1.

Introduo Imunologia

O que a Imunologia?

Conhecimento da imunidade (isento de)

Desde a antiguidade que se reconhece que aps exposio a uma dada doena
algumas pessoas morrem, enquanto que outras sobrevivem. Estas, quando expostas
uma segunda vez mesma doena, no adoecem.

O que o sistema imunitrio?

Sistema de defesa do corpo contra a invaso por substncias que no so do prprio

corpo (organismos patognicos). Distino do que ou no do organismo. Por
exemplo: agentes infecciosos ou clulas tumorais.

Varola (smallpocks)

Uma das primeiras doenas identificadas clinicamente. Houve numerosas epidemias

ao longo dos sculos. Levou s primeiras experincias em Imunologia.
Variolao: exposio de indivduos saudveis a pstulas de pacientes com doena
(varola) moderada.
Edward Jenner (1798): Publicao sobre a preveno da varola.
Hiptese: a pr-exposio doena cowpox (varola da vacas) protege contra a
infeco pelo vrus da varola - Variolao com pstulas de vacas contaminadas com
cowpox e posterior inoculao com o vrus da varola vivo No h contraco da
doena!

Origem da doena

Robert Koch (1884): Teoria da origem de doenas por germes - Microorganismos

patognicos so responsveis por doenas especficas.

Clera (galinhas)

Louis Pasteur (1878): Isolou o microrganismo que causa a clera nas galinhas
Pasteurella multocida.
1. Inoculou galinhas com as bactrias (com virulncia atenuada tinham ficado na
bancada) Os animais sobreviveram (no desenvolveram doena)
2. Inoculou com uma dose letal toxina da clera (fresca e virulenta) nas mesmas
galinhas Os animais sobreviveram
1

Concluso: introduo de patogene menos virulento provoca uma resposta no

organismo do hospedeiro. O organismo adquire memria, deixa de ser afectado pelo
patogene vacinao (vaccinus que significa vaca em homenagem a Eduard Jennner)

O que que permite aos animais ficarem isentos de doena?

O que que lhes confere imunidade?

Componente que estavam nos

fluidos que contribuam para a
imunidade.
Infectou-se
um
ratinho com uma bactria
atenuada.
Passado
umas
semanas, retiraram um bocado
de sangue do ratinho e retiraram
o soro das clulas (sobrenadante)
e inocularam um outro ratinho
com esse mesmo soro. Quando
estimularam este ltimo ratinho
com a bactria virulenta, este
no contraiu a doena. Concluso: Algo que est no soro protegeu o ratinho (mais
escuro) contra os patognios virulentos (anticorpos).

Observou
que
quando introduzia
um espinho de rosa
numa
larva
de
estrela do mar, uma
srie de clulas
foram para aquele
local para tentar
combater
aquela
leso (designou-as
de fagcitos).

Pensavam que a clula no

servisse para nada pois tinha
um ncleo enorme, uma
cromatina
altamente
condensada (no est a
transcrever, nem a replicar).
Para alm disso, no tinha
mitocondrios nem RE. Mas
para que servia esta clula?
Esta
clula
pode
metamorfoziar-se e tornar-se
numa clula efectora potente
para
combater
os
microorganismos.

Inata Barreira, clulas pouco especifica

Adaptativa Linfcitos (quer B quer T). Demora a responder e precisa de ser activada pela imunidade
inata. Mais potente, mais especifica e deixa memria!!!

Imunodeficiencia Sistema imunitrio (inato ou adaptativo) deficiente.

Hipersensibilidade Resposta exagerada a um agente potegnico.
Doenas auto-imunes o sistema imunitrio ataca o prprio organismo. O sistema
produz anticorpos que reconhece componentes do nosso organismo (DNA, RNA,
protenas) e destri-os. Ex: Diabtes tipo I e lupus

2. Introduo s respostas imunes

Resposta: Inata ou Adaptativa

Imunidade Inata

(Captulo 3, 35)
(p.36)

Diversos tipos de patognios:

Estruturas comuns reconhecidas pelos receptores da imunidade inata = Padres
moleculares comuns aos vrios tipos (ex. peptidoglicano, lipopolissacaridos, etc.)
Existem receptores (pouco especificos) que reconhecem estes padres comuns
(codificados no genoma, estas protenas no sofrem alteraes ao longo do
contacto com o patognio) e que so semelhantes entre si
Baixa especificidade: para estruturas partilhadas por grupos de microorganismos
Diversidade limitada: todas as clulas de uma classe so idnticas
O organismo no adquire memria inata, a resposta sempre semelhante (no
potenciada) no h amplificao nem aprendizagem
Reconhecimento dos componentes do prprio organismo (como em resposta
adaptativa)
Componentes da Imunidade Inata:
Barreiras fsicas e qumicas (contacto com o exterior): Pele; epitlios das mucosas;
substncias microbiocidas
Protenas do sangue (sistema do complemento)
Componentes celulares:
Clulas capazes de fagocitar (fagcitos): no sangue (neutrfilos e moncitos); nos
tecidos (macrfagos); clulas dendrticas (DC) e clulas NK (natural-killer)
Quando os patgeneos so muito grandes, algumas destas clulas libertam granulos o
que leva destruio directa desses patgeneos.
4

Imunidade Adaptativa

(p.56)

Caractersticas gerais da imunidade adaptativa:

Especificidade, Memria (num segundo ataque a resposta ser mais rpida e
poderosa), Diversidade (muitos receptores diferentes), Tolerncia, Diviso de trabalho

Especificidade (1 linfcito = 1 receptor)

Existem estruturas nicas reconhecidas pelos receptores da imunidade adaptativa:

A especificidade mediada por receptores especficos para antignio expressos pelos
linfcitos, isto , cada linfcito codifica um nico tipo de receptor de antignio que
diferente dos outros receptores para antignio expressos pelos outros linfcitos.
As clulas estaminais hematopoiticas diferenciam-se em linfcitos (B, T, NK). Estes,
por seu lado, amadurecem (j tm um receptor especfico, mas ainda no entraram
em contacto com o antignio) na medula ssea e so libertados na corrente sangunea.
Na periferia, podem ou no encontrar um microrganismo. Se o antignio tiver uma
estrutura complementar ao receptor do linfcito, as clulas so activadas e proliferam
(linhagem igual a si prpria). Depois sofrem diferenciao (seleco clonal): tornam-se
clulas efectoras: plasmcitos (produtoras de anticorpos) ou clulas de memria (de
longa durao).

Memria

Os clones de linfcitos com receptores especficos para antignio quando reconhecem

o antignio proliferam, isto , sofrem uma expanso clonal seleco clonal de
linfcitos. So clulas de longa durao e quando encontram uma segunda vez tal
antignio, a resposta muito mais rpida e poderosa, pois existem em grande

quantidade.
Diversidade
Os genes que codificam os receptores para antignio dos linfcitos so obtidos pela
juno de unidades gnicas mais pequenas por um processo de recombinao
somtica (dos genes que codificam para as regies variaveis dos anticorpos e dos TCRs)
durante o desenvolvimento das clulas B e T. Estas so as nicas clulas somticas do
organismo que sofrem recombinao ao nvel do DNA
Cada linfcito tem uma recombinao nica da haver to grande diversidade!

Tolerncia

Desenvolvimento de um repertrio de linfcitos activo que no ataca o prprio

organismo = no h resposta contra componentes do organismo.
O linfcito depois de maduro, vai ter contacto com diversas molculas do organismo, e
se houver uma ligao muito forte entre os dois, este linfcito vai sofrer apoptose.
(mais de 98% dos linfcitos morrem neste processo).
Experincia de Medawar: Retirou clulas do bao (tem mts linfcitos) de um ratinho e
introduziu-as num ratinho recem-nascido de uma estirpe diferente e como as suas
clulas ainda estavam na fase de aprendizagem (tolerncia), ele nunca teve problemas
em aceitar um transplante. Contudo, se o transplante for para um ratinho em que no
houve a deposio das clulas do bao, ele vai ser rejeitado.

Diviso de trabalho entre linfcitos

Os linfcitos B reconhecem qqr tipo de microorganismo (inteiro, degradado....).
Os receptores dos linfcitos B (imunoglobulinas) reconhecem sempre o
microorganismo

Imunidade humoral
Linfcitos B combatem microrganismos extracelulares (produo de anticorpos)
Imunidade celular (Linfcitos T) s reconhecem pptidos ligados a moleculas MHC
Linfcito T citotxico/citoltico combatem microrganismos que crescem
intracelularemente (replicao no hospedeiro e destruio das clulas, ex: vrus)
ou microrganismos que foram fagocitados.
Linfcito T auxiliar por intermdio de pequenas mensagens celulares (citocinas,
protenas) auxiliam na destruio de micorganismos fagocitados (por clulas
fagocticas)

Imunidade Inata vs. Imunidade Adaptativa

Componentes da imunidade exclusivos da resposta adaptativa:

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Antignios e imunognos
Reconhecimento especfico de antignios: clula B
Reconhecimento especfico de antignios: clula T e complexo
Processamento de antignio
Antignios de histocompatilidade principal
Co-receptores e molculas co-estimuladoras
Funes efectoras da clula B
Funes efectoras da clula T
Respostas imunes primrias e secundrias

1. Antignios e imunognos

Antignio: Qualquer substncia que possa ser reconhecida por receptores

especficos de linfcitos B e T (a activao no obrigatria, nem todos
desencadeiam uma resposta imunitria!). Macromolcula na superfcie do
patognio.
Imunognio: tipo de antignio capaz de desencadear uma resposta imune
adaptativa (activao das clulas B e T).

2.

Reconhecimento especfico de antignios: clula B

(p.93; Captulo 7, 113)

Epitopos dos antignios: ou determinantes antignicos. Constituem as partes

do antignio que entram em contacto com os receptores.

Clulas B: reconhecem epitopos internos ou externos do patognio. Os

receptores podem possuir qualquer tipo de estrutura qumica (BCR).
3. Reconhecimento especfico de antignios: clula T e complexo
(Captulo 8, 127)

Clulas T: reconhecimento de uma estrutura mltipla clulas T s

reconhecem pptidos ligados a MHC = complexo maior de histocompatibilidade

(classe I ou II)

MHC Classe I: so 6 diferentes (3 de cada progenitor). So clulas mais

polimrficas. Expressas em todas as clulas nucleadas.
9

MHC Classe II: so mais do que 6. Constituem clulas apresentadoras de

antignio APC (macrfagos, clulas B e clulas dendrticas). Expressas em
todas as APC (DCs, clulas B e macrofagos)

As clulas nucleadas expressam 6 molculas MHC I

As APCs expressam 6 molculas MHC II e 6 molculas MHC I
Cada pessoa exprime molculas MHC diferentes

4. Processamento de antignio ?
5. Antignios de histocompatilidade principal

Linfcitos T: so mais restritos na ligao ao antignio e podem reconhecer

antignios de diferentes provenincias.
Clula Tc (citotxica): reconhecimento de protenas do interior da clula (ex.
vrus)
Clula Th (helper = auxiliar): antignios fagocitados em endossomas
degradao em lisossomas fuso com MHC classe II expostos

10

6. Co-receptores e molculas co-estimuladoras

Estmulos para activao das clulas = Co-receptores (fortalece a adeso entre

linfcitos T e APC/ clulas nucleadas e esto envolvidas na transmisso de

sinais) + co-estimuladoras (entra a sinergia com o 1 sinal e desencadeia a
resposta adaptativa)
Activao completa da clula Tc CD8+ provoca apoptose celular
Th CD4+: no destroem as clulas mas enviam sinais para outras clulas.
Tambm requerem co-receptores e co-estimuladores sntese de mensagens
celulares (citocinas) informao para fagocitar e destruir as clulas

11

7. Funes efectoras da clula B

Imunoglobulinas g so bifuncionais:
Ligao ao antignio
Eliminao do antignio

Vias de eliminao do antignio:

Neutralizao do antignio
Fagocitose
Destruio por clulas, enzimas ou
complemento

12

8. Funes efectoras da clula T

9. Respostas imunes primrias e secundrias

Resposta secundria: maior n anticorpos!

TP1. Interaces anticorpo-antignio

Anticorpo
13

Anticorpo = Ab = imunoglobulina = Ig
Molcula proteica produzida pelos linfcitos B
Apenas um tipo de anticorpo produzido por clula B
Liga-se a um antignio (Ag) especfico
Especfico para um antignio (em geral)
Reagentes muito especficos
2 formas: produo como protena de membrana ou protenas segregadas para
o espao extracelular

Estrutura dum anticorpo = Imunoglobulina

(Cap. 6, 97)

Ligao entre cadeias leves e pesadas por pontes perssulfureto (S-S) e tambm
intracadeia
Regio varivel (V) amina (+)
Regio constante (C) carboxilo (-)
Lao = Domnio Ig
(2 res. Cys ligados por S-S)
Cadeia leve: arranjo em folha
pragueada
Domnio constante (frame regions FR)
Domnio varivel (CDR)

3 regies determinantes de
complementaridade
=
regies
14

hipervariveis (CDR complementary determining region) de ligao ao

antignio

Regies C da cadeia pesada determinam o isotipo (= classe de imunoglobulina)

Existem 5 isotipos de cadeia pesada: , , , ,
E as correspondentes 5 classes de Ig: IgM, IgG, IgA, IgD, IgE
IgM (so muito grandes pentmeros - no passam para os tecidos - sangue); IgG
(mais abundantes no sangue); IgA (dmeros abundantes nas mucosas); IgD; IgE
IgG, D, A: dobradias, 3 regies constantes
IgE, M: 4 regies constantes

Os domnios CH so diferentes para cada uma das classes. O isotipo determina

a funo do anticorpo
Fragmentos de anticorpo produzidos por digesto enzimtica parcial: Papana e
Pepsina

Natureza dos imunognios da clula B

Antignio (contra o qual so gerados os anticorpos, pode ligar-se aos

receptores B ou T BCR, TCR) Imunognio (antignio que desencadeia
resposta imune)
Antignio:
Qualquer substncia reconhecida como estranha pelo sistema imunitrio
Pode ser natural ou sinttica
Pode ser proveniente do hospedeiro ou do meio ambiente
Pequenas molculas i.e.. 2,4-dinitrofenol, aminocidos, nucletidos, oses
Grandes molculas: protenas, polisidos, lpidos, cidos nucleicos

15

Determinantes antignios podem ser conformacionais ou lineares

Determinante conformacional: deixa de reconhecer quando a protena est
desnaturada
Determinante linear: pertence a uma sequncia linear do antignio, mesmo
desnaturado reconhecido

Efeito da conformao nos determinantes antignicos:

Um bom antignio no necessariamente um bom imunognio!

(ligao facilitada mas no h activao)
16

Bom imunognio: MM, n subunidades; polares (mais facilmente

desnaturadas); diferente do prprio
Factores que afectam imunogenicidade:

Classes de imunognios: Td e Ti
7.4. Resposta Humoral dependente de linfcitos T

(p.115)

Resposta humoral: expresso de clulas B rpida e dependente da interaco entre

linfocitos B e linfocitos Th (CD4+).
Linfcitos B (imunidade inata ou natural resposta imediata)
Consideram-se dois grupos principais de antignios:
- Antignios independentes dos linfcitos T ou Ti (T-cell Independent / ThymusIndependent)
- Antignios dependentes dos linfcitos T ou Td (T-cell Dependent / ThymusDependent)

17

Antignios Ti : 2 categorias
Ti-1 : activao policlonal dos linfcitos B (mitognios = subs. que induz diviso celular
mitose; em imunologia: subs. que estimulam inespecificamente a proliferao de
muitos clones distintos) activam clones distintos de linfocitos B produo de
anticorpos policlonais (diferentes especificidades)
Ex. compostos das paredes bacterianas (LPS: lipopolissacarideo), peptidoglicanos e c.
Lipoteicoico
Ti-2 : activam linfocitos B promovem agregao de imunoglobulinas da membrana
(mIg) de diferentes BCR (B-cell receptor) induz transduo intracelular de sinal
Estruturas altamente repetitivas. Ex. cpsulas bacterianas polissacardicas, epitopos
antignicos repetitivos existentes em partculas virais.

Caractersticas dos imunognios Td:

Estranhos ao organismo
Complexidade molecular
Dose
Vias de entrada ou administrao
Adjuvantes

Cooperao clula B clula T na resposta imune humoral

Activao da clula B por antignios Td
7.5. Respostas Humorais dependente de linfcitos T

(p.116-7)

Enquanto as respostas das clulas B mediadas por antignios Ti (mol. noproteicas) eliminam rapidamente muitos agentes infecciosos, as respostas das clulas
B reguladas pelos linfcitos Th (T CD4+) produzem uma imunidade humoral com
maturao da afinidade dos anticorpos contra a maioria dos antignios proteicos.
Sinal 1: ligao do antignio Td provoca agregao de duas ou mais imunoglobulinas
de membrana (mIg) constitutivas do BCR
Sinal 2: interaco entre molculas CD40, existentes superfcie dos linfcitos B, e o
seu ligando CD40L, expresso superfcie do linfcito Th activado.
ocorre nos rgos linfides secundrios

18

As respostas Td induzem a diferenciao das clulas B em plasmcitos de

tempo de vida curto e o desenvolvimento de centros germinativos (onde se formam
linfcitos B com tempo de vida longo e clulas B de memria).

A clula B reconhece o antignio complexo

D-se a endocitose mediada por receptores
O antignio degradado e a parte proteica expressa na membrana juntamente
com um MHC classe II (vai funcionar com o ligando do TCR, clula Th)
Enviado 2 sinal para dentro da clula B (citocinas libertadas pela clula T)
Reconhecimento das citocinas na membrana pelas clulas B (3 sinal)
Clula B totalmente activada Proliferao

Nota: Se o antignio for muito pequeno (ex. fenol) estes 2 passos no ocorrem pelo
que a clula B no activada: o fenol no um composto proteico, no pode ser
degradado em pequenos pptidos, no podendo assim ligar-se MHC (2) no h
informao de citocinas (3) clula B no prolifera e no se diferencia!

Para haver este tipo de resposta o composto estranho tem de ter um componente
proteico (da que o fenol seja um antignio e no um imunognio!). O fenol um
hapteno com um transportador (proteico) torna-se um imunognio (= complexo
hapteno-transportador):

(antisoro policlonal: 3 tipos de anticorpos resultantes dos diferente epitopos)

19

20

A interaco antignio-anticorpo
Tipos de antignios
Imunognios: molculas que tm simultaneamente a capacidade de se ligarem a
anticorpos e de desencadear uma resposta imune
Haptenos: molculas que, embora tenham a capacidade de se ligar a um anticorpo,
no podem induzir uma reaco imune por si (i.e. no so imunognicas). Ex. : 2,4
DNP.
Epitopo: poro de um imunognio que se liga ao anticorpo. Tambm pode ser
designada por determinante antignico.

As ligaes antignio-anticorpo
Ligaes

por ponte de hidrognio:

resultam da formao de pontes de
hidrognio entre tomos adequados
Foras electrostticas: so devidas
atraco entre grupos com cargas opostas
Ligaes hidrfobas: so devidas
associao entre grupos hidrfobos, no
polares que levam minimizao do
contacto com as molculas de gua
(podem contribuir at metade da fora
total da ligao antignio-anticorpo)
Ligaes de Van der Waals: so geradas
pela interaco entre nuvens electrnicas
(dipolos oscilantes)
A afinidade e a avidez da ligao

21

K= cte associao entre 1 s local de ligao ao antignio

1 anticorpo tem 2 locais de ligao, fala-se em avidez da interaco (em vez de
afinidade!). Avidez a soma da afinidade dos dois locais de ligao ao antignio.

Reactividade cruzada dos anticorpos

Epitopos comuns ou semelhantes em vrios antignios

Preparao de antisoros policlonais e de anticorpos monoclonais

Antisoros Policlonais
Introduo de antignio no animal; soro com vrios anticorpos que
reconhecem o mesmo antignio
a) Purificao:
Remoo de pequenas pores dos tecidos do rato
Congelao + cortes finos (lmina de microscpio)
Passagem com soluo contendo anticorpo
Lavagem visualizao (MOC ou microscopia de fluorescncia)

22

b) Melhoramento
c) Adjuvante: composto que aumenta a
imunogenicidade do antignio
Dois componentes:
- Agentes que promovem a insolubilizao do
antignio
- Compostos microbianos que estimulam
produo de coestimuladores
d) Escolha do Animal
Quantidade de antignio disponvel
Quantidade de anticorpos desejada
Relao filogentica
Necessidade de anticorpos monoclonais !
Custos de manuteno
Facilidade de manuseamento
Cuidados com a manipulao dos animais
tica

23

Antisoros Monoclonais
Anticorpos derivados de apenas uma linha clonal reconhecem apenas 1 eptopo de um
antignio.
Utilidade dos anticorpos monoclonais devida a:
Especificidade de ligao
Produo ilimitada
Homogeneidade

Produo de anticorpos Monoclonais:

Remoo do bao de murganho (linfcitos)
Fuso com linfcitos B imortalizados de clulas malignas de mieloma (=doena:
clula deixa de ter capacidade apopttica expanso neoplasia)
Formao de hibridomas (polietilenoglicol)
Separao das clulas: 1 s tipo (soro monoclonal)
(p.128)

Hibridoma: linhagem celular produzida atravs da fuso de uma clula tumoral

mielometosa com um linfcito B normal produtor de imunoglobulinas ou plasmcito.
O resultado uma clula hbrida, ou hibridoma, com a capacidade de se dividir
indefinidamente (conferida pela clula-me transformada) e de segregar anticorpos
(conferida pela clula-me normal).
Os hibridomas so usados na obteno de anticorpos monoclonais.
24

HGPRT: hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase

TK: thymidine kinase

Hibridomas em cultura bloqueando a via de novo s funciona a via de salvao:

Seleco HAT hipoxantina-aminopterina-timidina (meio)
Apenas sobrevivem as clulas que se fundiram porque as clulas de mieloma no tm
HGPRT (as restantes clulas no fundidas morrem passados 2 dias).
As clulas que sobrevivem produzem anticorpos + polietilenoglicol. Com separar as
vrias clulas? Fazer diluies sucessivas!
Na fraco mais diluda, conferir se reage com o anticorpo. Repetio das diluies ate
se obter clulas nicas.

25

Produo de anticorpos monoclonais:

26

Tcnica de produo: Escolha e imunizao do animal

Murganho BALB/c ()
Fcil manipulao
Manuteno barata
Boa resposta a baixa concentrao de antignio
Crescimento de hibridomas na cavidade peritoneal
Rastreio: Identificao dos hibridomas produtores do anticorpo desejado
Trs tipos de rastreio:
Captura do anticorpo
Captura do antignio
Ensaios funcionais: bloqueio de uma reaco na presena do anticorpo

Propriedades do anticorpo: forma do anticorpo

27

3. Clulas do Sistema Imunitrio

Modelo de Hematopoiese

(Captulo 2, 19)
(p.23)

Hematopoiese: formao de clulas sanguneas

Percursor
comum:
clula
estaminal hematopoitica (HSC)
possui capacidade dupla de se
auto renovar e diferenciar,
dando origem a outras clulas
origina 2 tipos de clulas
estaminais mais especializadas:

Progenitor linfide CLP

(que origina linfcitos T, B, NK,
NKT e CDlinfcitos)

Progenitor mielide CMP

(que origina outros tipos de
leuccitos granulcitos e moncitos, eritroblastos - que originam eritrcitos e
glbulos vermelhos, e megacaricitos - que do origem s plaquetas

28

Localizao da
hematopoiese
A hematopoiese d-se na
medula ssea depois do
nascimento; antes disso
ocorre no fgado, bao e
estruturas embrionrias.

1as clulas hematopoiticas: eritrcitos e clulas dos vasos

Tipos de clulas hematopoiticas

Clulas da linhagem Mielide

NEUTRFILOS

Mais abundante (70%)

1 s ncleo altamente segmentado (geralmente 5 lbulos) com cromatina
muito condensada
Citoplasma grande com vrios tipos de grnulos
Poucos mitocndrios: pouca capacidade metablica (vai viver pouco tempo) (s
usa o que j possui grnulos com diferentes contedos [1,2 e 3], incluindo
enzimas)
Glicognio disperso
Na membrana plasmtica expressam receptores para Ig e para protenas do
complemento
Vida mdia 1-2 dias
50 x 109 num homem adulto. Como so muitos, facilmente chegam ao local da
leso e conseguem facilmente destruir os microrganismos, p.e, por fagocitose.
29

Grnulos primrios e secundrios

Neutrfilos produzem EROS e ERNs destrutivos que actuam como microbicidas

(destruio de microrganismos!)
Nas membranas: formao de EROS destruio de macromolculas
NADPH oxidase O2SOD H2O2
MOP OClNOS NO (arginina)

Produo de xidos de azoto bactericidas nos

neutrfilos e macrfagos:

30

Fagocitose
Clula com caractersticas fagocticas =
capaz
de
internalizar
grandes
partculas em vesculas: fagossoma
funde-se com lisossoma digesto
(enzimas hidrolticos)

EOSINFILOS

1 s ncleo bilobado (geralmente em forma de luneta)

Citoplasma com grnulos especficos grandes ovides, com um cristalide
alongado. O cristalide a MBP (major basic protein).
Os grnulos especficos contm tambm a protena catinica dos eosinfilos
(ECP), a neurotoxina derivada dos eosinfilos (EDN), peroxidase e outras.
Grnulos: contm protenas especficas com elevado potencial destrutivo
(destruio de grandes parasitas)
A MBP e a ECP podem ser segregadas, formando poros nos parasitas.
Elevada capacidade destrutiva
Destruidores de destruir parasitas grandes como lombrigas e tnias

31

BASFILOS

Difceis de encontrar (0,1%)

Ncleo em forma de S, pouco visvel devido ao elevado n grnulos
Poucos mitocndrios
Aparelho de Golgi pequeno
Poucos depsitos de glicognio
Grandes grnulos especficos que contm vrias protenas envolvidas em
reaces: heparina (anticoagulante), histamina (vasodilatador), factor
quimiotctil para eosinfilos, factor quimiotctil para neutrfilos (quando os
granulos so libertados para o exterior, so recrutados do sangue os neutrofilos
e os eosinfilos) e peroxidase.
Receptores de alta afinidade para as IgE na membrana celular. (As IgE
reconhecem o antignio e os basfilos que esto ligados a essas IgE
desgranulam)
Pergunta: O IgE que se liga ao antignio o mm que liga aos basfilos,
ou o IgE vai desencadear uma resposta que vai formar mais IgE e essas
sim ligam-se aos basfilos dando-se a posterior desgranulao?
Produzem leucotrienos C4, D4 e E4 (vasodilatadores mais potentes que a
histamina)
Demasiados basfilos podem ser prejudiciais: heparina e histaminas envolvidas
em reaces alrgicas imediatas (libertao do contedo dos grnulos)
Vasodilatao e contraco da musculatura lisa dos brnquios

32

MONCITOS

Ncleo grande acntrico e em forma rim com cromatina no muito condensada

e normalmente com 2 nuclolos.
Citoplasma com grnulos (bactericida) de glicognio e azurfilos (lisossomas)
Aparelho de Golgi (produo de proteina) perto da indentao do ncleo
Alguns mitocndrios: metabolicamente activa
Circulam no sangue
Produo de protenas
Quando penetra nos tecidos diferencia-se em macrfago = clula fagoctica
(diferente consoante o tecido em causa)

MACRFAGOS
Designaes de macrfagos residentes:

Macrfagos alveolares no pulmo

Histiocitos nos tecidos conjuntivos
Clulas de Kupfer no fgado
Clulas microgliais no crebro
Osteoclastos no osso
Clulas mesengiais no rim
clulas fagocticas
expressam MHC classe II

33

Clulas da linhagem Linfide

(Captulo 2, 19)

LINFCITOS

Clula mais pequena

Praticamente s se v o
ncleo: denso com cromatina
densa (no h transcrio
aspecto imutvel) e localizado

acentricamente
Citoplasma com poucos grnulos
Poucos mitocndrios
Aparelho de Golgi pequeno
Pouco retculo endoplasmtico rugoso (RER)
Poucos lisossomas

Os Linfcitos so:

20 40 % leuccitos
99 % clulas da linfa
~ 1012 linfcitos no homem adulto
55% dos Ly do sangue so clulas T CD4+
20% dos Ly do sangue so clulas T CD8+
10% dos Ly do sangue so clulas B
15% dos Ly do sangue so clulas NK e NKT

LINFCITOS T , LINFCITOS B

(Captulo 7 e 8)

A clula s se torna activa (deixa de

ser virgem) quando reconhece o antignio:
aumenta de tamanho (passa a blasto ou
linfoblasto) e torna-se uma clula efectora
T (ncleo menos denso, tem um citoplasma
abundante, RE abundante pk est a
expressar citocinas [mensagens] T CD4+)
Clula Efectora B: plasmcito (ncleo
menos denso, tem um citoplasma
abundante, RE abundante pk est a
expressar Ig)
CLULAS NK , CLULAS NKT

(Captulo 9 e 10)

34

Ncleo muito condensado

Citoplasma mais extenso, com grnulos (podem ser detectados com enzimas
hidrolticos ou proteolticos) levam apoptose das clulas com que entram
em contacto e reconhecem o Ag especifico.

CLULAS DENDRTICAS

Espalhadas por todo o organismo

Fentipo imaturo (capacidade de fagocitar microrganismos mas no tm de
apresentar organismos a clulas T, ou seja, no tm capacidade de
desencadear uma resposta imune adaptativa).
Capacidade fagoctica (internalizao de partculas)
Sofrem diferenciao para se tornar boas APCs
Depois de internalizar o antignio (fagocitose), a clula migra para o ganglio
linftico mais prximo (e vai perdendo a sua capacidade fagoctica mas
expressa mais molculas MHC II e co-estimuladores fnotipo maduro)
Existem vrias linhagens de clulas dendriticas: distinguem-se pelo seu fentipo
= protenas expressas na membrana
A identificao pode ser feita usando anticorpos que reconhecem diferentes
antignios ou epitopos (protenas)

APCs profissionais pk desencadeiam

a resposta primria, ou seja, levam
activao de linfcitos T virgens

Linhagem das clulas dendrticas (DC)

DCs na epiderme
(esq.) e glnglio
linftico (dir.)

(P. 21)

35

Compartimentalizao das clulas hematopoiticas

4. rgos e tecidos do Sistema Imunitrio

Extravaso de leuccitos
A interaco entre antignio e anticorpo/receptor difcil. Como que transitam os
leuccitos e os antignios para promover estes encontros?
rgos e tecidos do Sistema Imunitrio:

(Captulo 2, 24)

Clulas linfides difusas nos tecidos (mucosas, pele, etc) (bronquios e os

intestinos tm clulas linfides despertas perto das regies das mucosas)
Organizadas em folculos linfides (agregados de linfcitos)

36

o Interior centro germinativo (germinam linfcitos B que esto em

proliferao e existem clulas foliculares dendriticas)
o Manto existem linfcitos T que esto a ajudar os linfcitos B
(interior)
Agregados organizados de folculos = Placas (intestino delgado)
Nos rgos, os folculos encontram-se encapsulados. Estes constituem locais
de possveis encontros.

Em Murganho:
na medula ssea
que se d a
hematopoiese.
rgos linfides
primrios
ou
generativos:
(desenvolvimento
e maturao dos
linfcitos.
Expresso inicial
37

dos receptores para Ag)

Linfcitos T: amadurecem no timo

Linfcitos B: amadurecem na medula ssea (comeam a expressar os
receptores)

rgos linfides secundrios (locais de encontro entre um lifcito maduro e o Ag):

Gnglios linfticos
Bao
Tecidos associados: MALT e SALT

Medula ssea

Encontra-se no interior (entre a trabcula) dos ossos (parte oca)

Zona altamente vascularizada: vasos = seios da medula ssea
Clula de estroma (constitutiva)
Clulas adiposas
Clulas hematopoiticas
As clulas encontram-se em diferentes fases de maturao (existe contacto
entre clulas citocinas e factores de crescimento)

Clulas na medula ssea:

Linhagem mielide 60 70 %
Linhagem eritride 20 30 %
Linhagem linfide < 10 %
Reticulares, adipcitos,
mastcitos < 10 %

38

Timo

Localizado por cima do corao (atrs do externo)

2 Lobos com mltiplos lbulos: regio cortical (mais rica em clulas, mais
escuro) + regio medular (menos clulas, mais claro)
Linfcitos T no timo denominam-se timcitos
Clulas de Nurse: so grandes e possuem muitos timcitos no meio (junto ao
crtex) Clulas epiteliais do crtex e clulas dendrticas tambm entram em
contacto com os timcitos
Amadurecimento dos timcitos: percorrem o crtex e passam para a medula
Medula: clulas epiteliais e dendrticas + macrfagos (clulas so fagocitadas
na passagem do crtex para a medula entram em apoptose, por exemplo se
reconhecem antignios do prprio organismo)
Apenas 2% das clulas conseguem passar para a medula (as restantes
morrem!)
Os timcitos qd entram no tipo no expressam CD4 nem CD8 (duplamente -).
Seguidamente passam da regio entre a medula e o cortex para o cortex, onde entram
em contacto com as cTEC (educao dos timcitos) e passam a exprimir CD4 e CD8
(duplamente +) e TCRs que comeam a reconhecer as molculas do organismo (MHC)
(seleco positiva), sendo que as que no reconhecem moleculas MHC no servem.
Posteriormente, tornam-se somente CD4+ ou CD8+ e migram para a medula, onde
entram em contacto com as mTEC e DCs e aqui so selecionadas negativamente. Os
timcitos que tiverem TCRs que reconhecem com muita afinidade molculas MHC com
pptido vo ser eliminadas por apoptose. Como? As mTEC produzem um factor de
transcrio (AIRE) que codifica proteinas que so expressas em todos os tecidos da
periferia e se os timocitos reconhecem fortemente estas moleculas acabam por
morrer, para no se ligarem fortemente a tais proteinas qd sairem do timo e
desencadear uma resposta imunitria adaptativa.

Durante a vida, o timo vai sofrendo

alteraes (aos 100 anos deixa de
existir!):

39

RGOS LINFIDES SECUNDRIOS (ONDE SE D O ENCONTRO AB/AG)

OS

AG MIGRAM NORMALMENTE NA LINFA E ENTRAM NOS GANGLIOS PELOS VASOS LINFTICOS AFERENTES,

PARACORTICAL. OS LINFCITOS ENTRA ATRAVS DE UMA ARTRIA E SAEM NA REGIO

PARACORTICAL (RICA EM CLULAS T) ONDE TMB EXISTE DCS (APC). TAMBM AQUI SAEM CLULAS B E SE
ENCONTRAREM T ACTIVADOS MIGRAM OS DOIS (REAGINDO COM O MM AG) PARA OS FOLICULOS LINFTICOS
(REGIO CORTICAL), ONDE SE D A PROLIFERAO E DIFERENCIAO DAS CLULAS B. AS CLULAS T FICAM NA
PERIFERIA A MANDAR SINAIS (CITOCINAS). AS CLULAS B PRODUZEM PLASMCITOS QUE VO MIGRAR PARA A
MED OSSEA
FICANDO NA REGIO

Gnglio Linftico

Pequeno depsito: promove o encontro entre linfcitos e antignios

Existem poucos linfcitos para os antignios (o encontro difcil!)
Neste rgo os linfcitos so competentes (expressam receptores)
Regio B ou crtex: acumulao de linfcitos B (formao de folculos)
cpsula perfurada com vrios vasos linfticos aferentes (c/ vlvulas) para onde
entra o fluido extracelular quando as vlvulas fecham, a linfa no passa
(fluido unidireccional)
Aferentes linfticos entram no crtex
Hilo: artria + veia + eferente linftico
Pela linfa entram antignios (patogneos) e algumas clulas que transportam
antignios
Os capilares/vasos linfticos desaguam na Regio T local de encontro
antignio-anticorpo: a linfa traz os antignios e o sangue transporta vrias
clulas, entre elas os linfcitos
Os linfcitos entram na regio T e migram para a regio B (onde desagua a linfa
que traz antignios)

Os Ag chegam ao bao atravs do sangue.

Bao
40

rgo grande e frgil (apesar de ter cpsula)

Extremamente irrigado (susceptvel a hemorragias devido ao elevado volume
de sangue)
O volume de sangue de um adulto humano atravessa o bao 4 vezes por dia
Local de encontro: linfcitos (com receptores) e antignios (sangue)
Linfcitos T: bainhas linfides periarterolares (PALS)
Zonas marginais: outro tipo de linfcitos B e T
No tem aferentes linfticos (no h sada)
Polpa branca e polpa vermelha
Polpa branca: arterolas esplnicas, PALS, folculos e zona marginal

Polpa vermelha > regio mt vascularizada onde passa 1 o sangue. Regio com mts
macrofagos que destroem plaquetas e eritrocitos danificados/velhos. D-se o
armazenamento o Fe e seu turnover. A separar as polpas h a zona marginal onde tmb
h mts macrofagos que destroem os corpos apoptiticos. A polpa branca constituida
por camadas linfides periartriulares (regio de linfcitos T PALS) e foliculos.
A grande diferena entre as reaces nos gnglios e do bao que os Ag no 1 entram
pela linfa e no 2 pelo sangue.

MALT = tecidos linfides associados s mucosas

No so rgos encapsulados
Placas, folculos ou linfcitos encontram-se dispersos

41

TP2. Ensaios baseados na formao do par antignio-anticorpo

Ensaios directos e indirectos com marcadores

Mtodo directo: anticorpo primrio (marcado) liga-se directamente ao

antignio.
Mtodo indirecto: anticorpo secundrio (ou outra molcula marcada)
reconhece o anticorpo primrio ligado ao antignio.

Componentes usados em ensaios indirectos:

42

Anticorpo primrio marcado com biotina. adicionado um composto que se vai ligar
biotina: vidina ou estreptavidina, permitindo 4 ligaes.

43

Quanto maior for o nmero de molculas marcadas (*), melhor ser a

visualizao/deteco! (no necessrio quando o antignio muito
abundante)
A visualizao tambm ser melhor se aumentarmos o nmero de molculas
de biotina ou por uso de protenas A/G (*) que se ligam s regies constantes
do anticorpo

Marcadores moleculares
Marcadores mais comuns:
1. Radioistopos iodo
2. Enzimas

Baratos
Fceis de purificar
Muito estveis (importante manter actividade)
No muito grandes (permitem ligaes a outras molculas)
Facilmente conjugvel (fcil acoplar ao anticorpo)
Elevada actividade cataltica
Gama de substratos que permita originar produtos solveis e insolveis
Substrato: deve ser cromognico, incolor e originar produtos sluveis e
insolveis
Produtos: corados, solveis (determinao por curva-padro Abs) ou insolveis
(depositam-se no local do antignio)

Peroxidase de rbano (HRP) EC (1.11.1.7) e Fosfatase alcalina (AP) EC 3.1.3.1

Os tecidos tm actividade endgena destes enzimas, que provoca resultados
errneos temos de usar outro que no seja produzido pelas clulas:
-D-galactosidase EC 3.2.1.23 Aspergillus niger
Produzido por um fungo. mais caro e possui menos substratos.

3. Fluorforos

Existem centenas

44

Os fluorforos individuais tm espectros e caractersticas de excitao e

emisso diferentes
Quando excitados a determinado cdo emitem radiao (cdo diferente) Mic.
Fluorescncia: deteces simultneas

Exemplos:
Anticorpo marcado com fluorescina (verde) e outro com rodamina (vermelho):
Amarelo significa que h sobreposio!
Para identificar os mitocndrios: marcao com anticorpos que reconheam protenas
da membrana mitocondrial (castanho).

4. Materiais electrodensos

Procedimentos padro
1. Bloqueio de locais inespecficos:
Anticorpos so protenas estas possuem locais de ligao inespecficos na clula:
temos de anular esta capacidade das protenas para no haver adeso s amostras dos

45

tecidos! Assim, utilizam-se protenas que tapam esses locais inespecficos onde o
anticorpo se poderia ligar. Immunoblotting: leite em p magra (rico em protenas)
Depois, adiciona-se o anticorpo.
2. Lavagens: com tampo isotnico para retirar o excesso de anticorpo (tambm se
fazem noutros passos para remover excesso de reagente
3. Curva-padro: j se pode detectar convenientemente o anticorpo secundrio
(substrato de E, fluorescncia)

Deteco de antignios por ensaios com marcadores:

1. Cromatografia de afinidade
2. Imunoprecipitao
3. Immunoblotting
1. Cromatografia de afinidade

46

Amostra com vrios antignios

Esferas da resina com anticorpos especficos
Ligao especifica: antignio-anticorpo (o restante eluido)
Necessrio depois quebrar ligao antignio-anticorpo (pH ou fora inica)
Recolha do antignio

2. Imunoprecipitao

Objectivo: purificao parcial de antignios em soluo (at 10 000 vezes)

Princpio da imunoprecipitao: Formao de complexos anticorpo-antignio
em soluo
Purificao dos complexos anticorpo-antignio com proteina A ou G ligada a
esferas de agarose ou poliacrilamida
Associao com SDS-PAGE e immunoblotting para determinar massas
moleculares, detectar modificaes ps-traduo, determinar a velocidade de
degradao de protenas, etc.
Tcnica mais rpida e simples!

47

 Mistura antignio com excesso de anticorpo

Adio protena A (ou G), liga-se s zonas constantes do anticorpo esferas de
componente inerte ligado sedimentam aps centrifugao, juntamente com a
protena A/G e antignio-anticorpo (o material restante fica no sobrenadante)
Quebra da ligao anticorpo-antignio do sedimento

Procedimento geral:
1. Preparao da soluo de antignio:
- Lise celular
- Marcao do antignio
Lise de clulas sem parede celular com misturas de inibidores de proteases, a
temperaturas baixas e com detergentes:
Suaves no inicos NP-40 ou o Triton X-100
Fortes condies desnaturantes mistura de detergentes inicos (SDS) e no
inicos
2. Clarificao/descontaminao do lisado
Objectivo: eliminar o maior nmero possvel de protenas contaminantes.
48

Consiste: imunoprecipitao em que se utiliza um anticorpo no especfico para o

antignio em estudo.
Exemplo: se o anticorpo especfico de antignio for um antisoro policlonal feito em
coelho, deve-se usar soro de coelho no imunizado.
3. Formao dos complexos anticorpo-antignio
4. Purificao dos complexos

3. Immunoblotting
Princpio do immunoblotting:
Electroforese Transferncia para uma membrana Localizao do antignio com
anticorpos especficos
marcados

49

Permite:

Determinao de massa moleculares de protenas

Comparao da reactividade imunolgica cruzada entre protenas
Estudar modificaes de protenas durante o ciclo celular

Procedimento bsico do immunoblotting:

Preparao da amostra de antignio

50

Resoluo da amostra por electroforese em gel

Transferncia dos polipptidos separados para um suporte membranar (A)
Colorao das protenas na membrana (opcional) (B)
Deteco do antignio

(A)

(B) Colorao das protenas nas membranas

Objectivos:
- Determinar a posio dos marcadores de peso molecular
- Confirmar o sucesso da transferncia
Corantes:
Ponceau S Colorao rpida, mas no permanente
Indian Ink Pouco sensvel
Amido Negro Difcil registo fotogrfico

51

Escolha de anticorpos:
Reconhecimento anticorpo-antignio: O anticorpo deve ter capacidade de

reconhecer epitopos resistentes desnaturao

Minimizao de bandas de rudo de fundo:
Inespecficas
Especficas bandas devidas a reaces cruzadas do anticorpo com outros
polipptidos

Notas:
Permite deteco de alteraes (na MM) sem ser necessrio purificar (ex.
glicosilaoes)
amostra de protena da clula lise celular e separao por MM
Separao ocorre por electroforese: a separao d-se segundo a massa molecular
(molculas com MM inferiores migram mais no gel)
SDS-PAGE: detergente aninico desnatura a protena (carga negativa, migra para o
nodo)
Transferncia do gel para o suporte mais resistente (nylon ou nitrocelulose) porque
o gel muito frgil
A transferncia pode ser feita na ser feita na vertical ou horizontal (ver figuras)
Verificar se as protenas migraram, corando o gel e a membrana (pode usar-se um
corante reversvel para ver se a transferncia foi bem sucedida)
Deteco com anticorpos
Deteco de antignios com anticorpos marcados:
1. ELISA
2. Imunohistoqumica
3. Imunofluorescncia
4. Citometria de fluxo

1. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)

52

Caractersticas:

Utilizao de um suporte slido: adsoro de anticorpo ou antignio

Anticorpos especficos para antignios
Anticorpos ou antignios marcados com enzimas
Deteco da presena e/ou quantificao do complexo anticorpo-antignio
Concentrao de antignio ligado proporcional de substrato convertido
Curva padro obtida com concentraes crescentes do composto a determinar
e procedendo de modo idntico ao tratamento das amostras

Notas:
Exemplo: deteco de hormonas de crescimento
O marcador utilizado um enzima!
Permite quantificar antignio (nica tcnica capaz de o fazer!)
Utilizadas placas com 16 poos: protenas/hormonas aderem ao fundo da placa
Amostra de soro contendo antignio: incubado com anticorpo
Anticorpo secundrio liga-se ao enzima
Substrato no corado sofre uma alterao e origina um produto corado e solvel
Quantificao do produto formado (curva de calibrao): [prod] proporcional
concentrao de hormona/componente de interesse

53

Mtodo Indirecto

Se existirem anticorpos no soro, estes ligam-se e so detectados pelos

anticorpos secundrios (que se ligam aos 1 os se estes existirem)
Na placa, protenas com antigenio do anticorpo a detectar (ex. vrus)

Mtodo Sandwich

Deteco de insulina do soro, que se liga ao anticorpo

54

Imunocolorao

Identificao de componentes de tecidos atravs de uma reaco Ag-Ab

especfica (Ab marcado)
Distribuio e localizao de componentes celulares especficos numa clula ou
tecido
Combinao de tcnicas anatmicas, imunolgicas e bioqumicas

55

A tcnica pode ser dividida em quatro passos:

1. Preparao do material de partida (clulas/tecidos) adeso a um suporte slido
2. Fixao e permeabilizao das clulas
3. Ligao do anticorpo
4. Deteco
Fixao e permeabilizao das clulas
O processo de fixao deve:
- Impedir a fuga de antignio
- Manter a arquitectura celular
- Manter o antignio numa conformao reconhecida eficientemente pelo anticorpo
Permeabilizao:
- Permeabilizar a clula de modo a permitir o acesso ao anticorpo

56

Solventes orgnicos (etanol): desnaturam protenas (que no se deslocam fixao)

Parafomaldeido: liga-se covalentemente os grupos amina das protenas forma uma
rede dentro da clula (polimeriza) tem de permitir a entrada dos anticorpos
Antignio
Na membrana: acesso directo do anticorpo ao antignio
Intracelular: necessrio permeabilizar a membrana (adio de detergentes suaves)
para possibilitar a entrada dos anticorpos
Deteco: escolha do marcador
Microscopia ptica
Microscopia de fluorescncia:

Mais barato do que a confocal

Nveis reduzidos de fluorescncia na amostra
Microscpio confocal:
Muito mais caro.
Luz extremamente focada usada para iluminar a amostra em diferentes planos
focais. A clula visualizada em cada um destes diferentes planos. As imagens
so capturadas digitalmente.

Citometria de fluxo e fluorescence activated cell sorting FACS

Citometria de fluxo
Muito rpida e poderosa
Identifica o tipo de clula a tratar
Separao de clulas homogneas (fentipo)
Medio de um parmetro
Fluxo fluido

FACS
Pode ser mais verstil (mais complexo)
Clulas separadas conforme a carga (separao p/ expresso de receptores)
Grau de purificao elevado

O Citmetro:
Sistema fluido
57

Sistema ptico
Sistema electrnico

- Determinada e
- Variao da velocidade
- Clulas compelidas a estreitar (1 s clula passa pelo canal) obtm-se informao
clula a clula
- Incidncia de luz (laser)

58

Fotodetectores: transformam sinais luminosos em sinais elctricos

Recolha de luz no fluorescente:
Forward scatter FSC
Side scatter SSC
Recolha de luz fluorescente: Detectores de fluorescncia
Filtros: separam cores de luz individual e direccionam-na para o fotodetector
respectivo
Azul luz no fluorescente
Verde, Laranja, Vermelho luz fluorescente

Forward scatter: deteco radiao transmitida para a frente (no fluorescente). D

uma medida do tamanho da clula.
Side scatter: Deteco a 90. Medida da granulosidade da clula.

Diferentes filtros: captam diferentes fluorescncias

Cada clula que passa tem 5 sinais (forward, side + 3 cores = sinais fluorescentes)

59

Sistema electrnico
Computador: recebe os sinais elctricos e transforma-os em sinais digitais
Armazenamento e anlise de dados

60

Resultados dados pelo computador:

N clulas c/ intensidade de fluorescncia
Se esta for baixa significa que tem 4 receptores na membrana
Se for alta: n elevado de receptores (10000, p. ex.)
A intensidade da fluorescncia proporcional quantidade de protena expressa na
membrana (equivalente ao n receptores).

Problema da adeso de anticorpos s clulas de modo inespecfico necessrio fazer

bloqueio e eliminar fluorescncia intrnseca das clulas:
Soluo: Anticorpos monoclonais feitos em murganho (mAb IgG2)
Preparar anticorpo deste tipo, ou seja, com esta especificidade (classe) mas que
reconhea uma protena que no exista em mamferos (ex: quitina).
Este anticorpo (marcado com FTIC) vai-se ligar nos locais inespecficos. Assim, a
fluorescncia emitida dir respeito s ligaes inespecficas (pode ser
anulada/subtrada!)

61

62

Traar contornos de
regies mais
homogneas:
Anlise de parmetros
de fluorescncia
(gating das populaes)

63

Diviso celular com CFSE

CFSE or CFDA-SE: carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester.
um derivado de fluoresceina no fluorescente ao qual a clula permevel (no
sintetizada pela clula).
As esterases celulares quebram os grupos acetato (a molcula clivada) tornando a
molcula fluorescente e impermevel para a clula.
O ster de succinimidilo liga-se a aminas livres resultando em adutos de longa durao
e fluorescentes.
Aplicaes
Pode ser usado in vitro e in vivo.
CFSE tem uma fluorescncia muito intensa.
Estas propriedades permitem anlise simultnea do nmero, posio e diviso celular.
O CFSE dividido igualmente entre as clulas filhas em cada diviso celular:
(tantos picos quantas as divises. A fluorescncia diminui ao longo das divises)

7. Migrao e extravaso de leuccitos

Vasos principais do sistema linftico

64

Sistema linftico: extenso nmero de vasos linfticos que convergem e vo

encontrando gnglios linfticos (pequenos rgos encapsulados) possuem canais

de entrada e sada (aferentes e eferentes linfticos, respectivamente)

A drenagem da linfa ocorre nos GL
Circulao ocorre de baixo para cima

Recolha da linfa nos tecidos perifricos

Linfa = Fluido intersticial

Trocas gasosas ao nvel dos capilares (sangue venoso/arterial)

Sada de lquido dos vasos sanguneos para os tecidos acumulao de fluido

extracelular
Parte do lquido retorna s vnulas e outro vai para os vasos linfticos que so abertos
para o exterior (onde entra o fluido extracelular que vai desaguar depois num gnglio
linftico) e possuem vlvulas que impedem a sada da linfa

Recirculao de linfcitos

(p. 25)

Local de infeco (leso), ex. corte, onde existem vasos linfticos entrada de
bactrias: so captadas por clula fagocticas (DCs e migram pelos vasos linfticos at
desaguar um GL vasos eferentes Ducto torxico Veia cava corao
Pulmes)

O sistema est sempre em funcionamento (existem sempre outros gnglios na

periferia)
Para os GL entra no s a linfa mas tambm sangue: a entrada de linfcitos
(capilares e depois vnulas ps-capilares) torna possvel o encontro patogeneantignio!

Antignio (Linfa) + Linfcito (Sangue) Encontro nos GL

65

Os encontros patogene-antignio s se do em rgos que possuam aferentes

linfticos (no ocorrem no bao: s tem eferentes linfticos para sada da linfa)
Se o antignio entrou no organismo mas no foi captado por linfcitos pode
continuar a migrar na linfa at desaguar no ducto torcico (vaso grande)
desagua na veia cava vai para o corao (sistema sanguneo,
permanentemente a circular)
Os 2 sistemas so interpenetrantes e encontram-se em permanente
funcionamento e circulao (sistema linftico + sistema sanguneo)
Bao: no tem aferentes linfticos, os antignios entram pelo sangue
Entrada de sangue 4x/dia necessrio abrandar a velocidade de entrada dos
linfcitos (que muito elevada) existe um sistema de controlo que d
informao para diminuir a velocidade de entrada dos linfcitos (sistema de
migrao)

Linfcitos: Sangue Tecido Linfa Sangue

5 X 106 Ly/seg sai pelas HEV

Drenagem dos vasos principais do

sistema linftico:
Extravaso
de
leucfilos
(Passagem dos leuccitos de um
vaso sanguneo para os tecidos)
Leso do endotlio: clulas endoteliais
expressam protenas com receptores nos
linfcitos (Toque)
Rolamento: as selectinas ligam-se e
desligam; adeso s clulas endoteliais atravs
de ligandos o linfcito abranda. (Os

linfcitos e o endotlio possuem selectinas

e receptores de selectinas (L-Selectinas e
E-selectinas))

66

As clulas endoteliais tambm libertam quimiocinas (expressas pelas clulas do

estroma do orgo) que foram lesadas (atraiem clulas fagocticas capacidade
quimiotxica) Estas ligam-se aos receptores dos linfcitos activando as integrinas
expressas pelos linfcitos (sofrem modificaes conformacionais)

Despoletar da adeso: ligao coesa aos ligandos das integrinas, nas clulas
endoteliais o linfcito pra! (e pode penetrar no tecido)

Algumas famlias de molculas de adeso celular (CAM)

(p. 58)

Selectinas (E endotlio; L
linfctos): ligam-se a protenas com vrias
cadeias de sidos (glicosilados)

Integrinas:
heterodmeros
activados
por
modificaes
confomacionais ligam-se a protenas de
adeso CAM da super famlia das
imunoglobulinas com
domnio de
fibronectina

67

Quimiocinas

Identificadas mais de 50 quimiocinas

Possuem poucos resduos de aa (entre 70 e 100)
Possuem resduos de cisteina e so classificados de acordo com estes resduos)
Os seus receptores penetram na membrana 7 vezes e esto ligados a proteinas
G, levando a cabo uma sinalizao.
Existem 20 receptores para as 50 quimiocinas
Grande promiscuidade (um receptor pode ligar vrias quimiocinas e uma
quimiocina pode ligar a vrios receptores)
CC (na regio amina existem 2 cisteinas juntas), CXC (2 cisteinas com 1 residuo
de aa no meio), CX3C e CX
CCR7 Presente nas DCs maduras e clulas B e T Naive (encontram-se os 3 nos
orgos linfides secundrios). Possui dois ligandos (CCL19 e CCL21). Duas
quimiocinas produzidos no estroma dos gnglios linfticos. No gnglio linftico, os
linfcitos expressam CCR7 e os linfcitos B comeam a expressar CXCR5 que tem
como ligando o CXCR13 (existentes nos ganglios linfides)

1. Imunidade Inata I

(Cap. 3.1, 36)

Mecanismos de imunidade Inata

Componentes de imunidade e receptores no sofrem alterao

Vrios mecanismos de imunidade inata: barreiras anatmicas e fisiolgicas,
internalizaao e inflamao

68

Barreiras anatmicas e fisiolgicas infeco

- Pele intacta
- Olho: conjutiva do olho + lisozima das lgrimas (mata bactrias)
- Mucosas, membranas das mucosas (clulas epiteliais + muco) e epitlios
- Mucos: protenas altamente glisosiladas impedem penetrao de micorganismos
- Clios: empurram corpos estranhos
- Espirros e tosse: fluxo de libertao e expulso de microrganismos (movimento
mecnico)
- Estmago pH baixo 1 (helicobacter resistente!)
- Intestino: organismos comensais facilitam digesto ocupam locais de deposio de
patogenes
- Movimentos de fluxo/passagem de fluido (vias intestinais) expulso de
microrganismos atravs do vmito e fezes
- Sangue (protenas do sistema do complemento) destruio de microrganismos de
recrutamento de outras celulas

69

E ainda mecanismos de internalizaao celular e Inflamao!

Defesas inatas: pele e epitlios das mucosas
Componentes da pele (um dos maiores rgos, 5Kg ~ 5L sangue) epiderme

Barreira impermevel de queratina

No tem vasos sanguneos (esto por baixo da derme) dificulta entrada de

patogenes
Encontra-se em constante renovao
Derme: produo de sebo (acido gordo), pH 3-5 impede entrada de
microrganismos
Membrana das mucosas: epitlios, clios, mucosas, saliva e lgrimas (lisozima)

70

Barreiras fisiolgicas:

Temperatura corporal elevada T= 37 C (bactrias no crescem to

facilmente!)
pH cido do estmago
Substncias antibacterianas e antivirais nos fluidos corporais:
Lisozima
Lactoferrina
Defensinas
Catelicidinas
Interferes I e II (citocinas que impedem a replicao viral por via
parcrina ou autcrina)
Flora normal dos epitlios
Sistema do complemento

71

72

Mecanismos de internalizao celular

1. Macropinocitose
2. Endocitose mediada por receptores
3. Fagocitose

1. Macropinocitose
Invaginaes da membrana celular Internalizao (fluido extracelular que tmb
contem partculas mt pequenas) Degradao (vescula macropinoctica)

2. Endocitose mediada por receptores

Ligao de ligandos a receptores da membrana Invaginaes Formao de vesculas
de clatrina (dentro tem Ig com antignio)
S clulas que tenham estes receptores podem utilizar este mecanismo!

3. Fagocitose (tb mediada por receptores)

Ingesto de grandes partculas Clula fagoctica (fagossoma) ingere bactrias e vrus
Mecanismo realizado por neutrfilos, macrfagos e clulas dendrticas (DC)

As primeiras vesculas
que se formam so os
endossomas

73

Estes endossomas vo progredindo para o interior da clulas o fundem-se

com partculas do golgi ou dos lisossomas e vo tendo um pH cada vez mais cido e
ptt os enzimas que vo actuar tm um pH ptimo de (4.5/5) e esses enzimas vo
entrar em actividade e vo actuar sobre as partculas que foram internalizadas e
vo degradando-as

74

Opsonizao

Opsoninas (= tornar mais saboroso): anticorpos, protenas do complemento,

protenas de fase aguda
Eles ligam-se aos micro e depois existem receptores das membranas dos
fagoctos que se ligam s opsoninas e os micro so internalizados
CR: receptor das protenas do complemento estabelece ligaes covalentes
com as bactrias, promovendo a fagocitose
FcR (fragmento cristalino das Ig): receptor do anticorpo (= Ig) reconhece
pores do patognio

Modelo das vias endocticas

75

Endossomas: precoces (pH 6,5), tardios (pH 5,5-6) fundem-se com vesculas
trans do Golgi
Endossomas + Lisossoma (proteases) = Endolisossoma
Entrada Fuso (com outras vesculas) Degradao Libertaao

Uma parte do material recuperado ou libertado

Reciclagem dos receptores da membrana

76

Modelo de maturao dos fagolisossomas

Fagossoma + Lisossoma = Fagolisossoma (pH 4,5)

Activao por intermdio do agente de fagocitose NADPH oxidase
formao de compostos reactivos de oxignio e azoto - EROS e ERNs (SOD,
MPO) Degradao de microrganismos
Entrada Fuso + Fisso Degradao (pH cido) Libertao

77

Relembrando:
Exploso respiratria nos neutrfilos (mediada pela NADPH oxidase) leva
formao do anio radical superxido (O2-) H2O2 OCl- (agentes oxidantes
potentes que levam destruio dos micro)

Produo de xidos de azoto bactericidas nos neutrfilos e macrfagos

Quando as clulas so activadas (reconhecimento do mico

pelos seus receptores) induzido o enzima NOS que leva
formao da citrulina e do xido ntrico (potente
oxidanete)

78

Mediadores das actividades microbicidas e citotxicas dos macrfagos e neutrfilos

Resumo na aula da 1 e 2 aula da imunidade inata:

1. PAMP (Padres moleculares associados a patognios). Estruturas comuns a
classes de patognios
2. PRR Padres que reconhecem os PAMP
a. Sinalizao que conduzia a uma infeco (estimulavam a produo de
citocinas e de co-estimuladores)
b. Fagocitose
c. Captores
d. Molculas secretados que se ligavam aos PAMP e que serviam como
opsoninas
3. Clulas do sistema imune inato: neutrfilos (pode destruir intra ou
extracelularmente os patognios), mastcitos, macrfagos, eosinfilos, NK, DCs
e clulas epiteliais.
Mecanismos efectores do sistema imune inato:

79

1- Enzimas que hidrolisam

microrganismos

componentes

das

paredes

celulares

de

a. Lisozima
b. Quitinases
c. Fosfolipase A2
2- Protenas e pptidos microbiocidas que disrompem a integridade das paredes
celulares nos microrganismos
a. BPI (protena catinica que se liga ao lipdo A do LPS. Funciona tb como
opsonina. Expressa nos neutrfilos)
b. Defensinas (pptidos pequenos activos contra: gram + e -, fungos,
parasitas e alguns vrus com invlucro. As alfa-defensinas so
produzidas por neutrfilos e clulas de Paneth. As beta-defensinas so
produzidas pelas clulas epiteliais mas no so armazenadas em
grnulos, so lanadas para o exterior logo depois de se formarem.)
c. Catelicidinas (constitudo por 2 domnios. O domnio NH2 (catelina) tem
37 res. aa. Ela clivada pela elastase dos neutrfilos ficando activa
(contra Gram + e e fungos)
3 Proteases de serinas microbiocidas
a. Serprocedinas (proteases com serinas no ca. So altamente
catinicas)
4 Protenas que sequestram Ferro e zinco
a. Lactoferrina (quelante de Fe. As bactrias precisam de Fe para crescer. A
hidrolise desta d origem lactofericina que leva directamente destruio
dos microrganismos)
b. NRAMP (na membrana dos vacuolos das clulas fagocticas e bombeia
para fora dos vacuolos o Fe, inibindo a proliferao dos micro dentro dos
vac
c. Calcopectina (Regies mt ricas em histidinas e queletam o Zn. Esto no
nos grnulos, mas no citoplasma dos neutrfilos)
5 Enzimas que do origem a derivados txicos de Oxignio e Azoto
a. NADPH oxidase, superoxidade dismutase, mieloperoxidase e NOS

6 Interferes do tipo I

80

a. Produzidos por todas as clulas infectadas. Vo actuar sobre clulas

vizinhas do hospedeiro que no esto infectadas e sobre si mesma. Inibe a
sntese proteica (da prpria clula e, consequentemente, do vrus) de duas
maneiras: inibindo a sntese da protena e, por outro lado, degradando os
mRNA
Via de processamento endoctico
Inflamao como resposta infeco e leso
Reaco mais coordenada que involve vrios tipos de clulas

Resposta Inflamatria caracterizada por:

Calor
Rubor/vermelhido
Edema/tumor (swelling = inchamento)
Dor (protenas bradicinina, etc que actuam nos terminais nervosos)
Perda de funo (resultante da acumulao de clulas e fluido)

Les
o

Pen
etra
o
de
bac
tri
as

Det
ecta
dos
por
mac
rfa
gos e fagocitados Libertao de mediadores inflamatrios depois, os neutrfilos
que circulam no sangue tmb vo migrar para o local da leso libertando tmb os
mediadores inflamatrios (TNF-alfa, IL-1, IL-6 e IL-8)
81

Mediadores Inflamatrios: chamam zona lesada do tecido clulas que esto

no sangue para combater a infeco/patogenes responsveis pelo
recrutamento
Inflamao: resultado do recrutamento das clulas do sangue
Nos vasos sanguneos, as clulas endoteliais tm de se afastar:
vasodilatao + permeabilizao celular (promovidas pelos mediadores)

Resposta Inflamatria

82

Citocinas (IL-6, TNF): influncia nos hepatcitos protenas de fase aguda

(algumas ligam-se aos PAMPS e actuam como opsoninas, com a BPI)

Principais mediadores inflamatrios

Sistemas plasmticos das cininas, coagulao do sangue e fibrinoltico

83

Dor: simultaneamente activada cascata de enzimas do sangue coagulao

Componentes enzimticos que provocam dor:
Bradicinina - contribui para a permeabilizao vascular (permite que o
que est a circular no sangue passe para o tecido onde houve a
leso), vasodilactao e contraco do msculo liso
Plasmina - activao do complemento e quimiotaxia
Formao de cogulos (sangue na extremidade dos vasos) impede a infeco
sistmica (transitoriamente)

Principais mediadores inflamatrios

84

Produo de leucotrienos e prostaglandinas

Principais mediadores inflamatrios

85

Clulas auxiliares na inflamao

Adeso e migrao celular durante a inflamao

86

Extravaso de linfcitos

Endotlio activado: expresso de selectinas que se ligam a protenas (com

sidos) retardar velocidade clulas T expresso de adesinas =
molculas de adeso (ligandos de integrinas) paragem diapedese

Clulas da imunidade inata

Neutrfilos:
Os pptidos antimicrobiocidas levam morte directa do micro e produzem
protenas capazes de destruir esses micro quer intra como extracelularmente
Macrofagos:
Capazes de activar clulas T, pois so APC, expressam co-estimuladores que
produzem um 2 sinal
Produzem diferentes tipos de citocinas que levam diferenciao de clulas T.
Clulas Dendriticas
Produzem diferentes tipos de citocinas que levam diferenciao de clulas T.

87

Os neutrfilos tm a
capacidade de libertar os
contedos dos grnulos e
formar armadilhas
extracelular (formam uma
espcie de redes onde
aderem os micro
concentra-os naquela zona
o que vai facilitar a sua
destruio). Estas redes so
constuituidas por elastase,
mieloperoxidase e histonas
(microbiocidas)

88

TP3. Sistemas Experimentais em Imunologia

Isolamento de linfcitos de tecidos

Diluio do sangue 1:1

Aplicao sobre uma almofada de ficol
Centrifugao: gradiente de densidade

Glbulos vermelhos e granulcitos sedimentam

Interface: Aspirao de clulas mononucleadas (linfcitos e moncitos)

Nova separao: moncitos aderem placa e linfcitos ficam no sobrenadante

Isolamento in vitro de clulas T especficas para antignio

Clulas T em cultura sobre clulas APC (irradiadas para impedir proliferao s as

clulas T que proliferam!)
89

Proliferam clulas T especficas que reconhecem o antignio

90

Ensaios funcionais de clulas T

Clulas T CD4 proliferao
Clulas T CD8+ citlise; marcao com tetrmeros
Qualquer clula: ELISA (medio da produo de IL extracelular)

Ensaios funcionais de clulas T: activao policlonal das clulas T

Activadores policlonais ou mitognios policlonais so substncias que induzem a
mitose de linfcitos com especificidades diferentes.
Exemplos:

Ensaios funcionais de clulas T: proliferao

91

92

1.
Relembrando: Uso do CFSE com citometria de fluxo
CFSE or CFDA-SE: carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester.
O CFSE (entra nas clulas e estas ficam fluorescentes) dividido igualmente entre as

clulas filhas em cada diviso celular.

Pode ser usado in vitro e in vivo.
CFSE tem uma fluorescncia muito intensa
Estas propriedades permitem anlise simultnea do nmero, posio e diviso
celular.
2.

Contagem do nmero de cintilaes por minuto

93

3.
Proliferao de linfcitos: incorporao de BrdU
BrdU (bromodeoxyuridine) anlogo fluorescente da timidina
Injecta-se BrdU nos animais.
Retiram-se as clulas T e coram-se com Ab anti-BrdU.
Contam-se os ncleos que incorporaram o BrdU no seu DNA.

Identificao de clulas secretoras de citocinas colorao de citocinas

citoplasmticas

(CF Citometria de Fluxo)

Citocinas = mensageiros celulares

Anticorpo marcado reconhece citocinas com fluorocromo

Medio da intensidade de fluorescncia por citometria de fluxo

Identificao de clulas secretoras de citocinas ELISPOT

94

Anticorpos que reconhecem as citocinas aderem placa

Adio de clulas T libertao de interfero
Adio de anticorpo secundrio (com enzima acoplado): formao de produto corado
e insolvel

Ensaios funcionais de clulas Tc: citlise

95

Clulas CD8+ citotxicas

Clulas-alvo marcadas com composto marcado radioactivamente (51Cr)
Adio de clulas Tc
Contacto com clulas CD8+ provoca citlise: quando as clulas lisam libertado o
marcador medio da radioactividade no sobrenadante (clulas que lisam)

Tetrmeros de pptidos-MHC

Resultados da Citometria de fluxo:

Esq. (cima) CD8+ TCREsq. (cima) CD8- TCRDrt. (cima) CD8+ TCR+

Serve para testar o sistema:

Animais knockout = deleco do gene
Animais transgnicos = sobre-expresso (uso de vectores)

96

Transfeco de genes que produzem as cadeias e do TCR

Genes TCR e Ig so modificados nos linfcitos

Vrios segmentos gnicos: recombinao de TCRs cadeis / (ocorre durante a
maturao dos linfcitos)
Os genes ligam-se ao acaso e o que se encontra no meio desaparece
Genes recombinados: intervm 2 protenas RAG1/2
Quando a recombinao d origem a uma protena vivel dada informao
para impedir a expresso de RAG1/2 (prevenindo nova recombinao)
Incubao: Genes / so introduzidos j recombinados impedindo
recombinao das outras clulas (no h RAG1/2) 95% clulas apenas
expressa e
RAG-/-: nenhuma possibilidade de recombinao! Imunidade adaptativa
(ambiente tem de ser estril porque este organismo no tem sistema
imunitrio Ly B ou T)

Produo de murganhos transgnicos (TG)

97

Murganhos transgnicos (TG) para TCR

98

Murganhos transgnicos (TG) para TCR com KO de RAG

Murganhos RAG -/- no tm linfcitos T ou B!

Tipos de Imunizao
Imunizao Activa: Vacinas
Transferncia de imunidade por anticorpos Imunizao Passiva

Transferncia de anticorpos (soro de cavalo) de um animal imune para um no

imune (fica temporariamente imune)

99

Tambm se pode injectar os linfcitos do animal imunizado imunizao

adoptiva:

Transferncia de imunidade por linfcitos Imunizao Adoptiva

Em humanos no possvel, h rejeio! Em murganho possvel porque so estirpes

singnicas (gmeos homogigticos), littermate, resultantes de cruzamentos sucessivos.

Quimeras de medula ssea

A

100

Transferncia adoptiva de linfcitos

Clulas T que diferem na expresso de Foxp3 e na expresso de um fosfatase

(marcador CD45) expresso em todas as clulas
Distino das clulas atravs das diferentes isoformas CD45.1+/.2+

Animais singnicos, congnicos e alognicos

101

Singnicos: gmeos homozigticos

Congnicos: CD45 diferente num s locus
Alognicos: totalmente diferentes

7. Reconhecimento de padres na imunidade inata

Os mdulos do sistema inato so:
O epitlio das superfcies por cima do epitlio existem muitas mucinas
(produzidas por clulas secretoras) que formam o muco e os patogenios ficam
l presos.
O sistema fagoctico clulas capazes de internalizar e degradar patogenios.
Opsunina ligam-se aos microrganismos e as quais possuem receptores nas
clulas fagocticas, internalizando mais facilmente os micro
Clulas NK destroem clulas alteradas por vrus
A resposta a protenas da fase aguda e do complemento (produzidas pelo
hepatxico)
Interferes (capazes de levar a um estado antiviral)
Mastcitos, Eosinfilos e Basfilos

Receptores das clulas da imunidade inata

102

Os genes dos receptores da imunidade

inata no sofrem alteraes e
reconhecem padres gerais presentes
em vrios organismos.
Na Imunidade Inata, o mesmo receptor
pode
reconhecer
diferentes
organismos.

Receptores das clulas da imunidade adaptativa

Receptores da Imunidade Inata

Grandes padres moleculares PAMP (LPS Gram-, peptidoglicano, cidos lipoteicoico,
RNA dupla cadeia)
Receptores expressos na membrana fagoctica ou proteina soluveis que se ligam aos
patogenes (fagocitose)

Padres moleculares associados aos patognios

PAMP: Pathogen Associated Molecular Patterns
Reconhecidos por PRR Pattern Recognition Receptors
Os PAMP so molculas vitais dos patognios altamente conservadas, ie, raramente
so
protenas. Exemplos: -1,3 glucano dos fungos, peptidoglicano e LPS das bactrias,
fosfoglicano dos parasitas

103

Receptores da imunidade inata e adaptativa

Imunidade Inata
- Especificidade para PAMP sempre igual (herdada)
- Receptores expressos por todas as clulas
- Resposta Imediata
- Gama larga de patogenes
- Interaco com gama larga de molculas
Imunidade Adaptativa
- Codificados em vrios segmentos que se recombinam
- Cada linfcito recombina de modo aleatrio (padres nicos, repeties quase
impossveis)
- Reconhecem pequenos segmentos especficos dos patogenes

Receptores do sistema inato

104

1. PRR sinalizadores da infeco (dizem que h qqr no exterior de diferente no

organismo, levando activao de factores de transcrio como o NFKB ou de
factores reguladores da produo de interferes ou da produo das cinases
JNK ou Map Cinases. Isto vai levar activao de 3 tipos de genes: Pptidos
Microbiocidas, citocinas e quimiocinas inflamatrias [TNF, IL-1, IL-8] e leva
produo de protenas que vo ter influncia grande na imunidade adaptativa
[MHC, CD80/86, IL-12])
a. Expressos na membrana (TLR e Dectin-1)
b. Expressos intracelularmente (RIG, NLR e MDA-5)
2. PRR fagocticos
3. Molculas de reconhecimento de padres

Receptores de reconhecimento de padres (PRR)

Receptores TLR (Toll-like Receptors)

TLR e respectivos ligandos

105

So 9
TLR1,2,4,5,6 so expressos na membrana celular e reconhecem estruturas que esto
no exterior dos microganismos
Expressos na membrana ou compartimentos internos
TLR4 = reconhece lipopolissacridos
TLR5 = flagelina
TLR9 = DNA bacteriano

106

Estrutura dos TLR

Regio de contacto directo com ligando (PAMP)

(gancho): rica em Leucina. No compartimento interno, o

gancho est para dentro pk vai interagir com as clulas

internalizadas por vesculas vai interagir com regies
internas do micro
MyD88 = molcula adaptadora

Ligandos
TLR

Vias de transmisso de sinal atravs dos

Transmisso de sinal atravs de

TLR: Via do nFkB Activao de
factores de transcrio
expresso de genes

107

Consequncias do reconhecimento de PAMP por PRR

Expresso das molculas efectoras:
- Intermedirios reactivos de oxignio e azoto
- Pptidos microbiocidas
- Citocinas (IL1, IL2, TNF-)
- Quimiocinas (IL8)
- Molculas de adeso
- Protenas de fase aguda
(Imunidade Adaptativa estmulo de linfcitos)
- Co-estimuladores (B71/2, CD80/86)
- Molculas MHC

Consequncias da activao dos TLR

EROS + microbicidas
recrutamento de clulas
molculas de adeso + quimiocinas
vasodilatao, permeabilizaao
actividade hepatcitos protenas de fase-aguda ( opsoninas)
Formam-se melhores APC
Para haver estimulao de linfcitos (memria): co-estimuladores e molculas MHC
(imunidade adaptativa) necessrio primeiro um estmulo da imunidade inata!

108

Receptores intracelulares

Estrutura das molculas da famlia dos NLR (NOD like receptors)

Domnio rico em Leu

(ligao ao ligando)
Domnios NLR
Domnios
CARD

recrutamento
de
caspazes
(protenas
envolvidas
na
apoptose. Tm cido asprtico no
seu centro activo.)

NOD1 e NOD2 activam o NF-B

Domnios
NBS:
oligomerizam mais que uma
cadeia activao de protenas
para apoptose
NOD 1 e 2 activam o nFkB:
oligomerizam transduao do
sinal activao do nFkB
expresso dos genes
(protenas
receptoras
que
reconhecem
fragmentos
de
peptidoglicanos ou dipptido muramilo)

RIG-1 e MDA-5 (Reconhecem vrus)

RIG-1
109

Ligandos: vrus com ssRNA como paramicovirus, vrus influenza.

E uma grande gama de compostos polianinicos (das superfcies das bactrias grampositivas e negativas) como LPS, LTA e poly(IC)
MD 5
Ligandos: vrus com ssRNA como picornavirus e MD-tambm poly(IC)
RIG-1 retinoic acid inducible gene 1
MDA-5 melanoma differentiation associated gene 5

RIG-1 e MDA-5 activam o NF-B

Interferes tipo I

110

Receptores fagocticos (promovem fagocitose)

Receptores scavenger (captadores)
Trmero. Protena membranar
(com regio extracelular)
Gram+/Expresso nos macrfagos e
clulas endoteliais.
Ligandos: LDL (low-density
lipoproteins) oxidadas ou
acetiladas devido a leso
celular ou a apoptose. E uma
grande gama de compostos polianinicos (das superfcies das bactrias gram-positivas
e negativas) como LPS, LTA e poly(IC)
MARCO (macrophage receptor with collagenous structure)
Expresso nos macrfagos da zona marginal do bao induzido por LPS e citocinas
inflamatrias.
Ligandos: vrios em bactrias gram-positivas e negativas
Receptores da famlia das lectinas tipo C (fagocticos)

Expresso nos
dendrticas.

macrfagos

algumas

clulas

Ligandos: oses de bactrias, vrus e fungos.

Funo: fagocitose activao fagocitose, NF-B,
produo de citocinas inflamatrias: IL-12, IL-6, IL-8,
IL-1, GM-CSF

111

Expresso nos macrfagos, clulas dendrticas, neutrfilos e alguns linfcitos.

Ligandos: -glucanos dos fungos e leveduras.
Funo: fagocitose, activao NF-B, regulao da fosfolipase A2 e ciclooxigenase,
produo de IL-2, IL-6,
IL-10, IL-23 e activao de clulas Th17

Reconhecimento de padres por proteinas solveis

Colectinas
Pentraxinas
PGLYRP peptidoglycan-recognition protein
No ligadas clulas, secretadas.
1.
Colectinas: reconhecem padres com oses nos microorganismos. Funcionam como
opsoninas e activam o complemento.
Nos alvolos pulmonares funcionam como sulfactantes (ligao manose)
Exemplos:
MBL (mannose-binding lectin) reconhece sidos com manose ou fucose na
extremidade.
SP-A e SP-D surfactantes presentes nos alvolos reconhecem vrias estruturas dos
microrganismos
Estruturas de colectinas

112

2.
Pentraxinas: funcionam como opsoninas e activam o complemento.
CRP (C reactive protein)
fosfatidilcolina dos microrganismos. Aspergillus fumigatus, Zimosano. Protenas do
complemento (C1q)
SAP (serum amyloid protein)
Ligandos: fosfatidiletanolamina dos microrganismos.
Salmonella thyphimurium. Protenas do complemento (C1q e C4bBP)
3. PGLYRP humanos: efeito bactericida
Peptidoglicanos
Zonas de contacto com exterior: pele, olhos, mucosas
PMN polymorphonuclear leucocytes

113

Interferes tipo I
As clulas infectadas por vrus segregam
interferes tipo I (citocinas que interferem com a
sntese viral, na clula ou nas clulas vizinhas)
Desempenham aces autcrinas e parcrinas, sob a
prpria clula ou sob outras (mesmo nas clulas no
infectadas).
So produzidas por clulas infectadas, ligando-se ao
receptor da celula (inibem sntese proteica RNA viral).
Induo de actividade antiviral por IFN-/

114

Receptores das clulas NK (natural-killer)

Clulas NK: prontas a

matar (possuem tudo o que
e necessrio para destruio
celular)
Reconhecem
conjunto
de
ligandos
activadores mas tambm
tem um conjunto de
ligandos inibidores que se
ligam a molculas MHC
classe I
Em clulas normais,
no infectadas, h inibio
da activao das NK
Clula alterada: infectada ou tumor verifica-se diminuio de MHC I no
h ligando para os inibidores logo, os inibidores actuam libertao do
contedo dos grnulos apoptose

Receptores inibidores e activadores das clulas NK

H diferentes tipos
de receptores activadores e
inibidores
Caracterstica
comum dos activadores:
reconhecimento de MHC I
Nos humanos, HLAA, HLA-B e HLA-C
O HLA-E pode por
vezes substituir os outros
trs

8. O sistema do complemento

Componentes solveis do complemento

115

- Protenas que circulam no sangue na forma de pro-enzimas (activas aps clivagem)

- Tm massas moleculares baixas de 25 a 410 kDa
- Tm concentraes elevadas no soro de 1 a 1 200 g/ml
- Representam 15 % da fraco das globulinas do plasma numa concentrao total de 3 g/litro
- So sintetizados principalmente pelos hepatcitos.
- Tambm podem ser segregados pelos macrfagos, moncitos e clulas epiteliais das vias
urogenital e gastrointestinal.
- Imunidade Inata: a sua sntese e secreo pode ser induzida por citocinas inflamatrias como
TNF, IL-1, IL-6 e IFN.

Sistema do Complemento

116

Via clssica + Via Alternativa + Via das lectinas:

convergem para a formao da protena C3 deposio do complexo de ataque
membrana (MAC) lise dos patogenes

Caractersticas
Amplificao
Sensibilidade
Controlo
(Processo de amplificao muito sensvel e regulado!)

Nomenclatura
Componentes da via clssica e terminais: C1 C9 (C de complemento!)
Quando uma protena quebrada (clivagem) os fragmentos resultantes designam-se
por:
a fragmento mais pequeno
b fragmento maior
Fragmentos a so quimiotcteis (recrutamento) para leuccitos inflamatrios.
Fragmentos b contribuem para a actividade enzimtica seguinte na cascata.
(Excepo: C2a o fragmento maior)
Um componente enzimaticamente activo escrito com uma linha por cima do nome.
Componentes da via alternativa at ao C3b designam-se por factores.
Ex: factor B, factor D

117

Conformaes das IgM

Ligao das IgM: activao do sistema do complemento

Domnio de ligao ao C1 das IgM: CH3

C1 s activado quando 2 dos seus stios de ligao se ligam s Ig
IgM ligada ao antignio expe 5 regies Fc (CH3) prximas

Ligao de IgM livres no sangue na forma planar passa a forma de agrafe

Regio CH3 fica voltada para cima e liga-se primeira protena do complemento
(C1)
IgM so mais eficazes que IgG (distncia fixa)

Estrutura do C1
Domnio de ligao ao C1 das
IgG: CH2
C1 s activado quando 2 dos
seus stios de ligao se ligam s
Ig
IgG ligam-se atravs do CH2:
formao de ponte entre 2 IgG e
o C1 (desencadeia a activao)
tem de haver distncia
ptima
So precisas 1 000 IgG ligada ao
antignio para 2 regies Fc
estarem prximas e se poderem ligar ao C1
Ligao do C1q a regies Fc das IgM e das IgG

118

119

Constituio do C1

3 subunidades: A, B, C (que se enrolam) depois enrolam-se com outras 5

para formar um hexmero (as subunidades/ramificaes constituem a zona de
ligao)
Ligao de 2 dmeros (esterases de serinas inactivos) nos espaos entre
subunidades
Esterases de serina: enzimas no activados
C1r auto-activado activa C1r activa C1s cliva C4 (gera 2 fragmentos: a e
b)

C4a: fragmento quimiotctil (sangue, tecidos)C4b: liga-se covalentemente ao

patognio (lig. tioster) com cadeias laterais de aa ou grupos OH de polisidos (em vez
de gua)

120

Via Clssica do Complemento

C4b ligado ao patognio

Ligao a C2a e C2b

121

Sada de C2b: convertase clssica do C3

122

Ligaes tioester internas das molculas C3

123

Via Clssica

Anticorpos: receptores da Imunidade Adaptativa

Anticorpo + Antignio: ligao do C1 (desencadeia activao)
No uma via pura de Imunidade Inata tem de haver ligao prvia de
anticorpos (imunidade adaptativa)
C3b liga-se ao complexo anterior: convertase clssica do C5
Ligao de C5a (sangue) e C5b ?

124

Via Alternativa

(Em 5 minutos ligam-se 2 X 10 6 molculas de C3b superfcie de um patognio)

Desencadeada de maneira espontnea

Se no houver um patogene prximo a lig. tioster hidrolisada
C3 clivado espontaneamente (pequena quantidade): lig. tioster fica exposta
C3b + patognio + factor B (esterase de serina)
Factor B (homlogo a C2) liga-se a C3b, sendo depois clivado: formao do
complexo C3b-Bb convertase do C3 alternativa (homlogo a C4)
C3b formados pela convertase clssica podem ser usados pela via alternativa
esta funciona como sistema de amplificao

125

Properdina tetrmero 220 kDa

C3bBbPC3b convertase do C5 semelhante a C4b2a3b

Ligao da properdina (convertase C3) molcula adaptadora (estabilizadora):

possibilita a ligao de mais C3b
Activao de C3bBbPC3b (~C4b2a3b)

126

Via das lectinas

Colectinas
MBL mannose binding lectin
CRP C-reactive protein

Ligao de protenas de ligao s manoses (MBL): varias subunidades,

formao de multmetros
Domnio Cys, colagnio e domnio de ligao s lectinas

127

MBL liga-se s manoses do patogene

Ligao de outras protenas: Activao de MASP-2 clivagem de C4
clivagem de C2 convertase clssica de C3
Esta via mais primitiva (do ponto de vista evolutivo) pois no necessita de
anticorpos

128

Componentes terminais

C5 heterodmero 190 kDa

C5a 11 kDa
C5b 180 kDa
C6 monmero 128 kDa
C7 monmero 121 kDa
C8 heterotrmero 155 kDa

Ligao C5b
C7 liga-se a C6
Regies hidrfobas expostas ligao membrana
C9 polimeriza na membrana forma buracos na membrana do patogene
entrada de gua e ies lise

129

C9 monmero 79 kDa
4 a 18 C9 no MAC com
dimetro interno de 100

Estrutura do MAC nas membranas celulares

130

Alvos do MAC
Entidades com membranas:
- Bactrias gram-negativas
- Alguns virus com envlucro
- Clulas do hospedeiro infectadas por virus que expressam antignios virais na
membrana
- Eritrcitos heterlogos

Resistem ao MAC
- Clulas no infectadas devido a protenas reguladoras
- Clulas com grande actividade metablica endocitam o MAC antes de este actuar.
Ex: clulas cancerosas

Activao das vias clssica, alternativa e das lectinas do complemento

9. REGULAO DO SISTEMA DO COMPLEMENTO

REGULAO DA ACTIVAO DA VIA CLSSICA PELO INIBIDOR DO C1
131


C1: MOLCULA COMPOSTA POR
C1Q, 2 MOLCULAS DE C1R E 2
MOLCULAS DE C1 S.

SEMPRE QUE SE FORMA UM C1

EXISTE UMA MOLCULA INIBITRIA .

INIBIDOR DO C1 (C1INH ): O
C1 POSSUI UM CENTRO ACTIVO PARA O
INIBIDOR QUE IMPEDE QUE ESTE SE
LIGUE A UM ANTICORPO .

INACTIVAO LEVADA A CABO

C1INH EM VRIAS
SUBUNIDADES PELO C1 R E C1 S
(PROTEASES DE SERINA ),
ORIGINANDO C1 Q SEPARADO E
INACTIVO ( FRAGMENTOS C1 R /C1 S
ESTO IMPEDIDOS DE SE LIGAR ) =

PELA CLIVAGEM DO

INIBIO DA VIA CLSSICA

C1Q S SE LIGA AOS DOMNIOS

CONSTANTES DOS ANTICORPOS

(IG G

OU

IGM)

QUANDO O ANTICORPO SE LIGA AO SEU ANTIGNIO ESPECFICO .

A SSIM,

NO CASO DE INFECO O INIBIDOR SAI E OCORRE A CASCATA DO

COMPLEMENTO NORMAL

REGULADORES DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

OUTRAS PROTENAS REGULADORAS:
- IMPEDEM A FORMAO DE CONVERTASE C3
- CASO ESTE J ESTEJA FORMADO LEVAM SUA DISSOCIAO

FACTOR I

Quebra do C3b

132

DAF protena de membrana que impede a formao do convertase do C3

C4BP protena de solvel com funcionamento semelhante ao DAF

1) C4BP: PROTENA DE LIGAO AO

C4B

QUE EST LIGADO COVALENTEMENTE

MEMBRANA DA CLULA , IMPEDINDO DA

LIGAO DO

C2

E ASSIM PREVENINDO A

FORMAO DO CONVERTASE

C3

CLSSICA .

2) C4BP: SERVE DE COFACTOR PARA O

FACTOR

QUE FRAGMENTA O

TAMBM O

C4B,

C3B

MAS

ESTE LIGA CLULA A

PROTENA DE LIGAO

(C4 BP)

QUE SERVE

DE COFACTOR LEVANDO FRAGMENTAO .

3) DAF: FUNCIONA COMO O C4BP,

PROTENA DE MEMBRANA QUE SE LIGA AO

C4B

IMPEDINDO A JUNO DO

C2 E LOGO
C3.

A FORMAO DO CONVERTASE DO

4) DAF: dissociao do convertase do C3, promove a dissociao C3b-Bd

5) CR1: PROTENA DE MEMBRANA QUE SE LIGA AO C4B E IMPEDE A FORMAO DO
CONVERTASE

C3.

6) CR1: PODE ACTUAR NA PRPRIA CLULA OU EM CLULAS VIZINHAS .

REGULAO DO SISTEMA DO COMPLEMENTO VIA ALTERNATIVA

133

REGULADORES DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

FACTOR H: IMPEDE A LIGAO DO FACTOR B

(ESTRUTURALMENTE ANLOGO AO C2 DA VIA
CLSSICA) (3) OU LEVA DESINTEGRAO DO
CONVERTASE DO C3 (4). FUNCIONA TAMBM
COMO CO -FACTOR DO FACTOR I ( FACTOR DE
REGULAO ) QUE PROVOCA A FRAGMENTAO
DO C3B (5).
MCP: LIGA-SE AO C3B IMPEDINDO A LIGAO DO
BB E CONDUZINDO DEGRADAO DO C3B (COFACTOR DO FACTOR I) E IMPEDINDO A FORMAO
DO CONVERTASE DO C3 (6).

REGULADORES DA ACTIVIDADE DOS CONVERTASES DO C3 E DO C5

C3 VIA ALTERNATIVA
C4 VIA CLSSICA

REGULAO DO SISTEMA DO COMPLEMENTO VIA DAS LECTINAS

134

REGULADORES DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

REGULAO DO SISTEMA DO COMPLEMENTO COMPONENTES FINAIS

REGULADORES DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

O C8

LIGA -SE AO COMPLEXO

ADIO DE

MAC. C9

C9

C5B67,

ESTANDO J FIXADO NA MEMBRANA .

COMPLETA O COMPLEXO DE ATAQUE

A
MEMBRANA : C5 B6789 OU

ACELERA O PROCESSO DE FORMAO DE POROS OU CANAIS NA

MEMBRANA , LEVANDO LISE OSMTICA DA CLULA -ALVO .

VITRONECTINA : MOLCULA DE ADESO PARA O COMPLEMENTO LEVANDO SUA

DEGRADAO . L IGAO AO C5 B67, FORMANDO O COMPLEXO SC5 B67 QUE J NO
CAPAZ DE SE INSERIR NUMA MEMBRANA CELULAR E , DESSA FORMA , LOCALIZAR NESSA
CLULA A LISE REACTIVA .
HRF: FACTOR PLASMTICO QUE IMPEDE QUE SE INTEGRE O 1 MONMERO C8 AO
PREVINIR A LIGAO DO C9 AO C8. O EFEITO LTICO DO MAC FICA , NA PRTICA ,
RESTRITO S CLULAS EM QUE SE INICIOU O PROCESSO DE ACTIVAO DA CASCATA DO
COMPLEMENTO E NAS QUAIS OS FACTORES REGULADORES

( FACTOR H

E FACTOR

I)

NO

O IMPEDIRAM .

135

MIRL: IMPEDE
POROS.

A POLIMERIZAO DO

C9

E POR CONSEGUINTE A FORMAO DOS

PRINCIPAIS RECEPTORES DO COMPLEMENTO

FDC = CLULAS FOLICULARES DENDRTICAS

C3B/C4B = OPSONINAS
I C3 B = FRAGMENTO RESULTANTE DA DEGRADAO

DO

C3B

CR1: COM LIGANDOS CONDUZ INIBIO DA FORMAO DO CONVERTASE DO C3;

FAGOCITOSE ; SOLUBILIZAO DOS COMPLEXOS IMUNES: IMUNOGLOBULINAS +
ANTIGNIOS = FORMAO DE REDES VASCULITE = DEPOSIO DE COMPLEXOS E
INFLAMAO CONDUZ DESTRUIO DO VASO ; A RTRITE = ACUMULAO DE
LIQUIDO E INFLAMAO DAS ARTICULAES ; GLOMERONEFRITE .

136

CR2: EXPRESSO MAIS RESTRITA (CLULAS B, FAZ PARTE DO CO -RECEPTOR );

FAGOCITOSE ; DESTRUIO DE CLULAS B E DESENVOLVIMENTO DE CLULAS DE
MEMRIA .
DOENA

AUTO -IMUNE

(ANTIGNIO

SEMPRE PRESENTE )

+ D EFICINCIAS

EM

C3 =

FUNES DO C3B:

NEUTRALIZA PARTCULAS ESTRANHAS : IMPEDE A PENETRAO DE VRUS NAS CLULAS

CR3/CR4: integrina;
ligandos = molculas de
adeso celular;
envolvidos na
extravaso de
leuccitos, solubilizao
de complexos e
fagocitose.

Libertao de protenas
C3a, C4a e C5a
Reaco alrgica
sistmica fatal
(vasodilatao:
permeabilidade), para
baixar a tenso o sangue

137

sai dos vasos, os rgos deixam de ser irrigados Morte! Anafilatoxinas

10. Os genes das imunoglobulinas

10.1. Organizao genmica dos genes das imunoglobulinas

Homem: organizao em linha germinal dos genes das imunoglobulinas

No um gene contnuo, apresenta vrios segmentos gnicos permitindo

elevada complexidade

Legenda:
enh enhancer
C codifica para o domnio constante
J 5 domnios/resduos J
V regies variveis, associado a um L (pptido lder) que constitui o primeiro pptido
formado, permitindo conduzir a protena nascente do citosol para o RE e depois
clivado e no vai aparecer na protena madura.

Existncia de vrias regies C (constantes) e J a 5 dos genes: 1, 2, 3 7 (entre

3 e 7 existem pseudogenes, ou seja, tm codo que codifica apenas o final da
protena e, como tal, no originam uma protena completa)
Regies V+L

138

 CH = C + C + C + C + C
C do origem s IgA
C do origem s IgM
C do origem s IgD
C do origem s IgE
C 4 x IgG
Cada regio constante encontrase subdividida em intres + exes +
regies transmembranares (a rosa na
imagem)
JH e L+VH, entre estas regies
existem regies DH (n=23), que conferem diversidade

Domnios das imunoglobulinas e relaes com segmentos gnicos

V region regio varivel (V+L)

VH parte inicial da zona
varivel
JH parte final da zona varivel,
ligao regio constante
C region regio constante (C)
DH aproximadamente 6 resduos de
a.a.
TM- Transmembranar
Cada segmento gnico V pode ligar-se ao acaso aos segmentos J RECOMBINAO

10.2. Os rearranjos dos genes das imunoglobulinas

Recombinao de segmentos
gnicos: os segmentos V podem
ligar-se ao acaso aos J

139

 Exemplo para o locus da cadeia

leve existncia rearranjo: juno de
uma regio V23 com uma J4 (os
segmentos gnicos entre as regies
que se ligam so eliminados e ficam
sob a forma circular) e posterior
transcrio;
existncia
de
poliadenilao, splicing e traduo.
Pke desaparece no terceiro passo a
regio mais prxima de 5?

Rearranjos, transcrio e traduo

dos genes das imunoglobulinas
Cadeia Pesada

Cadeia leve

Cadeia pesada: 1 d-se a

recombinao de um segmento D com
um J (ao acaso). Depois vai-se
recombinar o V qqr com o DJ
anteriormente formado. Esta regio
depois transcrita no transcrito primrio,
clivada e traduzida numa protena que
ainda tem o lder e depois
encaminhada para o RE e finalmente os
dois polipeptidos vo-se associar por S-S
e vo ser expressas na membrana.
Interaco para formar protena
tetramrica (random)
Ordem de recombinao: cadeia
leve (, , , ) cadeia pesada
A recombinao efectuada pode ser ou no produtiva
- Produtiva: h associao entre leve e pesada e h inibio da
recombinao dos genes e do 2
- No produtiva: recombinao do 2 ; se no der, recombinao do 1
e, se este no der, recombinao do 2

140

O DNA da linha germinal igual em todas as clulas; P = promotor, a montante

do enhancer

10.3. Os
imunoglobulinas

mecanismos

moleculares

dos

rearranjos

dos

genes

das

RSS = recombination signal

sequence, sinal para corte
As RAG1 e RAG2 s
reconhecem os RSS seguindo esta
regra
Regra 12/23 RSS 12 + RSS
23; para que a recombinao se d o
espaador precisa obrigatoriamente

de ser diferente, um de 12 e o outro de 23

Existncia de RSS a 3 de V e a 5 de J (recomb. possveis: 12-23 ou 23-12)
Nunca h recombinao de V para J na cadeia pesada! Isto s possvel em e

141

Passos Bsicos na Recombinao V (D) J

Passos bsicos da recombinao:

Quebra numa s cadeia de DNA
pelas RAG1 e RAG2
RAG1 e RAG2 vo promover a
aproximao dos segmentos V e J que
podem estar mts distantes no genoma
(sinapse)
Forma-se
um
complexo
(Harpin)
Abertura dos Harpin e ligao
das cadeias (juno codificante e outra
juno de sinal)

RAG 1 & RAG 2

Expresso especfica nos linfcitos
RAG 1 / RAG 2 no tm intres nos genes, zonas muitos conservadas
Extremidade codificante = V+J
Extremidade de sinal = 2 x RSS
Reconhecem RSS, ligando-se e cortando o DNA de cadeia dupla, deixando
extremidades OH
Fazem com que as pores V e J se juntem = Sinapse
Ligao intracadeia entre extremidade OH e PO4 da outra cadeia = Hairpin
Complexo ps-quebra + NHEJ = poro de DNA retirado do genoma da clula,
degradado
Ligao das extremidades no homlogas (NHEJ)
NHEJ complexo de protenas ubquas:
Ku70 (70kDa), Ku86, DNA-PKcs (cinase
dependente do DNA)
O
DNA-Pk
activa
a
artemsia
(endonuclease) que cliva em qualquer lugar do
DNA formao das extremidades do hairpin
Exonucleases removem nucletidos,
degradando o DNA
Cada deleco origina uma protena
diferente
XRCC4 = activa o ligase
DNA-ligase IV + XRCC4 ligao das
duas extremidades DNA reparado!

142

Juno com inverso: quando V e J esto no mesmo sentido.

10.4. Formao da diversidade de anticorpos por rearranjos dos genes das

imunoglobulinas
143

No homem cada D lido em

trs grelhas de leitura (6480x3)
Pesadas x leves = 5 milhes

Adio de nuclotidos P

Adio de nucletidos N

A artemisa cliva onde bem entende e D e J podem ficar sem ser

complementares.

Polimerases preenchem espaos (formando segmentos P), permitindo a ligao

D-J (adicionam nas leves e pesadas)
TdT adiciona nucletidos sem molde (random), s expresso na formao da
cadeia pesada (no existe nas cadeias leves) nucletidos N, maior
diversidade! (adicionada em clulas B e T qd elas so ainda mt jovens)

As recombinaes entre segmentos D, J e V (acaso) + actividade da artemisa

(acaso) + actividade do TdT leva a que haja uma grande diversidade de Igs

144

11. A Resposta Humoral: o desenvolvimento da clula B

Fases de desenvolvimento da clula B

A fase de maturao do desenvolvimento da clula B

Papel das clulas do estroma da medula ssea no desenvolvimento da clula B

Maturao clulas B: medula ssea

Precursores
hematopoiticos
estaminais
Marcadores especficos de linhagem:
protenas expressas durante diferentes fases
de desenvolvimento
B220 (KDa) = CD25R fosfatase
expresso nas clulas hematopoiticas
(diferentes
isoformas
consoante
as
linhagens),
tambm
expresso
em
precursores das clulas NK
145

CD19: em todas as clulas B excepto Precursores precoces (e no em clulas

NK)

Estdios de maturao dos linfcitos

Clulas
hematopoieticas
estaminais (rgo linfide 1:
medula ssea)
linfcito B (virgem
maduro) diferenciao (na
periferia rgos linfoides 2)

Clula hematopoitica
de linhagem negativa No
expressa nenhum marcador
caracterstica de linhagens
linfides
ou
mieloides.
Expressam c-kit em nveis muito

elevados.
Contacto com clulas do estroma (tudo o que no so linfcitos, colcho) da medula
ssea
Sada da medula: ainda no encontrou antignio (naive=virgem)
Activao: rgos linfoides secundrios
Desenvolvimento das clulas B: envolvidas integrinas, fundamental citocina IL7
(produzida pelas clulas do estroma) fase de
crescimento e expanso antes de recombinao dos genes
Ig

O progenitor linfide comum (CLP) d origem a

diferentes tipos de clulas

Progenitor Linfide comum (CLP) diferencia-se

clulas NK, B, T
No tm ainda marcadores de linhagem
caractersticos e expressam cKit em []menores e expresso
a cadeia alfa do receptor do IL-7
146

na fase final da clula progenitora que ocorrem os primeiros fenmenos de

recombinao: primeiro na cadeia pesada (durante fase progenitora) se for
produtivo cadeia expressa na membrana celular clula precursora B seleco
Sinal intracelular para manter a clula viva recombinao da cadeia leve (fase pr).
No entanto, a clula ainda est imatura (s expressa IgM), no capaz de responder
ao antignio
Clula madura: expressa IgM + IgD
Clula B-1B: expressam CD25 na membrana (durante desenvolvimento fetal) no se
d hematopoiese
CLP = progenitor linfide comum
MZB = zona marginal do bao (expresso de CD2)

Nas clulas pr-B, existe cadeias leves substitutas (V-preB e lambeda5). Ligam-se a
glicoproteinas gp130/gp 35-65 (estas ultimas substituem as cadeias pesadas). como se se
originasse uma Ig Porque? Uma possibilidade para que haja a manuteno das clulas, para
no serem destrudas por apoptose. nestes clulas pr-B que se expressam tmb o RAG1 e
RAG2. Comea-se tambm os rearranjos de D e J. Expressa os receptores da IL-7
Nas clulas pr-B continuam-se a expressar as cadeias leves substituas.
Pre-B-1 recombinao de um segmento V com um segmento DJ nos genes das cadeias
pesadas.
Pre-B-2-1 Expressam a cadeia pesada (miu) e formam o receptor pr-BCR. Esta clula sofre
um sinal para ver se a protena miu foi expressa adequadamente na membrana ou no. Caso
no tiver sido, a clula morre.
Excluso alelica (d-se quando uma cadeia pesada foi bem expressa) inibe a RAG 1 e 2, a TDT,
pra a expresso das cadeias leves substitutas e de recpetores. Estimula a recombinao das
cadeias leves.
Recombinao D com J num alelo (me). Depois recombinao de V com DJ dando origem a
um mRNA funcional e uma protena (miu) funcional, inibindo a recombinao do alelo 2. Caso
no seja funcional vai tentar recombinar o alelo com pai. Se no der a clula morre.
Pre-B-2-2 Antes de recombinar os genes das cadeias leves (a primeira que comea sempre
a cadeia k) vai fazer RNA que no vo dar origem a protenas (estreis). Servem para tornar
mais expostas as regies onde se vo ligar as protenas que vo recombinar. Expressa
novamente RAG 1 e 2 e continua ainda em proliferao.

Pre-B-2-3 Comea a recombinar os genes das cadeias leves das Igs. Juno VJ
do alelo1 da cadeia k, dando-se a recombinao do alelo 1k. Se produzir um mRNA 1k
funcional inibe a recombinao do alelo 2 e inibe a recombinao do alelo lambeda.

147

J temos aqui uma clula B imatura expressa IgM. Recombinao acabou, mas
continua a expressar RAG1 e RAG2 e no proliferam nem se diferenciam em resposta
ligao de um antignio.
Processo de seleco positiva e negativa.
No final desta etapa, comeam a formar uma cadeia pesada Delta. Quando comea a
produzir estes dois Ig, torna-se uma clula madura.

Reguladores da transcrio que levam ao desenvolvimento das clulas B e T

Notch 1 : protena transmembranar (ligandos

extracelulares) maturao das clulas T e bloqueio da
maturao das clulas B.
Ligando fornecido pelas clulas vizinhas (adipcitos)
Pax-5 : Desenvolvimento da linhagem B em detrimento da
T
+ Expresso de factores de transcrio EBF, E2A (para
maturao das clulas B)

Clulas
progenitoras
(hematopoiticas
estaminais)
comeam por expressar CD43 expresso de CD19:
primeiros fenmenos de recombinao da cadeia pesada
(simultaneamente de D para J nos 2 alelos)

Estdios na maturao da clula B

Entre
a
fase
progenitora e precursora de B:
Expresso de RAG 1/2 +
Expresso TdT (que leva
adio de nucletidos N)
recombinao de v para dj
num nico alelo

Expresso do receptor da
clula B
Primeiro: Expresso
cadeia (5), no citoplasma e

148

depois na membrana celular. (no estvel sozinha)

Depois, expresso de e v-pr B (cadeias leves substitutas)
E ainda, expresso de protenas Ig, Ig, fundamentais para a transmisso de sinal
(caudas mais longas que as anteriores, que podem ser fosforiladas = activao)

A expresso deste conjunto essencial pois fornece informao clula:

Se a recombinao do 1 alelo eficaz, no necessrio haver segunda recombinao

(a clula deixa de expressar RAG e TdT). A clula entra em proliferao e origina clulas
com a mesma recombinao. Depois, quando a proliferao pra, as clulas comeam
novamente a expressar RAG (mas no de TdT, no h adio de nucletidos N),
gerando nova recombinao da cadeia leve k (deixa de precisar das cadeias substitutas
e v-pr B, no so transcritas).

Receptor da clula pre-B (pre-BCR)

- Inibio da recombinao do gene da cadeia H

(excluso allica)
- Diminuio da expresso dos genes rag
- Diminuio da expresso da TdT
- Sobrevivncia e proliferao das clulas pr-B
- Estimulao da recombinao da cadeia leve
- Paragem da transcrio das cadeias leves
substitutas

Excluso allica (cadeia pesada)

Se a recombinao do 1
alelo no for eficaz, d-se a
recombinao do 2 alelo. Se
tambm este no for eficaz, a
clula morre
Uma recombinao eficaz
do 2 alelo leva transcrio da
protena (cadeia pesada)

149

Excluso allica e excluso de isotipo de cadeia leve

Recombinaao da
cadeia leve:
alelo 1 k alelo 2 k
recombinao alelo
1 recombinao
alelo 2

Co-expresso de IgM IgD

Produo simultnea de protenas
e na membrana: transcripto primrio com
2 locais de poliadenilao; splicing
alternativo: produo de cadeia
Segmentos
e
: mesma
recombinao da zona varivel (igual
expresso de Ig); a nica diferena reside na
zona constante que no tem nada a ver co a
interaco com o antignio

150

Processos de seleco na maturao dos linfcitos

Podem migrar para a periferia

seleco positiva:
Interaco fraca entre Ig e antignio da
medula ssea (auto-antignio)
Interaco de alta avidez
seleco negativa:
Alterao da Ig, recombinao de
genes de cadeias leves (expressa RAG
de novo)
Processos de seleco ocorrem
quando as clulas ainda so imaturas

Pontos de verificao no desenvolvimento dos linfcitos

Pontos de
verificao iguais
aos das clulas T
14. O complexo de
genes de

Histocompatibilidade principal (MHC)

14.1. Aspectos gerais do MHC no homem e no murganho

151

H-2: MHC em murganhos

HLA: MHC no homem
DLA: MHC no co

Um gene que codifica as diferentes molculas

MHC
MHC I:
- murganho: H2-D/K
- homem: HLA-B/A/C
MHC II:
- murganho: H2-A/E
- homem: HLA-DP/DQ/DR
MHC III:
- codificadas protenas como o caso de protenas do
complemento, citocinas (TNF-a) e factor B, etc.
Esto nos cromossomas 17 e 6, repectivamente no murganho e no homem
14.2. Estrutura das molculas MHC
MHC I
Superfamlia das imunoglobulinas
Dois domnios 1 e 2 de ligao ao
pptido, domnio Ig, domnio transmembranar e
domnio citoslico (ligado a pptido no
covalentemente e no ligado membrana
Fenda de ligao ao pptido (codificada
pelas zonas 1 e 2) (onde o pptido se liga)
Pptido: 8-10 res. de a.a.
Oito cadeias pragueadas antiparalelas +

2 hlices
Nas posies 2 e 8 h motivos mais frequentes que
permitem uma melhor adaptao s molculas MHC I
Vrias molculas MHC podem ligar-se ao mesmo pptido
e o mesmo MHC pode-se ligar a vrios pptidos =
Promiscuidade
Os resduos que variam so os que se encontram virados
para cima

MHC II
Duas cadeias polimrficas (2 pptidos, um alfa e
outro beta)
Domnio
de
Ig
(proximo
da
regio
transmembranar)
152

A fenda de ligao feita por alfa1 e beta1

A abertura maior: permite a ligao a um pptido maior
Grande variabilidade (+ de 600 variantes)

14.3. Os genes do MHC

As molculas MHC I e II so mais

polimrficas da espcie (mutao que
mantem o funcionamento da prot e
existe em mais de 1% da populao).
Existem
outras
protenas
codificadas (protenas expressas no
proteassoma,
do
complemento,
citocinas) cujos genes esto localizados
neste loci (MHC)

153

As
clula
s
MHC I
e II do
pai e
da
me
pode
m ser muito diferentes, da a
variabilidade gentica das populaes.
Ao conjunto dos loci do MHC I e II que se encontram num determinado cromossoma
chama-se haplotipo.

Funes dos MHC

Os genes MHC controlam respostas imunes,

podendo um produzir anticorpos e o outro no,
sendo isto dependente do MHC ligar-se ou no
ao pptido, ou seja, ter ou no MHC capazes de
dar resposta

Controlam a rejeio de transplantes: complexo

de histocompatibilidade (rejeitam o transplante
pk consideram como estranho as molculas MHC
do dador. O conjunto MHC-peptido diferente e
dado como estranho)

Controle sobre os ligandos dos receptores

inibidores: cl. NK no so activadas e no
destroem as clulas alvo

154

 A
diminuio
da
expresso de molculas MHC I
ocorre
em
infeces
e
alteraes
tumorais.
A
variabilidade de molculas
MHC
permite
uma
apresentao muito maior de
Ag.

14.4. A expresso das molculas MHC

MHC I: expressas em quase todas as clulas nucleadas

MHC II: expressas em APC, cl. T activadas ou cl. epiteliais do timo

(apresentam s clulas T)

Aumento da expresso de molculas MHC classe II por IFN-

155

12. A activao e diferenciao da clula B

12.1. A fase de diferenciao do desenvolvimento da clula B

Diferentes tipos de clulas B

. MZB zona marginal
. FOB cl. B foliculares
. B-1 (produzem IgM)
As clulas B imaturas no auto-reactivas
saem da medula ssea em direco ao bao.

No bao amadurecem em dois tipos:

Clulas B da zona marginal (MZB) cuja
reaco aos auto-antignios muito fraca
Clulas B foliculares (FOB) cuja reaco aos auto-antignios fraca. Residem
nos folculos do bao ou rgos linfides secundrios (polpa branca do bao);
polpa vermelha muito vascularizada ( eritrcitos)

156

Clulas B1 tm origem em precursores fetais ou imediatamente aps o

nascimento e so residentes nas cavidades pleural e peritoneal. Produzem anticorpos
naturais (IgM) polireactivos. So clulas da imunidade inata.

Antignos das clulas B

Protenas solveis
Pequenas partculas
Antignios ligados a outras clulas imunes (DC, M, FDC) por FcR, CR ou CLR
M macrophage
FDC follicular dendritic cell
CLR C-type lectin receptor

Respostas de anticorpos a antignos

As repostas podem ser ou no dependentes das clulas T
TD dependentes das clulas T, reconhecem pptidos
TI independentes das clulas T, normalmente no tm pptidos
- TI-I os antignios so ligandos de TLR ou estruturas altamente
polimricas (partculas virais)
- TI-II os antignios so polisidos
As respostas a antignios TD do origem a anticorpos de alta afinidade, com
mudana de istipo de cadeia pesada (IgM + IgG + IgA) e a clulas B de memria e a
plasmcitos de longa durao. Os plasmcitos segregam Ig.
Fases da resposta humoral

Activao Proliferao
Diferenciao
157

Plasmcitos: segregam anticorpos, primeiro do tipo IgM e depois outros Ig

O modelo dos trs sinais da activao da clula B

Reconhecimento do antignio por Ig

da clula B
1 sinal: antignio da clula B
(apresentado
por
MHC
II
aps
processamento resultante da endocitose do
antignio, degradado em pptidos) faz
ligao cruzada com TCR da membrana da
clula T = cross-link
2 sinal: CD40 (cl. B) + CD40L (Th)
3 sinal: produo de IL-2 pelas
clulas activadas, para a qual existem
receptores na membrana das clulas B
transmisso de sinal

Complexo receptor da clula B BCR

BCR = IgM + (Ig + Ig)

158

Ig + Ig possuem caudas citoplasmticas resduos ITAM: motivo activador

baseado na tirosina dos imunoreceptores
Quando ocorre ligao ao antignio os domnios ITAM so fosforilados por
cinases Src: Lyn, Fyn, Blk

Ligao cruzada do antignio com os TCR

de membrana
Induzir a activao das cinases Src
Estas cinases tm domnios SH2:
reconhecem as tirosinas (Y) fosforiladas
Tirosinas (Y) fosforiladas so locais de
atracagem dos cinases
As Lyn e Fyn tm miristato e palmitato
(recrutam a lyn e fyn para as jangadas lipidas)
na regio NH2
Depois de se fosforilar a regio ITAM liga-se o Syk
Os fosfatases tm aco inversa aos cinases, desfosforilando as tirosinas,
garantindo um equilbrio fosforilado/desfosforilado
Fosfatases: CD45, SHP1, etc.

159

Passos iniciais na activao da clula B

1. Ligao do antignio
2. Cinases Src prximas da membrana so activadas,
fosforilando as tirosinas
3. A Syk liga-se s tirosinas fosforiladas
4. Ocorre fosforilao da protena adaptadora BLNK
pela Syk
5. Ligao da BLNK ao Fosfolipase C2
6. Btk fosforila o fosfolipase C2 (activao) devido
atracagem que estabelece com este pelos resduos SH2
Transmisso de sinal pelo complexo BCR

Factores de transcrio: NFAT (leva

activao das clulas T, diferenciao
celular), NF-kB (controle de respostas
imunes), AP-1 (polimerizao da
actina, tamanho das clulas)
DAG = diacilglicerol
IP3: apresenta actividade de fosfatase,
activando a calcineurina NFAT
DAG: protena PKC, quando fosforilada
retm o NF-kB no citoplasma (inactivo)
desfosforilao NF-kB passa para
o ncleo (activo)
Rac: activao do cinase (JNK) activao do JUN AP-1
A cascata de activao leva activao de intermedirios o que leva activao de
protenas e factores de transcrio, estimulando a expresso de diferentes genes

Consequncias da activao:

160

expresso
B7
(coestimuladores)
. expresso MHC-II
. expresso de receptores de
citocinas e de BAFK (factor de
activao das clulas B)
. expresso receptor de
quimiocinas (CCR7) migrao
para o local de produo de
quimiocinas

Mecanismo de activao de clulas B mediado por clulas T auxiliares

Clulas T activadas por clulas apresentadoras profissionais (DC): CD28 das cl. T
reconhecem B7-1 e 2, passando a produzir CD40L; cl. B pode ento receber os 2 sinais
Activ. DC activ. cl.T cl. B (TD) [3 sinais (DC, CD40, citocinas)]

Resumo: Ag liga-se aos BCR. Ao lado dos

BCR esto as Iga e Igb que tm ITAM, que
tm tirosinas que vo ser fosforiladas por
proteinas da familia Scr (Lyn e Fyn). Ao
serem fosforilados servem de local de
161

ligao de proteinas com dominio SH2 como o caso da Syk, ou da BLNK, ou do

PLCgama:
1- Levam activao da Rac, que por sua vez activao de muitas cinases que
levam activao do cJun que faz parte do AP-1.
2- Activao do Ras, que por sua vez activao de muitas cinases que levam
activao do RAF, que levam activao do Erk1/2
3- Activao do PLC2gama, activao do IP3 (que levam activao do NFAT no
ncleo ) e o DAG (que levam activao do NF-KB no nucleo).

Co-receptor da clula B Iga, Igb, Igm, CD21 (receptor de proteinas do complemento),

CD 19 (fosforilado pela Syk e serve de locla de ligao do PI3K) e CD 81

13. PAPEL DO COMPLEMENTO NA ACTIVAO DA CLULA B

COMPLEXO CO-RECEPTOR DA CLULA B

Receptor do C3d = CR2 (CD21) + CD14 + CD81

Liga-se simultaneamente ao mesmo antignio e potencia a ligao do antignio ao
receptor e ao co-receptor = ligao mais forte!
CD19: marcador da clula B tem uma cauda citoplasmtica com leucinas
(fosforilvel) molcula adaptadora activao mais rpida das clulas B
Cooperao entre a imunidade inata e adaptativa.
REGULAO DA ACTIVAO DA CLULA B PELOS RECEPTORES DOS FC DAS IG

162

Quando j existem muitas Ig solveis passveis de ser reconhecidas por receptores e

existem complexos imunes que se ligam aos receptores das clulas B Activao da
protena com motivo inibidor (ITIM) Activa fosfatase Desforilao (contrariar a
aco dos cinases) Bloqueio da activao (sinalizao) das clulas B!
Ocorre quando j h muita produo de Ig para o antignio presente Mecanismo
para a diminuio da activao (activao ocorre nos rgos linfides 2)
RESPOSTAS IMUNES HUMORAIS A ANTIGNIOS PROTEICOS DEPENDENTES DAS
CLULAS T

Fase I Activao de linfcitos B pelo antignio e formao de linfcitos Th efectores

para o mesmo antignio;
Fase II Formao de plasmcitos com um tempo de vida curto e centros
germinativos;
Fase III Formao d eplasmcitos, com um tempo de vida longo e com maturao da
afinidade, e de clulas B de memria;
163

Fase IV Estimulao de linfcitos B de memria num segundo confronto com o

antignio.
2 Encontros triplos: DC + clula T + clula B
Encontro na regio T do bao ou gnglios, onde desaguam vasos sanguneos
(transportam cl T) e aferentes linfticos (transportam DC com o antignio)
Encontro entre clulas T e DC As clulas B so residentes da regio B folculos 1
(virgens no encontraram antignio) Cl B aproximam-se da regio paracortical e
cl T da regio cortical Clulas B e T encontram-se a meio caminho na membrana
dos folculos (Fase I) Encontro vital para a activao das clulas B, interaco
envolve o emparelhamento dos receptores membranares Formao de linfcitos B
efectores plasmcitos com um tempo de vida curto (1 semana) que produzem
apenas IgM e de centros germinativos (Fase II)

Migrao das clulas T para os folculos Nos folculos d-se o contacto entre as
clulas B (activadas pelo antignio e pelos linfcitos Th) e os FDC (Clulas Foliculares
Dendrticas) 2 encontro triplo (Fase III) Congregao: reaco dos centros
germinativos Proliferao de clulas B e T (na periferia existem cl T que produzem
citocinas e molculas de membrana contribuindo para a expanso) Expanso clonal
massiva d origem formao de folculos secundrios, cobertos por um manto de cl
B virgens.

164

Os centros germinativos apresentam:

- zona escura prxima das reas T, onde proliferam cl B que expressam IgM mas
no IgD - Centroblastos (tduplicao = 6-12 h)
- zona clara com clulas B que no se dividem Centrocitos. Nesta zona so
selecionadas as clulas B com receptores para o Ag. As que no tm sofrem apoptose.

Um 2 confronto com o mesmo antignio caracterizado pela expanso acelerada de

linfcitos V de memria e sua rpida diferenciao em plasmcitos produtores de
anticorpos de elevada afinidade, com tempo de vida curto (Fase IV).
165

DURANTE A PROLIFERAO:
- Hipermutao somtica: pontuais nos genes das Ig, 1 milho de vezes mais frequente
que a mutao de DNA nas outras clulas, necessrias clulas T (CD40, CD40L e
citocinas).
- Mudana de isotipo da cadeia pesada: cessa a produo de c que leva produo
de IgM, passando a ser produzidas outras: , , , etc. que do origem a IgE, IgG, e IgA,
respectivamente.
Pra a diviso e as clulas migram para uma zona com menos clulas onde existem
FDC Regio branca ou clara, a existem fenmenos de mutao que do origem a
fenmenos de mutao que podem passar a ter diferente capacidade de se ligar ao
antignio.
Apenas as que tm mutaes que resultam em maior afinidade se ligam ao
antignio das FDC e recebem estmulo de sobrevivncia.
Nos centrocitos existe ento um processo de seleco (no h proliferao): as
clulas que no se encontrem ligadas a factores de sobrevivncia (no receberam
estmulo) esto destinadas a morrer apoptose; se ocorrer ligao s FDC ocorre a
expresso de protenas anti-apoptose (Bcl-2) e voltam regio escura Novo ciclo
(Hipermutao Somtica).
sada dos centros germinativos temos clulas de memria com muito maior
afinidade para o antignio que as clulas B que entraram; clulas B de memria e
os plasmcitos de longa durao (diferenciao) migram para a medula ssea.
O MECANISMO DE RECOMBINAO NA MUDANA DE ISOTIPO

166

 Cadeia pesada: a jusante de cada regio constante existe uma regio S: Switch
repeties tandem muito ricas em guaninas.
Antes de se dar a mudana de isotipo (intragnica) ocorre a quebra e aproximao
de 2 regies S, ligando-se uma outra, a regio do meio desaparece e a regio que
existe junto de vdj a 1 a ser expressa: c c = IgG IgE
Enzima de recombinao AID: desaminase da citidina especfico dos folculos.
Tem de haver transcrio do DNA (seguido de processamento mas no traduzido,
estril) para que as 2 regies S sejam abertas e o DNA seja exposto e as citidinas
substitudas por uracilos.
AID muda o C a U UNG retira os U e a endonuclease corta
UNG = glicosilase do uracilo buracos: nucletidos sem bases, zonas de possvel
actuao do endonuclease Reaparao do DNA: ligao de 2 zonas S, no se
sabe como apenas que envolve Ape1.
Para a produo de anticorpos de maior afinidade necessrio: Clulas T auxiliares
produtoras de citocinas que expressem CD40 para se ligar ao CD40L de clulas B,
expresso de AID e transcrio das regies S.

167

168

169

As clulas que saem para o exterior (plasmcitos ou Clulas B memria) so clulas

que esto a produzir diferentes Igs na regio varivel (pk sofreram hipermutao) e na
constante (pk sofreram mudana de isotipo) e como cada isotipo tem uma funo
diferente. As clulasB memria mantm as Igs na membrana, enquanto que os
plasmcitos vo segregar Igs. Para formar clulas B memoria preciso IL-2 IL-10 e
BCL6 (nos plasmcitos reduzido, o que aumenta o Blimp-1)
HIPERMUTAO SOMTICA
S OCORRE NAS REGIES VARIVEIS IGS
MUTAES DEPENDEM DA EXPRESSO DE AID
EXISTEM LOCAIS DE MAIOR FREQUNCIA PARA A EXISTNCIA DE MUTAES = CDR, ONDE EXISTEM
HOTSPOT PARA MUTAO (TRIPLETOS : A/T, G/A, C)
1 RESPOSTA ORIGINA POUCA MUTAES MAS COM O PASSAR DO TEMPO EXISTEM MAIS CICLOS DE
ENTRADA NA REGIO ESCURA ORIGINANDO CADA VEZ MAIS MUTAES ( VELOCIDADE DE
MUTAO )
CR1 CR2 CR3

170

14. O complexo de genes de Histocompatibilidade principal (MHC)

14.1. Aspectos gerais do MHC no homem e no murganho
H-2: MHC em murganhos
HLA: MHC no homem
DLA: MHC no co

171

Um gene que codifica as diferentes molculas MHC

MHC I:
- murganho: H2-D/K
- homem: HLA-B/A/C
MHC II:
- murganho: H2-D/E
- homem: HLA-DP/DQ/DR
MHC III:
- codificadas protenas como o caso de protenas do
complemento, citocinas (TNF-a) e factor B, etc.
14.2. Estrutura das molculas MHC
MHC I
Superfamlia
das
imunoglobulinas
Dois domnios 1 e 2
de ligao ao pptido, domnio
Ig, domnio transmembranar e
domnio citoslico (ligado a
pptido no covalentemente e
no ligado membrana
Fenda de ligao ao

pptido (codificada pelas zonas 1

e 2)
Pptido: 8-10 res. de a.a.
Oito cadeias pragueadas
antiparalelas + 2 hlices
Nas posies 2 e 8 h motivos mais
frequentes que permitem uma
172

melhor adaptao s molculas MHC I

Vrias molculas MHC podem ligar-se ao mesmo pptido e o mesmo MHC
pode-se ligar a vrios pptidos = Promiscuidade
Os resduos que variam so os que se encontram virados para cima

MHC II
Duas cadeias polimrficas
A abertura maior:
permite a ligao a um pptido
maior
Grande variabilidade (+ de
600 variantes)

173

14.3. Os genes do MHC

Existem outras protenas codificadas (protenas expressas no proteassoma, do

complemento, citocinas) cujos genes esto localizados neste loci (MHC)
174

Funes dos MHC

Os genes MHC controlam respostas imunes,

podendo um produzir anticorpos e o outro no,
sendo isto dependente do MHC ligar-se ou no
ao pptido, ou seja, ter ou no MHC capazes de
dar resposta
175

Controlam a rejeio de transplantes:

complexo de histocompatibilidade

Controle sobre os ligandos dos receptores

inibidores: cl. NK no so activadas e no
destroem as clulas alvo

A
diminuio
da
expresso de molculas MHC
ocorre
em
infeces
e
alteraes tumorais

14.4. A expresso das molculas MHC

MHC I: expressas em quase todas as clulas nucleadas

MHC II: expressas em APC, cl. T activadas ou cl. epiteliais do timo

(apresentam s clulas T)

176

Aumento da expresso de molculas MHC classe II por IFN-

15. Processamento e apresentao de antignios a linfcitos T

Processamento: entrada ou sntese de antignio e modificao
Apresentao: exposio do antignio pelo MHC I
MHC I e II: 2 vias de processamento e apresentao (dependentes da origem dos
pptidos)
Vias endgena e exgena de processamento de antignio

177

Via endgena
Antignios produzidos no interior da clula: podem ser prprios ou aqueles que
passaram para o citosol.
Associao a MHC I activao Tc CD8+ morte das clulas infectadas
Via exgena
Antignios provenientes do exterior. Apenas as APC fazem esta via.
Pptidos associados a MHC II activao de Th CD4+ (auxiliam clulas B)
destruio dos patogenes

Via de processamento e apresentao de antignio por MHC I

Via clssica

ER endoplasmic reticulum
TAP transporter associated with antigen processing
ERAP ER aminopeptidase associated with antigen processing
178

Quais os pptidos apresentados por MHCI? Pptidos de Ag sintetizados dentro

da prpria clula (vrus, bactrias intracelulares)
Proteinas so Ub e depois degradadas (no so apresentadas na forma nativa)
Degradao ocorre nos proteossomas (formando pequenos pptidos que
migram para o citoplasma novamente.
Pptidos: citosol RE Golgi
Auxlio de chaperones (HSP70) que permite que as proteinas fiquem funcionais.
Na membrana do RE existe um complexo com as proteinas TAP1 e 2 que transportam
os pptidos para o interior do RE (transportadores ABC, dependentes de ATP).
No RE esto a ser sintetizados duas proteinas (cadeia pesada e leve da MHCI)
O pptido liga-se fenda e translocada pelo Golgi para a membrana da clula onde
pode ser apresentada a uma molcula CD8.

Estruturas dos proteossomas

Standard: existe em todas as celulas.
sub. cataliticas , sub. para
estabilizao e controle de entrada.
Imunoproteossoma: sub. 11S em vez
de 19S (protena PA28 envolvida);
cadeias so substitudas por
proteinas (LMP-2/7, MECL-1) vao
clivar mais facilmente peptidos com
res. aa neutros ou bsicos.
A maioria dos pequenos peptidos (810 res aa) so mais frequentemente
clivados no imunoproteossoma (celulas expostas a IFN- mais proprcias a produzir
peptidos capazes de se ligarem s molculas de MHC I).
Proteossoma Comum quebra a seguir a aa hidrfobos, bsicos ou cidos
179

Imunoprotessoma quebra a seguir a aa hidrfobos e cidos

Ubiquitinao de protenas

Chaperones de molculas MHC classe I

ERp57 endoplasmic reticulum protein 57

Chaperones tambm ajudam a

montagem das molculas MHC I

MHC I: enrolamento ajudado pela

calnexina (chaperone)
Produo da cadeia ligao da cadeia
(B2 micro-globulina) calnexina
separa-se (qd j estar formada a molcula MHCI) liga-se uma protena do lmen do
RE, calreticulina (ajuda a manter a conformao das MHCI), auxiliada por uma outra
protena (tapasina, uma chaperone, parte entre as TAP e a MHC I acabada de
sintetizar).
O pptido degradado por aminopeptidase.
Com o auxlio da tapasina liga-se MHC I transporte para Golgi exposio

180

Excepo: DCs conseguem apresentar pptidos para MHC I !

Via de apresentao cruzada de antignios exgenos por MHC I

ERAD ER associated degradation

Antignios associados a clulas capturados

por fagocitose (via endo/lisossomal tm
de passar para o citosol para ser
degradados no proteossoma).
Predominam protenas derivadas de
clulas mortas.

Mecanismos possveis de passagem para o

citosol:
- Endossomas rompem-se e libertam o seu
contedo
- Exportao selectiva de antignios dos
endossomas
por
transportadores
especficos
- Fuso dos fagossomas com o ER e
libertao dos pptidos pelo ERAD
- Endocitose por caveolas no passa por endossomas conduz directamente ao ER
- Fagossomas recrutam NOX2 quem neutraliza o pH cido aumentando a transferncia
para o citosol

Por outras palavras, existem vrias hipteses:

- Pptidos podem vir de outras clulas atravs de gap juctions
- Fugas nos endo/lisossomas: sada para o citosol
- Fagossomas podem fundir-se com a membrana do RE pptidos libertados
(controle) degradao dos pptidos MHC I
- Processos de internalizao directa para o RE sem entrar na via dos lisossomas ou
proteossoma (via independente)
Via de processamento e
apresentao de antignio por
MHC II

181

Os pptidos vindos do exterior tm de ser internalizados: fagocitose, macropinocitose,

e endocitose mediada por receptores. Vo para os lisossomas e endossomas que tm
mtas proteases e por isso, partem a protena. No RE forma-se a molcula MHCII e na
fenda ligada uma regio invariante, sendo transportada pelo golgi e fundida na via
exocitica. Nesta via as peptidases vo quebrar a regio invariante ficando apenas um
pequeno pptido (CLIP). Existem ainda umas molculas semelhantes (HLA-DM)
MHCII que vo mudar a conformao das ltimas e o CLIP sai e entra um pptido mais
especifico (de origem externa). Migram para a membrana plasmtica e vao apresentar
o pptido as clulas CD4+
Hipteses:
- Macrfagos (maior capacidade fagoctica, bons destruir mas no a apresentar),
MHC II
- Clulas B: receptor TCR (endocitose mediada por receptor) expressam bastante
MHCII
- Clulas dendrticas expressam MHCII clulas de imunidade inata que expressam
muitos receptores que reconhecem PAMPS
DCs comeam a migrar da periferia, perdem parte da sua capacidade endoctica mas
aumenta a expresso de MHCII e de molculas co-estimuladoras Desaguam no
regio T dos gnglios linfticos encontrando clulas T especficas para antignio
(favorece encontro resposta adaptativa primria).
Pptidos internalilzados em vesculas (endossomas lisossomas)
Interaco entre as molculas MHC classe II e a cadeia invariante li (CD74)
Cadeias e ligam-se protena
invariante que se encaixa na fenda (de
ligao ao pptido) das MHC II:
conveniente para impedir o encaixe de
outros pptidos do citosol. H medida
que passa pelos compartimentos, a
protena invarivel quebrada
(desgaste) at ficar s o pptido CLIP,
que vai encaixar.

Papel de HLA-DM/H-2M
182

Nas clulas B e algumas

DC expressa uma MHC
II DO (HLA-DO)
fortemente associada
HLA-DM.
HLA-DM: trocador de fragmentos de CLIP por fragmentos provenientes da degradao
do pptido (fuso de endossomas com vescula exoctica).
Tambm sintetizada outra protena HLA-DO (expressa sobretudo nas clulas B) que
inibe a actividade de HLA-DM.
A inibio suprimida quando se d a internalizao do antignio (uma vez que a
internalizao de antignio leva dissociao de HLA-DO da HLA-DM); por isso, as
clulas B apresentam preferencialmente os antignios exgenos.
HLA-DO promove a apresentao de antignios reconhecidos por BCR. (receptores das
clulas B)
Apresentao de antignios lipdicos por molculas CD1 a clulas T ou NKT

Existem clulas que no reconhecem

pptidos
mas
lpidos,
sobretudo
provenientes de micobactrias.
Molculas CD1 (~MHC I e I b) apresentam
lpidos:
CD1a: via passa pelos endossomas mais
precoces (pH)
CD1b,d: outros pelos mais tardios (pH).
CD1d de lpidos do prprio (fosfolpidos)
CD1c: 50/50

183

CD1a, CD1b, CD1c apresentam antignios lipdicos (derivados de micobactrias) a

clulas T TCR.
CD1d apresenta auto-antignios lipidicos a clulas NKT com uma cadeia do TCR
invariante.
16. O RECEPTOR DA CLULA T: ESTRUTURAS DAS PROTENAS E GENES

CARACTERSTICAS BSICAS DOS RECEPTORES TCR E TCR

AMBOS OS RECEPTORES TM UM REGIO
CONSTANTE E UMA VARIVEL;
EXISTEM 2 TIPOS DE TCR:
- (90-99%) TECIDOS LINFIDES 2, PPTIDO
MHC
- (5%) MUCOSAS DO INTESTINO E DO
PULMO E NA PELE

DIFERENAS: ABUNDNCIA E LIGANDOS

(NO GAMA DELTA SO MT MAIS SIMPLES)
184

AMBOS PERTENCEM SUPERFAMLIA DAS IG!

TCR:

2 CADEIAS COM DOMNIO IG;

REGIO CONSTANTE , DOMNIO IG;
PPTIDO DE LIGAO LIGAO
PERSSULFURETO INTERCADEIAS ;
REGIO TRANSMEMBRANAR ;
CAUDA CITOPLASMTICA PEQUENA;
ESTES RECEPTORES NO TRANSMITEM O SINAL
PARA O INTERIOR DA CLULA ( DIFERENA
RELATIVAMENTE S IG), POIS AS CAUDAS
CITOPLASMTICAS SO MUITO PEQUENAS , APENAS
RECONHECEM O ANTIGNIO;
AMINOCIDOS CARREGADOS NAS PORES
TRANSMEMBRANAR ( INVULGAR ): LYS E ARG;
C: REGIO DESORGANIZADA , CADEIAS
PRAGUEDA , DOMNIO DIFERENTE DO NORMAL ;
CDRS (REGIES DETERMINANTES DE COMPLEMENTARIDADE ) ORIENTADOS PARA CIMA VARIAM DE
CLULA PARA CLULA ;
CDR1 CDR2

CDR3

CDR1 CDR2
185

PERIFERIA

CENTRO

PERIFERIA

O COMPLEXO TCR CD3

TCR EXPRESSO SEMPRE EM CONJUNTO
COM O COMPLEXO CD3 = TCR CD3 = 10
ITAM NO TOTAL RESULTANDO NUMA ELEVADA
TRANSMISSO DO SINAL ;
CD3 TEM 3 DMEROS: 2
HETERODMEROS (EPSYLON-GAMA E EPSYLON DELTA)( TM DOMININIO IG) E 1 HOMODMERO
(2 CADEIAS ZETA)(NO NA IG);
CADA UM TEM UM DOMNIO ITAM:
TIROSINAS QUE SO FOSFORILADAS E
TRANSMITEM O SINAL PARA O INTERIOR DA
CLULA;

186

RESDUOS DE CIDO ASPRTICO LIGAM-SE LISINA DA CADEIA DO 1 COMPLEXO CD3

POSSIBILITANDO A LIGAO DO 2 DMERO CD3 ;
A LIGAO COM O CIDO GLUTMICO E LISINA FACILITA A LIGAO AO 3 DMERO (ZETA)
ATRAVS DA LIGAO DE UM RESDUO DE ARGININA DA CADEIA AO CIDO ASPRTICO ;
MAS NO EST NEUTRALIZADO: 3 RESDUOS POSITIVOS E 6 NEGATIVOS A ASSOCIAO
TALVEZ SEJA ENTRE 2 DMEROS POIS J PERMITE A ANULAO DA CARGA (2 TCR), MAS
AINDA NO SE TEM A CERTEZA.

ORGANIZAO GENMICA

TCR

SEMELHANTES NO HOMEM,
MURGANHO E IDNTICOS AOS GENES
DAS CADEIAS LEVES DAS IG;

MUITO GRANDES : 1,1 MILHES

DE BASES ;

H OMEM: 61 SEGMENTOS J
(NAS IG ERAM 6) NA CADEIA (AUMENTO
DAS COMBINAES POSSVEIS );
SEGMENTO C (REGIO CONSTANTE) E
42 SEGMENTOS V;

TCRD: LOCALIZADO NO MEIO

DO GENE ; DESAPARECE QUANDO H
RECOMBINAO VJ, RECOMBINAO
DA CADEIA FAZ DESAPARECER GENE
DA CADEIA , LOGO IMPOSSVEL
FORMAR APENAS ;

POR ISSO MUITO GRANDE, POIS NA VERDADE SO 2 GENES!

187

TCR

MUITO PARECIDO COM O GENE

DA CADEIA PESADA DAS IG;

SEGMENTOS VARIVEIS : V, D E
J (VRIOS);

SEGMENTO CONSTANTE : C (S
EXISTE 1).

ISTO COMO SE TIVSSEMOS

UM GENE DENTRO DE OUTRO GENE

(DELTA DENTRO DE ALFA ). ASSIM, QD

FOR EXPRESSO UM TCRAB NO
EXPRESSO O TCRGD PK QUANDO H A
RECOMBINAO DE UM V A J A, TUDO O
QUE ESTA ENTRE ELES ( ZONA DA REGIO
DELTA) DESAPARECE .

TCR

VRIAS COMBINAES POSSVEIS;

C1 EC 2 DESEMPENHAM A
MESMA FUNO (RECONHECER E LIGAR AO
AG).

TCR
188

= PSEUDO GENE , CODO STOP NO INTERIOR QUE IMPEDE A FORMAO DE PROTENAS;

2 REGIES CONSTANTES : J E C.

189

D E ONDE VEM TAL DIVERSIDADE ?

SEGMENTOS D PODEM SER LIDO NAS 3 GRELHAS DE LEITURA

POSSIBILIDADE DE JUNO DE VRIOS SEGMENTOS D (VD NJ) DEVIDO AO CDR3.

O CDR3 ENCONTRA-SE LIGADO AO PPTIDO

D IFERENAS ENTRE TCR E IG:

RSS = SEQUNCIA SINAL DE

RECOMBINAO , ESPAADOR 23 OU 12 PB;

NAS IG APENAS SE PODEM COMBINAR

ESPAADORES DE 23 COM DE 12;

RAG = RECONHECIMENTO DAS RSS;

NOS GENES DOS TCR POSSVEL

COMBINAES DE V PARA J, MAS TAMBM DE D
PARA D;

POSSVEL INCORPORAR VRIOS D S,

AUMENTANDO A VARIABILIDADE E AS HIPTESES
DE RECOMBINAO (VD, DD, DD,

DJ);
REGIES DE LIGAO = OS CDR3 SO EXPRESSOS NOS LOCAIS DE JUNO DAS REGIES D E J,
ZONAS DE MAIOR VARIABILIDADE ;
VARIABILIDADE MUITO MAIOR QUE A DAS IG: 1015-1018 ;
AFINIDADE TCR << AFINIDADE IG.

VELOCIDADE DE LIGAO ENTRE OS

COMPLEXOS MUITO LENTA MAS A DE DESLIGAR

MUITO RPIDA;

190

 ESTABILIZAO FEITA NA 2 FASE PELA LIGAO DOS PPTIDOS AO CDR3.

CDR3

CENTRO DA LIGAO;
GRANDE FLEXIBILIDADE DE LIGAO;
MUITO PRXIMO DO PPTIDO, ZONAS QUE MAIS CONTRIBUEM PARA A LIGAO ;
MAIOR HIPTESE DE VARIABILIDADE E RECONHECIMENTO;
CDR3 O QUE TEM MAIOR FLEXIBILIDADE QUANDO SE LIGA AO PPTIDO : REACTIVIDADE
CRUZADA CADA TCR CONSEGUE RECONHECER MAIS QUE UM PPTIDO DEVIDO SUA
FLEXIBILIDADE .

CO-RECEPTORES: CD4 E CD8

SUPER -FAMLIA DAS IG;

CD4: 4 DOMNIOS;
CD8:
HETERODMERO
OU
HOMODMERO - HETERODMERO A FORMA
MAIS FREQUENTE ;

ASSOCIADOS
S
CAUDAS
CITOPLASMTICAS ESTO CINASES S RC E
RLK QUE ESTO NORMALMENTE
INACTIVADOS , A LIGAO DO TCR ACTIVA OS
CINASES ( DESFOSFORILADAS ) MAIS PRXIMOS
DOS RESDUOS ICAM E ESTES DESENCADEIAM
A

RESPOSTA

ATRAVS

DE

VRIAS

FOSFORILAES ;

A LIGAO DO TCR AO LIGANDO E S MOLCULAS MHC NEM SEMPRE MT ESPECIFICA PK COMO

SO SO CD3 QUE ESTO A INTERAGIR COM O PPTIDO E COMO H UMA CERTA PLASTICIDADE
NESTA LIGAO , MUITAS VEZES H LIGAES CRUZADAS , OU SEJA, UM TCR PODE RECONHECER
MAIS DO QUE UM AG-MHC

191

17. O desenvolvimento da clula T

Desenvolvimento das clulas T na medula ssea

Desenvolvimento das clulas T no timo

ISP=immature single positive

DN=double negative

Subconjuntos de precursores de clulas T

Murganhos normais: CD4+ CD8+ na maioria
Os que so CD4-CD8- so maioritariamente CD25+

192

Murganhos RAG -/-: CD8- CD4-, onde uns so CD44+CD25- e outros CD44-CD25+

DN1 a DN4 constituem 2-4% das clulas do timo

DN1 entram 50-100 clulas por dia vindas da medula ssea, mas vo sair 5x107 clulas
por dia
Em DN1 a proliferao controlada por sinais de c-kit
Em DN1-DN2 (muita proliferao) controlada por IL-7/IL-7R. Nestes estdios as
clulas ainda se podem diferenciar em DC, NK ou NKT
Em DN3 a proliferao controlada por pre-TCR. (Proliferao pra. Expresso de RAG.
Recombinao de genes. Esta recombinao no se d no gene da cadeia alga mas sim
nos outros genes. Comeam a ser expressos os pptidos correspondentes ao TCR
gama, delta, beta. Aqui ou se forma um TCRgd ou produz-se uma protena TCRb que
vai ser expressa na membrana conjuntamente com uma cadeia alfa substituta (ptalfa),
receptor da clula pr-T). NENHUM TCR expresso SEM A CO-EXPRESSO DO CD3
Em DN4 controlada por TCR
Receptor da clula pr-T
TCR : expressos em linfcitos que reconhecem
pptidos ligados a MHC I ou II, estando envolvidos em
respostas adaptativas
TCR : os linfcitos reconhecem um conjunto
diferente de antignios e pensa-se que estejam
envolvidos em respostas imunes inatas e na
manuteno da homeostasia de tecidos epiteliais,
como o intestino.

Enquanto que a apresentao de pptidos a linfcitos T imaturos vai permitir que

sejam seleccionados linfcitos T ao nvel do timo, a apresentao de pptidos a
lincitos T maduros que saram do timo vai permitir desenvolver uma resposta
imune

A seleco
Consiste:
1. Proliferao inicial com proteco da apoptose (DNISP) (as filhas tm a mm cadeia Beta, mas
as alfas podem ser diferente)
2. Proliferao mais tardia (ISP-DP)
193

3. Activao da transcrio de CD4, CD8 e TCR (gene da cadeia alfa)

4. Represso da transcrio de CD25 e de muitos genes de resposta ao Notch
5. Dimunuio da expresso transitria de RAG-1, RAG-2 e pT
6. Excluso allica
7. Silenciamento da transcrio dos genes dos TCR em DP

A fase DP CD4+CD8+

Rearranjo do locus TCR

Expanso das clulas TCR+
Seleco tmica

Modelo afinidade/avidez da seleco tmica

As cTEC expressam molculas MHC I e II mas

no expressam co-estimuladores. Se a
interaco entre as cTEC e as duplamente
positivas e o sinal que vai para dentro das
clulas no for um sinal muito forte as
clulas sobrevivem (Seleco positiva). Se
as clulas na presena das cTEC no
sofrerem qqr tipo de sinal significam que as
clulas no prestam e morrem (morte por
negligncia)
Aquando da seleco positiva no cortex,
que dura vrios dias, d-se uma srie de acontecimentos.
Sequncia de acontecimentos em DP:
1. Aumento da expresso de CD69
2. Diminuio da expresso de RAG (alfa e beta j esto feitos)
3. Aumento da expresso de CD5
4. Aumento da expresso de TCR/CD3
5. Aumento da expresso de CCR7 (migrao para a medula)
6. Aumento da expresso de MHC I
7. Aumento da expresso de Bcl-2 (protena anti-apoptotica)

Cerca de 75% vo ser diferenciadas em CD4+ e

25% em CD8+. O sinal transmitido pelo TCR-CD4
mt mais forte que o transmitido pelo TCR-CD8.
194

Qd a clula esta em CD4hiCD8lo se houver uma sinalizao continua vai haver a inibio de um
silenciador que esta a montante do gene da ZDTB7B e a clula diferencia-se em CD4. Qd o sinal
descontinuo o silenciador continua activado sendo inibido a expresso deste gene e o factor
de transcrio no produzido, ficando as clulas CD8.
A medula tmica e a tolerncia central
Na medula:
As mTEC
Controlam a expresso de antignios especficos de tecido (TSA).
Expressam molculas MHC I e II e co-estimuladoras CD40, CD80 e CD86 necessrias
para a eliminao de clulas T auto- reactivas.
Expressam o AIRE (factor de transcrio)
As DC:
No expressam TSA mas fazem a apresentao cruzada de antignios provenientes de
outras clulas a clulas T.
Expressam CD40, CD80 e CD86
O AIRE leva transcrio de protenas especificas de vrios rgos. Se os timocitos
reconhecerem fortemente estas protenas, morrem. Assim, os que vo sair no reconhecem
fortemente as protenas que so expressas da periferia. (seleco negativa)
Expresso ectpica de genes nas clulas epiteliais tmicas

Auto-antignios expressos nas clulas epiteliais da

medula e do timo (mTEC)

195

Tolerncia central a auto-antignios especficos dos tecidos

Mecanismos de tolerncia central

A seleco do reportrio dos TCR na afinidade para os complexos MHC-pptido

196

18. Activao dos Linfcitos T

Existncia de trs sinais necessrios para activao

Sinal 1:
ligao do TCR:pMHC

Sinal 2:
co-estimulao. Ligao da CD80/86 (expressas nas APC quando
ativadas) ao CD28 (expresso nas clulas T)

Sinal 3:

citocinas

18.1. SINAL 1: ligao do TCR : pMHC

Uma estimulao transitria do TCR pelo ligando desencadeia anergia em vez de

activao (reconhecimento no sustentado)
Para activao completa de uma clula T virgem necessria uma sinalizao
sustentada atravs do TCR de 30 horas (tempo mnimo) converso em Teff +
proliferao
O sinal sustentado est associado a um aumento da concentrao intracelular de Ca2+
Este necessrio para a manuteno de concentraes adequadas de factores de
transcrio no ncleo.

Estimulao em srie do TCR

Uma estimulao sustentada que resulte na activao completa da clula T requer o
envolvimento de 18 000 20 000 TCR com cerca de 100 pMHC.
Cada pMHC deve interagir sequencialmente com 180-200 molculas de TCR na superfcie
da mesma clula T.

Aglomerao de receptores na
membrana jangadas lipdicas,
alteraes
transitrias
na
membrana (+ enriquecidas em
colesterol e esfingolpidos); tal
devido aglomerao de
protenas de transduo de sinal

197

18.1.1. Transduo de sinal pelo TCR

Interaco do pptido MHC com

CD4
Activao de cinases: fosforilao
de seq. consensus dos domnios
ITAM, ancoragem de protenas do
citoplasma
Activao
transcrio

de

factores

de

A LcK est associada ao CD4 e

est inacativa. Quando o TCR
estimulado a LcK activada por
desfosforilao pela CD45 e vai fosforilar os resduos de ITAM do CD3. Esses resduos servem
de local de ligao de protenas com dominios SH2, como o caso da ZAP cinase. activada e
vai activar a fosfolipase Cg1, aumentando os nveis de clcio pela activao dos receptores de
clcio do RE, que vo activar a Calcineurina que por sua vez estimula a produo de NFAT. Por
sua vez, o PKC e o Ras iam activar uma cascata de cinases (MAP cinases) que levam a activao
do cFOS que se junta ao cJUN e forma o AP-1. Por fim, o Ras e o PLCg1 leva formao de
NFKB

Complexo TCR/CD3 e ITAM

CD3: subunidades / e /
TCR: subunidades /
Resduos tirosina (Y) dos ITAM so
fosforilados por cinases (Lck) activao

198

Famlias de cinases envolvidas na transmisso de sinal da clulas

Aps a ligao do TCR o acontecimento bioqumico mais precoce a activao das cinases
das tirosinas das protenas (PTK):
Famlias de PTK:
Famlia Src: Src; Lck, Fyn; Lyn; Blk
Famlia Syk: ZAP-70; Syk
Famlia Tec: Ltk; Itk; Btk, RLK
Estimulao do TCR e recrutamento de molculas efectoras

Regio cinase normalmente inactiva (cauda ligada) - PTK inactivo

CD45 um fosfatase (desfosforila), garantindo o balano de activao
Lck: fosforilao de outras protenas (ITAM)
Zap-70: fosforilao de protenas adaptadoras (LAT) onde outras protenas vo atracar
Protenas SOS: troca GDPGTP

PROTEINAS ADAPTADORAS (servem de acorador para outras protenas se adaptarem)

LAT domnio transmembrana. Regiao com

tirosina que pode ser fosforilada.
SLP-76 domnio SH2. Domnio rico em
prolina (ligao a SH3). Regio com tirosina
que pode ser fosforilada

199

A ligao ao TCR inicia a cascata do fosfatidil inositol

PIP2: fosfatidil inositol di-fosfato

IP3: trifosfato de inositol
Entrada de Ca favorecida: manuteno
da concentrao de Ca sustentvel
activao da calcineurina (fosfatase)
NFAT desfosforilado entrada no
ncleo (activo)

Activao do PLC-1

A via Ras/MAPK na activao da clula T

Cascata de cinases activadas por

mitognios activao e sntese de
factores de transcrio

Ligao ao TCR resulta na activao da via

NF-B mediada por PKC
200

IKK fosforila o inibidor do NF-B,

permitindo a libertao do factor de
transcrio que migra para o ncleo

Activao de factores de transcrio na clula T

Ligao ao TCR inicia a formao de um

complexo sinalizador multimolecular
Activao das integrinas (molcula de
adeso) para haver um contacto que dure mt
tempo.

AP-1 = Fos + Jun-P

AP-1: factor de transcrio da transcrio do
mRNA da IL-2
O complexo LAT/SLP-76 estimula alteraes
do citoesqueleto movimentos que levam
reorganizao do citoesqueleto

201

Alteraes morfolgicas e do citoesqueleto na sinapse entre uma clula T e uma APC

Movimentos do MTOC (microtbulos) permitem o

estabelecimento de interaces fortes entre clulas
T e APC nas regies onde h aglomerados de TCRs
Existncia de molculas de adeso
Aumento da expresso de integrinas de modo a
estabelecer contacto estreito: avidez da ligao

19.
Activa
o de
clulas
T
continu
ao

1.

19.
SINAL 2: coestimulao

O CD28
expresso
constitutivamente
nas
clulas
T
virgens,
os
restantes
s
202

quando so activadas
Receptores da imunidade inata existentes nas APC reconhecem grandes padres moleculares
PAMPs (ex: DNA ou RNA viral, peptidoglicano)
APC activadas por patogenes (grandes padres moleculares) expresso de molculas coestimuladoras (B7 ligando do CD28) e MHC
Sem infeco no ocorre activao das clulas T, no h necessidade de resposta
Necessrios pelo menos 2 sinais para haver resposta!
Aps activao das clulas T ocorre produo de citocinas (factor de crescimento celular),
permitindo a expanso e diferenciao

Diferentes receptores das clulas T e respectivos ligandos

nas APC
Receptores com domnios Ig homodmeros ou
monmeros
CTLA-4: expresso constitutivamente apenas em Treg

CD28
Glicoprotena da superfamlia das Ig (90kDa),
homodmero com uma ligao perssulfureto entre as duas
cadeias
Expressa constitutivamente em clulas T em repouso e
activadas. Expresso aumentada aps ligao de pMHC ao TCR.
Ligandos do CD28: B7-1 e B7-2
CD28 contribui reforando vias de transduo de sinal
mas tambm contribui para outras vias que no envolvem
directamente o TCR
A ligao do CD28 aos seus ligandos aumenta a
produo pelas clulas T de:

IL-2; IL-2R; IL-1; IFN-; TNF; IL-4; IL-5

Vrias quimiocinas e respectivos receptores
CD40L e CTLA-4
Via termina no AKT, aumenta a estabilidade do mRNA de citocinas

CD80 (B7-1)

Glicoprotena com 2 domnios Ig (50-60 kDa).

203

Aps interaco das APC com as clulas T a sua expresso aumentada nas APC s 48
horas diminuindo rapidamente s 72 horas

CD86 (B7-2)

Aps interaco das APC com as clulas T a sua expresso rapidamente aumentada
nas APC, mantendo-se assim at s 96 horas

- Nmero mnimo de TCR para activao da clula T

Sem CD28 : 8 000
Com CD28: 1 000 1 500
- Tempo mnimo para activao:
Sem CD28 : 30 horas
Com CD28: 6 horas

Transcrio dos genes IL-2

O CD28 potencia a transcrio do gene

da IL-2

mRNA de muito curta durao,

finamente regulados

O CD28 leva estabilizao dos mRNA,

fazendo com que estes perdurem por mais
tempo e, como tal, produzam mais citocinas
transmisso de sinal

IL-2R (receptor) em conjunto com o

IL-2 actividade autcrina de proliferao,
embora tambm tenha efeito parcrino

CD40 CD40L
CD40L: importante para tornar APC mais adequadas a
apresentar o antignio
Interaco com CD40, expresso constitutivamente pelas
APC
Clula virgem CD40L
PAMP + TLR APC expressa CD80 + CD86 interaco
com CD40 expresso constitutivamente torna-se independente,
j no precisa receber sinais de outros patognios
LICENCIAMENTO DAS APC

204

O CTLA-4 inibe a activao da clula T

No expresso constitutivamente
Apresenta 20 vezes mais afinidade
para o CD80 e CD86 que o CD28
Sinalizao negativa reguladora
B7 : CTLA-4 transduo de sinal
sinais inibitrios inibio de cinases,
expresso fosfatases (SHP-2) mecanismo
de desfosforilao paragem da
proliferao

19.2. SINAL 3: citocinas

Citocinas potenciam os outros dois sinais

Entrada em ciclo celular
Clulas memria permitem resposta tardia eficaz
Expresso Fas=CD45 apoptose (imploso da clula)
Degradao: DNA = resduos que diferem de 200pb morte celular programada
(electroforese com aspecto caracterstico, em escadote)
CD95+CD95L (ou Faz+FasL) cascata interveno de caspases activar DNAses
resduos em pequenas vesculas = corpos apoptticos, depois fagocitados por
macrfagos
205

Processo limpo = no h libertao dos componentes celulares

Cintica da expresso de genes nos linfcitos

T estimulados por antignio

Evoluo da resposta dos linfcitos T estimulados por antignio

A diminuio da expresso do TCR

Um TCR ao qual se ligou um Ag especfico e que foi completamente fosforilado
internalizado e degradado nos lisossomas.
A fosforilao do resduo de serina 126 da cadeia CD3 pela cinase C das protenas
(PKC) correlaciona-se com a internalizao do TCR.
Funo fisiolgica impedir a morte celular por sinalizao ou a estimulao
excessiva?

206

20. A diferenciao das clulas Th e funes efectoras

As clulas T nos GL em homeostase

Timo Ndulos Linfticos (NL), entrada
de linfcitos por venulas entrada na
zona paracortical (rica em clulas T)
Clulas DC: residentes nos gnglios
linfticos (GL) ou residentes na periferia
(s so activadas quando entram nos GL,
na zona cortical, pela linfa.
DC: encontro com linfcitos T na periferia dos NL pesquisa random das clulas T por
entre as DCs (contactos rpidos) se no encontrarem antignio, saem pelos
aferentes linfticos (linfa sangue outros NL)

As clulas T nos GL em activao

Estdio 1: contactos em srie
pouco duradouros. Contactos
com antignio transitrios (810h). Clula comea a receber
os primeiros sinais de
activao.

207

Estdio 2: Contacto sustentado (~15-20h). Clula T entra em ciclo celular. H medida

que proliferam, as clulas T diferenciam-se.
Estdio 3: proliferao e mobilidade rpida. Diferenciao linfcitos T: CD4+ ou CD8+.
(CD8+ de contactos mais longos que as CD4+, precisam de voltar a entrar em contacto
com o antignio).

As clulas T nos GL em diferenciao

TnF = auxiliares fulicolides

(folculos germinativos)
As clulas que se diferenciam
migram para o local onde o
antignio foi introduzido (zona
infectada) porque passaram a
expressar os receptores que as
encaminham para essas zonas.

A diferenciao das clulas T e funes efectoras

Subconjuntos de clulas T auxiliares

CD4+ naive diferencia-se:

208

Th1 resposta a patognios intracelulares

Th2 mucosas e epitlios
Th17 resposta a bactrias extracelulares
ThF auxlio na activao e diferenciao clula B

209

A diferenciao das clulas Th1 /Th2 e funes efectoras

Th0 produz IL2,4 e IFN

Encontro com DCs: Meio com IL12,27 ou
IL4 (citocinas diferentes) Diferenciao
em Th1 e Th2, respectivamente.
Clulas Th1 produzem IL2 e IFN
auxiliam clulas Tc e macrfagos
Clulas Th2 produzem IL4,5,10,13
auxiliam clulas B a diferenciar-se
(produo IgA e IgE), em respostas a
alergnicos, fungos ou parasitas

Factores de transcrio importantes na diferenciao das clulas Th1

NK, Tho IFN Macrfagos activados produzem

IL12, em conjunto com os sinais de TCR e IFN
cascata de sinais que activam o factor de transcrrio
STAT4 (em conjunto com STAT 1) Activa transcriao
de Tbet: activa transcrio de IL12 + inibe transcrio
IL4 (GATA3)

IL-12 e IFN- na imunidade mediada por clulas

IL12: Diferenciaao das CD4

IFN: factor de activao dos

macrfagos
capacidade fagoctica MHCII, coestimuladores(B7) Melhores APCs

210

(produzem intracelularmente para activao da NDPH oxidase + EROs e ERNs) clula superactivada
secreo de citocinas

211

Retroaco positiva na diferenciao da clula Th1

IFN inibe Th2 mas active macrfagos.

Principais funes efectoras das Th1 no murganho

Activaao de de macrfagos atravs

de IFN
Activaao de celulas B que
produzem Ig (boas opsoninas)
Activaao de celulas Tc celulas
citotxicas efectoras

Funes efectoras das clulas Th1 activao de macrfagos

212

Factores de transcrio importantes na diferenciao das clulas Th2

Meio com IL4
macrfagos
Eosinfilos, mastcitos (asma, alergias)
actividade celulas B (mudana de isotipo: produao de IgE e IgA)

Regulao cruzada das Th1/Th2

213

Principais funes efectoras das Th2 no murganho

Principais funes efectoras das clulas Th2

Diferenciao das clulas Th17

Redes de citocinas que controlam a
diferenciao das clulas T CD4+
efectoras

Clulas Th17:

Segregam IL1, IL6, TNF

Estimuladas por IL23 e TGF
Inibidas por IL4 (Th2), IFN (Th1)
Combate bacterias extracelulares

214

As linhagens das clulas T CD4+ - Th1

As linhagens das clulas T

CD4+ - Th2

As linhagens das clulas T CD4+ - Th17

As linhagens das clulas T CD4+ - ThF

- auxiliares nos folculos

21. A DIFERENICAO
DAS
- clulas B so activadas
CLULAS TC E FUNES
EFECTORAS
- mais activas
no combate a
DAS CTL
bac. extracelulares

215

AS APC ACTIVAM AS CLULAS CD4+ E CD8+, AS DCS SO AS MAIS IMPORTANTES POIS PODEM
ACTIVAR OS 2 TIPOS DE CLULAS T EM SIMULTNEO;
CLULAS TH CD4+ SO NECESSRIAS PARA A ACTIVAO DAS CD8+;
TRINGULO AMOROSO : TH CD4+ + DC + TC CD8+ - LIGAO ATRAVS DO MHC I;
IL-2 E RECEPTOR ENVOLVIDO FACTOR DE CRESCIMENTO;
CLULA TH ACTIVADA PRODUO DE CITOCINAS ACTIVAO DAS CLULAS TC
DIFERENCIAO DESTAS CLULAS EM CLULAS T CITOTXICAS (CTL);
A ACTIVAO DAS CD8+ PODE OCORRER DE 3 MANEIRAS

216

MODOS DE ACTIVAO DAS CD8+:

a)

LINFCITOS T CITOTXICOS = CTL DIFERENCIADAS

DC = PONTE ENTRE AS 2 CLULAS
IL-2 LEVA TOTAL ACTIVAO E TOTAL DIFERENCIAO

INTERACO DAS DC COM CD4+, EXPRESSO DOS CO-ESTIMULADORES CD40L=CD40,

VAI ACTIVAR AS CD8+ QUE SE VO DIFERENCIAR .

APRESENTAO CRUZADA DE ANTIGNIO;

APC INFECTADA POR VRUS;
DC INTERNALIZA A CLULA INFECTADA (P.E. CLULAS EPITELIAIS ) EXPRESSO DE CO ESTIMULADORES , DIFERENCIAO DAS CD8+

B)

C)

217

PRECURSORES DAS CTL (CLULAS VIRGENS) AINDA NO TM GRNULOS;

AS CLULAS CTL SO CAPAZES DE MATAR AS CLULAS INFECTADAS DIRECTAMENTE
ATRAVS DA LIBERTAO DO CONTEDO DOS GRNULOS ;
RGOS LINFIDES 2: APCTC (IL-2) PCTL (IL-12, IL-4, IFN-)
D IFERENCIAO CTL ARMADAS CONJUGAO (RGOS LINFIDES 3);
D URANTE A APOPTOSE DAS CLULAS-ALVO A MEMBRANA PLASMTICA ALTERA-SE E
FORMAM -SE CORPOS APOPTTICOS QUE EVITAM A LIBERTAO DO CONTEDO CELULAR E
SO FACILMENTE FAGOCITADOS POR MACRFAGOS;
ENORME ESPECIFICIDADE NA MORTE GRNULOS DIRECCIONAIS: APROXIMAM-SE DA
CLULA-ALVO E S A ATINGEM A ELA E NO ATINGEM A VIZINHANA NEM A PRPRIA CTL.

218

NCLEO PROTEICO MUITO DENSO E REGIO COM LAMELAS;

PH 5 PARA MANUTENO DA ACTIVIDADE ENZIMTICA;
A MEMBRANA DOS GRNULOS FUNDE -SE COM A MEMBRANA DAS CTL

EXOCITOSE DOS GRNULOS

219

CTL PESQUISAM AT ENCONTRAREM MHC I COM PPTIDO RECONHECIDO POR ESTAS :

1) 1 FENMENO DE ADESO NO ESPECFICO (LFA-1 E ICAM-1);
2) SE HOUVER RECONHECIMENTO LIGAO ESPECFICA MATEM-SE A ADESO;
3) O CENTRO ORGANIZADOR DOS MICROTUBULOS (MTOC) ORIENTA-SE PARA A CLULAALVO, ASSIM COMO O GOLGI E OS GRNULOS OCORRENDO A FUSO COM OS CTL;
4) CONJUGAO DAS CTL COM AS CLULAS -ALVO: FORMAO DO COMPLEXO DE ACTIVAO
SUPRAMOLECULAR (SMAC).

220

REGIO DE SINAPSE : LIBERTAO DO CONTEDO DOS GRNULOS

221

PERFORINAS:
HOMLOGA DA C9 (PROTENA DO COMPLEMENTO QUE FAZ POROS NA MEMBRANA);
POLIMERIZA: MONMERO COM 65 KD A;
EXISTE EM CTL E NK;
PH NEUTRO = SINAPSE = [CA2+]
PORO COM DIMETRO DE 20NM, MAIS PEQUENO QUE O DO C9.

222

223

GRANZIMAS:

PODEM

ENTRAR NA CLULA-ALVO MESMO NA AUSNCIA DE PERFORINA ( OS POROS NO

SO SUFICIENTEMENTE GRANDES PARA PERMITIR ESSA PASSAGEM), ENTRAM POR

RECEPTORES DE MANOSE

6-P 1

RECEPTOR RECONHECIDO INDEPENDENTEMENTE DE

CATIES (SG) E QUE FACILITA A ENTRADA DO GRANZIMA;

SAEM

DO ENDOSSOMA PARA O CITOSOL

PROTEASES DE SERINA

(NO

SE SABE COMO !) ONDE ACTUAM :

(A E B) INTERACO COM PROTEOGLICANOS (BASES A INTERAGIR

COM CIDOS);

PR PR-ENZIMA: PR-ENZIMA CLIVADO (PPTIDO LDER) DENTRO DOS GRNULOS (PH

5);
OUTRAS FORMAS DO GRANZIMA ENTRAR : ALTAS CONCENTRAES DE PERFORINAS
(FORMAO DE POROS PARA ENTRADA), MAS ESTES NVEIS TERIAM DE SER DEMASIADO
ELAVADOS PELO QUE O PROCESSO NO DEVE OCORRER DESTE MODO.

224

PROTEOGLICANOS : SERGLICINA (SER + GLI) CARREGADOS NEGATIVAMENTE , INTERAGEM COM

GRANZIMAS A E B E PERFORINA .

FASL: INSERIDA NA MEMBRANA CITOPLASMTICAS DAS CTL, INTERAGE COM FAS DAS CLULAALVO.

GRANULISINA: LISE BACTERIANA DIRECTA DE GRAM + E -.

CALRETICULINA: CHAPERON, INIBIDOR DA PERFORINA.
CATEPSINA C: ACTIVIDADE PROTEPSINA?

225

MECANISMOS APOPTOSE DE CLULAS ALVO POR CTL

NECROSE = SEM MEMBRANA PLASMTICA, LIBERTAO DO CONTEDO CELULAR PARA O EXTERIOR ,

PROCESSO INFLAMATRIO: LIBERTAO DE HIDROLASES DOS ORGANITOS PARA O ESPAO
EXTRACELULAR E DESTRUIO O TECIDO .
APOPTOSE = MEMBRANA PLASMTICA ALTERADA (BLEDDING), DECOMPOSIO DOS ORGANITOS,
CONDENSAO DA CROMATINA ( NCLEO DENSO), CONTENO DO CONTEDO CELULAR .
ELECTROFORESE EM GEL DE AGAROSE :
- APOPTOSE : DNA QUEBRADO NUCLEOSSOMA A NUCLEOSSOMA EM INTERVALOS COM 200PB;
- NECROSE : DNA DE TODOS OS TAMANHOS , QUEBRA INDIFERENCIADA.

226

 2 VIAS DE MORTE POR APOPTOSE ;

AS 2 VIAS SO ACTIVADAS PELAS CTL;
227

228

 VIA EXTRNSECA: SINAL DE APOPTOSE A LIGAO DE FAS (EXPRESSO CONSTITUTIVA) E

FASL (EXPRESSO NA MEMBRANA DOS GRNULOS) OU TNF QUE SE LIGA AO RECEPTOR QUE
INDUZ A APOPTOSE RECEPTOR TNFR1 PROTENA ADAPTADORA COM DOMNIOS DE
MORTE ACTIVAO DE PROTENAS INDUTORAS : PRO-CASPASE 8 CASPASE 8
(INICIADORA) ACTIVAO DE CASPASES EXECUTORAS : PR-CASPASE 3 (ACTUAM
DIRECTAMENTE SOBRE OS COMPONENTES ) CASPASE 3 ACTIVAO DE DNASE QUE
TRANSPORTADA PARA O NCLEO E CLIVA O DNA;
VIA INTRNSECA: ACTIVADA POR STRESS INTRA OU EXTRACELULAR COMO A DEPRIVAO
DE FACTORES DE CRESCIMENTO , DANOS NO DNA, HIPOXIA OU A ACTIVAO DE
ONCOGENES ESTES SINAIS CONVERGEM PARA O MITOCNDRIO ALTERAO
MEMBRANA EXTERIOR DO MITOCNDRIO E LIBERTAO DE PROTENAS ( CONTEDO DOS
GRNULOS GRANZIMA A E B) ACTIVAO DO CASPASE 9 CASPASE 3
(EXECUTORA).
AMPLIFICAO DA VIA INTRNSECA: LIBERTAO DO INIBIDOR LIBERTAO DO
CITOCROMO C INIBEM PROTENAS INIBIDORAS DA APOPTOSE (SMAC, DIABLO)
APOPTOSSOMA ACTIVAO DO CASPASE 3.

229

 CASPASES EXISTEM SOB A FORMA DE PR-ENZIMAS COM UMA UNIDADE GRANDE E OUTRA
PEQUENA QUE SE AUTO -ASSOCIAM ( DIMERIZAO PEQUENA + PEQUENA E GRANDE +
GRANDE ).
SUBSTRATOS DOS CASPASES: PROTENAS ESTRUTURAIS SO SUBSTRATOS PREFERENCIAIS
DOS CASPASES EXECUTORES; ACTUAM SOBRE AS HISTONAS , LMINAS DO NCLEO ,
PROTENAS DE REPARAO DO DNA E AT DO PRPRIO METABOLISMO DO DNA,
PROTENAS DE TRANSDUO DO SINAL ( CINASES , STAT S ) PROTENAS ENVOLVIDAS
MECANISMOS BSICOS DE SOBREVIVNCIA DA CLULA ACTIVAM ALGUNS DNASES.

230

GRANZIMA A:

PROTENA MAIS ABUNDANTE DOS GRNULOS ;

QUEBRA PROTENA NOS RESDUOS DE ARG E LYS;
PROTENAS-ALVO: ENDONUCLEASES MANUTENO DA ESTRUTURA DO NUCLEOSSOMA ;
LIBERTAO DE NM23-H1 QUE PROVOCA NICKS AOS ACASO DO DNA.

231

COMPLEXO 7:

GRANZIMA LEVA SUA QUEBRA E LIBERTAO DE NM23-H1 QUE CLIVA O DNA AO

ACASO ;
ACTUAO SOBRE HISTONAS DESTRUIO DO DNA; E LMINAS : QUEBRAM LIGAO
ENTRE A MEMBRANA E PORO, DESTRUINDO O INVLUCRO NUCLEAR ;

GRANZIMA B:

CLIVA A SEGUIR A RESDUOS DE ASP;

PODE CLIVAR DIRECTAMENTE O CASPASE 3 FRAGMENTAO NUCLEAR ;
CLIVA ICAD (INIBIDORA DA DNASE): DNASE LIVRE E TRANSLOCADA PARA O NCLEO
DEGRADAO DO DNA;
ALTERAO NA MEMBRANA EXTERNA DO MITOCNDRIO ONDE EXISTEM PROTENAS PRAPOPTTICAS ACTUA SOBRE BID E CLIVA-A TBID ( TRUNCADA) ACTIVA BAX E
BAD LIBERTAO DO CONTEDO DO MITOCNDRIO : ENDONUCLEASES E CITOCROMO C
LIGAO AO COMPLEXO APAF RECRUTA O PR-CASPASE 9 (APOPTOSSOMA)
ACTIVAO DO CASPASE 3 ( DEPENDENTE DE ATP) APOPTOSE !
232

TAMBM

ACTUA SOBRE O POTENCIAL DE MEMBRANA DO MITOCNDRIO LEVANDO

ACTIVAO DO APOPTOSSOMA;

VRIOS AGENTES QUE CONDUZEM AOS MESMOS RESULTADOS ;

FACTORES EXTRNSECOS LEVAM ACTIVAO DAS 2 VIAS;

FASL E FAS:
VIA EXTRNSECA;
PR-CASPASE 8 CASPASE 3 ACTUA DIRECTAMENTE HIDROLISANDO

22. Ponte entre a imunidade inata e a adaptativa

233

Clulas dendrticas
Caractersticas

Origem miloide
So clulas com morfologia dendrtica (pelo menos num estdio)
Apresentam uma expresso elevada de molculas MHC I e II (nenhuma clula
expressa tanto) e uma expresso intermdia a alta de molculas coestimuladoras (fundamental para activao clulas T)
Motilidade
Especializao de funo com o tempo, isto , mudana de um modo de
captura de antignio para um modo de estimulao de clulas T (DCs imaturas
capturam antignios; maduras apresentam-nos s clulas T)

Clulas dendrticas - Famlias

Clulas dendrticas intersticiais

Encontram-se DC imaturas em todos os rgos (excepto o crebro) nos espaos

intersticiais que so drenados pelos vasos aferentes linfticos (que entram nos
GL)
Tambm se encontram nas superfcies das mucosas como as do pulmo e do
intestino
No murganho todas as DC esplnicas expressam quantidades semelhantes de
CD11c, MHC II, CD80, CD86 e CD40
No bao h 2 subtipos (expressam ou no CD8):
zona marginal - CD8+ CD205+
zona clulas T - CD8- 33D1+
Nos GL as populaes de DC so mais complexas

Clulas de Langerhans

DC presentes na epiderme e em epitlios escamosos estratificados da faringe,

esfago superior, vagina e colo do tero externo
Distribudas em rede cobrem toda a superfcie do corpo. So a primeira
barreira imunolgica contra agentes externos
Possuem organitos citoplasmticos pentalamelares - grnulos de Birbeck
234

Expressam langerina (CD207) uma lectina dependente do Ca2+ com

especificidade para a manose e associada aos grnulos de Birbeck
Os seus precursores so moncitos GR-1hi

Clulas veladas

Captao de antignio
DC presentes nos vasos aferentes linfticos
Entram nos GL, mas no saem. Sofrem a apoptose.

Clulas dendrticas derivadas de plasmacitides

No homem precursoras de DC CD4+ CD11c semelhantes a plasmcitos

Segregam grandes quantidades de IFN/ em resposta a virus
No murganho so as DC Ly6c/BR-1+ B220+ CD11clo CD4+ que segregam IFN e
IL-12

Desenvolvimento das clulas dendrticas

235

Clulas estaminais clula me (receptor CD117) DC plasmocitide (CD4+)

precursor desconhecido (CD117) ou diferenciao:
moncitos dif. em DC e macrfagos (condies inflamatrias)
macrfagos
DC residentes (CD11)

Caractersticas das clulas dendrticas

Processo de maturao

Mudana de um modo de captura de antignio para um modo de estimulao

de clulas T
Alteraes no transporte e funo das MHC II
Redistribuio das MHC II dos compartimentos intracelulares para a membrana
plasmtica
Diminuio da endocitose e macropinocitose

Maturao de clulas dendrticas

236

Processo de maturao (~48h)

Clulas fagocticas estimulao de celulas T

Alterao do transporte e funo de MHC I e II
Re-distribuio de MHCII
capacidade fagocitose/endocitose
Quando nos gnglios comea a expressar MHC II

A maturao por ser induzida por:

Constituintes de microorganismos
Citocinas inflamatrias (TNF, IL-1)
Clulas T (interaces CD40L:CD40)
Stress (necrose, transplantes)

Captao de antignio

DC endocitam e fagocitam antignios, patognios e clulas mortas

Expressam receptores que medeiam estas actividades, capazes de internalizar e
apresentar antignios:
FcR, FcR (Ligandos: IgE e IgG funcionam como opsoninas, ligadas a
patognios)
Integrinas CD36 e v5 (corpos apoptticos)
Oses MMR e DEC-205 (lectinas)
Componentes de patognios - TLR
DC-SIGN
MR receptores de manose

Receptores
das
DC
semelhantes a lectinas do
tipo C

237

Processamento de antignio
DC encontram o antignio na periferia e migram para os GL onde os apresentam a
clulas T.
Esta caracterstica resulta de:
1. Alterao na vida mdia das MHC II entre as DC imaturas e as DC maduras.
Decomposiao das vesculas endocticas e ligao aos pptidos das MHC II.
Nas DC imaturas as MHC II so rapidamente internalizadas e recicladas com uma vida
mdia de cerca de 10 horas. Enquanto as DC so imaturas, os pptidos no se ligam
fenda das MHC II (s est ligado o pptido invarivel), depois so clivadas (zona CLIP) e
os pptidos j se podem ligar fenda das MHCII.
Nas DC maduras h uma sntese extensa e rpida de MHC II e a sua vida mdia de
cerca de 100 horas.

Expresso de MHC II e apresentao de antignio em DC imaturas e maduras

238

2. Nas DC imaturas as MHC II esto localizadas nos lisossomas. Aquando da

maturao vo passando para vesculas perifricas no lisossomais at que nas DC
maduras as MHC II esto localizadas na membrana plasmtica.
Percurso das MHCII: lisossomas vesculas mais perifricas maturao na
membrana
3. Bloqueio do processo de transferncia do pptido para as MHC II nas DC
imaturas. Os complexos pptido: MHC II s se formam quando as DC so expostas a
agentes de maturao.
4. Durante o processo de maturao h um aumento da sntese de MHC I e da sua
vida mdia e de algumas subunidades dos imunoproteassomas. As DC so muito
eficientes em apresentar pptidos exgenos atravs de MHC I. Os antignios
internalizados (de clulas apoptticas ou infectadas por virus) podem aceder ao citosol
e serem processados pelo proteassoma.
Processamento de antignio endgeno (provenientes do interior de clulas
infectadas). Fagocitose de clulas infectadas. No se conhecem vias: antignios saem
das vesculas endocticas para o citosol.
3 vias:
Antigneos endgenos MHC I CD8+
Antigneos exgenos MHC I CD8+
Antigneos exgenos MHC II CD4+
1. Apresentao cruzada de antignios a clulas T CD8+

Via especfica das DCs. Apresentao cruzada de antignio a clulas T (CD8 +) atravs de
molculas MHC I
2. Apresentao de antignios endgenos (MHC I) a clulas T CD8+
3. Apresentao de antignios endgenos (MHC II) a clulas T CD4+
239

Propriedades de migrao
Envolve quimiocinas e a expresso de diferentes receptores na membrana das DC.
Aquando do processo de maturao as DC passam a expressar CCR7 que reconhece as
quimiocinas CCL19 e CCL21 que so expressas nos GL na regio das clulas T.
Direco de migrao: gradiente de concentrao dos ligandos (sada dos aferentes e
entrada nos GL). expresso de receptor na maturao

Libertao de citocinas
Libertaao de citocinas importantes para o inicio da resposta imune.
IL-12: aps a estimulao por microorganismos as DC so a principal fonte de IL-12, em
particular as DC CD8+ virgem dif. clula Th1.
IL-23: produzida principalmente por DC activadas IFN produzida por DC
plasmacitides. Inibe a produo de IL-12 por DC durante infeces virais.
Sobrevivncia e manuteno de clulas Th17.
IL-2: mRNA da IL-2 aumenta 4-6 horas aps encontro com microrganismos. Factor de
crescimento das clulas T efectoras.
IL2 + IFN estimulao de NK produo de IFN manuteno de NK e
activao de macrfagos pelas Th1

IFN produzido por Th1: activao de macrfagos destruio de patogenes

intracelulares (ex. micobactrias)

240

Polarizao de respostas imunes

(ponte imunidade inata e adaptativa)
Em presena de CD4+ e condies diferentes de produo de DC.
IL12: resposta Th1
IL6, TGF: resposta Th17 (IL23 sobrevivncia)
Se nenhum destes actuar as clulas diferenciam-se por defeito em Th2.

23.
inata

Ponte entre a
imunidade
e adaptativa:
Clulas NK

Clulas NK
Clulas linfides
So
clulas linfides
com origem na
medula ssea

Constituem 10 15 % dos linfcitos do sangue

Maiores e com mais grnulos do que os linfcitos
Reconhecem e matam clulas aberrantes, sem activao prvia
Produzem factores solveis com efeitos microbiocidas e que sensibilizam outras
clulas do sistema imune
Linfcitos que no so B nem T, so linfcitos sIg-, TCR/CD3- que podem mediar morte
de clulas alvo, que no expressam MHC I, por meio de mecanismo dependente da
perforina
Podem levar morte de clulas alvo que j no expressam MHC = mecanismos
perforina, granzima
Existem no sangue, bao e fgado
Vida mdia: 7-10 dias

241

Clulas NK Funes

Citlise/morte de clulas infectadas por vrus e de clulas tumorais

i) Citotoxicidade natural
ii) ADCC - antibody-dependent cellular cytotoxicity (citotoxicidade celular
dependente de anticorpos)
Secreo de citocinas que regulam as funes e a diferenciao de clulas B e T
- GM-CSF
- TNF-
- IFN-

i) Citotoxicidade Natural

A citotoxicidade natural consiste na apoptose mediada por perforina e

granzimas.
Os grnulos com perforina/granzima esto prformados, ao contrrio do que
acontece com as clulas Tc CD8+.
Induzida por mecanismos semelhantes cl. T citotxicas
Mecanismos de apoptose intrnseca e extrnseca (perforinas e granzimas)
As clulas alvo das clulas NK expressam ligandos dos receptores activadores:
clulas infectadas por vrus, clulas malignas, clulas normais em stress
O sinal transmitido pelos receptores inibidores um sinal dominante.
Desencadeada em relao a clulas com vrus, malignas ou normais com stress

ii) ADCC
Antignios virais reconhecidos por
IgG ligado a CD16 expresso na membrana das NK
mecanismo de transduo de sinal activao da
clula libertao de grnulos morte da clula
infectada

242

As clulas NK expressam FcRIIIA (CD16) ao qual se ligam IgG que revestem

clulas modificadas ou infectadas
Esta via pode ser bloqueada pela ligao de receptores inibidores.

Secreo de citocinas

As clulas NK sensibilizadas e activadas

por envolvimento de receptores
activadores ou FcRIIIA segregam
citocinas
e
quimiocinas
imunoreguladoras.
Reconhecimento do alvo pelas NK

Existncia de elevado n de receptores que no sofre alteraes genticas, imutveis,

sem recombinao, diferente dos TCR, Ig
Expresso de receptores, activadores, inibidores
Receptores promscuos (mesmo ou diferentes ligandos)
Receptores reconhecem MHC I mas diferentes dos que reconhecem MHC II (outras
clulas)
Os receptores das clulas NK esto codificados no DNA em linha germinal.
As clulas NK individuais expressam receptores inibidores e activadores para o
reconhecimento do alvo e, frequentemente, expressam vrios receptores diferentes
de cada tipo.
Os receptores so frequentemente promscuos e com especificidades sobreponveis.
Os receptores das clulas NK ligam-se especificamente s MHC I, mas so funcional e
estruturalmente diferentes dos outros receptores que se ligam a estas molculas.
Complemento de actuao das CTL (quando o MHC I expresso); activadas quando
no existe expresso de MHC I

243

Clulas normais: receptores inibidores ligados

(ausncia de activao) superior ao sinal
activador NK no actua sobre a clula
Cancergena: s sinal activador morte da
clula alvo
Stress: produo de activadores ultrapassa
a inibio
Alterada: pode no expressar activadores mas
quando lesadas podem j expressar sinal
activador morte da clula alterada
Clulas NK receptores inibidores

Os receptores inibidores reconhecem molculas MHC classe I clssicas.

Quando ligados a MHC I as clulas no so activadas para degradao
O reconhecimento independente da origem do pptido.
Os receptores inibidores ligam-se a locais conservados nos domnios extracelulares das
molculas MHC classe I, os quais no esto envolvidos na fenda de ligao ao pptido.
Os sinais intracelulares enviados por estes receptores anulam os dos receptores
activadores e so sempre mediados por ITIM.
Existem 3 tipos de receptores inibidores:
Protenas semelhantes a lectinas do tipo C (murganho)
KIR (killer immunoglobulin-like receptor) (homem)
ILT (immunoglobulin-like transcript ) ILT2
Numa clula NK individual h expresso simultnea de receptores dos 3 tipos.
O mais comum serem expressos vrios (4-5) receptores inibidores diferentes, dos 3
tipos, por clula.
Os 3 tipos de receptores usam o mesmo mecanismo de sinalizao.

244

CD94 - 30kDa uma glicoprotena de membrana tipo II. uma lectina tipo C.
CD94 associa-se a NKG2A ou NKG2B, ambas de 40 kDa e com longas caudas
citoplasmticas com ITIM.
CD94/NKG2A liga-se ao HLA-E (homem) e ao Qa-1b
(murganho)
HLA-E uma molcula MHC classe 1b no clssica cuja fenda
de ligao ao pptido ocupada por sequncias leader das
outras molculas MHC classe I.

KIR glicoprotenas de membrana tipo I.

Monmeros ou dmeros.
2 ou 3 domnios extracelulares semelhantes aos das Ig S ou L tamanho das caudas
citoplasmticas:
S (short ) normalmente transmitem sinais activadores (76 84 res aa)
L (long ) transmitem sinais inibidores
KIR so expressas nas clulas NK e em algumas clulas T CD8 + com
fentipo de memria.
As KIR ligam-se com alta afinidade hlice 1 das molculas MHC
classe I, num local diferente do que reconhecido pelos TCR.

245

CLULAS NK SO CLULAS PERMANENTEMENTE EM VIGILNCIA

Muito mais rpidas que as CD8+

Clulas NK receptores activadores

Os receptores activadores reconhecem protenas ou oses derivados de patognios ou

molculas MHC no clssicas:
o Receptores de citotoxicidade natural - NCR
o Receptores da classe NKG2 (membros activadores)
NCR natural cytotoxicity receptor
NKG natural killer gene

246

Interaces entre clulas NK e clulas dendrticas

247

DCs activam NK
Cytolysis = morte
NK = maturao de DC ou levar sua lise
Mais tardio: Dc NK IFN- diferenciao clulas T Th1 auxilio de
macrfagos + auxilio CD8+ CTL

Activao e eliminao de DC mediadas por clulas NK

Infeco viral: interaces entre DC e clulas NK

248

Produo de IFN (imunidade adaptativa) + imunidade inata = resoluo da infeco

249

24. Citocinas e receptores de citocinas

Citocinas

Protenas 10 30 kDa, algumas sob a forma de monmeros ou de multmeros

Maioria segregadas
Ligam-se a receptores especficos para exercerem os seus efeitos
Podem ser produzidas por vrios tipos de clulas com um distribuio muito lata
Sintetizadas em pequenas quantidades
Produo finamente regulada
Exercem os seus efeitos de um modo autcrino, parcrino ou endcrino (raro)
Influenciam uma grande gama de clulas
A maioria das citocinas sintetisada por clulas Th activadas em resposta ao antignio
Ou
Sintetizada por macrfagos activados em resposta presena de microorganismos
As vidas mdias das citocinas e dos seus mRNA so muito curtas

Citocinas Propriedades

Pleitropia: uma citocina com efeitos diferentes em vrias clulas

Redundncia: diferentes citocinas com igual efeito em clulas diferentes
Sinergia: aco das duas em conjunto superior soma da aco de cada uma
Antagonismo: activao/inibio

Citocinas Funes

Regulao da resposta inata

Regulao da resposta adaptativa
Regulao do crescimento de clulas hematopoiticas
Regulao da diferenciao de clulas hematopoiticas
Quimiotaxia
A afinidade da ligao entre as citocinas e os seus receptores
K =10 10 - 10 12 M -1
250

As concentraes a que actuam so muito pequenas, da ordem do picomolar (mM 10 3, M 10 -6, nM 10 -9, pM 10 -12)
Frequentemente tm actividades redundantes

Citocinas estrutura

H vrias famlias de estruturas

As citocinas que so semelhantes estruturalmente podem ter funes muito
diferentes e vice-versa
A famlia estrutural maior a que integra citocinas com 4 cadeias pequenas em hlice
, ex: IL-2 e IFN-
Existe uma famlia de citocinas que possuem 4 cadeias longas em hlice qual
pertencem os IFN/ e a IL-6
Noutra famlia as citocinas possuem estruturas em -trefoil , por terem 12 folhas
pregueadas , ex: IL-1 e IL-18

A estrutura em -jelly roll tem a forma de um sino formada por homodmeros, ex:
famlia TNF
A estrutura em boto de cistena formada por homodmeros ligados por pontes
perssulfureto, ex: famlia TGF
As quimiocinas classificam-se de acordo com a presena de resduos de cistena na
extremidade amina, ex: CC, CXC, CX3C e C

251

Receptores de citocinas

252

253

254

Transduo de sinal: actuao sobre receptores; caudas citoplasmticas longas

recrutamento de STAT por cinases (Jak) fosforilao de Tyr translocao para o ncleo
Diferentes citocinas = diferentes cinases = diferentes STATs recrutadas

Citocinas que medeiam e regulam a imunidade inata

255

TNF-

Concentraes baixas
. Aco sobre clulas endoteliais, mais separadas
. Recrutamento de leuccitos
. Vasodilatao local
. Activao e produo de citocinas: sinal

256

Moderadas
. Clulas endoteliais e fibroblastos activados em maior extenso
. produo de clulas hematopoiticas
. Efeito endcrino no crebro: T do corpo (impedir crescimento bacteriano)
. Hepatcitos: produo de protenas fase aguda (opsoninas)
. prostaglandinas: vasodilatao e recrutamento
. coagulao nos vasos sanguneos
. Glndulas supra-renais: glucocorticides
. Activao de osteoclastos (macrfagos do osso)
. IL-2, 6, 8, TNF = aces redundantes

Elevadas
. Fgado + glbulos vermelhos
a ser destrudos choque
cptico TNF
. Vasodilatao brutal
. volume
. Corao + enfraquecido
oxignio e nutrientes no
chegam a todos os stios
. crebro sem sangue
. hipoglicmia: carncia da
produo de glucose e
consumo elevado

257

258

. Produo por DC e macrfagos aps

reconhecimento de microrganismos
. Actua sobre NK ou CD8+ activao
citotxica
. actuam sobre CD4+, CD8+, NK IFN-:
activao macrfagos (imunidade inata e
adaptativa)
. Produo inicial de TNF actuao sobre clulas produo de outras clulas

259

. = 20 tipos; = 1 tipo
. Interferem com a proliferao de vrus
. Ligam-se aos receptores das clulas transduo de sinal activao de GTPases
inactivao de RNA viral: RNAses degradam RNA; inibio da translao do RNA viral; inibio
da transcrio do RNA viral

260

. Anti-inflamatrias
. activao eosinfilos, neutrfilos
. Produo Treg e Th2
. Inibem produo de citocinas de Th1
. Estimulam diferentes T naive em Th2

261

As quimiocinas e os seus receptores

Quimiocinas receptores

262

Citocinas que medeiam e regulam a imunidade adaptativa

263

264

265

266

267

268

Citocinas que estimulam a hematopoise

269

270

25. TOLERNCIA IMUNOLGICA

CAPACIDADE

QUE OS LINFCITOS ADQUIREM DE NO RESPONDEREM A COMPOSTOS ENDGENOS ,

EVITANDO LESES NOS TECIDOS DOENAS AUTO -IMUNES .

RGOS LINFIDES CENTRAIS (TIMO E MEDULA SSEA): TOLERNCIA CENTRAL

(1 SELECO) LINFCITOS APRENDEM QUAIS OS COMPOSTOS A RESPONDER;
RGOS LINFIDES PERIFRICOS SE NO APRENDERAM A RESPONDER A ALGUM COMPOSTO
NA MO OU T AINDA PODEM APRENDER .

271

TOLERNCIA CENTRAL NOS LINFCITOS B

OS LINFCITOS IMATUROS ENTRAM EM CONTACTO COM OS AUTO-ANTIGNIOS PODEM TER VRIOS

DESTINOS CONFORME A FORA DA AVIDEZ :
EDIO DO RECEPTOR : TENTATIVA DE BAIXAR A AVIDEZ DA IG, RECOMBINAR GENE DA CADEIA
LEVE PARA DIMINUIR A AVIDEZ DO RECEPTOR ; MENOS COMUM : RECOMBINAO DA CADEIA
PESADA;
ANERGIA CLONAL: PARAGEM NO CRESCIMENTO/MATURAO, AUSNCIA DE RESPOSTA A
AUTO-ANTIGNIOS ESPECIALMENTE OS SOLVEIS ; ANERGIA: ESTADO DE NO RESPOSTA DO
LINFCITO QUANDO ENCONTRA UM ANTIGNIO ESPECFICO QUANDO EM CONDIES
DIFERENTES DAS DA ESTIMULAO , MESMO EM CONDIES PTIMAS

LINFCITOS B = 4-5 DIAS);

APOPTOSE : IG COM ALTA
FUNCIONAR .

(LINFCITOS T = MESES.

AVIDEZ , S OCORRE EM LTIMO CASO SE NENHUMA OUTRA

272

273

TOLERNCIA CENTRAL NOS LINFCITOS T

REMOO

CLONAL : ANTIGNIOS UBQUOS , APOPTOSE DE CLULAS MATURAS ESPECIALMENTE

PARA AUTO -ANTIGNIOS COM ELEVADA AVIDEZ; SE TIVEREM

ESPECFICOS DO TECIDO PODEM SOFRER APOPTOSE

TCR

(INTERACO

PARA ANTIGNIOS

FORTE ) OU ANERGIA

(INTERAO MENOS FORTE);

REMOO DOS TIMCITOS : DC QUE MIGRAM PARA O TIMO APOPTOSE ;
FORMAO DE TREG: ACTUAM NA PERIFERIA, CLULAS TREG NATURAIS LIBERTADAS DO TIMO
J ACTIVADAS E INIBEM A ACTIVIDADE DE CLULAS T QUE POSSAM RECONHECER AUTO ANTIGNIOS DO TIMO ;

274

275

TOLERNCIA PERIFRICA NOS LINFCITOS B

MECANISMOS DE CONTRLO : APOPTOSE , ANERGIA OU APOPTOSE POR EXCLUSO;

ACTIVAO DE LINFCITOS B POR 3 SINAIS! (REVISO) ANTIGNIO, CO-ESTIMULADORES ,
CD40-CD40L (TH2);
DIFERENCIAO EM CLULAS B DE MEMRIA OU PLASMCITOS;
NA AUSNCIA DE INTERACO COM OS TH2 QUE AS POSSAM ACTIVAR SOFREM ANERGIA E
DEPOIS MORREM;
SE AS CLULAS B AO SEREM ACTIVADAS PELAS TH2 NO RECONHECEM SINAIS DE PERIGO
PRODUZIDOS PELOS PATOGNIOS ( AS CLULAS B TM RECEPTORES PARA ESTES SINAIS ), NO
H EXPRESSO DE CO -ESTIMULADORES , LOGO NO SE PODE DAR A ACO DAS CLULAS T
SOBRE ESTAS ANERGIA MORTE ;
SE AS CLULAS B NO RECONHECEM OS PADRES MOLECULARES DE PATOGNIOS TAMBM
NO VO PRODUZIR MOLCULAS CO -ESTIMULADORAS (B71 E B72) MORTE ;
EXCLUSO DE CLULAS B DOS FOLCULOS LINFIDES, PROCESSO DE SELECO POR
METAMORFOSES ( HIPERMUTAO SOMTICA) ENTRADA NOS FOLCULOS LINFDES 2
PROLIFERAO MUTAES COMPETIO ENTRE SINAIS COM DIFERENTES FORAS;
PROCESSO DE SELECO DENTRO DOS CENTROS GERMINATIVOS DE CLULAS COM RECEPTORES
MODIFICADOS

ANTI -

S SOBREVIVEM AS CLULAS QUE INTERAGEM COM O ANTIGNIO

LIGAES MAIS PERSISTENTES RESULTAM NUMA MAIOR PRODUO DE PROTENAS

APOPTTICAS SE A LIGAO NO SE DER AS CLULAS B MORREM

276

277

TOLERNCIA PERIFRICA NOS LINFCITOS T

278

RESPOSTA NORMAL : SINAL DE LIGAO AO TCR (MHC + PPTIDO) + CO-ESTIMULADOR

CLULAS T EFECTORAS OU DE MEMRIA;
SEM UM DESTES SINAIS, CO-ESTIMULAO POR EXEMPLO, AS CLULAS T ENTRAM T
ANERGIA MESMO EM CONDIES PTIMAS NA EXISTNCIA DO ANTIGNIO PODEM NO
RESPONDER , MAS PODEM RETOMAR ACTIVIDADE APS MESES ;

A EXISTNCIA DE SINAIS DE PERIGO (PATOGNIO OU LESO ) ACTIVAO DE RECEPTORES

ACTIVAO DAS DC MATURAO ACTIVAO DAS CLULAS T NAIVES A
EFECTORAS ;
QUANDO NO H SINAIS DE PERIGO RECONHECIMENTO DO AUTO-ANTIGNIO SEM A
PRODUO DE CO -ESTIMULADORES PELAS DCS NO H ACTIVAO DAS CLULAS T QUE
PASSA A FICAR TOLERANTES OU ANRGICAS A ESTE ANTIGNIO ;

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280

281

SUPRESSO DA ACTIVIDADE DE CLULAS T POR TREGS NATURAIS

TAMBM EXISTEM CLULAS TREG INDUZIDAS

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CLULAS TH3 MAS INDUZIDAS NA PERIFERIA ATRAVS DE DCI QUE AMADURECEM NA PRESENA DE
IL-10 (DCS MODULADAS ) SEGREGAO DE TGF- + IL-10 + IL-35 (CITOCINAS
IMUNOSUPRESSORAS); SEM SINAIS DE PERIGOS E OUTROS MIGRA PARA OS NDULOS LINFTICOS ,
MAS COM CITOCINAS MIGRA PARA OS GNGLIOS E TORNAM -SE TREGS TOLERANTES .

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 CLULAS TR1 ORIGINADAS QUANDO CONTACTAM COM DC MODULADAS NA PRESENA IL-10

SEGREGA SOBRETUDO IL-10.

CLULAS T SUPRESSORAS (TS CD8+) INTERAGEM COM DC MODULADAS QUE EXPRESSAM ILT3
E ILT4

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