Вы находитесь на странице: 1из 9

DESHIDRATACION

DE TEJIDOS.

Qu es la
deshidratacion?

Los tejidos contienen grandes cantidades de agua, tanto intra


como extracelular, que debe ser eliminada y remplazada por
parafina. Este proceso se llama deshidratacin. Debe ser
realizado mediante el uso de alguna substancia que se mezcle
con el agua y tenga cierta afinidad con ella. El mejor agente es
el alcohol etlico, ya que tiene la ventaja de no ser venenoso.
Hay dos mtodos generales para deshidratar tejidos. El ms
comn es el reemplazamiento gradual de agua con un solvente
orgnico por transferencia del tejido a travs de soluciones de
concentraciones crecientes (etanol, acetona)-referido como
una serie de deshidratacin graduada.
Un mtodo menos comn en microscopa de campo claro es
una deshidratacin rpida utilizando un reactivo orgnico (metil
celosolve, dimetoxipropano, trietil fosfato).

Deshidratacin usando una serie de


solventes en gradiente- etanol, acetona

El mtodo ms comn para eliminar el agua de los tejidos usa etanol como agente
deshidratante. Deshidrata el tejido pasando a travs de series de etanol graduado
empezando con un 30% y acabando con etanol 100%. Para todas las diluciones excepto
para la dilucin final de etanol, debe ser usado etanol de 95% comercial. Desde cada paso
en la serie la concentracin es ms relativa que absoluta, tratar el alcohol de 95% como de
100% cuando calcules las diluciones. Diluir con agua destilada a la proporcin adecuada..
Finalmente, la mayora de los fijadores requieren un paso de lavado antes del
procedimiento de deshidratacin. Lavar los tejidos con la solucin fijadora menos el fijador.
La deshidratacin de tejidos puede volverlos transparentes.
Cambiar las soluciones decantando el lquido donde hayan tejidos de tamao grande o
retirando el lquido con una pipeta de vidrio cuando se traten de piezas de pequeo
tamao. Elimina todo menos una pequea cantidad de lquido y aade el siguiente solvente
en series rpidamente. Nunca dejar que los tejidos se sequen o se daarn
irremediablemente.
La cantidad de tiempo en cada solvente depende de la velocidad a al cual el solvente
difunde dentro del tejido. Tejidos pequeos, porosos, necesitan slo de 30 minutos a 2
horas por paso, mientras que un tejido ms grande o duro pueden necesitar como mucho
24 horas por paso
En algunos casos, sustituyendo acetona por etanol debera cosechar resultados superiores,
especialmente para algunos tipos de trabajo en inmunolocalizacin. La acetona, sin
embargo, es considerablemente ms voltil que el etano y las precauciones que deberan
ser tomadas para prevenir la desecacin de tejidos durante el ltimo paso de
deshidratacin, mayores.

DESHIDRATACION RAPIDA
Durante la deshidratacin rpida, el agua del tejido es reemplazada
rpidamente, sin el dao por tensin superficial que puede ir asociado
con los alcoholes o la acetona. El metil celosolve y dimetoxipropano
tienen regiones hidroflicas e hidrofbicas. Esto permite que el solvente
interacte con los lpidos de las membranas biolgicas, sin causar
alteracin.
La mayora de los solventes de deshidratacin no son tambin solventes
de parafina; por tanto incorporaremos varios pasos de intermediarios para
mover el tejido del agente deshidratante hasta la parafina.
Ejemplos de agentes intermedios son Histo-Clear, xileno, isopropanol, y tertbutil alcolhol (TBA). Estos deben ser includos en el programa de
deshidratacin despus de las soluciones de deshidratacin pero antes
de la infiltracin en parafina. Algunos solventes intermedios pueden
endurecer tejidos (xileno) mientras que su qumico homlogo debe ser
ms txico (cloroformo, benceno).
Despus de la deshidratacin, los tejidos deben ser procesados por
cualquier nmero de tcnicas, la deshidratacin es el punto de apoyo
para todas las tcnicas de investigacin en tejidos.

Procedimiento de deshidratacin rpida


Paso
Parafina (temperatura ambiente)
Metacrilatos (temperatura ambiente-4C)
1
Reemplazar el fijador acuoso con acidificador puro DMP, *MC, o TEP; incubar 2 h
Reemplazar el fijador acuoso con MC puro o DMP acidificado, incubar 2 h
2
Hacer 2 cambios en disolvente puro en 4-24 h
Hacer 2 cambios de MC puro o DMP en 4-24 h
3
EtOH 100% + 0.1% Safranina, Eosina, o Azul de Timol para teir temporalmente los tejidos
EtOH 100% + 0.1% Safranina, Eosina, o Azul de Timol para teir temporalmente los tejidos
4
EtOH 100%, incubar 4-24 h
EtOH 100%, incubar 4-24 h
5
n-propanol 100%, in cubar 4-24 h
6
100% TBA, ** incubar 4-24 h
7
Mantener a 27-42C o infiltrar en parafina
Mantener a 4C-temperatura ambiente o infiltrar
* Aadir una gota de HCl concentrado a 100 ml de DMP
** El TBA solidifica a 24C y puede daar los tejidos si cristaliza

Histokinette

Los procesadores automticos de tejidos perfeccionan el


procesamiento de los mismos mediante el uso de calor, vaco,
presin y agitacin.
El histokinette es el equipo para procesar tejidos blandos, estos
procesadores automticos varan en el diseo de su tecnologa, el
ms comn consta de 12 pasos de una hora cada uno en
recipientes de 1l. de capacidad para sus soluciones
correspondientes.
El tiempo de proceso o inmersin en cada uno de los pasos
depende del tipo de equipo con el que se cuente, por lo general
de 12 a 14 horas aproximadamente.
En ocasiones puede funcionar errticamente dando por resultado
especmenes resecados, quemados y mal deshidratados. La
limpieza y cambio de soluciones es indispensable para un buen
proceso de deshidratacin.

Accin de los solventes

(cualquier que sea el producto utilizado debe, en cada etapa su cantidad debe ser superior a 10
veces el volumen del tejido por deshidratacion)

Formol: Su funcin es fijar el tejido es aconsejable en


todos los casos en que no se disponga de un fijador
especial, principalmente cuando se trata de fijar rganos
o tejidos para estudios histolgicos topogrficos.

Alcohol: debido a que una gran parte del tejido est


constituida por agua, se aplica una serie gradual de
soluciones acuosas de menor a mayor de agente
deshidratante. Iniciando con alcohol al 60%, 80%, 96% y
absoluto.

Xilol: es una solucin que es miscible tanto con el


alcohol como con el medio de inclusin a utilizar.
Esta fase se llama aclaramiento ya que el tejido se
torna transparente o claro en el xileno, esto se
debe a que cambia su ndice de refraccin.

Parafina: al infiltrar la parafina liquida o cualquier


medio de inclusin en estado lquido al tejido, se
disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el
tejido. La parafina debe estar fundida a 60
C,.Debido al calor, el xilol o el benzol se evaporan
y los espacios anteriormente ocupados por ellos
son ahora ocupados por la parafina.

Bibliografia

Martes 3 de junio 2014 Anny Rodriguez


http://
procesohistologico.blogspot.mx/2014/06/
tren-de-deshidratacion.html

http://
www.euita.upv.es/varios/biologia/tecni
cas_de_histologia_vegetal/Documentos/D
eshidratacion.htm

Вам также может понравиться