BAB I

PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

Bakteri merupakan organisme bersel-tunggal yang bereproduksi dengan cara sederhana,
yaitu dengan pembelahan biner. Sebagian besar hidup bebas dan mengandung informasi
genetik dan memiliki sistem biosintetik dan penghasil energi yang penting untuk
pertumbuhan dan reproduksinya. Sejumlah bakteri, bersifat parasit intraseluler obligat
contohnya Chlamydiae dan Rickettsiae.
Dalam beberapa hal bakteri berbeda dari eukariot. Bakteri tidak memiliki ribosom 80S
maupun organel bermembran, seperti nukleus, mitokondria, lisosom, retikulum endoplasma
maupun badan golgi, bakteri tidak memiliki flagela fibril 9+2 atau struktur silia seperti pada sel
eukariot. Bakteri memiliki ribosom 70S dan kromosom sirkuler tunggal (nukleoid) tanpa
sampul yang disusun oleh asam deoksiribonukleat untai-ganda (DNA) yang bereplikasi
secara amitosis. Jika terjadi pergerakan sering disebabkan adanya struktur flagela filamentunggal. Sejumlah bakteri memiliki mikrofibril eksternal (pili atau fimbria) yang berfungsi untuk
menempel. Mycoplasma tidak memiliki dinding sel, sedangkan eubakteria lainnya
menghasilkan struktur sampul dengan susunan senyawa kimianya mirip peptidoglikan dinding
sel. Eubakteria yang berdinding sel dan archaebakteria dapat berbentuk kokus (bola), basil
(batang), batang melengkung atau spiral. Struktur kimia sampul eubakteria sering digunakan
untuk membedakannya ke dalam kelompok bakteri Gram-positif, Gram-negatif dan acid-fast
(tahan-asam).
Escherichia coli, atau biasa disingkat E. coli, adalah salah satu jenis spesies utama
bakteri gram negatif. Pada umumnya, bakteri yang ditemukan oleh Theodor Escherich ini
dapat ditemukan dalam usus besar manusia. Kebanyakan E. coli tidak berbahaya, tetapi
beberapa, seperti E. coli tipe O157:H7, dapat mengakibatkan keracunan makanan yang
serius pada manusia yaitu diare berdarah karena eksotoksin yang dihasilkan bernama
Identifikasi Escherichia Coli

verotoksin. Toksin ini bekerja dengan cara menghilangkan satu basa adenin dari unit 28S
rRNA, sehingga menghentikan sintesis protein. Sumber bakteri ini contohnya adalah daging
yang belum masak, seperti daging hamburger yang belum matang. E. coli yang tidak
berbahaya dapat menguntungkan manusia dengan memproduksi vitamin K2, atau dengan
mencegah baketi lain di dalam usus.
E. coli banyak digunakan dalam teknologi rekayasa genetika. Biasa digunakan sebagai
vektor untuk menyisipkan gen-gen tertentu yang diinginkan untuk dikembangkan. E. coli
dipilih karena pertumbuhannya sangat cepat dan mudah dalam penanganannya. Negaranegara di eropa sekarang sangat mewapadai penyebaran bakteri E. coli ini, mereka bahkan
melarang mengimpor sayuran dari luar.
Bakteri E. coli merupakan organisme penghuni utama di usus besar, hidupnya komensal
dalam kolon manusia dan diduga berperan dalam pembentukan vitamin K yang berperan
penting untuk pembekuan darah. Dari berbagai penelitian menunjukkan beberapa galur atau
strain dari bakteri E. coli juga dapat menyebabkan wabah diare atau muntaber, terutama
pada anak anak.

Identifikasi Escherichia Coli

1.2.

MAKSUD PRAKTIKUM

Maksud dilakukan praktikum ini adalah :

1) Mengetahui cara mengidentifikasi dan isolasi bakteri Escherichia coli
2) Mengetahui prosedur pembuatan media pertumbuhan pada bakteri khususnya
Escherichia coli
3) Mengetahui cara penanaman koloni / biakan kuman Escherichia coli
pada media pertumbuhan bakteri
4) Mengetahui berbagai macam spesies dan genus bakteri Escherichia coli
1.3 TUJUAN PRAKTIKUM
Tujuan dilakukan praktikum adalah :
1) Untuk mengidentifikasi atau mengisolasi bakteri Escherichia coli
2) Untuk membuat media pertumbuhan pada bakteri khususnya media yang digunakan
untuk pertumbuhan Escherichia coli
3) Untuk melihat morfologi serta sifat bakteri Escherichia coli dengan jalan isolasi bakteri
dan pewarnaan gram
4) Untuk mengamati pertumbuhan bakteri / koloni Escherichia coli pada media
pertumbuhan bakteri.

Identifikasi Escherichia Coli

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1.

TINJAUAN UMUM BAKTERI ESCHERICHIA COLI

Klasifikasi :
Domain :
Bacteria
Filum
:
Proteobacteria
Kelas
:
Gammaproteobacteria
Ordo
:
Enterobacteriales
Famili
:
Enterobacteriaceae
Genus
:
Escherichia
Spesies :
E. coli
Escherichia coliatau biasa disingkat E. coliadalah salah satu jenis spesies utama bakteri

gram negatif. Pada umumnya, bakteri yang ditemukan oleh Theodor Escherich ini dapat
ditemukan dalam usus besar manusia. Kebanyakan E. Coli tidak berbahaya, tetapi beberapa,
seperti E. Coli tipe O157:H7, dapat mengakibatkan keracunan makanan yang serius pada
manusia yaitu diare berdarah karena eksotoksin yang dihasilkan bernama verotoksin. Toksin
ini bekerja dengan cara menghilangkan satu basa adenin dari unit 28S rRNA, sehingga
menghentikan sintesis protein. Sumber bakteri ini contohnya adalah daging yang belum
masak, seperti daging hamburger yang belum matang. E. Coli yang tidak berbahaya dapat
menguntungkan manusia dengan memproduksi vitamin K2, atau dengan mencegah baketi
lain di dalam usus.
Escherichia coli banyak digunakan dalam teknologi rekayasa genetika. Biasa digunakan
sebagai vektor untuk menyisipkan gen-gen tertentu yang diinginkan untuk dikembangkan. E.
coli dipilih karena pertumbuhannya sangat cepat dan mudah dalam penanganannya. Negaranegara di eropa sekarang sangat mewapadai penyebaran bakteri E.Coli ini, mereka bahkan
melarang mengimpor sayuran dari luar.
2.2.

Morfologi dan Fisiologi

Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek yang memiliki
panjang sekitar 2 m, diameter 0,7 m, lebar 0,4-0,7m dan bersifat anaerob fakultatif. E. coli
membentuk koloni yang bundar, cembung, dan halus dengan tepi yang nyata (Smith-Keary,
Identifikasi Escherichia Coli

1988 ; Jawetz et al., 1995). Bakteri ini termasuk umumnya hidup pada rentang 20-40 derajat
C, optimum pada 37 derajat.
2.3.

Media Perbenihan Escherichia Coli dan Tes Biokimia

Media yang sering digunakan adalah sebagai berikut:

1) Blood Agar Plate (BAP)
Biasanya koloni Escherichia Coli yang tumbuh pada media ini berwarna abu-abu,
berukuran sedang, smooth, keping, haemolytis atau anhaemolytis.
2) Mac Conkey Agar ( MCA )
Koloni Escherichia Coli yang tumbuh pada media Mac Conkey berukuran sedang,
smooth, keping atau sedikit cembung., berwarna merah bata atau merah tua metalik.
3) Eosin Methylen blue Agar ( EMBA )
Koloni yang tumbuh berukuran sedang, smooth, keping, dan berwarna kehijau-hijauan
hitam metalik.
4) Endo Agar ( EA )
Mengandung fuchsin sehingga membedakan E.Coli dari enterobakter lainnya.
5) Triple Sugar Iron Agar ( TISA )
Media ini terdiri dari 0,1% glukosa, 1% sukrosa, 1% laktosa. Ferri sulfat untuk mendeteksi
produksi H2S. Protein dan indikator phenol red. Salmonella bersifat alkali acid, alkali
berbentuk karena adanya proses oksidasi dekarboksilasi protein membentuk amina yang
bersifat alkali dengan adanya phenol red maka berbentuk warna merah, Escherichia Coli
menfermentasi glukosa, sukrosa dan laktosa yang bersifat asam sehingga terbentuk warna
kuning pada dasar dan lereng dan menghasilkan gas. (Gani A.2003)
6) Sulfur Indol Motility ( SIM )

Identifikasi Escherichia Coli

Media SIM adalah perbenihan semi solid yang dapat digunakan untuk mengetahui
pembentukan H2S, indol dan motility dari bakteri. Escherichia Coli membentuk indol dan
motility positif. (Gani A. 2003)
SIM medium hasil penanamannya adalah :
- H2S : Negatif / Positif
- Indol : Positif
- Motility : Aktif / Brown
7) UREA
Bakteri tertentu menghidrolisis urea dan membentuk ammonia dengan terbentuknya
warna merah karena adanya indikator phenol red, Escherichia Coli pada media urea memberi
sifat negatif karena Escherichia Coli tidak menhidrolisis urea dan tidak membentuk ammonia
(Gani A. 2003).
8) MR-VP
a Uji MR
Hasilnya positif, terjadi perubahan warna menjadi merah setelah ditambahkan methyl
red. Artinya, bakteri ini mengahasilkan asam campuran (metilen glikon) dari proses
fermentasi glukosa yang terkandung dalam medium MR-VP. Terbentuknya asam campuran
pada media akan menurunkan pH sampai 5,0 atau kurang, oleh karena itu bila indikator metil
ditambahkan pada biakan tersebut dengan pH seredndah itu maka indikator tersebut
menjkadi merah. Hal ini menandakan bahwa bakteri ini peragi asam campuran(Anonim,
2008)
b Uji VP
Hasilnya negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah ditambahkan
-napthol dan KOH, artinya hasil akhir fermentasi bakteri ini bukan asetil metil karbinol
(asetolin) (Anonim, 2008). Hasil positif terbentuk warna merah apabila sudah ditambahkan napthol dan KOH.
9) SCA

Identifikasi Escherichia Coli

Hasil uji sitrat yang diperoleh positif, yang ditandai dengan terjadinya perubahan warna
indikator BTB dari hijau menjadi biru . Artinya bakteri ini mempunyai enzim sitrat permiase
yaitu enzim spesifik yang membawa sitrat ke dalam sel.
Hasil uji sitrat yang diperoleh negatif, yang ditandai dengan tidak terjadinya perubahan
warna. Artinya bakteri ini tidak mempunyai enzim sitrat permiase yaitu enzim spesifik yang
membawa sitrat ke dalam sel(Anonim, 2008)
10)Uji gula-gula(Glukosa, Laktosa, Sukrosa dan Manitol,maltosa)
Uji ini dilakukan untuk mengindetifikasi bakteri yang mampu memfermentasikan
karbohidrat. Pada uji gula-gula hanya terjadi perubahan warna pada media glukosa yang
berubah menjadi warna kuning, artinya bakteri ini membentuk asam dari fermentasi glukosa.
Pada media glukosa juga terbentuk gelembung pada tabung durham yang diletakan terbalik
didalam tabung media, artinya hasil fermentasi berbentuk gas(Anonim, 2008)
2.4 Manfaat dan Patogenitas
E. coli adalah anggota flora normal usus. E. coli berperan penting dalam sintesis vitamin
K, konversi pigmen-pigmen empedu, asam - asam empedu dan penyerapan zat-zat
makanan. E. coli termasuk ke dalam bakteri heterotrof yang memperoleh makanan berupa
zat oganik dari lingkungannya karena tidak dapat menyusun sendiri zat organik yang
dibutuhkannya. Zat organik diperoleh dari sisa organisme lain. Bakteri ini menguraikan zat
organik dalam makanan menjadi zat anorganik, yaitu CO2, H2O, energi, dan mineral. Di
dalam lingkungan, bakteri pembusuk ini berfungsi sebagai pengurai dan penyedia nutrisi bagi
tumbuhan (Ganiswarna, 1995).
E. coli menjadi patogen jika jumlah bakteri ini dalam saluran pencernaan meningkat atau
berada di luar usus. E. coli menghasilkan enterotoksin yang menyebabkan beberapa kasus
diare. E. coli berasosiasi dengan enteropatogenik menghasilkan enterotoksin pada sel epitel
(jawetz et al., 1995).
Manifestasi klinik infeksi oleh E. coli bergantung pada tempat infeksi dan tidak dapat
dibedakan dengan gejala infeksi yang disebabkan oleh bakteri lain (jawetz et al., 1995).
Penyakit yang disebabkan oleh E. coli yaitu :
Identifikasi Escherichia Coli

a. Infeksi saluran kemih

E. coli merupakan penyebab infeksi saluran kemih pada kira-kira 90 % wanita muda.
Gejala dan tanda-tandanya antara lain sering kencing, disuria, hematuria, dan piuria. Nyeri
pinggang berhubungan dengan infeksi saluran kemih bagian atas.
b. Diare
E. coli yang menyebabkan diare banyak ditemukan di seluruh dunia. E. coli
diklasifikasikan oleh ciri khas sifat-sifat virulensinya, dan setiap kelompok menimbulkan
penyakit melalui mekanisme yang berbeda. Ada lima kelompok galur E. coli yang patogen,
yaitu:

E. coli Enteropatogenik (EPEC) : EPEC penyebab penting diare pada bayi,

khususnya di negara berkembang. EPEC sebelumnya dikaitkan dengan wabah

diare pada anak-anak di negara maju. EPEC melekat pada sel mukosa usus kecil.
E. coli Enterotoksigenik (ETEC) : ETEC penyebab yang sering dari diare
wisatawan dan penyebab diare pada bayi di negara berkembang. Faktor
kolonisasi ETEC yang spesifik untuk manusia menimbulkan pelekatan ETEC pada

sel epitel usus kecil.

E. coli Enteroinvasif (EIEC) : EIEC menimbulkan penyakit yang sangat mirip
dengan shigelosis. Penyakit yang paling sering pada anak-anak di negara
berkembang dan para wisatawan yang menuju negara tersebut. Galur EIEC
bersifat non-laktosa atau melakukan fermentasi laktosa dengan lambat serta
bersifat tidak dapat bergerak. EIEC menimbulkan penyakit melalui invasinya ke

sel epitel mukosa usus.

E. coli Enterohemoragik (EHEK) : EHEK menghasilkan verotoksin, dinamai sesuai

efek sitotoksisnya pada sel Vero, suatu ginjal dari monyet hijau Afrika.
E. coli Enteroagregatif (EAEC) : EAEC menyebabkan diare akut dan kronik pada

masyarakat di negara berkembang.

c. Sepsis
Bila pertahanan inang normal tidak mencukupi, E. coli dapat memasuki aliran darah dan
menyebabkan sepsis.
Identifikasi Escherichia Coli

d. Meningitis
E. coli dan Streptokokus adalah penyebab utama meningitis pada bayi. E. coli merupakan
penyebab pada sekitar 40% kasus meningitis neonatal (Jawetz etal., 1996).

Identifikasi Escherichia Coli

BAB III
METODE PRAKTIKUM
3.1.

WAKTU DAN TEMPAT

Praktikum bakteriologi mengenai identifikasi dan cara-cara identifikasi bakteri Escherichia

coli yang dilaksanakan hari Senin-Rabu, 21-23 oktober 2013 pukul 09.30-12.00 WITA.
Bertempat di Laboratorium Mikrobiologi Poltekkes kemenkes Makassar jurusan analis
kesehatan.
3.2.

ALAT
Alat yang digunakan pada pemeriksaan ini adalah sebagai berikut :
A. Pengambilan sampel
Pot/wadah sampel
Label Kecil
B. Isolasi/Penanaman
Centrifuge
Rak + tabung reaksi
Inkubator
Tabung centrifuge
Ose
Bunsen
Pipet tetes
Kertas pembungkus media
C. Identifikasi
Mikroskop
Ose
Nall
Rak Tabung
Objek glass
Lampu Spiritus dan korek api
Bak pewarnaan
3.3. BAHAN
Bahan yang digunakan pada percobaan ini:
A. Pengambilan sampel
Sampel yang digunakan adalah air got
Identifikasi Escherichia Coli

10

B. Isolasi
1) Media pemupuk
BHIB
2) Media Selektif
MCA ( Mac Conkey Agar)
EMBA (Eosin Methylen Blue Agar)
Endo Agar
C. Identifikasi
Media differensial
TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Untuk Uji biokimia pada:
a Deretan gula-gula :
Glukosa
Laktosa
Sukrosa
Maltosa
Mannitol
b Media lain :
SIM (Sulfur Indol Motility)
MR (Methyl Red) dan VP (Voges Proskauer)
SCA (Simmon Citrat Agar)
Urea
Untuk Pewarnaan
CGV (Carbol Gentian Violet)
Lugol
Alcohol 96%
Safranin
3.4. Cara Isolasi Dan Identifikasi
A. Hari I
1) Penanaman pada Media Pemupuk
a. Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
b. Sampel air got terlebih dahulu dicentrifuge selama 15 menit dengan 3000 rpm,
kemudian ambil endapannya menggunakan ose steril lalu ditanam pada media
BHIB.
c. Inkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam di inkubator.
B. Hari II
1. Mengamati hasil penanaman pada media pemupuk

dengan

pemeriksaan mikroskopik dengan pewarnaan gram yaitu :

Identifikasi Escherichia Coli

11

melakukan

a) Ambil 1 ose biakan kuman dengan ose steril lalu buat preparat pada objek
glass yang bersih dan bebas lemak, keringkan.
b) Setelah kering, preparat tersebut difiksasi diatas nyala api dengan melewatkan
sebanyak 3kali.
c) Lalu tetesi dengan zat warna CGV pada bagian apusan, diamkan selama 2-3
d)
e)
f)
g)
h)

menit.
Cuci air mengalir
Tetesi dengan lugol, diamkan 45-60 detik. Cuci air mengalir.
Dekolorisasi / lunturkan dengan alkohol 96%,diamkan selama 20-30 detik.
Cuci air mengalir
Tetesi kembali dengan zat warna safranin, diamkan sekitar 2-3 menit. Lalu cuci

air mengalir
i) Keringkan preparat, setelah kering tetesi sekitar 1 tetes oil imersi dan lakukan
pemeriksaan dibawah mikroskop dengan pembesaran lensa objektif 100x.
j) Amati dan catat hasil
2. Setelah dilakukan pewarnaan, dan didapatkan hasil maka dilanjutkan dengan
isolasi pada media selektif yaitu media MC Agar,EMB Agar, dan Endo Agar dengan
metode gores kuadran.
3. Diambil 1 ose biakan kuman, ditanam pada media MC Agar,EMB Agar, dan Endo
Agar dengan menggoreskan dengan metode kuadran.
4. Setelah digoreskan,media dibungkus kembali lalu di masukkan ke inkubator pada
suhu 37oC selama 18-24 jam.
C. Hari III
1. Pengamatan pada media selektif, diamati pertumbuhan koloninya.
2. Dilakukan pemeriksaan mikroskopik dengan pewarnaan gram yaitu :
a) Ambil 1 ose biakan kuman dengan ose steril lalu buat preparat pada objek
glass yang bersih dan bebas lemak, keringkan.
b) Setelah kering, preparat tersebut difiksasi diatas nyala api dengan melewatkan
maksimal 3kali.
c) Lalu tetesi dengan zat warna CGV pada bagian apusan, diamkan selama 2-3
menit.
d) Cuci air mengalir
e) Tetesi dengan lugol, diamkan 45-60 detik. Cuci air mengalir.
Identifikasi Escherichia Coli

12

f) Dekolorisasi / lunturkan dengan alkohol 96%,diamkan selama 20-30 detik.

g) Cuci air mengalir
h) Tetesi kembali dengan zat warna safranin, diamkan sekitar 2-3 menit. Lalu cuci
air mengalir
i) Keringkan preparat, setelah kering tetesi sekitar 1 tetes oil imersi dan lakukan
pemeriksaan dibawah mikroskop dengan pembesaran lensa objektif 100x.
3. Setelah dilakukan beberapa pemeriksaan, maka koloni yang dicurigai bakteri
Escherichia Coli diambil 1 ose koloni ditanam pada media differensial TSIA dan
ditanam pada media gula-gula ( Glukosa, laktosa, sukrosa, maltosa, Mannitol),
SIM, MR-VP, SCA, dan Urea.
4. Diinkubasi diinkubator pada suhu 37oC selama 18-24 jam.
D. Hari IV
1. Pengamatan hasil penanaman uji biokimia pada media differensial TSIA, dan
media gula-gula
2. Amati dan catat hasil, cocokkan dengan tabel reaksi uji biokimia dan catat
kesimpulan bakteri apa yang didapat.

Identifikasi Escherichia Coli

13

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 HASIL PENGAMATAN
A. HARI I :
1. Penanaman pada media pemupuk :
1) Media BHIB

Ket : Menjadi Keruh

2. Pemeriksaan Mikroskopik
Hasil Pemeriksaan :

Keterangan :
a. Bentuk
: Basil
b. Sifat
: gram negatif
c. Susunan :tunggal dan berpasangan
d. Tersangka : Escherichia Coli

Identifikasi Escherichia Coli

14

B. HARI II
1) Pengamatan hasil isolasi :
N

Ciri

Media MCA

Media EMB Agar

Media Endo Agar

1.

Bentuk

Bulat, sedang-besar

Bulat Sedang

Merah keruh

Hijau

Bulat, Besar-besar

Koloni :
2.

Warna
Koloni :

3.
4.

Elevasi :
Sifat :

metalik, Merah metalik

tengahnya berwarna
ungu tua
Keping
Smooth

Cembung
Smooth

Cembung
Smooth

2) Pengamatan hasil mikroskopik

MCA

EMBA

Basil gram negative

Basil gram negative

ENDO

Basil gram negative

Identifikasi Escherichia Coli

15

C. HARI III
1) Pengamatan hasil penanaman pada media differensial TSIA
Hasil penanaman pada media TSIA (Triple Sugar Iron Agar) adalah :

Sebelum ditanami bakteri

Sesudah ditanami bakteri

Lereng : Acid (Kuning)

Dasar : Acid (Kuning)
Gas : (+)
H2S : (-)
2) Pada Uji Biokimia
a. Deretan gula-gula
- Sebelum ditanami bakteri

Setelah ditanami bakteri

Identifikasi Escherichia Coli

16

b. Media lain-lain
- SIM (Indol)

Sulfur : (-)
Indol : (+)
Motility : (+)
Urea

Urea: (-)
-

-SCA

SCA: (-)

MR dan VP

Identifikasi Escherichia Coli

17

MR: (+)

VP: (-)

Identifikasi Escherichia Coli

18

4.2 PEMBAHASAN
Pada pemeriksaan bakteri, digunakan sampel bakteri air got yang dibuat suspensi. Bakteri
isolat tersebut kemudian ditanamkan pada MCA, EMB Agar, Endo Agar kemudian diinkubasi
selama 24 jam. Setelah 24 jam pada media tumbuh bakteri dengan ciri ciri :
Media pemupuk
Media BHIB yang ditanami dengan sampel feces setelah diinkubasi setelah 24 jam pada
suhu 37 0 C terlihat keruh menandakan adanya pertumbuhan bakteri pada media tersebut.
Pewarnaan
Pada hasil pewarnaan sampel feces yang diamati dari media BHIB terlihat pada
dibawah mikroskop bakteri basil gram negatif ( warna merah) artinya bakteri tersebut
mengikat zat warna kedua (safranin). Begitupula halnya pada hasil pewarnaan pada media
perbenihan (mac.conkey, Endo, Na). Bakteri gram negatif memiliki dinding sel yang tipis
yang membedakan dengan gram positif (dinding sel yang tebal)

sehingga pada saat

didekolorisasi dengan alkohol maka zat warna pertama akan luntur dan akhirnya menyerap
zat warna kedua yaitu safranin berwarna merah.
Media-media perbenihan
- Media Mac. Conkey
Koloni terlihat berwarna merah keruh dan merah muda, smooth, cembung
-

Media EMBA

Koloni terlihat berwarna hijau metalik, sedang, smooth, cembung

-

Media Endo
Koloni terlihat berwarna merah dan hijau metalik, sedang kecil, smooth,

cembung.
Media uji biokimia
- Deret Gula-gula
Identifikasi Escherichia Coli

19

Pada deret gula-gula digunakan media glukosa, mannitol, laktosa, sukrosa,

fruktosa dan semuanya posif dan positif gas. Artinya media tersebut berubah warna
dari warna biru menjadi kuning, hal ini disebabkan karena bakteri tersebut dapat
memfermentasikan karbohidrat. Media tersebut positif gas karena terdapat
gelembung udara pada tabung durham.
-

TSIA
Pada media TSIA terlihat

pada lereng berwarna kuning (asid) dan dasar

berwarna kuning (asid), positif gas dan sulfur (-). Reaksi asid-asid pada media TSIA
tersebut menandakan bahwa glukosa difermentasikan. Media TSIA digunakan
terutama untuk mengidentifikasi bakteri gram-negatif. Media TSIA terdiri dari
glukosa, Laktosa, sukrosa, indikator fenolred, FeSO 4 . Perubahan warna yang
terjadi disabebkan keranan adanya indikator yang terdapat dalam media tersebut.
Untuk media TSIA digunakan agar miring dan tabung harus ditutup sedikit longgar
supaya terdapat pertukaran udara bebas. Konsentrasi dalam medium pembiakan
TSIA adalah 1/10 dari konsentrasi laktosa dan sakarosa. Konsentrasi yang kecil ini
dimaksudkan untuk mengetahui bila hanya glukosa saja yang difermentasi, maka
hasil fermentasi di bagian slant karena sedikit , segera teroksidasi sehingga warna
indikator tidak berubah. Dibagian butt tegangan oksidasi lebih rendah, sehingga
reaksi asam tetap dipertahankan. Itulahsebabnya tutup tabung tidak boleh terlalu
rapat untuk memungkinkan pertukaran udara secara bebas. Sehingga keadaan
alkalis dibagian slant dapat dipertahankan. Bila tabung ditutup terlalu rapat, dan
bila hanya glukosa yang difermentasi, bagian slant pun akan berwarna kuning,
yang mengakibatkan salah tafsir. Pada pemeriksaan dengan TSIA, medium harus
diperiksa dalam waktu 18-24 jam dan tidak dapat ditafsirkan secara sempurna bila
medium pembiakan telah di eramkan lebih dari 48 jam.
-

SIM
Pada media SIM, Sulfur untuk melihat adanya sulfur yaitu adanya warna hitam.

Identifikasi Escherichia Coli

20

Untuk Indol hasilnya positif (+) ditandai dengan pengamatan setelah

penambahan dengan reagen kovecs dan membentuk cincin merah. Pemeriksaan
dimaksudkan untuk mengetahui apakah dalam proses pertumbuhannya. Bakteri
dapat membentuk indol dari triptofan. Indol adalah zat yang dapat menguapkan
dan dapat diperiksa adanya dengan penambahan paradimetilaminobanzaldehid
atau dengan sepotong yang diimpregasi dengan adanya asam oksalat, kemudian
diselipkan antara mulut mulut dan tutup kapas. Penggunaan eter dimaksudkan
untuk mengekstraksi indol dari medium, karena indol dapat larut dalam eter/silol.
Sehingga bila jumlah indol sedikit dapat dikumpulkan ke permukaan medium dan
bereaksi dengan reagen di permukaan medium berupa cincin merah.
- SCA
Hasil uji citrat tidak terjadi perubahan warna, tetap berwarna hijau.
Perubahan warna tersebut karena adanya indikator dalam media tersebut. Uji citrat
digunakan untuk melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan citrat
sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. Na.citrat satu-satunya sumber
karbon, NH4+ sebagai satu-satunya sumber N dan BTB sebagai indikator pH. Pada
Escherichia coli tidak memanfaatkan sitrat, sehingga pada penanaman media sitrat
hasilnya negatif. (Gani A.2003)
- VP
Hasil dari pengamatan diperoleh VP (-), tidak terjadi perubahan warna pada
media

tersebut.

Pengujian

ini

untuk

mengetahui

apakah

dalam

proses

pertumnuhan organisme terbentuk asetil metilkarbinol dalam lingkungan yang

mengandung potassium hidroksida dan udara teroksidasi menjadi senyawa diasetil.
Senyawa ini dengan alfa naftol dan inti guanidin dari asam aminoorganina (dari
pepton) menghasilkan warna merah. Reaksi ini harus dilihat dalam waktu lebih dari
empat jam setelah ditambah reagen.
-

MR
Hasil dari pengamatan menghasilkan warna merah. Pengujian dengan MR

dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri dapat membentuk asam sedemikian

banyaknya sehingga dapat mengubah indikator MR menjadi merah. Pengujian
Identifikasi Escherichia Coli

21

seharusnya dilakukan sebelum biakan berumur 2 hari pada suhu 37

hari pada suhu 30

C atau tiga

C. Reaksi ini tidak dapat dipercepat dengna meningkatkan

kadar glukosa dalam medium.

Identifikasi Escherichia Coli

22

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 KESIMPULAN
Dari hasil praktikum, dapat ditarik kesimpulan bahwa pada praktikum ini untuk identifikasi
Escherichia Coli dari bahan pemeriksaan air got didapatkan bakteri Escherichia Coli karena
pada pemeriksaan mikroskopiknya didapatkan hasil bakteri bentuk basil gram negatif, dan
setelah dilakukan beberapa uji pemeriksaan dan uji biokimia sesuai dengan uji biokimia
untuk bakteri Escherichia Coli. Dan sesuai dengan IMVIC ( Indol, Metil Red, Voges
Proskauer, Simon citrat) dengan hasil ++--.
5.2 SARAN
Adapun saran yang ingin disampaikan praktikan melalui laporan adalah sebagai berikut :
1. Diharapkan didalam praktikum, praktikan harus menggunakan APD lengkap.
2. Menggunakan alat-alat yang steril dan bersih.
3. Memperhatikan reagen yang akan digunakan,masih dapat digunakan atau sudah
4.
5.
6.
7.

rusak.
Menghindari terjadinya kontaminasi.
Mengikuti aturan praktikum.
Diharapkan didalam praktikum,praktikan harus menggunakan APD lengkap.
Menggunakan alat-alat yang steril dan bersih.

Identifikasi Escherichia Coli

23

DAFTAR PUSTAKA

http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-denganmpn.html
www.wikipedia.com
www.google.com
http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/
http://kenzhi17.blogspot.com/2012/11/identifikasi-bakteri-escherichia-coli.html

Gibson, J.M. 1996. Mikrobiologi dan Patologi Modern Untuk Perawat. EGC. Jakarta
http://yalun.wordpress.com/2008/10/07/mengenal-bakteri-escherichia-coli/
Bonang Enggar S, Gerard. 1982. Mikrobiologi Kedokteran untuk Laboratorium Klinik.
PT. Gramedia. Jakarta
Anonim, 2007, Escherichia Coli, http://www.wikipedia.com

Identifikasi Escherichia Coli

24