Aislamiento y Purificacin de Protenas

Clulas
Tejidos
Lisis

Sonicacin, Detergentes
Criofractura, Embolo-aspas

Proteccin de Protenas

Aislamiento y Purificacin de Protenas

Homogenizado

Centrifugacin

Diferencial
Gradientes

Centrifugacin

Diferencial

Centrifugacin

Diferencial

Centrifugacin en Gradientes
Zonas de Velocidad

Centrifugacin en Gradientes
Zonas de Velocidad

Centrifugacin en Gradientes

TCNICAS PARA LA
SEPARACIN DE PROTENAS
CROMATOGRAFAS

COLUMNAS
CROMATOGRFICAS
Fase estacionaria
Matriz
Fase mvil
Solucin

Cromatografa Filtracin en gel

(Exclusin por tamao)

Cromatografa Intercambio Inico

Cromatografa

de Afinidad

TCNICAS PARA LA
SEPARACIN Y DETECCIN
DE PROTENAS
INMUNOFLORESCENCIA
ELISA
ELECTROFORSIS

Biotina - Avidina

Biotina - Avidina

Biotina Avidina - Enzima

Concepto Bsico de Absorcin y Emisin

Estructuras de Fluoroforos

Estructuras de Fluoroforos

Espectro de Excitacin y Emisin

Molecular Fluorescent Probes

Especficos (e.g. DAPI)
Unin a protenas
Anticuerpos

Expresin en clulas vivas u organismos

Inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia

There are Different Fluorescent Molecules for Different Jobs

See Molecular Probes Catalog; Sigma Catalog; CloneTech for GFP

Molecular probes

Deteccin con Ac - Conjugados

Deteccin con Ac - Conjugados

Deteccin con Ac - Conjugados

Deteccin con Ac - Conjugados

ENZIME LINKED
IMMUNOABSORBANT ASSAYS
ELISA

ENZIME LINKED
IMMUNOABSORBANT ASSAYS
ELISA

ENZIME LINKED
IMMUNOABSORBANT ASSAYS
ELISA

ELISA
Enzyme-linked Immunosorbent Assay
Es una prueba rpida por la que un anticuerpo
o antgeno se une a una enzima como medio
para detectar una relacin entre el anticuerpo
y el antgeno.
La reaccin enzimtica produce un cambio de
color relativo a la cantidad de protena
presente.

ELISA

ELISA

ELISA SANDUCHE
Unin del Ag

Deteccin de Ag
= Antgeno

Deteccin

Ag

ELISA - Indirecto
Unin del Ac

Deteccin de
Ab / Ac
= Antgeno

Deteccin

PAGE

WESTERN BLOT

Marcaje y purificacin protenas

Por Biotina - estreptavidina

Purificacin Biotina - Avidina

Ethynyl

Azida

Azida

Ethynyl

labeling by azidohomoalanine (AHA)