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Informe de Prctica de Laboratorio I

LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL

FACULTAD
DE
CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES

Determinacin de hierro en alimentos por espectroscopa de Ultravioleta - Visible


Moreno Gordon Luisa Fernanda, Valencia Ortiz Luisa Fernanda.
Fecha de presentacin

30/03/2016

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Resumen
La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados. La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de
la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/Vis puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. El objetivo de esta prctica fue
determinar por espectroscopa de Ultravioleta - Visible la concentracin de hierro en cereal tipo All Bran. La concentracin de hierro en el cereal tipo
All Bran mediante la ecuacin de mnimos cuadrados fue de 273,8 ppm y grficamente mediante la curva de calibracin fue de 274 ppm.

Palabras Clave: Espectrometra UV/Vis; Cereal All Bran; Hierro; Curva de calibracin; Patrones; Concentracin
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1.

se puede encontrar en la naturaleza presente en dos estados de


oxidacin que son: 2+ (ferroso) y 3+ (frrico).

Introduccin

La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UVVis implica la espectroscopia de fotones en la regin de


radiacin ultravioleta-visible. La espectrometra UV/Vis se
utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de
soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados (Ref-[1]).

El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10fenantrolina segn la reaccin:

El que una sustancia tenga color significa que transmite luz de


ciertas longitudes de onda en la regin visible del espectro,
mientras que absorben luz de otras longitudes de onda en dicha
regin (Ref-[2]). A la fraccin de luz absorbida por una
solucin medida a un largo de onda dado se le conoce como
por absorbancia. La absorbancia est dada por la Ley de Beer:
A = bc
Dnde:
A = absorbancia
= absortividad molar en unidades de L/(mol x cm)
(Es una propiedad inherente de la sustancia y depende de la
longitud de onda al cual se mide la absorbancia.)
b = la longitud del paso de luz (Equivale al ancho de la
celda)
c = concentracin molar del analto
La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una
solucin es directamente proporcional a la concentracin de la
solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse
para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario
saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la
concentracin (Ref-[3]).
Para determinar el hierro en una matriz alimenticia es
importante conocer que el hierro es un elemento metlico, que

Para asegurarse de que todo el hierro presente en la muestra


se encuentra en forma de Fe2+ se aade, antes de la formacin
del complejo, un agente reductor como es el clorhidrato de
hidroxilamina, el cual reduce el Fe3+ a Fe2+ segn la reaccin:
4Fe 3+ + 2 NH2OH

4 Fe 2+ + N2 O + 4 H3O + + H2 O

La formacin del complejo hierro (II) con fenantrolina se da


en un intervalo de pH comprendido entre 2 y 9, aunque ste es
suficientemente amplio, para asegurar la formacin
cuantitativa del complejo se adiciona al medio acetato sdico
que neutraliza el cido formado durante la reduccin del
hierro (III) y ajusta el pH a un valor al que se puede efectuar
la formacin del complejo (Ref-[4]).
Este mtodo puede aplicarse a matrices alimentarias y permite
determinar el contenido total de hierro (Fe2+ + Fe3+).
En las siguientes secciones se expondr el procedimiento y
los resultados para determinar por espectroscopa de
Ultravioleta - Visible la concentracin de hierro en cereal tipo
All Bran.

Se pes 6,003g de la muestra de cereal All Bran en un crisol,


previamente se calcin la muestra (Figura No. 1) hasta
conseguir unas cenizas blancas o ligeramente grises, y
homogneas. Se llevaron al desecador para previo
enfriamiento y posteriormente se pesaron.
1.2 Determinacin de hierro en las cenizas
Dilucin de las cenizas: En la campana de extraccin, se le
aadi al crisol fro 8 mL de HCl concentrado hasta que se
disolvieron las cenizas. Se adicionaron 10 mL de agua
destilada, agitando con un agitador de vidrio hasta que se
disolvieron las cenizas en su totalidad. Se filtr para eliminar
pequeos grumos, se pas cuantitativamente el lquido a un
matraz de 25 mL y para finalizar se afor.

Figura No. 1
Calcinacin de la muestra de cereal All Bran.

2.

Cuantificacin del hierro: Se tomaron tres alcuotas de 0,2


mL (Figura No. 2) de la solucin obtenida de las cenizas y se
llevaron a tubos de ensayo, se aadieron los siguientes
reactivos, en este orden para que se desarrollara de color
anaranjado por la reaccin entre el hierro (II) y el 1,10
fenantrolina: 0,1 ml de solucin de clorhidrato de
hidroxilamina, 0,8 ml de acetato de sodio, 1ml de 1,10fenantrolina. Luego se agit y se dej en reposo durante 15
minutos (Ref-[5]).

Materiales y Mtodos

Materiales
Baln volumtrico de 5 ml y 25 ml
Beaker
Celdas Espectrofotomtricas de plstico
Crisol
Espectrofotmetro
Embudo en V
Gradilla
Mechero
Mufla
Pipetas y micro pipetas
Tubo de ensayo
Papel filtro
Reactivos
Cereal tipo All bran
Acetato de Sodio (C2H5COONa)10%
Clorhidrato de hidroxilamina (NH2OH*HCl)10%
cido Clorhdrico (HCl)
1,10-Fenantrolina 0,1%
Sulfato de hierro amoniacal (NH4Fe(SO4)2*12H2O)

Figura No. 2
Alcuotas de la muestra problema y de los patrones.

II.

PREPARACION
CALIBRACION
a.

DE

LA

CURVA

DE

Preparacin de los estndares de calibracin

3. Procedimiento Experimental
I.

PREPARACION DE LA MUESTRA
1.1 Obtencin de cenizas totales

Se prepararon 5mL de un conjunto de 5 estndares diferentes


de concentracin. Para elegir el intervalo de concentracin en
el cual se prepararon los patrones se investig el contenido de
hierro en el cereal All Bran y con base en este dato se
realizaron los clculos para obtener la curva de calibracin.

b. Construccin de la curva de calibracin


1.

Se tomaron alcuotas de 0,2 ml de cada una de las


soluciones de los estndares preparados (Figura No. 2) y
se llevaron a diferentes tubos de ensayo, para posterior
mente adicionar los siguientes reactivos en el siguiente
orden: 0,1 mL de solucin de clorhidrato de hidroxilamina,
0,8 mL de acetato de sodio, 1mL de 1,10-fenantrolina, se
dej en reposo durante 15 minutos para que se diera la
reaccin necesaria y apareciera el color deseado.
Se procedi a registrar un barrido espectral entre 400 y
600 nm, del complejo hierro-(1,10-fenantrolina),
utilizando como blanco de referencia agua tratada de la
misma manera que los estndares. Se registr la longitud
de onda donde se dio el pico de mayor absorbancia y esta
se utiliz en la lectura de la muestra problema.
Se realiz la curva de calibracin de absorbancia frente a
concentracin a longitud de onda seleccionada.
Se obtuvo la absorbancia de la muestra problema, para
posteriormente interpolarla con la curva de calibracin y
as obtener la concentracin de la muestra problema.

2.

3.
4.

4.

Tabla No. 1
Algunos alimentos ricos en hierro.

Despejando V1, se obtiene que:

Resultados y Anlisis de resultados

I.

V 1=(C 2 V 2)/C 1

BARRIDO ESPECTRAL

Para la realizacin del barrido espectral se ley uno de los


patrones que contena hierro, teniendo en cuenta el intervalo de
longitud de onda entre 400 y 600 nm, obteniendo como
longitud de onda del hierro 515 nm.
II.

CURVA DE
PATRONES

CALIBRACIN

DE

1000 g

=200 ppm
1 kg

V 1,1=

125 ppm5 mL
= 0,5 mL
1250 ppm

LOS

De acuerdo a la Tabla No. 1 el cereal tipo All Bran contiene 20


mg de hierro. Se determin la concentracin del cereal de la
siguiente manera:

20 mg
100 g

(Frmula No. 3)

(Frmula

V 1,2=

150 ppm 5 mL
= 0,6 mL
1250 ppm

V 1,3=

200 ppm 5 mL
= 0,8 mL
1250 ppm

V 1,4=

225 ppm5 mL
= 0,9 mL
1250 ppm

V 1,5=

250 ppm 5 mL
= 1,0 mL
1250 ppm

No. 1)
Para determinar el intervalo de concentracin de los patrones
se eligieron dos concentraciones por encima (125 ppm y 150
ppm) de la concentracin del cereal (200 ppm) y dos por
debajo de este (225 ppm y 250 ppm), obteniendo de la suma de
las concentraciones un total de 950 ppm. La muestras madre
presentes en el laboratorio tenan concentraciones de 200 ppm,
250 ppm y 1250 ppm respectivamente.
Se eligi la concentracin para la muestra madre de 1250 ppm
puesto que esta fue la ms cercana al total de 950 ppm.

Despus de tomar alcuotas de 0,2 mL de las soluciones de los


estndares preparados y haberles agregado la cantidad
apropiada de clorhidrato de hidroxilamina, acetato de sodio y

Con estos datos se pudieron hallar los volmenes de los


patrones a partir de la Frmula No. 2.
C1V1=C2V2

(Frmula No. 2)

1,10 fenantrolina respectivamente, se procedi a realizar la


curva de calibracin en el espectrofotmetro a una longitud de
onda de 515 nm, obteniendo las absorbancias de los patrones
como se muestra en la Tabla No. 2.

x=

0,714(1,024)
0,010

x=173,8 ppm
Tambin se determin la concentracin de la muestra
problema grficamente (Grfico No. 1) obteniendo como
resultado 174 ppm.

Tabla No. 2
Absorbancias de los patrones a 515nm.

De acuerdo al Grfico No. 1, la curva de calibracin es lineal


demostrando de esta manera que cumple con la ley de
Lambert Beer ya que a mayor concentracin hubo mayor
absorbancia.
III.

CONCENTRACIN
PROBLEMA

DE

LA

MUESTRA

Se procedi a medir por triplicado en el espectrofotmetro la


absorbancia de la muestra problema obteniendo como
resultado las siguientes absorbancias: 0.688, 0.721, 0.714.
Se sac la medida de tendencia central la cual fue 0,714 y a
partir de la Formula No. 4 se hall la concentracin de la
muestra problema la cual fue de 173,8 ppm.

y= mx + b

(Formula No. 4)

Despejando x:

x=

yb
m

Dnde:

Grfico No. 1
Curva de calibracin de los patrones (Absorbancia vs. Concentracin).

5.

Cuestionario

1.

Describir las desviaciones que pueden presentarse en


la aplicacin de la Ley de Beer.

a.
i.
ii.

Desviaciones reales.
La concentracin debe ser inferior a 0,01 M
La absorbancia debe darse en un rango de 0,15 -0,8

b. Desviaciones instrumentales.
i.
Radiacin no monocromtica
ii.
Radiacin parsita
iii.
Errores de lectura
c.

Desviaciones qumicas.
Influencia del equilibrio (dimerizacin, acido-base,
complejos)
ii.
Influencia del disolvente
iii.
Influencia de la temperatura
iv.
Impurezas de los reactivos
v.
Interaccin entre especies absorbentes (Ref-[6]).
2. Qu es un complejo?
i.

(Formula No. 5)

y= 0,714

b= -1.024
m= 0,330

Un complejo es una ion que se compone de un tomo central


que acta como receptor de pares electrnicos y de grupos

ligando que actan como dadores de pares electrnicos


formando enlaces coordinados dativos. Los complejos se
forman especialmente con los elemento de transicin los cuales
en su notacin espectral
quedan con varios orbitales
semillenos. Experimentalmente se observa que los diferentes
cambios de color que forman los complejos se dan debido al
orden de la fuerza creada por los ligandos, un orden que se
esperara por los efectos electrostticos y teniendo en cuenta el
desplazamiento delos iones, se forma la serie espectro-qumica
debido a las diferentes coloraciones observadas (Ref-[7]).
3.

sugiere hacer ms patrones y de esta manera ampliar el


intervalo permitiendo de esta manera que la muestra
problema se pueda interpolar con las concentraciones de los
patrones.
6.

Por qu se llaman complejos por transferencia de


carga?

Porque es una asociacin qumica de dos o ms molculas, en


el que la atraccin entre las molculas se debe a una transicin
electrnica hacia un estado electrnico excitado. La atraccin
electrosttica resultante provee una fuerza estabilizadora para
el complejo molecular. La molcula fuente de donde la carga es
transferida se denominada electrn donante, y la molcula
receptora es denominada electrn receptor (Ref-[8]).
4.

Qu sucede si no se adiciona hidroxilamina antes de


agregar la 1, 10 fenantrolina? Qu condiciones debe
tener el agua que se utiliza para preparar las soluciones
en este anlisis?

Para asegurarse que todo el hierro presente en la muestra est


en estado de oxidacin (+2), antes de la formacin del
complejo, se agrega un agente reductor como lo es el cloruro
de hidroxilamina, el cual reduce el Fe+3 a Fe+2. Por lo tanto si
este no se agrega no se podra presentar el complejo, puesto
que se necesita que el Fe este en estado de oxidacin +2 (Ref[6]).
El agua debe ser destilada, es decir con un pH neutro, ya que se
necesita que la solucin se neutralice y esta no afecte la
formacin de complejo.
6.

Cules son los factores que deben tenerse en cuenta


para la determinacin espectrofotomtrica de iones
inorgnicos por formacin de complejos?

Los factores que se deben tener en cuenta son: velocidad de


reaccin, formacin de insaturaciones, tiempo, temperatura y
equilibrio qumico (Ref-[9]).
5.

Conclusiones

Si la solucin de su muestra problema tiene una


absorbancia por encima o por debajo de las
absorbancias de las soluciones patrn usadas para la
curva de calibracin; qu efecto puede tener esto en el
resultado del anlisis y como se soluciona este
inconveniente?

El resultado que puede tener en nuestro experimento es que


la absorbancia de nuestra muestra problema no corte la curva
de calibracin, es decir, que nuestra muestra problema no
contiene el compuesto requerido o que este en mnimas
concentraciones. Para solucionar este inconveniente se

7.

Se logr determinar la concentracin de hierro en una


muestra de cereal tipo All Bran a 515 nm, la cual fue
de 273,8 ppm. Esta se hall a partir de la reduccin
del Fe+3 a Fe+2 por accin de la 1,10 fenantrolina,
para generar un complejo. Grficamente mediante una
curva de calibracin e interpolando la muestra
problema se obtuvo una concentracin de 274 ppm.
La curva de calibracin aportada por la solucin
madre indica que hay una relacin directa entre la
concentracin y la absorbancia, es decir, hay un
cumplimiento de la ley de Lambert Beer.
Para que la ley de Beer se cumpla, las soluciones a
utilizar deben ser homogneas, sin impurezas o
precipitados, y la luz utilizada debe ser
monocromtica.
El conocer el adecuado uso del espectrofotmetro
permiti obtener en el laboratorio resultados con alta
calidad analtica en las mediciones que son emitidas
por este.

Bibliografa:

Textos
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Graw-Hill, Ed.7, Mxico 2004, pg. 629,630.
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ESPECTROMETRIA
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www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta
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http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan
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[5] Universidad de Caldas, Determinacin de hierro
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Instrumental.
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[7]
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Nacional,
Complejos,
http://www.bdigital.unal.edu.co/249/12/80__11_Capi_5.pdf
[8] Wikipedia, Complejo de transferencia de carga,
https://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_de_transferen
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[9] Universidad Autnoma de Mxico, Fundamentos
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