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Hidrolisis de una protena y ensayos para protenas y aminocidos

Alfaro M. Paola V. Vzquez M. Selene I. y Sols C. Korina A.


Resumen
Se llev acabo la hidrolisis de una protena as como su identificacin, para ello se prepararon cuatro soluciones la A que fue a reflujo con
grenetina, B que es la solucin A neutralizada con NaOH, la C grenetina con agua destilada y la D la albumina (clara de huevo) con agua,
procediendo a la identificacin de aminocidos con: reaccin Xantoproteica, reaccin de precipitacin, reaccin de Biuret, reaccin de
nihidrina, reaccin de cido nitroso, accin reguladora de aminocidos y cromatografa en placa fina.

Introduccin
Las protenas son biopolmeros de los -aminocido, llamados as
debido a que el grupo amino esta enlazado al tomo de carbono
adyacente al grupo carbonilo. Las propiedades fsicas y qumicas de
una protena estn determinadas por los aminocidos que la
constituyen. Las subunidades individuales de los aminocidos se
unen por medio de enlaces de amida llamados enlaces peptdicos.

polipptido es un pptido que contiene muchos residuos de


aminocidos pero por lo general tiene una masa molecular de
alrededor de 5000. Las protenas contienen ms unidades de
aminocidos, con masas moleculares que van de alrededor de 6000
a 40000000.

Niveles de estructura de la protena:


*estructura primaria: estructura enlazada de manera covalente de la
molcula, esta incluye la secuencia de los aminocidos.
*estructura secundaria: tienden a formar arreglos ordenados
enlazados por puentes de hidrogeno.
*estructura terciaria: incluye todas las estructuras secundarias y
Un pptido es un compuesto que contiene dos o ms aminocidos todos los dobleces y plegados entre ellas.
unidos por medio de enlaces de amida entre el grupo amino de cada *estructura cuaternaria: a la asociacin de dos o ms cadenas de
aminocido y el grupo carboxilo del aminocido vecino. A cada pptidos en la protena completa.
unidad de aminocido en el pptido se le llama residuo. Un
El termino aminocido podra significar cualquier molcula que
contenga un grupo amino y cualquier tipo de grupo acido; sin
embargo, el termino casi siempre se usa para referirse a un cido
carboxlico -amino.

Discusin de resultados
Se pudieron identificar distintos aminocidos presentes en las
protenas siguientes por medio de reacciones de identificacin:
1.

Esquema 2. Grenetina hidrolizada neutra

Hidrolisis de una protena (Solucin A):

En un matraz se colocaron 200mL, 1g de grenetina ,10mL de HCl


concentrado y 10mL de agua destilada, se coloc a reflujo y
calentamos durante 35 minutos, obteniendo una solucin por a la
cual se le aadi un poco de carbn activado para eliminar estas
trazas de olor y color se calent a ebullicin por 2 minutos
posteriormente se filtr la solucin, obteniendo la solucin A,
(grenetina hidrolizada). Posteriormente se realizaron las pruebas de
identificaron para conocer los aminocidos de nuestra solucin A. La
reaccin de hidrolisis de nuestra protena fue la siguiente.

3. Solucin de Grenetina sin Hidrolizar (Solucin C):


En un vaso de precipitados aadimos 0.5g de grenetina y 20mL de
agua destilada y se agitamos vigorosamente, hasta disolucin total.
Con lo cual se obtuvo nuestra grenetina desnaturalizada.
4. Solucin de Albmina (Solucin D):
Se agito la clara de huevo por 10 segundos, se le agrego 50mL de
agua, agitamos y filtramos la solucin. (Desnaturalizacin).
Posteriormente se realizaron las pruebas de identificacin de
aminocidos que posean nuestras protenas de grenetina y de
albumina
I.

Esquema 1. Hidrlisis de una protena

2.

Solucin neutralizada
Grenetina (Solucin B):

de

hidrolizado

de

Para la neutralizacin de la protena, se colocaron 5mL de la


grenetina hidrolizada y NaOH al 10%, hasta obtener un pH de
7(neutro), lo cual se verifico con ayuda de papel pH, obteniendo
nuestro compuesto llamado zwitterin que es un aminocido
estabilizado por una carga positiva y una negativa (Ver esquema 2).

Reaccin Xantoproteca:

Los aminocidos aromticos como la tirosina, el triptfano y la


fenilalanina presentes en las protenas dan un precipitado de color
amarillo cuando son calentados con HNO3 concentrado. Con adicin
de un medio alcalino, el precipitado se vuelve naranja debido a la
nitracin del anillo aromtico. La reaccin solo dio positiva a la
solucin D ya que esta protena (albumina de huevo) cuenta con
tirosina, triptfano y fenilalanina en su estructura. Mientras que la
solucin A (grenetina) solo tiene trazas de tirosina y fenilalanina, pero
carece de triptfano.
II.

Reaccin de Precipitacin:

El enlace disulfuro es un enlace covalente que se produce cuando


V.
Reaccin con cido nitroso
dos grupos sulfhidrlo (SH) reaccionan para formar un puente
disulfuro (SS). Los residuos de cistena pueden formar puentes Esta reaccin determino la cantidad de grupos aminos libres de los
disulfuro. Pueden unir 2 cadenas peptdicas o una sola para formar pptidos y las protenas midiendo la cantidad de nitrgeno liberado y
un anillo. Dicha prueba identifica los enlaces disulfuro de las esto se puso de manifiesto mediante un burbujeo.
protenas, en donde a mayor parte las protenas que contengan un
Solucin
Reaccion
nmero mayor de puentes disulfuro,
A(Grenetina)
Si
Sustrato
Observaciones
C (Grenetina desnaturalizada)
No
Solucin A(Grenetina)
FormaciFormacin de precipitado blanco
D (Albmina)
No
Solucin D (Albmina)
FormaciFormacin de precipitado caf
H2O (sin protena)
No
VI.
III.

Reaccin de Biuret

La reaccin de Biuret es un mtodo general para la determinacin de


protenas o pptidos, se basa en la reaccin del sulfato de cobre con
compuestos que tengan 2 o ms enlaces peptdicos, en un medio
alcalino. El producto es un complejo color violeta, cuya intensidad
depende la cantidad de enlaces peptdicos presentes. Los di
pptidos y aminocidos dan esta prueba negativa.

Accin reguladora de aminocidos

Los -aminocidos son anfteros. La zona de viraje del rojo congo


es de 5.2, as que el empleo de gotas de HCl para alcanzar una
coloracin azul en la solucin B confirma que se lleva a cabo una
reaccin cido-base. La zona de viraje de la fenoftaleina es en un pH
de 8.6, de tal manera que la adicin de unas gotas de NaOH a la
solucin B demuestra la propiedad anftera.
Solucin

Indicador

Agua

Rojo Congo

Color
inicial
Rojo

Sol. B

Rojo Congo

Rojo

Agua
Sol. B

Fenoftaleina Transparente 1 NaOH


Fenoftaleina Transparente 4 NaOH

Esquema 3. Reaccin Biuret


En
caso
dio positiva en la solucin C y
presencia de hidrxido de sodio, por lo
soluciones C y D tienen enlaces peptdicos.

tanto

nuestro
la prueba
D, solo en
las

VII.
IV.

Gotas
1 HCl

Color
final
Azul

5 HCl

Azul
Rosa
Rosa

Cromatografa en Capa fina

Reaccin con ninhidrina

Cuando la ninhidrina reacciona con un aminocido uno de los


productos es un anin violeta obscuro estabilizado por resonancia
llamado purpura de Ruhemann. La ninhidrina produce este mismo
colorante purpura sin importan la estructura del aminocido original,
por lo tanto, va identificar aminocidos libres primarios, como
resultado nuestra solucin B y patrn tomaron una tonalidad violeta.

Por medio de la cromatografa en capa fina se separaron la mezcla


de aminocidos de la solucin B con 2 aminocidos patrones
(Fenilalanina y glicina) tomando como base su polaridad.
Dependiendo de sus polaridades, los aminocidos tienen diferentes
afinidades a la fase mvil y la estacionaria y en consecuencia
ascienden en la placa con distinta rapidez. Los aminocidos menos
polares ascienden por la placa con una mayor rapidez por su afinidad
a la placa obtenindose los siguientes resultados:

Sustancia
Solucin B
Fenilalanina
Glicina

Rf
No corri
0.75
0.39

Conclusin:
Existen varios mtodos para identificar los aminocidos
presentes en una protena como es la reaccin
Xantoproteica para identificar aminocidos aromticos, la
reaccin de precipitacin para identificar enlaces disulfuro
en los aminocidos, la reaccin de biuret para identificar

enlaces peptdicos, la reaccin con ninhidrina para


identificar aminocidos libres , la reaccin con cido
nitroso para identificar aminos libres de los pptidos, por
ltimo en la cromatografa identificar los aminocidos
presentes en una protena hidrolizada con base a su
polaridad.

Bibliografa
Wade, Leroy. Qumica Orgnica, Volumen 2. Sptima. Mxico: PEARSON EDUCACION, 2011. Paginas consultadas: 1153