Jaminan Mutu Laboratorium Mikrobiologi merupakan bagian atau penerapan dari ISO

17025 jaminan mutu laboratorium yang dikhususkan untuk laboratorium mikrobiologi.

1. Personil
1.1 pengujian mikrobiologi harus dilakukan dan diawasi oleh orang yang berpengalaman,
berkualifikasi dalam mikrobiologi atau setara. Staf harus memiliki pelatihan dasar
mikrobiologi dan pengalaman praktis yang relevan sebelum diperbolehkan untuk
melakukan pekerjaan yang tercakup dalam ruang lingkup pengujian.
1.2 deskripsi pekerjaan saat ini untuk semua personil yang terlibat dalam pengujian dan /
atau kalibrasi, validasi dan verifikasi harus dipelihara. Laboratorium juga harus
mempertahankan catatan dari semua tenaga teknis, yang menjelaskan kualifikasi mereka,
pelatihan dan pengalaman.
1.3 Jika laboratorium menyertakan pendapat dan interpretasi hasil tes dalam laporan, ini
harus dilakukan oleh petugas yang berwenang dengan pengalaman yang sesuai dan
pengetahuan yang relevan dari aplikasi spesifik termasuk, misalnya, persyaratan
peraturan dan teknologi dan kriteria penerimaan.
1.4 Manajemen laboratorium harus memastikan bahwa semua personel memiliki
kompetensi pengujian dan pengoperasian peralatan. Serta mendapat pelatihan yang
memadai,mencakup pelatihan teknik dasar misalnya analisa metode tuang, menghitung
koloni, teknik aseptik, pembuatan media,membuat serial pengenceran , dan teknik dasar
dalam diidentifikasi, dengan penerimaan ditentukan berdasarkan kriteria objektif yang
relevan. Personil hanya dapat melakukan tes pada sampel sesuai dengan kompetensinya,
atau jika tidak sesuai mereka melakukannya di bawah pengawasan yang memadai.
Kompetensi harus dipantau secara kontinyu untuk menetukan pelatihan apa yang
diperlukan.
Apabila suatu metode atau teknik yang digunakan buka metode rutin(metode baru),
kompetensi personil untuk melakukan tes harus diverifikasi sebelum pengujian
dilakukan. Dalam beberapa kasus dapat diterima untuk berkaitan kompetensi untuk
teknik umum atau instrumen yang digunakan daripada metode tertentu.
1.5 Personil harus dilatih prosedur yang diperlukan untuk penyimpanan mikroorganisme
dalam fasilitas laboratorium.

1.6 Personil harus dilatih penanganan mikroorganisme yang aman.

2. Lingkungan
2.1 Bangunan/Gedung
2.1.1 laboratorium Mikrobiologi dan peralatan pendukung tertentu (misalnya autoklaf dan
peralatan gelas) harus disediakan khusus dan dipisahkan dari area lain, terutama dari area
produksi.
2.1.2 Mikrobiologi laboratorium harus dirancang agar sesuai dengan Kegiatan yang akan
dilakukan di dalamnya. Harus ada ruang yang cukup untuk semua kegiatan untuk
menghindari mencampur, kontaminasi dan kontaminasi silang. Harus ada ruang yang
cocok cukup untuk sampel, organisme acuan, media (jika perlu, dengan pendinginan),
pengujian dan catatan. Dikarenakan sifat dari beberapa bahan (misalnya, media steril
terhadap organisme acuan atau budaya diinkubasi), lokasi penyimpanan terpisah mungkin
diperlukan.
2.1.3 Laboratorium harus tepat dirancang dan harus mempertimbangkan kesesuaian
bahan-bahan konstruksi untuk memungkinkan pembersihan yang sesuai, desinfeksi dan
meminimalkan risiko kontaminasi.
2.1.4 Harus ada pasokan udara terpisah ke laboratorium dan area produksi. Unit
penanganan udara terpisah dan ketentuan lainnya, termasuk kontrol suhu dan kelembaban
di mana diperlukan, harus di tempat untuk laboratorium mikrobiologi. Udara disuplai ke
laboratorium harus berkualitas yang tepat dan seharusnya tidak menjadi sumber
kontaminasi.
2.1.5 Akses ke laboratorium mikrobiologi harus dibatasi hanya ke petugas yang
berwenang. Personil harus dibuat mengetahui: - Akses yang sesuai dan prosedur
memasuki dan keluar lab;
- Tujuan penggunaan daerah tertentu;
- Pembatasan yang diberlakukan area kerja dalam bidang-bidang tertentu;
- Alasan untuk menerapkan pembatasan tersebut, dan
- Tingkat isolasi yang layak.
2.1.6 kegiatan laboratorium, seperti persiapan sampel, media dan persiapan peralatan dan

penghitungan mikroorganisme, harus dipisahkan oleh ruang atau setidaknya jeda waktu,
sehingga dapat meminimalkan risiko kontaminasi silang, hasil positif palsu dan hasil
negatif palsu. Dimana daerah non dedicated digunakan, prinsip-prinsip manajemen risiko
harus diterapkan. Pengujian sterilitas harus selalu dilakukan di tempat khusus.
2.1.7 Pertimbangan harus diberikan untuk desain sesuai diklasifikasikan.
daerah untuk operasi yang akan dilakukan dalam laboratorium mikrobiologi. klasifikasi
harus didasarkan pada kekritisan produk dan operasi yang dilaksanakan di daerah.
Pengujian sterilitas harus dilakukan di bawah kelas yang sama seperti yang digunakan
untuk operasi manufaktur steril / aseptik.
2.1.8 Secara umum, peralatan laboratorium seharusnya tidak rutin dipindahkan antara
daerah kelas kebersihan yang berbeda, untuk menghindari kontaminasi silang tidak
disengaja. Peralatan laboratorium yang digunakan di laboratorium mikrobiologi tidak
boleh digunakan di luar wilayah mikrobiologi, kecuali ada tindakan pencegahan khusus
di tempat untuk mencegah kontaminasi silang.
2.2 Pemantauan lingkungan di laboratorium.
2.2.1 Apabila diperlukan dan sesuai (misalnya di daerah untuk pengujian sterilitas)
program pemantauan lingkungan harus di tempat yang meliputi, misalnya, menggunakan
pemantauan udara aktif, settling udara atau pelat kontak, suhu dan perbedaan tekanan.
Pemberitahuan serta tindakan batasan harus didefinisikan. Tren hasil pemantauan
lingkungan harus dilaksanakan.
2.3 Pembersihan, disinfeksi dan kebersihan.
2.3.1 Harus ada dokumentasi pembersihan dan Program desinfeksi. Hasil pemantauan
lingkungan harus diperhatikan.
2.3.2 Harus ada prosedur untuk menangani tumpahan.
2.3.3 Harus tersedia fasititas cici tanagn dan desinfeksi untuk tangan yang memadai.
2.4 Fasilitas Uji sterilitas
2.4.1 Fasilitas Uji sterilitas memiliki persyaratan lingkungan yang spesifik untuk
memastikan integritas tes yang dilakukan. WHO good manufacturing practices (GMP)

untuk produk farmasi steril mengharuskan pengujian sterilitas harus dilakukan dan
menentukan persyaratan untuk pengujian sterilitas. Bagian ini menjelaskan persyaratan
clean-room untuk fasilitas uji sterilitas.
2.4.2 pengujian sterilitas harus dilakukan dalam kondisi aseptik, yang harus setara dengan
standar kualitas udara yang dibutuhkan untuk pembuatan aseptik produk farmasi. Tempat,
layanan dan peralatan harus tunduk pada proses kualifikasi yang sesuai.
2.4.3 pengujian sterilitas harus dilakukan dalam Kelas A dengan aliran udara satu arah
pada zona proteksi ataumenggunakan lemari biosafety (jika diperlukan) yang
ditempatkan dalam ruang bersih dengan latar belakang kelas B. Atau pengujian dapat
dilakukan dalam ruang isolasi. Perawatan harus dilakukan sesuai desain tata letak fasilitas
dan pola aliran udara ruang, untuk memastikan bahwa pola aliran udara searah tidak
terganggu.
2.4.4 klasifikasi clean-room dan peralatan pengendalian udara untuk fasilitas uji sterilitas
harus dikaji ulang setidaknya setahun sekali oleh orang yang kompeten atau kontraktor.
Lingkungan harus sesuai dengan batas kelayakan/bakumutu dengan melakukan verifikasi
HEPA filter dan pola aliran udara ruang. Frekuensi pemantauan dapat ditentukan
berdasarkan manajemen risiko mutu/ quality risk management (QRM). Lokasi Pemetaan
untuk titik sampel untuk pemantauan rutin harus didokumentasikan, serta lamanya
paparan, dan frekuensi semua jenis pemantauan lingkungan mikrobiologi harus
ditentukan dalam prosedur tertulis.
2.4.5 Udara yang disuplai ke zona kelas A dan B harus melalui terminal HEPA filter.
2.4.6 alarm untuk aliran udara yang tidak sesuai juga perbedaan tekanan dan instrumen
tertentu harus disediakan (GMP: Pemanasan, ventilasi dan sistem Penyejuk untuk bentuk
sediaan farmasi yang tidak steril (8), dan GMP untuk produk farmasi steril (8).
2.4.7 Pembacaan tekanan Ruangan harus diamati dan dicatat dari alat pengukur yang
dipasang dari luar kecuali sistem pemantauan berkelanjutan tervalidasi telah diinstal.
Minimal, pembacaan harus diambil sebelum masuknya operator untuk melakukan
pengujian. Pengukur tekanan harus diberi label untuk menunjukkan area yang diperikasa
dan dengan spesifikasi dapat diterima.
2.4.8 Masuk ke ruangan yang bersih (clean-room) harus melalui sistem airlocks dan
ruang Ganti di mana operator diwajibkan untuk mengenakan pakaian yang sesuai untuk

area bersih (clean-room). Ruang ganti diperbolehkan seperti kondisi kelas yang sama
dengan ruang pelayanan (serves room). Ruang ganti harus memiliki ukuran yang
memadai untuk kemudahan saat mengganti pakaian. Harus ada pembatas yang jelas dari
zona yang berbeda.
2.4.9 pemantauan mikrobiologi lingkungan harus mencerminkan fasilitas yang digunakan
(ruang atau isolator) dan termasuk kombinasi metode pengambilan sampel udara dan
permukaan yang sesuai dengan fasilitas, seperti:
-Exsposure udara dengan mebuka cawan petri yang berisi media agar
-Swab permukaan
-pemeriksaan kontak permukaan dengn metode rodac plate atau dengan petri film
-pengecekan sarungtangan yang dikenakan oleh operator
Pemantauan mikroba dilingkungan zona uji sterilitas harus dilakukan pada tiap sesi
bekerja di bawah kondisi operasional (dinamis).

3. Validasi metode uji

3.1 Metode uji standar tetap harus divalidasi. Selain itu, metode tes khusus yang
digunakan oleh laboratorium untuk pengujian produk tertentu harus terbukti cocok untuk
digunakan dalam memulihkan/recovery bakteri, jamur dan kapang yang terdapat pada
produk tertentu tersebut. Laboratorium harus menunjukkan bahwa unjuk kerja metode uji
standar dapat dipenuhi oleh laboratorium sebelum menggunakan metode tersebut untuk
pengujian rutin (metode terverifikasi) dan juga metode tes (khusus untuk produk tertenu)
telah memperlihatkan hasil uji yang sama dengan uji pada positif dan negatif kontrol.
3.2 Metode pengujian tidak berdasarkan metode standar atau referensi lain yang diakui
harus divalidasi sebelum digunakan. Validasi harus terdiri, dimana tepat, menentukan
akurasi, presisi, spesifisitas, batas deteksi, batas kuantitasi, linieritas dan ketahanan.
Potensi dampak penghambatan dari sampel harus diperhitungkan ketika menguji berbagai
jenis sampel. Hasil harus dievaluasi dengan metode statistik yang sesuai, misalnya seperti
yang dijelaskan dalam farmakope nasional, regional maupun internasional.
4. Peralatan

Setiap item peralatan, instrumen atau perangkat yang digunakan untuk pengujian,
verifikasi dan kalibrasi harus diidentifikasi secara unik. Sebagai bagian dari sistem mutu,
laboratorium harus memiliki program terdokumentasi untuk kualifikasi, kalibrasi,
verifikasi kinerja, pemeliharaan dan sistem untuk memantau penggunaan peralatannya.
4.1 Pemeliharaan peralatan
4.1.1 Pemeliharaan peralatan yang sangat penting harus dilakukan secara berkala sesuai
dengan prosedur yang terdokumentasi. Catatan rinci harus disimpan.
4.2 Kalibrasi, verifikasi dan pemantauan penggunaan.
4.2.1 Tanggal kalibrasi dan servis dan tanggal kalibrasi ulang harus jelas ditunjukkan
pada label yang melekat pada instrumen.
4.2.2 Frekuensi kalibrasi dan verifikasi kinerja peralatan akan ditentukan dari unjukkerja
yang terdokumentasi dan akan didasarkan pada kebutuhan, jenis dan kinerja sebelumnya.
Interval antara kalibrasi dan verifikasi harus lebih pendek daripada waktu peralatan telah
ditemukan untuk mengambil melayang di luar batas yang dapat diterima. Kinerja
peralatan harus sesuai dengan kriteria penerimaan yang telah ditetapkan.
4.2.3 perangkat pengukuran Suhu
4.2.3.1 Apabila suhu memiliki efek langsung pada hasil analisis atau sangat penting untuk
kinerja yang benar dari peralatan, alat ukur suhu harus kualitas yang tepat untuk
mencapai akurasi yang diperlukan (misalnya termometer cair di kaca, termokopel dan
platinum termometer resistensi (PRT) yang digunakan dalam inkubator dan otoklaf).
4.2.3.2 Kalibrasi perangkat harus sesuai dengan standar nasional atau internasional untuk
suhu.
4.2.4 Inkubator, water bath dan oven
Stabilitas suhu, keseragaman distribusi suhu dan waktu yang dibutuhkan untuk mencapai
kondisi kesetimbangan dalam inkubator, water bath, dan suhu bagian dalam oven harus
dikontrol . Perlakuan khusus sehubungan dengan penggunaan khas (misalnya, posisi,
ruang antara, dan tinggi, tumpukan cawan Petri) ditetapkan dari awal dan
didokumentasikan . kesetabilan karakteristik awal peralatan dicatat selama validasi dan
harus diperiksa juga dicatat setelah setiap kali terjadi perbaikan yang signifikan atau
modifikasi. Suhu operasi jenis peralatan harus dipantau dan catatan disimpan.
Penggunaan peralatan harus dipertimbangkan ketika menentukan apakah kontrol

temperatur diperlukan
4.3.5.1 Autoklaf harus mampu memenuhistandar waktu dan temperatur sterilisasi,
pemantauan tekanan saja tidak dapat diterima. Sensor yang digunakan untuk mengontrol
atau memantau siklus operasi memerlukan kalibrasi dan kinerja timer harus diverifikasi.
4.3.5.2 validasi awal harus mencakup studi kinerja (survei distribusi temperatur ruang
autoklaf) untuk setiap siklus operasi dan setiap konfigurasi beban yang digunakan dalam
praktek. Proses ini harus diulang setelah setiap ada perbaikan yang signifikan atau
modifikasi (misalnya penggantian penyetelan/setting thermoregulator atau programmer,
mengubah beban muat atau pengaturan siklus operasi. Validasi dan revalidasi harus
mempertimbangkan kesesuaian datang dan turun kali serta waktu pada suhu sterilisasi.
4.3.5.3 Instruksi kerja yang jelas harus ditetapkan berdasarkan profil pemanasan yang
ditentukan untuk keperluan khusus selama validasi / revalidasi. Kriteria penerimaan /
penolakan harus dibuat dan catatan operasi autoclave, termasuk suhu dan waktu,
disimpan untuk setiap siklus.
4.3.5.4 Pemantauan bisa diperoleh misalnya dengan salah satu cara berikut:
- Menggunakan termokopel dan perekam untuk menghasilkan grafik atau cetakan;
- Pengamatan langsung dan pencatatan suhu maksimum dicapai dan waktu pada suhu
tersebut.
Selain secara langsung memonitor suhu autoclave, efektivitas operasi selama setiap siklus
dapat diperiksa dengan menggunakan indikator kimia atau biologis untuk tujuan
sterilisasi atau dekontaminasi. Autoclave tape atau Indikator harus digunakan hanya
untuk menunjukkan bahwa muatan telah diproses, tidak untuk menunjukkan penyelesaian
siklus diterima.
Laboratorium harus memiliki autoclave terpisah untuk dekontaminasi/destruksi. Namun,
dalam kasus luar biasa satu autoclave dapat diterima asalkan tindakan pencegahan
dekontaminasi terpisah dan saat sterilisasi, dan program pembersihan didokumentasikan
meliputi lingkungan internal dan eksternal dari autoklaf.
4.3.6 Neraca dan anak timbang harus dikalibrasi secara berkala dan tertelusur (sesuai
dengan tujuan penggunaannya) menggunakan anak timbang sesuai standar yang
tertelusur ke anak timbang standar bersertifikat.
4.3.7.1 Laboratorium Mikrobiologi harus melakukan verifikasi awal peralatan volumetrik

(dispenser otomatis, dispenser / pengencer, pipet tangan mekanik dan pipet sekali pakai).
Melakukan pemeriksaan rutin untuk memastikan bahwa peralatan ini dalam kondisi
sesuai spesifikasi yang dibutuhkan. Verifikasi awal seharusnya tidak perlu untuk alat
gelas yang telah disertifikasi untuk toleransi tertentu misal gelas piala(backer glass).
Peralatan harus diperiksa adalah peralatan yang menggunakan pengaturan volume, untuk
memastikan volume yang dipindahkan/dipiipet telah sesuai.
4.3.7.2 Untuk peralatan volumetrik "sekali pakai, laboratorium harus mendapatkan
pasokan dari supplier dengan sistem mutu yang diakui dan relevan. Setelah melakuakn
validasi awal terhadap kesesuaian peralatan, dianjurkan untuk melakukan pemeriksaan
acak untuk memastikan akurasi. Jika supplier tidak memiliki sistem mutu yang diakui,
laboratorium harus memeriksa setiap batch peralatan untuk kesesuaian.
4.3.8 Peralatan lainnya, Conductivity meter, oxygen meter, pH meters dan instrumen
serupa lainnya harus diverifikasi secara berkala atau sebelum setiap kali digunakan.
Buffer digunakan untuk keperluan verifikasi harus disimpan dalam kondisi yang sesuai
dan harus ditandai dengan tanggal kadaluwarsa.
Jika kelembaban berpengaruh terhadap hasil tes, hygrometers harus dikalibrasi, kalibrasi
yang tertelusur ke standar nasional atau internasional.
Timer, termasuk timer autoclave, harus diverifikasi menggunakan dikalibrasi waktu atau
sinyal waktu nasional. Ketika sentrifugal digunakan dalam prosedur pengujian, penilaian
terhadap rotasi per menit (RPM) harus dibuat. jika hasil sentrifge berpengaruh terhadap
hasil pengujian maka centrifuge harus dikalibrasi.

5. Reagen dan media kultur

Laboratorium harus memastikan bahwa kualitas reagen dan media yang digunakan sesuai
untuk pengujian yang bersangkutan.
5.1 Reagen
5.1.1 Laboratorium harus memeriksa kesesuaian setiap batch reagen penting untuk tes,
sejak awal dan selama umur simpan.
5.2 Media

5.2.1 Media dapat dibuat sendiri atau dibeli baik sebagian atau sepenuhnya siap. Vendor
media dibeli harus disetujui dan berkualitas. Vendor yang berkualitas dapat mengesahkan
beberapa parameter kualitas yang tercantum selanjutnya. Promosi Pertumbuhan dan, jika
sesuai, tes kinerja lain yang sesuai (lihat bagian 5.2.2) harus dilakukan pada semua media
pada setiap batch dan pada setiap pengiriman. Dimana pemasok media sepenuhnya siap
memenuhi syarat dan memberikan sertifikasi promosi pertumbuhan per batch media dan
kondisi transportasi telah memenuhi syarat, pengguna dapat mengandalkan sertifikat
produsen dengan verifikasi periodik nya atau hasil nya.
5.2.2 Kinerja media kultur yang sesuai, pengencer dan cairan suspensi lainnya harus
diperiksa, bila relevan, berkaitan dengan:
- Pemulihan/recovery atau pemeliharaan kelangsungan hidup organisme sasaran.
Pemulihan 50-200% (setelah inokulasi tidak lebih dari 100 unit pembentuk koloni (CFU
atau cfu) harus dibuktikan;
- Penghambatan atau penekanan organisme non-target;
- Biokimia (diferensial dan diagnostik) sifat, dan
- Sifat lain yang sesuai (misalnya pH, volume dan sterilitas).
Prosedur kuantitatif untuk evaluasi pemulihan atau kelangsungan hidup lebih
diutamakan.
5.2.3 Bahan baku (kedua formulasi kering komersial dan konstituen secara individu) dan
media harus disimpan dalam kondisi yang sesuai yang direkomendasikan oleh produsen,
misalnya sejuk, kering dan gelap. Semua wadah, terutama untuk media kering, harus
tertutup rapat. Media Kering yang menggumpal atau retak atau menunjukkan perubahan
warna tidak boleh digunakan.
5.2.4 Kualitas air mikrobiologi yang tepat dan yang bebas dari bakterisida, zat
penghambat atau mengganggu, harus digunakan untuk persiapan kecuali metode
pengujian ditentukan lain.
5.2.5 Media yang mengandung antimetabolites atau inhibitor harus disusun dengan
menggunakan peralatan gelas khusus, sebagai akumulasi dari agen tersebut ke media lain
bisa menghambat pertumbuhan dan deteksi mikroorganisme yang ada dalam sampel yang
diuji. Jika peralatan gelas khusus tidak digunakan, prosedur cuci peralatan gelas harus
divalidasi.

5.2.6 Menuangkan media setelah sterilisasi harus dilakukan di bawah aliran udara searah
(UDAF) untuk meminimalkan potensi kontaminasi lingkungan. Ini harus dianggap
sebagai persyaratan minimum untuk media yang akan digunakan dalam kaitannya dengan
pengujian produk steril. Ini termasuk pendinginan media, tutup wadah perlu dilepaskan
selama pendinginan untuk mencegah penumpukan kondensasi.
5.2.7 Media tuang yang diradiasikan mungkin memerlukan penambahan antioksidan dan
scavenger radikal bebas untuk memberikan perlindungan dari efek dari proses iradiasi.
Media iradiasi harus divalidasi dengan melakukan pengujian pertumbuhan promosi
kuantitatif pada kedua media iradiasi dan non-radiasi.
5.2.8 umur simpan media disiapkan dalam kondisi penyimpanan yang ditentukan harus
ditetapkan dan diverifikasi.
5.2.9 Batch media harus diidentifikasi dan kesesuaian dengan spesifikasi kualitas yang
didokumentasikan. Untuk media dibeli laboratorium pengguna harus memastikan bahwa
ia akan diberitahu oleh produsen setiap perubahan spesifikasi kualitas.
5.2.10 Media harus disiapkan sesuai dengan instruksi pabrik, dengan spesifikasi seperti
waktu dan suhu untuk sterilisasi.
5.2.11 perangkat Microwave tidak boleh digunakan untuk pencairan media karena
distribusi yang tidak konsisten dari proses pemanasan.
5.3 Pelabelan
5.3.1 Laboratorium harus memastikan bahwa semua reagen (termasuk larutan stok),
media, dan cairan pengencer pensuspensi lainnya cukup diberi label untuk menunjukkan,
sesuai, identitas, konsentrasi, kondisi penyimpanan, tanggal persiapan, tanggal
kadaluwarsa divalidasi dan / atau periode penyimpanan yang dianjurkan . Penanggung
jawab untuk pembuatan harus diidentifikasi dari catatan. 5.4 Resusitasi Organisme
5.4.1 Resusitasi Organisme diperlukan di mana metodologi pengujian dapat
menimbulkan sel cedera. Misalnya, paparan: - Efek merugikan pengolahan, misalnya
panas;
- Agen antimikroba;
- Pengawet;
- Tekanan osmotik Ekstrim , dan

- Ekstrim pH.
5.4.2 Organisme resusitasi dapat dicapai dengan:
- Paparan media cair seperti larutan garam sederhana pada suhu kamar selama 2 jam;
- Paparan media perbaikan padat selama 4-6 jam.
6. Bahan acuan dan kultur acuan
6.1 Standar internasional
6.1.1 Bahan acuan dan bahan acuan bersertifikat umumnya
digunakan di laboratorium mikrobiologi untuk memenuhi syarat, verifikasi dan kalibrasi
peralatan. Bila mungkin bahan-bahan referensi harus digunakan dalam matriks yang
sesuai.
6.2 Kultur Acuan
6.2.1 Kultur Acuan yang diperlukan untuk menetapkan kinerja yang bisa diterima media
(termasuk alat tes), untuk memvalidasi metode, untuk memverifikasi kesesuaian metode
pengujian dan untuk menilai atau mengevaluasi kinerja yang sedang berlangsung.
Ketertelusuran diperlukan, misalnya, saat membuat performa media test kit dan metode
validasi. Untuk menunjukkan ketertelusuran, laboratorium harus menggunakan strain
mikroorganisme acuan yang diperoleh langsung dari koleksi nasional atau internasional
yang diakui, bila ada. Atau, turunan komersial yang semua sifat yang relevan telah
ditunjukkan oleh laboratorium untuk menjadi setara pada titik penggunaan dapat
digunakan.
6.2.2 strain Acuan dapat disubkultur sekali untuk menyediakan stok acuan. Kemurnian
dan pemeriksaan biokimia harus dilakukan secara paralel secara tepat. Disarankan untuk
menyimpan stok acuan dalam aliquot baik dibekukan atau liofilisasi. kultur kerja untuk
penggunaan rutin harus subkultur utama dari stok acuan (lihat Lampiran 5 pada
penggunaan umum dari kultur acuan). Jika stok referensi telah dicairkan, mereka tidak
boleh dibekukan kembali dan digunakan kembali.
6.2.3 Stok Kerja sebaiknya tidak disubkultur. Biasanya tidak lebih dari lima generasi

(atau bagian) dari strain. referensi asli dapat disubkultur jika ditentukan dengan metode
standar atau laboratorium dapat memberikan bukti dokumen bahwa telah ada perubahan
dalam setiap properti yang relevan. Turunan Komersial strain acuan hanya dapat
digunakan sebagai kultur kerja.

7. Pengambilan contoh/sampling
7.1 Dimana laboratorium pengujian bertanggung jawab untuk sampling primer untuk
mendapatkan item tes, sangat disarankan bahwa pengambilan sampel ini dilindungi oleh
sistem jaminan mutu dan harus tunduk pada audit reguler.
7.2 Setiap desinfeksi proses yang digunakan untuk memperoleh sampel (misalnya
disinfeksi titik sampel) tidak harus berkompromi tingkat mikroba dalam sampel.
7.3 Transportasi dan penyimpanan sampel harus di bawah kondisi yang menjaga
integritas sampel (misalnya dingin atau beku jika perlu). Pengujian sampel harus
dilakukan sesegera mungkin setelah pengambilan sampel. Untuk sampel di mana
pertumbuhan populasi mikroba selama transportasi dan penyimpanan mungkin harus
menunjukkan bahwa kondisi penyimpanan, waktu dan suhu, tidak akan mempengaruhi
keakuratan hasil pengujian. Kondisi penyimpanan harus dipantau dan catatan disimpan.
Tanggung jawab untuk transportasi, penyimpanan antara pengambilan sampel dan tiba di
laboratorium pengujian harus didokumentasikan secara jelas.
7.4 Sampling sebaiknya hanya dilakukan oleh petugas terlatih. Ini harus dilakukan secara
aseptik menggunakan peralatan steril. Tindakan pencegahan yang tepat harus diambil
untuk memastikan bahwa integritas sampel dipertahankan melalui penggunaan wadah
tertutup steril untuk pengumpulan sampel mana yang sesuai. Mungkin perlu untuk
memantau kondisi lingkungan, misalnya, pencemaran udara dan suhu, di lokasi
pengambilan sampel. Waktu pengambilan sampel harus dicatat, jika sesuai.

8. Penanganan dan identifikasi sampel

8.1 Laboratorium harus memiliki prosedur yang mencakup pengiriman dan penerimaan

sampel dan identifikasi sampel. Jika kuantitas sampel tidak memadai atau sampel dalam
kondisi yang buruk karena kerusakan fisik, suhu yang salah, kemasan robek atau
pelabelan kurang, laboratorium harus berkonsultasi dengan klien sebelum memutuskan
apakah akan menguji atau menolak sampel.
8.2 Laboratorium harus merekam semua informasi yang relevan, misalnya
- tanggal yang relevan, dan waktu penerimaan;
- Kondisi sampel pada penerimaan dan, bila perlu suhu, dan
- Karakteristik pelaksanaan sampling (termasuk tingkat sampling dan kondisi sampel).
8.3 Sampel menunggu pengujian harus disimpan dalam kondisi yang sesuai untuk
meminimalkan perubahan apapun terhadap populasi mikroba pada sample. Kondisi
penyimpanan harus divalidasi, didefinisikan dan dicatat.
8.4 kemasan dan label sampel dapat sangat terkontaminasi sehingga harus ditangani dan
disimpan dengan hati-hati untuk menghindari penyebaran kontaminasi. Proses desinfeksi
diterapkan pada wadah luar seharusnya tidak mempengaruhi integritas sampel. Perlu
dicatat bahwa alkohol tidak bersifat sporicidal(menghancurkan spora).
8,5 Subsampling oleh laboratorium segera sebelum pengujian mungkin diperlukan
sebagai bagian dari metode pengujian. Mungkin tepat bahwa itu dilakukan sesuai dengan
standar nasional atau internasional, yang ada, atau dengan in-house methods yang telah
divalidasi. Prosedur Subsampling harus dirancang untuk mengumpulkan sampel yang
representatif.
8.6 Harus ada prosedur tertulis untuk penyimpanan dan pembuangan sampel. Jika
integritas sampel dapat dipertahankan mungkin tepat bahwa sampel yang disimpan
sampai hasil tes diperoleh, atau lebih lama jika diperlukan. Porsi sampel laboratorium
yang diketahui terkontaminasi harus didekontaminasi(destruksi) sebelum dibuang.

9. Pembuangan limbah terkontaminasi

9.1 Prosedur untuk pembuangan bahan yang terkontaminasi harus dirancang untuk
meminimalkan kemungkinan mencemari lingkungan pengujian atau bahan. Ini adalah

masalah manajemen laboratorium yang baik dan harus sesuai dengan standar nasional /
internasional lingkungan atau kesehatan dan peraturan keselamatan.

10. Jaminan kualitas hasil dan kontrol kualitas kinerja

10.1 Kontrol kualitas internal
10.1.1 Laboratorium harus memiliki sistem penjaminan mutu internal atau kontrol
kualitas (misalnya penyimpangan penanganan, penggunaan sampel spiked, replikasi
pengujian dan partisipasi dalam uji profisiensi, mana yang sesuai) untuk menjamin
konsistensi hasil dari hari ke hari dan kesesuaian dengan kriteria yang ditetapkan.

11. Prosedur pengujian

11.1 Pengujian sebaiknya dapat dilakukan menurut prosedur yang dijelaskan dalam
Standar nasional, regional dan internasional.
11.2 prosedur pengujian alternatif dapat digunakan jika mereka sudah divalidasi dan
setara dengan metode resmi/standar.

12. Laporan Pengujian

12.1 Jika hasil enumerasi adalah negatif, hal itu harus dilaporkan sebagai "tidak terdeteksi
untuk unit didefinisikan" atau "kurang dari batas deteksi untuk unit didefinisikan".
Hasilnya tidak harus diberikan sebagai "nol untuk unit didefinisikan" kecuali itu adalah
persyaratan peraturan. Hasil uji kualitatif harus dilaporkan sebagai "terdeteksi / tidak
terdeteksi dalam jumlah atau volume yang ditetapkan". Mereka juga dapat dinyatakan
sebagai "kurang dari jumlah tertentu dari organisme untuk unit didefinisikan" di mana
jumlah tertentu dari organisme melebihi batas deteksi metode dan ini telah disepakati
dengan klien. Dalam data mentah hasilnya tidak harus diberikan sebagai nol untuk unit
didefinisikan kecuali itu adalah persyaratan peraturan. Sebuah nilai yang dilaporkan "0"
dapat digunakan untuk entri data dan perhitungan atau analisis kecenderungan dalam

database elektronik.
12.2 Apabila estimasi ketidakpastian hasil tes dinyatakan pada laporan pengujian, batasan
(terutama jika estimasi tidak termasuk komponen disumbangkan oleh distribusi
mikroorganisme dalam sampel) harus dibuat jelas kepada klien.