METODOLOGA

Lo primero que realizamos para llevar a cabo el experimento era ordenar el espacio donde debamos
trabajar y organizar el procedimiento y materiales que bamos a utilizar. Luego, lemos la gua y
anotamos los datos importantes para el experimento, entre sos datos se encuentra los diferentes
reactivos y el tiempo en que se realizaba cada procedimiento.
Establecimos el objetivo del experimento que es extraer la nucleoprotena de la levadura a travs de
ciertos mtodos de separacin.
El procedimiento se llev a cabo as:
1. Usamos una esptula metlica pequea para extraer la masa de la levadura indicada. Tarareamos
la balanza con el mortero que bamos a utilizar. Y le aadimos levadura hasta que alcanzara 5
gramos. Despus trituramos la levadura hasta alcanzar una textura ms polvosa.
2. En otro mortero agregamos de 10 a 12 portaobjetos y los trituramos hasta lograr un polvo de vidrio.
3. Aadimos 10 gotas de ter y 10 gotas de agua con un gotero; y adems le aadimos una
cucharadita de arena de vidrio, y trituramos durante 15 minutos.
4. Agregamos 30 ml de la solucin: hidrxido de sodio concentrado al 0,4%. Seguimos triturando la
mezcla con el piln durante 15 minutos ms.
5. Al terminar de triturar, observamos que la textura de la mezcla era ms uniforme. Repartimos la
mezcla en 3 tubos de ensayo, y lo colocamos en la gradilla para movilizarlo a la mquina de
centrifugacin.
6. Al movilizarnos y localizar la mquina, seguimos el consejo de la profesora de laboratorio, que
consista en mantener estable el soporte en donde colocamos los 3 tubos de ensayos junto a otro
grupo, es decir haban 6 tubos de ensayo y lo alineamos de manera que consigamos estabilidad en
el soporte. Ajustamos el tiempo en 10 minutos a 2500 r.p.m y esperamos. Mientras algunos
miembros del grupo esperamos hasta que se finalizara de centrifugar, el resto del grupo preparaba
12ml de solucin de cido actico al 5% con ayuda de una probeta graduada.
7. Al pasar los 10 minutos de centrifugacin, con ayuda de un gotero se extrajo de los tres tubos de
ensayo, el sobrenadante (la fase superior de la mezcla, la ms liviana) y se coloc en un vaso
qumico.
8. Se verti el cido actico al 5% preparado anteriormente en el vaso qumico y con ayuda de un
policial agitamos constantemente durante 5 minutos hasta observar un precipitado.
9. La mezcla dentro del vaso qumico se reparte nuevamente en 3 tubos de ensayo y se lleva a cabo
otra centrifugacin de 10 minutos a 2500 r.p.m.
10. Colocamos el precipitado en un matraz Erlenmeyer listos para ser utilizado en la mezcla en una
reaccin de hidrlisis.
11. Finalmente, al tener la muestra en el matraz Erlenmeyer se le agregan 15 ml de cido sulfrico al
5% medido con una probeta graduada.

Completamos el paso de preparacin. Al no concluir con la prctica de laboratorio. Los siguientes pasos
sera el posible mtodo de la cual proseguiramos.
Estableceramos nuestro objetivo del segundo proceso que es hidrolizar la nucleoprotena, lo cual se
llevara a cabo los siguientes pasos:
1. El matraz se cierra con un refrigerante de reflujo y despus se hierve con precaucin con el
mechero de Bunsen durante 1 hora.
2. Esperamos a que se enfre y lo filtramos en un embudo, debajo de l se pondr un vaso qumico
para recuperar lo filtrado.
3. Despus de que se haya filtrado la mezcla lo mayor posible, sta estar dispuesto a ser
analizado en la hidrlisis.
Nuestro siguiente objetivo es identificar las protenas sencillas. Lo lograramos con los siguientes pasos:
1. Preparamos dos tubos de ensayo, en el primero se verter 0,5 ml de hidrxido filtrado medidos
con una pipeta graduada, para neutralizarla debemos desprender de 12 a 15 gotas de hidrxido
de sodio al 10% de un gotero, con ayuda de un papel tornasol para medir pH.
2. En el siguiente tubo de ensayo se verter 1 ml de hidrolizado, medidos nuevamente con la pipeta
graduada limpia, con 10 gotas de NaOH, nuevamente con el gotero limpio, aadimos de 0,3 a 1
ml de reactivo Millon (mercurio y cido ntrico) medidos previamente con una pipeta graduada.
Calentamos el tubo de ensayo dentro de un vaso qumico con agua con ayuda del mechero de
Bunsen y esperamos a que la reaccin sea positiva, que debe aparecer como un precipitado de
color rosado o rojo ladrillo.
Posteriormente estableceramos el otro objetivo para nuestro experimento, lo cual sera identificar las
pentosas. Proseguiramos a los siguientes pasos:
1. Preparamos un tubo de ensayo limpio en donde se verter 0,5 ml de hidrolizado medidos
previamente con una pipeta graduada, y lo neutralizaramos con ayuda del papel tornasol para
medir pH.
2. Aadimos 0,5 ml de reactivo de Fehling. Lo agitamos y lo calentamos dentro de un vaso qumico
otra vez con la ayuda de un mechero de bunsen por 5 a 10 minutos. Esperamos la formacin de
un precipitado rojo amarillo de xido cuproso.
Ulteriormente fijamos nuestro siguiente objetivo sera identificar las bases pricas.
1. Agregamos 2 ml del hidrolizado en un tubo de ensayo y por consiguiente con ayuda de otro
papel ph tornasol lo neutralizamos aadiendo de 5 a 6 gotas de amonaco concentrado.

2. Despus le agregamos 0,5 ml de solucin de nitrato medidos con una pipeta graduada de plata
en amoniaco al 3%. Debemos observar la formacin de un precipitado blanco en forma de copos,
stos estarn constituidos de nitrato de plata en amoniaco al 3%.
Finalmente, como ltimo objetivo identificaremos el cido fosfrico. Se lograra al realizar por
consiguiente ste paso:
1. En un tubo de ensayo se verter 2 ml de hidrolizado, lo cual se aadir 3 ml de molibdato de
amonio medidos con una probeta graduada o pipeta graduada y 1 ml de cido ascrbico
medidos con los mismos instrumentos pero limpiados anteriormente. Luego se mezcla con un
policial y se lleva a bao Mara. Se debe observar una coloracin azul que nos indicar la
presencia de fosfatos.

RESULTADOS
Parte I
Durante el experimento se llevaron a cabo varios procesos los cuales produjeron algunos resultados
bastante favorables con respecto a la gua.

Comenzamos con la trituracin de la levadura junto a los tres ingredientes dichos anteriormente y luego
observamos que la levadura se iba haciendo ms fina con el paso del tiempo y desprenda un olor cada
vez ms intenso.
Ms tarde se le agreg [NaOH] hidrxido de sodio con el cual pas a convertirse en una mezcla
pastosa; ya que antes no tena una fase lquida, slo era slida; porque los componentes aadidos eran
slidos y voltiles.
Luego de distribuirse en los tubos de ensayo para centrifugarse, se observaron dos fases de la mezcla,
el sobrenadante (fase lquida visible) y el precipitado (fase slida, parte de levadura y arena de vidrio).
Al agitarse el sobrenadante con el cido actico en un vaso qumico se observ una formacin de
burbujas en donde la mezcla se haca ms homognea, el cual nos tom un poco de tiempo ya que el
sobrenadante tena una forma similar a la clara del huevo y este era bastante difcil de mezclar e
incorporarse, ms tarde paso a la centrfuga nuevamente para obtener un precipitado.
En este caso se observaron dos fases, nuevamente del cual el sobrenadante fue desechado y se
recuper el precipitado para la reaccin de hidrlisis.
Al retirar el sobrenadante del tubo de ensayo, el precipitado estaba tan espeso que no sala con
facilidad del tubo, por lo que debimos adicionar cido sulfrico para hacer una mezcla ms diluida y
poder transferirlo al Erlenmeyer.
Parte II
***Los resultados descritos a continuacin son los posibles resultados de la II parte del laboratorio de
los nucletidos ya que an no se han hecho***
Para hidrolizar las nucleoprotenas se divide la sustancia en varias partes y se hacen varias pruebas,
donde en el primero, se arma un equipo de reflujo donde se coloca la mezcla anterior que fue guardada
y luego fue hervido, dejando una sustancia reducida el cual se dej enfriar y luego se filtr para su
anlisis.
Se utiliz la prueba de Biuret para el anlisis de los pptidos y otra prueba de Millon que se utiliza para
el reconocimiento de la tirosina, ambas dan resultados positivos.

La prueba de Biuret la conocimos en experimentos anteriores y este nos da un color violeta y la prueba
de Millon da un resultado de color amarillo.
Se da otra prueba conocida como Fehling que tambin da positiva a un color amarillo xido, el cual es
utilizado para identificar las pentosas.
En otra prueba utilizando amonaco concentrado y se forma un precipitado blanco en forma de copitas.
Este se da para la identificacin de bases pricas.
Y se da una ltima prueba con el objetivo de identificar el cido fosfrico, en el cual se utiliza molibdato
de amonio y acido ascrbico. Al indicar la presencia del acido fosfrico o fosfatos, este se torna un color
azul.

REACTIVOS QUIMICOS

APLICACIN DE AGUA Y ETER

UTILIZADOS EN LA I PARTE

TRITURACION DE LA LEVADURA (PRINCIPIO)

POLVO FINO DE LA LEVADURA

DISCUSIN
Con los resultados obtenidos; nuestro anlisis de los procesos qumicos que ocurren
nanoscpicamente, podemos explicar que:

I.

El ter ms la arena de vidrio rompe los enlaces de hidrgeno de las macromolculas, para la
posterior desnaturalizacin de las protenas.

II.

El hidrxido de sodio no tiene parte en la reaccin de la primera fase (no se coagula), pero
permite que se realice posteriormente la prueba de Biuret.

III.

En la primera parte de la centrifugacin se obtiene en el sobrenadante: Carbohidratos y ARN, y

en el precipitado ter, arena de vidrio y ADN (parte desechada).

IV.

En este proceso la protena no est completamente desnaturalizada, por lo que se le agrega

cido actico y se agita.

V.
VI.

Se centrifuga una vez ms para obtener slo la parte coagulada (precipitado)

Con el cido sulfrico y el precipitado se inicia la hidrlisis de la protena, se calienta durante una
hora. Gracias a estos dos factores comunes de desnaturalizacin juntos (cido, y calor) podemos
estar seguros que hemos hidrolizado las protenas.

VII.

La prueba de Biuret, esta reaccin se caracteriza por un color prpura, cuando los iones cpricos
son unidos por los enlaces peptdicos a pH alcalino.

VIII.

La prueba de Millon (parte de mercurio en cido ntrico) lo cual produce nitrato de mercurio el
cual en un medio fuertemente cido reacciona con el OH de la tirosina(aminocido) produciendo
una coloracin roja intensa.

IX.

El reactivo de Fehling (sulfato cprico ms agua destilada), se da en un medio alcalino para

reconocer la existencia de azcares reductores, dando una coloracin roja amarilla de xido
cuproso.

X.

Al agregarle a la protena hidrolizada ms nitrato de plata y amonio, en un medio alcalino, se

forma un precipitado de color blanco (sales de plata y bases pricas).

XI.

El grupo fosfato se identifica por la reaccin para fsforo inorgnico, en medio cido, con el
molibdato da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido ascrbico a azul
de molibdeno, todo esto en un bao mara.

1. Explique en qu consiste la descomposicin hidroltica de las nucleoprotenas.

Consiste en la liberacin de protenas y luego en la despolimerizacin de los cidos nucleicos;
luego, se hidrolizan los mononucletidos en las pentosas, bases nitrogenadas y el cido
fosfrico.
2. Qu caractersticas qumicas presentan las histonas y las protaminas?
Histonas: se unen inicamente a los grupos fosfato del ADN cargados negativamente. In vitro,

esta interaccin, se puede romper con 0.5 M de NaCl.

Protaminas: son protenas de bajo peso molecular con un alto contenido del aminocido
arginina en su estructura.

3. Qu caractersticas qumicas presentan las albminas y globulinas?

Albuminas: Posee un pKa de 8.5; tiene un pH de 8; tiene un pI de 4,9.
Globulina: son un grupo de holoprotenas insolubles en agua, solubles en disoluciones
salinas, que se encuentran en todos los animales y vegetales.
4. Cmo explicara usted una prueba positiva con el reactivo Millon? Cules fueron sus
resultados con este reactivo? Cmo explica usted este resultado?
Una prueba positiva con el reactivo Millon me demuestra que la protena se ha descompuesto en
su forma ms simple, los aminocidos. Los resultados con este reactivo en el filtrado (protena
hidrolizada) fueron positivos. Este resultado se explica porque el reactivo reconoce la tirosina
(aminocido); ya que estos son los monmeros de las protenas.

5. Menciona al menos tres diferencias de la estructura qumica entre el DNA y el RNA

a) La pentosa del ADN es desoxirribosa y la del ARN es ribosa.
b) El ADN y ARN contienen tres bases nitrogenadas en comn (adenina, guanina, citosina),
difiriendo en timina (ADN) y uracilo (ARN).
c) La estructura del ADN es de doble cadena (mayor proteccin de la informacin gentica) y el
ARN es monocatenaria; aunque puede ser lineal ARNm o plegada ARNt y ARNr.
(Meza)
6. Con las pruebas realizadas, podra usted identificar el tipo de cido nucleico extrado de la
levadura. Explique su respuesta. Si su respuesta es negativa, trate de idear un mtodo que
nos permita identificar el cido nucleico.
No podra identificarlo ya que; solo se hicieron anlisis de protenas sencillas, pentosas, bases
pricas y cidos fosfricos. Ninguna de estas pruebas discrimina alguno de los dos cidos
nucleicos. Una forma para identificarlo sera: Con 100mg del cido nucleico ms 1ml de cido
perclrico, calintelo en un bao mara por una hora, centrifguelo y utilice el sobrenadante para
identificar por medio de cromatografa descendente en papel whatman no.1 de un da para otro.

7. Cmo explicara usted la siguiente afirmacin: el fosforo se encuentra en todas las

clulas de las plantas y los animales?
El fsforo compone los huesos, que ayuda para la acumulacin de energa ATP y compone la
doble banda del ADN y la banda simple del ARN. En clulas vegetales est relacionado a la
produccin de energa y presente en el material gentico.
8. Investigue las caractersticas qumicas de la ribosa y desoxirribosa. Por qu se dice que
son azucares reductores?
La ribosa y la desoxirribosa son monosacridos, es decir, un hidrato de carbono que no se puede
descomponer en otros ms simples por hidrlisis. Son aldehdos con cuatro grupos hidrxido
(OH), que suele presentar estructura cclica formando un anillo pentagonal (forma furanosa). El
trmino "2-desoxirribosa" puede referirse igualmente a dos enantiomeros: el de importancia
biolgica D-2-desoxirribosa y a su inusual imagen especular L-2-deoxyribose.1 La D-2Desoxirribosa es un precursor del cido nuclico ADN. La 2-Desoxirribosa es una aldopentosa,
eso es, un monosacrido con cinco tomos de carbono y conteniendo a un grupo funcional
aldehdo. En solucin acuosa, la desoxirribosa consiste primariamente de una mezcla de tres
estructuras: la forma linear H-(C=O)-(CH2)-(CHOH)3-H y dos formas cclicas variables,
desoxirribofuranosa, con un anillo de cinco tomos de carbono, y desoxirribopiranosa de un anillo
de seis. La segunda forma es la predominante.
Todos los monosacridos son azcares reductores, ya que al menos tienen un -OH hemiacetlico
libre, por lo que dan positivo a la reaccin con reactivo de Fehling, a la reaccin con reactivo de
Tollens, a la Reaccin de Maillard y la Reaccin de Benedict.
El Reactivo de Millon es un Ensayo qumico que sirve para saber si existe tirosina en la solucin,
si esto es as se genera un cogulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne.
El reactivo de Fehling, es una solucin que se utiliza como reactivo para la determinacin de
azcares reductores.
9. Investigue las caractersticas qumicas de las bases nitrogenadas relacionadas con los
cidos nucleicos.
Las bases nitrogenadas son compuestos orgnicos cclicos, tienen dos o ms tomos de nitrgeno.
stas forman la parte esencial de los nuclesidos, los nucletidos, los nucletidos cclicos
(mensajeros intracelulares), los dinucletidos (poderes reductores) y adems los cidos nucleicos.

Biolgicamente existen seis bases nitrogenadas primordiales, las cuales se clasifican en tres
grupos: bases isoaloxaznicas (derivadas de la estructura de la isoaloxazina), como la flavina (F);
bases pricas o purinas (derivadas de la estructura de la purina), como la adenina (A) y
la guanina (G); y bases pirimidinas (derivadas de la estructura de la pirimidina), como la timina (T),
la citosina (C) y el uracilo (U).

10. Cul es el componente no orgnico de los mononucletidos?

El componente no orgnico del mononucletido es el cido fosfrico, H 3PO4, debido a que no tiene
enlace carbono-hidrgeno.