Microbiologia Del Agua Potable

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
Facultad de Ingeniera Pesquera y de Alimentos

Escuela Profesional de Ingeniera de Alimentos
TEMA
: Anlisis Microbiolgico del
Agua Potable.
DOCENTE
Merino
: Blgo.-Ing.: Arturo Garca
2013
MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
Blgo.-Mblgo.: ARTURO GARCIA MERINO

I.
INTRODUCCIN
AN LISIS B ACTERIOLGICO DEL AGU A POTABLE

II. OBJETIVOS.
1. Determinar la calidad bacteriolgica del agua potable que se consume en
nuestra ciudad.
2. Familiarizar al estudiante con la toma de muestra, transporte y anlisis de
una muestra de agua potable.
III. MATERIAL Y PROCEDIMIENTO.

A. MATERIAL:
1. BIOLGICO:
-
Agua potable.
2. MEDIOS DE CULTIVO:
-
Agar cuenta grmenes (PCA).

Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (BRILA)
Agar Violeta Cristal Rojo Neutro Bilis (VRBA).
Agar Tres Azcares (TSI)
Agua triptonada peptonada.
3. REACTIVOS:
-
Reactivo de Kovac's.
4. EQUIPOS:
-
Autoclave.
Contador Qubec.
Estufa regulada 35-37C
Bao mara regulado 44,5C
B: PROCEDIMIENTO.
B.l.TOMA DEMUESTRA
1. Desinfectar el grifo con un algodn embebido en una solucin de
hipoclorito flamear el grifo a la llama del mechero.

2. Abrir el grifo, dejar correr el agua durante 2 a 3 minutos.
3. Recolectar el agua en frascos de vidrio neutro o plstico, estril,
de boca ancha con tapa protectora y cierre hermtico. La
capacidad de los frascos recolectores debe ser de por lo menos
250 mi de capacidad con el objeto de dejar un espacio que
facilite la homogeneizacin de la muestra antes del anlisis.
4. Para desactivar el cloro
residual presente
en
el agua
potable, agregar tiosulfato de sodio en cantidad de 0,1 mi de

una solucin al 10% por cada 100 mi de muestra en el frasco
antes de esterilizar.
5. Rotular la muestra, conteniendo los siguientes datos: Lugar
de muestreo. fecha, hora exacta
del mismo, y alguna
condicin especial que pueda sugerir la posibilidad de

contaminacin a fin de orientar el anlisis.
B.2. TRANSPORTE Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA:

1. Despus del acopio de la muestra, sta debe transportarse al
laboratorio a una temperatura aproximada de 4C.
2. Al llegar la muestra al laboratorio debe ser refrigerada y/o
analizada inmediatamente, caso contrario, debe conservarse
en refrigeracin a la misma temperatura hasta por un tiempo
mximo de 6 horas.
B.3. ANLISIS DE LA MUESTRA:

1. Agitar
el
frasco
que
contiene
la
muestra
anotar
caractersticas de la misma.
1. Preparar las diluciones decimales con agua peptonada.
2. Efectuar las siguientes determinaciones:
a) Numeracin de bacterias heterotrofas (RTBAMV)

b) Numeracin de bacterias coliformes totales: Determinacin
mediante el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
las

c) Numeracin de coliformes fecales: Determinacin mediante el
mtodo del NMP .
Algunas teoras indican que el origen de la vida en nuestro planeta tuvo lugar en el
agua, del mismo modo, las riberas de los brazos de agua natural fueron los sitios
ideales para asentamientos humanos dedicados a la agricultura y pesca, y actualmente
son los sitios de desarrollo urbano e industrial; en definitiva el agua es reconocida como
fuente de vida.
Las aguas superficiales son susceptibles de contaminacin fecal, debido al vertimiento
de los desages sin ningn tratamiento, hecho que es usual en las grandes ciudades,
mientras que en las zonas rurales la contaminacin se origina por la defecacin a
campo abierto y la presencia de animales domsticos y silvestres que actan como
reservorio de agentes patgenos. Por otra parte la contaminacin de agua tratada o
potabilizada puede ocurrir cuando entra a la red de distribucin a travs de conexiones
cruzadas, rotura de tuberas, cisternas, reservorios defectuosos, grifos daados y
durante el tendido de nuevas tuberas y reparaciones sin medidas de seguridad
adecuados.
II.
CONCEPTOS
3.1 AGUA
El agua es el medio idneo donde se desarrollan complejas reacciones bioqumicas que hacen posible el
desarrollo de la vida, adems es el nico compuesto que se encuentra en los tres estados fsicos de
agregacin de la materia y en cantidad considerable, pues se estima que el total de agua en la tierra es
de unos 1400 millones de km3, de los cuales un 3% corresponde a agua dulce.
El agua adems de ser una sustancia imprescindible para la vida por sus mltiples propiedades es
ampliamente usada para actividades industriales y consumo domstico, convirtindose en uno de los
recursos ms apreciados del planeta.
De ah radica la importancia de conservarla y mantener libre de contaminacin las fuentes naturales,
para garantizar sus sostenibilidad y aprovechamiento para las futuras generaciones.
3.2 CALIDAD MICROBIOLGICA DEL AGUA

La verificacin de la calidad microbiolgica del agua potable por lo general incluye anlisis
microbiolgicos.
En la mayora de los casos, conllevar el anlisis de microorganismos indicadores de contaminacin
fecal, pero tambin puede incluir, en algunas circunstancias, la determinacin de las concentraciones de
patgenos especficos.
La verificacin conlleva el anlisis del agua; de origen, del agua inmediatamente despus de ser tratada,
del agua en los sistemas de distribucin o del agua almacenada en los hogares. La verificacin de la
calidad microbiolgica del agua de consumo incluye el anlisis de la presencia de Escherichia coli, un
indicador de contaminacin fecal. No debe haber presencia en el agua de consumo de E. coli, ya que
constituye una prueba concluyente de contaminacin fecal reciente. En la prctica, el anlisis de la
presencia de bacterias coliformes termotolerantes puede ser una alternativa aceptable en muchos casos.
E. coli es un indicador til, pero tiene limitaciones. Los virus y protozoos entricos son ms resistentes a
la desinfeccin; por tanto, la ausencia de E. coli no implica necesariamente que no haya presencia de
estos organismos. En ciertos casos, puede ser deseable incluir en los anlisis microorganismos ms
resistentes, como bacterifagos o esporas bacterianas, por ejemplo cuando se sabe que el agua de
origen que se usa est contaminada con virus y parsitos entricos, o si hay una incidencia alta de
enfermedades virales y parasitarias en la comunidad.

El agua de consumo inocua (agua potable), segn se define en las guas, no ocasiona ningn riesgo
significativo para la salud cuando se consume durante toda una vida, teniendo en cuenta las diferentes
vulnerabilidades que pueden presentar las personas en las distintas etapas de la vida. Las personas que
presentan mayor riesgo de contraer enfermedades transmitidas por el agua son los lactantes y los nios
de corta edad, las personas, las personas debilitadas o que viven en condiciones antihiginicas y los
ancianos. El agua potable es adecuada para todos los usos domsticos habituales, incluida la higiene
personal. Las guas son aplicables al agua envasada y al agua de hielo destinado al consumo humano.
No obstante, puede necesitarse agua de mayor calidad para algunos fines especiales, como dilisis renal
y la limpieza de lentes de contacto, y para determinados usos farmacuticos y de produccin de
alimentos.
Las personas con inmunodeficiencia grave posiblemente deban tomar precauciones adicionales, como
hervir el agua, debido a su sensibilidad a microorganismos cuya presencia en el agua de consumo
normalmente no sera preocupante.
CALIDAD MICROBIOLGICA DEL AGUA
La verificacin de la calidad microbiolgica del agua por lo general incluye anlisis microbiolgicos.
En la mayora de los casos, conllevar el anlisis de microorganismos indicadores de contaminacin
fecal, pero tambin puede incluir, en algunas circunstancias, la determinacin de las concentraciones de
patgenos especficos.
La verificacin conlleva el anlisis del agua de origen, del agua inmediatamente despus de ser tratada,
del agua en los sistemas de distribucin o del agua almacenada en los hogares. La verificacin de la
calidad microbiolgica del agua de consumo incluye el anlisis de la presencia de Escherichia coli, un
indicador de contaminacin fecal. No debe haber presencia en el agua de consumo de E. coli, ya que
constituye una prueba concluyente de contaminacin fecal reciente. En la prctica, el anlisis de la
presencia de bacterias coliformes termotolerantes puede ser una alternativa aceptable en muchos casos.
E. coli es un indicador til, pero tiene limitaciones. Los virus y protozoos entricos son ms resistentes a
la desinfeccin; por tanto, la ausencia de E. coli no implica necesariamente que no haya presencia de
estos organismos. En ciertos casos, puede ser deseable incluir en los anlisis microorganismos ms
resistentes, como bacterifagos o esporas bacterianas, por ejemplo cuando se sabe que el agua de
origen que se usa est contaminada con virus y parsitos entricos, o si hay una incidencia alta de
enfermedades virales y parasitarias en la comunidad.
AGUA DE CONSUMO HUMANO
El agua de consumo humano es aquella abastecida a cualquier predio para uso domstico, sea para
bebida, cocina, lavado o produccin de alimentos debe cumplir con los requisitos.
Los requisitos del agua de consumo humano son los siguientes:
(a) El agua no debe contener ningn elemento, organismo o sustancia (bien sea o no un parmetro
reglamentado) a una concentracin o valor que en conjuncin con cualquier otro elemento,
organismo o sustancia (bien sea o no un parmetro reglamentado) puede resultar peligroso a la
salud pblica;
(b) En el curso del ao, el 80 por ciento de los resultados de los anlisis correspondientes a los
compuestos que afectan la calidad esttica y organolptica del agua de consumo humano, no deben
exceder las concentraciones o valores establecidos;
(c) Ninguna muestra de agua destinada a consumo humano, debe exceder las concentraciones valores
reglamentados para los compuestos que afectan la salud de los consumidores.
(d) El contenido de coliformes totales por 100 mililitros en el total de muestras tomadas a la salida de la
planta de tratamiento, fuentes de agua subterrnea, reservorios de servicio y/o dentro de las zonas
de abastecimiento de agua, deben de cumplir con lo siguiente:
(i) El 95 por ciento de las muestras no deben contener ningn coliforme total en donde cincuenta
(50) o ms muestras de agua han sido tomadas en el ao; o
(ii) Cuarenta y ocho (48) de las ltimas cincuenta (50) muestras no deben contener ningn coliforme
total en donde menos de cincuenta (50) muestras han sido tomadas en el ao.
(e) Ninguna muestra de agua destinada a consumo humano debe contener coliformes termotolerantes
en 100 mililitros de muestra de agua; y
(f) Donde el agua sea blanda, haya sido ablandada o desalinizada y es abastecida para bebida, cocina
o produccin de alimentos, debe cumplir con los requisitos mnimos de dureza y alcalinidad
establecidos.
II.
TOMA DE MUESTRAS
1. TCNICAS DE MUESTREO

La recoleccin de la muestra es un punto crtico en el procedimiento de la evaluacin de la calidad del
agua. La seleccin del punto de muestreo tendr como requisito principal que la muestra sea
representativa del sistema, del componente, de las fuentes de agua, del reservorio, etctera.
El envase para la toma de muestras tendr las caractersticas apropiadas para el tipo de anlisis que se
efectuar. Para el anlisis microbiolgico, la muestra se tomar en un envase de 500 mililitros de
capacidad, de vidrio o plstico autoclavable, de boca ancha y con tapa rosca; no se requieren
preservantes. No se debe exponer la muestra a la luz ni tampoco agitarla. La muestra debe ser analizada
en forma inmediata.
Las muestras de agua para consumo humano tratada y sometida a un proceso de desinfeccin con cloro
se deben colectar en un frasco esterilizado al cual, antes de la esterilizacin, se le hayan adicionado 0,1
mililitros de solucin de tiosulfato de sodio al 1,8% para cada 100 mililitros. Con este reactivo se
neutraliza el cloro residual. Esta cantidad de tiosulfato de sodio es suficiente para neutralizar
concentraciones de hasta 5 mg/L de cloro residual y es adecuada para una muestra de rutina. En
situaciones especiales, como emergencias, en que el cloro residual puede ser mayor de 5 mg/L, se
requiere una mayor cantidad de tiosulfato; en estos casos, pueden utilizarse volmenes de 0,1 mililitros
de solucin de tiosulfato de sodio al 10% para cada 100 mililitros de muestra. Esta cantidad es suficiente
para neutralizar concentraciones de hasta 15 mg/L de cloro residual.
Para la recoleccin de muestras de aguas sospechosas de contener concentraciones superiores a 0,01
mg/L de metales pesados tales como cobre, cinc, etctera, se debern adicionar en el frasco de
recoleccin, antes de su esterilizacin, 0,3 mililitros de una solucin de cido etilenodiaminotetracticoEDTA al 15% para cada 100 mililitros de muestra. Cuando se requiera, tambin se agregar una solucin
de tiosulfato de sodio (volumen de 0,1 mililitros de una solucin al 10% para cada 100 mililitros de
muestra). La solucin de EDTA puede ser adicionada a un frasco de recoleccin sola o combinada con
una solucin de tiosulfato de sodio. El EDTA acta como agente quelante y reduce la accin txica de los
metales.
Otro punto importante en el muestreo es la correcta y clara identificacin de la muestra. En la etiqueta o
ficha de muestreo debe figurar toda la informacin requerida. Los datos bsicos son los siguientes:
Cuadro 4.1
Datos bsicos de la etiqueta de muestreo
Nmero de muestra.
Punto de muestreo.
Localidad.
pH.
Temperatura.
Cloro residual (en el caso de agua potable)..
Turbiedad.
Y si el programa de vigilancia lo requiere, se deben considerar otros datos que permitan interpretar los
resultados en forma correcta. En el apndice B se presenta una propuesta de formatos que deben ser
adaptados segn las caractersticas del programa de vigilancia. El formato B.1, denominado cadena de
custodia, se usa en el caso de que se requiera enviar la muestra a un laboratorio para su anlisis, y el
formato B.2 para la toma de muestras en un programa de nivel bsico en lugares que cuenten con una
planta de tratamiento y sistema de distribucin de agua. Tambin se presenta una gua para llenar este
formato.
2. PRESERVACIN DE LAS MUESTRAS

Verificar la correcta identificacin de la muestra (vase el cuadro 4.1).
La muestra deber ser transportada al laboratorio lo antes posible. El tiempo lmite entre el muestreo y el
inicio del examen bacteriolgico es 30 horas.

Las muestras deben ser transportadas en condiciones de refrigeracin (4-10 C), en cajas que las
conserven en este rango de temperatura. Se debe colocar dentro de la caja hielo o gel refrigerado. En el
laboratorio la muestra debe ser conservada a temperatura de refrigeracin hasta el inicio del examen.
3. TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS: EMBALAJE Y ENVO
Los frascos deben ser transportados o enviados en una caja resistente para evitar roturas. Esta caja
puede ser de plstico, madera o metal. La caja tendr suficiente espacio para colocar las bolsas con la
mezcla refrigerante que permitir que la muestra se conserve a temperatura de refrigeracin.
En la cubierta de caja de transporte se debe colocar una etiqueta que, de manera impresa o con tinta
indeleble, muestre de un modo muy claro las inscripciones Frgil, Muestras de agua, urgente y Este
lado hacia arriba, as como la direccin del laboratorio al que se enviarn las muestras. En otra etiqueta
debe figurar el remitente.
En la parte interna de la caja tambin ir el formulario detallado con los datos de la recoleccin de las
muestras, su descripcin y el nombre de la persona que las recolect y las envi. Si el programa de
vigilancia lo solicita, las muestras irn acompaadas de la cadena de custodia, que tiene por objetivo
rastrear la muestra desde el momento del muestreo hasta su entrega al laboratorio. En el apndice B se
presenta un modelo de cadena de custodia.
APNDICES
Formularios de toma de muestras
B.1 Cadena de custodia
N. de encuesta
Puntos de Fecha
muestreo
Hora
Muestreadores: nombres y firma

Tipo de muestra
N. de Anlisis
envase
requerid
o
Punto de
Cadena de
Custodia
Entregado por:
Nombres y firma
Recibido por:
Nombres y firma
Fecha y hora
Entregado
al
laboratorio
por:
Nombres y
firma
Fecha y hora
Recibido
en
laboratorio por:
Nombres y firma
Fecha y hora
Nota: este formato es una propuesta para ser usada en el caso de que se requiera enviar la muestra a un laboratorio para
su anlisis.
B.2 Formulario para toma de muestras de agua y evaluacin de la calidad del servicio para un
programa de vigilancia de la calidad del agua de nivel bsico.
1 Ubicacin___________________ Cdigo________________________
Localidad ___________________ Distrito _______________________

Provincia ___________________ Departamento _________________
2. Muestras
2.1 Red de distribucin
Vivienda
Direccin
Nombre
del
usuario
Hora de
muestreo
Cloro
residual
Nmero de muestraa
pH/turbiedad
Coliformes
1
2
3
4
5
6
a Anlisis realizado por el laboratorio perifrico.
2.2 Componentes
N
Tipoa
Hora de
muestra
Cloro
residual
Nmero de muestrab
pH/turbiedad
Coliformes
1
2
3
a. Captacin, reservorio, cmara reductora de presin, etctera.
b. Anlisis de pH, turbiedad y coliformes realizado por el laboratorio perifrico.
Fecha: __________________________
Muestreador: _____________________ Firma: ____________________
Fuente: Rojas, R. (2002). Elementos de vigilancia y control. Gua para la vigilancia y control de la calidad del agua para consumo
humano. Lima, CEPIS/OPS.
Nota:
este formato es una propuesta para la toma de muestras en un programa de nivel bsico en lugares que cuenten con
planta de tratamiento y sistema de distribucin de agua. A continuacin se presenta una gua para llenar el mencionado formato.
Gua para llenar el formulario B.2

1. Ubicacin
Cdigo: Colocar el nmero asignado por el rgano de vigilancia a la comunidad, anexo, sector.
Comunidad: Indicar el nombre de la comunidad.
Anexo/sector: Sealar si se trata de un anexo o de un sector.
Distrito: Indicar el distrito al cual pertenece el anexo o sector.
Provincia: Sealar la provincia donde se ubica el distrito.
2. Muestras
2.1 Red de distribucin
Para cada una de las viviendas, se llenarn los recuadros correspondientes con los datos
solicitados: direccin de la vivienda y nombre del entrevistado.
Hora de muestreo.
Cloro residual: Se anotar la concentracin del cloro residual encontrado en el agua de la
vivienda evaluada.
Nmero de muestras: En el casillero se anotar el nmero de la muestra y del frasco que la
contiene y que ser enviado al laboratorio perifrico para su anlisis.
2.2 Componentes
Tipo: Colocar en el recuadro el nombre de la estructura en la que se ha tomado
la muestra de agua: captacin, cmara reductora de presin, etctera.
Hora de muestreo: Indicar la hora de toma de la muestra.
Cloro residual: Se anotar la concentracin del cloro residual Encontrado en el agua del
componente evaluado.

Nmero de muestra: En el casillero se anotar el nmero de la muestra y del frasco que la

contiene y que ser enviado al laboratorio perifrico o al laboratorio central para su anlisis, si
fuera el caso.
Consignar la fecha y el nombre del encuestador con su respectiva firma.
Fuente: Rojas, R. 2002. Elementos de vigilancia y control. Gua para la vigilancia y control de la calidad del agua para consumo
humano. Lima, CEPIS/OPS.
BIBLIOGRAFA
1. Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (1997). Manual para la certificacin de
laboratorios de anlisis de agua potable. Criterios y procedimientos para el aseguramiento de la
calidad. Cuarta edicin.
2. Cincinnati, Ohio. Allen, M. (1996). La importancia para la salud pblica de los indicadores
bacterianos que se encuentran en el agua potable. Reunin Regional sobre la Calidad del Agua
Potable. Lima, CEPIS.
3. American Public Health Association-American Water Works Association (1999). Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater, 20.a ed.
4. American Public Health Association-American Water Works Association (1960). Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater, 11.a ed.
5. American Association for Laboratory Accreditation (1996). Requisitos generales para la acreditacin
de laboratorios. Gaithersburg.
6. Castro, M. L. (1996). Programa sobre monitoreo y evaluacin global de la calidad del agua. Control
de calidad analtica. Reunin Regional sobre la Calidad del Agua Potable. Lima, CEPIS/OPS.
7. CEPIS/OPS (2000a). Proyecto de capacitacin para los laboratorios de El Salvador, Nicaragua y
Honduras. Programa de Mejoramiento de la Capacidad de los Laboratorios de Control y Vigilancia
de la Calidad del Agua para Consumo Humano. Lima, CEPIS/OPS-USAID-EPA.
8. CEPIS/OPS (2000b). Procedimiento normalizado de operacin para la determinacin de pH por el
mtodo potenciomtrico. Lima, CEPIS/OPS.
9. CEPIS/OPS (2002a). Procedimiento normalizado de operacin para la determinacin de turbiedad
por el mtodo electromtrico. Lima, CEPIS/OPS.
10. CEPIS/OPS (2002b). Procedimiento normalizado de operacin para la determinacin de cloro
residual por el mtodo del DPD. Lima, CEPIS/OPS.
11. CEPIS/OPS (2002c). Procedimiento normalizado de operacin para la determinacin de turbiedad
por el mtodo nefelomtrico. Lima, CEPIS/OPS.
12. Difco Laboratorios (1996-1997). Product catalog for microbiology. IDEXX Laboratorios (1993).
Colliert. Documento de informacin tcnica.
13. INDECOPI (1999). Norma Tcnica Peruana. Agua para Consumo Humano. Determinacin de
Turbiedad. Mtodo nefelomtrico. NTP 214.006.1999.
14. INDECOPI (2000). Norma Tcnica Peruana. Agua para Consumo Humano. Determinacin de pH.
Mtodo electromtrico. NTP 214.029.2000.

15. Le Chevallier, M. W. y W. D. Norton (1992). Examining relationships between particle counts and
Giardia, Cryptosporidium, and turbidity. Journal of the American Water Works Association 84: 54-60.
16. Millipore (1991). Manual AB323/P. Microbiologa de aguas.
17. Mora, D. (1996). Situacin del agua de consumo humano y evacuacin de excretas en Amrica
Latina y el Caribe. Reunin Regional sobre la Calidad del Agua Potable. Lima, CEPIS.
18. Organizacin Panamericana de la Salud (1988). Guas para la calidad del agua potable. Vol. 3.
Control de la calidad del agua potable en sistemas de abastecimiento para pequeas comunidades.
Publicacin Cientfica 508. Washington D. C., OPS.
19. Organizacin Panamericana de la Salud (1978). Procedimientos simplificados para el examen de
aguas. Segunda edicin en espaol. Publicacin Cientfica 369. Washington, OPS.
20. Piza, P. (1996). Los sistemas ambientales. Un abordaje terico para el estudio de la vigilancia
ambiental. Serie HSP-UNI/Manuales Operativos PALTEX. OMS, Fundacin W. K. Kellog.
21. Rojas, R. (2002). Elementos de vigilancia y control. Gua para la vigilancia y control de la calidad del
agua para consumo humano. Lima, CEPIS/OPS.
22. Romero Rojas, J. (1999). Potabilizacin del agua. Mxico, Alfaomega.
23. Solsona, F. (2002). Guas para elaborar normas de calidad del agua de bebida en los pases en
desarrollo. Lima, CEPIS/OPS.
24. Solsona, F. y J. P. Mndez (2002). Desinfeccin del agua. Lima, EPA-CEPIS/OPS.
Filtracin:
Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensin del H 2O.
Cloracin:

Es el mtodo ms eficaz de hacer potable el H 2O. La cantidad de cloro que se agrega depende del grado
de contaminacin del abasto hdrico y su contenido de sustancias orgnicas. El cloro mata la mayor
parte de las bacterias no esporgenas. El H 2O clorada, en consecuencia no siempre es estril, pero
suele brindar seguridad para consumo por el ser humano.
Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Mtodo):
Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtracin de acetatos de celulosa con poros y
dimetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H 2O.
La membrana de filtracin se coloca aspticamente en una caja de Petri en un cojincillo absorbente
saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba a 24 C durante 24 horas. Despus se
examina la membrana con microscopio de poca potencia y se cuentan las colonias verdes violceos con
resplandor metlico, si considera que son bacterias coliformes.
Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H 2O:
1. Rapidez en la obtencin de resultados
2. Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales si el filtro se
lava y se vuelve a utilizar.
3. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fcilmente durante un corto
tiempo y a una temperatura conveniente.
Inconvenientes de Uso:
1. No hay indicacin de formacin de gas (algunas H 2O tienen gran cantidad de organismos
fermentadores de la lactosa sin produccin de gas capaces de crecer en el medio).
2. La filtracin por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos recuentos,
porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente.
Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden interferir
en el crecimiento de los coliformes
III.
MATERIALES
Medios de cultivo
Reactivos Materiales
Tiosulfato sodio 0.01N
Frasco o bolsas estriles
Refrigerador porttil
Algodn y alcohol al 70%
Botes de distintos tipos utilizados para

la toma de muestras de agua. El de la
izquierda es de vidrio, el del centro de
tefln, y el de la derecha de plstico, de
tipo sanitario.
IV.
PROCEDIMIENTO

IV.1.
CRISTALERA
Las muestras para anlisis bacteriolgico se deben tomar en frascos que se hayan lavado con
extremo cuidado, enjuagados con agua limpia y esterilizados por lo menos 60 minutos a una
temperatura de 170C.
Es necesario evitar que la parte baja de la tapa y la boca del frasco no toquen cosa alguna que
pueda contaminarla muestra.
Esterilizar
60 min/ 170C.
IV.2.
DECLORACIN
Los frascos que se destinen para la recoleccin de muestras de agua con cloro residual deben llevar un
agentes declorador (0.5 ml de tiosulfato de sodio 0.01 N por cada 100 ml de agua); su presencia en una
muestra de agua clorada en el instante de la recoleccin, neutraliza cualquier cloro residual y evita que
con esto prosiga la accin bactericida del cloro durante el tiempo que la muestra se encuentre en trnsito
al laboratorio, en tales condiciones es probable que el examen bacteriolgico indique el verdadero
contenido bacteriano de la muestra en el momento del muestreo.
0.5 ml
100 ml
Tiosulfato de sodio 0.01 N
(AGENTE DECLORADOR)
IV.3.
Muestra de agua clorada
PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO
El examen bacteriolgico de las muestras de agua se deben iniciar inmediatamente despus de su

recoleccin, sin embargo, muy raras veces se puede proceder as y se deben establecer normas mas
prcticas. El tiempo permisible entre la captacin de la muestra y el examen bacteriolgico no debe ser
mayor de 6 horas para aguas muy contaminadas y de 12 para aguas relativamente puras. En ningn
caso ese lapso debe exceder las 36 horas. En el perodo que transcurre entre la recoleccin y el
examen, se debe mantener la temperatura de la muestra entre 6 y 10C (refrigeracin, no congelacin).

Para lograr estas condiciones, en el transporte se introducen los frascos con las muestras en un termo o
nevera de icopor con bolsas de hielo.
Es importante que al refrigerar las muestras se tomen precauciones y medidas para prevenir cualquier
contaminacin proveniente del hielo derretido.
Mantener la
muestra a
T= 6 -10C
Tiempo:
- Aguas
contaminadas: 6h
- Agua pura: 12h
Que no sobrepase
IV.4.
CAPTACIN DE LAS MUESTRAS
IV.4.1.
Muestras de grifo o llaves
1. Observar que el grifo no presente escapes de agua.

2. Rotular el frasco recolector de la muestra con la siguiente identificacin: tipo de muestra, fecha
hora
3. Abrir el grifo y dejar correr agua durante 2 o 3 minutos para eliminar impurezas y agua
acumulada en el interior de la caera.
4. Restringir el flujo de la llave para recoger el agua sin salpicaduras.
5. Destapar el frasco e iniciar la recoleccin de la muestra hasta las partes del frasco.
6. Tapar el frasco, refrigerar y enviar al laboratorio lo ms pronto posible.
7. Nota: si se diera el caso que muestras sucesivas del mismo grifo tengan coliformes, entonces
este deber ser desinfectado con una solucin de hipoclorito para eliminar cualquier foco de
contaminacin externa; en este caso el laboratorio suministrar la informacin pertinente.

Agua de
grifo
24/02/10
8:30 am
RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFAS (UFC/ml)

Mtodo: APHA-AWWA-WEF-2000

OBJETIVO
Cuantificar la poblacin de microorganismos ae rob io s viables en determinada muestra.
MARCO TEORICO
El mtodo empleado se realiza en caja de Petri utilizando el agar cuenta grmenes como medio de
cultivo, se realiza a todo tipo de alimento y la siembra puede hacerse en profundidad, o en superficie.
MATERIALES
- Elementos necesarios para la preparacin y dilucin de la muestra.
- Cajas de Petri vacas estriles.
- Pipetas graduadas en dcimas de cc
- Tubos de Plate Count agar o agar cuenta grmenes
- Contador de colonias
PROCEDIMIENTO
Tradicionalmente se ha recomendado que con la finalidad de minimizar el error producido en los
recuentos, todas las diluciones se siembren por duplicado.
Preparar las diluciones del alimento siguiendo las instrucciones de la seccin anterior
-1
Pipetear de la dilucin 1ml en una placa Petri vaca y estril empezando por la dilucin 10 hasta 10
6
Se sugiere esta serie de diluciones cuando no se conoce el grado de contaminacin que pueda
tener la muestra de agua.
Teniendo el medio de cultivo fundido y enfriado a una temperatura de 45C aproximadamente agregar
a cada placa Petri que contiene el ml de las diferentes diluciones el contenido del tubo. Con
movimientos suaves en sentido vertical, luego horizontal y finalmente circulares en el sentido de las
agujas del reloj y a la inversa. Teniendo el cuidado de no formar burbujas, se logra una mezcla
uniforme entre la muestra y el medio de cultivo debe hacerse siguiendo los pasos anotados para
conseguir un crecimiento bacteriano uniforme y rpido, para evitar la solidificacin del agar
Una vez solidificado el agar las cajas se invierten y se incuban a 35-37C
Realizar los recuentos:
Seleccionar para hacer el recuento aquella dilucin donde haya crecimiento bacteriano que contenga
entre 30 y 300 colonias, Utilice el cuenta colonias
Cuente las colonias y el numero encontrado deber multiplicarlo por el reciproco de la dilucin que
utilizo para hacerlo
Pueden presentarse ciertas variaciones en los cultivos realizados. En la hoja siguiente usted
encontrara las diferentes posibilidades y que hacer en cada caso. Lo importante es saber que cuando
se puedan encontrar diluciones que contengan entre 30 y 300 colonias si el recuento es preciso, se
informa como recuento Standard
Recuento estimado del estndar
Este clculo se realiza cuando no es posible encontrar ninguna dilucin que contenga menos de 300
colonias. Para hacer recuentos se puede dividir la caja en 2, 4 o aun 8 porciones y contar las colonias.
Este numero de colonias se multiplica por el factor apropiado (2,4 u 8) y adems por el reciproco de la
dilucin, que en este caso sera la ms alta.
Cuando hay ms de 200 colonias por 1/8 se asume que en toda la caja hay ms de 1600 (200x8). El
recuento total deber ser mayor de 1600 multiplicado por el reciproco de la dilucin ms alta.
-1
Si no hubiese colonias en la caja de dilucin menor (10 ) se reporta como menos de 10 colonias puesto
que el mnimo numero de colonias puesto que el mnimo numero de colonias que se puede obtener es
de 1 y al multiplicarlo por el reciproco de la dilucin dar 10.
Expresin los resultados
El recuento bacteriano se debe expresar con 2 dgitos y el resto en potencias de 10.
Como no siempre el conteo de colonias produce valores como por ejemplo 10-20-50-80-300 etc, es
necesario aplicar algunas correcciones con la finalidad de convertir el nmero hallado en uno con 2
dgitos. Ejemplos: Si el recuentos se realizo en la dilucin 10 -3 y fue de 138 colonias, el tercer digito por
ser mayor que 5 permite adicionar 1 unidad al 2 o sea que el recuento seria 140.000 = 14x10 4.
Si el recuento fue de 124 por ser el 3er. Digito menor que 5 se anula y se expresa 120.000 = 12x10 4. .
Cuando el recuento de mesaerobios se utiliza para determinar la aceptacin o rechazo de un alimento,
nicamente se considerara el recuento estndar y nunca el estimado.

PROCESAMIENTO Y RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES POR NUMERO
MAS PROBABLE (NMP).
OBJETIVO
Capacitar al estudiante para efectuar e interpretar correctamente un anlisis bacteriolgico de agua.
Determinar si el agua a ensayar contiene microorganismos contaminantes mediante la tcnica de los
tubos mltiples de fermentacin.
MARCO TEORICO
El agua puede ser perfectamente clara, libre de olores y sabores indeseables y sin embargo estar
contaminada. Esta contaminacin puede ser por microorganismos patgenos o dainos que llegan al
agua y que en un momento dado la hacen peligrosa para consumo humano o animal. La potabilidad de
un agua se puede determinar por pruebas de laboratorio tanto fisicoqumicas como bacteriolgicas.
Podra pensarse que la manera ms adecuada de determinar si un agua est contaminada por
microorganismos patgenos sera el aislamiento de dichas bacterias, sin embargo esto no es lo
recomendado debido a varias causas:
Se necesitan varios das para obtener los resultados de los exmenes de laboratorio que determinen
con exactitud la presencia de un microorganismo patgeno especfico.
Muchas personas podran haber tomado agua antes de conocerse los resultados y as haberse
expuesto a la infeccin.
Los organismos patgenos llegan al agua en forma espordica y no sobreviven mucho tiempo, por
tanto, pueden no estar o no detectarse en una muestra que se enve al laboratorio.
Por el contrario es ms sencillo y rpido determinar la presencia o no, de otros microorganismos no
patgenos que comparten algunas veces el mismo hbitat con los patgenos. Por consiguiente el
hallazgo de los saprfitos indicara la posible presencia de un patgeno.
Se sabe que los microorganismos patgenos llegan al agua procedentes de las descargas intestinales
de los humanos y los animales. Ciertos tipos de bacterias tales como Escherichia coli y varios
microorganismos afines, denominados Coliformes (adems de los estreptococos fecales etc) son
habitantes normales del intestino y en consecuencia siempre estn en las materias fecales: de tal
manera que la presencia de estos Coliformes indica que el agua est contaminada con materia fecal,
existiendo por tanto la probabilidad que cualquier patgeno haya llegado a ella.
Se ha usado por mucho tiempo el grupo de bacterias Coliformes como indicadores de la contaminacin
del agua con excretas, stos gozan de algunas ventajas al compararlos con otros indicadores.
Los microorganismos Coliformes, particularmente la Escherichia coli, se encuentra en nmero muy
grande en el intestino y generalmente sobreviven en el agua durante ms tiempo que los patgenos.
Por lo regular una persona sana no elimina microorganismos patgenos, pero puede desarrollar una
infeccin intestinal y esos microorganismos aparecern en materia fecal. As, la presencia de Coliformes
en el agua, se toma como seal de alarma, pues, ha sido contaminada peligrosamente.
El grupo de Coliformes comprende todas las bacterias en forma de bacilos GRAM NEGATIVOS, que son
aerbicos o anaerbicos facultativos, no formadoras de esporas y fermentadores de la lactosa en un
tiempo de 24 a 48 horas a temperatura de 35C. Para bacteriologa de aguas y en relacin con la familia
ENTEROBACTERIACEAE este grupo comprende los siguientes gneros: ESCHERICHIA,
CITROBACTER, ENTEROBACTER Y KLEBSIELLA.
Varias investigaciones hechas en el campo de la microbiologa acutica han demostrado que los
organismos Coliformes presentes en el tracto intestinal y por tanto en las heces de animales de sangre
caliente, generalmente incluyen organismos capaces de producir gas a partir de lactosa en un medio de
cultivo apropiado a temperatura de 44.5C+0.2C. Organismos Coliformes procedentes de otras fuentes
(suelo, vegetacin) no puede producir gas bajo las anteriores condiciones.
Esto lleva a concluir que podemos hablar de dos tipos de origen para organismos Coliformes; los de
origen fecal, es decir provenientes de materia fecal; y los de origen no fecal (a partir del suelo y la
vegetacin).
La suma de los Coliformes de origen fecal ms los de origen no fecal constituye los denominados
Coliformes totales.

MATERIALES
Tubos de 175 x 22 mm
Tubos de 150 x 16 mm
Tubos de Durham
Pipetas de 10 ml y 1 ml.
Gradillas
Mechero
Incubadora a 35.5C
Bao mara a 44.5C
Asas de inoculacin
Colorantes para la coloracin de Gram
Microscopio
Lminas portaobjeto
Medios de cultivo as: Caldo lauril triptosa
Caldo lactosado bilis verde brillante
EMB (Eosina azul de metileno)
Caldo E.C.
Agar nutritivo
PROCEDIMIENTO
Mtodo para determinar el Nmero ms probable de Coliformes Totales. Este mtodo consta de tres
partes.
Prueba presuntiva.
Consiste en sembrar diferentes volmenes de muestra en escala de mltiplos y submltiplos de 1 ml (10,
1, 0.1, 0.01, ml etc). Es necesario sembrar 5 tubos por cada volumen de muestra.
La escogencia de los volmenes depende de la muestra que se va a procesar. Como gua para lo
anterior se puede recomendar lo siguiente:
Si se trata de aguas potables debe sembrarse 10, 1 y 0.1 ml (5 replicas de cada una).
Para aguas relativamente no poluidas los volmenes de muestra deben ser 1, 0.1 y 0.01 ml.
Agitar los tubos vigorosamente alrededor de unas 25 veces e incubar a 35+0.5C por 24-48+3 h.
Al cabo de 24 horas de incubacin, examinar la presencia de gas y turbiedad.
En caso negativo, reincubar por un periodo adicional de 24 h.
Reexaminar. Si no hay cambios, reportar la prueba presuntiva como negativa.
En caso contrario todos los tubos positivos de la prueba presuntiva deben someterse a la prueba
confirmativa.
Prueba confirmativa.
Consiste en inocular a partir de cada uno de los tubos positivos de la prueba presuntiva, por medio de un
asa bacteriolgica o un aplicador, un tubo con caldo lactosado bilis verde brillante.
- Agitar los tubos cuidadosamente e incubar a 35 +0.5C durante 24-48 +3 h.
- Despus de 24 +2 h, examinar la presencia de gas y turbiedad.
- En caso negativo reincubar por un periodo adicional de 24 +3 h.
- Reexaminar. Si no hay cambio, la prueba confirmativa se reporta como negativa.
- En caso contrario, o sea si hay presencia de gas y turbiedad (prueba positiva) se proceder a efectuar
la prueba completa con cada uno de los tubos.
En anlisis de rutina la mayora de las muestras se procesan hasta la prueba confirmativa. Sin embargo
estos datos deben verificarse llevando a cabo la prueba completa en el 5% de las muestras, con un
mnimo de 1 muestra con prueba completa.
Prueba completa.
Consiste en sembrar a partir de cada uno de los positivos de la prueba confirmativa, una caja de Petri
que contenga EMB (eosina azul de metileno).
Sembrar el inoculo (1 asada) por el mtodo de agotamiento en superficie (mtodo de estra).
Incubar durante 24 +2 horas a 35 +0.5C.
En general pueden desarrollarse varios tipos de colonias. Las tpicas del grupo coliforme (positivas) son
nucleadas, con o sin brillo metlico. Las atpicas son pocas, no nucleadas, mucoides, rosadas. Las
negativas son transparentes.
Escoger tres colonias (dos tpicas y una atpica y sembrar cada una de ellas en un tubo con caldo lauril
triptosa y otra con agar nutritivo inclinado).
Incubar el caldo lauril triptosa durante 24-48 +3h y el agar nutritivo inclinado durante 24 + 2h. Ambas a 35
+0.5C.

Examinar los tubos de caldo lauril triptosa despus de la incubacin para determinar produccin de gas
con la consiguiente turbiedad.
Hacer extendidos y colorear con Gram, a partir de las colonias crecidas con el agar nutritivo inclinado
que corresponda a los tubos de caldo lauril triptosa que hayan revelado presencia de gas a partir de las
colonias del EMB.
NOTA: La coloracin de Gram puede omitirse de la prueba completa que se haga, solamente para aguas
potables.
TABLA DE NMP PARA 10 TUBOS/10 ML SOL. PARA AGUA POTABLE
N de Tubos
Positivos
NMP
Index/100 ml
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
<1,1
1,1
2,2
3,6
5,1
6,9
9,2
12,0
16,1
23,0
>23,0
95%
de
Confianza
Inferior
0
0,03
0,29
0,69
1,3
2,1
3,1
4,3
5,9
8,3
13,5
Limites
Superior
0,3
5,9
8,1
10,6
13,4
16,8
21,1
27,1
36,8
59,5
Infinito
Clculo de los resultados

El clculo de la densidad probable de Coliformes totales en una determinada muestra est basado en la
combinacin de los resultados de los tubos positivos y negativos obtenidos de cada dilucin o volumen
sembrado.
Esta densidad se expresa como NMP (nmero ms probable) de Coliformes totales por 100 ml.
El NMP se obtiene de la comparacin de los resultados obtenidos de la muestra, con las tablas
especialmente diseadas las cuales tienen lmites de confianza del 95%.
Es indispensable disponer de tres series de diluciones o volmenes de muestra (mltiplos y submultiplos
de 1) para obtener el cdigo con el cual se debe buscar el nmero correspondiente al NMP, en la tabla 1:
Ejemplo: Si hemos sembrado 5 porciones o rplicas de 10 ml, 5 de 1 ml, y 5 de 0.1 ml, de los cuales
resultaron positivos 5 de 10 ml, 2 de 1 ml y 1 de 0.1 ml, el cdigo resultante ser 5-2-1.
Al buscar en la tabla 1, ste cdigo corresponde a un ndice de 70/100 ml con un lmite inferior de 23 y
superior de 170.
Aunque la tabla 1 se refiere especficamente a la combinacin de resultados positivos obtenidos, cuando
son inoculados volmenes de 10, 1 y 0.1 ml de muestra, sta puede ser usada cuando se siembran
volmenes mayores o menores de muestra.
En este caso se busca el nmero de la tabla correspondiente al cdigo, teniendo cuidado de aplicar la
siguiente frmula:
Valor del NMP de la tabla x 10 = NMP/100 ml
Mayor volumen sembrado
Ejemplo: Si hemos sembrado 5 porciones o rplicas de 0.01 ml, 5 de 0.001 ml y 5 de 0.0001 ml, de las
cuales resultaron positivas 5 de 0.01 ml, 2 de 0.001 ml y 0 de 0.0001 ml, el cdigo ser 5-2-0.
Al buscar en la tabla 1, ste cdigo corresponde a un ndice de 49/100 ml.
Aplicando la frmula tendremos:
NMP = 49 x 10 = 49.000/100 ml = 49 x 103/100 ml
0.01
Cuando se inoculan ms de tres diluciones o volmenes de muestra, se deben determinar las tres
diluciones significativas, de acuerdo con las siguientes reglas:
- Solamente deben usarse tres diluciones en el cdigo, para calcular el valor del NMP.
- Como primer nmero del cdigo, seleccionar los volmenes de muestra ms pequeos en los cuales
todos los tubos resultaron positivos (5) y los dos volmenes o diluciones menores que le suceden. (Ver
tabla 2, pruebas 1 y 2).
- Si menos de tres diluciones muestran tubos con resultados positivos, se seleccionarn los tres mayores
volmenes de muestra incluyendo las diluciones con los tubos positivos (tabla 2, prueba 3).

- Si resultaron tubos positivos en diluciones ms altas o mayores que en aquellas escogidas para el
cdigo, dichos positivos se suman a la dilucin ms alta de las tres seleccionadas en la primera ocasin
(tabla 2, prueba 4).
- No debe haber resultados negativos en volmenes de muestra superiores a aquellos escogidos. Sin
embargo si aparecen tubos negativos, ejemplo: 4/5, 3/5 y 0/5, debe usarse el mayor volumen de muestra
con todos los tubos positivos, junto con los dos siguientes volmenes de muestra ms bajos. (tabla 2,
prueba 5).
- Si todos los tubos son positivos se escogen las tres diluciones ms altas (tabla 2, prueba 6).
- Si todos los tubos son negativos, escoger para el cdigo, las tres diluciones ms bajas (tabla 2, prueba
7).
- Si no resultaron tubos positivos en una dilucin intermedia, seleccionar para el cdigo, la dilucin ms
alta con tubos positivos y las dos diluciones ms bajas (tabla 2, prueba 8).
- Si solamente la dilucin intermedia es positiva, escoger para el cdigo sta dilucin, la siguiente ms
alta y la anterior ms baja (tabla 2, prueba 9).
Tabla 2. Seleccin del cdigo de resultados, serie de 5 tubos.
Prueba
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
5
5
5
4
1
3
5
4
5
5
5
0
4
0
0.1
0
4
1
4
3
5
0
0
1
0.01
0
0
0
1
0
5
0
2
0
0.001
0
0
0
1
0
5
0
0
0
0.0001
0
0
0
0
5
0
0
0
Codigo
5. 3. 0.
5. 4. 0.
4. 1. 0.
5. 4. 2.
5. 3. 0.
5. 5. 5.
0. 0. 0.
4. 0. 2.
0. 1. 0.
RESULTADOS
El reporte del valor del NMP (nmero ms probable) de Coliformes fecales en las muestras de agua, se
expresa con base en 100 ml de muestra: NMP de Coliformes totales/100 ml.
Mtodo para determinar el Nmero ms Probable de Coliformes Fecales
La prueba para determinar el NMP (nmero ms probable) de Coliformes fecales es aplicable a
investigaciones de fuentes de agua cruda, corrientes de agua poluda, sistemas de tratamiento para
aguas residuales, aguas recreacionales, aguas marinas.
Este procedimiento no es recomendado como un sustituto para la prueba de Coliformes en el examen de
agua potable, ya que no se tolera ningn tipo de coliforme en aguas tratadas.
Esta prueba consiste en transferir inculo a partir de los tubos positivos de caldo lauril triptosa de la
prueba presuntiva para Coliformes, a tubos con caldo E.C, (ver figura 3).
Incubar a 44.5 +0.2C durante 24 +2h en bao mara, teniendo cuidado que el tiempo transcurrido entre
la siembra y la colocacin en bao mara no exceda de 30 minutos.
Clculo de resultados
En el clculo de la densidad probable de Coliformes fecales se obtiene con base en la combinacin de
los resultados positivos y negativos obtenidos de los tubos con medio E.C. de acuerdo con la tabla del
NMP utilizada para Coliformes totales, teniendo en cuenta las reglas sealadas all. La densidad de
Coliformes fecales se expresa como: NMP de Coliformes fecales/100 ml.
Reporte de resultados
El reporte del valor del NMP (nmero ms probable) de Coliformes fecales en las muestras de agua, se
expresa con base en 100 ml de muestra: NMP de Coliformes fecales/100 ml.
PREGUNTAS.
1. Qu otros microorganismos aparte de los Coliformes podran producir una prueba presuntiva
positiva?
2. Porqu rutinariamente no se intenta aislar microorganismos patgenos como Salmonella y Shigella a
partir de muestras de agua para determinar la calidad sanitaria de esta?
3. Explique el significado del trmino grupo coliforme. Qu importancia tiene en bacteriologa de
aguas?. Cules bacterias lo integran?
4. Fuera de los Coliformes, Qu otras bacterias conoce usted, como indicadores de contaminacin?

RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFAS (UFC/ml)

Metodo: Standard Methods for the Examination of Water and
Watewater,
20th Ed. 1998 (APHA-AWWA-WEF)
Siembra en Placa
1 mL. Tiosulfato
de Sodio
al 3% (*)
1mL
CONTROLES
Muestra de
(-)
(+)
Agua Potable
Diluyente
10 mL
1 mL
(-)
1mL
10-1
1 mL
1mL
10-2
1 mL
1mL
10-3
1 mL
10-n
1 mL
Agar
(+)
Agregar :
Agar Plate Count
PC
OGY
15 mL
Ambiental (-)
Incubar:
a 35 +/- 0,5 C / 48 h
Lectura: entre 30 300 colonias / placa
Homogenizar
(* ) Solo para la toma de muestra de agua potable adicionar 1 mL.
Tiosulfato de Sodio
al 3% para inactivar el cloro libre o residual presente en este tipo
de muestras.

NUMERACION DE COLIFORMES (NMP/100ml)

Watewater,
I. PRUEBA PRESUNTIVA
(*) Adicionar 1 mL.
De
Tiosulfato de Sodio
AGUA POTABLE
Muestra 1 Litro
10 mL de muestra pura a cada tubo
Caldo Lauril
Sulfato
Triptosa a 2x :
10 mL
Incubacin: Temperatura: 35 + 0,5 C
Tiempo: 24 + 2h - 48 + 3h.
Lectura: Gas (
+ ), Acidez y Turbiedad
II. PRUEBA CONFIRMATIVA

Inocular una asada de los tubos positivos del Caldo
(Prueba Presuntiva) a
Caldo Bilis-Verde Brillante 2% (Brilla)
Lauril Sulfato

Tiempo: 24 + 2h - 48 + 3h.

Lectura:
(*
Gas (
+ ),
Acidez
y Turbiedad
Con numero de tubos Caldo

BRILLA (+) positivos ir a la tabla
del Metodo oficial del Standard
Methods y determinar presencia
de Coliformes NMP/100mL.
Solo para la toma de muestra de

agua potable adicionar 1 mL. Tiosulfato de Sodio
al 3% para inactivar el cloro libre o residual presente en este tipo de
muestras.
NUMERACION DE COLIFORMES FECALES (NMP/100ml)

Watewater,
I. PRUEBA PRESUNTIVA
(*) Adicionar 1 mL.
De
Tiosulfato de Sodio
AGUA POTABLE
Muestra 1 Litro
10 mL de muestra pura a cada tubo
Caldo Lauril
Sulfato
Triptosa a 2x :
10 mL
Tiempo: 24 + 2h - 48 + 3h.
Lectura: Gas (
+ ), Acidez y Turbiedad
II. PRUEBA CONFIRMATIVA

Inocular una asada de los tubos positivos del Caldo
(Prueba Presuntiva) a
Caldo EC A1
Lauril Sulfato
Incubacin: Temperatura: 44.5 +
0,2 C (Bao de
Agua)

Tiempo: 21 + 2h.
Lectura:
Gas (
+ ),
Acidez
Turbiedad
Con numero de tubos Caldo EC A1
(+) positivos ir a la tabla del
Mtodo oficial del Standard Methods
determinar
la
presencia
de
coliformes fecales NMP/100mL.
(* ) Solo para la toma de muestra de agua potable adicionar 1 mL.

Tiosulfato de Sodio
al 3% que va inactivar el cloro libre o residual presente en este tipo de
muestras.
Identificacin de Organismos Coliformes IMVIC NMP/100mL

(Escherichia Coli).
I. Aislamiento Selectivo
De tubos de Caldo EC Gas(+)
Sembrar en Agar Mc. Conkey
Incubar: T: 35 + 0,5 C
T: 24 + 2h.
Colonia Tpica de
Escherichia coli
II. Purificar una colonia tpica E. coli

Tubo
en Agar nutritivo Placa y/o

Coloracin:
GRAM(-) no esporulado
Incubar: T: 35 + 0,5 C

T: 24 + 2hh.
III. Prueba
Confirmativa
Bioqumicas
Caldo
MR
VP Medium
Agar
Citrate
Triptona
Simmons
Incubacion:
Tiempo:
24 + 2h.
Temperatura = 35 + 0,5 C
5 dias
48 + 3h.
48 +
3h.
Adicionar 2
gotas Rx. Kovacs
LECTURAS:
( + )
( + )
( - )
( - )
ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS POR FILTRACIN

http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-controlalimentario/practicas-1/practica-1-analisis-microbiologico-de-aguas-por
1. Fundamento
La presencia de bacterias patgenas en el agua destinada al consumo humano es un
riesgo siempre presente, que se incrementa en las reas de mayor densidad de la poblacin.
La tcnica de filtracin por membrana (MF) se basa en hacer pasar la muestra de agua
problema a travs de un filtro de membrana microporosa, en cuya superficie quedan retenidos
los microorganismos. Se utilizan membranas que tienen un tamao de poro de 0.45 micras ya
que la mayora de los microorganismos tienen un tamao superior (dimetro).
La normativa para abastecimiento y control de calidad de agua potable de consumo
pblico establece como anlisis microbiolgicos a realizar las determinaciones de: coliformes
totales, coliformes fecales, grmenes totales, estreptococos fecales y clostridios sulfitoreductores. El nmero de determinaciones se establece para cada tipo de anlisis, si este es
mnimo, normal o completo.
2. Material
Recipiente estril para toma de muestras
Sistema de filtracin y fuente de vaco
Membranas de filtracin de 0.45 micras de dimetro de poro.
Pinzas de acero con bordes biselados
Placas Petri.
Mechero
Medio Slanetz y Bartley (Merck 1.05262.0500) para anlisis de Enterococos fecales


Agar Chromocult Coliform (Merck: 1.0426.0100) para anlisis de E. coli y Coliformes.
Equipo de filtracin
Medios de cultivo
3. Preparacin del medio de cultivo Slanetz y Bartley.
Pesar 41.5 g/litro de agua
Esterilizar por calor durante 20 minutos en corriente de vapor
Enfriar rpidamente
No autoclavar
Dispensar en placas. (El medio tiene un color plido amarillo-marrn, aunque pueden
aparecer tintes rojizos)
4. Preparacin del medio de cultivo Chromocult.
Este medio se emplea para la deteccin simultnea de coliformes totales y E. coli en

agua y alimentos
Disolver 26.5g/litro de agua calentando en agua hirviendo o en autoclave con corriente

de vapor
Agitar aproximadamente durante 35 min. (Puede quedar turbio pero no tiene efectos
significativos)
No introducir en autoclave.
Dispensar en placas de petri.

5. Procedimiento
Limpiar con alcohol la superficie del portafiltros.
Colocar un filtro de membrana sobre el soporte con la ayuda de unas pinzas de acero
previamente flameadas con alcohol.
Situar un embudo sobre el soporte hasta que est fijo.
Verter la muestra de agua problema en el embudo (100ml) y aplicar el vaco hasta que
el lquido se haya filtrado.
Romper el vaco y extraer el embudo. Con las pinzas flameadas se extrae el filtro del
soporte.
Se coloca el filtro dentro de una placa Petri sobre el medio de cultivo, con la cuadricula
hacia arriba, procurando que no se formen burbujas entre la membrana y el medio de
cultivo.
Las placas se llevan a incubar en posicin invertida en la estufa: Coliformes totales

y E.coli: 24 horas a 37C; Estreptococos fecales: 48 horas a 37C.
Colonias caractersticas: Las colonias de E. coli son azul oscuro a violeta y los
coliformes totales son de color salmn a rojo. Si aparecen colonias azul claro a turquesa o
incoloras, puede tratarse de otras bacterias Gram negativas. Para confirmar E. coli puede
cubrirse la colonia azul-violeta con una gota del reactivo de Kovacs. Si este reactivo da un
color cereza-rojo despus de algunos segundos, significa que son colonias indol positivo,
que confirma la presencia de E. coli.
Por otra parte los Estreptococos fecales en el medio Slanetz y Bartley producen
colonias de color granate.
Los resultados se expresan en nmero de microorganismos/100 ml de agua.


Filtro de mebrana
RECUENTO DE GRMENES EN FILTROS DE MEMBRANA

http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-control-alimentario-1/practicas/?
searchterm=None
1. Fundamento
El recuento de grmenes en filtros de membrana, se basa en la propiedad que tienen estos
filtros de permitir el paso rpido de grandes volmenes de soluciones acuosas y de retener
las bacterias existentes en stas. Las bacterias retenidas en el filtro pueden cultivarse
posteriormente colocando ste sobre un disco de papel absorbente, el cual ha sido saturado
con un medio de cultivo lquido. Los nutrientes del medio de cultivo, pasan a travs de los
poros de membrana, permitiendo de esta forma, el crecimiento de las bacterias, y la
formacin de colonias visibles. Normalmente
se utiliza esta tcnica en el anlisis
bacteriolgico de aguas y bebidas, y cuando se sospeche un nmero bajo de grmenes.
2. Material
Equipo de filtracin Millipore estril. Bomba de vaco.

Filtros de membrana tipo IIA, de 0.45 micrmetros de dimetro de poro,
estriles.
Placas de Petri y pipetas, estriles. Pinzas.
Medo de cultivo segn microorganismo (caldo de triptosa soja, caldo
MacConkey, caldo para Enterococos..etc.). Tienen frmulas especiales.
Solucin Ringer al 0.25. estril.
Estufa a 35-37C.

3. Mtodo
Montar el equipo de filtracin aspticamente.

Colocar un filtro de membrana, con la rejilla hacia arriba, entre las dos
Poner la muestra en el embudo y conectar la bomba de vaco.
Cuando haya pasado toda la muestra adicionar solucin Ringer al 0.25,
con objeto de lavar.
Desconectar la bomba de vaco.
Poner un disco de papel absorbente en placa de Petri estril y adicionar
con una
pipeta el medio de cultivo hasta saturacin.
Levantar la parte superior del embudo y retirar el filtro aspticamente.
Colocar el filtro, con la rejilla hacia arriba, sobre el disco que tiene el
medio de cultivo, procurando que no queden bolsas de aire entre
ambos. Higiene, Inspeccin y Control Alimentario
Incubar a 35-37C.
Contar las colonias crecidas sobre la superficie del filtro.
Expresar el resultado como unidades formadoras de colonia colonias
(ufc)/mL
Bibliografa Bsica
1. Annimo, 1989. Manuales para el control de calidad de los alimentos.9. Introduccin a
la toma de muestras de alimentos. Ed. FAO. Roma.
2. Belitz, H.D. y Grosch, W., 1988. Qumica de los alimentos. Ed. Acribia. Zaragoza.
3. De Juana E., y De Juana A. J.R. 1987. Gua de pescados y mariscos de consumo
usual en Espaa. Ediciones Omega, S.A. Barcelona, Espaa.
4. Infante Gil, J. 2000. Manual de Inspeco sanitria de carnes. II Volume. Aspectos
Especiais. Servio de Educao. Fundao Calouste Gulbenkian, 2 Edicin. Lisboa.
Portugal.
5. Gracey, J.E. 1989. Higiene de la carne. 8 ed. Interamericana-Mc Graw-Hill.
6. Libro de Prcticas. 2000. Bromatologa e Inspeccin de Alimentos, Gua Docente de la
Universidad de Murcia. Ed. Diego Marn.

7. Moreno, B. 2006. Higiene e Inspeccin de Cranes I. Editorial Daz de Santos. Madrid.
Espaa.
8. Mossel, D.A.A., Moreno, B. y Struijk, C.B. 2003. Microbiologa de los Alimentos.
2Edicin. Editorial ACRIBIA, S.A. Zaragoza, Espaa.
9. Pascual Anderson, M. R., y Caldern y Pascual V. 2000. Microbiologa Alimentaria.
Metodologa Analtica para Alimentos y Bebidas. 2 Edicin. Editorial Daz de Santos
S.A. Madrid, Espaa.
10. Vacclavick, V.A. 1998. Fundamento de Ciencia de los Alimentos. Editorial Acribia, S.A.
Zaragoza. Espaa.
11. Varnam, A.H. y Sutherland, J.P. 1994. Leche y Productos Lcteos. Tecnologa,
Qumica y Microbiologa. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza. Espaa.
12. Yousef, A.E. y Carlstrom, C. 2006. Microbiologa de los Alimentos: Manual de
Laboratorio. Editorial ACRIBIA, S.A. Zaragoza, Espaa.
Bibliografia Complementaria
1. Huss et al. Assesment and Management of seafood safety and quality. FAO Fishering
Series, Roma (2000). ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/006/y4743e/y4743e00.pdf

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