes sseas no conectadas, (1 a conectividade e (2 o

nmero de cavidades com medula ssea totalmente circundadas por osso. O osso
trabecular uma estrutura totalmente conectada ((0 = 1), e com nenhuma cavidade
fechada contendo medula ssea ((2 = 0). A expresso acima fica ento simplificada:

= 1 1

(3.6)

A anlise de Euler tambm expressa por densidade de conectividade

(Eu.Conn.D, mm-3) que o quociente entre 1 e o volume da amostra (TV).
Uma outra medida de conectividade denominada fator padro de osso
trabecular (Tb.Pf) foi proposta por Hahn e colaboradores em 1992. Em uma anlise

11
2D o parmetro calcula um ndice de relativa convexidade e concavidade da superfcie
ssea considerando que concavidade indica conectividade (presena de ns) e
convexidade indica estruturas desconectadas isoladas (trabculas sseas). Em 2D,
conforme equao 3.7, o ndice Tb.Pf compara rea e permetro (ou volume e
superfcie na anlise 3D) de um slido binarizado antes e depois (subscrito 1 e 2,
respectivamente) de um processo de dilatao. Como resultado, menores valores de
Tb.Pf significam estrutura trabecular mais conectada enquanto maiores valores de
Tb.Pf significam estrutura trabecular menos desconectada.

(3.7)

3.2.3

Anisotropia

Whitehouse

[16]

(1974) descreveu a medida da anisotropia microestrutural

utilizando uma tcnica de contagem de interseo. Ele expressou a anisotropia

atravs da medida do comprimento da interseo mdia (mean intercept length, MIL).
O princpio da MIL a contagem em uma seo plana de osso trabecular do nmero
de intersees entre uma grade de linhas paralelas e a interface trabcula / medula
ssea (Fig. 3.6). O MIL o comprimento mdio entre duas intersees sendo
calculado pela razo entre o nmero de intersees em uma dada direo da grade,
I(), e o comprimento L total da grade. Ao construir diagramas polares com os pontos
(, L), Whitehouse constatou que estes pontos podem ser interpolados de forma
precisa e representados por uma elipse (Fig. 3.7).

Figura 3.6 Medio do MIL em duas dimenses [17]

12

Figura 3.7 Representao do MIL em duas dimenses por uma elipse [18]

A generalizao do conceito da anisotropia estrutural para trs dimenses gera

uma elipside, como ilustrado na figura 3.8. A equao geral de uma elipside em um
sistema de coordenadas cartesiano com eixos x, y e z dada pela equao 3.7:
Ax 2 + By 2 + Cz 2 + 2Dxy + 2Exz + 2Fyz = 1

(3.7)

Figura 3.8 - Representao do MIL em trs dimenses por um elipside [5]

Seja L() o MIL calculado na direo em um plano com direo qualquer. O

plano intercepta uma amostra ssea gerando uma seo. Sejam n1, n2 e n3 as
projees no sistema de coordenadas x, y e z de um vetor unitrio n com direo
pertencente ao plano , e seja um vetor com magnitude L() na direo do vetor
unitrio n do plano . As coordenadas do vetor com magnitude L() nos eixos x, y e z
so dadas por: x= L() n1, y= L() n2 e z= L() n3. A equao 3.7 pode ser reescrita
como segue:
1
An12 + Bn 22 + Cn 32 + 2Dn1n 2 + 2En1n 3 + 2Fn 2 n 3 =
2
L ( )

(3.8)

A equao 3.8 pode ser reescrita como:

[ n1

n2

A D E n1
1
n 3 ]. D B F . n 2 =
2
E F C n 3 L ()

(3.9)

13
Onde M um tensor de segunda ordem, positivo definido, e n um versor que
define a direo sobre a qual infere-se o valor de L(). O tensor M, tensor de
anisotropia, caracteriza o arranjo geomtrico da microestrutura do meio poroso. Os
autovetores de M fornecem as direes principais do elipside, as quais so as
orientaes preferenciais das trabculas.
Harrigan & Mann (1984) propuseram uma tcnica experimental de medida de
L() em uma direo arbitrria e do MIL em trs dimenses. A tcnica consiste em
obter elipses sobre trs planos mutuamente ortogonais da amostra, as quais so as
projees ortogonais de um elipside sobre estes planos. Observa-se na Fig. 3.9 que
os eixos principais das elipses determinam as orientaes das trabculas.

Figura 3.9 Elipses obtidas sobre planos mutuamente ortogonais em trs amostras de osso
trabecular: a) fmur distal; b) rdio distal; c) crista do ilaco [9]

O grau de anisotropia (DA) definido conforme a equao 3.10, utilizando-se o

autovalor mnimo e mximo da matriz M.

(3.10)

3.2.4

ndice de modelo estrutural (SMI)

O SMI (structure model index) indica a predominncia de bastonetes ou placas

no osso trabecular. Este parmetro de muita importncia na osteoporose do osso
trabecular que caracterizada pela transio da arquitetura de placas para
bastonetes. Uma estrutura apenas com placas ou bastonetes ter valores de SMI 0 e
3, respectivamente. O clculo da SMI expresso pela equao 3.11 e baseado na

14
dilatao do modelo de voxel 3D, Sendo S a rea superficial do objeto antes da
dilatao, S a diferena na rea causa por pela dilatao e V o volume inicial sem
dilatao.

(3.11)

3.2.5

Porosidade

A porosidade medida na anlise 2D. Nos objetos binarizados so

identificados espaos completamente fechados. A porosidade a rea destes espaos
expressa como percentual da rea total dos objetos binarizados. Uma medida de
porosidade em 3D pode ser obtida por integrao desta medida no volume de
interesse do objeto.

4. Material e Mtodo
4.1 Obteno de Amostras sseas Trabeculares
Seis amostras de osso trabecular foram obtidas de fmur bovino, extrado de
um animal sacrificado com quatro anos de idade, atravs do seguinte procedimento
executado no Laboratrio de Biomecnica do Instituto de Ortopedia e Traumatologia
do Hospital das Clnicas da Faculdade de Medicina da USP: a) congelamento dos
fmures; b) retirada em temperatura ambiente de uma amostra cbica da regio
trabecular de um par de fmures do mesmo animal utilizando um mecanismo de
movimentao angular e longitudinal e uma serra circular de 1mm de espessura
(figuras 4.1 e 4.2); d) extrao de trs amostras cilndricas com dimenso de 10mm de
raio e 20 mm de altura de cada cubo nas direes principais do trabeculado (fig. 4.3).
A primeira direo foi obtida de observao radiogrfica do fmur considerando-se a
direo preferencial das trabculas; e) manuteno das amostras cilndricas em soro
(soluo salina com 0.9% de NaCl) at a realizao da quantificao estrutural atravs
de microtomografia.

15

Figura 4.1 - Equipamento para retirada de amostra cbica

Figura 4.2 - Amostra cbica extrada da regio trabecular

Figura 4.3 Extrao das amostras cilndricas

16
4.2

Quantificao Microestrutural
A

anlise

microestrutural

das

amostras

cilndricas

foi

realizada

no

Microtomgrafo 3D de bancada na EMBRAPA Instrumentao Agropecuria de So

Carlos (modelo 1172, SkyScan, Blgica), mostrado na Fig. 4.4. A Tabela 4.1 descreve
as caractersticas do microtomgrafo. O seguinte procedimento foi utilizado na
quantificao microestrutural:
-

Cada uma das amostras cilndricas foi afixada em um template com uma

massa de modelar a fim de se obter um alinhamento vertical, evitar deslocamentos

durante a movimentao angular e manuteno no campo visual do detector de
radiao (cmera CCD), conforme ilustrado na figura 4.5. A reconstruo tomogrfica
utiliza o algoritmo de Feldkamp [9].
-

Foram obtidas 480 projees geradas e caracterizadas como imagens no

formato TIF/16bits com resoluo de 6,7 m para cada pxel. Com esta resoluo no
foi possvel radiografar toda a amostra ssea, conforme fig. 4.5, obtendo-se um
arquivo de projees de tamanho aproximado de 4Gb e um arquivo de reconstruo
3D de aproximadamente 32Gb (formato STL) com 936 seces (fig. 4.6). O uso de
uma maior resoluo permitiria observar toda a amostra, mas produziria um arquivo
muito grande de reconstruo 3D.
-

Dificuldades de processamento computacional do arquivo de 32Gb resultaram

em uma escolha ainda menor do volume de interesse da amostra utilizado na anlise

microestrutural (ver anexo), conforme fig. 4.7.

Figura 4.4 - Microtomgrafo de bancada SkyScan 1172

17
Tabela 4.1 - Especificaes do Microtomgrafo SkyScan 1172
Especificaes
SkyScan 1172 80kV
SkySkan 1172 100kV
Nvel de detalhe

1 m para 10Mp e 2m para 1.3Mp

Tamanho do Pixel e

8m

Magnificao mx.

5m

Tubo selado microfocado, ventilado, vida til maior que 10000h.

Fonte de Raios-X

Tamanho do ponto < 8m @ 8W,

Tamanho do ponto < 5m @ 4W,

20-80kV, 0-100A

20-1ookV, 0-250A (10W mx.)

10 Mp (4000 X 2300) CCD digital 12-bit

Detector de Raios-X

1.3 Mp (1280 X 1024) CCD digital 12-bit

Cmera de 10Mp: 35mm de dimetro para varredura standard e

Tamanho mximo do

68mm para varredura com offset.

objeto para

Cmera com 1.3 Mp: 20mm de dimetro para varredura standard e

reconstruo

37mm para varredura com offset.

Computador para

Computador com processamento paralelo e rpida reconstruo

controle, reconstruo

volumtrica para feixe em cone

3D e analise de imagem

(algoritmo de Feldkamp)

Segurana de radiao

< 1$v/h em qualquer ponto da superfcie do equipamento

1250X690X360 / 240kg, para 100-130AC - 4A ou 220 - 240 AC - 3A /

Dimenses / condies

50-60Hz (apenas scanner).

de operao

De -10C at 50 armazenamento, de 18 at 25 em operao, 70%

de umidade mxima (sem condensao).

Figura 4.5 Exemplo de projeo da amostra ssea

18

Figura 4. 6 Seo reconstruda

Figura 4.7 VOIs radiografos e reconstrudos

19

5. Resultados
A fig. 5.1 ilustra o resultado da anlise 2D de uma das amostras sseas
utilizando-se o software CT-Analyser. A tabela 5.1 descreve os resultados das seis
amostras sseas, nas direes principais P1, P2 e P3, das seguintes anlises 2D:
morfometria, conectividade, anisotropia, ndice de modelo estrutural e porosidade. A
Tabela 5.2 descreve os resultados da anlise 3D nas mesmas amostras.

Figura 5.1 Resultado da anlise 2D da seo 500 (central)

20
Tabela 5.1 - Anlise Microestrutural 2D (6.7 m de resoluo) na seo 500
Parmetros

Amostras sseas
Direes Principais (P1, P2, P3)
Fmures Esquerdo (E) e Direito (D)

Abreviao

Unidade

P1 (E)

P1 (D)

P2 (E)

P2 (D)

P3 (E)

P3 (D)

Tissue Area

T.Ar

76.99

76.94

76.79

77.82

77.72

76.08

mm

Bone Area

B.Ar

5.44

2.05

2.58

3.65

1.61

0.87

mm

Percent Bone Area

B.Ar/ T.Ar

7.06

2.67

3.36

4.69

2.07

1.15

Tissue Perimeter

T.Pm

32.82

32.81

32.77

32.99

32.97

32.61

mm

Bone Perimeter

B.Pm

726.49

369.92

393.21

546.48

329.10

198.36

mm

Trabecular pattern
factor

Tb.Pf

6.79

7.99

6.32

5.83

6.65

7.84

1/ mm

Euler Number

Eu.N

6999

6107

5036

6542

6130

4381

Percent Porosity

Po

1.94

0.48

0.47

0.62

0.04

0.01

Trabecular
thickness

Tb.Th

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01

mm

Trabecular
separation

Tb.Sp

0.19

0.41

0.38

0.27

0.46

0.76

mm

Trabecular Number

Tb.N

4.72

2.40

2.56

3.51

2.11

1.30

1/ mm

21
Tabela 5.2 - Anlise Microestrutural 3D (6.7 m de resoluo)
Parmetros

Amostras sseas
Direes Principais (P1, P2, P3)
Fmures Esquerdo (E) e Direito (D)

Abreviao

Unidade

P1 (E)

P1 (D)

P2 (E)

P2 (D)

P3 (E)

P3 (D)

Tissue Volume

TV

51.44

54.10

51.31

51.99

51.93

50.83

mm

Bone Volume

BV

3.45

1.39

1.46

2.34

0.99

0.49

mm

Percent Bone
Volume

BV/TV

6.69

2.56

2.84

4.50

1.92

0.98

Tissue Surface

TS

175.79

176.81

175.34

177.55

177.34

173.81

mm

Bone Surface

BS

594.08

326.19

297.15

455.51

270.96

155.26

mm

Bone
Surface/Volume
Ratio

BS/BV

172.41

235.49

203.79

194.66

271.10

313.06

1/ mm

Bone Surface
Density

BS/TV

11.55

6.03

5.79

8.76

5.22

3.05

1/ mm

Trabecular pattern
factor

Tb.Pf

23.28

84.03

56.89

45.10

100.60

123.77

1/ mm

Trabecular
thickness

Tb.Th

0.03

0.03

0.03

0.03

0.02

0.02

mm

Trabecular number

Tb.N

2.24

0.95

1.02

1.58

0.80

0.47

1/ mm

Trabecular
separation

Tb.Sp

0.31

0.33

0.35

0.32

0.31

0.34

mm

Degree of
Anisotropy

DA

0.51

0.52

0.48

0.49

0.49

0.49

Eingenvalue 1

0.64

0.69

0.67

0.67

0.65

0.67

Eingenvalue 2

0.69

0.65

0.65

0.68

0.68

0.66

Eingenvalue 3

0.34

0.33

0.35

0.35

0.34

0.34

22

6. Discusso e Concluso
A tcnica de microtomografia tem dado contribuies relevantes para se
investigar o aprimoramento da caracterizao da qualidade ssea

[21-23]

. A

microtomografia de alta resoluo uma ferramenta incrvel, assim como os softwares

para visualizao e quantificao microestrutural, para investigaes sobre a influncia
da microestrutura na resistncia mecnica do osso trabecular atravs da correlao
dos parmetros microestruturais com os parmetros de resistncia mecnica
(coeficientes elsticos da matriz de rigidez) [24]. A utilizao de um mdulo de ensaio
mecnico acoplado ao microtomgrafo

[24]

permitir a determinao dessas

correlaes, bem como o desenvolvimento de tcnicas visando o aprimoramento da

caracterizao da qualidade ssea para o diagnstico de doenas do metabolismo
sseo como a osteoporose. O software quantifica diversos parmetros da
microestrutura atravs de anlise microestrutural 2D e 3D.
As amostras sseas foram extradas de um par de fmures de um mesmo
animal. A anlise microestrutural 3D descrita na tabela 5.2 mostra que houve pequena
variao nos parmetros das amostras sseas frao de volume (BV/TV), superfcie
ssea (BS), densidade de superfcie ssea (BS/TV), conectividade (Tb.Pf) e nmero
trabecular (Tb.N) entre as amostras cilndricas extradas de um mesmo fmur em
direes perpendiculares entre si e entre amostras de fmures diferentes com a
mesma direo. Os parmetros de espessura trabecular (Tb.Th), separao trabecular
(Tb.Sp) e grau de anisotropia (DA) e autovalores no variaram entre as amostras de
um mesmo fmur ou de fmures diferentes com a mesma direo. Os valores medidos
dos autovalores e do grau de anisotropia mostram que as trabculas das amostras
sseas extradas dos dois fmures tm a mesma orientao espacial nas direes
principais.
O nmero de amostras sseas utilizadas nessa investigao, apesar de
pequeno, foi suficiente para demonstrar o enorme potencial da microtomografia de alta
resoluo nas investigaes sobre a influncia dos parmetros microestruturais do
osso trabecular na qualidade ssea.

23

7.

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Ensaios Mecnicos e Microtomografia Tridimensional, Projeto Interinstitucional,
2008.

25

Anexo
(Software CT-Analyser)
O uso do software CT-Analyser para quantificao microestrutural envolve as
seguintes etapas:
Etapa 1: Abrir os arquivos de reconstruo com formato bmp

Etapa 2: Observar as sees reconstrudas

Etapa 3: Escolha da ROI (anlise 2D) e do VOI (anlise 3D) com formato irregular ou
regular

26
Etapa 4: Binarizao, Anlise de Densidade e Reconstruo 3D

Binarizao

Reconstruo 3D

Etapa 5: Anlise Morfomtrica 2D ou 3D

Anlise 2D

27

Escolha dos parmetros de interesse da quantificao 3D

Anlise 3D