Nama : Fatmawati Amalia Agustin

NIM

: 141710101039

Kelas : THP C

RANGKUMAN MODUL III

1. Pengenceran dan Pemekatan Larutan
Dalam kegiatan analisis kandungan kimia maupun mikroba selalu
dilakukan

pengenceran

sampai

tingkat

volume

tertentu

dengan

menggunakan alat ukur volume spesifik. Pengenceran adalah penurunan

atau memperkecil konsentrasi larutan dengan menambahkan pelarut.
Rumus yang digunakan:
V1 M1 = V2 M2
V1 = volume larutan sebelum diencerkan (L atau ml)
M1 = konsentrasi larutan sebelum diencerkan
V2 = volume larutan setelah diencerkan (L atau ml)
M1 = konsentrasi larutan setelah diencerkan
Jika rumus tersebut diatas ditulis dengan cara seperti dibawah ini:
M2 = (V1/V2) M1
Maka faktor V1/V2 merupakan faktor pengenceran, atau jika ditulis dengan:
M1 = (V2/V1) M2
Maka faktor (V2/V1) merupakan faktor pemekatan.
2. Analisis Kuantitatif dan Kualitas Sel Mikroba
Perhitungan jumlah sel mikroba dapat dinyatakan dengan dua cara, yaitu
perhitungan jumlah sel dan massa sel. Untuk hitungan jumlah sel
diantaranya hitungan secara mikroskopik, hitungan cawan dan most
probable number (MPN). Sedangkan hitungan massa sel meliputi cara
volumetric, gravimetric dan turbidimetri. Untuk menentukan jenis sel mikroba
dilakukan dengan menumbuhkan mikroba pada medium khusus/spesifik
yang hasil

pertumbuhan akan menunjukkan indicator khusus, misalnya

perubahan warna tertentu, pembentukan zona bening dan lain-lain.

Perhitungan secara mikroskopik menggunakan alat pembesar dan deks
gelas khusus untuk menghitung jumlah sel dari sejumlah cuplikan suspensi
mikroba tanpa melakukan penumbuhan mikroba terlebih dahulu. Sedangkan
hitungan cawan dan MPN memerlukan media tumbuh tertentu untuk
sejumlah cuplikan suspensi mikroba yang ditumbuhkan dalam 1 sampai 2
hari pada suhu ruangan tertentu, kemudian jumlah sel dapat dihitung.
Metode ini dapat dilakukan dengan cara agar tuang dan sebar. Untuk
menentukan jumlah mikroba golongan tertentu dengan menggunakan media
khusus yaitu: PDA untuk menentukan jumlah kapang, PCA untuk khamir
dengan OMEA (Oxytetracyclin Malt Extract Agar)

Nama : Fatmawati Amalia Agustin

NIM

: 141710101039

Kelas : THP C

3. Perhitungan Jumlah Sel

a. Hitungan Mikroskopik
Hitungan mikroskopik merupakan menghitung secara langsung
dengan bantuan alat pembesar penglihatan/objek (mikroskop dan desk
glass berskala). Kelemahan dari metode ini adalah tidak bisa
membedakan sel mati dan hidup , ukuran sel kecil sulit dilihat, jumlah sel
harus tinggi (106) dan tidak digunakan pada sampel yang mengandung
debris/ekstrak makanan/pengotor.pada metode ini dua diantaranya
adalah metode Breed dan Petroff-Hauser.
Metode Breed
Metode ini digunakan untuk menghitung jumlah mikroba atau
bakteri yang ada pada susu. Cara untuk menghitung jumlah mikroba
dengan menggunakan metode Breed adalah sebagai berikut:
- Menghitung luas areal pandang mikroskop
- 0.01 ml cairan/susu dipipet
- Disebarkan ke gelas objek membentuk luasan 1 cm 2
- Dibiarkan mongering
- Difiksasi dan diwarnai dengan Methylin Blue
- Hitung rerata jumlah bakteri per areal pandang (10-60 x areal

pandang)
Metode Petroff-Hauser
Metode ini merupaka salah satu metode hitungan mikroskopik
yang dalam pelaksanaannya menggunakan bantuan kotak-kotak
skala. Setiap ukuran skala seluas 1 mm 2=25 kotak besar, sehingga
0,04 mm2/kotak, dan tinggi culplikan 0,02 mm. dan jumlah sel pada
beberapa kotak besar dihitung dan jumlah rerata per kotak besar.
Dengan demikian jumlah sel per ml=rerata jumlah sel kotak

besarx25x(1/0.02)x1000
b. Hitungan Cawan/Petridish
Metode ini merupakan metode menghitung jumlah mikroba
dengan cara menumbuhkan mikroba pada medium agar. Satu koloni
yang tumbuh dinyatakan sebagai satu sel. Jumlah koloni (sel/gram) =
jumlah koloni per cawan x FP/gram bahan
Keuntungan dari metode cawan adalah sel hidup yang dihitung,
beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus dan dapat digunakan
isolasi dan identifikasi mikroba. Sedagnkan kelemahan dari metode ini

Nama : Fatmawati Amalia Agustin

NIM

: 141710101039

Kelas : THP C

yaitu tidak menujukkan sel sebenarnya, medium dan kondisi berbeda

menghasilkan hasil yang berbeda dan mikroba harus tumbuh pada
media padat dan perlu persiapan serta waktu inkubasi.
c. Metode MPN (Most Probable Number)
Pada metode ini suspense mikroba ditumbuhkan pada media
medium cair dalam seri tabung reaksi, kemudian tabung reaksi yang
positif dikonfirmasikan ke tabel MPN. Berdasarkan tabel tersebut akan
Nampak kemungkinan-kemungkinan yang terjadi. Pernyataan tabung
reaksi positif ditandai dengan timbulnya kekeruhan atau terbentuk
gelembung gas. Cara untuk menghitung jumlah mikroba dengan metode
-

MPN yaitu:
Tingkat pengenceran harus lebih tinggi dari metode cawan, yaitu

sampai didapatkan satu tabung reaksi hanya mengandung 1 sel/ml

Setiap pengenceran diambil sejumlah tertentu suspense mikroba
Setiap pengenceran dimasukkan ke dalam 3-5 tabung reaksi yang

berisi media tumbuh cair

Banyak tabung rekasi ang positif setiap seri pengenceran dikonfirmasi
dengan tabel pengenceran
Dengan demikian, jumlah koloni (sel) = Nilai MPN dari tabel x FP