UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NCLEO DE SUCRE
DEPARTAMENTO DE BIOANLISIS
CUMAN

BACTERIOLOGA CLNICA
NCLEO TEMTICO 4
BACILOS GRAM NEGATIVOS
FERMENTADORES

(ENTEROBACTERIACEAE)

Escherichia, Klebsiella, Enterobacter,

Citrobacter y Serratia

Taxonona y Clasificacin
Dominio: Bacteria
Phylum: Proteobacteria

Clase: -Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
*Tribu:
*Gneros:

Clasificacin de los gneros descritos

en la familia Enterobacteriaceae
*Escherichia

Klebsielleae

Klebsielleae

Citrobactereae

Klebsielleae

Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

E. coli

K. pneumoniae

E. aerogenes

C. amalonaticus

S. marcescens

E. cloacae

C. freundii

S. proteamaculans

E. gergoviae

C. kosri (C. diversus)

subesp. proteamaculans

E. sakazakii

C.braaki

S. proteamaculans

E. amnigenus

C. farmeri

Subesp. quinovora

E. cancerogenus

C.rodentium

S. rubidaea

K. oxytoca

E. asburiae

C. sedlakii

S. entomophila

K. ornithinolytica

E. dissolvens

C. werkmanii

S. ficaria

K. planticola

E. hormaechei

C. youngae

S. fonticola

K.terrigena

E. intermedius

S. grimesii

E. kobei

S. odorifera

E. nimipressuralis

S. plymuthica

E. blattae
E. fergusonii

subesp. ozaenae
K. pneumoniae

E. hermannii
E. vurneris

subesp. pneumoniae
K. pneumoniae
subesp. rhinoscleromatis

E. pyrinus
5 especies

13

10

Clasificacin de los gneros descritos

en la familia Enterobacteriaceae
Segn la fermentacin de la lactosa:

-Fermentadores rpido: E. coli, Klebsiella y Enterobacter

-Fermentadores lento: Serratia y Citrobacter
Escherichia coli

Enterobacter sp.

Clasificacin de los patogrupos de E.

coli diarreognicas descritas
Escherichia coli:
Productora de toxina shiga (ECEH)

Enteroinvasiva (ECEI)
Enteropatgena (ECEP)
Enterotoxignica (ECET)
Difusa adherente (ECDA)
Enteroagregativa (ECEAg)
Kaper et al., 2004. Nat. Rev. microbiol

Habitat
Ampliamente distribuidos en la naturaleza
Forman parte de la flora normal aerobia del intestino
Escherichia
Forma la mayor
parte de la flora
comensal aerobia
facultativa del
tracto intestinal

Klebsiella
portadores de la
orofaringe (1-6%).
Pacientes
hospitalizados (20%)

Enterobacter
Flora intestinal,

Citrobacter
Contaminante de
alimentos

Serratia
Se ha encontrado
contaminando
ambientes y
soluciones

Caractersticas
morfolgicas y tintoriales
Bacilos Gram negativos rectos (3 - 5m de largo)
Disposicin en grupos, pares, aislados y/o cadenas cortas
No forman esporas
Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

Cpsula variable

Cpsula

Cpsula (Vi)

Mviles*

Inmviles

mviles

mviles

mviles

*Se han descrito variantes inmviles de E. coli

Caractersticas de cultivo

-Aerobio y anaerobios facultativos

-Temperatura de crecimiento: hasta 45C, T. ptima: 35-37 C
-pH: 7,2 7,4
-Medios de cultivos:
Bsicos: Agar Tripticasa de soya, Infusin cerebro corazn
Enriquecidos: Agar Sangre
Selectivos difrenciales: Agar Mac Conkey,
Agar Eosina azul de metileno

Morfologa de las colonias

Agar Bsico (ATS, ABHI, AN):
Colonias grande (2-4mm), redondas, lisas, elevadas o aplanadas,
de consistencia blanda, color blanquecinas, en caso de Serratia se
puede observar produccin de pigmento. En caso de Klebsiella, las
colonias son mucoides
Agar sangre:
colonias grande (3-5mm), redondas, lisas, elevadas o aplanadas, de
consistencia blanda, color grisceo. En caso de Klebsiella, las
colonias son mucoides
Agar Mac Conkey:

Colonias grande (2-4mm), redondas, lisas, elevadas o aplanadas, de

consistencia blanda, color de fucsia a rosado (Lactosa positiva). En caso
de Klebsiella, las colonias son mucoides

Morfologa de las colonias

Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Agar sangre

Grises con
hemlisis
variable

Grises, grandes y
coalescentes

Grises y de tamao
mediano

Agar Mac
Conkey

Lactosa (+),
color fucsia,
secas,
chicloides

Lactosa (+), color

fucsia a rosa
plido, mucoides
y grandes

Lactosa (+), color

rosa plido o
amarillentas,
pueden ser
mucoides

Agar EMB

Brillo metlico

Escherichia coli

Enterobacter cloacae

Klebsiella pneumoniae

Agar Mac Conkey

Serratia
Posible
produccin de
pigmento

Lactosa (+), color

fucsia , secas,
chicloides, color
rosa plido o
amarillentas,
pueden ser
mucoides

Lactosa (+), color

rosa plido o
amarillentas (en
colonias no
pigmentadas),
pueden producir
pigmentos

Brillo metlico

Posible
produccin
pigmentos

Escherichia coli

Serratia marcescens

Agar Eosina Azul de Metileno

Caractersticas de Bioqumicas
Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

Lactosa

Glucosa

H2S

*, + *(3)

Gas

Citrato

Urea

+*

Indol

+ *, *(0)

+ *, *(4)

Motilidad

Rojo de metilo

Ornitina

Lisina

*, + *(1)

Arginina

+ *, *(2)

*K.pneumoniae: +,V: variable (+ entre el 50-90%), (0): K. pneumoniae: , K. oxytoca: +; (1): E. aerogenes: +, E.cloacae: ;(2): E. aerogenes:
, E.cloacae: +; (3): C. freundii: + ; C. koseri: ; (4): C. freundii: ; C. koseri: +

Enzimas
Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

Urea

*(1)

Triptofanasa

Ornitina
descarboxilasa

Lisina
deacarboxilasa

Arginina
descarboxilasa

Lipasa

Gelatinas

ADNasa

-lactamasas

*(1): K. pneumoniae produce ureasa

Toxinas
Endotoxinas

Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

Enterotoxinas

TL, TS,
VT o SLT

Bacteriocinas

Colicinas

Klebocinas

Marcesinas

Estructura antignica

Estructura Antignica
Estructura

Escherichia

Klebsiella

Antgeno O

Clasificacin en
grupos . MAS DE
176 ANTIGENOS
SOMATICOS

Clasificacin en
grupos (11)

Antgeno H

Clasificacin en
tipos

Antgeno K

Clasificacin en
tipos (K1)

Antigeno F

Pili manosa sensible

(MS)

Clasificacin en
tipos (80)

Enterobacter

Citrobacter

Vi

Serratia

Pili manosa
resistente (MR)*
*Las cepas de E. coli MR que afectan al hombre se denominan CFAI, CFAII, E8775; En cepas uropatgenas se denominan
fimbrias P:

C. freundii: algunas cepas se asemejan a Salmonella desde el punto de vista bioqumico y

aglutinan con el antisuero polivalente O contra Salmonella; puede ser identificada
incorrectamente como especies de Salmonella

Determinantes de Patogenicidad
Escherichia

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

Lpido A
(Endotoxina)
Propiedad
antifagocitaria,
alteraciones
vasculares,
accin pirgena

Lpido A
(Endotoxina)
Propiedad
antifagocitaria,
alteraciones
vasculares, accin
pirgena

Lpido A
(Endotoxina)
Propiedad
antifagocitaria,
alteraciones
vasculares, accin
pirgena

Lpido A
(Endotoxina)
Propiedad
antifagocitaria,
alteraciones
vasculares, accin
pirgena

Lpido A
(Endotoxina)
Propiedad
antifagocitaria,
alteraciones
vasculares, accin
pirgena

Antgeno K

Propiedad
antifagocitaria

Propiedad
antifagocitaria

Antgeno H

Dseminacin

Antgeno F

Adherencia (MS
y MR)

Lipopolisacarido

Bacteriocinas

Colicinas
(colonizacin)

Enterotoxinas

TL, TS,

Klebocinas
(colonizacin)

Marscecinas
(colonizacin)

VT o SLT

MS: Pili manosa sensible; MR: Pili manosa resistente;TL: Toxina termolbil; TS: Toxina termoestable;
VT: Verotoxina o SLT: Toxia tipo shiga.

Patotipos de E. coli diarreognicas

descritas
Escherichia coli:
Productora de toxina shiga (ECEH)

Enteroinvasiva (ECEI)
Enteropatgena (ECEP)
Enterotoxignica (ECET)
Difusa adherente (ECDA)
Enteroagregativa (ECEAg)

patotipos de E. coli diarreognicas descritas

patotipos de E. coli diarreognicas descritas

Abreviatura

Serogrupos implicados

patognicidad

Infeccin(Signos y sntomas)

ECET

O6,O8,O15,O20,O25,O27,O63,
O78,O80,O85,O92,O115,O128
ac,
O139,O148,O153,O159,O167

Elaboracin de toxinas
secretorias (TL*,TS) que no
daan el epitelio mucoso (efecto
citotnico)

Diarrea del viajero. Diarrea profusa y

acuosa, clicos leves. Deshidratacin y
vmito

ECEP

O55,O86,O111,O119,O126,O1
27,O128ab,O142

Se adhiere a las clulas

epiteliales en microcolonias.
Efecto adherencia y efusin
(A/E). Factor EAF

Gastroenteritis. Fiebre de bajo grado,

malestar, vmitos y diarrea,con cantidad
predominante de moco, pero no
generalmente no hay sangre

ECEI

O28ac,
O29,O11ac,O124,O136,O143,
O144,O152,O164

Invaden clulas epiteliales

Elaboracin citotoxinas

Disentera. Fiebre y colitis, sntomas de

urgencia y tenesmo, sangre, moco y muchos
leucocitos en materia fecal

ECTS

O157:H7,
O26:H11,O48:H21,O103:H2,O1
11:NM,O145

Elaboracin de toxinas
Toxina shiga (STX1, STX2)
(VT)

Diarrea sanginolenta con leucocitos, a

menudo sin fiebre. Es comn el dolor
abdominal. Puede desarrollar sndrome
urmico hemoltico

ECEA

044:H18

Se adhieren en la totalidad de la
superficie de las clulas
epiteliales. No se define an el
factor de virulencia

Causan diarrea liquida verde con moco sin

sangre, persistente

0126:H27

Se adhiere a las clulas

epiteliales localizadamente, en
un patrn que semeja una pila de
ladrillos. Tampoco se ha definido
an el factor de virulencia

Diarrea acuosa, vmitos deshidratacin y

con menor frecuencia dolor abdominal

ECDA

*Semejante a la toxina de V. cholerae

K+
Na+
Aumento
AMPC

Infecciones
Escherichia

Klebsiella*

Enterobacter

Citrobacter

Serratia

+++
(Patgenas)

++

Infecciones
peritoneales

+++

Infecciones
urinarias

+++

++

++

Infecciones de
heridas

Bacteriemia

++

+++

++

+*

Meningitis

++

++

++

Neumona

+++

Diarreas

Sepsis

+*

* K. pneumoniae subesp. pneumoniae: neumona; subesp. ozaenae: Rinitis ftida; subesp. Rhinoscleromatis: Rinoscleroma ;
*S. marcescens: pacientes con cncer que reciben quimioterapia

Infecciones
K. pneumoniae subesp. pneumoniae
Neumona: necrosis extensa y hemorragia, el esputo puede ser grueso, mucoide de
color rojo ladrillo o delgado y con apariencia de jalea de grosella. Pleuritis (80%)
Enteritis y Meningitis en lactantes
Infecciones urinarias
Bacteriemia y septicemia

K. pneumoniae subesp. Rhinoscleromatis: Rinoscleroma

K. pneumoniae subesp. Ozaenae: Rinitis atrfica (ocena)

Diagnstico de Laboratorio
Muestra
Ex. farngeo, orina *, L.C.R.,
Sec. Heridas, Sangre *, etc.
Ex. Directo (Gram):
Bacilos gramnegativos,
PMN, clulas epiteliales

Muestra de procedencia
extraintestinal

Cultivo: AS, AMC

Incubacin: microaerobiosis (AS),
aerobiosis (AMC) a 35-37C, 18-24 h.

Coloracin de Gram.
Bacilos gramnegativos

Morfologa de las colonias

AS, AMC

Subcultivo en medio bsico

para purificar colonia a valorar

Pruebas
Bioqumicas

*Para Orina (Urocultivo) y sangre (Hemocultivo)

Incubacin: aerobiosis
a 35-37C, 18-24 h.

Pruebas de
susceptibilidad
antimicrobiana

Pruebas inmunolgicas
y/o serolgicas

CUADROS DIARREICOS

Datos epidemiolgicos: Edad (nios),

Posibilidades de contagio, antecedentes
Datos clnicos: Fiebre, tipo de la diarrea,
tiempo con la diarrea, complicaciones
(deshidratacin, diabetes, entre otros)

Qu bacterias debemos
buscar en un coprocultivo?
Escherichia coli
ECEA
ECEI

< 2 aos

Yersinia sp.
Plesiomonas shigelloides

ECEP

Aeromonas sp.

ECET

Vibrio sp.

ECTS

Campylobacter sp.

Shigella sp.

Salmonella sp.

termotolerantes

Muestra oportuna: Preferiblemente tomada al inicio de la enfermedad y previo al suministro

de antimicrobianos

Hisopado rectal

Heces recin emitidas

1 2 gr en SSF

Macroscpico
Consistencia

Examen en fresco: sol

Color

fisiolgica y lugol

Olor
Presencia de sangre

Carry Blair

Microscpico

Frotis coloreado con

Presencia de moco

Kinyoun

Presencia de

Frotis teido con azul

fragmentos de tejido
Residuos alimentarios
Parsitos

de metileno

Hisopado rectal

Heces recin emitidas

Siembra
AMC, SS, XLD

Incubar a 37C x 18horas en

aerobiosis
Evaluacin morfolgica de las colonias:

Caldo selenito
Incubar de 8 a 12h en
aerobiosis
Sembrar
AMC, SS, XLD

Frotis

Incubar a 37C x 18horas en aerobiosis

Sub-cultivo en medio
bsico

pruebas
bioqumicas

Antibiograma

Pruebas serolgicas:
Serogrupos y Serotipos

Pruebas bioqumicas
Prueba de oxidasa:
Negativa
Miembro de la
familia
Enterobacteriaceae
Identificacin de gnero y especie
Bioqumica primaria:
Kligler y/o TSI, Indol, Motilidad, Rojo de metilo, Citrato

Bioqumica complementaria:
Fenilalanina, urea, malonato, arginina, reduccin de
nitratos, ONPG, fermentacin de carbohidratos

Incubacin: aerobiosis
a 37C, 24 h.

Lectura de los resultados

Antibiograma para Enterobacteriaceas

Ampicilina
Cefalotina
Amoxicilina/Clavulnico
Ceftazidima, Ceftriaxona,
Cefotaxima
Cefepime

Ampicilina/Sulbactan
Imipenem o Meropenem
Ciprofloxacina u Ofloxacina
Gentamicina
Amikacina

Norfloxacina, Ciprofloxacina u Ofloxacina

Trimetoprin/Sulfa
Nitrofurantona
La serratia es resistente a la colistina y cefalotina naturalmente
Aislamientos ambientales, Hospitalarios, Urinarios

BLEE
CTX
AMC
FOX

CAZ

IMP
APB

MBL

EDTA

MER

KPC

Disposicin de discos para observar mecanismos de

resistencia en enterobacterias. INH 2014

Antibiograma para Enterobacteriaceas

AMP

CNT

SXT

GEN

CIP

AKN

FOX

Epidemiologa de la Diarrea de
viajero
Agente causal
E. coli enterotoignica

Hospedero:

Reservorio:

Hombre susceptible

Portador o enfermo

Puerta de entrada:

Puerta de salida:

Boca

Recto (Heces)

Transmisin:
indirecta (ingestin de
alimentos contamnados)

Medidas Preventivas
Estricto control en la preparacin y distribucin de los alimentos,
incluye:
Higiene personal

Lavado de manos antes de preparar cada comida y despus de ir al bao.

Evitar las moscas y roedores
En Hospitales:

Todo personal mdico debe Lavarse las manos antes de examinar a cada
paciente
Esterilizacin de equipos y material mdico-quirrgico

Evitar los tratamiento intravenosos, sonda, etc.

Evitar el uso indiscriminado de agentes antimicrobianos
Hacer vigilancia epidemiolgica, principalmente en hospitales, para
conocer las bacterias circulantes

INTERRUMPIR el ciclo de transmisin

Bibliografa Recomendada
1.

Aguado, J. y Lumbrera, C. 1998. Infecciones por Enterobacterias. Medicine. 7(78):3622-3628.

2.

Cimolat, N. 2001. Laboratory Diagnosis of Bacterial Infections.

3.

Jawest, E., Melnick, J., y Odeleberg. 1999. Manual de Microbiologa Mdica. Editorial Manual
Moderno. Mxico.

4.

Joklik, W, K., y Amos, B. 1996. Microbiologa. Editorial Mdica Panamericana.

5.

Koneman, E., Allen, S., Janda, W., y Winn, W. 1999. Diagnstico Microbiolgico. Texto Atlas color. 5
edicin. Editorial Panamericana.

6.

Murray, P., Kobayashi, G., Pfaller, M. y Rosenthal, K. 1997. Microbiologa Mdica. Editorial Hartcourt.
2 Edicin.

7.

Madigan, M., Martinko, M., y Parker, J. Brock. 2000. Biologa de los Microorganismos. 9 edicin.
Editorial Prentice Hall.