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Laboratorio No. 5
Reticulocitos y ESP

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EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA (ESP):

Un frotis de sangre perifrica es la preparacin de una pelcula delgada de sangre sobre
una lmina de vidrio a partir de una muestra de sangre obtenida de la circulacin
microvascular drmica, mediante puncin capilar en el pulpejo del dedo medio o anular, o
el taln.
El ESP es de gran importancia en hematologa, ya que el diagnstico de muchas
enfermedades hematolgicas puede realizarse observando las caractersticas
morfolgicas de las clulas sanguneas.
Antes de realiza la puncin aplicar un ligero masaje longitudinal a lo largo del dedo para
aumentar el flujo sanguneo. Una vez realizada la puncin eliminar la primera gota, ya que
esta se acompaa de lquido tisular.
El ESP debe realizarse en lo posible sin anticoagulante para poder valorar la
agregabilidad plaquetaria, sin embargo el anticoagulante de eleccin es el EDTA por
conservar la morfologa celular. El ESP debe hacerse lo ms pronto posible ya que el
EDTA acta sobre los leucocitos originando vacuolizacin citoplasmtica, falso aumento
de cayados y aparicin de diversos artefactos.
Recibir los extendidos de sangre perifrica
Registrar el paciente en el libro de registro
Realizar ingreso a Dinmica gerencial en caso de pacientes hospitalizados
Verificar facturacin en el caso de pacientes de consulta externa
Marcar con lpiz videograf el extendido
Coloracin de Wright:
Adicionar colorante de Wright filtrado en toda la lamina
Adicionar gota a gota agua destilada con pipeta Pasteur e ir soplando con pipeta de vidrio
hasta obtener brillo metlico en el colorante.
Dejar actuar el colorante durante 8 minutos. (Segn estandarizacin de la coloracin)
Adicionar indirectamente abundante agua de chorro para eliminar los precipitados.
Limpiar la parte posterior de la lamina (donde no se encuentra la muestra) con compresa
para eliminar el colorante sobrante que interfiere en la lectura.
Dejar secar la preparacin colocndola en el soporte de secado
Realizar el anlisis del extendido de sangre perifrica:
1. ANALISIS DEL ESP:
1.1 ANALISIS EN 10X
Todo ESP debe inspeccionarse con el objetivo de 10x para buscar el campo
adeudado para su anlisis, el cual es donde los glbulos rojos apenas se toquen.
Este sitio se encuentra ubicado en el cuerpo del extendido con este objetivo se
valora:

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- Glbulos blancos: Cantidad aproximada: disminuidos, aumentados o normales., si

hay acmulos.
- Los glbulos rojos: fenmeno de rouleaux
- Plaquetas: agregados
Escoger el campo a analizar
1.2.

ANLISIS EN 100X

Todo extendido debe analizarse con el objetivo de 100x en el microscopio de luz

para ver detalles morfolgicos. El sitio de eleccin es donde los glbulos rojos
apenas se tocan. Se debe escanear el rea de la lmina escogida siguiendo un
patrn en zigzag para evitar contar dos veces la misma clula. Se debe realizar un
conteo diferencial de 100 glbulos blancos.
Describir y cuantificar (leve (+), moderada (++), severa (+++)) cualquier
anormalidad en glbulos , rojos blancos y plaquetas
Evaluar e informar realizando formula diferencial contando 100 clulas y
evaluando las tres lneas celulares: glbulos rojos, glbulos blancos, y plaquetas

rea de Escritura

Cabeza

Cabeza

1.3.

Zona para evaluar

morfologa

Cola

VALORACION DE SANGRE PERIFERICA

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1.3.1.

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VALORACIN DE GLBULOS BLANCOS

a. Cantidad: normales, aumentados, disminuidos.

Valoracin cualitativa del nmero de glbulos blancos utilizando el objetivo de 10x:

Este es una aproximacin del conteo que da el equipo, existe una variacin de + 20%.

Numero de glbulos blancos/mm3: Promedio de glbulos blancos en 10 campos x 1000

2

Se debe realizar una correccin del conteo de leucocitos realizado por el equipo
automatizado de hematologa si se observa gran cantidad de normoblastos.

100+No. Normoblastos contados

100 glbulos blancos

No. Glbulos blancos /mm3

X= No. Glbulos blancos corregidos

b. Alteraciones morfolgicas: neutrfilos con mas de 6 lobulaciones

(macropolicitos), neutrfilos hiposegmentados (seudopelguer o pelguer
huet).
c. Granulaciones: hipogranular e Inclusiones granulares citoplasmticas
Grnulos de Alder-Reilly: Son grnulos grandes, morado oscuro, compactos,
se encuentran en la anomala de Alder-Reilly y en pacientes con
mucopolisacaridosis.
Bastones de Auer: tienen forma de aguja, eosinofilicos, se encuentran en
blastos y promielocitos en pacientes con leucemia mieloide aguda.
Grnulos Chdiak-Higashi: grnulos de rojo a azul que se encuentran en
granulocitos, linfocitos o monocitos de pacientes con el sndrome de ChdiakSteinbrinck-Higashi.
Cuerpos de Dhle: Son de tamao y forma variable, de color gris azulado
ubicados en cerca de la periferia de los neutrfilos, bandas y metamielocitos
en pacientes con infecciones, quemaduras, embarazos complicados,
intoxicaciones o tratamiento con factores de crecimiento como G-CSF.
Anomala de May-Hegglin: grnulos basfilos pequeos. En esta anomala se
encuentra leucopenia y macroplaquetas.

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1.3.2.

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Granulaciones toxicas: grnulos azul oscuro a morado encontrados en el

citoplasma de metamielocitos, bandas, neutrfilos en procesos inflamatorios,
quemaduras, trauma, tratamiento con factores de crecimiento como G-CSF.
Usualmente se encuentran acompaadas con un giro a la izquierda de
neutrfilos y la presencia de vacuolas citoplasmticas y cuerpos de Dohle.
VALORACION DE GLBULOS ROJOS:

a. Evaluar la cromia: Es decir el estado o condicin de pigmentacin (cantidad de

hemoglobina) e informar: Normocromia, hipercromia- policromatofilia, hipocromia
segn el grado de cromia observada: Leve, Moderado, Severo.

Sangre perifrica normal

Hipocroma severa

b. Evaluar Anisocitosis (tamao): Macrocitos (aumento tamao), Microcitos

(disminucin del tamao), segn el grado de anisocitosis observada: leve,
moderado, severo.
c. Evaluar Poiquilocitosis (diferentes Formas): segn el grado de poiquilocitosis
observada: Leve, Moderado, Severo
Formas de glbulos rojos: esquistocitos, dacriocitos, acantocitos, eliptocitos,
dianocitos, ovalocitos, esferocitos, leptocitos, crenocitos, celulas falciformes, rasgo
falciforme, etc.

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Glbulos Rojos Normales

Clulas falciformes

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Esquistocitos

Equinocitos

Estomatocitos

Dacriocitos

d. Evaluar la presencia de parsitos: Plasmodium vivax, Plasmodium malarie, filaria,

etc.
e. Evaluar la presencia de inclusiones: punteado basfilo, cuerpos de Howell Jolly,
anillos de Cabot, etc.
f. Evaluar la presencia de glbulos rojos nucleados (normoblastos): y reportar en
porcentaje
1.4.
I.

VALORACIN DE SANGRE PERIFERICA

ESCALA VALORATIVA DE GLOBULOS ROJOS

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NORMAL
0-5

ANORMALIDAD
Esferocitos
Eliptocitos
Estomatocitos
Drepanocitos
Dianocitos
Poiquilocitos
Esquistocitos
Acantocitos

LEVE
6-15
(+)

NORMAL

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ANISOCITOSIS
MODERADA
16-30
(++)

POIQUILOCITOSIS
NORMAL
LEVE
(+)
0
1-5
0
1-5
0
1-5
0
1-5
0-1
2-5
0-1
2-5
0-1
2-5
0-4
2-5

0-5

Cdigo:

SEVERA
>30
(+++)

MODERADA
(++)
6-15
6-15
6-15
6-15
6-15
6-15
6-15
6-15

ANISOCROMACIA
LEVE
MODERADA
6-15
15-30
(+)
(++)

SEVERA
(+++)
>15
>15
>15
>15
>15
>15
>15
>15

SEVERA
>30
(+++)

INCLUSIONES ERITROCITARIAS
NORMAL
LEVE
MODERADA
(+)
(++)
Punteado Basfilo 0
1-2
3-5
Cuerpos
de 0
1-2
3-5
Howell Joly
Anillos de Cabot
0
1-2
3-5
Parsitos
0
1-2
3-5
ANORMALIDAD

II.

SEVERA
(+++)
>6
>6
>6
>6

VALORACION DE PLAQUETAS:
a. Evaluar la granularidad:
Hipogranularidad: Plaquetas con numerosos grnulos citoplasmticos
pequeos de color rojo a morado o poseer muy pocos o nulos grnulos
normales. Esta anormalidad ocurre en sndromes mieloproliferativos,
mielodisplsicos y en desordenes plaquetarios de hipogranulacin.
Normogranular: Presentan numerosos grnulos citoplasmticos.
b. Plaquetas Gigantes: se observan en pacientes con sangrados o estrs, sndrome
mieloproliferativo, mielodisplsicos.

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c. Satelitismo plaquetario: las plaquetas normales se encuentran adheridas a la

superficie de neutrfilos o monocitos y forman rosetas. Puede ser producido por el
EDTA, para descartar tomar muestra con heparina. Sin embargo este fenmeno
puede causar trombocitopenia en analizadores automatizados.
III.

RECUENTO DE PLAQUETAS EN LMINA

Fundamento:
Se basa en el conteo de plaquetas en 10 campos utilizando un extendido de sangre
perifrica coloreado con Wright. Se halla el promedio de plaquetas por campo y se
multiplica por 21.000. se debe escoger el campo donde los glbulos rojos apenas se
toquen. La lmina debe ser realizada con sangre sin anticoagulante para poder evaluar la
agregabilidad plaquetaria.
Si el recuento es muy bajo se recomienda contar mnimo 20 campos.
No. Plaquetas/mm3: Plaquetas contadas en 10 campos X 21.000
10
VALOR NORMAL: 150.000-4000.000/mm3

IV.

FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD DEL EXTENDIDO DE SANGRE

PERIFRICA Y ASPIRADOS DE MEDULA SEA

Basofilia: Caracterizada por una coloracin excesivamente azul.

Causas:
Frotis de sangre perifrica muy gruesos debido a la utilizacin de una gota muy
grande para hacer el extendido
Extendidos de aspirado de medula sea o improntas muy gruesos debido al
exceso de sangre perifrica o a una inadecuada distribucin de las clulas por
tcnica inadecuada en la realizacin del extendido. Presencia de material proteico
en pacientes con Mieloma Mltiple.
Lavado insuficiente lo cual deja colorante remanente en exceso
Tiempo de coloracin excesivo
Colorante muy alcalino: cuando la mezcal de colorante y agua destilada posee un
ph. mayor de 7
Acidofilia: Caracterizada por una coloracin naranja brillante a rojo
Causas:

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Acidez del colorante o buffer (agua destilada): Cuando la mezcla tiene un Ph

inferior a 6.5 o presencia de vapores cidos en la zona de trabajo.
Lavado excesivo: Cuando la lmina no se escurre bien, no se seca con
compresa o papel filtro por la parte posterior del extendido y no se deja parada
verticalmente para retirar el exceso de agua
Tiempo de coloracin insuficiente, menor al tiempo estandarizado para el
colorante en uso.

Precipitado:
Causas:
Filtracin inadecuada del colorante antes de su uso
Lavado inadecuado durante la coloracin.
Utilizacin de insuficiente cantidad de colorante, conllevando a evaporacin del
mismo sobre la lamina.
2. TIPOS DE COLORACIN
2.1.

COLORACION DE WRIGHT MODIFICADO

REACTIVOS
Metanol puro, grado de laboratorio (Alcohol metlico). Ficha de seguridad
Glicerina
Colorante de Wright (eosina azul de metileno) en polvo
Colorante de Giemsa en polvo o liquido

CANTIDAD
1000 ml
30 ml
3 grs.
0.3 grs.

PROCEDIMIENTO
Medir los reactivos siguiendo el instructivo de uso de balanza electrnica ubicada en el
rea de fraccionamiento del banco de sangre y utilizando papel Craft para colocar los
reactivos en caso de ser en polvo o probeta pequea en el caso que el Giemsa sea
liquido.
Alistar el mortero y su base, probeta
Colocar el colorante de Wright y Giemsa (polvo) medido en el recipiente de porcelana,
adicionar unas 10 gotas de glicerina y macerar
Agregar el metanol lentamente para que el colorante se vaya disolviendo
3. RECUENTO DE RETICULOCITOS

FUNDAMENTO: Los reticulocitos son hemates que contienen restos de ARN

(Ribosomas), que es un compuesto que precipita en presencia de ciertos colorantes
vitales como el azul de cresilo brillante y da lugar a imgenes filamentosas fcilmente
visibles al microscopio de luz.

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RECOMENDACIONES: Realizar el recuento en sangre total recolectada con EDTA y

dentro de las primeras dos horas post extraccin para evitar falsos negativos por
maduracin celular.
PREPARACION DE REACTIVOS
REACTIVO A
REACTIVO A MEDIR
PROCEDIMIENTO
PREPARAR
0.5 grs. de azul de cresilo Mezclar y disolver el azul de cresilo en
el agua destilada.
500 ml agua destilada
Azul de cresilo
brillante
Almacenar en frasco mbar y forrado
con papel aluminio para proteger de la
luz
PROCEDIMIENTO
Mezclar la muestra del paciente por inversin , con movimientos suaves
Realizar un microhematocrito por duplicado
Agregar 5 gotas de azul de cresilo brillante y 5 gotas de sangre total, mezclar e
incubar durante 15 minutos a 37oC.
Realizar una extendido con la mezcla en una lmina utilizando una gota (50
lambdas) y dejar secar al aire libre.
LECTURA
En el microscopio de luz y utilizando el objetivo de 10X buscar un rea donde los
glbulos rojos apenas se toquen (cuerpo)
Con el objetivo de 100X observar 2000 glbulos rojos y contar los reticulocitos que se
encuentren all
CALCULOS:
Porcentaje de Reticulocitos: ____Nmero de reticulocitos contados_____ X 100
Nmero de glbulos rojos observados (2000)

Porcentaje de Reticulocitos corregido: %Reticulocitos Observados X hematocrito Paciente

Hematocrito Normal

IPR:

Reticulocitos Observados
X
Periodo de maduracin en das (2)

Hematocrito Paciente
Hematocrito Normal

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IPR: INDICE DE PRODUCCION DE RETICULOCITOS

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VALORES DE REFERENCIA:
Poblacin

Reticulocitos
Valor relativo
(%)

Reticulocitos
Valor Absoluto
(X109/L)

Adultos y nios

0.2-2

24-84

Recin Nacidos

2-6

110-330

IPR>3

IPR<3

Indica
aumento de
actividad
eritropoytica
medular
(Anemia
regenerativa)

Indica escasa
actividad
eritropoytica

BIBLIOGRAFA
1. ICSH guidelines for the standardization of bone marrow specimens and reports; H.
L e e, W. N. E r b e r, A. P o r w i t, M. To m o n a g a, C. P e t e r s o n.;
Blackwell Publishing Ltd, International Journal Laboratory Hematology. 2008, 30,
34936
2. Annimo. Normal reference Laboratory values. New England Journal Med
1986;314 (1): 39-49
3. ICSH, IFCC, WASP. Recommendations for use of SI units in clinical laboratory
measurements. Br Journal Hematology 1972; 23: 287-288.
4. LEHMANN HP. Metrical of clinical laboratory data in SI units. American Journal
Clinical Pathology 1976; 65: 2-18.
5. BALCELLS A. La clnica y el laboratorio. Barcelona, Masson, S.A. 16. A ed.

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