Pontificia Universidad Catlica de

Chile
Facultad de Ciencias Biolgicas
Fisiologa y Bioqumica Vegetal
Bio225c

Katherinne Mendez
Daniela Risso
Marjorie San Martn

Antecedentes
Ingeniera gentica

Cambios en el organismo.
-Transformacin estable (heredable)

-Transformacin transitoria (no heredable)

Mtodos utilizados
- biobalstisca

-agroinfiltracin

 Modelos de estudio, uso de la fluorescencia.

Agrobacterium tumefaciens

Cebolla (Allium cepa L)

Objetivos
Generar un nuevo mtodo para producir transformaciones
transitorias en plantas de bajo costo y alta eficiencia a travs de
la agroinfiltracin.

Materiales y mtodo
Mtodo de Agroinfiltracin
- Cebolla (Allium cepa L)

- Tabaco (Nicotiana tabacum L. var.nc Xanthi)

- Arabidopsis thaliana (ecotipo Colombia)

- Agrobacterium tumefaciens (cepa GV3101)

- Cuatro vectores: pCM1205-RFP, pLPGM113, pLPGM202 y pLPGM41
- Microscopia de fluorescencia
- Tincin DAPI
- Biobalstica
Eficiencia de la tcnica
- Medicin de Densidad ptica (OD)
- Test de Duncan

http://www.argenbio.org/adc/uploads/imagenes_doc/ingenieria_genetica/plasmidorecombinante.jpg

Resultados

- Tres das de agroinfiltracin, a

concentracin del lquido a
OD600 de 0.1, dio la ms alta
eficiencia.

- Al aumentar el tiempo de
pretratamiento se increment
la eficiencia.

Resultados

- Todos los componentes del lquido de agroinfiltracin son necesarios y contribuyen a la

eficiencia de transformacin.

Resultados
- El mtodo desarrollado
puede
mediar
eficientemente
la
transformacin
transitoria,
y
la
expresin de los genes
reporteros in vivo.
- Tambin
se
podra
utilizar para determinar
la
localizacin
subcelular de protenas
de inters, con la
misma consistencia que
otros mtodos.

Resultados

- El mtodo desarrollado dio eficiencias de transformacin ms alta, al comparar con

biobalstica.
- Adems, tiene ventajas en costo y equipo necesario.

Resultados

- El mtodo desarrollado dio eficiencias ms altas en cebolla, que en tabaco y Arabidopsis.

- Adicionalmente, el tiempo en cebolla fue menor, y es ms fcil conseguir mejores imgenes
en esta.

Conclusin
- Se logr desarrollar un mtodo rpido y de bajo costo usando agroinfiltracion in planta en
clulas epidermales de cebolla viva.
- La eficiencia obtenida es ms alta que los mtodos convencionales.
- Al ser rpido, de bajo costo y eficiente, este mtodo es adecuado para anlisis a gran escala
de localizacin subcelular de protenas.