UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

CTEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS
DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
TEMA:
INCRUSTACIN DE TEJIDOS EN PARAFINA
GRUPO: N6
TERCER SEMESTRE
PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016
RIOBAMBA ECUADOR
GRUPO N-6

TCNICAS HISTOLGICAS

INCRUSTACIN DE TEJIDOS EN PARAFINA

INTEGRANTES:
N-

APELLIDOS Y NOMBRES

DE LA TORRE ZABALA JESSICA KATHERINE

MACHADO YANZA CAROLINA MONSERRATH

OROZCO PILCO JOSUE ANDRES

TEMA:
INCRUSTACIN DE TEJIDOS EN PARAFINA

PARTICIPACIN
N-

25%

50%

75%

100%

Observacin
Colabor con todas las
necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo

100%

100%

Su colaboracin fue clave

para la correcta
elaboracin del trabajo.

100%

Trabaj correctamente, y
colabor en todo lo
necesario.

INTRODUCCIN

Cal. Docente

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INCRUSTACIN DE TEJIDOS EN PARAFINA

Para poder ser estudiados con el microscopio, los tejidos de las biopsias, piezas
quirrgicas o autopsias deben ser seccionados en cortes muy delgados, generalmente de
entre 3 y 6 micras (milsimas de milmetro). Previamente es necesario conferirles una
consistencia homognea mediante lo que llamamos:
PROCESO DE INCLUSIN. Este se realiza habitualmente mediante procesadores
automticos de tejidos y estaciones de inclusin.
Inclusin en parafina: Es el proceso que se utiliza habitualmente. Su objetivo es sustituir
el agua de los tejidos por parafina liquida caliente (58 C) que al enfriarse adquirir una
consistencia adecuada para el corte. Como la parafina es insoluble en agua es preciso
eliminar previamente esta ltima del tejido, sustituyndola inicialmente por alcohol
(deshidratacin) y posteriormente por tolueno o xileno (aclaramiento) que al ser
solubles en parafina pueden ser sustituidos finalmente por ella. As se obtendr un tejido
embebido en parafina que ser introducido en moldes con parafina liquida. Al enfriarse
los moldes obtendremos un "bloque de parafina" a partir del cual pueden obtenerse las
secciones. (Servicio de Anatoma Patolgica, 2011)

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Adquirir el conocimiento necesario sobre la orientacin e inclusin de tejidos en
parafina, para lograr un bloque consistente en el que est incluido el tejido previamente
procesado.
OBJETIVOS ESPECFICOS

Aprender la definicin de inclusin y cul es la finalidad de la misma.

Identificar el medio de inclusin usado con ms frecuencia.
Reconocer los puntos de fusin de la parafina slida y liquida.
Conocer el equipo para la inclusin de tejidos.
Diferenciar los moldes adecuados de acuerdo con el tamao de la muestra.
Conocer la orientacin del tejido para la realizacin de un bloque.

FUNDAMENTO TERICO

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INCLUSIN DE TEJIDOS EN PARAFINA

Ilustracin 1 Bloques de parafina

La inclusin es el proceso por el cual se incrementar la dureza y consistencia de la

pieza para permitir su corte. Esto se consigue incluyendo la pieza en una sustancia que
tenga la dureza y consistencia adecuada. La sustancia habitualmente utilizada en este
proceso es la parafina. El reto consiste en sustituir el agua que hay en el interior y
exterior de las clulas por parafina.
La parafina es una sustancia que por encima de los 600C es lquida y solidifica por
debajo de esta temperatura, esto facilita de difusin de la parafina por los tejidos cuando
est lquida, no obstante, otro problema que hay que salvar es el hecho que la parafina
es altamente hidrfoba, es decir no se puede mezclar con el agua o sustancias en medio
acuoso. Por ello el siguiente paso que debe sufrir las muestras es la eliminacin del agua
de la muestra: la deshidratacin.
La deshidratacin de las muestras se consigue mediante una sustitucin progresiva del
agua por etanol. Para conseguirlo se somete a las piezas a sucesivos baos de etanol de
gradacin creciente, empezando por etanol 500 700 y concluyendo con diferentes
baos de etanol absoluto (1000), pasando por baos de etanol 960.
La pieza, ya deshidratada, an no puede ser pasada a parafina ya que el etanol no es
miscible con la parafina. Se usa un agente intermediario, es decir una sustancia que sea
miscible tanto con el etanol como con la parafina. El intermediario habitualmente usado
es el Xileno, en el que la pieza sufre varios baos para sustituir totalmente al etanol.
Con la pieza en Xileno, se suele pasar por un bao de una mezcla de Xileno-Parafina al
50% para favorecer la penetracin de la parafina. Posterior a este bao se suceden
varios baos en parafina pura hasta conseguir que la parafina haya penetrado

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completamente en toda la pieza. Todos estos baos que incorporan parafina se realizan
en estufa 600C para mantener la parafina lquida. En algunos laboratorios todo este
proceso se realiza de forma automatizada usando un dispositivo (robot), que va
cambiando las muestras de un lquido a otro mediante un programa preestablecido.
Una vez pasado el tiempo necesario para que la parafina penetre en los tejidos, la
cuestin es realizar un bloque con todo ello, que pueda ser usado en el micrtomo para
obtener cortes.
(Martn, 2012)
ESTACION DE INCLUSION DE TEJIDOS EN PARAFINA

Ilustracin 2 Estacin de tejidos en parafina

La forma ms sencilla es usar un molde en el que se vierte la parafina y en el que se

introduce la muestra procesada y se deja enfriar para que el conjunto se solidifique. En
muchos laboratorios se utiliza una estacin a tal efecto. Estas estaciones disponen de
depsito de parafina lquida (600C), desde el que se puede dispensar parafina sobre el
molde mediante un grifo; dispone tambin de una cmara donde se guardan los
diferentes moldes a 600C y una placa caliente (600C) y otra fra (40C). La dinmica es
sencilla, se coloca el molde debajo del grifo dispensador de parafina y se llena con
parafina lquida, se coloca la pieza y se orienta, colocando, por ltimo, la base del casete
de inclusin. Se desplaza con cuidado el conjunto encima de la placa fra para conseguir
una solidificacin rpida que no forme cristales y una vez solidificado se extrae el
molde obteniendo un bloque listo para cortar.
(Martn, 2012)

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Ilustracin 3 Colocacin del molde

Ilustracin 4 Dispensador

de parafina

Ilustracin 5 Colocacin de tejido y cubrir con la tapa

parafina la superficie

Ilustracin 6 Relleno con

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Ilustracin 7 Obtencin del bloque de parafina

ENCASTRACIN EN PARAFINA
Las muestras de tejidos estn encastradas en bloques de parafina (o PEG) usando
contenedores disponibles en plstico o porcelana, discos de aluminio, o en "botes
hechos con papel". Cuando uses estos mtodos, extiende una fina capa de aceite de
parafina en la superficie antes de vaciar la parafina lquida para permitir que se
desmonte ms fcilmente el bloque de parafina.

La encastracin de tejidos inhibidos con parafina se realiza ms fcilmente sobre una

plataforma de encastracin. Esta es una superficie simple de aluminio, que tiene una de
sus superficies calentadas y no la otra. Cuando est caliente, el lado calentado mantiene
la parafina lquida permitiendo que el tejido pueda ser orientado.
(Annimo)
ORIENTACION DEL TEJIDO

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Ilustracin 3 Orientacin de los tejidos en parafina

La calidad y la utilidad final de una seccin de tejido depende de la ejecucin impecable

de cada uno de los pasos del procesamiento; cada paso, a su vez, depender
completamente del paso anterior si se desea calidad ptima. An con fijacin adecuada,
procesamiento impecable, y microtoma profesional, una seccin de tejido puede ser
destruida si la inclusin, la localizacin y la orientacin no son adecuadas. El tcnico de
histopatologa debe escrudiar cada uno de los fragmentos del tejido recibido, analizar
su estructura, y decidir cmo situar el tejido en el bloque.
Consideraciones generales:
Las secciones de tejidos son incluidas perfectamente planas para asegurarse de que se
obtenga una seccin completa. Use la presin justa para mantener la seccin plana
contra la superficie del molde. Debe tenerse mucho cuidado para que despus no
aparezcan artefactos causados por un manejo inadecuado de las muestras de tejido.
Estructuras Tubulares
Estructuras tubulares tales como vaso deferente, venas, arterias y oviductos deben ser
incluidas en una forma tal que la cuchilla corte a travs de la luz tubular. La orientacin
debera ser tan vertical como sea posible.
Superficies Epiteliales
Aquellos tejidos que tienen una superficie epitelial, con la piel, el intestino, la vescula
biliar, la vejiga urinaria y el tero, deben ser colocados de forma tal que el plano de
seccin pase a travs de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe colocarse
en la parte ms alta del bloque para que as sea la ltima en ser cortada. El acto de llegar
al epitelio al final de la mocin de corte va a minimizar la presin que es causa de

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distorsin de la capa epitelial. El cortar de ultimo la capa de queratina reduce la

compresin, los rasguos y las cortadas de las capas subcutneas.
Los especmenes, cuando son mltiples deben ser incluidos uno junto al otro con sus
superficies epiteliales orientadas en la misma direccin. Puede ser difcil identificar la
superficie epitelial cuando las biopsias de tejido son muy pequeas.
Especmenes Grandes y Slidos
Los especmenes rectangulares grandes o slidos como el tero, la prstata, la glndula
tiroides y el tejido seo deben ser incluidos con un ligero ngulo en relacin al borde de
la cuchilla. Esta comienza el corte con menos resistencia, reduciendo as la posibilidad
de desplazar el tejido fuera del bloque. La vibracin e inestabilidad del borde de la
cuchilla o del bloque tambin se minimizan notablemente.
Mltiples Especmenes
Mltiples fragmentos de tejido blando y ganglios linfticos deben ser colocados uno
junto al otro con suficiente espacio entre ellos silos tejidos se colocan uno encima del
otro, existe la posibilidad de que el tejido de abajo distorsione el tejido que est encima.
La organizacin metdica de los tejidos hace que la lmina sea ms fcil de estudiar y
que se vea ms profesional que si los fragmentos se incluyen en desorden.
Los tejidos rectangulares pequeos deben ser orientados con su eje longitudinal casi
paralelo al borde de la cuchilla para minimizar los pliegues y la distorsin causados por
presin.
Estructuras Qusticas
Despus de la biseccin, los quistes pequeos adoptan una forma de cpula. Por lo
tanto, los quistes deben ser incluidos con la superficie de corte hacia abajo para que as
la cuchilla corte a travs de todas las capas de la pared del quiste. Hay que asegurarse de
que la cpula no atrape burbujas de aire.
Entre los factores que afecta a la inclusin se encuentran.
1) agitacin
2) calor
3) viscosidad

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4) ultrasonidos
5) vaco

(Buenas Tareas, 2012)

CONCLUSIONES
Se aprendi el significado de la palabra inclusin y para que nos sirve la misma
dentro del laboratorio de Anatoma Patolgica.
Se identific cual es el medio de inclusin o incrustacin usado con ms
frecuencia.
Se reconoci cules son los puntos de fusin de la parafina tanto en su estado
slido como en su estado lquido.
Se conoci el equipo y las partes del mismo que se utilizan para realizar la
inclusin de tejidos en parafina.
Se realiz una diferenciacin de los moldes a utilizar de acuerdo con el tamao
de la muestra.
Se conoci la correcta orientacin de los tejidos para la realizacin de los
bloques de parafina y su posterior corte en el micrtomo.

BIBLIOGRAFA
Annimo. (s.f.). Inclusin en parafina. Obtenido de Inclusin en parafina:
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal
/Documentos/Inclusion_p.htm
Buenas Tareas. (10 de Julio de 2012). Obtenido de Buenas Tareas:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Orientacion-e-Inclusion-DeTejidos/4750487.html#
Martn, V. (5 de Junio de 2012). Tcnicas Histolgicas. Obtenido de Tcnicas
Histolgicas: http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T
%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci
%C3%B3n+de+bloques+en+parafina

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Servicio de Anatoma Patolgica. (14 de Marzo de 2011). Obtenido de
Servicio de Anatoma Patolgica:
http://www.chospab.es/area_medica/anapat/tecnicahistologica.htm
Tcnicas Histolgicas. (s.f.). Obtenido de
http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T
%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci
%C3%B3n+de+bloques+en+parafina

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