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Gamboa Contreras Alain

Prez Navarro Gabriel


Seccin 4
Razo Vzquez Dalia Lupita

Grupo: 4QM2

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL


ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
Laboratorio de Bioqumica
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE
ENZIMA Y DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIN

INTRODUCCIN

vez, manteniendo los dems parmetros


constantes

ENZIMAS Y CINTICA ENZIMTICA


EFECTO DEL pH
Las enzimas son molculas de naturaleza
Todas las enzimas poseen un valor de pH
proteica, que catalizan una gama amplia de
ptimo en el cual la actividad es mxima;
reacciones biolgicas. Estas molculas
por encima o por debajo de este pH la
aumentan considerablemente la velocidad
actividad disminuye bruscamente. Los
de reaccin, disminuyendo la energa de
efectos son: desnaturalizacin proteica,
activacin y facilitando la transformacin de
cambio en la ionizacin de grupos de
sustrato en uno o varios productos.
residuos de aminocidos
Blan
Tubo No.
PROBLEMAS
Las
enzimas
implicados
en
la
co
poseen
una
T
1
2
3
4
5
6
catlisis, cambio en la
selectividad a un Sacarosa
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ionizacin de grupos del
0.2 M (ml)
sustrato
sustrato,
modificacin
especfico y la Regulador
en la afinidad de la
de
pH pH
pH pH pH
actividad
de
pH=
pH
enzima y el sustrato.
citratos
=
=
=
=
=
5
=5
stas se puede 0.2 M (0.5
3.5 4.5
5.5 6.5 7.5
CONCENTRACIN DE
modificar
con
ml)
ENZIMA
diversos factores Agua (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
como
la Preincuba
5 minutos a temperatura ambiente
La velocidad de una
cin
temperatura, el
reaccin enzimtica es
Enzima
pH,
la
(100
directamente
concentracin de
0
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
microgra
proporcional
a
la
la enzima y del
mos / ml)
concentracin
de
la
sustrato,
Incubaci
enzima
a
cualquier
5 minutos a temperatura ambiente
utilizando
n
concentracin
de
inhibidores, etc.
0.5
sustrato.
Cuando
ml
aumenta la cantidad de
La
cintica
3,5enzima, las molculas
DNS
enzimtica
Inactivaci
+
0.5 ml 3,5- DNS
actuarn
abarca el estudio
n
0.5
independientemente en
de la velocidad
ml
solucin
para
de las reacciones
enzi
transformar
ms
enzimticas,
ma
sustrato en un intervalo
considerando los Desarrollo
5 minutos a 92 C
de tiempo.
factores que la
de color
Colocar en bao de hielo y diluir con
afectan
y
Dilucin
OBJETIVOS
2 ml de agua destilada
requiere que se
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
realice el estudio
de un factor a la Absorben 0.25 0.2 0.4 0.4 0.9 1.0 0.7 *Someter una reaccin
enzimtica a diferentes
cia
2
31
2
58
21
13
17
Azcar
5.2 5.7 11. 12. 8.9
3.1 2.9
reductor
5
5
5
6
5
(M)
0.2 0.5 0.5 1.1 1.2 0.8
Velocidad 0.31
9
25
75
5
6
95
(UI)
pH

3.5

4.5

5.5

6.5

7.5

Grupo: 4QM2
valores de pH, para as observar el cambio
sobre la ionizacin de la enzima y del
sustrato, manifestndolo de una forma
grfica.
*Demostrar de forma experimental y
mediante una grfica que una reaccin
enzimtica est condicionada directamente
por la concentracin de enzima

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RESULTADOS (pH)

VELOCIDAD de reaccin, se requiere


transformar nuevamente esos datos de
concentracin, en unidades internacionales
o unidades de invertasa. Esto se obtiene
dividiendo los moles de azcar reductor
entre el nmero de productos de la hidrlisis
por el tiempo de incubacin de la reaccin.
Para este caso en particular, la frmula es la
siguiente:

Resultados (concentracin de
enzima)

Unidades de invertasa = moles de azcar


reductor /
(2
productos) (5 minutos de incubacin)

DISCUSIN
La curva tipo nos permite interpolar los
datos de absorbencia que obtenemos de los
problemas y transformarlos en moles de
azcar reductor, pero, como se est
realizando el estudio de la influencia del pH
y de la concentracin de la enzima sobre la
Blanc
Tubo No.
PROBLEMAS
o
T
1
2
3
4
5
Sacarosa
0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.2 M (ml)
Regulador
de acetatos
0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.05 M pH
4.7 (ml)
Agua (ml)
0.5
0.9 0.8 0.7 0.6
0
Preincubaci
5 minutos a temperatura ambiente
n
Enzima
(100
0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
microgram
os / ml)
Incubacin 5 minutos a temperatura ambiente
0.5
ml
3,5Inactivaci DNS
0.5 ml 3,5- DNS
n
+ 0.5
ml
enzi
ma
Desarrollo
5 minutos a 92 C
de color
Colocar en bao de hielo y diluir
Dilucin
con 2 ml de agua destilada
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
Absorbenci
0.39 0.42 0.5 0.56 0.66
0.086
a
5
6
6
5
8
Azcar
reductor
1.1 4.95 5.3
7
7.05 8.4
(M)
Velocidad
0.49
0.70
0.11
0.53 0.7
0.84
(UI)
5
5
Concentrac
in de
0
5
10
15
20
25
enzima
(g( 2 ml)

pH
Las enzimas, al ser molculas de naturaleza
proteica, estn susceptibles a los cambios
de pH, el cul puede influir en las
interacciones inicas de la protena. Las
enzimas poseen un sitio activo, el cual es
especfico para un sustrato, y en l actan
una serie de residuos de aminocidos que,
al
sufrir
una
protonacin
o
una
desprotonacin pueden cambiar su arreglo
espacial y ya no tener la afinidad por el
sustrato o no permitir la unin entre la
enzima y el sustrato.
Todas las enzimas tienen un valor de pH
ptimo en el cul su actividad es mxima.
Grficamente, se observa un ascenso en la
velocidad de la reaccin al aumentar el pH,
hasta alcanzar el pH ptimo, despus de
este valor la velocidad desciende.
Dentro de la grfica se observa una zona en
forma de campana que muestra un rango
ptimo y la zona mxima de la actividad de
la invertasa. El punto mximo de la
campana, representa el pH ptimo de la
enzima, en el lado izquierdo de la campana,
de forma ascendente se encuentra el pH
subptimo y en el lado derecho se observa
un declive, que indica que la actividad de la
invertasa disminuye despus del valor
ptimo, debido a la ionizacin y a cambios
estructurales en la enzima y el sustrato.

Concentracin de enzima

Grupo: 4QM2
La velocidad de la reaccin enzimtica va a
estar condicionada por la concentracin de
la enzima, debido a que cuando se
presentan
ms
molculas
de
este
catalizador biolgico en solucin que
contiene sustrato, cada molcula va a
actuar independientemente y van a
transformar una mayor cantidad de sustrato
en productos, en una menor cantidad de
tiempo. Si la concentracin de enzima se
eleva al doble, la velocidad lo har tambin,
as respectivamente.
Grficamente
se
observa
un
comportamiento ascendente, con tendencia
lineal, que muestra claramente que, al
aumentar la concentracin de enzima,
aumenta la velocidad de reaccin. Por lo
tanto: La concentracin de enzima es
directamente proporcional a la velocidad de
la
reaccin.
Este
comportamiento
ascendente va a estar condicionado
igualmente por la concentracin del
sustrato, debido a que mientras exista
sustrato en solucin la velocidad aumentar
(por la concentracin de enzima), en tanto
que, si ya no hay sustrato para la reaccin,
la velocidad va a descender de una manera
brusca.

CONCLUSIN

A travs de la curva tipo de


azcares
reductores
podemos
interpolar y transformar lecturas de
absorbencia de los problemas en
micromoles de azcar reductor.
Para realizar un estudio de cintica
enzimtica se debe variar el factor a
estudiar y mantener todos los
parmetros que restan constantes.

Gamboa Contreras Alain


Prez Navarro Gabriel
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Razo Vzquez Dalia Lupita

Cada enzima tiene un valor de pH


en el cul su actividad es mxima y
despus de este valor, la velocidad
decaer de manera brusca.
El pH puede modificar y ionizar
tanto a la enzima como al sustrato,
afectando la afinidad, el arreglo
espacial y la unin entre ellos.
Para
realizar
estudios
representativos se deber trabajar
con un valor de pH menor al ptimo,
evitando as el descenso brusco.
La velocidad de
reaccin es
directamente proporcional a la
concentracin de enzima.
La tendencia de la velocidad con
respecto a la concentracin de
enzima ser ascendente hasta que
se agote el sustrato, posteriormente
la velocidad decaer

REFERENCIAS
*http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/sh
o/Tema_5b_pH.pdf
*Nelson, David L Lehninger, PRINCIPIOS DE
BIOQUIMICA , 6 ed, editorial Omega,
Espaa. Pp 204 207
*http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/
0403/velocidad%20reaccion
%20enzimatica4.html
*http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/32%20INVERTASA%20CIN
%C3%89TICA.pdf
*http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero
/1.4.ENZIMAS_24470.pdf