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#########################Microbiologia. Obiectul de studiu. Disciplinile
microbiologice si obiectele de studiu. Etapele istorice de dezvoltare a
microbiologiei. Rolul savantilor A. Leeuwenhoek, L. Pasteur, R. Koch, I.Mecinicov
in dezvoltarea microbiologiei.Obiectul de studiu: mi/o si activitatea lor vitala
(forma, structura, metabolism, crestere si multiplicare) ( identificarerelatiile
mi/o cu mediul ambiant si cu organismul-gazdaScopurile studierii mi/o:patogene,
oportuniste = prevenire maladii infectioaseutile, inofensive = productie AB,
medicamente prin ADNrec (streptokinaza, insulina), alimente (unt, brinza)
insecticide biologicefabricare plastic biodegradabil ???decompunere deseuri,
metanDisciplini microbiologice:particularitati biologice mi/obacteriologievirologie
protozoologiemicologie, etchabitat mi/omicrobiologia solului... marina... cosmica
implicatii in activitatea umanamicrobiologia medicala... veterinara... alimentara,
etcGenetica microbianaEcologia microbianaMicrobiologia medicala studiaza:relatia
mi/o-gazda umanacapacitatile patogene mi/ocapacitatile antiinfectioase organism
umanmetode de diagnostic etiologic al bolilor infectioasemetode de
terapie/profilaxie antimicrobianaEtape istorice in dezvoltarea microbiologiei:
empirica (pina in sec. 15)morfologica (sec. 16-18)A. von Leewenhoek: 1673 prima
observare si descriere a mi/ofiziologica (sec. 19)L. Pasteur: prepararea
vaccinurilor contra antraxului, turbarii, holerei; sustine necesitatea sterilizarii
instrumentelor, bandajelorR. Koch: introducerea mediilor de cultura solide; izolare
agent antrax, tbc; elaborare teorie despre rolul etiologic al mi/o in bolile
infectioase (postulatele lui Koch)I. Mecinicov: argumentare rolul florei
intestinale (antagonism); descoperire fagocitoza si rolul antimicrobian al
inflamatieiTipurile de laboratoare microbiologice si sarcinile lor. Regimul si
regulile de lucru in laboratorul microbiologic. Clasificarea laboratoarelor in
functie de exigenta sigurantei antiinfectioase. Notiune de microorganisme.
Categoriile taxonomice, tipuri acelulare si celulare. Deosebirile dintre
microorganismele procariote si eucariote.Mi/o = organisme microscopice (micro-nanometri) + alge, protozoare, virusuri, agenti subvirali (prioni), cipuerci
microscopice (fungi, micete)Clasificari mi/o:fenotipica (prima tentativa Carl von
Linne)genotipicafilogenetica (bazata pe studiul fosilelor sau al HLA)Grupe
taxonomice: domeniu ( regn ( increngatura ( clasa ( ordin ( familie ( gen ( specie
Taxoni infraspecifici din cadrul speciei, care prezinta anumite diferente:biovar
(activitate biochimica/fiziologica)serovar (structura Ag)patovar (grad de
patogenitate)lizovar (sensibilitate la bacteriofagi)antibiovar (sensibilitate la
AB)Rolul taxonilor infraspecifici: markeri epidemiologici!Clasificare mi/o:forme
acelulare (virusuri, viroizi, prioni)forme celulare:bacteria = procariote, eubctGG+micoplasme (lipsite de PC)archaea = procariote, PC fara peptidoglican, habitat in
conditii extremaleeucarya = eucariote (fungi, protozoare) Metodele microbiologice
de diagnostic si esenta lor. Metoda microscopica in diagnosticul bolilor
infectioase. Tipurile de microscoape, utilizarea practica, particularitatile si
rolul uleiului de emersie.Metode microbiologice de diagnostic:diagnostic direct
(detectare agent patogen sau a produselor lui)microscopic (orientativ) ( prezenta
bct, nr, forma, structurabacteriologic ( izolare culturi pure de bct, identificare
si testare la ABbiologic (experimental) ( inoculare produs patologic la animale de
laborator, provocare maladie tipicadepistare Ag mi/o in lichide biologice
identificare AN mi/o prin tehnici de biologie molecularadiagnostic indirect
(imunologic)serodiagnostic ( detectare si titrare Ac specifici in serul bolnavului
intradermoreactie ( introducere alergen microbian epidermal/intradermal; reactie
pozitiva = aparitie eritem ( hipersensibilitate specifica (intilnire repetata cu
Ag) Morfologia bacteriilor. Grupurile morfologice de bacterii. De desenat.
Caracterele tinctoriale ale bacteriilor. Colorantii de baza utilizati in
microbiologie. Metodele de colorare. Aplicarea practica.Bct = mi/o, unicelular,
procariot, autonomGrupe morfologice de bct:coci:microdiplo (neisseria=bob de cafea,

pneumococi=lanceolati)tetrastrepto (lant) + enterococcus, lactococcusstafilo


(gramezi)sarcine (pachete 8-16-32 coci)bastonasebacterium capete rotunjite, nu
formeaza spori (ex. E. coli)bacillus capete retezate, formeaza spori ce nu
depasesc diametrul celulei (ex. B. anthracis); posibilitate formare lanturi =
streptobaciliclostridium capete rotunjite, formeaza spori ce depasesc diametrul
celulei (ex. C. perfringens)spiralate/incurbatevibrio (ex. V. cholarae)
campylo-/helico- bacter = 2 apire. aspect de pasare in zbor (ex. C. jejuni)
spirillum = cel. spiralate rigidespirochaeta = cel. spiralate flexibile, 5-25 spire
(ex. Treponema, Leptospira, Borrelia)polimorfe (Actinomyces, Rickettsia, Chlamydia,
Mycoplasma)Etapele si tehnica de pregatire a frotiurilor din culturile bacteriene
crescute pe medii lichide. Tehnica de pregatire a frotiurilor din biosubstrate:
sputa si frotiuri amprente. Metodele de fixare.Pregatirea frotiurilor ( examen
microscopicEtape in pregatirea frotiului:etalare material microbianuscarefixare
( oamoara bct, mareste afinitatea pt colorantcolorare ( asigura contrast intre mi/o
si fundalexaminare (microscop optic cu imersie)Caracter tinctorial = capacitatea
mi/o de a fixa colorantulEtapele si tehnica de pregatire a frotiurilor din
culturile bacteriene crescute pe medii solide. Tehnica de pregatire a frotiurilor
din biosubstrate: singe, puroi. Metodele de fixare.Structura celulei bacteriene.
Enumerati elementele permanente (obligatorii) si nepermanente (neobligatorii) de
structura. Membrana citoplasmatica si citoplasma. Structura, compozitia chimica si
functiile biologice. Metodele de evidentiere.

Elemente permanente: PC, MCt, Ct, nucleoid, ribosomi, mezosomi ( G+ (E, citocromi)
Elemente nepermanente: capsula, spor, flageli, fimbrii, plasmide, incluziuni
celulareMCt:mozeic fluid Singerlipsa colesterol, contin sterol-like molecules
hopanoizimai bogata in prot. decit eucariotele ( fctii multiple (la eucariote
indeplinite de organite)PBP catalizare transpeptidare si sinteza PCpermeaze
transportprot. sist. de secretiereceptoriE lant respiratorRol MCt:Bariera
semipermeabila, selectiva ( difuziune simpla, facilitataPermeaze ( transport activE
( activitate metabolicaMetabolism energeticParticipa la diviziunea celularaSinteza
PG si fosfolipidelorChemotaxis (R specifici)Mezozomi: cresc S MCt ( cresc
activitatea metabolica, energeticaCt:Lipsesc organitelePrezenta: ribozomi,
nucleoid, inclusiuni, plasmidepH acidRol Ct: sediul proceselor metabolice

Peretele celular bacterian, functiile. Particularitatile de structura ale peretelui


celular al bacteriilor gram pozitive. Coloratia Gram. Tehnica si mecanismul de
colorare. Importanta practica. Exemple de bacterii gram pozitive.PC = invelis rigid
ceinconjoara protoplastul; e constituit din PG.PG = mureina = heteropolimer
macromolecular, format din 2 parti:Partea glicanica (PZ) = catene liniare paralele:
NAG + NAMPartea peptidica = peptide 4*aa (izoforme D si L) legate de NAM
( protectie de proteazeG-: tetrapeptidele unite direct (bidimensional) G+:
tetrapeptidele unite prin punti interpeptidice 5*Gly (tridimensional)Structuri
prezente doar la procariote:ac. diaminopimelic (tetrapeptid, la G+)izoforma D aaNAM
Fragmente solubile de mureina (PG) ( interactiune cu toll-likeR/CD14R de pe
macrofage ( secretie citokine ( soc septic!Rol PC:Protectie de liza osmoticaForma
Factor de patogenitate (soc septic)Protectie contra subst. toxice (AgO, E din
spatiul periplasmatic)Tinta de atac a unor substante: Lizozim scindare legaturi
din catena glicanica (intre NAG si NAM)AB inhibitie proces de transpeptidarePC
G+:Componente:PG (tridimensional) 40-80% ac. teichoici (fixati de NAG), ac.
lipoteichoici (fixati de MCt) = polimeri de ribitol, glicerol-fosfat;sarcina
electrica negativatransfer de ionifctie Agactivare complement pe cale alternativa
stimulare secretie citokineadeziune intercelularaprot. asociate PCStreptococcus
pyogenes = prot. MStaphylococcus aureus = prot. A (clumping factor), prot.
fixatoare de fibronectinaUniformGrosime 80 nm Peretele celular bacterian,
functiile. Particularitatile de structura ale peretelui celular al bacteriilor gram
negative. Coloratia Gram. Tehnica si mecanismul de colorare. Importanta practica.
Exemple de bacterii gram negative.PC G-:Componente:PG (bidimensional) 1-10% MEx:
existenta situsuri de comuniune intre MEx si MCt ( rol in transportProt. majore:
porine, receptori (pili, fagi)Prot. minore: E de captare si transport a subst.LP
Braun = uneste Mex si PG ( stabilizare MExLPZ (cel mai neobisnuit component)
( stabilizare MExLipid A localizat in MEx; endotoxina (stimuleaza secretia
citokinelor)Miex PZ transport unele subst.; AgR ( specificitate de genLant O (OZ)
sarcina negativa, impiedica fagocitoza; AgO ( specificitate de specie N.B. Bct au
capacitatea de a modifica structura AgO ( capacitate de a amagi apararea imuna
NeomogenGrosime 12 nmSpatiul periplasmatic: E si prot. fixate de MCtRol e:
hidroliza, sinteza PC, detoxifiere (ex. Beta-lactamaze)Coloratia GRAMViolet de
gentiana ( Ct violeta Spalare cu apa, tratare cu sol. Lugol (iodin) ( formare
complex insolubil violet-iodin ( fixare colorant in celuleTratare cu alcool 95%
eliminare colorant din bct G- ( pori mai mari in PG, continut mai mare de lipide
(solubile in alcool), pH slab acidmentinere colorant in bct G+ ( pori mai mici,
continut scazut de lipide ( alcoolul dehisrateaza peretele si reduce diametrul
porilorRecolorare cu fuxina apoasa Rezultat: G-: rosu, G+: violetUtilizarea
coloratiei Gram: Diagnostic, Sensibilitate la ABForme particulare, osmotic
sensibile:Protoplast = G+, fara PGSferoplast = G-, MCt+MEx, partial fara PGForme L
= bct lipside de PC, din cauza AB, (i)reversibileMycoplasma lipsite de PC,
osmotic rezistente ( rezistenta marita MCt; forma pleiomorfa Particularitatile de
structura si compozitia chimica a peretelui celular al bacteriilor acidorezistente.
Coloratia Ziehl-Neelsen. Componentele, tehnica si mecanismul de colorare. Exemple
de bacterii acidorezistente. Coloratia Ziehl-Neelsen:Colorare cu fuxina fenicata +
incalzire lama pina la aparitia vaporilorSpalare cu apa, tratare cu sol. ac.
sulfuric 5% Spalare cu apa, recolorare cu albastru de metilenRezultat:
Acidorezistente: rosu; Acidonerezistente: albastruAparatul nuclear al bacteriilor.
Compozitia chimica si functiile biologice. Metodele de evidentiere. Plasmidele
bacteriene, tipurile si functiile lor.Aparatul nuclear = nucleoid, ADN bicatenar
circular 1 crsN.B. date recente ca V. cholerae contine > 1 crsADN: pliat n
bucle,
stabil#############################################################################
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#i#d#e#n#t#i#f#i#c#a#r#e#a# #b#a#c#t#e#r#i#i#l#o#r#.##P#o#z#i#tia sporului in
celula: central; subterminal; terminal; terminal, cu deformarea celuleiStructura
sporului:exosportunica externa = straturi proteice ( rezistenta la subst. chimice
(ex. apa oxigenata)tunica interna ???cortex = PG ( inlaturare osmotica a apei
( dehidratarePC sporalprotoplast = nucleoid + ribosomi + E de reparare ADN15% masa
uscata spor = dipicolinat de Ca, localizat in protoplast ( stabilizare ADNADN
asociat la DNA binding proteins ( protectie contra temperaturii inalte,
radiatiilor, d#e#s#i#c#a#t#i#e#i###S#t#a#d#i#i#l#e# #s#p#o#r#o#g#e#n#e#z#e#i#
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#I#I# ## #d#i#v#i#z#a#r#e#a# #a#s#i#m#e#t#r#i#c### #a# #c#i#t#o#p#l#a#s#m#e#i#
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#A#U#J#E#S#Z#K#Y### #C#a#p#s#u#l#a# #b#a#c#t#e#r#iilor. Compozitita chimica si
functiile biologice. Metodele pozitive si negative de colorare a capsulei. Exemple
de bacterii capsulate, de desenat. Capsula formata din polimeri organici
sintetizati in mediul natural de existenta al bct.Se disting:
Capsu##############################################################################
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###########################l#a# #a#d#e#v###r#a#t### #(#p#e#s#t#e# #0#,#2##m#)#,#
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#c#i#r#l#i#g# #d#e# #a#r#t#i#c#u#l#a#t#i#e##c#o#r#p# #b#a#z#alG+inel intern (MCt)
inel extern (PG)G-disc M (Mct)disc S (spatiu periplasmatic)disc P (PG)disc LPZ
(MEx)Sinteza flagel = proprietate de autoasamblareRotire flagel E. coli = 270/s
Motilitatea e determinate de chemotaxis. Bct nu allege directia de miscare, cid oar
determina daca trebuie sau nu sa continuie miscarea in aceeasi directie.
Evidentierea flagelilor:microscopie electroniccoloratie Loeffler
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#G#r#a#n#u#l#a#t#i#i#l#e# #d#e# #v#o#l#u#t#i#n#a#.# #C#o#m#p#o#z#i#t#i#a#
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#N#e#i#s#s#e#r#.# #M#e#c#a#n#i#s#m#u#l# #s#i# #t#e#h#n#i#c#a# #d#e#
#c#o#l#o#r#a#r#e#.# #E#x#e#m#p#l#e# #d#e# #b#a#c#t#e#r#i#i# #c#u#
#g#r#a#n#u#l#a#t#i#i# #d#e# #v#o#l#u#t#i#n#a#.# #I#m#p#o#r#t#a#n#t#a#
#p#r#a#c#t#i#c#a#.# Tipuri de incluziuni Ct:glicogen sau PHB (poli-betahidroxibutirat)vacuole de gaz ( plutire (ex. cianobacterii)magnetosomi = incluziuni
de Fe sub forma de magnetit --. orientare in cimpul magnetic al pamintuluigranule
de volutina (polimetafosfat) = granule metacromatice
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#####################################################################L#a#
#t#r#a#t#a#r#e#a# #c#u# #u#n#i#i# #c#o#l#o#r#a#n#c#i# #b#a#z#i#c#i#
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#f#e#n#o#m#e#n#u#l# #m#e#t#a#c#r#o#m#a#z#i#e#i#.##R#o#l# #g#r#a#n#u#l#e# #d#e#
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#u#n#u#i# #a#p#a#r#a#t# #l#o#c#o#m#o#t#o#r#,#c#a#r#e# #consta din fibrile dispuse
pe toata lungimea corpului intre perete si membrana. Peretele este elastic, format
din glucide, lipide, polipeptide. Nu
sunt rezistente in mediul extern. (Nu rezista la variatii de temperatura,sunt
sensibile la peniciline si cefalosporine)Familia Spirochaetaceae, cuprinde 3
genuri, toate avind importanta in patologia umana.Genul Treponema(se subdivid in
specii patogene,si saprofite.)Cele patogene...Treponema pertenueTreponema carateum
Treponema pallidumGenul LeptospiraDin specii saprofite.Leptospira biflexaDin specii
patogene-L.Icterohaemorrhagiae(rezervorul soarecele)
-L.grippotyphosa(rezervorul soarecele)
-L.pomona(rezervorul porcul)
-L.canicola(rezervorul cainele) Genul BorreliaPatogenitatea.Treponema este patogena
prin multiplicarea intracelulara si prin invazivitate.Boala se numeste Sifilis.
Leptospirele sunt patogene prin multiplicare.Produc boala numita Leptospiroza,care
este o antropozoonoza.Borrelia sunt patogene prin multiplicare si
invazivitate.Produc borrelioze,care sunt boli generalizate.Caractere morfologice
Treponema. Are 10-15 spire regulate, rigide cu capetele drepte. Intre perete si
membrana are fibrile, care ii confera mobilitate,prezinta miscari de rotatie si
flexie. Se coloreaza Giemsa slab,dar se coloreaza prin impregnare argentica,
coloratia Fontana-Tribondeau, germenii apar bruni pe fond bej.Leptospira. Corpul
are 10-12 sppire,nedeformabile,mici,regulate,cu capete rasucite. Aparatul locomotor
este alcatuit dintr-o singura fibrila dispusa intre membrana si perete,care este
foarte elastic. Se coloreaza Giemsa,dar foarte greu. Nu se coloreaza cu Gram
Borrelia. Corpul alcatuit din 5-6 spire neregulate sideformabile in cursul
miscarilor,avind capete drepte.Aparatul locomotor este alcatuit dintr-un manunchi
de 30 de fibrile dispuse intre membrana si pereteSe coloreaza Gram,fiind Gramnegative Morfologia si ultrastructura micoplasmelor si chlamidiilor. Metodele de
studiere. Speciile patogene.Micoplasmele sunt bacterii: Delimitate numai de o
membrana trilaminata si lipsite de perete celular rigid ca si de informatia
genetica necesara sintezei precursorilor specifici peretelui.Forme mici si
polimorfeSe cultiva pe medii acelulare ,iar cultura este inhibata de anticorpii
specifici.Se inmulteste intr.un ciclu care include alternativ,elongarea si
fragmentarea unor forme filamentoase in forme cocoide si diviziunea acestora.Se
examineaza in functie de localizarea infectiei,sputa sau exudatul
nazofaringian,urina,prelevate prin laparoscopia pelvina. Microscopia directa este
fara valori,coloratiile uzuale nu pot depista micoplasmele din cauza dimensiunilor
reduse...iar coloratia imunofluorescenta nu a dat rezultate satisfacatoare.
Izolarea si identificarea. Coloratia Dienes,coloniile de micoplasme se coloreaza in

violet si acoperite cu o lamele pot fie examinate cu imersie.Specii patogene. Din


cele 80 de specii de Mzcoplasme,gazduite de cele mai diverse vertebrate,omul
gazduieste numai 10,din care doar 3 sunt patogene. Din cele 3 specii= M. Genitalum
(tractul urogenital inferior) M. hominis, M. Pneumoniae (cai respiratorii).
Chlamidiile sunt minuscule bacterii cocoide, parazite energetic, total dependente
de
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