Bioquimica Informe 3 Upsjb

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA
INTRODUCCION:
Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones orgnicas;
entre sus caractersticas tenemos que son especficas, son
protenas y son biolgicas. Las enzimas tienen un centro activo
donde entra el sustrato que va a hacer modificado, pueden ser
especficas en cuanto a forma del sustrato, tipo de sustrato, grupo,
reaccin.
Las enzimas se nombran usando como prefijo el nombre del
sustrato o de la reaccin junto con el sufijo asa.
La actividad enzimtica esta afectada por el pH, la temperatura,
concentracin de sustrato, concentracin de la enzima, tamao del
sustrato, presencias de moduladores o inhibidores y la presencia de
cofactores.
En las vas metablicas se encuentran enzimas que regulan ciertas
necesidades del cuerpo. Las enzimas Covalentemente moduladas
se encuentran inactivas y solo se activan en la presencia de otra
enzima. Las enzimas Isoenzimas son la misma enzima misma
funcin y se halla en varios puntos del metabolismo y las enzimas
BIOQUIMICA Y NUTRICION

OBJETIVOS:
Conocer la importancia del Km.
Identificar los efectos que produce las altas temperaturas en
las enzimas.
Conocer la clasificacin de las enzimas.
Identificar que es un cofactor.

Marco Terico:
ENZIMAS

Debido a la naturaleza proteica, las enzimas se ven afectadas en su

actividad y estructura por los mismos factores que afectan a las
dems protenas, entre los que cabe destacar:
pH: el pH es el grado de acidez de
una solucin. De acuerdo con el sitio
donde acta la enzima, tiene un pH
ptimo; por ejemplo, la pepsina que
se halla en el jugo gstrico tiene un
pH ptimo cido; por encima de este
valor la velocidad de la reaccin
disminuye porque la estructura de la enzima se ve afectada. El pH
del medio es el responsable de que los grupos funcionales de las
enzimas (-COOH, -NH2, -OH, -SH) pueden estar cargados positiva,
y negativamente, o posean carga neutra. Recordar que las
variaciones del pH pueden ocasionar un cambio en la estructura
tridimensional de las enzimas, que pueden afectar en su actividad.
Existe un pH ptimo en que la concentracin de H+ es la idnea
para que se produzca la actividad cataltica. Tambin existe una
banda, que oscila entre un valor del pH mnimo y otro mximo,
donde la enzima puede actuar. Para valores situados fuera de esta
zona no existe actividad enzimtica, dado que las cadenas
polipeptdicas se pueden desnaturalizar. La mayor parte de las
enzimas poseen un pH prximo al del estado neutro.

Temperatura: como toda protena, la enzima se ve afectada por las

temperaturas muy altas, pues su estructura globular se rompe y
pierde funcionalidad, se desnaturaliza. El calor implica movimiento,
as que por debajo de cierta temperatura las enzimas comienzan a
perder
movilidad y la velocidad de reaccin disminuye. Las temperaturas
no adecuadas para que una enzima (que son protenas) realice sus
funciones tienden a desnaturalizarla y esto causa, deficiencia en las
funciones que realiza la enzima y a temperaturas extremas a daar
la enzima completamente.
Las reacciones catalizadas por enzimas siguen, por regla general,
la ley de Van tHoff que establece que cada diez grados de aumento
de la temperatura se produce un aumento de velocidad de la
reaccin de dos a cuatro veces. Esta regla se cumple dentro de
unos limites, ya que las enzimas, debido a su naturaleza proteica,
son termolbiles, siendo afectadas por las variaciones de la
temperatura e inactivndose al desnaturalizarse.
ENZIMAS REGULADORAS DEL

METABOLISMO

En las vas metablicas encontraremos enzimas que regulan ciertos

pasos muy importantes, en las cuales las reacciones subsecuentes
se veran favorecidas o reprimidas, dependiendo de las
necesidades del cuerpo. Son catalizadores biolgicos, que adems
de las propiedades que caracterizan a las enzimas, presentan
caractersticas que le confieren papeles reguladores del
metabolismo.
Enzimas Covalentemente Moduladas
Los enzimas modulados covalentemente tambin presentan dos

formas, una activa y otra inactiva, que son interconvertibles por
modificacin covalente de sus estructuras catalizada por otros
enzimas, denominados enzimas moduladores. Tal modificacin
suele consistir en la adicin o eliminacin de un grupo qumico
esencial para la catlisis (generalmente un grupo fosfato, metilo,
adenilato u otros) de manera que el enzima modulado se activa
cuando est unido a dicho grupo y se inactiva cuando ste se
elimina. En la mayor parte de los casos son necesarios dos enzimas
moduladores diferentes, uno que activa el enzima modulado y otro
que lo inactiva. Se encuentran en forma inactiva y solo se activan
en la presencia de otra enzima. Por ejemplo: el tripsinogeno es la
forma precursora de la tripsina (enzima pancretica que degrada
protenas) cuando es segmentada por otra enzima se activa.
Enzimas Isoenzimas

Son la misma enzima, es decir, tienen, por ejemplo, la misma

funcin, y se hallan en varios puntos del metabolismo. La
glucoquinasa y hexoquinasa son enzimas que fosforilan la glucosa;
La glucoquinasa se encuentra en las clulas del hgado, fosforilando
la glucosa que entra a el. En el musculo de la hexoquinasa la que
esta presente y realiza la misma funcin.
Enzimas Alostricas
Son enzimas que tienen cuatro cadenas peptdicas. Entre ellas se

encuentra la fosfofructoquinasa, la cual tiene como funcin fosforilar
la fructosa 6 fosfato. La mayora de las enzimas Alostricas son
protenas con varias subunidades. La unin del sustrato a un
protmero en una enzima Alostricas afecta a las propiedades de
unin de los protmeros adyacentes. La actividad de las enzimas
Alostricas se ve afectada por molculas efectoras que se unen a
otros lugares denominados lugares alostricos o reguladores. Las
enzimas Alostricas generalmente catalizan pasos reguladores
clave de las rutas bioqumicas.
FUNCIONES DE LAS ENZIMAS

En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o ms
cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de

aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el

sustrato, y donde se realiza la reaccin.
Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no

encajan con exactitud. Este hecho asegura que la enzima no
participa en reacciones equivocadas.
La enzima misma no se ve afectada por la reaccin. Cuando los
productos se liberan, la enzima vuelve a unirse con un nuevo
sustrato.
INHIBIDORES ENZIMATICO
Compuestos o agentes que se combinan con una enzima de
manera tal que evitala combinacin sustrato-enzima normal y la
reaccin cataltica. La unin de un inhibidor puede impedir la
entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que
la enzima catalice su reaccin correspondiente. La unin del
inhibidor puede ser reversible o irreversible. Normalmente, los
inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma
covalente y modifican su estructura qumica a nivel de residuos
esenciales de los aminocidos necesarios para la actividad
enzimtica. En cambio, los inhibidores reversibles suenen a la
enzima de forma no covalente, dando lugar a diferentes tipos de
inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al
complejo enzima-sustrato o a ambos.
CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

xido-reductasas
(Reacciones
de
xidoreduccin).
Transferasas
(Transferencia
de
grupos
funcionales)
Hidrolasas (Reacciones de hidrlisis)
Liasas (Adicin a los dobles enlaces)
Isomerasas (Reacciones de isomerizacin)
Ligasas (Formacin de enlaces, con aporte de
ATP)
FACORES QUE AFECTAN LA

ACTIVIDAD ENZIMATICA

Los biocatalizadores especficos sintetizados por el organismo,

llamados enzimas son protenas que intervienen en las reacciones
biolgicas, acelerando la velocidad de reaccin hasta alcanzar su
punto de equilibrio. Las enzimas son sumamente especficas en las
reacciones que catalizan y en los compuestos (llamados sustratos)
sobre los que actan.
La cintica enzimtica es el estudio del comportamiento de la
velocidad en reacciones catalizadas por enzimas. Las mediciones
de la cintica proporcionan una herramienta bioqumica muy til
para calcular la concentracin de una enzima en una muestra
biolgica y comparar su actividad cataltica con la de otras enzimas.
Adems, las mediciones cinticas permiten describir de manera
cuantitativa el efecto de un veneno o medicamento sobre la
actividad de una enzima.
La velocidad a la que procede una reaccin enzimtica est
controlada en parte por las concentraciones de la enzima y el
sustrato. A medida que progresa la reaccin, aumenta la
concentracin de los productos a expensas de la desaparicin de
los correspondientes sustratos, en tanto que la concentracin de la
enzima no se altere.
La actividad enzimtica puede expresarse:

a) Por la desaparicin del sustrato (S).
b) Por la aparicin de productos (P).

c) Por modificacin de cofactores (C).
Diversos factores modifican la actividad enzimtica, tales como:
1) Concentracin de sustrato [S]
2) Concentracin de la enzima [E]
3) pH del medio
4) Influencia de la temperatura
5) Efecto de inhibidores y activadores
En la presente prctica estudiaremos el efecto de estos factores
sobre la actividad enzimtica de la amilasa salival sobre el almidn.
La amilasa es una enzima que degrada molculas hidrocarbonadas
complejas en componentes ms pequeos, tiene un PM de 40,000
a 50,000 daltons. Es producida por el pncreas exocrino y las
glndulas salivales para ayudar a digerir el almidn.
EXPERIMENTO A

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA
ENZIMA, DE LA TEMPERATURA Y DEL ION
CLORO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA
SALIVAL
1) Preparar los siguientes tubos:
Tubos No.
Solucin almidn 1%
Buffer phosphate pH 6.6
Solucin salina (NaCl 1%)
Agua destilada
I
1 ml
5 ml
2.8 ml
II
1 ml
5 ml
2.6 ml
III
1 ml
5 ml
2.4 ml
IV
1 ml
5 ml
2.2 ml
---
---
---
---
V
1 ml
5 ml
--2.2
ml
VI
1 ml
5 ml
2.2
ml
---
VII-C
1 ml
5 ml
2.2 ml
---
2) Colocar los tubos I al V en un bao de agua a 37C, durante 5

minutos. El tubo VI servir de comparacin para ver el efecto
de la temperatura sobre la accin enzimtica por lo que se
deja a temperatura ambiente.
3) Agregar la solucin de enzima:
Tubos No.
Solucin amilasa
I
0.4 ml
II
0.8 ml
III
1.2 ml
IV
1.6
ml
V
1.6
ml
VI
1.6
ml
VII-C
---
4) Colocar nuevamente los tubos I al V en bao de agua a 37C

durante 20 minutos, el tubo VI se mantiene a temperatura
ambiente.

5) Luego hacer el control final de la reaccin con el reactivo de

yodo, de la siguiente manera:
Tubos No.
HCl 0.05 N
de los tubos de reaccin
correspondientes agregar
Solucin yodada
I
5 ml
0.5 ml
II
5 ml
0.5 ml
III
5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
IV
5 ml
0.5
ml
0.5
ml
V
5 ml
0.5
ml
0.5
ml
VI
5 ml
0.5
ml
0.5
ml
VII-C
5 ml
0.5 ml
0.5 ml
6) Mezclar y dejar en reposo por 10 minutos.

7) Leer las absorbancia al espectrofotmetro a 650 nm.
8) La diferencia de las absorbancia entre los tubos nos indicar la
actividad enzimtica para cada tubo.
9) Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimtica en el eje Y
vs concentracin de la enzima [E] en el eje X.
EXPERIMENTO C

EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL

1)Preparar los siguientes tubos:
Tubos No.
Solucin de almidn 1%
Solucin salina (NaCl 1%)
I
5 ml
2 ml
2 ml
-----
II
5 ml
2 ml
--2 ml
---
III
5 ml
2 ml
----2 ml
2)Mezclar y colocar los tubos en bao de agua a 37C por 5 minutos.

3)Aadir a cada tubo 2 ml de solucin de enzima (amilasa).
4)Colocar nuevamente los tubos a 37C por 20 minutos.
5)Extraer los tubos del bao y realizar el control mediante la solucin yodada,
como en el experimento anterior.
6)Realizar el estudio crtico comparativo de ellos. Sacar conclusiones.
7)Graficar en papel milimetrado una curva de actividad enzimtica vs pH.
CONCLUSIONES

Se puede concluir que una enzima en grandes

cantidades reacciona con facilidad con el perxido
de hidrogeno.
La velocidad de la reaccin puede variar por
diferentes motivos ya sea por la cantidad del
sustrato por la temperatura, Etc.
Los catalizadores biolgicos actan sobre un
sustrato en especial no acta sobre grandes
cantidades.
El nivel en pH nos marcara tambin q tipo de
reaccin es y cunto ser su velocidad.
CUESTIONARIO

1.- CUL ES LA IMPORTANCIA DEL KM.

El km es una constante para cada enzima, y su importancia radica
en que es un ndice muy aproximado de la afinidad de la enzima
respecto a su sustrato. En efecto puede verse a la figura 7.10 que si
el Km es muy pequeo, quiere decir que a baja (s) se alcanzara la
velocidad mxima. En otras entradas, el Km puede ser
inversamente proporcional a la afinidad de la enzima por el
sustrato.
En virtud de la importancia el significado de los conceptos
anteriores, no debe sorprender que la determinacin del Km y la
Vmax de las enzimas sea objeto de la experimentacin de
numerosos laboratorios de investigacin bioqumica
2.- QU EFECTOS PRODUCE LAS ALTAS TEMPERATURAS
SOBRE LAS ENZIMAS.
Las enzimas son siempre protenas y stas soportan temperaturas
relativamente altas. Pero superada esa temperatura, las protenas
se desnaturalizan y por tanto tambin las enzimas.
Se estima que la temperatura aproximada de desnaturalizacin in
vitro en de 45 C. In vivo pueden soportar temperaturas
ambientales ms altas pero es porque el cuerpo utiliza todos sus
sistemas de refrigeracin. Se puede vivir a temperaturas de hasta
unos 50 C
3.- COMO SE CLASIFICAN LAS ENZIMAS?

Clasificacin de las Enzimas

Las enzimas, se clasifican por tipos de reaccin y mecanismo. Con el

descubrimiento de ms y ms enzimas surgieron ambigedades inevitables y
con frecuencia no estaba claro de que enzima se estaba hablando, para
remediar esta deficiencia la Unin Internacional de Bioqumica (IUB, en ingles
internacional Union Of Biochemistry) adopto un sistema complejo pero
inequvoco, de la nomenclatura enzimtica y las clasifico:
Oxidoreductasas:
Estas enzimas catalizan la transferencia de electrones desde una molcula que
va a ser el agente reductor hasta otra molcula receptora y esta ser el agente
oxidante.
Las enzimas Oxidoreductasas reaccionan de la siguiente manera:
AH2 + O2 A + H2O
Se clasifican en:
Deshidrogenadas.
Oxidasas.
Peroxidasas.

Oxigenasas.
Hidroxilasas.
Reductasas
Transferasas:
Estas enzimas catalizan la transferencia de un grupo funcional de

una molcula donante a una molcula receptora.
Las
enzimas
Transferasas
de la siguiente
AB + C A+
reaccionan
manera:
CB
Se clasifican en:
Grupos Monocarbonados.
Grupos Aldehdo o Ceto.
Acil Transferasas.
Glicosiltransferasas.

Alquil o Ariltranferasas.
Grupos Nitrogenados.
Grupos Fosfato.
Grupos Sulfato.
Hidrolasas:
Estas enzimas son capaces de hidrolizar sea descomponer

qumicos por su reaccin con el agua.
Las
enzimas
reaccionan de
manera:
Hidrolasas
la siguiente
AB + H2O AH + BOH
Se clasifican en:
Esterasas.
Glucosidasas.
Eter Hidrolasa.
Peptidasas.
Acil anhidro Hidrolasas.
enlaces

Helicasas.
Etc.
Liasas:
Estas enzimas son las encargadas de catalizar la ruptura de enlaces qumicos
en compuestos orgnicos por un mecanismo distinto a la hidrlisis y a la
oxidacin. Como resultado del proceso de la ruptura de los enlaces se forman
frecuentemente nuevos dobles enlaces o nuevas estructuras en anillos.
Las enzimas Liasas reaccionan de la siguiente manera:
AB A + B
Se
clasifican en:
Actan sobre enlaces C-C.
Actan sobre enlaces C-O.
Actan sobre enlaces C-N.
Actan sobre enlaces C-S.

Actan sobre enlaces C- Haluro.
Actan sobre enlaces P-O.
Etc.
Isomerasas:
Estas enzimas son las encargadas de transformar un isomero de un compuesto
qumico en otro
Las enzimas Isomerasas reaccionan de la siguiente manera:
ABC ACB
Se clasifican en:
Rasemasas y Epimerasas.
Cis-Trans- Isomerasas.
Oxidoreductasas Intramoleculares.
Transferasas Intramoleculares.

Liasas Intramoleculares.
Ligasas:
Son las enzimas capaces que catalizar la unin entre dos molculas de gran
tamao, para dar lugar a un nuevo enlace qumico.
Las enzimas Ligasas reaccionan de la siguiente manera:
A + B + XTP AB + XDP + Pi
Se clasifican en:
Forman enlaces C-O.
Forman enlaces C-S.
Forman enlaces C-N.
Forman enlaces C-C.
Forman enlaces esters fosforicos.
Actan sobre enlaces N-metal.

4.- A QUE SE LLAMAN ZIMGENOS E ISOENZIMAS.

ISOENZIMA :
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia
de aminocidos, pero que catalizan la misma reaccin qumica. Estas
enzimas suelen mostrar diferentes parmetros cinticos (i.e. diferentes
valores de KM), o propiedades de regulacin diferentes. La existencia
de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las
necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del
desarrollo.
ZIMOGENOS:
Es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no cataliza ninguna
reaccin como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de un cambio
bioqumico en su estructura que le lleve a conformar un centro activo
donde pueda realizar la catlisis. En ese momento, el zimgeno pasa a
ser una enzima activa. El cambio bioqumico suele ocurrir en un lisosoma,
donde una parte especfica de la enzima precursora se escinde del resto
para activarla. La cadena de aminocidos que se libera por la activacin
se llama pptida de activacin.
5.- QUE SON COFACTORES Y MENCIONE EJEMPLOS.

Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja
masa molecular, necesario para la accin de una enzima. El cofactor se

une a una estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo

apoenzima-cofactor recibe el nombre de holoenzima.
Aquellos cofactores que estn covalentemente unidos a la apoenzima
son denominados grupos prostticos, ya sean orgnicos (coenzimas) o
inorgnicos.
Los cofactores son bsicamente de dos tipos, iones metlicos y
molculas orgnicas, denominadas coenzimas.
BIBLIOGRAFA
Murray, R.K., Granner, D.K., Mayes, P.A., Rodwell, V.W. 1996.

Bioqumica de Harper, I Edicin. Editorial
El manual
moderno S.A de C.V. Santaf, Bogot.77, 87, 91, 119
https://es.wikipedia.org/wiki/Cofactor

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En las vas metablicas encontraremos enzimas que regulan ciertos

Enzimas Covalentemente Moduladas

Los enzimas modulados covalentemente tambin presentan dos

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Son la misma enzima, es decir, tienen, por ejemplo, la misma

Son enzimas que tienen cuatro cadenas peptdicas. Entre ellas se

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aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el

Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no

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Los biocatalizadores especficos sintetizados por el organismo,

La actividad enzimtica puede expresarse:

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a) Por la desaparicin del sustrato (S).

b) Por la aparicin de productos (P).

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2) Colocar los tubos I al V en un bao de agua a 37C, durante 5

4) Colocar nuevamente los tubos I al V en bao de agua a 37C

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5) Luego hacer el control final de la reaccin con el reactivo de

6) Mezclar y dejar en reposo por 10 minutos.

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EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL

2)Mezclar y colocar los tubos en bao de agua a 37C por 5 minutos.

7)Graficar en papel milimetrado una curva de actividad enzimtica vs pH.

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Se puede concluir que una enzima en grandes

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1.- CUL ES LA IMPORTANCIA DEL KM.

3.- COMO SE CLASIFICAN LAS ENZIMAS?

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Las enzimas, se clasifican por tipos de reaccin y mecanismo. Con el

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Estas enzimas catalizan la transferencia de un grupo funcional de

Grupos Aldehdo o Ceto.

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Estas enzimas son capaces de hidrolizar sea descomponer

Acil anhidro Hidrolasas.

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Actan sobre enlaces C-C.

Actan sobre enlaces C-O.

Actan sobre enlaces C-N.

Actan sobre enlaces C-S.

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Actan sobre enlaces C- Haluro.

Actan sobre enlaces P-O.

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Forman enlaces C-O.