Вы находитесь на странице: 1из 371

TERAPIA CELULAR CON

CLULAS MADRE Y
MEDICINA REGENERATIVA

Terapia celular con


clulas madre y
medicina regenerativa
Dr. Gerardo Martn Gonzlez Lpez
Presidente de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C.

Dr. Dolores Javier Snchez Gonzlez


Vicepresidente Operativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C.

Dr. Carlos Armando Sosa Luna


Vicepresidente Administrativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C.

Editorial
Alfil

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Todos los derechos reservados por:
E 2009 Editorial Alfil, S. A. de C. V.
Insurgentes Centro 51A, Col. San Rafael
06470 Mxico, D. F.
Tels. 55 66 96 76 / 57 05 48 45 / 55 46 93 57
email: alfil@editalfil.com
www.editalfil.com
ISBN 9686077504023
Primera edicin, 2009

Direccin editorial:
Jos Paiz Tejada
Editor:
Dr. Jorge Aldrete Velasco
Revisin editorial:
Irene Paiz, Berenice Flores
Diseo de portada:
Arturo DelgadoCarlos Castell
Dibujos:
Alejandro Rentera
Impreso por:
Impresiones Editoriales FT, S. A. de C. V.
Calle 15 Manz. 42 Lote 17, Col. Jos Lpez Portillo
09920 Mxico, D. F.
Diciembre de 2008
Esta obra no puede ser reproducida total o parcialmente sin autorizacin por escrito de los editores.
Los autores y la Editorial de esta obra han tenido el cuidado de comprobar que las dosis y esquemas teraputicos sean correctos y compatibles
con los estndares de aceptacin general de la fecha de la publicacin. Sin embargo, es difcil estar por completo seguros de que toda la informacin proporcionada es totalmente adecuada en todas las circunstancias. Se aconseja al lector consultar cuidadosamente el material de instrucciones e informacin incluido en el inserto del empaque de cada agente o frmaco teraputico antes de administrarlo. Es importante, en especial,
cuando se utilizan medicamentos nuevos o de uso poco frecuente. La Editorial no se responsabiliza por cualquier alteracin, prdida o dao que
pudiera ocurrir como consecuencia, directa o indirecta, por el uso y aplicacin de cualquier parte del contenido de la presente obra.

Autores

Dr. Gerardo Martn Gonzlez Lpez


Presidente de la Sociedad Internacional de Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C. Mdico cirujano militar (Escuela Mdica Militar). Maestro en Ciencias Biomdicas en el rea de
morfologa y embriologa (Escuela Militar de Graduados de Sanidad). Jefe de la Seccin de Investigacin y Doctrina
Militar de la Escuela Mdico Militar. Profesor titular de Anatoma Humana y Embriologa de la Escuela Mdico
Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Especialista en reproduccin in vitro (Escuela Militar
de Graduados de Sanidad, Hospital Central Militar y Clnica de Especialidades de la Mujer). Maestra en Terapia
Celular, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento. Instituto Tecnolgico de Estudios Superiores de Monterrey.
Ganador del Premio Nacional a la Creatividad en Investigacin 2007 (Cmara Nacional de la Industria Farmacutica). Ganador del XIV Premio Nacional de Investigacin en el rea indita bsica 2003 (Fundacin GlaxoSmith
Kline).
Dr. Dolores Javier Snchez Gonzlez
Vicepresidente Operativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C. Maestro en Ciencias Biomdicas en el rea de morfologa e histologa (Escuela
Militar de Graduados de Sanidad). Doctor en Ciencias de Investigacin en Medicina (Escuela Superior de Medicina
del Instituto Politcnico Nacional). Profesor titular de Biologa Celular y Tisular de la Escuela Mdico Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Profesor de la Asociacin Nacional de Medicina y Patologa Esttica, A. C. Jefe del Laboratorio de Biologa Celular y Tisular de la Escuela Mdico Militar. Miembro del Sistema
Nacional de Investigadores CONACYT (Investigador Nacional Nivel I). Socio Fundador del Colegio Mexicano de
Clulas Madre y Medicina Regenerativa, A. C. Colegiado titular del Colegio Nacional de Mdicos Militares, A. C. Ganador del XIV Premio Nacional de Investigacin en el rea indita bsica 2003 (Fundacin GlaxoSmithKline).
Dr. Carlos Armando Sosa Luna
Mdico cirujano militar (Escuela Mdico Militar). Especialista en Medicina Integral y de Urgencias (Escuela Militar
de Graduados de Sanidad/Hospital Central Militar). Maestro en Ciencias Biomdicas en Farmacologa y Profesor
titular de Farmacologa de la Escuela Mdico Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Jeje de
la subseccin de Evaluacin Educativa, Seccin Pedaggica de la Escuela Mxico Militar. Profesor de la Asociacin
Mexicana de Neurologa y Psiquiatra, A. C. Presidente de la Asociacin Mexicana de Amigos de Pacientes Esquizofrnicos, A. C. Ex presidente de los Jvenes Inventores de la Asociacin Nacional de Inventores, A. C. Fundador
de la Asociacin Nacional de Jvenes Inventores, A. C. Ex secretario de la Sociedad Mexicana de Salud Mental,
S. C. Ganador del Premio Nacional de los Proyectos Creativos, Cientficos y Tecnolgicos de la Juventud 1996 y
1997. Expositor nacional en el Museo Tecnolgico (CFE), Tecnologa 97 (CANACINTRA) y en PLAZA INN.

VI

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Autores)

Contenido

Captulo 1.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Captulo 2.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

37

Captulo 3.

Biologa celular y molecular de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

61

Captulo 4.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

81

Captulo 5.

La terapia celular en la prctica mdica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

103

Captulo 6.

Terapia celular y bioingeniera de tejidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

149

Captulo 7.

Terapia celular y neurorregeneracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

187

Captulo 8.

Terapia celular en el sistema cardiovascular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

245

Captulo 9.

Aspectos inmunolgicos de la terapia celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

271

Captulo 10. Entorno actual de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

319

ndice alfabtico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

349

VII

VIII

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Contenido)

Agradecimientos
Dolores Javier Snchez Gonzlez

Por su colaboracin en la captura y revisin de textos:


Dr. Ismael Vsquez Moctezuma,
Q. C. Claudia Mara Martnez Martnez,
BSc. Marisol Nez Snchez y
M. en C. Dairo Jess Orjuela Henry.

IX

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Agradecimientos)

Captulo

Historia de la terapia celular


y de la medicina regenerativa

HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR

como medicina regenerativa. Se puede decir que es un


tratamiento biolgico basado en los conocimientos de
la teraputica quirrgica, mdica y de rehabilitacin,
constituyndose como el nuevo paradigma en los tratamientos, y es en la actualidad el ms avanzado de la medicina (medicina del siglo XXI). A diferencia de la teraputica que ofrecen las especialidades mdicas
modernas, la terapia celular aborda al organismo de manera integral. Este paradigma qued en el olvido en las
ltimas dcadas del siglo XX por la necesidad de formar
especializaciones mdicas y quirrgicas, pero la sociedad anhela recuperarlo en el modelo del mdico general, quien se ha identificado con la especialidad de Medicina Familiar e intenta recuperar el prestigio del cual
gozaba anteriormente por el simple hecho de ser mdico.
A diferencia de la teraputica farmacolgica (regulacin de las funciones o eliminacin de infecciones) o
quirrgica (reseccin, reparacin o trasplante), la tera-

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Introduccin
En un episodio de la mitologa griega, Zeus castiga a
Prometeo por revelar el conocimiento del fuego a la humanidad. Ello dio lugar a que Prometeo fuese encadenado a una piedra y Zeus enviaba todos los das a un
guila a comerle el hgado. A pesar de esto, el hgado de
Prometeo se regeneraba diariamente permitindole sobrevivir. Con este ejemplo, los cientficos, investigadores y mdicos de hoy esperan ver realizado el legendario
concepto de regeneracin. En el mbito de la nueva medicina regenerativa y antienvejecimiento, la terapia celular emplea clulas madre con el propsito de restaurar
lo perdido o daado en las clulas envejecidas, as como
tambin en los tejidos enfermos del organismo, utilizando innovadoras tcnicas cientficas.
La terapia celular o celuloterapia1 surge de la efectividad teraputica por administracin de clulas nuevas,
liofilizadas o hidrolizadas provenientes de tejidos sanos
controlados, por medio de inyecciones parenterales y
locales. Adquiere importancia cuando se considera que
su accin no se basa en productos de sntesis qumica,
por lo general ajenos al organismo humano, sino en elementos celulares de mdula sea, de cordn umbilical
y de placenta, los cuales son similares o comunes en todas las especies superiores y pueden contribuir a la curacin de los enfermos. La terapia celular surge de las
relaciones interdisciplinarias con la teraputica mdica
1.

Da 151

Figura 11. Clulas madre derivadas de endotelio en verde


fluorescente (marcados con protena GFP) al da 151 de
aplicadas como terapia celular, donde se observa que han
regenerado la pared vascular coronaria afectada. Experimentos in vivo en ratn que muestran la capacidad de las
clulas madre de integrarse y diferenciarse en el tejido del
hospedero.

Zelluoterapie (en alemn).

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 1)

Desarrollo humano

Oocito fecundado

3 das
mrula

5 a 7 das
blastocisto

Clulas madre Clulas madre


embrionarias Embrionarias
(ESC)
totipotenciales

Embriones
de 4 semanas

Clulas madre
de tejido fetal
pluripotentes o
multipotentes

Embriones
de 6 semanas

Clulas germinales
primordiales
pluripotenciales
(EGC)

Infante

Adulto

Clulas madre Clulas madre de


carcinoma
de adulto
pluripotentes y embrionario (ECC)
multipotentes pluripotentes

Clulas madre de cordn


umbilical y clulas madre
de placenta pluripotentes
o multipotentes
Figura 12. Origen de las clulas madre (stem cells): habitualmente la terapia celular emplea clulas madre embrionarias (ESC)
del cordn umbilical y del adulto. Teratocarcinoma (tumor de clulas germinales).

pia celular tiene la capacidad de regenerar los tejidos daados restableciendo la salud y la vitalidad al organismo
enfermo, proporcionando a los trillones de clulas elementos teraputicos eficaces, ya sea por el contenido
biomolecular en el interior de las clulas o bien integrndose al tejido para diferenciarse en los sitios daados o lesionados (figura 11). Diversos experimentos
de biologa celular indican que cada clula est dotada
de una capacidad de autoorganizacin. La clula constantemente disminuye y reconstruye su propia materia
y adems es capaz de lograr una estrecha unin con
otras clulas del mismo tipo para formar tejidos especficos y, a partir de stos, rganos. Esta capacidad de activacin de las clulas est dentro de ellas mismas. sta
es una de la razones para preferir la terapia celular con
clulas madre extradas de diversos tejidos tanto de
humanos como de animales, aunque tambin existe la
posibilidad de obtener clulas madre (stem cells) adultas provenientes de la mdula sea, sangre umbilical o
perifrica y de tumores. Esto es posible ya que las clulas humanas y animales estn formadas con DNA,
RNA, molculas de protenas, carbohidratos y lpidos.
La teora celular ha permitido comprender que todas las
clulas de los organismos vivos tienen las mismas estructuras y las mismas funciones elementales: no hay diferencias entre las clulas humanas y las clulas animales.
En la actualidad, en el nivel III de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, la terapia celular aplica clulas madre (stem cells) humanas de diferente origen
embrionario, de cordn umbilical, de adulto, etc. (figura
12), as como clulas y sustancias derivadas de rganos
de otros organismos jvenes o de humanos por biotecno-

loga de DNA recombinante, tales como insulina, eritropoyetina, etc. (medicina regenerativa de nivel I y II).
En Europa, la terapia celular ya se aplicaba desde
hace ms de dos siglos y hoy en da su uso es ms frecuente, formando parte del arsenal teraputico de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, la cual presenta una tendencia exponencial en su desarrollo. Por
ejemplo, en la actualidad existen ms de 30 frmacos
(teraputica biolgica) basados en las protenas y pptidos humanos y de animales. Ejemplos de estas terapias
son los modernos frmacos inmunomoduladores como:
interferones, factores estimuladores de colonias, factores de crecimiento, inmunoglobulinas, albmina y factores de transferencia. Estos ltimos han revolucionado
la industria de la salud con patentes que permiten su extraccin en grandes cantidades a partir de calostro bovino, huevo, liofilizados de leucocitos humanos y de cocodrilos, muchos de los cuales han sido aceptados para
su venta en EUA bajo la regulacin de la Food and Drug
Administration (FDA) o bajo el esquema de nutracuticos, en Mxico, Rusia y la Unin Europea.
La importancia de la terapia celular, medicina regenerativa y antienvejecimiento en la actualidad se deduce al
considerar la siguiente declaracin de la Asociacin Mexicana de Industriales Farmacuticos, A. C. (AMIF):2
De las enfermedades existentes, tan slo 30% pueden
curarse; en cuanto al 70% restante, slo se pueden combatir sus sntomas o se est casi indefenso ante ellas.
Esta declaracin es un excelente reflejo del limitado
2. Principales diarios de la capital aparecieron todos los das
durante la semana del 28 de julio al 2 de agosto de 1986.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

Teraputica actual
Reseccin
Trasplante

Quirrgica
Reparacin

Mdica

Farmacolgica

Biolgicas
Nutracutico

Psicolgica
Fsica

Terapia celular
Medicina regenerativa y
antienvejecimiento

Radioterapia

Rehabilitacin
Otras

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 13. Cuadro sinptico del progreso de la teraputica mdica a travs del tiempo (t). Snchez GDJ, Gonzlez LGM y Sosa
LCA.

alcance de la teraputica actual3 en la medicina (figura


13). La declaracin anterior tambin explica el xito
de la medicina alternativa y naturista, orientacin actual
que est afectando a la medicina del siglo XXI; esto se
debe a que existe una gran demanda de servicios y productos que ofrecen salud a individuos sanos y enfermos.
Los pacientes del siglo XXI estn examinando con
mente ms abierta nuevos horizontes en la curacin de
sus enfermedades, de manera que existe un crecimiento
acelerado en la aplicacin de medicinas alternativas
(homeopata, acupuntura, medicina natural, etc.) que no
siempre ofrecen resultados tan satisfactorios y honestos
como la medicina alpata. Si se considera que este grupo de profesionistas est aumentando y ofreciendo servicios con los ms estrictos criterios de tica profesional, aplicando terapias alternativas que los pacientes
perciben ms eficaces para resolver sus dolencias y enfermedades crnicodegenerativas, hoy en da representan un verdadero reto para el profesional que presta
servicios de atencin a la salud. Sin embargo, la terapia
celular no debe ser clasificada como parte de la medicina alternativa o naturista, ya que se trata de la evolucin a un nivel ms avanzado de la medicina alpata,
por lo que debe ser clasificada como medicina cientfica de frontera y ha sido sustentada por diversos descubrimientos cientficos aportados por notables mdicos e investigadores, entre ellos varios premios Nobel
(cuadro 11), cuyos resultados teraputicos pueden ser
calificados hoy en da por algunos profesionales y especialistas de la medicina alpata como de ciencia ficcin, imposibles o milagrosos. A pesar de ello, el Presupuesto del Gobierno Federal Mexicano en materia de
Salud es de 25 000 millones de pesos anuales; de stos,
3.

Habitualmente referida como alpata.

70% se destinan a la atencin mdica de las enfermedades crnicodegenerativas, seguido de 10% para el tratamiento de las infecciones y 20% para el resto de las
enfermedades y padecimientos.4
Tambin hay evidencia de esfuerzos cientficos para
adquirir experiencia clnica en terapia celular. Por ejemplo, en un peridico5 se public la noticia de que en el
Hospital Infantil Federico Gmez, de la Ciudad de
Mxico, se haba realizado un trasplante de clulas de
pncreas de origen porcino en 10 nios, reducindose el
tratamiento con insulina en 65% y sealndose de manera responsable que con este mtodo no se esperaba lograr la curacin total de la diabetes mellitus, pero s la
regeneracin, revitalizacin y rejuvenecimiento del
pncreas, con la intencin de mantener estable la enfermedad durante el mayor lapso posible y la regeneracin
natural de los tejidos que se realiza durante la divisin
celular, diferenciacin y crecimiento de clulas madre
(clulas satlites en el msculo) que se encuentran disgregadas en los diversos rganos del organismo. Con el
advenimiento del cultivo celular y de la disposicin de
bancos de lneas celulares, hoy en da es posible trasplantar clulas madre o tejidos jvenes liofilizados que
reemplacen las clulas faltantes, as como las molculas
bioactivas necesarias, para iniciar una regeneracin de
los tejidos existentes. Cuando estos insumos son insuficientes se trasplantan clulas (terapia celular con clulas madre) con la intencin de sustituir el nmero y funcin de las clulas enfermas o envejecidas. El
descubrimiento de las clulas madre adultas y las clulas madre embrionarias ha elevado la capacidad de la te4.

Secretario de Salud Jos ngel Crdova Villalobos. 9 de


octubre del 2007.
5. Reforma, jueves 20 de julio de 2000.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 1)

Cuadro 11. Ganadores del Premio Nobel en Fisiologa y Medicina que han contribuido
en el desarrollo de la terapia celular
2007
2002
1999
1997
1996
1994
1993

1990
1989

1987
1983
1980
1962
1960
1955
1946
1931
1926
1920
1919
1913
1912
1910
1909
1908
1906

Mario Capecchi, Oliver Smithies y Sir Martin Evans por sus trabajos sobre clulas madre y manipulacin gentica en
modelos animales
Sydney Brenner, H. Robert Horvitz, John E. Sulston por su investigacin sobre el fenmeno de la apoptosis con los
nemtodos C. elegans
Gnter Blobel por descubrir que las protenas tienen seales intrnsecas que gobiernan su transporte y situacin en la
clula
Stanley B. Prusiner por el descubrimiento del prin como partcula infecciosa proteica
Peter C. Doherty, Rolf M. Zinkernagel por sus descubrimientos sobre la respuesta inmunitaria de las clulas frente al
ataque de organismos infecciosos
Alfred G. Gilman y Martin Rodbell por descubrir las protenas G y su participacin en la transduccin de seales intracelulares
Richard J. Roberts, Phillip A. Sharp por su trabajo sobre los intrones, fragmentos de DNA que no tienen nada que ver
con la informacin gentica. Pudieron describir que la informacin depositada en un gen no estaba dispuesta de
manera continua, sino fraccionada
E. Donnall Thomas, Joseph E. Murray por sus descubrimientos acerca del trasplante celular y de rganos en el tratamiento de enfermedades humanas. Thomas fue pionero del trasplante de mdula sea y de la terapia celular
J. Michael Bishop, Harold E. Varmus, pues con sus hallazgos se pudo comprender la produccin de tumores malignos
a partir de cambios que se producen en genes normales de una clula, que no slo son producidos por virus, sino
que tambin pueden ser producidos por radiaciones, sustancias qumicas, etc.
Susumu Tonegawa por su descubrimiento del fundamento gentico de la formacin de los anticuerpos
Barbara McClintock por su trabajo con los transposones
Baruj Benacerraf, Jean Dausset, George D. Snell por sus descubrimientos acerca de estructuras de la superficie celular determinadas genticamente que regulan las reacciones inmunolgicas (sistema HLA)
Francis Harry Compton Crick, James Dewey Watson, Maurice Hugh Frederick Wilkins por el descubrimiento de la
estructura del DNA
Sir Frank Macfarlane Burnet, Peter Brian Medawar por sus descubrimientos sobre la tolerancia inmunolgica adquirida
Axel Hugo Theodor Theorell por sus trabajos sobre los procesos bioqumicos de las enzimas
Hermann Joseph Muller, autor de notables estudios acerca de la accin de los rayos X como productores de mutaciones y de la accin de las radiaciones sobre las clulas
Otto Heinrich Warburg por sus investigaciones sobre el citocromo en la respiracin celular
Johannes Andreas Grib Fibiger por sus investigaciones sobre la hiptesis inflamatoria en la etiopatogenia del cncer
Schack August Steenberg Krogh por establecer el mecanismo que regula el intercambio gaseoso en la respiracin y
descubrir la fisiologa de los vasos capilares
Jules Bordet por el hallazgo de un factor bactericida presente en el suero de la sangre de los mamferos, conocido
como complemento
Charles Robert Richet por descubrir la anafilaxia
Alexis Carrel por trabajos sobre sutura vascular y trasplante de vasos sanguneos y rganos
Albrecht Kossel por sus investigaciones en biologa celular sobre protenas y cidos nucleicos
Emil Theodor Kocher por sus trabajos sobre la fisiologa, patologa y ciruga de la glndula tiroides
Ilya Ilyich Mechnikov y Paul Ehrlich por sus estudios sobre las clulas del sistema inmunitario
Camillo Golgi y Santiago Ramn y Cajal por sus investigaciones sobre las clulas del sistema nervioso

rapia celular a una medicina regenerativa y antienvejecimiento del nivel I (liofilizados de clulas provenientes
de glndulas y tejidos fetales de animales) al nivel III,
en donde se utilizan clulas madre de origen humano,
las cuales tienen tres importantes capacidades:
1. La de autorreproducirse fuera y dentro del organismo.
2. La de migrar al sitio de enfermedad, envejecimiento, dao o lesin, fenmeno conocido como
trofismo (figura 14).

3. La de diferenciarse en clulas especializadas que


conforman los tejidos, fenmeno conocido como
transdiferenciacin.
Se requieren estas tres caractersticas para poder regenerar un tejido u rgano lesionado o enfermo. Cuando
la clula madre llega al sitio de lesin, este microambiente dirige a la clula para que se diferencie en clulas
especializadas que conforman el tejido circundante; de
esta manera la clula madre (figura 15) activa sus
mecanismos intracelulares permitiendo la transforma-

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

Piel
Hgado
Lesin
Lesin

Clulas madre
(exgenas o
terapia celular)
Inyeccin intravenosa
de clulas madre

Regeneracin

Vasos sanguneos

Hepatocitos
Lesin

Clulas madre
(exgenas o
terapia celular)

Factores de crecimiento
y diferenciacin
Clulas madre
(endgenas)

Intestino

cin en endotelio, neurona, miocito, fibroblasto, etc.


Existe adems otra explicacin terica. En biologa es
bien conocida la existencia de la herencia vertical (de
padres a hijos) y la horizontal (de un organismo hermano a otro); este ltimo mecanismo ha sido evidenciado
de manera experimental en organismos procariontes
(bacterias), de manera que una bacteria resistente a un
antibitico, ante la presencia o junto a una bacteria que
no posee el gen de resistencia al antibitico, lo adquiere
(herencia horizontal).
Esta transferencia de material gentico (DNA y
RNA) se realiza a travs de crculos de cidos nucleidos
llamados plsmidos que pueden ser inyectados de una
bacteria a otra por estructuras de la pared bacteriana llamadas pilis. Sin embargo, en los organismos eucariontes (como lo son las clulas del cuerpo humano), esta herencia horizontal no se haba observado ni demostrado
experimentalmente. En experimentos del laboratorio de
los autores, el Dr. Snchez Gonzlez DJ y el Dr. Vzquez Moctezuma descubrieron la herencia horizontal en
clulas de la piel, demostrando la transferencia de material gentico de una clula a otra. En su nueva hiptesis,
a la que han llamado: SnchezGonzlezSosa, es la
herencia horizontal la que puede explicar cmo las clulas madre, al entrar en contacto ntimo con las clulas
circundantes, pueden transferir material gentico nuevo
(DNA y RNA) a las clulas envejecidas y enfermas, o
bien el DNA y el RNA del tejido circundante pueden ser
adquiridos por las clulas madre para obtener la informacin necesaria que les permita sobrevivir, una vez
diferenciadas, a la identificacin como clulas extraas
por las clulas del sistema inmunitario, mecanismo que

tambin puede explicar los experimentos in vitro, en


donde se ha observado la capacidad de las clulas madre
para revertir las caractersticas malignas de las clulas
neoplsicas.
La terapia celular y los nutracuticos (alimentos funcionales o suplementos nutricionales) van a desplazar
y/o coadyuvar con las terapias o medicamentos en la
medicina del siglo XXI. Por ejemplo, las tcnicas de liofilizacin estn permitiendo ofrecer clulas, protenas y
pptidos de origen natural para su administracin por
va enteral o parenteral. El desarrollo de implantes
Integracin
Humoral
Vaso sanguneo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 14. La inyeccin endovenosa de clulas madre de origen embrionario y adulto ha mostrado la capacidad de trofismo y
transdiferenciacin intrnseca que les permite a stas llegar al lugar en donde el organismo ms las requiere (lesin), ya que los
tejidos daados liberan factores de crecimiento y diferenciacin que les indica el sitio que tiene que ser regenerado.

Clulas madre

Estructura
Metablico
Fisico

Neural

Paracrina
Regeneracin

Figura 15. La clula madre ingresa a la circulacin por


inyeccin endovenosa, intramuscular o local. Al llegar al sitio de la lesin, el microambiente de la clula le da direccin
a la diferenciacin, para que sea igual a la del tejido hospedero, debido a diferentes estmulos estructurales, endocrinos, metablicos, fsicos, neuronales y paracrinos.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

como vlvulas cardiacas porcinas, glndulas y rganos


de embriones de oveja o inyecciones celulares de tejidos
embrionarios y adultos, es hoy en da una realidad. Las
terapias mdicas ms avanzadas se basan en tratamientos biolgicos que aplican protenas y pptidos, obtenidos de organismos o cultivos celulares de organismos
vivos controlados con y sin biotecnologa recombinante
de DNA. El campo de la farmacologa se est enriqueciendo al cambiar el paradigma de molculas pequeas
extradas de plantas, y despus sintetizadas en laboratorio, por la bsqueda de clulas, pptidos y protenas con
actividad biolgica con ayuda de la protemica y el proyecto del genoma humano. Durante el siglo XXI estn
en pleno desarrollo la investigacin de alimentos con
propiedades medicinales, los llamados alimentos funcionales y nutracuticos. Sin embargo, sin lugar a dudas
es la inminente investigacin cientfica con clulas
madre y su aplicacin clnica como terapia celular en la
medicina regenerativa y antienvejecimiento la que verdaderamente regenera a las enfermedades crnicodegenerativas y a los ancianos, siendo primicias y representantes de la revolucin en la salud y la longevidad
que habr de suscitarse. Definitivamente, con este enfoque vanguardista en la aplicacin mdica de la terapia
celular con clulas madre (stem cells) tanto de origen
embrionario como adultas, puede percibirse su importancia si se considera que el cuerpo humano est formado por trillones de clulas, las cuales son reemplazadas por otras tantas; es decir, en todos los aparatos y
sistemas (a excepcin de las clulas nerviosas y musculares)6 estn en continua renovacin, unas a mayor velocidad, como en el tubo digestivo, piel y sangre, y otras
con ms lentitud, como las del hueso y el hgado.
En los modelos experimentales en los que el hgado
es incapaz de sostener la vida del organismo, la inyeccin de 1 000 hepatocitos aislados (terapia celular de
medicina regenerativa de nivel II) permite que ese hgado daado, que ocasionara la muerte por insuficiencia
heptica, se regenere, formando cmulos celulares
iguales a los descritos en el modelo de hepatectomas
parciales, y restablece finalmente la masa heptica original salvando la vida. Modelos matemticos han permitido calcular que un solo hepatocito da origen a 1.7
x 1010 clulas despus de slo 34 divisiones celulares.
Por ejemplo, un hgado de rata normal contiene 3 x 108
clulas, y un hepatocito en estas condiciones podra generar unos 50 hgados en una rata. Puede imaginarse la
capacidad que tiene una clula madre para regenerar
6. La reparacin e hipertrofia de los tejidos musculares y ner-

viosos dependen de los depsitos asilados en los tejidos de


clulas troncales o madre son conocidas como satlite.

(Captulo 1)

todos los tejidos, lo que se conoce como medicina regenerativa de nivel III.
Se calcula que en el interior del cuerpo humano mueren cada segundo unos 50 millones de clulas que son
reemplazadas por otras tantas. Sin embargo, al enfermar
o envejecer disminuye la calidad y cantidad de clulas,
por lo que es necesaria la sustitucin, para que clulas
jvenes reemplacen a las viejas que se han vuelto imperfectas (medicina antienvejecimiento); es esta reposicin de clulas o constituyentes celulares, con clulas o
derivados bioactivos de ellas, procedentes de organismos jvenes, el fundamento de la medicina regenerativa y antienvejecimiento si adems se considera que las
personas de edad avanzada se tornan cada vez ms vulnerables a enfermedades, y sufren debilitamiento natural de sus defensas antioxidantes y de su sistema inmunitario; entonces la terapia celular se convierte en el
mejor tratamiento antienvejecimiento.

Terapia celular
Existen por lo menos tres tcnicas diferentes de terapia
celular:
1. Terapia con clulas frescas: en un tiempo no mayor de 45 min a 3 h se deben remover las clulas
del embrin, el feto, el cordn umbilical, la placenta o los rganos que se necesite preparar en
suspensin e inyectarlas al paciente. Es el mtodo
original y as se trabaj durante aos, hasta que la
tcnica produjo otras alternativas igualmente
efectivas.
2. Terapia con clulas congeladas (criopreservacin): despus de obtenido el material celular se hace
una congelacin rpida (criognica) a temperaturas
de hasta 196 _C logrando conservar ntegros la
vitalidad y el poder teraputico, as como la esterilidad del medio, por periodos de meses o aos.
Como referencia recurdese cmo el esperma humano y animal se congelan con un mtodo similar
para inseminacin ulterior durante largos periodos.
3. Terapia con clulas desecadas (liofilizados): el
producto es desecado por el mtodo de liofilizacin, conservando as el material celular biolgico
intacto durante aos. Es un mtodo prctico que
permite el manejo, transporte y control ms convenientes. Las clulas producidas se elaboran bajo
las ms modernas condiciones tcnicas y su reputacin y calidad son reconocidas por los ministerios de salud de pases tan estrictos en sus normas
de calidad como Suiza y Alemania.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Cuadro 12. Indicaciones de la terapia celular


Revitalizacin general y reactivacin de la salud
S Deterioro fsico con disminucin de la vitalidad (envejecimiento cronolgico)
S Agotamiento fsico, psquico o ambos (andropausia y menopausia)
S Secuelas de enfermedad u operacin
S Depresin, estrs emotivo (sndrome general de adaptacin)
S Envejecimiento prematuro y desgaste de varios sistemas y rganos: cerebro, corazn, circulacin, pulmones, hgado, riones, aparato digestivo (celulitis, arrugas, canas, pecas, insuficiencia renal crnica, EPOC, Alzheimer, insuficiencia vascular
crnica, divertculos, etc.)
S La revitalizacin general puede usarse en todas las edades (envejecimiento biolgico)
Disfuncin de las glndulas del sistema endocrino
S Hipotiroidismo
S Trastornos menstruales
S Obesidad por trastornos glandulares (sndrome metablico)
S Trastornos en los hombres (disfuncin erctil)
S Diabetes mellitus
S Hipertrofia prosttica benigna
Enfermedades crnicodegenerativas
S Cardiopata coronaria e insuficiencia cardiaca Hernias discales
S Hipotensin e hipertensin arterial Parlisis faciales
S Secuelas de accidente vascular cerebral Hipoacusia
S Enfermedad pulmonar obstructiva crnica
S Desrdenes digestivos crnicos
S Insuficiencia y cirrosis heptica
S Enfermedad de Parkinson
S Arteriosclerosis Insuficiencia cardiaca
S Insuficiencia vascular cerebral
S Osteoartrosis (enfermedad articular degenerativa)
S Osteoporosis (desmineralizacin sea)
S Anemias
S Trastornos mentales por deterioro cerebral e intelectual (esquizofrenia y demencias)
Enfermedades del sistema inmunitario
S Baja resistencia y susceptibilidad a infecciones Apoyo al tratamiento de quimioterapia y radioterapia en linfoma, leucemias y mieloma mltiple
S Artritis reumatoide
S Lupus eritematoso Vitligo
S Esclerodermia, psoriasis
S Asma bronquial
Trastornos de paciente en edad peditrica
S Retraso en el crecimiento de origen hipofisario
S Subdesarrollo de rganos sexuales
S Sndrome adiposogenital
S Parlisis cerebral infantil
S Mongolismo (sndrome de Down)
S Debilidad mental moderada, por hipoxia o secuelas posencefalitis o meningitis
S Pubertad tarda
S Retraso en la consolidacin de fracturas o en el cierre de las heridas
S Otras

Todas las investigaciones bsicas y pruebas clnicas emplean preparaciones congeladas o desecadas.
Los siguientes aspectos deben ser considerados durante la aplicacin de una terapia celular:

1. Es indispensable establecer un diagnstico que


sea correcto para obtener xito en la terapia celular; por ello, y para fines prcticos, es un requisito
establecer categoras e indicaciones donde se haya

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Cuadro 13. Contraindicaciones
para la terapia celular

S En el embarazo
S Todos los estados infecciosos
S Todas las enfermedades agudas y las crnicas en evolucin acelerada
S Las afecciones orgnicas descompensadas (arritmias,
cirrosis, neuropatas, insuficiencia renal aguda, edema
agudo del pulmn)
S Algunas enfermedades endocrinas por hiperfuncionamiento (enfermedad de Basedow), ya que al estimular,
el efecto sera indeseable
S Casos en que el hipofuncionamiento glandular es muy
severo (necrosis hipofisaria, Adisson por destruccin
de la suprarrenal) y donde el recurso ideal es la sustitucin hormonal
S Estados de deterioro fsico y mental tan severos que
no existan reservas orgnicas para responder al estmulo regenerativo (enfermos en estado crtico y terminal)
S En los procesos recientes de vacunacin o de aplicacin de sueros

2.

3.

4.

5.
6.

probado una mayor efectividad cientfica y clnica


(cuadro 12).
Es una teraputica biolgica cuyo objetivo es estimular, activar, reparar, regenerar y sustituir clulas de los rganos insuficientes, deficientes o daados por condiciones patolgicas, aprovechando
las capacidades residuales del organismo.
Es un tratamiento que emplea clulas provenientes
de otros organismos (animales y humanos) en
ocasiones pueden ser obtenidas del mismo, que
van a ser integradas a los tejidos del organismo
destinatario, en contraste con los tratamientos farmacolgicos que emplean sustancias qumicas,
las cuales actan por cortos periodos mientras son
eliminadas por los procesos fisiolgicos y el metabolismo. Las molculas qumicas extraas (frmacos) generalmente presentan reacciones secundarias y efectos txicos al ser introducidas en el
organismo.
La terapia celular tiene efectos de larga duracin
al promover reacciones de autorregeneracin, ya
que en el caso de las clulas madre, stas tienen la
capacidad de replicarse, migrar y diferenciarse en
el sitio del dao, fenmeno biolgico que sucede
de manera natural en todos los organismos vivos.
La mayor parte de las clulas inyectadas actan teraputicamente en un periodo de dos a tres semanas.
Los resultados precoces no se deben a las clulas
propiamente dichas, sino a la bioactividad y el me-

(Captulo 1)

tabolismo de protenas solubles contenidas en la


base o en el vehculo.
7. El manejo de las clulas madre debe ser bajo protocolos estrictos, puesto que son muy sensibles a
sustancias qumicas, toxinas, rayos X, temperaturas elevadas y parsitos intracelulares.
Conforme aumente el nmero de pacientes tratados y se
profundice ms la investigacin se ampliarn las nuevas
categoras e indicaciones para la terapia celular. Cabe
sealar que los ltimos esfuerzos se orientan a la terapia
del cncer (se ha observado que las clulas madre en
cultivo al estar junto a una clula tumoral tienen la capacidad de revertir el proceso de transformacin maligna),
el tratamiento de otros problemas tan difciles como la
esclerosis mltiple y el SIDA, donde se han obtenido resultados preliminares muy alentadores. Sin embargo,
tambin existen situaciones en las cuales por el momento no se recomienda su aplicacin (cuadro 13).
Para ejemplificar el gran desarrollo que est teniendo
esta nueva teraputica en medicina, baste sealar que en
la actualidad existen en el mundo ms de 5 000 mdicos
que la utilizan y estn inscritos en la Sociedad Internacional de Terapia Celular con sede en Alemania, la cual
se dedica al estudio y divulgacin de todos los avances
para tal fin. Esta asociacin realiza congresos en Europa
con un elevado nivel acadmico y cientfico; tiene un
importante respaldo financiero, ya que colabora con
institutos como el Rockefeller de Nueva York, el cual
brinda apoyo a centros internacionales de investigacin
como el Centro Internacional de Mejoramiento de Maz
y Trigo, sede de la Revolucin Verde en Mxico y dependiente de las Naciones Unidas (FAO). El doctor Paul
Weiss de este Instituto concluye que: la clave que permite explicar los efectos regenerativos observados en
diferentes rganos especficos despus de inyectar clulas son los factores bioactivos contenidos de forma inherente en la clula en s. En Mxico, los autores fundaron la Sociedad Internacional para la Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el Antienvejecimiento S. C. (SITECEM), con fines de investigacin, tratamiento y enseanza.

HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR

Desde los orgenes ms antiguos de la medicina surgi


el principio de que la ingestin o trasplante de rganos
de origen animal posea un efecto curativo. El papiro de
Evers, de Egipto, menciona la preparacin de rganos

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


animales. En la India, en 1400 a.C. se recomendaba la
ingestin de testculos de tigre como revitalizante. El
griego Aristteles y el latino Plinio hablaban de la
accin curativa del extracto de rganos. Los chinos usaban la placenta humana como fortificante. Paracelso en
el siglo XVI dijo: el corazn cura al corazn, el rin
cura al rin.
El notable avance de la medicina cientfica7 se inici
hace varios siglos; sin embargo, los logros ms importantes se han registrado en los siglos XIX, XX y XXI.
Este progreso histrico ha repercutido en la manera en
que se desarrolla la terapia celular en la prctica mdica.
En la primera dcada del siglo XXI los paradigmas culturales estn cambiando, de manera que los jvenes y
los adultos en la tercera y cuarta dcada de vida estn
buscando estilos de vida ms saludables (baby boomers). Y parece ser que la terapia celular es una de las
respuestas a esta demanda de la sociedad. No es aventurado pensar que la terapia celular permitir reducir el
obstculo actual que existe entre la teraputica convencional y el mdico del siglo XXI, y podr ofrecer ms
y mejores servicios de salud con base en esta innovadora teraputica. De esta manera, la terapia celular est
contribuyendo cada da a que las personas puedan vivir
ms tiempo y tener una calidad de vida saludable.
A fines del siglo XIX, Brown Sequar en 1899 us extractos glandulares por va subcutnea y Voronoff adquiri fama al implantar testculos de mono. En el siglo
XX, en 1912, hacen su aparicin los premios Nobel con
Alexis Carrel, quien demostr por primera vez el efecto
regenerador que se observa con la aplicacin de clulas
provenientes de un organismo joven a uno ms viejo, y
dijo la siguiente frase clebre: La esperanza de la
humanidad est basada en la prevencin de las enfermedades degenerativas y mentales, pero no en el alivio
de los sntomas. Este eminente mdico francs aport
a la experimentacin en ciruga el concepto de trasplante al realizar aloinjertos en animales, con los cuales
obtuvo numerosos xitos, aunque se produjeron rechazos en los xenoinjertos (rganos de individuos de diferente especie).
Notable mdico y cirujano, el Dr. Alexis Carrel tambin demostr la inmortalidad de un rgano o tejido en
vida artificial (in vitro), ya que durante 27 aos mantuvo
latiendo el corazn de un pollo dentro de un recipiente
con suero fisiolgico, al que le agregaba todos los das
los fluidos filtrados de otro corazn de pollo. Durante
1912 a 1939 Alexis Carrel demostr con sus experimen7. Ciencias biomdicas: Histologa, Embriologa, Fisiologa,
Farmacologa, Embriologa, Inmunologa, Biologa Molecular, Bioqumica, etc.

tos el paradigma de la terapia celular: Los rganos envejecidos recobran rpidamente su vigor si se les agrega un extracto de otro rgano similar.
Otro mdico que contribuy incansablemente en su
investigacin y difusin fue el destacado Dr. Paul Niehans,8 de nacionalidad suiza, quien trat a un paciente
con extirpacin de tiroides y paratiroides; no teniendo
la posibilidad de implantarlas, las tritur y se las inyect
al paciente, desapareciendo el cuadro de tetania que presentaba el paciente. En 1931 Niehans descubre la terapia celular; durante el procedimiento quirrgico se suscit una situacin crtica, ya que la glndula paratiroides
se da y el paciente presentaba convulsiones fuertes y
su estado de salud era muy grave. Niehans no tena
tiempo de ejecutar el injerto quirrgico de la glndula
entera. Usando un catter, Niehans aplic clulas de la
paratiroides obtenida de un ternero. El xito de esta terapia realizada por Niehans para abandonar el trasplante
quirrgico de las glndulas intactas es que actualmente
slo se implantan por medio de inyecciones.
En 1937 Niehans fue motivado por el gran neurocirujano y neuroendocrinlogo Cushing para que se implantaran por primera vez clulas del cerebro de animales
muy jvenes, sobre todo del hipotlamo y la hipfisis.
En 1948 Niehans ampli la terapia celular con clulas
de hgado, pncreas, riones, corazn, duodeno, timo y
bazo. Estas clulas eran aplicadas a sus pacientes con
inyecciones que contenan clulas recientemente obtenidas (congeladas) o liofilizados reconstituidos (polvo
seco de las clulas) derivados de los diferentes rganos
y glndulas de embriones y ovejas jvenes.
En 1949, el Papa Po XII, paciente del Dr. Niehans,
se someti a terapia celular y antes de morir, el Papa
Juan Pablo II tambin se someti al mismo procedimiento, pero ya estaba muy enfermo, por ello no se pudo
revertir a tiempo su enfermedad. Actualmente existe
una reconocida clnica en Suiza que lleva su nombre y
la cual contina aplicando terapia celular con liofilizados e investigando al respecto (medicina regenerativa
de nivel II). Hoy en da est disponible en forma comercial el tratamiento derivado de la amplia experiencia de
la prestigiada clnica de Niehans en Suiza. Este tratamiento de terapia celular incluye 3 frascos mpula de 8
mL con 500 mg y se conoce como vacuna antivejez,9
la cual se acompaa de 1 frasco con 45 cpsulas de 200
mg.10 Esta terapia celular contiene diversos activos bio8. Paul Niehans naci en Schweizer Arzt el 21 de noviembre

de 1882 y muri el 1 de septiembre de 1971. Es considerado


el padre de la terapia celular (life cell therapy or older cell
therapy).
9. VHumacell.
10. VCeluplacell.

10

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

lgicos de origen natural: 500 mg de extracto de hipfisis de oveja negra, 500 mg de extracto de timo de oveja
negra, 500 mg de extracto de placenta. Adems contiene inductores para la estimulacin de la hormona humana del crecimiento, con base en una combinacin de
aminocidos de origen natural (Lglutamina, Lpiroglutamato, Larginina, Llisina, 2tirosina, glicina,
cido aminobutrico11 y acetilL carnitina); adems
contiene: coenzima Q10, bioestimulina, enzimas esenciales, clorhidrato de seleginina,12 melatonina de origen
recombinante y otros componentes. La va de administracin es subcutnea. Se toma 0.5 mL de cada mpula
hasta completar un volumen de 1.5 mL para inyectarlo
debajo de la piel en la regin del abdomen o brazo. Para
un tratamiento de medicina antienvejecimiento esta
dosis se aplica en personas de 30 a 50 aos de edad
durante 16 das consecutivos, acompaada de dos cpsulas de 200 mg diariamente por va oral. Se recomienda que este tratamiento se realice cada ao y la terapia
se mantiene tomando dos cpsulas al da durante todo
el ao. Cuando la terapia celular para el antienvejecimiento se requiere en personas mayores de 50 aos de
edad se debe aplicar un esquema doble, es decir, en lugar de aplicarla durante 16 das se aplica durante 32 das
consecutivos y se contina con la toma de dos cpsulas
durante todo el ao.13 Sin embargo, el tratamiento que
nosotros ofrecemos (en la SICETEM) es la alternativa
ms moderna de terapia celular con clulas madre alognicas que existe en el mundo. Tambin se desarroll
en Suiza y los resultados clnicos de regeneracin son
espectaculares.
El descubrimiento de las clulas madre (stem cells)
viene a revolucionar el concepto de terapia celular desarrollado por la Clnica de Niehans en Suiza. El trabajo
cientfico pionero lo inicia Robert Edwards, que siendo
todava alumno de doctorado en Edimburgo, con el antecedente de haber sido miembro del ejrcito britnico,
inicia su trabajo cientfico bajo la direccin del profesor
Conrad Waddington, eminente embrilogo, bajo la supervisin directa de Alan Beatty.14 Edwards RG enfoc
su tema de tesis en la embriologa del ratn. Durante su
doctorado estudi los conceptos avanzados en gentica
y biologa celular con su maestro Waddington, destacndose los conceptos de silenciacin de genes y la
canalizacin (modelo de diferenciacin celular),
11. GABA.
12. Deprenil.
13. www.mxpharmaceuticgroup.com.
14. El Dr. Gerardo Gonzlez es embrilogo,

el Dr. Javier
Snchez es bilogo celular y el Dr. Luna es farmaclogo;
pioneros de la terapia celular con clulas madre en Mxico
y fundadores de la SITECEM.

(Captulo 1)

introducindose en el conocimiento cientfico de la epigentica; Edwards RG admiraba a su brillante maestro


Waddington y destaca cmo investigaba los mecanismos genticos de la evolucin biolgica de las especies
y se haca brillantes preguntas de investigacin, como
por qu las aves prehistricas (Archaeopteryx) haban
perdido el gen que expresa la dentadura, el que ha evolucionado hasta nuestros das como pico, y cmo al trabajar con embriones de Drosophila melanogaster (mosca
de la fruta) descubre que la elevacin de la temperatura
de incubacin de los huevos tiene la capacidad de modificar la expresin de los genes que forman los ojos en la
mosca de la fruta, sustituyndose por la formacin de
piernas en el mismo lugar donde habitualmente se
encuentran los ojos.
En 1950 Waddington relacion a Edwards con Charles Thibault, quien trabajaba en las nuevas tcnicas de
fertilizacin artificial en animales con fines agropecuarios. Con este entrenamiento cientfico, Edwards RG
tuvo el deseo de trabajar con clulas madre de origen
embrionario, con el propsito de aplicarlas en problemas de ndole mdica. El primer problema que Edwards
resolvera fue la esterilidad humana, motivo por el cual
su primer esfuerzo se dirigi a lograr la fertilizacin in
vitro de los humanos. Edwards realiz la maduracin de
oocitos humanos in vitro, los cuales requirieron 37 h y
no 12, como se haba ensayado previamente en los ratones empleados por Thibault, Dauzier, Austin, Chang y
Yanagimachi.
Durante la ruta crtica de su investigacin, Edwards
recibi en 1963 una carta de un bioqumico de Glasgow
llamado John Paul que haba seguido sus estudios e
intentaba conseguir las lneas celulares de embrin de
ratn fertilizado in vitro; surgi as una colaboracin
para trabajar juntos durante un ao hasta obtener un
embrin en crecimiento in vitro. Este experimento pretenda obtener clulas hematopoyticas y neuronales en
cultivo en cajas de Petri y este ambicioso trabajo era tan
extenso que invitaron a colaborar a Robin Cole.
Durante el ao sabtico Edwards RG observ el comportamiento de los cultivos de las lneas celulares de
embriones de conejo obtenidos por fertilizacin in vitro
(FIV); ste fue el hallazgo ms importante de la terapia
celular, ya que ha permitido obtener clulas madre o
troncales de origen embrionario. Cuando la masa celular interna del blastocisto era disgregada ocurra un
cambio, el cual no se suscitaba cuando se mantena intacta. Cuando lograron separar las clulas de la masa celular interna del blastocisto y las pusieron en cultivo celular en cajas de Petri, observaron ante sus atnitos ojos
cmo las clulas embrionarias se transformaban (diferenciacin, concepto de canalizacin de Waddington)

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

11

Fertilizacin in vitro
Da 0

vulo fertilizado

Da 3

Las clulas madre


pluripotenciales se
derivan de la masa
celular interna

Clulas totipotenciales

Masa celular
interna
Blastocele

Da 5

Blastocisto

3 lneas celulares principales

Trofoecteodermo
Clulas madre

Caja de Petri

Cultivo de
clulas madre

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 16. Hallazgo de Edwards RG y col. Las clulas madre de origen embrionario se derivan de la masa celular interna del
blastocisto.

en cada tejido del cuerpo como sangre, neuronas y msculo. Robert Edwards refiere que la primera publicacin sobre clulas madre humanas en EUA, hecha por
Thomson en 1995, es una copia fiel de la biologa del
desarrollo segn Edwards publicada 35 aos antes
(figura 16).
Como profesor del doctorado en ciencias en Cambridge, Edwards fue director de tesis de diversas investigaciones. En su intento por demostrar que las clulas
madre de origen embrionario obtenidas de la masa celular interna de blastocistos al ser aplicadas en blastocistos de otros ratones llevaban genes distintos al del receptor, Edwards RG lo ofreci como tema de doctorado
a Richard Gardner y ste acept. Trabajaron juntos para
establecer los procedimientos operativos correctos para
manipular los blastocistos y decidieron cortar los pequeos pedazos de trofoectodermo de los blastocistos
de conejo. Los tejidos cortados fueron marcados para
identificar la cromatina del sexo y poder diferenciar los
embriones masculinos (negativos) de los embriones
femeninos (positivos).
Richard Gardner descubri la formacin de quimeras
en los descendientes del donador y la clula extraa
haba colonizado virtualmente cada tejido del cuerpo.
Este trabajo fue el precursor de los nuevos conceptos
para aplicar la recombinacin del gen a los embriones
de mamferos,15 trabajo pionero que sera precursor

muchos aos despus del Premio Nobel en Fisiologa y


Medicina 2007 (figura 17).

15. Introduccin de un gene por microinyeccin y recombinacin homloga en ratn (Capechi, 1980).

Figura 17. Formacin de quimeras de Richard Gardner y


Edwards RG.

Marcando clulas madre en ratn


El blastocisto
se implanta
en el tero
de le madre
Marcan las clulas
madre en blastocisto

Ratones
quimmricos
que nacen
de la madre

vulo

vulo
Espermatozoide

Ratones que expresan


el gen marcado

Ratn normal

12

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

En un comunicado de prensa del 8 de octubre de


2007, el Instituto Karolinska de Estocolmo inform que
el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina 2007 se otorgaba a Mario Capecchi (Universidad de Utah, EUA),
Oliver Smithies (Universidad de Carolina del Norte,
EUA) y Martin J. Evans (Universidad Cardiff, Reino
Unido) por sus descubrimientos sobre los principios
para introducir modificaciones genticas especficas en
el ratn utilizando para ello clulas madre embrionarias. El trabajo de estos investigadores reuni dos ideas:
la recombinacin homloga (Capecchi, Smithies) y las
clulas madre (Evans), lo que llev a la creacin de una
tecnologa poderosa: modificacin de genes especficos
por recombinacin homloga en el ratn. Actualmente
esta tecnologa se aplica en prcticamente todas las
reas de la biomedicina, desde la investigacin bsica
hasta el desarrollo de nuevas terapias.
La investigacin de Capecchi y Smithies se enfoc
en la recombinacin de molculas homlogas de DNA,
es decir, entre molculas cuya secuencia de nucletidos
es muy similar. La historia de este descubrimiento se
inici hace ms de 50 aos, cuando J. Lederberg, Premio Nobel en 1958, descubri que la bacteria Escherichia coli tena sexo, por lo cual poda recombinar informacin gentica como los guisantes de Mendel, las
moscas de Morgan y en general como los organismos
con sexo. Lederberg demostr, por ejemplo, que la
transferencia de DNA (herencia horizontal) por conjugacin de una bacteria donadora (macho), capaz de sintetizar el aminocido histidina (fenotipo His+) a una bacteria receptora (hembra) que no lo sintetiza (His), poda
generar clulas hembra His+. Es decir, el gen silvestre de
la bacteria donadora haba reemplazado por recombinacin homloga al gen mutado de la bacteria hembra.
En el decenio de 1965 a 1975, A. J. Clark y otros investigadores identificaron los principales genes y la funcin
de sus productos (RecA, RecBC, RecFOR, RuvABC) en
la recombinacin homloga. En 1966 Capecchi inicia su
investigacin sobre la traduccin de protenas en Escherichia coli. En 1973 Capecchi incursiona en el mundo de los
eucariotes y publica un artculo en el que describe un procedimiento para aislar clulas mutantes de ratn. Capecchi
quiso demostrar si se poda usar la recombinacin homloga, tal como se usaba en Escherichia coli, para modificar
un gen especfico en clulas de mamfero.
Este descubrimiento desencaden una avalancha de
experimentos para descifrar a nivel molecular esta clase
de recombinacin. En esos aos el enfoque molecular
no era posible en organismos multicelulares, pero s lo
era en un organismo unicelular sencillo, fcil de cultivar
y que permita analizar 100 o ms millones de clulas
en un experimento.

(Captulo 1)

Los mecanismos moleculares de la recombinacin


homloga se conocan en bacterias, pero no en eucariotes, incluyendo a los unicelulares como la levadura, por
lo que su propuesta se consider poco probable. En
Inglaterra, la solicitud de un donativo de Evans, quien
trabajaba con clulas madre embrionarias de ratn, tambin fue rechazada. En 1977 R. Axel public en la revista Cell que clulas en cultivo deficientes de la enzima
timidina cinasa (tk) recuperaban la actividad normal de
la enzima si se les introduca el gene tk del virus del herpes (terapia gnica). El mtodo de Axel era poco eficiente, as que Capecchi consider que si se aumentaba
la eficiencia y se diseaba un mtodo de seleccin positivanegativa sera posible aislar clulas recombinantes
de mamfero.
En 1980 Capecchi publica un artculo donde describe
un mtodo muy eficiente para introducir por microinyeccin en el ncleo molculas de DNA, y en 1982 publica en Mol Cell Biol la primera evidencia de que por
recombinacin homloga en el genoma de la clula de
mamfero se poda integrar un gen introducido por microinyeccin. En 1985 Smithies y en 1986 Capecchi publican artculos donde describen una metodologa muy
eficiente que les permiti, por recombinacin homloga, manipular genticamente clulas de mamfero en
cultivo. Capecchi dise una combinacin de seleccin
positiva (resistencia al antibitico NeomicinaR) y negativa (no correccin de una mutacin del gen tk cromosmica) que permite identificar las clulas con el cambio gentico deseado. El diseo consiste en construir
una molcula de DNA vector (molcula de DNA que se
microinyecta en el ncleo de las clulas) que contiene
un gen de resistencia al antibitico neomicina flanqueado de regiones homlogas al gen blanco y adems
al gen para tk. Este gen se localiza en una regin distante
del genoma y por lo tanto no interviene en la recombinacin. La clula receptora del vector tiene un gen tk
mutado. La clula en la que el producto de recombinacin es el correcto adquiere resistencia al antibitico,
pero no corrige su deficiencia de tk. Esta clase de mutacin en la que el gen queda inactivado por la insercin
de un gen seleccionable se conoce como knockout. Capecchi conoca el trabajo con clulas madre de Evans y
el de recombinacin homloga de Smithies, y ellos estaban familiarizados con el de Capecchi, incluso ste pas
dos semanas en Inglaterra con Evans aprendiendo a cultivar clulas madre y a generar ratones a partir de ellas.
El camino estaba claro para Capecchi, Smithies y
Evans: las clulas de mamfero podan ser modificadas
por recombinacin homloga, estas modificaciones podan realizarse en clulas madre embrionarias de ratn
y as generar, por cruzas especficas posteriores, ratones

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Mario Capecci
Universidad de Utah,
en Salt Lake City, UT.
Intituto Mdico Howard Hughes; EUA.
Foto: Tim Roberts/PR Newswire, HHMI.

Oliver Smithies
Universidad de Carolina del
Norte, en Chapel Hill, NC,
EUA. Foto: Sacanpix/Dan
Sears, Chapel Hill, NC, EUA.

homocigotos con genes modificados. En 1989 los ratones knockout, que portan mutaciones que inactivan a
genes especficos, entran en esta historia, la cual termina en octubre de 2007, para iniciar otra que ser contada en un futuro.
Volviendo al trabajo pionero de los estudiantes de
doctorado de Edwards RG, Barry y Bavister decidieron
inseminar una docena de oocitos humanos. Estos experimentos permitieron estudiar el proceso por el cual el
espermatozoide ingresa en la zona prelcida del oocito y
pudieron describir cmo se lleva a cabo la penetracin en
el espacio perivitelino, entrando finalmente al vulo, culminando con la fecundacin y la formacin de dos proncleos. Emplearon adenina marcada con radiocarbono
14 y el grupo de Edwards RG pudo medir la migracin
de los espermatozoides en los testculos y el epiddimo.
Richard Gardner, alumno de Edwards durante este
tiempo, logr obtener la primera quimera en ratn y se
practic la fertilizaron de embriones humanos in vitro.
En el Hospital General Oldham, del Distrito de Lancashire, el Dr. Patrick, colaborador de Edwards RG, por
laparoscopia extraa oocitos humanos de las pacientes
que eran estimuladas con HMG y HCG. La gran mayora de los vulos obtenidos por Patrick lograron fertilizarse in vitro y muchos desarrollaron blastocisto; uno de
los vulos fecundados creci despus de haber salido
del cascarn de su zona pelcida. Edwards seala que
su morfologa y su crecimiento eran maravillosos, la
clula y la estructura nuclear eran totalmente normales.
Sin embargo, ninguno logr implantarse. Esta terrible
fase de fracasos por establecer embarazos con la transferencia a teros de los embriones humanos fertilizados
in vitro pas inadvertida hasta entonces ante la hostigadora prensa amarillista.

13

Martin Evans
Cardiff University, Reino Unido.
Foto: The Press Association
Limited, Limited.

El arduo trabajo pionero de Edwards RG y Patrick


Steptoe con la tcnica de FIV finalmente fue coronado
con el primer beb de tubo de ensayo, Louise Brown,
que naci el 25 de julio de 1978 en Oldham, Inglaterra,
en medio de una intensa controversia biotica (cuadro
14) por la seguridad y moralidad del procedimiento.
Aunque exista una verdadera oposicin, la difusin y
el desarrollo cientfico continuaron en todo el mundo.
El 3 de octubre de 1978 nace en la India el segundo nio
de probeta, Kanupriya Agarwal, gracias al trabajo cientfico del mdico Subhash Mukhopadhyay, que acab
suicidndose en Calcuta en 1981 por la frustracin y
reprimenda con que fue insultado en lugar de recibir
reconocimiento por tan notable logro de parte de su Gobierno, que le impidi asistir a conferencias internacionales. En Melbourne, Australia, el 23 de junio de 1980
nace el tercer beb de probeta, Candice Reed, gracias al
esfuerzo de los cientficos Carl Wood, Alan Trounson
e Ian Johnston. En 1981 se produce el primer tratamiento de FIV exitoso en EUA (Elizabeth Jordania Carr)
bajo la direccin de los doctores Howard Jones y Georgeanna Seegar Jones en Norfolk, Virginia. Desde
entonces la FIV ha ido creciendo en popularidad y se calcula que 1% de todos los nacimientos son concebidos
hoy en da in vitro; se cree que 115 000 han nacido tan
slo en EUA. En la actualidad, en Dinamarca, el porcentaje de nios nacidos despus de FIV o inyeccin de
esperma intracitoplasmtico (ICSI) es de 4%.
Finalmente, el mtodo FIV de Edwards RG qued
completamente desarrollado para superar muchos problemas de esterilidad, sobre todo cuando la afeccin se
localiza en las trompas de Falopio. Tambin ha tenido
xito para resolver otros problemas de esterilidad. Los
progresos en la FIV permitieron tambin el desarrollo

14

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Cuadro 14. Dilemas bioticos que surgieron
con la fertilizacin in vitro (FIV)

Desvo del mtodo natural de la concepcin


Creacin de vida en el laboratorio
Fertilizacin excesiva de embriones innecesarios
Desecho de embriones excedentes
Ambiente antinatural para los embriones
Uso de tecnologa no probada
Elevado costo para muchos
Mercantilismo de recursos mdicos
Creacin artificial de embriones que permite la criopreservacin, la cual es considerada como un limbo
Exposicin de embriones a sustancias antinaturales
Destruccin de embriones durante la investigacin
Posibilidad de crear embriones para propsitos mdicos
Posibilidad de seleccionar los embriones
Posibilidad de modificar embriones genticamente
Facilitacin de la idea de que los embriones son artculos
Los premios financieros para los doctores de FIV
Considerar la esterilidad como una enfermedad y no
como un sntoma, el cual debe ser tratado como un
problema de ndole mdica
Separar el modelo tradicional madrepadre

tecnolgico de la introduccin intracitoplasmtica por


microinyeccin de un espermatozoide (ICSI), lo que ha
permitido resolver la esterilidad de origen masculino.
La tcnica actual de FIV incluye la estimulacin ovrica con diversos medicamentos y hormonas, la cual se
inicia al tercer da de la menstruacin, y consiste en un
rgimen de frmacos especializados que estimulan el
desarrollo de folculos mltiples en los ovarios. En la
mayora de las pacientes se emplean gonadotropinas
inyectables o anlogos de la FSH siempre bajo supervisin estricta de las concentraciones, hormonas como el
estradiol y seguimiento por ultrasonido ginecoobsttrico. Por lo general se aplican inyecciones durante 10
das. La ovulacin endgena se bloquea con el uso de
agonistas de la GnRH o antagonistas de GnRH para la
recuperacin del oocito que luego habr de ser fertilizado in vitro. Se emplea anlogo de la hormona LH que
ocasiona la ovulacin unas 36 h despus de la inyeccin; los oocitos se recuperan con una tcnica transvaginal que por ultrasonido gua una aguja que atraviesa la
pared vaginal para alcanzar los folculos de los ovarios;
el lquido folicular es aspirado para ser enviado al laboratorio en donde sern aislados e identificados los oocitos. El procedimiento de recuperacin de oocitos de la
futura madre toma unos 20 min y suele hacerse bajo
sedacin consciente o anestesia general. De ser necesario, cuando la esterilidad depende del futuro padre, los

(Captulo 1)

oocitos recuperados son inyectados con el procedimiento de ICSI. Para tal efecto los laboratorios de FIV despojan a los oocitos de las clulas circundantes para obtener
una mejor fertilizacin in vitro. Tambin el semen obtenido del futuro padre es preparado para la fertilizacin
in vitro quitndole las clulas inactivas y el fluido seminal. La fertilizacin in vitro se realiza en un tubo de ensayo en donde se incuban el esperma y el oocito en una
proporcin de aproximadamente 75 000:1 en medios
apropiados para cultivo celular durante 18 h (figura 18).
Cuando el oocito finalmente ha sido fertilizado mostrar los dos proncleos. En situaciones clnicas donde
la cuenta de espermatozoides es baja, un solo espermatozoide es inyectado directamente en el huevo empleando la tcnica de ICSI. El vulo fertilizado pasa a un medio de crecimiento especial durante aproximadamente
48 h hasta que el huevo haya alcanzado la divisin en 6
a 8 clulas.
El embrin de 8 clulas (figura 19) es graduado por
embrilogos expertos que juzgan su calidad. Tpicamente, son transferidos al tero los embriones que han
alcanzado de 6 a 8 clulas tres das despus de la recuperacin. En algunos programas de FIV, como los desarrollados por espaoles, ingleses, estadounidenses y australianos, se emplean embriones que se mantienen en
cultivo celular prolongado, llegando a la fase de blastocisto. El traslado de embriones en fase de blastocisto ha
mostrado una tasa ms elevada de embarazos.
La transferencia de embriones al tero de la madre se
realiza por medio de un catter plstico delgado, que
pasa por su vagina y crvix.
Pueden pasarse varios embriones al tero para incrementar las oportunidades de implantacin y embarazo.
El nmero de embriones transferidos al tero depende

Figura 18. Fotografa de varios oocitos rodeados de espermatozoides durante una fertilizacin in vitro.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

15

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 19. Imgenes de clulas totipotentes de los embriones de 8 clulas (a la izquierda) y de la mrula con clulas madre
multipotentes (a la derecha).

del nmero disponible, la edad de la mujer, su estado de


salud y otros factores de diagnstico. En pases como el
Reino Unido, Australia y Nueva Zelanda, el nmero de
embriones est limitado a un mximo de dos, excepto en
circunstancias raras, para evitar embarazos mltiples.
Una vez que la madre ha recibido la transferencia de
embriones, tiene que esperar dos semanas antes de regresar a la clnica para realizarse pruebas de embarazo
convencionales.
Durante este tiempo puede recibir hormonas como la
progesterona para apoyar el embarazo en el tero favoreciendo la implantacin. Muchos programas de FIV
proporcionan este tipo de medicamentos adicionales
como parte de su protocolo.
Las proporciones de xito son de cerca de 15% durante cada ciclo de FIV, aunque la competencia y la estandarizacin de la tcnica han incrementado la proporcin a 50% por ciclo. Los factores que determinan las
proporciones de xito son la edad de la paciente, la calidad de los oocitos y espermatozoides, el tiempo de duracin de la esterilidad, el estado de salud del tero y el
grado de especializacin mdica.
Una prctica comn de los programas modernos de
FIV con la finalidad de incrementar la proporcin de
xito de embarazo es aumentar el nmero de embriones
transferidos, lo que incrementa el riesgo de embarazos
mltiples, asociado con mayor nmero de complicaciones obsttricas.
La aplicacin generalizada de FIV a escala mundial
permiti el desarrollo de tcnicas de criopreservacin de
oocitos, embriones y bancos de clulas madre a 196 _C.
Como durante los procedimientos de FIV se generan
mltiples embriones, las pacientes pueden optar por
congelar los que no le son transferidos al tero. Los

embriones se ponen en nitrgeno lquido y se conservan


durante mucho tiempo.
Se calcula que tan slo en EUA existen 500 000 embriones congelados. La ventaja de esta tecnologa es que
las pacientes que no conciben durante el primer ciclo de
transferencia al tero pueden utilizar otros embriones,
que se han mantenido en congelacin, para intentar una
nueva transferencia en el tero en un tiempo subsecuente, evitando el ciclo completo de FIV. La ventaja es
que si el embarazo se llevara a cabo con xito, la pareja
podra iniciar otro embarazo trasladando al tero un embrin en criopreservacin. La criopreservacin se aplica tambin en la preservacin de diferentes tipos de clulas; en el caso de la FIV, los oocitos pueden ser
congelados sin haber sido fertilizados, lo cual es conveniente en mujeres que necesariamente van a ser sometidas a esquema de quimioterapia para tratar algn padecimiento o enfermedad y tambin para aqullas que
pretenden embarazarse despus de la menopausia.
Tambin existe la posibilidad de criopreservar el
tejido ovrico. Como se seal anteriormente, estas tcnicas han sido revolucionarias, puesto que permiten a la
mujer conservar durante ms tiempo su funcin reproductiva (medicina antienvejecimiento). El lmite natural > 45 aos de edad de la reproduccin en la mujer est
cambiando y la teraputica contra el cncer (radioterapia y quimioterapia) cuenta con una alternativa para
preservar la paridad de mujeres jvenes y adultas.
Mientras que la menopausia mostraba ser una barrera
natural para la concepcin, la FIV est permitiendo a
algunas mujeres embarazarse a los 50, 60 y 70 aos de
edad. Las mujeres posmenopusicas son preparadas
con medicamentos hormonales para que sus teros de
manera apropiada reciban embriones de oocitos dona-

16

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Figura 110. Microfotografa con microscopia electrnica


de barrido de clulas madre.

dos o previamente criopreservados. Por consiguiente,


aunque estas mujeres no tengan identidad gentica con
el nio, s tienen un eslabn biolgico a travs del embarazo y el parto (matriz sustituta). En muchos casos el padre gentico del nio es el compaero de la mujer. Esto
ha demostrado que despus de la menopausia el tero es
totalmente capaz de llevar a cabo su funcin.
En el ao 2001 una francesa recibi la atencin del
periodismo mundial por haberle propuesto a la esposa
de su hermano servirles de tero sustituto, para que pudieran tener un hijo con la sangre del hermano, empleando la FIV con un oocito donado por un banco de
criopreservacin y fertilizado con el esperma del hermano. Algunos vieron esta propuesta como una decorosa forma de incesto; otros pensaron que el nio podra
desarrollar un trastorno psicolgico al crecer y comprender la forma como haba sido concebido y nacido
en el vientre de su ta, y que su madre lo haba abandonado como clula donada, y que no tendra la ms remota posibilidad de conocer a su madre biolgica.
Otros inconvenientes pueden ocurrir durante los procesos de FIV, como el riesgo latente de que haya confusiones en el laboratorio, lo que podra originar acciones
legales contra el proveedor de FIV, ocasionando adicionalmente demandas legales de compleja solucin al tratar de alegar y comprobar el derecho de paternidad. Un
ejemplo de lo anterior fue el caso de una mujer de California que recibi el embrin de otra pareja y a quien se
le notific este error despus del nacimiento de su hijo.
Tambin, existen objeciones religiosas; la ms impor-

(Captulo 1)

tante es la oposicin de la Iglesia Catlica Romana, que


se opone de manera total a los procedimientos de FIV,
prohibiendo todos los casos y abogando que la esterilidad forma parte del llamado de Dios para adoptar nios.
No puede negarse que en la sociedad internacional
existe preocupacin por el desecho de embriones durante los procesos de FIV. El catolicismo, otras religiones
y sectas en el mundo consideran que todos los embriones son vidas humanas y tienen los mismos derechos
que las personas nacidas; por consiguiente, este procedimiento corre el riesgo de ser considerado como inaceptable. Estas presiones sociales y religiosas han
hecho que algunos gobiernos exijan que los programas
de FIV operen bajo pautas voluntarias, como en EUA,
mientras que en otros pases los programas estn siendo
sujetos a regulaciones que limitan muchos aspectos de
prctica clnica de la FIV.
Entre estas regulaciones estn, por ejemplo, limitar
el nmero de oocitos que pueden fertilizarse, limitar el
nmero de embriones que pueden transferirse, evitar el
uso de tcnicas de criopreservacin, regular el uso de
terceras personas para asistir la reproduccin (teros en
renta y donacin de oocitos) y regular las tcnicas para
realizar pruebas o intervenciones en los embriones. El
ejemplo ms grave ocurri en 2004 en la legislacin de
Italia, ya que el gobierno italiano considera hoy en da
como un delito la criopreservacin de embriones humanos, as como la realizacin de diagnsticos de periimplantacin, adelantos cientficos desarrollados por el
esfuerzo y el talento cientfico de Edwards RG y su
equipo de colaboradores.
Edwards RG describe la emocin que vivi al conocer los resultados de los experimentos de Peter Hollands
(otro de sus estudiantes de doctorado) al estar investigando las clulas madre embrionarias (figura 110)
obtenidas de la masa celular interna del blastocisto:16
Ante mis ojos ocurra otro milagro; los ratones irradiados tuvieron la capacidad de colonizar el hgado, bazo
y mdula sea en 48 h, los marcadores fueron detectados en la sangre de los ratones destinatarios de cuatro a
cinco das despus. Era maravilloso, las clulas madre
haban salvado a los ratones irradiados de la muerte:
estaban llenos de vida! Adems, Edwards RG destaca el hecho de que estos experimentos no evidenciaron la presencia de cncer y las clulas madre no fueron
rechazadas por el husped. Ellos observaron el fenme16. Constituyndose como fuente actual de clulas madre
pluripotenciales (Embrionic Stem Cells; ESC) que conforman una masa de 50 a 150 clulas en el interior del blastocisto, ste se forma en el periodo de preimplantacin
embrionaria, el que ocurre habitualmente 4 a 5 das despus
de que un oocito ha sido fecundado por el espermatozoide.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


no de trofismo en donde las clulas madre no necesitaron ser dirigidas por una implantacin especfica en el
sitio del dao, ya que las clulas emigraron directamente a los rganos daados, regenerando los tejidos y
rganos daados por la irradiacin en los ratones. Estas
situaciones asombrosas se han encontrado en muchas
investigaciones similares.
El trabajo cientfico est enfocado en resolver los
problemas de la radiobiologa clnica (radiooncologa),
especficamente sobre la radiosensibilidad que existe en
las clulas cancerosas y las clulas normales. James
Edgar Till y Ernest McCulloch, en Toronto, utilizaron
la metodologa de inyectar clulas17 de la mdula sea
en ratones irradiados. Ellos observaron ndulos en el
bazo de los ratones, estos ndulos aparecan en proporcin al nmero de clulas inyectadas de mdula sea
(medicina alpata); dieron a esos ndulos el nombre de
colonias del bazo (spleen colonies) y posteriormente
especularon sobre su origen. Estos experimentos realizados en el Ontario Cancer Institute del Princess Margaret Hospital desde 1961 culminaron con la demostracin de la existencia de las clulas madre adultas (stem
cells) en 1963 (figura 111). La reflexin de la importancia de este trabajo resulta de considerar cmo pudieron las clulas madre en el bazo sobrevivir en colonias
al reconocimiento de los linfocitos y clulas NK18
debido a que no expresan molculas de reconocimiento
antignico como el complejo mayor de histocompatibilidad, permitindoles pasar inadvertidas al reconocimiento antignico del sistema inmunitario.
Cuando la terapia celular emplea tejidos y clulas de
embriones o fetos, el principal problema sera el rechazo del organismo a los elementos extraos. En este caso
las clulas embrionarias o fetales han demostrado ser
muy compatibles y no son alergnicas en el periodo gestacional. Adems, el nmero de cromosomas es similar
al humano cuando se trata de cerdos y ovejas.
En seres humanos y animales, el feto (criatura no
nacida) todava no ha desarrollado actividad inmunolgica por s mismo y es de hecho un implante tolerado por
la madre, pues de otro modo sera rechazado. Cuando se
emplean tejidos animales de recin nacidos, algunas
glndulas como los testculos, los ovarios, las suprarrenales y la hipfisis, no son activas o son demasiado pequeas, por ello se usan las de animales jvenes en caso
de terapia con especies de mamferos superiores.
Cabe sealar que cuando la terapia celular emplea
liofilizados de xenoinjertos, los animales deben cumplir

17

con condiciones rigurosamente establecidas que incluyen la supervisin cuidadosa por parte de mdicos veterinarios y vigilados bajo estricta cuarentena (seis semanas) antes de recuperar los tejidos para su uso. Toda la
preparacin de las clulas e implantes de tejido se debe
realizar bajo las ms estrictas medidas de asepsia y antisepsia en laboratorios muy especializados.
El Dr. Stein explica: Lo descubrimos marcando las
clulas con istopos, inyectndolas en los cuerpos de las
ovejas preadas que pasaron al feto sin causarle dao.
Inyectamos estas clulas en otros animales mediante un
contador Geiger y seguimos la direccin que tomaba la
clula. En un principio usamos fosfuros, yoduros y sulfuros; actualmente aminocidos, materia base de las
protenas. Descubrimos que las clulas procedentes de
un rgano especfico terminaban, en efecto, en el rgano especfico correspondiente.
A pesar del avance cientfico, la evidencia emprica
ha rechazado la explicacin terica y todava es difcil
hablar de la efectividad de la terapia celular demostrada
en experimentos y casos clnicos que han aceptado recibir terapia celular, sobre todo de los que resultan de
introducir clulas madre de origen humano embrionario
o clulas de embriones de diferentes especies (xenognico) o de individuos de la misma especie (alognico),
encontrando que las clulas no se pierdan en el organismo destinatario y brindando adems resultados teraputicos asombrosos.
Finalmente Leonard Hayflick, considerado por algunos como el padre de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, y sus colaboradores evidenciaron experimentalmente la efectividad de la terapia celular al
trasplantar clulas recientes, liofilizadas o hidrolizadas
provenientes de tejidos embrionarios sanos controlados,

17.
18.

Terapia celular.
Natural Killer, asesinas naturales, respuesta inmunitaria
natural.

Figura 111. Micrografa de barrido de una clula madre.

18

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

a travs de inyecciones parenterales. Ellos reconsideraron que si estas clulas fueran reconocidas por el sistema
inmunitario al ser fagocitadas por los macrfagos, seran
trasladadas a los rganos y tejidos blanco por los mecanismos de migracin durante la inflamacin, liberando
las biomolculas revitalizantes presentes en las clulas
jvenes y necesarias en las clulas envejecidas, daadas
o enfermas (RNAm, DNA no lesionado, muchas protenas antioxidantes y reparadoras de DNA, como la telomerasa); ellos tambin emplearon istopos radioactivos.
Esta teora refuerza una de la hiptesis del equipo de investigacin de los autores19 de la existencia de una herencia horizontal en clulas animales, que a travs de un
transporte especial como el de vesculas permite transferir DNA, RNA, pptidos y protenas que devuelven la
capacidad funcional a la clula destinataria.
En la actualidad est creciendo el desarrollo de tecnologa que permite identificar las clulas madre multipotenciales20 formadoras de las clulas sanguneas (HSC21);
stas pueden aislarse del mismo individuo, o de los bancos
de sangre y de mdula sea, empleando la tecnologa de
citometra de flujo de alta velocidad, marcando las clulas
con anticuerpos monoclonales22 (sorting). La proporcin
aproximada es 1 clula madre sangunea por cada 15 000
clulas madre de la mdula sea.
La importancia histrica de todas las aportaciones
anteriormente sealadas es la evidencia experimental
que hace factible hoy en da la aplicacin de la terapia
celular como parte de la prctica mdica. Hoy ms que
nunca sta es posible gracias a la gran expansin que
han tenido los programas de FIV, los cuales no han
podido ser frenados por la oposicin religiosa, social y
legal; tambin ha habido un notable crecimiento en la
aparicin a nivel internacional de bancos de clulas y tejidos, semejantes a los convencionales bancos de sangre
y semen, de los cuales se pueden obtener clulas madre
de origen embrionario, ya que fueron obtenidas por donacin. sta se ha facilitado ms que la donacin de rganos para programas de trasplante debido al gran xito
19. Hiptesis SnchezSosaGonzlez.
20. Son clulas madre encontradas en el adulto; pueden for-

mar un nmero limitado de tipos celulares, cuando no se ha


dado ningn estmulo para su diferenciacin; es decir,
cuando han crecido in vitro. El trmino pluripotenciales debe
distinguirse de multipotenciales, ya que el primero significa
que pueden diferenciarse en todos los derivados celulares
de: ectodermo, endodermo y mesodermo. stas incluyen
cada uno de los ms de 250 tipos celulares en el cuerpo
humano adulto.
21. Del ingls (Hematopoietic) Stem Cells, procedentes de
mdula sea.
22. FACs highspeed sorters. Esta tcnica conocida como
citometria de flujo separa las clulas en suspensin.

(Captulo 1)

que han tenido en Europa los programas FIV. La gran


cantidad de oocitos fertilizados y sin fertilizar tambin
ha permitido desarrollar en medios de cultivo lneas
celulares en bancos criognicos europeos de los que se
pueden obtener clulas madre embrionarias y adultas de
humanos. stas estn siendo tipificadas molecularmente con tcnicas de FAC de alto flujo.21 De esta manera,
ya se pueden obtener clulas madre semiespecializadas
(lneas de estirpes celulares especficas) que pueden ser
utilizadas de manera especfica en la terapia celular.

MEDICINA REGENERATIVA

La era de la medicina regenerativa es un hecho que se


hace ms evidente a principios de este siglo XXI como
resultado del gran adelanto en el conocimiento biomdico, que ha llevado rpidamente al desarrollo de nuevas terapias que emplean el conocimiento multidisciplinario e interdisciplinario de las ciencias y la tecnologa
involucrando nuestra capacidad actual de modificar y
conocer los genes, clulas, tejidos y organismos.
En contraste con la mayora de las especialidades
mdicas convencionales, la medicina regenerativa ofrece la aplicacin de clulas (terapia celular) y sustancias
provenientes de organismos vivos que permitan regenerar con rapidez y eficiencia los tejidos envejecidos o lesionados. La genmica ha permitido conocer alrededor
de 6 000 protenas humanas de las ms de 200 000 que
se considera que existen y an son desconocidas. El
advenimiento de la automatizacin en laboratorios con
robots ha incrementado la capacidad de generacin de
resultados; hoy se emplean mtodos de hibridacin in
situ y de reacciones en cadena de la polimerasa (PCR).
Existe la tendencia a fabricar microarreglos, microprocesadores con sensores bioelectrnicos que permiten la
identificacin y cuantificacin en masa de miles de
muestras de suero, sangre, orina, etc., hacindose realidad el estudio sistematizado del universo de las protenas (proteoma humano). Con las tcnicas avanzadas de
biologa molecular y bioqumica no se puede obtener
protenas en forma pura; esto es posible por la biotecnologa recombinante, que permite insertar genes que
expresan protenas humanas en plsmidos de microorganismos, los cuales se reproducen en cultivo y pueden
sintetizar grandes cantidades de protenas de origen
humano. Esta biotecnologa es conocida como DNA
recombinante.
En los ratones de Capecchi, Smithies y Evans, mejor
conocidos como knockout, se emple la tecnologa de

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Edwards RG para bloquear genes y evitar la expresin


de protenas especficas en estos mamferos; esto est
permitiendo disear experimentos que permiten conocer los efectos de la deficiencia en la expresin de protenas, orientando el conocimiento funcional de los
genes y pudiendo diferenciar los genes que no codifican
protenas intrones de los que s codifican protenas
exones (son los que estn involucrados en la traduccin y transcripcin de protenas).
La integracin de estas tcnicas est permitiendo que
la evaluacin de la funcin de protenas sea ms sencilla. Estas tcnicas han propiciado el nacimiento de una
nueva ciencia, la protemica. Gracias a este desarrollo se est pudiendo entender los efectos medicinales
(propiedades funcionales)23 que se describen con la
ingesta de ciertos alimentos ricos en protenas (hongos,
plantas medicinales, soya, polisacridospptidos derivados del arroz, factores de transferencia derivados de
la yema, huevo y calostro bovino, lactoserum, etc.),
apareciendo conceptos nuevos en la teraputica farmacolgica: los nutracuticos, que estn incrementando
el arsenal teraputico de la medicina regenerativa.
Hoy en da se pueden reconocer por lo menos cuatro
niveles en la teraputica que integra la medicina regenerativa:
S Nivel I. Aplicacin de sustancias humanas o de
animales, algas, hongos, plantas y bacterias (pptidos, protenas, genes y otras biomolculas) con
fines teraputicos.
S Nivel II. Aplicacin de clulas y tejidos con fines
teraputicos (terapia celular, liofilizados e ingeniera de tejidos).
S Nivel III. Aplicacin de clulas madre de origen
embrionario y adulto (terapia celular con clulas
madre).
S Nivel IV. Aplicacin de nuevos materiales (nanotecnologa, prtesis, robtica binica, biologa
molecular, etc.).

Medicina regenerativa de nivel I


El primer nivel de la medicina regenerativa involucra la
aplicacin de sustancias y nutrientes que favorecen o
mejoran la regeneracin celular. Se han empleado protenas humanas, animales y vegetales. El conocimiento
de los genes de exones no est permitiendo elaborar
nuevos frmacos y productos nutracuticos.
23. Para valorarlos ms all de las caractersticas nutricionales de la alimentacin con stos.

19

Cada ao, a travs de modelos matemticos se predice la cepa que puede ocasionar una epidemia de influenza, de ah se seleccionan los determinantes antignicos con los que se elaborarn las nuevas vacunas. El
avance ms reciente que intenta prevenir el cncer cervicouterino es el desarrollo de la vacuna contra el HPV
(virus del papiloma humano). Estas vacunas son elaboradas aplicando biotecnologa de DNA recombinante.
Se estn agregando nuevos medicamentos a la terapia
biolgica con pptidos y protenas humanas; ejemplos
de este arsenal farmacolgico recombinante son: la
insulina humana, los interferones, la hormona del crecimiento, la eritropoyetina, factores estimuladores de
colonias, etc. Estas protenas humanas tienen efecto teraputico al sustituir las deficiencias de produccin o
concentracin sangunea de los pacientes. La ventaja de
inyectar protenas recombinantes es generar menos autoanticuerpos contra ellas; por ejemplo, la insulina en
un principio era extrada de cerdos y bovinos, ya que la
mayora de los pacientes con diabetes mellitus insulinodependientes (tipo 1) corran el riesgo de morir de hiperglucemia y cetoacidosis si no se les aplicaba la insulina.
Hoy en da la insulina humana recombinante es el ejemplo ms elocuente de la medicina regenerativa de nivel
I; su principal aplicacin clnica es regular las concentraciones de glucosa sangunea y compensar el catabolismo producido por la deficiencia de la produccin de
insulina por las clulas B del pncreas (figura 112).
La eritropoyetina humana recombinante estimula la
produccin de eritrocitos y ha sido utilizada para cometer fraude en las competencias atlticas y olmpicas,
el cual puede pasar inadvertido en las pruebas antidopaje; ya que stas no tienen la capacidad, sensibilidad y
especificidad necesarias para detectar si un deportista
ha recibido o no eritropoyetina humana recombinante,
que se suele encontrar de forma normal en el cuerpo
humano. La eritropoyetina est indicada en personas
anmicas y en quienes padecen de insuficiencia renal
crnica. Esta teraputica biolgica ha mostrado tener
efectos nefroprotectores y regenerativos en los glomrulos y estimular las clulas madre de la mdula sea.
Caso especial son los pacientes con cncer, que pueden
padecer anemia por la toxicidad que producen la quimioterapia y la radioterapia en la mdula sea ocasionando trastornos hematolgicos, siendo los ms frecuentes la anemia normocrmica y la normoctica, y las
anemias graves que se producen en procesos neoplsicos agresivos como el mieloma mltiple, en el que es
necesario emplear grandes dosis (25 000 a 50 000 UI).
Existen varios tipos de interferones humanos recombinantes: los interferones alfa se usan para tratar las
infecciones crnicas por hepatitis y cncer, su principio

20

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Pncreas

Islotes de Langerhans

Clulas B
Vaso
sanguneo

Fibra muscular

Insulina

Glucosa

Figura 112. La diabetes mellitus tipo 1 es una enfermedad


ocasionada por la destruccin de las clulas b (B) ubicadas
en los islotes de Langerhans del pncreas que ocasiona la
acumulacin de glucosa en los vasos sanguneos.

es estimular el sistema inmunitario para eliminar el


virus. El interfern b se emplea de manera experimental
para tratar de reducir las placas de esclerosis sobre la
sustancia blanca cerebral en la esclerosis mltiple. El
principio de esta teraputica es que esta protena humana inmunomodula al sistema inmunitario que de manera
errnea reconoce al tejido cerebral rico en mielina ocasionando dficit neurolgicos focalizados en las regiones del cerebro y la mdula espinal. En algunos pacientes han disminuido los sntomas.
Es probable que surjan muchas otras protenas recombinantes humanas que sean registradas para su aplicacin mdica. Muchos frmacos modernos estn basados en las biomolculas humanas: enzimas, hormonas,
anticuerpos y genes. Muchos de stos estn en fase de
investigacin y algunos probndose en la clnica. Por
ahora son slo el principio de lo que se volver una revolucin de largo alcance. Los frutos del Proyecto del
Genoma Humano se irn integrando al esfuerzo internacional consolidado por los gobiernos y las organizaciones privadas.
Otro notable avance de la medicina regenerativa de
nivel I es el uso de sustancias de origen biolgico, natural y recombinante, por estar clasificadas como nutracuticos por su nula toxicidad, ya que se derivan de las
protenas de la yema de huevo, calostro bovino y mangostn o, en su defecto, tienen menor capacidad de acti-

(Captulo 1)

var clulas del sistema inmunitario natural (NK), las


cuales tambin se encuentran en ampolletas con polvo
liofilizado de las sustancias obtenidas de dializados de
leucocitos humanos o de animales para su aplicacin
por va parenteral. Estos productos han sido desarrollados en EUA en forma de cpsulas, logrando contener
concentrados en polvo que se emplean con comodidad
sin correr los riesgos inherentes a la ingestin de frmacos xenobiticos (figura 113). Estas biomolculas de
origen natural que permiten elevar el sistema inmunitario, factores de transferencia (transfer factors), fueron descubiertas en 1949 por el trabajo pionero del
mdico militar (US Navy) H. Sherwood Lawrence (figura 114); poco a poco han venido introducindose en
la prctica mdica hospitalaria y de especialidad.
Lawrence observ que al inyectar un extracto de leucocitos provenientes de una persona previamente infectada con tuberculosis a una persona hasta el momento
no infectada, se otorgaba una inmunidad al nuevo organismo receptor; esta capacidad le permita escapar de la
terrible infeccin por micobacterias. Una unidad internacional (UI) de factor de transferencia equivale a la
sustancia que se asla en cada 2 000 leucocitos huma-

Porcentaje de la actividad de las clulas


asesinas naturales (NK) sobre el control basal
Noni (Morinda citrifolia) 15%
Aloe vera 15%
Bovine colostrum 23%
Cordyceps formula 28%
Shitake 42%
Echinacea 43%
IP6 49%
Transfer factor classic 103%
Transfer factor classic 204%
Transfer factor plus 248%
Jugo de Mangostn 400%
Figura 113. Grfica comparativa que muestra el efecto
sobre la activacin funcional de clulas NK en ensayos in
vitro con diferentes nutracuticos de uso comn. Obsrvese
la considerable respuesta que se obtiene con los factores de
transferencia (transfer factor 4 life researches) y el mangostn (Xango), que superan al hexafosfato de inositol
(IP6), compuesto que se consideraba lder para fortalecer
el sistema inmunitario, el cual es utilizado en pacientes con
infecciones por el virus del VIH y que presentan sndrome
de inmunodeficiencia adquirida.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

21

1
5
2

Citocinas y
molculas
bioactivas

Figura 114. A la izquierda el retrato del Dr. Lawrence y a la derecha un esquema de los factores de transferencia formados por
400 aminocidos unidos a RNA con un peso molecular de 5 000 a 10 000 kDa (Kirkpatrick CH: Structural nature and functions
of transfer factors. Ann N Y Acad Sci 1993;685:362368), algunas asociadas con la familia de transferrinas. La hiptesis ms
actual es que estas molculas activan algunos receptores de superficie en las clulas T (1), los cuales transportan la molcula
del factor de transferencia que se piensa que funciona como molcula de enseanza inmunolgica o mensajero inteligente. (2,
3), el cual permite una estimulacin modulada de la liberacin de diversas citocinas que estimulan el sistema inmunitario de
manera ordenada (4), fenmeno observado especficamente en macrfagos, NK y linfocitos T (5).

nos. Los mecanismos de accin de los factores de transferencia no son del todo conocidos (figura 115). Sin
embargo, se ha demostrado in vitro que el incremento
en la activacin de macrfagos por un aumento en la

100
90

97%

80

88%

70
60

69%

50
E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

55%
40
30
20
10

liberacin de citocinas como la interleucina1 incrementa la capacidad de quimiotaxis de los leucocitos, y


sobre todo se incrementa la funcionalidad de las clulas
asesinas naturales (natural killer), mejor conocidas
como clulas NK. Estudios subsecuentes demostraron
que las frmulas nutracuticas de combinar factores de
transferencia de origen bovino, yema de huevo con liofilizados (Shitake) e IP6 superaban la activacin lograda por el estndar de oro para la activacin de leucocitos
del sistema inmunitario, la interleucina2 (IL2); estos
estudios in vitro han permitido desarrollar cpsulas nutracuticas disponibles comercialmente con potencia
para elevar el sistema inmunitario que no tiene precedente alguno ni puede ser alcanzada con los frmacos
(xenobiticos) inmunomoduladores disponibles en la
teraputica convencional, ya que se han obtenido porcentajes de activacin de NK de hasta 437% superiores
al nivel de activacin del control (4lifeR y XangoR).

0
48 h
Figura 115. Grficas comparativas que muestran los
resultados de los primeros experimentos in vitro al comparar
el concentrado de factor de transferencia clsico. A. (obtenido del calostro bovino), transfer factor advanced B. (obtenido del calostro bovino y yema de huevo) y transfer factor
plus advanced. C. (obtenido de calostro bovino, yema de
huevo adicionado con polvo liofilizado de hongos e IP6) D.

Medicina regenerativa de nivel II


En contraste con el gran avance de la medicina regenerativa de nivel I, actualmente no se cuenta con nutracuticos genricos que permitan tener ampolletas con liofilizados de clulas humanas para su aplicacin en terapia
celular (figura 116). Sin embargo, el nivel II de la medicina regenerativa se caracteriza por la aplicacin cl-

22

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Figura 116. Futuro de la terapia celular?

nica de clulas del cuerpo humano o de animales jvenes. Para ello estas clulas se hacen crecer en medios de
cultivo en laboratorios especializados para alcanzar el
nmero suficiente, obtener lneas purificadas y analizadas para que puedan ser finalmente introducidas en los
pacientes que las requieran.
La medicina regenerativa de nivel II se ha desarrollado con la llamada ingeniera de tejidos, que ha propiciado una revolucin en la ciruga reconstructiva que
busca proveer de tejidos de clulas formadoras de piel
para injertos que permiten la reconstruccin de partes
del cuerpo ampliamente daadas. La ingeniera de tejidos puede tomar dos vertientes: la primera involucra el
desarrollo de biotecnologa que intenta construir fuera
del cuerpo rganos y tejidos combinando clulas humanas con materiales apropiados, empleando andamios o
estructuras que les proporcionen un apoyo. La segunda
involucra propiamente la terapia celular, cultivando
clulas recientes o criopreservadas en medios de cultivo
para laboratorio, para que luego sean inyectadas en los
tejidos que necesiten ser reparados.
En la actualidad el nivel II emplea liofilizados, clulas recientes y congeladas, que pueden provenir de un
cultivo celular del mismo paciente (autoinjerto), de otro
paciente humano (clulas madre adultas) (aloinjerto) o
de animales superiores como cerdos y ovejas (xenoinjerto). Cuando las clulas son inyectadas de manera sistmica, como ya se ha sealado, tienen la capacidad de
migrar y encontrar por s mismas los sitios dnde el
cuerpo ms las necesita (figura 12). La medicina regenerativa de nivel II puede beneficiarse y potencializarse

(Captulo 1)

con la teraputica del nivel, ya que muchas sustancias


humanas son mezclas de protenas que facilitan la diferenciacin, mitognesis, trofismo y migracin de las
clulas; caso especfico son los factores de crecimiento
y adresinas.
El progreso en la ingeniera de tejidos est enfocado
en el diseo de tejidos para el reemplazo de rganos, necesidad que se est incrementando por el envejecimiento natural de la poblacin. Las personas ms viejas tienen necesidades de reemplazar msculos enfermos o
estropeados, huesos, cartlagos, nervios, rganos del
aparato digestivo, piel, clulas del cerebro. El secreto
del cultivo y crecimiento de tejidos de reemplazo se relaciona con el diseo de sistemas de redes que sirven de
andamios intrincados donde las clulas puedan fusionarse y crecer. Varias sustancias naturales y sintticas
estn demostrando ser valiosas para crear las estructuras de andamios naturales que semejan las estructuras
estrmicas de los rganos en su estado natural.
En la regeneracin natural del hgado, la arquitectura
heptica se restablece siguiendo una secuencia determinada. Por ejemplo, pocos das despus de la hepatectoma se observan acmulos de hepatocitos como resultado de su activa proliferacin. Luego, los procesos de
desdiferenciacin que ocurren en algunos hepatocitos
se transforman en clulas madre monopotenciales que
comienzan a migrar penetrando en estos acmulos y
producen diferentes tipos de laminina, de manera que
eventualmente los hepatocitos se reacomodan para formar las placas hepticas tpicas del hgado maduro. Los
capilares de los acmulos, revestidos de la membrana
basal capilar, cambian a la estructura sinusoidal con
escasa matriz y son revestidos de las clulas fenestradas
y hay presencia de clulas de Kupffer.
El proceso ha sido repetido con docenas de hepatectomas sucesivas sin que se observen signos de agotamiento. La capacidad clonognica del hepatocito tambin parece ilimitada. En modelos en que el hgado es
incapaz de sostener la vida del animal, 1 000 hepatocitos aislados inyectados en ese hgado (terapia celular)
crecen formando acmulos iguales a los descritos en el
modelo de hepatectomas parciales, y restablecen finalmente la masa heptica original salvando la vida del animal. Modelos matemticos permiten calcular que un
solo hepatocito da origen a 1.7 x 1010 clulas al cabo de
un mnimo de 34 divisiones celulares. Como un hgado
de rata normal contiene 3 x 108 clulas, un hepatocito en
estas condiciones puede generar unos 50 hgados de rata
(figura 117).
Estudios con cultivos de clulas hepticas han mostrado que bajo el estmulo del factor de crecimiento de
los hepatocitos (HGF) y del factor de crecimiento epi-

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


Estado quiescente de la clula
madre en la fibra muscular

23

Lesin de la fibra
muscular (miotrauma)

mioncleo

Autorrenovacin

Activacin de las clulas


madre y proliferacin

Regeneracin del ncleo central


de la fibra muscular
Trofismo por quimiotaxis
a la fibra lesionada
Fusin de la clula madre a la
fibra muscular (hipertrofia)
Transdiferenciacin de las clulas madre
en fibras musculares (hiperplasia)

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 117. Esquema de clulas satlite. Depsitos naturales de clulas madre en el msculo esqueltico, responsable de la
hipertrofia en los atletas y fisicoculturistas.

drmico (EGF), los hepatocitos sufren primero un proceso de desdiferenciacin (clulas ovales) y luego uno
de rediferenciacin para formar ya sea hepatocitos maduros o estructuras semejantes a ductos biliares.
Esto muestra que los hepatocitos no son clulas diferenciadas terminalmente, lo que es inesperado dada la
gran complejidad de las funciones de un hepatocito maduro. Incluso ms espectacular que esto es la capacidad
de los hepatocitos de proliferar mientras mantienen
simultneamente sus funciones esenciales: regulacin
de la glucosa, sntesis de protenas, secrecin de bilis y
biodegradacin de toxinas. Estas funciones se mantienen incluso si slo queda un tercio del rgano y 90% de
las clulas residuales estn proliferando. Esta actividad
se debe a la interaccin de diversos eventos complejos
como la regulacin de la matriz, la disolucin y luego
la resntesis de los diferentes dominios de membrana
especializados del hepatocito, y a la alineacin y coordinacin de unos 150 cromosomas en cada mitosis.
Esta regeneracin tambin sucede de manera natural
en mayor o menor grado en prcticamente todos los rganos de nuestro cuerpo. De hecho, a lo largo de la vida
vamos perdiendo clulas producto del envejecimiento
o del dao producido por infecciones, sustancias qumicas, traumatismos, etc., las cuales son reemplazadas con
nuevas clulas, lo que permite que los tejidos y rganos
continen funcionando de manera adecuada. Las clulas encargadas de esta regeneracin natural son las
clulas madre (satlites) localizadas en los diferentes
rganos del cuerpo. Estas clulas madre tienen la capacidad de autorregenerarse, es decir, de mantenerse en un
nmero constante, y la capacidad de transformarse en

clulas maduras especializadas (parnquima), reponiendo as las que se van perdiendo (figura 117).
Cuando el dao de un tejido u rgano es muy severo,
los mecanismos de reparacin natural son insuficientes
y no son capaces de compensar la gran prdida de clulas ocasionada por la lesin o enfermedad, llevando muchas veces al reemplazo por clulas no especializadas
en el tejido (estroma) que ocasionan fibrosis (cicatriz)
y haciendo que el tejido u rgano no funcione adecuadamente.
Qu dispara la respuesta regenerativa? Cmo se regulan las diferentes etapas de la respuesta regenerativa?
Cmo se detiene el proceso? stas son las preguntas de
la investigacin en desarrollo. La hiptesis de disparo de
la respuesta regenerativa es que existen seales mitognicas producidas por elementos que aparecen rpidamente en la sangre y son llevadas a los hepatocitos o
sitios de lesin remanentes y estimulan la proliferacin.
Aun cuando el tejido heptico sea trasplantado a sitios
extrahepticos, aumenta la sntesis de DNA despus de
la hepatectoma. En experimentos en los que las ratas son
unidas a travs de una circulacin parabitica se ha
demostrado que al hacer la hepatectoma en una de ellas,
el hgado de la otra tambin se regeneraba, observndose
el efecto mximo cuando la hepatectoma es total.
Existen factores de crecimiento involucrados de manera directa en la respuesta mitognica y una serie de
otros factores que actuaran indirectamente, pero cuya
presencia es indispensable para generar los estmulos
mitognicos apropiados.
Entre los primeros estara el factor de crecimiento de
los hepatocitos (HGF), que aumenta rpidamente luego

24

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

de la hepatectoma, el factor de crecimiento epidrmico


(EGF) y el factor de crecimiento transformadora
(TGFa). HGF y TGFa se produciran en los mismos
hepatocitos y EGF en las glndulas de Brunner en el
duodeno, llegando al hgado a travs de la circulacin
portal. Junto a stos hace falta la presencia de otros sistemas de seales que aparecen como necesarios para la
produccin de estos factores, o bien para que stos produzcan sus efectos, por ejemplo citocinas, insulina y
noradrenalina.
Las citocinas, especialmente la IL6 y TNFa, secretadas por las clulas de Kupffer, aparecen como especialmente importantes en los mecanismos iniciales de
la regeneracin. La insulina, si bien no tiene efectos mitognicos directos sobre los hepatocitos, es indispensable para que las seales mitognicas acten apropiadamente. De igual modo, la noradrenalina tampoco acta
como mitgeno, pero amplifica la accin de HGF y
EGF a travs de la activacin del receptor adrenrgico
a1 y, adems, induce la secrecin de EGF por parte de
las glndulas de Brunner en el duodeno.
Hay compaas que estn empleando clulas humanas para hacer piel artificial, un producto que ha mejorado la atencin mdica y el cuidado de las vctimas de
quemaduras. Hoy en da existe la tecnologa que permitir preparar terapia celular despus de cultivar una
biopsia de las propias clulas de los pacientes. En algunos laboratorios los cientficos han logrado formar
vasos a partir de clulas de la sangre, se ha podido cultivar msculo cardiaco, crnea, tubo digestivo, sistema
urogenital, hgado y rin. Mdicos especializados en
ciruga y trasplante estn empezando a implantar estos
nuevos tejidos en los pacientes.
Los trasplantes de sangre (transfusiones sanguneas)
y de mdula sea son los paradigmas con los que se tiene
ms experiencia en el campo clnico; ambas teraputicas se han utilizado por varias dcadas para regenerar el
tejido destruido por la quimioterapia y la radioterapia.
Hoy en da es posible obtener de bancos de sangre y de
mdula sea, clulas madre o troncales (stem cells)
adultas, las cuales son separadas por mtodos de citometra de flujo elevado.
Los hematlogos y los onclogos obtienen aspirados
y biopsias de mdula sea para rescatar con el trasplante
a los pacientes tratados; despus de la inyeccin endovenosa las clulas emigran a los sitios que sean convenientes en el interior de los huesos, para multiplicarse
y restaurar con nuevas clulas sanguneas el espacio intravascular. La terapia celular con clulas madre adultas
es la frontera de la medicina regenerativa de nivel II, ya
que las clulas madre tienen la capacidad de tomar dos

(Captulo 1)

caminos: una clula sigue indiferenciada para mantener


el clon y la colonia de la clula multipotencial, mientras
que otras clulas tienen la capacidad de diferenciarse en
muchos tipos celulares, en clulas del sistema nervioso,
tejido hematopoytico, miocardio, corazn, clulas endoteliales, pncreas (clulas b), hgado, hueso, trofoblasto y otros tejidos celulares.
La principal causa de muerte en Mxico son las enfermedades cardiovasculares, sobre todo por infarto al
miocardio. Los avances en la ciruga de derivacin y la
angioplastia percutnea de las coronarias con colocacin de endofrulas cardiacas han mejorado sobre todo
la sintomatologa de la angina estable e inestable. Sin
embargo, no siempre tienen la capacidad de restaurar la
funcin, sobre todo en infartos al miocardio que evolucionan a la dilatacin ventricular e insuficiencia cardiaca. La terapia celular con cardiomiocitos previene el
adelgazamiento cardiaco y la dilatacin ventricular.
La era de la cardiomioplastia celular se inici con el
Dr. Menasche en Pars. En un estudio clnico fase I, de
pacientes referidos para una ciruga de derivacin con
infartos extensos se obtena una biopsia muscular de la
cual se aislaban mioblastos que eran cultivados de forma externa y que fueron inyectados alrededor del infarto en el tiempo quirrgico de la derivacin. Diez pacientes, en un periodo de uno a dos aos posteriores a la
ciruga de derivacin y a la terapia celular, se encontraron libres de sntomas coronarios y mejoraron la funcin cardiaca de forma general, la cual fue evaluada en
el ecocardiograma, lo que sugiri una restauracin de la
funcin en la zona infartada. Los estudios de medicina
nuclear con PET24 mostraron viabilidad en la regin del
infarto en zonas que no estaban presentes en el periodo
preoperatorio. Dos pacientes murieron, uno por choque
cardiognico y el otro 17 meses despus por un evento
vascular cerebral de tipo isqumico; en las autopsias se
observ que los mioblastos estaban engarzados en la
regin del infarto, demostrndose la viabilidad del trasplante de clulas. Aunque las clulas se encontraron
entre los miocitos, no presentaban la caracterstica de
sincronizacin del latido debido a que no expresaban
conexiones. En cuatro pacientes aparecieron arritmias
y se requiri implante de desfibriladores y el uso de
amiodarona. En la actualidad este procedimiento de
cardiomioplastia celular requiere la inyeccin de 800
millones de mioblastos.
Estudios ms actuales estn demostrando que la regeneracin celular del miocardio infartado proviene de
la diferenciacin de clulas madre residentes en el mio24.

Tomografa por emisin de positrones.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


A. Clulas madre inyectadas en
miocardio infartado en el
ventrculo

Clulas madre
embrionarias y
adultas

Las clulas madre


regeneran el
tejido infartado

Infarto
Alognico

25

B. Clulas madre humanas


inyectadas en la vena
caudal de rata

Las clulas madre inducen formacin


de vasos sanguneos en el interior del
msculo infartado
Nuevos
vasos

Clula madre

Infarto
Xenognico

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 118. Terapia celular con clulas madre adultas en la lesin e intravenosas en los modelos de isquemia miocrdica.

cardio (semejantes a las satlites del msculo estriado)


y de las provenientes de la mdula sea. Por desgracia
este proceso puede no bastar para prevenir la insuficiencia cardiaca en los infartos masivos y en los pacientes
con cardiomiopatas (figura 118).
En la medicina regenerativa de nivel II los pacientes
reciben medicinas que permiten activar las clulas madre
propias del organismo, se aplica la vacuna antienvejecimiento y de ser necesario se aplican clulas cultivadas, o
bien se extraen clulas madre de un donador o paciente.
Est en investigacin si es necesario el tratamiento inmunosupresor, por ejemplo usar esteroides para prevenir
rechazo o reacciones por la introduccin de clulas extraas. Hasta el momento no se suele utilizar como en el
caso de la ciruga de trasplante. Poco a poco se establecern los bancos de tejidos que incluyan la tipificacin de
las caractersticas inmunes de las clulas, como la tipificacin de los tipos sanguneos y los grupos Rh, y hasta
del sistema mayor de histocompatibilidad, como se hace
en los bancos de rganos para trasplante.

Medicina regenerativa de nivel III


El rasgo distintivo del nivel III es utilizar terapia celular
con clulas madre de origen embrionario y adulto
(figura 118). Estas clulas pueden diferenciarse en los
ms de 250 tipos celulares que constituyen el cuerpo de

un ser humano y presentan una gran tolerancia inmunolgica por el organismo destinatario, es decir, presentan
una respuesta de rechazo inmunolgico mnima o nula.
Hoy en da existen bancos de clulas madre de origen
embrionario, de cordn umbilical y adultas, las cuales
estn disponibles en forma de lneas celulares con diferentes grados de diferenciacin (ectodermo, mesodermo y endodermo), lo que permite dirigir, de ser necesario, el tipo de tratamiento de conformidad al tejido
blanco enfermo o lesionado que se desee regenerar.
Estas clulas tienen la capacidad de multiplicarse in
vitro y una vez que estn dentro del organismo, de
migrar y dividirse en el sitio de la lesin. Las clulas madre de origen embrionario, al ser obtenidas del interior
de blastocisto humano, provienen de un sistema biolgico hermtico libre de microorganismos infecciosos,
priones, etc.; adems, su maquinaria nuclear e intracelular (DNA, RNA, ribosomas y dems organelos) se
encuentran como la de un automvil recin salido de la
agencia, es decir, totalmente nuevas, lo que incluye sistemas de defensa, regeneracin, mitosis y diferenciacin celular intactos, no afectados por el envejecimiento ni la enfermedad: se encuentran en su mxima
capacidad, ofreciendo ventajas adicionales a la terapia
celular con clulas madre de origen adulto o del mismo
paciente, ya que estas ltimas tienen telmeros acortados y su DNA ha estado sujeto durante ms tiempo al
impacto del ambiente y el tiempo. Su grado de mitog-

26

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Telmeros
A

(Captulo 1)

Telomerasa

B
Proceso de regeneracin
de la longitud de los telmeros

Antes
Ncleo

Cromosomas

DNA
terminal

Templete de RNA

Telomerasa
C
Telomerasa

D
DNA
nuevo

No hay
telomerasa

DNA
polimerasa
Despus

Figura 119. Diferencias en el tamao de los telmeros y actividad de la telomerasa entre las clulas madre embrionarias (A)
y las adultas (B). Las clulas madre embrionarias mantienen intacta la maquinaria de reparacin del DNA y el RNA, ya que expresan telomerasa; los telmeros son ms largos y estn menos envejecidos (C); mientras que los telmeros de las clulas madre
adultas son ms cortos y las clulas han envejecido, no expresan telomerasa, lo hacen de forma insuficiente (D).

nesis y diferenciacin est, por lo tanto, ms disminuido


(figura 119).
Nuevos conceptos de la biologa del desarrollo, definidos en los ltimos 20 aos, han apoyado y ampliado
viejos principios que datan de finales del siglo XIX a
inicios del XXI sobre la capacidad regenerativa y de
reparacin tisular de determinadas poblaciones celulares. La utilizacin de clulas derivadas de estas poblaciones con el propsito de regenerar o sustituir clulas
daadas o defectivas y lograr restaurar o establecer la
funcin tisular requerida constituye la base de la terapia
de trasplante celular propuesta para diversas enfermedades crnicas y defectos genticos, asociados con la
afectacin o prdida de tipos celulares especficos.
Estas clulas, cuyo potencial regenerativo o generativo
es apreciado en la actualidad por su indiscutible valor teraputico, se denominan clulas madre. Una clula madre
debe ser clonognica, capaz de autorrenovacin ilimitada
por divisiones asimtricas y bajo condiciones experimentales adecuadas, as como de generar clulas diferenciadas
de virtualmente cualquier tipo de tejido. Esta ltima cualidad, conocida como plasticidad de diferenciacin, distingue a las clulas madre pluripotentes con capacidad de
diferenciarse al cruzar las fronteras de lnea, tejido e
incluso capa germinal, de los precursores o progenitores

tisulares, que aseguran el recambio celular slo dentro de


los lmites de su propio tejido de origen.
La combinacin de las propiedades de clonogenicidad, autorrenovacin (con el carcter vinculado de expansin extensiva in vitro) y plasticidad convierte a las
clulas madre en excelentes herramientas de procedimientos de reconstitucin tisular, cuyo ejemplo ms
exitoso es el trasplante de mdula sea en el tratamiento
de leucemias y linfomas.
En otras enfermedades humanas, la reconstitucin de
los tejidos daados o defectuosos mediante el trasplante
de clulas madre podra ser tambin una intervencin
curativa. Una importante limitacin para la posible
reconstitucin de rganos slidos ha sido la disponibilidad restringida de clulas madre con capacidad de generar clulas diferenciadas que funcionen con la misma
eficiencia que las clulas especficas del tejido que
deben reemplazar.
Con el propsito de lograr el suficiente nmero de
clulas diferenciadas y funcionales en los trasplantes
celulares, son objeto de intenso estudio dos grandes grupos de clulas madre: las clulas madre embrionarias y
las adultas. Ambos tipos de clulas parecen retener una
memoria colectiva del complejo proceso de desarrollo
a travs del cual son construidos los tejidos especficos.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


Recientemente se han logrado dos importantes avances
en el desarrollo de la terapia con clulas madre embrionarias: la derivacin de clulas madre embrionarias humanas
a partir de un blastocisto clonado, as como la derivacin
y caracterizacin de nuevas lneas humanas de clulas
madre embrionarias. Sin embargo, el uso clnico de las
clulas madre embrionarias ha estado en ocasiones limitado por razones ticas y restricciones polticas.
En los ltimos aos se han identificado clulas madre
pluripotentes en muchos tejidos del organismo adulto,
incluidos algunos con muy baja capacidad regenerativa,
como el tejido nervioso. Entre estas clulas madre adultas, el uso de aqullas derivadas de mdula sea y sangre
perifrica es especialmente atractivo por su accesibilidad y aparente plasticidad in vivo. La posibilidad de
generar tejido no linfohematopoytico a partir de clulas madre de sangre perifrica se sugiri inicialmente
por la presencia de hepatocitos y clulas epiteliales cutneas e intestinales derivadas del donante en receptoras
de trasplantes de clulas madre adultas alognicas, aunque en este caso no se estudi la funcin de las clulas
generadas.
Hoy en da son una realidad los ensayos clnicos en
los que se demuestre la recuperacin de una funcin
orgnica eficiente y sostenida tras el trasplante de clulas madre.
La diabetes mellitus tipo 1 (DM1) es, sin duda, la
enfermedad endocrinometablica que ha recibido ms
atencin por parte de clnicos y bilogos que exploran
la utilidad teraputica de las clulas madre. Ya es posible revertir esta enfermedad crnica, que resulta de la
destruccin selectiva de las clulas b de los islotes de
Langerhans, mediante su reemplazo por clulas diferenciadas que secreten insulina bajo regulacin fisiolgica. El alotrasplante de islotes puede restaurar la normoglucemia sin emplear insulina en pacientes con DM1
de larga evolucin.
Varios estudios recientes en modelos animales apoyan la factibilidad de generacin de clulas b funcionales a partir de clulas madre embrionarias y adultas, y
se ha demostrado la reversin de diabetes inducida experimentalmente con el uso de clulas productoras de
insulina derivadas de clulas madre embrionarias.
Tambin se ha propuesto emplear clulas madre embrionarias obtenidas despus de transferencia del ncleo de clulas somticas autlogas o progenitoras autlogas de clulas, cuya fuente en el hombre an est por
definirse. Estudios recientes indican que la mdula sea
puede ser una fuente de progenitores de clulas pancreticas que tienen la capacidad de expansin ex vivo y
diferenciacin in vivo, y por lo tanto ser til para el trasplante autlogo en pacientes diabticos.

27

En cualquier caso, el xito a largo plazo del trasplante


de clulas madre en la DM1 depender de la posibilidad
de restaurar y mantener una masa funcional eficiente de
clulas en un individuo cuya respuesta autoinmune selectiva contra estas clulas, mediada por clulas T, caus inicialmente la enfermedad. En receptores de alotrasplantes de islotes se describe este riesgo de diabetes
autoinmune recurrente. Por lo tanto, deben evaluarse
paralelamente modos seguros y efectivos de control de
la respuesta autoinmune que eviten la destruccin progresiva de las clulas regeneradas. En este sentido se
han explorado algunas formas de induccin de tolerancia en ensayos preclnicos.
En algunos pacientes con diabetes mellitus tipo 2,
con profunda deplecin de la masa funcional de clulas
pancreticas se utiliza el trasplante de clulas madre sin
el riesgo antes mencionado de respuesta autorreactiva.
En este caso, las clulas precursoras trasplantadas logren su diferenciacin final in vivo y producen clulas
funcionales en cantidad suficiente para restaurar el control euglucmico.
Las clulas madre embrionarias, como su nombre lo
indica, se derivan de los embriones, especficamente de
oocitos fertilizados in vitro (FIV), donados con propsitos de investigacin para tratamiento mdico firmando
una hoja de consentimiento informado para donadores,
y no se derivan de huevos fertilizados en la mujer. Los
embriones de donde se obtienen las clulas madre embrionarias humanas tienen tpicamente de cuatro a cinco
das de edad, constituidos por una esfera microscpica
formada por clulas llamadas blastocistos. El blastocisto incluye tres estructuras: el trofoblasto, que es la
capa de clulas que rodean al blastocisto; el blastocele,
que es la cavidad sin sustancia dentro del blastocisto, y
la masa celular interna, que es un grupo de unas 30 clulas en un extremo del blastocele. Esta masa celular interna se separa del trofoblasto para cultivar aqullas,
que se dividen y se extienden encima de la superficie
interior de las cajas de cultivo celular.
Las investigaciones de ingeniera de tejidos de la medicina regenerativa del nivel II desarrollaron tecnolgicamente la colocacin, sobre la superficie de la caja de
cultivo celular, de una lmina de clulas embrionarias
de ratn que recibieron tratamiento especial para no
entrar en mitosis. Esta capa de clulas es conocida como
capa alimentadora. La razn de tener esta capa es proporcionar una superficie adherente a las clulas de las
masas celulares internas. Las clulas alimentadoras liberan nutrientes en el medio de cultivo. Recientemente,
otros cientficos han inventado nuevas tecnologas que
permiten a las clulas madre embrionarias de origen
humano crecer sin necesidad de la capa de clulas de ali-

28

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 1)

Blastocisto
Masa celular interna
Clula madre
embrionaria

Clula
madre
Suspensin de clulas madre
marcadas con anticuerpos y
marcadores fluorescentes

Receptores
Membrana plasmtica
FACS
Factores de
transcripcin

Lser
Activacin

Activacin

Se someten a un flujo de presin


y campo electromagntico

Sealizacin

Autorrenovacin
Bloqueo
autorrenovacin

Las clulas generan


una carga elctrica que
les permite ser separadas
(sorting)

Grfica de FACS
Intensidad
fluorescente

Anlisis de clulas madre


B

Figura 120. A. Vas de sealizacin que estn investigndose en clulas madre embrionarias. B. Tecnologa para obtener clulas madre adultas a partir de mdula sea y sangre perifrica por citometra de flujo de alta velocidad (FACssorting), que separa
las clulas madre marcadas por su carga elctrica negativa.

mentacin. Durante los siguientes das, las clulas de la


masa celular interna proliferan y empiezan a apiarse en
el plato de cultivo. Cuando esto ocurre, estas clulas se
separan con suavidad y vuelven a sembrarse en nuevas
cajas con nuevos medios de cultivo. Este proceso de
reimplantacin de clulas se repite muchas veces y
durante muchos meses. Cada ciclo es conocido como
subcultivacin de clulas; despus de seis meses o ms,
las 30 clulas originales de la masa interna del blastocisto donado se multiplicaron para alcanzar millones de
clulas madre embrionarias que pueden aplicarse en la
terapia celular. Hoy en da, estas clulas pueden adquirirse en bancos que han establecido lneas celulares, las
cuales se congelan en medios especiales de criopreservacin y pueden enviarse a otros laboratorios para continuar su cultivo celular, realizar experimentacin y
aplicar terapia celular a pacientes.
Una ventaja de utilizar lneas celulares de estos laboratorios es que estas clulas madre de origen embrionario humano fueron sometidas a diversas pruebas. Estos
ensayos incluyen la testificacin de su capacidad de crecimiento en los procesos de subcultivacin durante muchos meses, lo que permite garantizar que las clulas
sean capaces de autorrenovarse a largo plazo cuando se
apliquen en el paciente. Adems, expertos cientficos en
embriologa y morfologa inspeccionan los cultivos a
travs de diversas tcnicas de microscopia para ver que

las clulas se encuentren saludables y continen en su


estado de indiferenciacin.
En EUA los Institutos Nacionales de Salud (NIH) estn desarrollando tcnicas especficas para determinar
la presencia de marcadores de superficie que slo se encuentran en este tipo de clulas indiferenciadas (figura
120). Otras pruebas importantes en desarrollo consisten en localizar la presencia de la protena Oct4, tpica
de las clulas indiferenciadas, la cual funciona como
factor de transcripcin, mientras sigue creciendo el conocimiento sobre el genoma humano. Hoy en da se
sabe que Oct4 ayuda en el proceso de encendido, activacin de genes, y participa en los procesos de diferenciacin celular y desarrollo embrionario. Otro mtodo es
el examen microscpico de cromosomas, que permite
evaluar si existe dao cromosmico o si el nmero de
cromosomas ha cambiado. Cuando se descubre que no
existen mutaciones genticas en las clulas, las clulas
pueden seguir el proceso de subcultivacin y criopreservacin. Otros controles de calidad son la descongelacin y reimplantacin, sometiendo a pruebas de diferenciacin clulas madres embrionarias humanas para
conocer si su capacidad pluripotencial se conserva, permitiendo a las clulas diferenciarse de manera espontnea en los medios de cultivo celular. Tambin se pueden
manipular las clulas para dirigir el tipo especfico e inyectar las clulas madre a ratones inmunodeprimidos

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


para corroborar el supuesto riesgo de formacin de tumores benignos llamados teratomas, los cuales pueden
originarse cuando se emplean clulas madre derivadas
de teratomas, lo que no se recomienda para su aplicacin clnica de terapia celular.
El genoma humano es un conjunto de instrucciones
de material gentico existentes en las clulas del cuerpo
humano. La gran molcula de DNA que compone el genoma est repartida en 23 pares de cromosomas. Todas
las clulas se formarn a partir de la primera que se form en el momento de la fecundacin, al fusionarse el
gameto del padre con el de la madre. A partir de stas,
una clula madre embrionaria totipotencial dar origen
a los ms de 100 trillones de clulas que forman un organismo adulto, todas con idntica carga gentica, de tal
manera que cada par de cromosomas es idntico. Microscpicamente los cromosomas tienen la apariencia
de un ovillo. Por lo tanto, el genoma humano comprende el conjunto de genes que integran el patrimonio biolgico de cada individuo y contienen las claves de la
herencia. Su conocimiento permite entender los procesos de transmisin de todo tipo de caractersticas.
El Proyecto Genoma Humano (PGH) ofrece herramientas jams imaginadas por los investigadores, como
prevenir y curar enfermedades hereditarias que causan
30% de mortalidad infantil, pero a la vez desencadena
una compleja discusin tica, en que se involucran
diversas esferas de la sociedad que tratan de llegar a un
consenso de enfoques ante el avance de la ciencia.
Ya se han usado clulas madre embrionarias con xito para tratar lesin y enfermedad en los animales, incluyendo lesiones del cordn espinal en las ratas. Tambin
ha sido prometedor en roedores de modelos experimentales de enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Las clulas madre embrionarias humanas pueden sobrevivir en el pncreas de ratn y tienen la
capacidad de aumentar la secrecin de insulina, por lo
que el ratn resiste el ataque del sistema inmunitario
para poder revertir la diabetes mellitus. Naturalmente,
clulas madre embrionarias humanas empleadas en la
terapia celular tienen mejores efectos equivalentes en
los pacientes humanos.
En caso de que las clulas madre embrionarias de origen humano, obtenidas de las lneas celulares de los
bancos, ocasionen una hipottica reaccin inmune al
inyectarse en el paciente, existira entonces la posibilidad de emplear una nueva tcnica biolgica poderosa
conocida como trasplante nuclear, utilizado en 1997
para producir a Dolly, la oveja clonada.
El trasplante nuclear permite producir clulas madre
embrionarias de origen humano genticamente idnticas a la muestra que se obtenga del cultivo celular del

29

paciente, eliminando as la supuesta dificultad de incompatibilidad. Esta tcnica evitara la clonacin de


animales, que ha sido limitada por la biotica en algunos
pases. Existe otra tcnica que permite, a travs de un
choque elctrico, iniciar la mitosis del oocito, proceso
llamado partenognesis que evita la fertilizacin por el
espermatozoide. Este embrin es implantado en un tero y la descendencia es un clon genticamente idntico
al animal que proporcion el ncleo original. Pero si el
objetivo es derivar las clulas madre embrionarias, la
transferencia nuclear permitira extraer clulas madre
embrionarias de animales con ncleos de paciente.
El experimento de clonacin con Dolly demostr dos
puntos importantes: uno fue la posibilidad de reprogramar una clula adulta para que sus descendientes puedan convertirse en cualquier otro tipo de clula en el
cuerpo. Tambin se demostr con Dolly que ese trasplante nuclear puede rejuvenecer las clulas, mientras
que al poner en retroceso su reloj interior se comportaran de manera similar a las clulas jvenes nuevas,
proceso que podra usarse para regenerar el envejecimiento de las clulas humanas.
Sin embargo, la principal limitante de la medicina
regenerativa de nivel III es la oposicin de ciertos sectores de la sociedad, que arguyen dilemas bioticos. La
administracin del presidente George W. Bush en EUA
ha restringido el apoyo federal para la investigacin de
clulas madres embrionarias humanas a un pequeo
nmero de lneas celulares que han quedado legalmente
establecidas y que pueden ser empleadas para la terapia
celular con fines mdicos. Ya que el trasplante nuclear
podra usarse para hacer un clon humano, algunas personas se oponen al uso de esta tcnica, incluyendo su
empleo con fines teraputicos y reproductivos. La
administracin Bush ha sido presionada por sectores de
la sociedad para prohibir cualquier uso de trasplante
nuclear que incluya el crear tejidos que igualen los de
un paciente. Mientras que estas oposiciones polticas se
invierten en EUA, en pases como Mxico hay la oportunidad de avanzar en la medicina regenerativa de nivel
III investigando y aplicando terapia celular con clulas
madre embrionarias de origen humano. La oposicin de
algunos sectores de la sociedad para usar clulas madre
de origen humano se deriva de la consideracin de que
estos embriones tempranos, los que en realidad son
todava una esfera de clulas (blastocistos), son destruidos para recuperar la masa interna de clulas de las que
se derivan las lneas de clulas madre, sin considerar
que en esta fase temprana de desarrollo el embrin humano es microscpico, formado por un acmulo de menos de 100 clulas, las cuales no han formado rganos
como el corazn, cerebro o sistema nervioso. Por lo tan-

30

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

to, estas clulas son incapaces de sentir dolor o sufrimiento. Los programas de FIV disponen de miles de
embriones donados en procesos semejantes a los de donacin voluntaria, como la donacin de sangre o de rganos para ciruga de trasplante. Muchas mujeres y
hombres son donadores deseosos de ofrecer un embrin
destinado a la disposicin de clulas madre embrionarias que permitiran sanar a enfermos y ancianos.

Medicina regenerativa de nivel IV


El paradigma del nivel IV de la medicina regenerativa
es la ciencia de los nuevos materiales, y el rpido progreso de esta ciencia est permitiendo el diseo de materiales a escala atmica y molecular. La nanotecnologa
permite mayor precisin, lo cual hace que los implantes
se integren ms fcilmente en los tejidos, como si se tratara de nuestras propias clulas. Se vislumbra el desarrollo de dispositivos microscpicos que funcionen con
estructuras producidas por ingeniera a escala atmica
(nanotecnologa) que sern capaces de introducirse en
el cuerpo sin ocasionar rechazo. Estos desarrollos proporcionarn al paciente viejo o enfermo la capacidad de
restaurar de manera inconcebible clulas y tejidos. De
hecho, la ciencia ficcin espera que ellos superen las
capacidades naturales del cuerpo. Las implicaciones de
la nanotecnologa sern una realidad a largo plazo. Las
aplicaciones mdicas llevarn a la medicina regenerativa a un lugar ms all de lo que ahora se puede lograr.
El campo de la nanotecnologa tardar en madurar,
pero ya se pueden discernir sus principios ms tempranos. Los mdicos ortopedistas actualmente utilizan
suturas e implantes de acero inoxidable para sustituir las
articulaciones de la cadera; los cirujanos cardiovasculares sustituyen las vlvulas del corazn con vlvulas
mecnicas en aleaciones especiales de acero y emplean
vasos sintticos de silicn y dacrn para reemplazar
segmentos de vasos sanguneos obstruidos por placas
de ateroma o que han formado aneurismas; los otorrinolaringlogos estn permitiendo que miles de personas
recuperen el sentido de la audicin implantando ccleas
artificiales en el odo interno.
Qu clase de sustancia puede integrarse en los tejidos del cuerpo humano? La respuesta es sorprendentemente simple: cualquier clula o material que persista
en el cuerpo y no llame la atencin del sistema inmunitario. Esta pregunta ya est siendo resuelta con las investigaciones clnicas de nivel II. Al aplicar clulas
madre en pacientes, debe reconocerse que el estmulo
ms importante al escribir la primera edicin de este
libro ha sido la experiencia clnica de los autores, al ha-

(Captulo 1)

ber aplicado clulas madre de origen embrionario y


adulto en ms de 1 000 pacientes que presentaban diversas enfermedades crnicas degenerativas incurables,
con resultados sorprendentemente benficos, y en ninguno de ellos se ha presentado hasta el momento reaccin de rechazo de tipo inmunolgico. Ese sistema de
defensa, compuesto de las clulas especializadas de
sangre y anticuerpos, rechazar materiales que reconozca como qumicamente diferentes de los componentes
naturales del cuerpo. Aun as, aceptar aqullos qumicamente similares y aceptar algunos materiales que no
se parezcan a nuestros componentes con tal que no lleven ninguna bandera roja qumica con la cual llamen la
atencin.
El diseo actual de implantes, dispositivos y prtesis
se hace con base en que los materiales con los que estn
fabricados tengan la capacidad de no producir rechazo
inmunolgico. Estos materiales actualmente son cuidadosamente seleccionados. Los experimentos han identificado a varios que incluyen ciertas aleaciones de metales mezcladas con minerales y metales, materiales
naturales y plstico con la capacidad de ser absorbidos
por el cuerpo, como aqullos que son actualmente empleados en las suturas sintticas que se emplean en ciruga (Vicryl, catgut crmico y simple).
Los recientes logros de la micromecnica y la electrnica han permitido disear dispositivos y prtesis con
marcapasos con desfibriladores implantados, prtesis
robticas inteligentes que permiten sustituir las funciones de las extremidades superiores e inferiores al estar
conectadas al sistema nervioso perifrico del paciente.
Existen actualmente riones y corazones artificiales que
han permitido realizar la ciruga de trasplante.

MEDICINA ANTIENVEJECIMIENTO

Finalmente, la medicina regenerativa puede encaminarse al antienvejecimiento. Difcilmente la teraputica


convencional con frmacos qumicos puede detener el
proceso natural del envejecimiento. Sin embargo, la
medicina regenerativa puede frenar o enlentecer los
cambios fsicos que se observan durante el envejecimiento del cuerpo humano. Despus de todo, son las
sustancias bioactivas de nuestro organismo y sus clulas
las que dirigen nuestro desarrollo, mantienen y reparan
nuestros cuerpos. Las hormonas del crecimiento humano de origen recombinante pueden promover el crecimiento del msculo y aumentar la regeneracin de la
piel. Las arrugas y la atrofia muscular representan una

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


diferencia importante en la calidad de vida que, desafortunadamente, cambia mientras envejecemos.
La medicina antienvejecimiento no puede emplear
una sola medicina o tratamiento que pueda limitar este
proceso. La medicina regenerativa de nivel I para el
antienvejecimiento emplear las sustancias que permitan fortalecer el sistema inmunitario, como los factores
de transferencia y la alimentacin con lactosuero, antioxidantes, hormonas y factores de crecimiento que en
combinacin permitan fortalecer los huesos, reparar
cartlagos y una extensa variedad de propsitos mdicos.
La medicina antienvejecimiento no es un solo procedimiento y no necesariamente est indicada nicamente
para los ancianos, por lo que pueden establecerse programas en todas las edades, en especial en la vida adulta
(ms de 30 aos de edad). Este programa incluye la disminucin de factores estresantes y nocivos (noxas). Por
ejemplo, sabemos actualmente que el estrs emocional
es un factor importante que incrementa el riesgo de
muerte prematura. Los factores emocionales provocan
desgaste fsico y mental (sndrome general de adaptacin), la propensin a enfermedades de diverso tipo y,
por consiguiente, envejecimiento acelerado.
Si se considera que en la vida moderna existen mltiples factores ambientales que afectan negativamente las
condiciones de salud de la poblacin, se comprender
por qu muchas personas preocupadas por mejorar su
estado de salud son ejecutivos, artistas, profesionales y
todos aqullos sometidos a trabajo excesivo y presiones
fsicas y emotivas, y se someten a diferentes procedimientos de medicina regenerativa en los que se incluye
la terapia celular.
En este libro, el concepto de medicina antienvejecimiento estar integrado a la aplicacin combinada de
terapia celular con clulas madre, con una dieta biomdica antienvejecimiento (alimentos funcionales como
el lactosuero ms restriccin calrica y disminuir en >
60% la ingestin de caloras), suplementada adems
con nutracuticos que incrementan la capacidad del sistema inmunitario y antioxidante (jugos antioxidantes ricos en xantonas y factores de transferencia), adems de
la inmunizacin convencional extendida (contra neumococo, influenza, virus del papiloma humano, etc.),
as como la adquisicin de hbitos saludables de vida
que incluyen el control del estrs, ejercicio aerbico,
combinado con periodos de reposo y la eliminacin de
vicios nocivos para la salud como tabaquismo, etilismo,
promiscuidad, etc., debido a que el envejecimiento y
otros procesos patolgicos autoinmunes disminuyen las
defensas, lo cual tambin puede observarse por el efecto
secundario del empleo de frmacos inmunosupresores
(corticosteroides y otros factores nocivos). Adems,

31

debe considerarse la gran cantidad de pacientes con sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA); en estos
pacientes ocurre un envejecimiento acelerado, adems
de que existe una mayor susceptibilidad a infecciones recurrentes, intoxicaciones, heridas no cicatrizantes, enfermedades autoinmunes y mayor incidencia de cncer.
Adems de la regeneracin de tejidos por terapia celular con clulas madre (medicina regenerativa de nivel
II), el paradigma adicional al que se refiere la medicina
antienvejecimiento implica reforzar el sistema inmunitario y las defensas antioxidantes. La importancia del
sistema inmunitario est implicada en que ste es el responsable de:
1. La defensa contra las enfermedades causadas por
virus, bacterias, parsitos y hongos.
2. El reconocimiento de las clulas propias del organismo.
3. La proteccin contra el cncer.
4. Los mecanismos reparadores de errores en las divisiones celulares.
En una primera aproximacin, la terapia celular (medicina regenerativa de nivel II) puede emplear liofilizados
derivados de extractos celulares del sistema reticuloendotelial fetal o clulas madre embrionarias previamente
dirigidas a la diferenciacin del sistema inmunohematolgico como revitalizador preventivo de los trastornos de mayor relevancia en la vejez. La mayora de los
cientficos reconocen que el mejor tratamiento contra el
cncer y las enfermedades crnicodegenerativas que
se presentan durante el envejecimiento consiste en mantener en ptimas condiciones el sistema inmunitario.
Las preparaciones especficas con liofilizados de
clulas para revitalizacin y clulas madre especficas
para regenerar el sistema inmunitario han demostrado
en el campo experimental un efecto regenerador de tejidos en general, acompaado de un efecto inmunoestimulante benfico. Estas teraputicas tambin han tenido aplicacin en los casos de retraso en el desarrollo
somtico o psquico en nios si se considera que no se
dispone de recursos teraputicos convencionales para
estas situaciones clnicas, los cuales ni siquiera existen
en los grandes centros hospitalarios y de investigacin.
Por lo tanto, se considera como alternativa vlida utilizar la medicina regenerativa y antienvejecimiento en
los casos de sndrome de Down, Turner, mongolismo,
oligofrenia y trastornos del crecimiento. Algunos investigadores como Feldman han reportado una evidente
aceleracin del desarrollo en la esfera fsica, intelectual
y social, mejora en el coeficiente de inteligencia, tono
muscular e interrelacin con los dems. De particular
inters fue comprobar que adems se disminuan las

32

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

enfermedades intercurrentes y que las medidas psicopedaggicas en los nios con retraso mental resultaban
tambin mucho ms eficaces. Los mejores resultados
estn en relacin directa con un inicio temprano y de
preferencia antes de la pubertad. Si bien en casos especficos el reemplazo hormonal puede estar indicado, no
debe emplearse como un paradigma de la medicina del
antienvejecimiento como frecuentemente se confunde;
as como los tratamientos alternativos y de medicina
ciruga esttica.
La estructuracin de un tratamiento de medicina regenerativa y antienvejecimiento requiere diagnstico y
planeacin mdica personalizada, pero en trminos
generales el procedimiento se enfocara en tratar al organismo enfermo o envejecido con clulas madre o extractos celulares fetales correspondientes de rganos sanos. Sin embargo, como es comn que un rgano afecte
a todo el sistema o aparato al que pertenece, se deben incluir varios tipos de clulas, elaborando un esquema individual para los requerimientos del paciente.
El protocolo de la SICETEM es el siguiente:

1. En principio se debe obtener un diagnstico clnico con base en una historia clnica completa,
complementada con mtodos de laboratorio y gabinete habituales, para determinar si el paciente es
apto para la terapia celular.
2. En seguida se elaborar un esquema de tratamiento individualizado segn los requerimientos y las
condiciones particulares del paciente.
3. Es norma que en una sola sesin se apliquen simultneamente 1 o 2 implantes o inyecciones diferentes bajo las ms estrictas normas de higiene
y asepsia.
4. Se debe buscar que el material que se aplique sea
lo menos doloroso; esto es posible, ya que cuando
se emplea la va parenteral por lo general se emplean productos biolgicos naturales cuya composicin corresponde al pH y osmolaridad de los tejidos y lquidos del organismo del paciente.
5. El paciente debe guardar reposo de 1 a 2 min en el
consultorio con evaluacin de sus signos vitales.
6. El paciente debe alimentarse con la dieta biomdica antienvejecimiento posterior a la terapia celular, ya que provee abundantes protenas, e instruye al paciente a evitar el consumo de grasas y
azcares, pues son irritantes y pueden afectar la
migracin celular.
7. El mdico entrega al paciente una serie de indicaciones por escrito para que las lleve a cabo despus
de la terapia celular.

(Captulo 1)

8. En algunos casos puede haber una ligera elevacin


de temperatura por unas horas o das; se llama fiebre de absorcin o crisis curativa y no representa
ningn riesgo y debe ser notificada al mdico.
9. En algunos tratamientos puede haber un ligero enrojecimiento (eritema) y dolor (inflamacin) alrededor de los sitio de regeneracin.
Las clulas madre que ingresan permiten suplementar
los tejidos envejecidos y estmulos inductores de regeneracin, ya que son el depsito natural del material gentico necesario que sustituir al material gentico perdido por enfermedad o por envejecimiento celular, y son
transportadas a los rganos afines por un principio llamado organotropismo. Los productos celulares sanos y
activos penetran en clulas de rganos deficientes o envejecidos que de este modo retoman sus tendencias normales reactivadas, ya que la replicacin celular peridica es parte vital de los seres vivos. Las clulas
organoespecficas se reparten y son asimiladas por los
rganos correspondientes en los lugares donde el tejido
est afectado, por un tropismo gentico (se demostr la
organoespecificidad con un marcaje de clulas con istopos radioactivos y por medios inmunolgicos).
Las clulas que no logran ser incorporadas a los tejidos son rodeadas por anticuerpos que las inactivan y
luego son eliminadas por el sistema inmunitario. Segn
lo expuesto, las fagocitadas por macrfagos adquieren
importancia en la medida en que el proceso favorece la
recepcin del material intracelular til para la revitalizacin y el aumento de la resistencia celular de las propias clulas envejecidas del paciente. Las clulas son
como microesferas o microliposomas naturales que al
ser digeridas por los leucocitos liberan elementos de la
medicina regenerativa de nivel I (enzimas, polipptidos, DNA, RNA y sustancias orgnicas bsicas), y son
trasladadas e incorporadas mediante vesculas a las clulas respectivas, o sea a sus homlogas. Recordando
los principios enunciados por la hiptesis de Snchez
Vzquez en lo que a herencia horizontal entre clulas se
refiere, en el laboratorio de los autores se ha podido observar mecanismo de transporte de DNA y RNA entre
una clula y otra.
Qu efectos puede sentir el paciente? Despus de la
terapia celular, generalmente suceden tres fases:
S Primera fase: ocurre en las primeras horas y das;
los elementos celulares activos son absorbidos en
la corriente sangunea e inducen mejora a corto
plazo que se desvanece en los das siguientes.
S Segunda fase: se denomina de silencio teraputico. Puede durar de 3 a 10 das despus del im-

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

plante, corresponde al periodo que requieren los


elementos celulares para la adaptacin e integracin a las clulas del organismo husped. En este
periodo el paciente usualmente no percibe mejora
aparente (aunque algunos la reportan desde periodos tempranos).
S Tercera fase: es el estado de revitalizacin o reactivacin de funciones; se inicia en 3 a 6 semanas
y dura de 4 a 12 meses. Durante este periodo el objetivo teraputico buscado es notorio, hay sobre
todo renovada vitalidad, capacidad funcional y
mayor mejora en las condiciones generales. La
reactivacin de la salud se manifiesta con aumento
del apetito, aumento de peso, desaparicin de la
debilidad, incremento de la capacidad fsica y
mental, un mejor estado de nimo. Cuando el problema es orgnico, es evidente la mejora de la
funcin de dichos rganos. El efecto final puede
y debe durar de varios meses a varios aos, dependiendo del autocuidado y de los estilos de vida
saludables. Es importante seguir las prescripciones de grageas, dieta y medicamentos que cada paciente necesita.
La pregunta obligada con respecto a la terapia celular
sera: Es efectiva en 100% de los casos? La experiencia
clnica actual de los autores es que s es efectiva, aunque
la proporcin en el porcentaje de mejora, regeneracin
y antienvejecimiento o rejuvenecimiento va a depender
del tratamiento temprano y oportuno en cada uno de los
pacientes, en la aplicacin continuada y sostenida de las
clulas madre, ya sean de origen embrionario o adultas,
ya que el envejecimiento se inicia desde el momento de
la concepcin. De qu depende el xito? Como con
todo tratamiento mdico, depende del diagnstico oportuno, temprano y correcto, de la indicacin teraputica,
pero sobre todo de la capacidad residual, fisiolgica,
bioqumica y anatmica del organismo enfermo, envejecido, con discapacidad funcional, para reaccionar de
manera positiva a un estmulo rejuvenecedor, revitalizador y reactivador. Desafortunadamente, en ciertos casos el cuerpo humano establece un balance negativo,
que rechaza sistemticamente los estmulos teraputicos de diversa ndole, lo que sobrepasa los lmites de la
intervencin mdica. Produce efectos nocivos o reacciones alrgicas? La vasta experiencia reportada internacionalmente no seala dao de ningn tipo ni reacciones alrgicas en los pacientes receptores. Actualmente
se considera como inofensivo e inocuo. El riesgo estriba
en personas que sin seguir las normas de produccin
correctas pueden transmitir alguna enfermedad de origen animal o producir una reaccin alrgica. En estos

33

casos el problema no radica en la terapia celular, sino en


las personas carentes de escrpulos, seriedad y honestidad que las ponen a la venta. De qu depende su prestigio? De su aplicacin durante ms de 50 aos de trabajos de ndole experimental clnica y de biologa celular
por miles de profesionales, discpulos del Dr. Niehans,
que han formado la Sociedad Internacional de Terapia
Celular con sede en Alemania. Sus tratamientos y publicaciones han sido autorizados y reconocidos por las
autoridades de salubridad en pases con tica mdica
muy elevada, como Suiza, Francia y Alemania, que no
slo la aprueban, sino que fomentan el desarrollo de esta
ciencia teraputica que requiere una gran preparacin
por quienes la aplican. Aquellos mdicos que la niegan
o la rechazan lo hacen porque la ignoran, pero sa es una
limitante de los hombres, no de la ciencia. Cmo ha podido extenderse fuera de Suiza? Fue el desarrollo de clulas congeladas y secas (criopreservacin y liofilizacin) lo que primero permiti a los mdicos hacer uso
de la terapia celular. Con estas preparaciones el mdico
es independiente del proceso quirrgico, y sus requisitos para obtener el material, las clulas, estn a su disposicin en cualquier momento. Las preparaciones de clulas congeladas se conservan por un periodo de
mxima eficiencia y seguridad de seis meses y las clulas liofilizadas no tienen caducidad, ya que son desecadas. Cul ser la actitud de su mdico tratante cuando
le pidan su opinin acerca de la terapia celular? Es muy
lgico que los pacientes pregunten a sus mdicos acerca
de este tipo de tratamientos; las respuestas sern variables y dependern del criterio y la calidad humana y profesional del mdico. Aqullos que hayan estudiado la
tcnica aun cuando la practiquen externarn en su mayora opiniones favorables. nicamente los que la desconocen o han tenido informacin vaga o de medios
poco confiables respondern (si son sinceros) que no
pueden opinar acerca de algo que desconocen, o bien al
basarse en su temor por reconocer la ignorancia, la rechazarn sistemticamente, llegando incluso a condenarla. Desafortunadamente, el cuerpo mdico en su
mayora est mal informado de la importancia, seriedad
y posibilidades de este mtodo de gran auge en Europa.
Debe considerarse adems que la geriatra en Mxico
est en sus inicios y eso en parte es la razn por la cual
existe un desconocimiento generalizado al respecto. Sin
embargo, el conformismo, la negacin, el rechazo sistemtico a lo que se ignora y las actitudes prepotentes de
desprecio no son actitudes cientficas que correspondan
a un buen mdico.
Para los mdicos deseosos de ampliar sus horizontes
existen artculos, libros y una serie de informacin a su
disposicin. El grupo pionero de cientficos y maestros

34

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

miembros del Cuerpo Mdico Militar del Ejrcito y


Fuerza Area Mexicanos, Dr. Gerardo Gonzlez Lpez,
Dr. D. Javier Snchez Gonzlez y Dr. Carlos Armando
Sosa Luna, tienen la esperanza de que con esta publicacin pionera se inicie la difusin y desarrollo de la terapia celular en Mxico con alcance internacional, para

(Captulo 1)

que ocupe su merecido lugar como herramienta cientfica disponible en la lucha por lograr la curacin de
mltiples enfermedades que hoy por hoy no tienen una
teraputica adecuada, con la esperanza de que el sufrimiento que la enfermedad y el envejecimiento, confieren no sea ms.

REFERENCIAS
1. Alison MR, Poulsom R, Jeffery R, Dhillon AP, Quaglia A
et al: Hepatocytes from nonhepatic adult stem cells. Nature
2000;406:257.
2. Amsellem S, Pflumio F, Bardinet D et al.: Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells by direct delivery of
the HOXB4 homeoprotein. Nat Med 2003;9:14231427.
3. Austin CR: The mammalian egg. Blackwell, Oxford University Press, 1961.
4. Benveniste P, Cantin C, Hyam D et al.: Hematopoietic stem
cells engraft in mice with absolute efficiency. Nat Immunol
2003;4:708713.
5. Bradford GB, Williams B, Rossi R et al.: Quiescence, cycling, and turnover in the primitive hematopoietic stem cell
compartment. Exp Hematol 1997;25:445453.
6. Brinster RL, Zimmermann JW: Spermatogenesis following male germcell transplantation. Proc Natl Acad Sci U S
A 1994;91:1129811302.
7. Camargo FD, Green R, Capetenaki Y et al.: Single hematopoietic stem cells generate skeletal muscle through myeloid intermediates. Nat Med 2003;9:15201527.
8. Campbell KH: Viable offspring derived from fetal and adult
mammalian cells. Nature 1997;385:810813.
9. Chang MC: Hormonal regulation of sperm capacitation. En:
Rasp G (ed.): Schering Symposium on Mechanisms
Involved in Conception, Advances in the Biosciences, Nueva
York, Pergamon Press, 1969:1220.
10. Corbel SY, Lee A, Yi L et al.: Contribution of hematopoietic
stem cells to skeletal muscle. Nat Med 2003;9:15281532.
11. Cowan CA, Klimanskaya I, McMahon J: Derivation of
embryonic stem cell lines from human blastocysts. N Engl J
Med 2004;350:13531356.
12. De Haan G, Szilvassy SJ,Meyerrose TE et al.: Distinct
functional properties of highly purified hematopoietic stem
cells from mouse strains differing in stem cell numbers.
Blood 2000;96:13741379.
13. Dexter TM, Allen TD, Lajtha LG: Conditions controlling
the proliferation of haemopoietic stem cells in vitro. J Cell
Physiol 1977;91:335344.
14. Down J, Boudewijn A, Dillingh J et al.: Relationship
between ablation of distinct haematopoietic cell subsets and
the development of donor bone marrow engraftment following recipient pretreatment with different alkylating drugs. Br
J Cancer 1994;70:611616.
15. Down JD, Ploemacher RE: Transient and permanent
engraftment potential of murine hematopoietic stem cell subsets: differential effects of host conditioning with gamma radiation and cytotoxic drugs. Exp Hematol 1993;21:913921.

16. Edwards RG, Dauzier L, Thibault C: New data on the in


vitro fertilization of rabbit and ewe ova. C R Hebd Seances
Acad Sci 1959;248:26552656.
17. Edwards RG: Aspects of the molecular regulation of early
mammalian development. Reprod Biomed Online 2003;6:
97113.
18. Evans MJ, Kaufman MH: Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature 1981;292:
154156.
19. Gage FH: Mammalian neural stem cells. Science 2000;287:
14331438.
20. Gonzlez LGM, Sosa LCA, Jurez MJL, Trejo BNI,
Nez SM et al.: Terapia celular y aplicacin de clulas
madre en la enfermedad de Parkinson (revisin). Neurol
Neurocir Psiquiat 2007; 40(3):8091.
21. Goodell MA, Brose K, Paradis G et al.: Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are
replicating in vivo. J Exp Med 1996;183:17971806.
22. Goodell MA, Rosenzweig M, Kim H et al.: Dye efflux studies suggest that hematopoietic stem cells expressing low or
undetectable levels of CD34 antigen exist in multiple species. Nat Med 1997;3:13371345.
23. Gussoni E, Soneoka Y, Strickland CD et al.: Dystrophin
expression in the mdx mouse restored by stem cell transplantation. Nature 1999;401:390394.
24. Harris CP, Becker RA, Hearn JP: Isolation of a primate
embryonic stem cell line. Proc Natl Acad Sci USA 1995;
92:78447848.
25. Harrison DE: Competitive repopulation: a new assay for
longterm stem cell functional capacity. Blood 1980;55:
7781.
26. Jiang Y, Jahagirdar BN, Reinhardt RL et al.: Pluripotency
of mesenchymal stem cells derived from adult marrow.
Nature 2002;418:4149.
27. Koller MR, Manchel I, Smith AK: Quantitative longterm
cultureinitiating cell assays require accessory cell depletion
that can be achieved by CD34enrichment or 5fluorouracil
exposure. Blood 1998;91:40564064.
28. Krbling M, Katz RL, Khanna A: Hepatocytes and epithelial cells donor origin in recipients of peripheral blood stem
cells. N Engl J Med 2002;346:738746.
29. Krosl J, Austin P, Beslu N et al.: In vitro expansion of hematopoietic stem cells by recombinant TATHOXB4 protein.
Nat Med 2003;9:14281432.
30. Lagasse E, Connors H, Al Dhalimy M et al.: Purified
hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in
vivo. Nat Med 2000;6:12291234.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa


31. Lammie A, Drobnjak M, Gerald W et al.: Expression of
ckit and kit ligand proteins in normal human tissues. J Histochem Cytochem 1994;42:14171425.
32. Lemischka I: The haematopoietic stem cell and its clonal
progeny: mechanisms regulating the hierarchy of primitive
haematopoietic cells. Cancer Surv 1992;15:318.
33. Lessard J, Sauvageau G: Bmi1 determines the proliferative capacity of normal and leukaemic stem cells. Nature
2003;423:255260.
34. Martin GR, Evans MJ: The morphology and growth of a
pluripotent teratocarcinoma cell line and its derivatives in tissue culture. Cell 1974;2:163172.
35. Martin GR: Isolation of a pluripotent cell line from early
mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 1981;78:
76347636.
36. Matsui Y, Zsebo K, Hogan BL: Derivation of pluripotential
embryonic stem cells from murine primordial germ cells in
culture. Cell 1992;70:841847.
37. Matsuzaki Y, Kinjo K, Mulligan RC et al.: Unexpectedly
efficient homing capacity of purified murine hematopoietic
stem cells. Immunity 2004;20:8793.
38. McGrath J, Solter D: Inability of mouse blastomere nuclei
transfered to enucleated zygotes to support development in
vitro. Science 1984;226:13171319.
39. Mezey E, Chandross KJ, Harta G, Maki RA, McKercher
SR: Turning blood into brain: cells bearing neuronal antigens
generated in vivo from bone marrow. Science 2000;290:
17791782.
40. Michalopoulos GK, DeFrances MC: Liver regeneration.
Science 1997;276:6066.
41. Miller RA, Ruddle FH: Pluripotent teratocarcinoma thymus somatic cell hybrids. Cell 1976;9:4555.
42. Morrison SJ, Weissman IL: The longterm repopulating
subset of hematopoietic stem cells is deterministic and isolatable by phenotype. Immunity 1994;1:661673.
43. Morrison SJ, Wandycz AM, Hemmati HD et al.: Identification of a lineage of multipotent hematopoietic progenitors.
Development 1997;124:19291939.
44. Niehans P: 20 years of cellular therapy. Med Klin 1952;
47:116.
45. Niehans P: History of fresh cell therapy with correction of
an error. Hippokrates 1956; 27(16):519523.
46. Niehans P: Introduccin en la terapia celular. Berna, Hans
Huber, 1987.
47. Niehans P: La terapia celular. Urban u. Schwrzenberg
Minich, 1984.
48. Niehans P: The case for Niehans. Med Monatsschr 1956;
10(8):535537.
49. Niwa H, Miyazaki J, Smith AG: Quantitiative expression
of Oct3/4 genes differentiation, dedifferentiation or selfrenewal of ES cells. Nature Genet 2000;24:372 376.
50. Odorico JS, Kaufman DS, Thomson JA: Multilineage differentiation from human embryonic stem cell lines. Stem
Cells 2001;19:193204.
51. Okada S, Nakauchi H, Nagayoshi K et al.: In vivo and in
vitro stem cell function of ckit and Sca1positive murine
hematopoietic cells. Blood 1992;80:30443050.
52. Onishi A, Iwamoto M, Akita T, Mikawa S, Takeda K et
al.: Pig cloning by microinjection of fetal broblast nuclei.
Science 2000;289:11881190.

35

53. Orlic D, Kajstura J, Chimenti S et al.: Bone marrow cells


regenerate infarcted myocardium. Nature 2001;410:701705.
54. Orlic D, Kajstura J, Chimenti S et al.: Mobilized bone marrow cells repair the infarcted heart, improving function and
survival. Proc Natl Acad Sci U S A 2001;98:1034410349.
55. Osawa M, Hanada K, Hamada H et al.: Longterm lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34low/negative hematopoietic stem cell. Science 1996;273:242245.
56. Panigrahy D, Singer S, Shen LQ et al.: PPARgamma
ligands inhibit primary tumor growth and metastasis by
inhibiting angiogenesis. J Clin Invest 2002;110(7):923932.
57. Papaioannou VE, McBurney MW, Gardner RL, Evans
MJ: Fate of teratocarcinoma cells injected into early mouse
embryos. Nature 1975;258:7073.
58. Park IK, Qian D, Kiel M et al.: Bmi1 is required for maintenance of adult selfrenewing haematopoietic stem cells.
Nature 2003;423:302305.
59. Pedraza CJ, Yam CP, Chirino YI, Snchez GDJ,
Martnez MCM et al.: Protective effects of garlic powder
against potassium dichromateinduced oxidative stress and
nephrotoxicity. Food Chem Toxicol 2008;46 (2):619627.
60. Peterson BE, Bowen WC, Patrene KD, Mars WM, Sullivan AK et al.: Bone marrow as a potential source of hepatic
oval cells. Science 1999;284:11681170.
61. Ploemacher RE, van der Loo JCM,van Beurden CAJ et
al.: Wheat germ agglutinin affinity of murine hemopoietic
stem cell subpopulations is an inverse function of their long
term repopulating ability in vitro and in vivo. Leukemia
1993;7:120130.
62. Ploemacher RE, van der Sluijs JP,van Beurden CAJ et
al.: Use of limitingdilution type longterm marrow cultures
in frequency analysis of marrowrepopulating and spleen colonyforming hematopoietic stem cells in the mouse. Blood
1991;10:25272533.
63. Ploemacher RE, van der Sluijs JP, Voerman JSA et al.: An
in vitro limitingdilution assay of longterm repopulating
hematopoietic stem cells in the mouse. Blood 1989;74:
27552763.
64. Ploemacher RE, van Os R, van Beurden CAJ et al.: Murine hematopoietic stem cells with longterm engraftment and
marrow repopulating ability are less radiosensitive to gamma
radiation than are spleen colony forming cells. Int J Rad Biol
1992;61:489499.
65. Resnick JL, Bixler LS, Cheng L, Donovan PJ: Longterm
proliferation of mouse primordial germ cells in culture.
Nature 1992;359:550551.
66. Reya T, Duncan AW, Ailles L et al.: A role for Wnt signalling in selfrenewal of haematopoietic stem cells. Nature
2003;423:409414.
67. Snchez GDJ, Villanueva LGC, Sosa LCA, Orjuela HDJ,
Ortega RJA et al.: xido ntrico en el sistema nervioso central.
Neuronas nitrrgicas. Neurol Neurocir Psiquiat 2004;37:7378.
68. Snchez GDJ, Trejo BNI: Biologa celular y molecular.
Editorial Alfil, Mxico, D. F., 2006.
69. Schuldiner M, Yanuka O, Itskovitz EJ, Melton DA, Benvenisty N: Effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells. Proc
Natl Acad Sci USA 2000;97:307312.
70. Solter D, Skreb N, Damjanov I: Extrauterine growth of
mouse eggcylinders results in malignant teratoma. Nature
1970;227:503504.

36

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

71. Spangrude GJ, Heimfeld S,Weissman IL: Purification and


characterization of mouse hematopoietic stem cells. Science
1988;241:5862.
72. Sutherland HJ, Eaves CJ, Eaves AC et al.: Characterization and partial purification of human marrow cells capable
of initiating longterm hematopoiesis in vitro. Blood 1989;
74:15631570.
73. Szilvassy SJ, Lansdorp PM, Humphries RK et al.: Isolation in a single step of a highly enriched murine hematopoietic stem cell population with competitive longterm
repopulating ability. Blood 1989;74:930939.
74. Temple S: The development of neural stem cells. Nature
2001;414:112117.
75. Thibault C: La parthnogense exprimentale chez le lapin.
C R Hebd Seances Acad Sci 1947;224:297299.
76. Thomson JA, Itskovitz EJ, Shapiro SS, Waknitz MA,
Swiergiel JJ et al.: Embryonic stem cell lines derived from
human blastocysts. Science 1998;282:11451147.
77. Vassilopoulos G, Wang PR, Russell DW: Transplanted
bone marrow regenerates liver by cell fusion. Nature 2003;
422:901904.
78. Visser JW, Bauman JGet al.: Isolation of murine pluripotent hemopoietic stem cells. J Exp Med 1984;159:15761590.
79. Wakayama T, Perry AC, Zuccotti M, Johnson KR, Yanagimachi R: Fullterm development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus nuclei. Nature 1998;394:369374.
80. Wang X,Willenbring H, Akkari Y et al.: Cell fusion is the

81.
82.

83.

84.

85.

86.

87.

(Captulo 1)
principal source of bonemarrowderived hepatocytes. Nature 2003;422:897901.
Weissman IL: Stem cells. Scientific, medical, and political
issues. N Eng J Med 2002;346(20):15761579.
Wierenga PK, Brenner MK, Konings AW: Enhanced
selectivity of hyperthermic purging of human progenitor
cells using Goralatide, an inhibitor of cell cycle progression.
Bone Marrow Transplant 1998;21:7378.
Wierenga PK, Setroikromo R, Kamps G et al.: Peripheral
blood stem cells differ from bone marrow stem cells in cell
cycle status, repopulating potential, and sensitivity toward
hyperthermic purging in mice mobilized with cyclophosphamide and granulocyte colonystimulating factor. J Hematother Stem Cell Res 2002;11:523532.
Willert K, Brown JD, Danenberg E et al.: Wnt proteins are
lipidmodified and can act as stem cell growth factors. Nature 2003;423:448452.
Wolf NS, Kone A, Priestley GV et al.: In vivo and in vitro
characterization of longterm repopulating primitive hematopoietic cells isolated by sequential Hoechst 33342 rhodamine 123 FACS selection. Exp Hematol 1993;21:614622.
Xu C, Inokuma MS, Denham J, Golds K, Kundu P et al.:
Feederfree growth of undifferentiated human embryonic
stem cells. Nature Biotechnol 2001;19:971974.
Yanagimachi R: Acceleration of the acrosome reaction and
activation of guinea pigs spermatozoa by detergents and
other reagents. Biol Reprod 1975;13:519526.

Captulo

Medicina regenerativa
y biologa del desarrollo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

INTRODUCCIN

fundamentalmente en las clulas epidrmicas, de la mucosa oral y del tracto respiratorio, clulas sanguneas,
pelo, uas, tejido muscular, piel y tejido seo. Los nuevos conocimientos sobre las clulas madre han abierto
una nueva era que ofrece al hombre la posibilidad de influir teraputicamente en la regeneracin de rganos y
tejidos. Uno de los campos de la medicina que ms expectativas ha levantado en los ltimos aos es la terapia
celular con clulas madre. El aislamiento de clulas madre embrionarias humanas, la aparente e inesperada potencialidad de las clulas madre adultas y el desarrollo
de la terapia gnica nos lleva a imaginar un futuro esperanzador para una importante cantidad de enfermedades
actualmente incurables. Existe otra subpoblacin de clulas con una capacidad limitada y circunscrita de autorrenovacin, las clulas en trnsito, intermedias entre las
clulas madre verdaderas y sus derivados diferenciados.
Los rganos reproductores masculinos del ser humano se clasifican en rganos reproductores internos y externos. Los internos comprenden: testculos, epiddimos,
conductos deferentes y las glndulas sexuales anexas
(glndulas bulbouretrales, vesculas seminales y la prstata). Los genitales externos comprenden el pene y el
escroto. El saco escrotal contiene los testculos, epiddimos y conductos deferentes. Es una bolsa recubierta de
piel con una cavidad revestida de mesotelio que se contina con la cavidad peritoneal a travs del conducto inguinal. Los testculos producen las clulas sexuales o
gametos (funcin exocrina) y los espermatozoides y la
hormona sexual masculina, la testosterona (funcin
endocrina), hormona responsable de la produccin de
espermatozoides, del crecimiento y funcin de los rganos sexuales secundarios y de los caracteres masculinos. Los testculos se localizan por fuera del abdomen,

Los seres vivos mantienen cierta capacidad de regeneracin. Entre los nuevos mtodos para mejorar las caractersticas y propagacin de las plantas estn las tcnicas de regeneracin de plantas in vitro, que incluyen la
organognesis y la embriognesis somtica, que da la
posibilidad de formar las llamadas semillas artificiales. En el campo de la zoologa tambin se ha observado la capacidad regenerativa de algunos animales, entre
ellos las planarias, las hidras, las estrellas de mar y los
crustceos. Muchos vertebrados han perdido, al menos
de manera significativa, la potencialidad regenerativa
de la mayor parte de sus tejidos y rganos. Sin embargo,
algunos han retenido una notable capacidad regenerativa, entre ellos los peces telesteos, los urodelos (salamandras y tritones) y otros tipos de anfibios.
Los quelonios, cocodrilos y serpientes han perdido
en general la capacidad de regenerar partes perdidas.
Los lagartos tienen la posibilidad de regenerar la cola.
Las guilas rejuvenecen cada 7 aos al cambiar su pico
y denudar todo su plumaje, que se regenera por completo; para ello construyen nidos sobre rocas o grandes alturas mientras pasa el tiempo que dura este proceso regenerativo y de antienvejecimiento. Los mamferos
tienen tambin limitaciones, ya que no pueden regenerar extremidades, rganos y tejidos de la misma forma
que lo hacen algunos animales inferiores. Sin embargo,
hay excepciones, entre ellas los ciervos, el delfn y algunos tipos de ratones, como los de la lnea MRL. El ser
humano expresa slo algunos procesos regenerativos fisiolgicos o ante algunas lesiones, que se manifiestan
37

38

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

en conjunto pesan unos 40 g y estn rodeados de una


cpsula de tejido conectivo, la tnica albugnea, recubierta en su parte externa por una capa de mesotelio que
se extiende hacia el interior del mediastino testicular
que diverge en tabiques radiales: los tabiques testiculares, que a su vez dividen el tejido glandular en unos 250
lobulillos testiculares de forma piramidal. Cada lobulillo contiene varios tbulos seminferos contorneados
(250 mm de dimetro y 50 cm de largo) y son la parte
productora de espermatozoides del testculo. El intersticio que rodea los tbulos seminferos contiene clulas
epitelioides, clulas intersticiales o de Leydig con funcin endocrina. Estn revestidos por un epitelio estratificado especializado productor de espermatozoides que
contiene clulas de sostn o de Sertoli. stas son cilndricas y se extienden desde la membrana basal hasta la
superficie luminal del epitelio: las clulas espermatognicas incluyen espermatogonias, espermatocitos primarios, espermatocitos secundarios, espermtides y espermatozoides. Los tbulos seminferos se continan cerca
del mediastino testicular en los tbulos rectos, que a su
vez forman un sistema laberntico de canales en el mediastino: la rete testis. Los tbulos seminferos estn
rodeados por una membrana basal y por tres o cuatro capas de clulas mioides. Por dentro de la membrana basal
estn revestidos por el epitelio productor de espermatozoides o seminfero que contiene dos tipos principales
de clulas: las de sostn y las espermatognicas, que se
dividen en cinco tipos: espermatogonias, espermatocitos primarios, espermatocitos secundarios, espermtides y espermatozoides. Las clulas de Sertoli junto con
las espermatogonias son las nicas que estn en contacto con la membrana basal. Son cilndricas, con numerosas prolongaciones laterales delgadas en forma de rbol
de Navidad y fagocitan el citoplasma excedente liberado por los espermatozoides al terminar la diferenciacin. Durante la proliferacin y diferenciacin de las
clulas espermatognicas se desplazan a lo largo de las
caras laterales de las clulas de Sertoli, hacia la superficie libre del epitelio. Las prolongaciones laterales estn
unidas mediante contactos oclusivos que forman la base
estructural de la barrera hematotesticular. Las clulas
de Sertoli tienen capacidad de producir estrgenos y
adems tienen la funcin de sostener mecnicamente y
proteger las clulas espermatognicas y de nutrirlas.
Tambin sintetizan la protena ligadora de andrgenos
(ABP) que fija la testosterona. Producen inhibina, que
frena la sntesis de la hormona foliculoestimulante
(FSH). Adems se encargan de la sntesis del factor de
regresin de Mller durante la vida fetal e intervienen
en la liberacin de los espermatozoides maduros. Las
clulas de Sertoli son estimuladas por la FSH y por la

(Captulo 2)

testosterona secretada por las clulas de Leydig en el intersticio. En el tejido intersticial ubicado entre los tbulos seminferos estn las clulas intersticiales o clulas
de Leydig, que representan la parte endocrina del testculo ya que sintetizan y secretan la hormona masculina
testosterona. Las clulas de Leydig se encuentran en
grupos pequeos muy irrigados por capilares; son activas en la diferenciacin inicial del feto masculino y
luego sufren un periodo de inactividad que comienza a
los 5 meses de vida fetal. La hormona luteinizante (LH)
estimula el desarrollo de las clulas de Leydig, su produccin y secrecin de testosterona al lquido intersticial, muy abundante en los testculos. En los testculos
de ratones adultos existen clulas madre multipotentes
capaces de originar todos los tipos celulares del organismo.
Los rganos sexuales femeninos se dividen en externos e internos. Los externos comprenden: monte de Venus, labios menores, labios mayores, glndulas vestibulares y cltoris. Los internos comprenden: ovarios,
trompas uterinas, tero y vagina. El tamao y la estructura microscpica de estos rganos cambian mucho con
la edad; son relativamente pequeos, permanecen en
reposo funcional hasta la pubertad en la cual tiene lugar
el crecimiento de la mama, cambios de la forma corporal, aparicin del vello pbico y axilar; estos cambios
culminan con la menarca. El primer flujo menstrual o
menarca tiene lugar a los 13 aos de edad aproximadamente; despus de ella, a lo largo de toda la vida reproductora los ovarios y el endometrio sufren cambios cclicos cada 28 das.

TESTCULOS

Las espermatogonias son el punto de partida de la espermatognesis, desde las espermatogonias ms tempranas
hasta los espermatozoides maduros. Las primeras clulas sexuales aparecen en la cuarta semana de la vida fetal
en la pared endodrmica del saco vitelino, desde donde
migran al primordio testicular. Antes de la pubertad se
encuentran en los tbulos seminferos en estado de reposo. En la pubertad comienzan a proliferar por divisiones meiticas para renovar de manera constante la poblacin de espermatogonias.
Hay dos tipos de espermatogonias:
1. Las espermatogonias A tienen el ncleo redondo
y uno o dos nucleolos localizados sobre la cara interna del nucleolema. Son clulas madre que sufren

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

mitosis. Algunas permaneces como tales y otras se


diferencian a espermatogonias B por mitosis.
2. Las espermatogonias B con ncleo redondo y un
solo nucleolo central. Despus de la ltima mitosis de las espermatogonias B, se diferencian a espermatocitos primarios.
Los espermatocitos primarios se desplazan en direccin
luminal y se encuentran en la capa celular ms cerca de
la luz. Entran en seguida en la primera divisin meitica, por lo que el nmero de 46 cromosomas de doble estructura (DNA 4n) se reduce a 23 cromosomas de doble
estructura (DNA 2n) del espermatocito secundario. La
profase de la primera divisin meitica es muy prolongada y se extiende durante unos 22 das. Los espermatocitos secundarios se forman a partir de los espermatocitos primarios, por la primera divisin meitica. Son
mucho ms pequeos que los espermatocitos primarios
y pasan rpidamente a la segunda divisin meitica, su
ncleo es redondo y contiene grumos de cromatina
gruesos. Los 23 cromosomas de doble estructura (DNA
2n) de estas clulas se reducen a 23 cromosomas de estructura sencilla (DNA 1n) en las espermtides y espermatozoides. Las espermtides aparecen despus de la
segunda divisin meitica a partir de los espermatocitos
secundarios y tienen un nmero haploide de cromosomas 23 (DNA 1n).
La espermatognesis comprende la espermacitognesis, que es el paso de espermatogonia a espermatocito
primario, y la espermiognesis o diferenciacin de una
espermtide recin formada a espermatozoide. La duracin de la espermatognesis en el hombre es de 74 das.
El espermatozoide maduro tiene 60 mm de longitud en
el humano. Su cabeza es aplanada, puntiaguda y mide
4.5 mm de largo por 3 mm de ancho por 1 mm de espesor.
El casquete acrosmico que cubre los dos tercios anteriores del ncleo contiene hialuronidasa, neurominidasa, fosfatasa cida y una proteasa similar a la tripsina llamada acrosina. Estas enzimas son necesarias para la
penetracin de la membrana pelcida del vulo. La cola
del espermatozoide est subdividida en cuello, pieza intermedia, pieza principal y pieza terminal. El cuello
contiene los centriolos y el origen de las fibras gruesas.
La pieza intermedia es de 7 mm de longitud y contiene
mitocondrias dispuestas en forma helicoidal alrededor
del complejo axonmico. La pieza principal mide unos
40 mm de longitud y la pieza terminal corresponde a los
ltimos 5 mm del flagelo, slo compuesta por el complejo axonmico. Los espermatozoides abandonan los tubos seminferos para incorporarse a:
1. La rete testis.

39

Despus, a los conductillos eferentes.


Luego pasan al epiddimo.
Se continan por el conducto deferente.
Posteriormente ingresan al conducto eyaculador.
Para continuar hacia la uretra prosttica, membranosa y peneana.
7. En la eyaculacin son depositados en las inmediaciones del canal cervical femenino para que se
produzca el proceso de fecundacin.
2.
3.
4.
5.
6.

La prstata es la glndula sexual accesoria ms grande


del hombre. Mide unos 2 x 3 x 4 cm de espesor, largo y
ancho respectivamente; pesa alrededor de 20 g. Se compone de unas 40 glndulas tubuloalveolares que se
vacan en unos 20 conductos excretores independientes;
a su vez stos desembocan en la uretra a ambos lados del
folculo seminal. Las glndulas estn incluidas en un
estroma compuesto en su mayor parte de clulas musculares lisas, separadas por hebras de tejido conectivo. El
parnquima de la prstata del adulto est dividido en
cuatro zonas anatmica y clnicamente distintas:
1. Zona perifrica: corresponde a la zona de glndulas prostticas principales y constituye 70% del tejido glandular de la prstata.
2. Zona central: contiene alrededor de 25% del tejido
glandular y es resistente tanto a los carcinomas
como a la inflamacin.
3. Zona transicional: contiene glndulas mucosas.
4. Zona periuretral: contiene glndulas mucosas y
submucosas.
La secrecin prosttica aporta de 20 a 30% del contenido seminal, un lquido lechoso muy fluido que contiene
cantidades importantes de fosfatasa cida prosttica, fibrinolisina, enzimas proteolticas, protenas, zinc, cido
ctrico y antgeno prosttico especfico. El semen contiene lquido alcalino y espermatozoides del testculo y
productos de secrecin del epiddimo, conducto deferente, prstata, vesculas seminales y glndulas bulbouretrales. El promedio del volumen del semen emitido
por eyaculacin es de 3 mL y cada mL contiene en promedio 100 millones de espermatozoides; de stos, cerca
de 20% son morfolgicamente anormales y 25 % carecen de movilidad.
En las semanas 3 a 4 del desarrollo prenatal es posible
reconocer a las clulas germinales primordiales (CGP)
o gonocitos, originadas de clulas endodrmicas de la
porcin posterior del saco vitelino, cerca de la alantoides, aunque se ha mencionado su origen ectodrmico y
su migracin posterior al endodermo del saco vitelino.
Las CGP son clulas grandes, de ncleo grande y nucleolo prominente, con reaccin positiva a fosfatasa

40

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

alcalina. Migran por movimientos ameboideos debido


a estmulos quimiotcticos a lo largo de la pared del saco
vitelino hacia las crestas urogenitales, procedentes del
mesodermo intermedio, para constituir los cordones sexuales primarios. La migracin de las CGP est regulada por gradientes de laminina y fibronectina. La fibronectina deja de expresarse en la membrana basal del
testculo adulto. Las CGP migratorias proliferan en respuesta a factores mitognicos como: factor inhibidor de
la leucemia y factor de crecimiento de los mastocitos.
El evento crucial y definitivo en la formacin del testculo a partir de una gnada bipotencial e indiferenciada
es la organizacin de los cordones sexuales (semana 6,
aproximadamente), que contienen los componentes celulares necesarios para su diferenciacin en testculo:
a. Cresta o epitelio germinal que formar las clulas
de Sertoli.
b. Mesnquima urogenital que originar las clulas
de Leydig, clulas mioides, fibroblastos, capilares
sanguneos y linfticos, y sustancia intercelular
del parnquima.
c. Clulas germinales primordiales, precursoras de
los espermatozoides.
Las CGP son clulas madre precursoras de los gametos
maduros; la fusin de stos produce un cigoto totipotente. Las clulas madre embrionarias de ratn pueden contribuir a la lnea germinal de ratones quimricos. Si se
inyectan clulas madre cultivadas de una raza de ratn
en el interior de un embrin normal (blastocisto) de otra
raza, dichas clulas madre podran dar origen a cualquier tipo de tejido del adulto. Los ratones en los que
hay tejidos procedentes de dos razas distintas se denominan quimeras, y en algunas quimeras las clulas reproductivas proceden de las clulas madre introducidas
en el blastocisto. Si se manipulan clulas madre por ingeniera gentica y se transfieren a un blastocisto, podrn obtenerse ratones quimeras en los que parte de los
tejidos estn alterados genticamente. Si las clulas
madre manipuladas contribuyen a la lnea germinal, el
rasgo gentico modificado en el ratn quimera se transmite a la descendencia, constituyndose entonces una
lnea de ratones transgnicos. Los ratones transgnicos,
incluidos los denominados K.O. (genticamente anulados, es decir, con un gen mutante introducido por recombinacin homloga), son actualmente una herramienta valiosa en biologa y en el diseo de modelos de
enfermedades humanas.
Para el final de la diferenciacin testicular aumenta
el nmero de CGP. Entre 1 000 y 2 000 CGP colonizan
las crestas genitales, en donde pierden su capacidad

(Captulo 2)

migratoria y se multiplican por mitosis hasta alcanzar


varios millones. Estas clulas se asocian con elementos
celulares originados por crecimiento del epitelio celmico para formar los cordones sexuales primarios. Al
trmino del segundo mes, los cordones penetran en el
mesnquima subyacente, se agrupan en la rete testis y
pierden contacto con el epitelio superficial. Durante la
vida fetal los cordones testiculares primitivos estn conformados por CGP dispersas separadas de la membrana
basal, en proliferacin entre las clulas de soporte precursoras de las clulas de Sertoli. Los gonocitos proliferan en la cresta genital durante la fase de migracin temprana; una vez que se rodean por clulas de Sertoli cesa
su divisin y permanecen quiescentes hasta la mitad del
periodo fetal. Las clulas de Sertoli de los cordones seminferos son ms numerosas y pequeas; adems, las
clulas de Sertoli fetales son insensibles a los andrgenos y no maduran. Entre las semanas 8 y 12 aparecen las
clulas intersticiales o de Leydig. Bajo la influencia de
la hormona gonadotropina corinica (HGC) y la hormona luteinizante (LH), las clulas de Leydig sintetizan
testosterona y androstenediona, responsables de la virilizacin. Despus de las semanas 17 a 18 las clulas de
Leydig experimentan una involucin gradual y slo reaparecen en la pubertad, cuando estimulan la espermatognesis. Ciertas protenas, como la hormona inhibidora
de los conductos de Mller y la inhibina, producidas por
la clula de Sertoli, inhiben la meiosis espermtica en
el feto.
La diferenciacin sexual se determina en el momento
de la fecundacin, ya que un cigoto XY est destinado
a ser varn. En el cromosoma Y se localiza un gen determinante del sexo masculino y se denomina factor de
diferenciacin testicular (TDF) o gen Sry (regin sexual del cromosoma Y), localizado en una pequea porcin del brazo corto, cercana al centrmero del cromosoma Y (Yp11.3). Este gen codifica una protena
nohistona de 223 aminocidos perteneciente a la familia de protenas que contienen una regin fijadora de
DNA muy conservada de 59 aminocidos llamada high
mobility group box. En 1993 se demostr que la protena
codificada por el Sry reconoce de manera especfica los
promotores de los genes de la hormona inhibidora de los
conductos de Mller y de la aromatasa, lo que confirma
que regula genes blanco de la cascada de diferenciacin
testicular normal. El desarrollo del testculo a partir de la
cresta genital est dirigido por el Sry y su expresin
induce a la gnada indiferenciada hacia la organognesis testicular.
Con el envejecimiento masculino los conductos seminferos involucionan gradualmente, de tal suerte que
entre los 50 y los 80 aos de edad la produccin de es-

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


permatozoides se reduce 30%. En el periodo senil, muchos de los conductos presentan atrofia extensa, con clulas de Sertoli pero ausencia de espermatogonias. Las
espermatogonias tipo A son las ms sensibles a la edad
avanzada y decrecen aproximadamente 65% entre la
tercera y la octava dcada de la vida. Las clulas de Leydig se reducen a la mitad hacia los 60 aos de edad. De
forma sorprendente y alentadora, la regeneracin que
ofrece la terapia celular con clulas madre a los varones
de edad avanzada es tan contundente que se ha observado recuperacin fisiolgica de la capacidad sexual y
reproductiva.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

OVARIOS

Los ovarios miden de 2.5 a 5 cm de largo, de 1.5 a 3 cm


de ancho y de 0.6 a 1.5 cm de grueso; uno de sus bordes,
el hilio, est unido por el mesovario al ligamento ancho.
Estn recubiertos por el mesotelio peritoneal. Tienen la
funcin de producir gametos y de sintetizar hormonas
esteroideas como los estrgenos, que se encargan del
crecimiento y la maduracin de los rganos reproductores, as como de la acumulacin de tejido graso, y los progestgenos, que preparan al tero para el embarazo y a
las glndulas mamarias para la lactancia. Durante el ciclo
menstrual son de color rojo grisceo con surcos o cicatrices posteriores a rupturas de folculos. El ovario tiene
una corteza que rodea a la mdula. En el tejido conectivo
de la corteza estn incluidos los folculos que contienen
a las clulas sexuales o gametos, los ovocitos. Cuando un
folculo alcanza la madurez se rompe para dejar libre al
ovocito. La mdula est formada por tejido conectivo
laxo y por una masa de vasos sanguneos tortuosos, vas
linfticas y nerviosas. El ovario est recubierto por una
lmina continua de epitelio plano cuboideo, el epitelio
germinal, y por debajo del epitelio germinal hay una capa
de tejido conectivo denso, la tnica albugnea. Los folculos estn incluidos en el estroma de la corteza por
debajo de la tnica albugnea, contienen un nico ovocito y la capa de tejido circundante. De acuerdo con su
estado de madurez se clasifican en:
1. Folculos primordiales (35 mm): compuestos de
un nico ovocito y una capa de clulas foliculares
aplanadas, presentan en su citoplasma abundantes
mitocondrias y gotas de lpidos.
2. Folculos primarios (100 mm): crecen independientemente de las gonadotropinas y contienen al

41

ovocito y una capa de clulas foliculares. Estos folculos estn inmediatamente por debajo de la tnica albugnea. A medida que el ovocito se agranda, las clulas foliculares se hacen cbicas o
cilndricas bajas, y por divisiones mitticas dan
origen a un epitelio estratificado de clulas de la
granulosa. Entre el ovocito y las clulas granulosas de su alrededor se desarrolla un espacio donde
se acumula un material amorfo que envuelve a las
microvellosidades y se condensa poco a poco para
formar la zona pelcida, una capa glicoproteica.
La zona pelcida se considera producto de las clulas de la granulosa. Las clulas del estroma circundante se distribuyen en una capa concntrica
que forma la teca folicular.
3. Folculos secundarios (200 mm): se componen
del ovocito, la zona pelcida y las clulas de la granulosa circundantes, las cuales conforman el cmulo oforo. La teca se divide en teca interna
(muy vascularizada) y externa. Las clulas epitelioides contienen en su citoplasma gotas de lpido
necesarias para la sntesis de hormonas esteroides
(estrgenos) en el retculo endoplasmtico liso. El
folculo empieza a presentar una cavidad semilunar llena de lquido claro y viscoso, la cual forma
el antro folicular. Este lquido es rico en cido hialurnico, pero adems contiene un pptido pequeo llamado inhibidor de la maduracin ovoctica
que las clulas de la granulosa secretan hacia el
lquido antral y que en la fase dictioteno detiene al
ovocito.
4. Folculo terciario o maduro (de de Graaf) (15 a
20 mm): el ovocito junto con su zona pelcida y
la corona radiada se van liberando de su insercin
en el cmulo oforo en preparacin para la ovulacin. La teca del folculo alcanza su desarrollo
mximo en el folculo maduro. Las clulas de la
teca interna son las principales responsables de
elaborar los precursores esteroides de las hormonas sexuales femeninas, los estrgenos. La funcin endocrina de la teca interna est en concordancia con su rico plexo capilar. La teca externa no
parece tener ninguna funcin secretora.
En un principio el crecimiento de los folculos es independiente de FSH y LH. Durante el crecimiento de los
folculos tiene lugar el proceso de maduracin dependiente de gonadotropinas. Algunas clulas de la granulosa poseen receptores para FSH y de la teca interna poseen receptores para LH; al activarse interrumpen su
divisin y se diferencian en clulas productoras de hormonas esteroides. Las clulas de la teca interna son esti-

42

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

muladas por LH, para la sntesis del andrgeno androstenediona a partir de colesterol. El proceso de maduracin
del ovario se inicia en el embrin e incluye dos etapas
de diferenciacin: la de gnada bipotencial y la sexual
de clulas germinales. La diferenciacin de la gnada
bipotencial se refiere a la de los elementos somticos y
se manifiesta en el desarrollo de las clulas foliculares.
A diferencia del varn, los fenmenos finales de la maduracin de las clulas germinales slo se producen a
partir de la pubertad y hasta la menopausia. An no se
comprende la regulacin del inicio del dimorfismo
sexual, aunque se sugiere que en la mujer est predeterminada de manera autnoma. Las influencias hormonales del eje hipotlamohipfisisovario se manifiestan
por primera vez en la pubertad. Las hormonas foliculoestimulante (FSH) y luteinizante (LH) aparecen a los
dos meses de gestacin, antes de que la diferenciacin
celular hipofisaria concluya. El ovario est constituido
por clulas somticas y germinales. Las clulas somticas se generan a partir del mesodermo intermedio o urogenital. Las crestas genitales de la pared dorsal del
embrin producen una sustancia quimiotctica, el telofern, que atrae a las clulas sexuales primitivas. La formacin de las crestas genitales requiere la funcin de los
genes: WT1 y SF1 (factor esteroidognico1). Las
clulas del epitelio gonadal se multiplican y forman los
cordones sexuales primarios que se proyectan hacia la
regin medular de la gnada en desarrollo. Las CGP
proceden de la pared caudal del saco vitelino y alantoides, migran hacia la cresta gonadal con movimientos
ameboides a razn de 50 mm/h. Son atradas hacia las
crestas gonadales por factores desconocidos entre los
cuales se han identificado el factor de crecimiento fibroblstico (FGF) y el factor de crecimiento transformante
beta uno (TGFb1). Estas clulas inducen la diferenciacin, desarrollo y organizacin del ovario, y pierden sus
caractersticas migratorias al llegar a la cresta gonadal.
Entre las semanas 7 y 8, las ovogonias de las primeras
generaciones alcanzan la regin medular y se rodean de
clulas procedentes del epitelio celmico en el interior
de los cordones sexuales primarios. Las generaciones
subsecuentes de ovogonias permanecen en la regin
cortical en el interior de los cordones sexuales secundarios, donde se multiplican activamente, pierden la organizacin cordonal y se agrupan en nidos de ovogonias.
Los periodos de crecimiento y maduracin del ovocito
se dividen en tres fases: fetal, prenatal y posnatal, cada
una constituida por lapsos de actividad y quiescencia. El
periodo de multiplicacin slo tiene lugar en la etapa
prenatal. En la etapa fetal inmediata o temprana (segundo a quinto mes) las ovogonias se reproducen por mitosis (periodo de multiplicacin), lo que provoca que su

(Captulo 2)

poblacin aumente de unos cuantos miles a 7 millones;


muchas de estas clulas degeneran y se atrofian. Hacia
el quinto mes, las ovogonias inician su periodo de crecimiento, en el que los ovocitos primarios alcanzan un
dimetro aproximado de 25 mm y se rodean de clulas
planas del epitelio celmico denominadas clulas foliculares o granulosas; la combinacin de los dos tipos
de clulas constituye el folculo primordial. Las clulas
germinales inician el periodo de maduracin en grupos
debido a la presencia de puentes citoplsmicos que las
conectan entre s y les confieren una organizacin sincicial. La formacin de folculos unilaminares y su organizacin final se produce por desaparicin de los puentes intercelulares al final de la profase de la meiosis I;
cada ovocito se rodea de clulas foliculares; los componentes celulares y extracelulares del estroma ovrico
crecen alrededor de los ovocitos, circundan y aslan los
folculos primarios que les confieren forma esferoidal.
En el ser humano, las ovogonias continan proliferando hasta el tercer mes de desarrollo fetal. Despus se
inicia la replicacin de DNA y la ovogonia entra en
meiosis (ovocitos primarios, con DNA 4n). Entre el tercero y el sptimo mes de gestacin se encuentran ovogonias en proliferacin junto con ovocitos primarios en
el ovario fetal. Durante este periodo de desarrollo los
ovocitos estn en diferentes fases de la profase meitica
(leptoteno, cigoteno y paquiteno temprano). Despus
del sptimo mes un pequeo grupo de ovocitos alcanza
el paquiteno tardo y el diploteno temprano. La meiosis
no contina y los ovocitos son bloqueados en diploteno
tardo, y simultneamente algunos involucionan. Los
cambios meiticos se producen slo en el ncleo; la organizacin del citoplasma permanece inalterada. Existen algunas evidencias que sugieren que la red embrionaria a nivel mesonfrico secreta posiblemente un
factor difusible que desencadena el proceso de meiosis
y acta sobre las clulas germinales femeninas. El primer bloqueo meitico se debe al efecto obstructivo del
epitelio folicular que circunda los ovocitos durante las
etapas tardas del periodo fetal; provoca que el periodo
de maduracin del ovocito se extienda slo hasta la
etapa de diploteno o dictioteno de profase I. Al final de
la proliferacin mittica, la ovogonia entra en profase
de meiosis I y simultneamente algunas involucionan.
En el feto femenino la meiosis se inicia en el cuarto mes.
Al nacimiento existen en ambos ovarios 700 000 folculos, de los cuales persisten 40 000 en la pubertad. Durante las primeras etapas de la embriognesis, hasta el
estadio de mrula, ambos cromosomas X son eucromticos y activos. La inactivacin de un cromosoma X
sucede en forma heterognea y se inicia a partir de una
regin cromosmica especfica denominada centro de

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

inactivacin (XIC) (banda Xq13), sin la cual el embrin


muere. El locus XIST que transcribe el alelo localizado
en el cromosoma X inactivo codifica para un RNA que
se retiene en el ncleo y rodea al cromosoma X inactivo.
La inactivacin se observa primero en trofoblasto, despus en epiblasto y finalmente en la masa celular interna. Inicialmente este proceso no se produce al azar, ocurre de preferencia en el X de origen paterno en las etapas
de blastocisto temprano. La inactivacin en clulas que
originan el embrin ocurre ms tarde (blastocisto tardo); en stas el bloqueo es aleatorio y se establece un
patrn permanente en clulas somticas, es decir, una
vez inactivado el X materno o paterno en una clula,
este mismo cromosoma se inactivar en las clulas descendientes. Sin embargo, en el cromosoma X inactivo,
el extremo distal del brazo corto (Xp22) permanece
activo y es esencial para un desarrollo fenotpico normal; adems existen genes que escapan a la inactivacin
y estn situados a lo largo del cromosoma X, aunque la
mayora se localizan en regiones seudoautosmicas y
en Xp11.
Esta distribucin indica que la inactivacin es un fenmeno regional, donde bloques enteros de genes estn
regulados de manera coordinada. Varios de estos genes
tienen un homlogo funcional en el cromosoma Y. Posiblemente la falta de inactivacin en mujeres asegura la
expresin gnica similar en varones y mujeres; a este
grupo pertenecen los genes localizados en la regin seudoautosmica Xp (PAR1). Para la maduracin ovrica
definitiva es necesaria la presencia de dos cromosomas
X normales. Esto se evidencia en los casos de sndrome
de Turner (45XO) y en las disgenesias gonadales puras
(46XX), en los cuales los folculos primordiales se identifican en la infancia temprana, aunque disminuyen
rpidamente hasta agotarse. El tejido germinal es sustituido gradualmente por tejido conectivo en la pubertad,
originando un remanente ovrico sin folculos y sin actividad endocrina.

Ovulacin
La ovulacin es el proceso por el cual el ovocito secundario es liberado del folculo de de Graaf. Las causas de
la ovulacin son las siguientes:
1. Aumento del volumen y de la presin del lquido
folicular.
2. Protelisis enzimtica de la pared folicular por
plasmingeno activado y colagenasa.
3. Depsito de glicosaminoglicanos que van conformando la zona pelcida.

43

4. Contraccin de la teca externa provocada por las


prostaglandinas que el ovocito libera.
Antes de la ovulacin el flujo sanguneo se detiene en
la superficie ovrica; todo esto forma un montculo en
la superficie que se conoce como estigma. Por ltimo se
rompe el estigma y el lquido folicular fluye dentro de
la cavidad junto con el ovocito y la corona radiada. La
induccin de la ovulacin se debe a una importante liberacin de LH. Con la ovulacin contina la divisin y
de nuevo se detiene en la metafase de la segunda divisin meitica; slo en caso de que el espermatozoide fecunde al ovocito se contina con la divisin. El hipotlamo (ncleos supraptico y paraventricular), a travs
de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH),
controla la funcin de adenohipfisis (clulas basfilas)
para la sntesis de hormonas foliculoestimulante (FSH)
y luteinizante (LH) que actan sobre varios folculos
primordiales. Las clulas foliculares poseen receptores
para FSH y las clulas tecales, para LH; ambos tipos inician una serie de cambios citolgicos que concluyen en
la mayora de los casos con la maduracin de un solo
folculo. El crecimiento folicular hasta la formacin de
cuatro capas de clulas granulosas es independiente del
control hormonal; a partir de esta etapa, la maduracin
folicular no progresa sin la accin de FSH y LH, necesarias para asegurar la sntesis adecuada de esteroides. La
zona pelcida es una red de protenas sintetizadas y
secretadas por el ovocito para cubrirse a s mismo. En
humanos la zona pelcida est compuesta de tres tipos
de glicoprotenas (ZP1, ZP2 y ZP3). La ZP2 y la ZP3
estn involucradas en el proceso de fertilizacin. La cabeza del espermatozoide se une al oligosacrido O del
ZP3 mediante la enzima galactosiltransferasa b 14 localizada en la cabeza espermtica, y finalmente al oligosacrido N del ZP3, los cuales favorecen que el espermatozoide penetre la zona pelcida. Despus de la
penetracin del espermatozoide, la zona pelcida modifica sus protenas y se vuelve inpermeable a la penetracin espermtica.
La ovulacin constituye el trmino de la fase folicular. Las clulas del folculo roto, los fibroblastos de la
teca interna y los capilares se transforman por proliferacin, vascularizacin y acumulacin de lpidos en
cuerpo lteo, que sobrevive entre 14 " 2 das en condiciones normales, excepto en el embarazo, en el cual permanece por espacio de tres meses. Existen dos tipos de
clulas en el cuerpo amarillo: las clulas grandes de procedencia tecal, que aseguran la secrecin bsica de progesterona los primeros das, y que al poco tiempo degeneran debido a la saturacin de sus receptores a LH, y
las clulas pequeas sensibles a hormona gonadotropi-

44

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

na corinica (HCG), que aseguran la secrecin de progesterona en caso de embarazo. Este periodo se conoce
como fase lutenica y dura unos 14 das. Hacia la mitad
de esta fase, la secrecin de LH declina, el cuerpo amarillo involuciona para transformase en cuerpo blanco y
aumenta la secrecin de prostaglandinas y citocinas en
el estroma endometrial, lo que provoca cambios degenerativos en las glndulas endometriales, estroma y vasos uterinos, que progresan hasta necrosis y sangrado.
En caso de haber fecundacin el cuerpo lteo crece hasta alcanzar de 2 a 3 cm y mantiene la actividad secretora
durante el primer trimestre del embarazo (cuerpo lteo
del embarazo), antes de iniciar la transformacin en
cuerpo albicans.

tero
Se ubica en el centro de la cavidad pelviana y termina
en la vagina, es un rgano hueco de forma de pera y
gruesas paredes, pesa de 40 a 50 g y mide 8 x 5 x 2.5 cm.
Las partes que lo constituyen son:
1. Cuerpo: representa dos tercios y una parte es ms
angosta y cilndrica.
2. Fondo: comprende la porcin superior en forma
de cpula.
3. Cuello: conforma el tercio restante.
La pared se compone de tres capas:
1. El endometrio, que es la mucosa del tero.
2. El miometrio, que es la capa muscular.
3. El perimetrio, que en su mayor parte es peritoneo.
El endometrio se subdivide en un estrato basal y uno
funcional; este ltimo es el que se desprende en cada
menstruacin.
La capa basal genera una nueva capa funcional en el
siguiente ciclo. Las modificaciones histolgicas del endometrio durante el ciclo menstrual se dividen en tres
fases:
1. Fase folicular o proliferativa: ocurre el crecimiento folicular del ovario y la secrecin de estrgenos. Crece el espesor del endometrio hasta mediar 3 mm.
2. Fase lutenica o secretora: el endometrio crece
de espesor hasta mediar de 6 a 7 mm debido a la
secrecin de progesterona (y estrgenos) proveniente del cuerpo lteo. En esta etapa las glndulas
adquieren un aspecto aserrado por el edema.

(Captulo 2)

3. Fase de la menstruacin: corresponde al desprendimiento de la capa funcional del endometrio;


despus de un da de periodos definidos de isquemia se produce la destruccin de las paredes de las
arterias espiraladas y la sangre y los restos endometriales necrticos son eliminados por la vagina.
La regin del endocrvix tiene de 3 a 5 mm de espesor
y forma pliegues; el epitelio es cilndrico alto compuesto por clulas secretoras y algunas clulas ciliadas,
se transforma en cilndrico alto y produce mucina. La
secrecin es muy viscosa, pero hacia el momento de la
ovulacin el moco cervical se licua, es ms fluido y
puede ser penetrado con facilidad por los espermatozoides. La mucosa de la porcin vaginal o exocrvix es lisa
y est revestida de epitelio plano estratificado con clulas ricas en glucgeno.
En el embrin mamfero, la formacin de los linajes
extraembrionarios, el trofoectodermo y endodermo primitivo, precede a la diferenciacin de las clulas que
formarn al feto. Las clulas del endodermo primitivo
dan lugar a las capas del endodermo del saco vitelino,
mientras que las descendientes del trofoectodermo formarn la porcin del trofoblasto de la placenta. Las clulas madre embrionarias se multiplican por divisin
celular asimtrica y simtrica segn el entorno y el
momento del desarrollo en el embrin. En las clulas
pluripotentes el factor de transcripcin Oct 3/4 es un
regulador restringido a los embriones tempranos, pertenece a la familia de POU germinal, y a las clulas del
carcinoma embrionario, la clula germinal embrionaria
y las clulas madre embrionarias. La expresin in vivo
de Oct 3/4 es esencial para el desarrollo inicial de la
capacidad pluripotencial en la masa interna. Si la expresin de Oct 3/4 se elimina en las clulas madre embrionarias, la renovacin cesa y se dispara un proceso poco
ortodoxo de diferenciacin. En vez de formar los derivados embrionarios normales de la clula madre, endodermo y mesodermo, las clulas se diferencian en trofoblasto. Parece que esta restriccin de desarrollo por Oct
3/4 puede ser necesaria para la manifestacin pluripotencial. De esta manera, Oct 3/4 acta en parte como
control que evita la diferenciacin celular en trofoblasto.
La placenta es un rgano temporal que tiene por funcin la nutricin del embrin y del feto durante el embarazo; se encuentra slo en mamferos. Los tabiques placentarios dividen la placenta en 15 a 20 lobulillos o
cotiledones, y cada cotiledn tiene 2 o 3 vellosidades
con sus ramificaciones. Hacia el cuarto mes la placenta
se compone de dos partes:
1. La parte fetal incluye el corion frondoso y la placa
corinica.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


2. La parte materna incluye la decidua basal comprimida por la placa de la decidua.
La placenta madura es un discoide y tiene un dimetro
de unos 20 cm y un espesor central de alrededor de 2.5
cm. El peso promedio es de 500 g. Se observan de 15 a
20 cotiledones cubiertos por una delgada capa de decidua basal.
La decidua se forma por accin de los estrgenos y
progesterona, contiene abundante glucgeno, se elimina en el parto y se compone de tres regiones:
1. Decidua basal: capa compacta de clulas grandes
fijada a la placa corinica, que se encuentra por
debajo del sitio de implantacin y que representa
la parte materna de la placenta.
2. Decidua capsular: cubre el polo abembrionario.
3. Decidua parietal: incluye el resto de la mucosa del
cuerpo uterino.
La membrana placentaria es el tejido fetal que separa la
sangre materna de la fetal. Las vellosidades corinicas
terciarias tienen un ncleo de tejido conectivo vascularizado recubierto de trofoblasto en su parte externa,
hacia el espacio intervelloso. El trofoblasto que recubre
las vellosidades se compone de sincitiotrofoblasto y citotrofoblasto. La membrana placentaria se compone, en
consecuencia, de seis capas:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Sincitiotrofoblasto.
Citotrofoblasto.
Membrana basal subyacente.
Tejido conectivo del ncleo de la vellosidad.
Membrana basal alrededor del capilar fetal.
Endotelio del capilar.

La placenta ejerce las funciones de respiracin, nutricin, excrecin e inmunolgica para el feto. Sintetiza
colesterol, cidos grasos y glucgeno, sobre todo en las
etapas tempranas del embarazo; el intercambio de sustancias a travs de la placenta tiene lugar, casi con exclusividad, por los mismos mecanismos de la absorcin
que existe en el intestino delgado, es decir, difusin simple, difusin facilitada, transporte activo y endocitosis.
El sincitiotrofoblasto produce las hormonas placentarias, aunque la progesterona puede ser sintetizada por
el citotrofoblasto. La glucoprotena GCH en estado purificado tiene actividad biolgica indistinguible de la
accin de la LH. La somatomamotrofina corinica
humana (HCS) o lactgeno placentario humano
(HPL) tiene efecto lactgeno y estimulante sobre el crecimiento, ya que est muy relacionada con la hormona

45

de crecimiento, inhibe la insulina de la madre y aumenta


la glucosa en sangre. La progesterona es producida por
la placenta y es necesaria para mantener el embarazo;
hacia fines del cuarto mes se sintetiza en cantidades suficientes para ejercer tal efecto, momento en el cual disminuyen las funciones del cuerpo lteo de la gestacin.
Los estrgenos son producidos en cantidad creciente
durante el embarazo, para alcanzar un nivel mximo
poco antes del parto, cuando se observa una brusca cada de la produccin estrognica placentaria. Los estrgenos son muy importantes para la regulacin endocrina de la implantacin, modifican las mamas en el
embarazo y su disminucin brusca en el parto induce un
fuerte aumento en la secrecin de prolactina.

GLNDULAS MAMARIAS

La glndula mamaria (del griego mastos y del latn


mamma) es un cuerpo glandular tubuloacinar compuesto, ubicado entre abundante grasa y tejido conectivo,
que se origina a partir de la sexta semana de vida embrionaria. En la mujer, la glndula mamaria alcanza su
completo desarrollo en la pubertad y en relacin con el
embarazo. Se extienden en sentido vertical de la segunda a la sexta costilla y en sentido horizontal de la lnea
paraesternal a la lnea axilar media, con una prolongacin en la parte superoexterna, llamada cola, que llega a la axila a travs de un agujero de la fascia axilar
conocido como foramen de Langer. En el hombre permanece atrfica durante toda la vida.
Las glndulas mamarias son glndulas sudorparas
apocrinas modificadas, de situacin subcutnea, que estn colocadas en la regin anterior del trax a ambos lados del esternn; en la vida intrauterina se forman de las
lneas mamarias desde la axila hasta la regin inguinal.
Hacia la mitad de la vida fetal se forman 20 botones
secundarios y antes del nacimiento se ramifican un par
de veces. Cada uno representa el primordio de un lbulo
mamario de tejido conectivo laxo, que rodea un conducto y sus ramificaciones. Al nacer, las mamas son de
mayor tamao que en la primera infancia y la secrecin
papilar recibe la denominacin de leche de brujas; esto
se debe a estrgenos producidos por la placenta. Los
verdaderos alveolos secretores se desarrollan hasta el
embarazo.
Los lbulos estn separados de manera incompleta
por tejido conectivo interlobular denso y grasa; cada
lbulo contiene una glndula independiente con un conducto galactforo con desembocadura propia en la papi-

46

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

la. El conducto galactforo est revestido de epitelio de


dos capas con clulas basales cbicas y superficiales
cilndricas. En la desembocadura el epitelio se transforma en escamoso, a nivel de la areola el conducto se ensancha y forma el seno lactfero que sirve como reservorio de leche; la abertura sobre la papila mide 0.5 mm
de dimetro y se distingue a simple vista.
Entre los espacios de las porciones parenquimatosas
hay tejido graso, que confiere su redondez al rgano.
Las ramas de los conductos galactforos forman conductos interlobulares revestidos de epitelio cilndrico
simple; este epitelio se transforma en cbico en los conductos excretores intralobulares ms pequeos. Entre el
epitelio y la membrana basal se encuentran las clulas
mioepiteliales (corresponden a las clulas mioepiteliales de las glndulas sudorparas y salivales); las ramificaciones dicotmicas del conducto galactforo estn
rodeadas de tejido conectivo laxo muy celular sin grasa.
Cada lbulo se compone de numerosos lobulillos que
reciben un nico conducto terminal, el cual se ramifica
en forma irregular en conductillos intralobulares. El
conducto terminal con el lobulillo correspondiente representa la unidad funcional de la mama o unidad ductolobulillar terminal (unidad lobulillar ductal), que
mide menos de 1 mm en la mama en reposo y est revestido de dos tipos de clulas: la epitelial dispuesta hacia
la luz y las clulas mioepiteliales.
Durante la gestacin ocurre una serie de alteraciones
hormonales significativas. El cuerpo lteo y la placenta
producen grandes cantidades de estrgenos y progesterona. La secrecin de lactgeno placentario humano y
la somatotropina corinica humana secretadas por la
placenta, asociadas a grandes cantidades de estrgenos
y progesterona, producen aumento e induccin de la actividad secretora de la mama. El efecto ms significativo se observa en los lbulos, el nmero de acinos se aumenta y conforme avanza el embarazo se acumula
material secretor y gotas de grasa en las clulas epiteliales, las clulas mioepiteliales se atenan y el estroma
interlobulillar se reduce por la expansin del lbulo. En
la segunda mitad del embarazo, los alveolos se ensanchan y adquieren luz; contienen una secrecin eosinfila rica en protenas: el calostro.
En el ciclo secretor las luces alveolares se llenan de
leche; el mecanismo de secrecin es distinto para las
protenas y las grasas. Las protenas de la leche y la IgA
se sintetizan en el RER y se empaquetan en el aparato
de Golgi en vesculas redondas, que se liberan del pice
de la clula por exocitosis, es decir, por secrecin merocrina. La grasa de la leche es sintetizada en el REL y
aparece como pequeas gotas de lpido cerca de esa estructura. Las gotas migran hacia la zona apical y se fu-

(Captulo 2)

sionan para formar gotas ms grandes; vacuolas lipdicas visibles con el microscopio ptico son secretadas
por secrecin apocrina. El inicio de la secrecin de
leche se debe a la secrecin de prolactina por la pars distalis hipofisaria.
El brusco aumento en la secrecin de la leche despus del parto se debe al descenso de la concentracin
plasmtica de estrgenos (que contrarrestan los efectos
de la prolactina). El mantenimiento de la secrecin de
leche depende de la continua accin de prolactina sobre las clulas glandulares. La prolactina es secretada en
mayor cantidad durante la lactancia porque la estimulacin sensitiva del pezn por la succin del lactante desencadena una gran secrecin de esta hormona. El vaciamiento de la leche de los alveolos ocurre por el reflejo
de bajada de la leche o de eyeccin lctea por la oxitocina liberada por la neurohipfisis; esta hormona induce la contraccin de las clulas mioepiteliales. Entre
las succiones se acumula leche en los alveolos y en los
conductos excretores. La prolactina inhibe la ovulacin
al mantener niveles muy bajos de estrgenos y progesterona, ya que inhibe la secrecin de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH). Cuando finaliza la
lactancia, la produccin de leche termina muy pronto,
dado que se interrumpe la estimulacin de la secrecin
de prolactina por reflejo neurohormonal. Las clulas
epiteliales degeneran y muestran intensa actividad autofagoctica. Los macrfagos del tejido conectivo circundante fagocitan estas clulas degeneradas y paulatinamente disminuye el tejido glandular, hasta quedar
reducido a unos escasos conductillos en cada lobulillo.
Sin embargo, despus del embarazo la glndula siempre
queda ms desarrollada. Las mamas reciben la influencia de las modificaciones de los niveles hormonales
ovricos durante cada ciclo menstrual. Las modificaciones hormonales en la menopausia causan la regresin o
involucin de los componentes glandulares de la mama
y su reemplazo por tejido adiposo y tejido conectivo. La
involucin comienza en la periferia, con atrofia y degradacin de los tejidos glandulares, e incorpora porciones
cada vez ms centrales del parnquima. En la edad avanzada el tejido adiposo desaparece por completo.

Embriognesis
Es durante el periodo embrionario y el desarrollo fetal
cuando el ndice de la produccin de nuevas clulas aumenta en cantidad en comparacin con el tamao de
ellas y del organismo. El cigoto formado tras la fecundacin de un vulo por un espermatozoide es una clula
capaz de generar un nuevo individuo completo. Se trata,

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

pues, de una clula totipotente capaz de producir un espcimen completo con todos sus tejidos. En la fertilizacin se fusionan el ovocito y el espermatozoide. Durante esta etapa se llevan a cabo varios procesos:

a. Penetracin de la corona radiada por los espermatozoides (capa ms externa del complejo ovular)
mediante la accin de enzimas (hialuronidasa,
proteinasa cida, acrosina, arilaminidasa, arilsulfatasa, colagenasa, esterasa, fosfolipasa, galactosidasa, glucuronidasa, neuraminidasa, proacrosina, etc.) y los movimientos flagelares activos de
los espermatozoides.
b. Anclaje a la zona pelcida y su penetracin mediante la participacin de las glucoprotenas ZP1,
ZP2 y ZP3. ZP2 y ZP3 polimerizan en filamentos
largos y se unen a intervalos mediante puentes cruzados de ZP1. Los espermatozoides se unen
mediante la membrana plasmtica de sus cabezas
a las molculas ZP3 (O ligandos oligosacridos). Este fenmeno inicia la reaccin acrosmica
y la liberacin de enzimas participantes.
c. Reaccin acrosmica, paso masivo de Ca++ a travs de la membrana plasmtica de la cabeza del espermatozoide, entrada de Na+ y salida de H+, elevacin del pH intracelular. En el momento de
hacer contacto los gametos, el espermatozoide se
une por la regin ecuatorial de la cabeza. Las molculas de la membrana plasmtica del espermatozoide se ligan a integrina alfa 6 beta 1 de la superficie del vulo. Las membranas plasmticas de
ambas clulas establecen continuidad, la cabeza y
la pieza intermedia del espermatozoide se introducen en el vulo. Una vez que ha entrado el espermatozoide, el citoplasma inicia la reaccin cortical, que consiste en cambios bioqumicos y
estructurales en membrana celular, citoplasma y
ncleo del ovocito.
d. Bloqueo rpido de la polispermia. Despolarizacin
elctrica de la membrana plasmtica del vulo.
e. Bloqueo lento de la polispermia. Propagacin de
una oleada de Ca++ a partir del sitio de unin del
espermatozoide. Entre los cambios citoplsmicos
est el aumento de densidad en la periferia del
ovocito debido a exocitosis de grnulos citoplsmicos (enzimas hidrolticas y polisacridos) hacia
el espacio perivitelino. Esta sustancia no es degradada por las enzimas acrosmicas del espermatozoide, impide la polispermia y constituye la membrana de fertilizacin. Los productos secretorios
de los grnulos corticales se han asociado con la

47

hidrlisis de las molculas ZP3. Otras reacciones


del ovocito que participan en la fertilizacin son:
secrecin de aglutininas, que fijan los espermatozoides que no participaron en la fecundacin. Finalmente, el proncleo masculino se descondensa, el ovocito termina la meiosis II y libera el
segundo cuerpo polar; los proncleos se fusionan
(singamia) y se restablece el nmero diploide de
cromosomas. Los centrolos introducidos por el
espermatozoide divergirn hacia los polos de la
clula y se iniciar la segmentacin; la cola, las
mitocondrias y dems componentes del espermatozoide sern absorbidos y eliminados por el ovocito. El DNA mitocondrial proviene exclusivamente del ovocito. Aumenta bruscamente el
metabolismo y se inicia la fase de segmentacin.
En esta segmentacin se observa la divisin mittica sucesiva del cigoto sin crecimiento celular
durante la interfase. A causa de represin proteica,
las clulas resultantes son menores que la clula
materna y el embrin en conjunto no supera el
tamao de la clula inicial (cigoto). La segmentacin contina hasta que se restablece la correlacin del ncleo y el citoplasma caracterstica de la
especie. Despus se reactiva la sntesis de protenas. Entre los das primero y cuarto del desarrollo embrionario, la clula original va dividindose
en varias clulas ms. Durante las primeras divisiones el embrin es una esfera compacta (mrula).
Cada una de estas clulas se separa del resto y es
capaz de producir un individuo completo; por ello,
son tambin clulas totipotentes. La primera divisin en el humano se realiza al cabo de 24 a 30 h.
El destino prospectivo de las clulas no est totalmente determinado. La blastulacin se presenta a
partir de las primeras divisiones donde se forman
dos tipos de blastmeras: oscuras y claras. Las claras se segmentan con mayor rapidez para situarse
alrededor de las oscuras. Las clulas claras originan el trofoblasto; las oscuras, el embrioblasto y
dems rganos extraembrionarios.
A partir del cuarto da comienza una primera especializacin: en el desarrollo embrionario humano se produce
un blastocisto. El blastocisto est formando por dos tipos de clulas y una gran cavidad interior:
S Capa externa: forma la placenta y las envolturas
embrionarias con una capa superficial que dar
origen al trofoblasto.
S Masa celular interna: formar todos los tejidos
del cuerpo humano. Se denomina embrioblasto.

48

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Las clulas madre de un blastocisto ya no son totipotentes, puesto que una sola de estas clulas ya no es capaz
de generar un individuo completo. Las clulas de la
masa celular interna del blastocisto son pluripotentes
(del latn plures, que significa muchos o varios). Sin
embargo, aunque las clulas de la masa celular interna
del blastocisto son clulas multipotentes, no son en s
mismas clulas madre dentro del embrin, porque no se
mantienen indefinidamente como tales in vivo, sino que
se diferencian sucesivamente en los diversos tipos celulares durante la fase intrauterina. Lo que ocurre es que
cuando se extraen del embrin y se cultivan in vitro bajo
ciertas condiciones, se convierten en clulas inmortales dotadas de esas dos propiedades, la autorrenovacin y la pluripotencia. Es importante destacar que para
que una clula madre pueda considerarse como pluripotente tiene que cumplir las siguientes condiciones:
1. Una nica clula debe ser capaz de diferenciarse
de progenitores especializados procedentes de
cualquier capa embrionaria.
2. Demostrar la funcionalidad in vitro e in vivo de las
clulas en las que se ha diferenciado. In vivo la
multipotencia se manifiesta cuando al incorporar
clulas madre en blastocistos, stas pueden formar
cualquier tejido u rgano. In vitro pueden contribuir con las seales adecuadas a diferentes lneas
celulares de las tres capas germinales embrionarias: mesodermo, endodermo y ectodermo. ste es
el campo donde ms se est investigando actualmente, por su relevancia para la clonacin teraputica.
3. Que se produzca un asentamiento claro y persistente de stas en el tejido blanco, tanto en presencia como en ausencia de dao en los tejidos en los
cuales se transplanta.
En esta etapa se forma un macizo celular correspondiente al polo embrionario (embrioblasto) y una cavidad originada por la coalescencia de pequeos espacios
llenos de lquido desde la etapa de mrula tarda (blastocele), adems del adelgazamiento y diferenciacin inicial del polo embrionario en una capa unicelular (trofoblasto). En la gastrulacin el embrin se divide en dos
reas: opaca (perifrica) y pelcida (central). La primera se divide a su vez en un rea vasculosa (interna),
que contiene islotes sanguneos en desarrollo, y un rea
vitelina (externa).
En el rea pelcida se observa una banda oscura, el
cuerpo del embrin en desarrollo, que no ha presentado
plegamientos y est en etapa de disco plano o disco bilaminar.

(Captulo 2)

Las clulas madre embrionarias pueden ser obtenidas a partir de las primeras etapas de formacin del embrin cuando el vulo fecundado es una esfera compacta
o mrula; stas son entonces precursores totipotenciales
con capacidad de proliferar indefinidamente in vitro.
Las clulas madre pluripotentes individualmente son
capaces de formar cada una de las tres capas primarias
germinales, adems de clulas germinales. Estas clulas
se obtienen de la masa celular interna del blastocisto y
del epiblasto antes de la implantacin. Despus de la
implantacin el epiblasto se ampla para generar el sustrato celular para la gastrulacin y la formacin del embrin. Una vez que la gastrulacin comienza, las clulas
del epiblasto (a menudo llamadas ectodermo primitivo
o embrionario en esta etapa) se diferencian progresivamente en mesodermo definitivo, endodermo y ectodermo.
Las clulas del epiblasto son muy plsticas y su renovacin y diferenciacin estn reguladas segn el contexto embrionario. Esta capacidad de acomodar clulas
adicionales proporciona el fundamento en el cual se
producen fetos quimricos. El primer reporte acerca del
aislamiento de clulas madre embrionarias provenientes de blastocistos humanos data de 1994, cuando se
determin que estas clulas in vitro se diferencian de
manera espontnea en estructuras multicelulares conocidas como cuerpos embrionarios, que contienen elementos de las tres capas germinales a partir de las cuales
se pueden formar varios tipos de clulas, como cardiomiocitos, neuronas y progenitores hematopoyticos,
entre otros. Las clulas madre embrionarias (derivadas
del blastocisto) y las clulas embrionarias germinales
(derivadas posimplantacin del blastocisto) son similares en muchos aspectos; ambos tipos de clulas son capaces de replicarse y dividirse en cultivos por largos periodos sin mostrar alteraciones cromosmicas, adems
expresan una serie de marcadores caractersticos de
progenitores totipotenciales que facilitan su identificacin; sin embargo, las clulas madre embrionarias derivadas del blastocisto y las clulas germinales difieren
del tejido de donde provienen y de su comportamiento
in vivo, ya que las clulas madre embrionarias son capaces de generar teratomas mientras que las clulas germinales humanas no.
La lnea primitiva aparece en el plano medio sagital
desde el extremo caudal hasta la parte media del disco
embrionario, donde se ubica el nodo primitivo o de Hensen. Inmediatamente posterior se localiza una amplia
fosa primitiva, que se contina con un angosto surco
primitivo localizado en el plano medio sagital de la lnea
primitiva y limitado por pliegues. La formacin inicial
de la lnea primitiva se debe probablemente a la rpida
migracin de clulas hacia el plano medio sagital; las

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


clulas migrantes se deslizan a travs de la lnea primitiva y se extienden en una capa por debajo del epiblasto
y hacia los lados para formar el mesodermo intraembrionario. A la altura de la fosa primitiva se sita un
grupo de clulas que originan la notocorda, que se extiende en sentido ceflico por debajo del ectodermo.
El mesodermo prolifera con rapidez, excepto en los
extremos ceflico y caudal del disco germinativo, donde el epiblasto y el hipoblasto permanecen unidos para
formar las lminas procordal y cloacal, respectivamente. A ambos lados del proceso ceflico y a lo largo del
nodo y la fosa primitiva se observa una zona densa provocada por el engrosamiento del ectodermo para formar
la placa neural. En algunos especmenes se observan los
pliegues neurales semejantes a dos lneas gruesas paralelas a la notocorda. Posteriormente aparecen los somitas justo antes del nodo de Hensen y la lnea primitiva.
Representan el inicio de la subdivisin del mesodermo
paraxial. A medida que la lnea primitiva inicia su regresin, aparecen nuevos somitas en secuencia anteroposterior. El nmero de somitas es el criterio ms confiable
para determinar la edad de embriones jvenes.
El disco embrionario ha comenzado a plegarse hacia
la regin ventral y el cuerpo inicia el cierre progresivo
mediante los pliegues cefalocaudal y lateral. El proceso
ceflico sobresale en parte por encima del preamnios.
La placa neural contina su proliferacin y constituye
una depresin longitudinal en la parte ceflica del embrin (surco neural).
Los bordes laterales siguen aproximndose hasta
fusionarse (tubo neural). Esta fusin se inicia en la regin destinada al cuello y progresa en direccin craneal
y dorsal.
El endodermo del pliegue ceflico se abre en el intestino anterior; sus mrgenes laterales pueden ser visibles
detrs del borde ceflico anterior. Si se enfoca cuidadosamente, por debajo del tubo neural se identifica una
banda angosta: la notocorda. Esta estructura est directamente debajo del piso del tubo neural, entre el infundbulo del diencfalo (por delante) y la lnea primitiva
(por detrs). El extremo anterior de la notocorda induce
la diferenciacin del sistema nervioso central.
El mesodermo intraembrionario se divide en tres regiones: somtico o paraxil, paralelo al tubo neural y a
ambos lados del mismo, del que se originan huesos, cartlagos, ligamentos y msculo esqueltico; intermedio
o urogenital, adyacente y externo con respecto a los somitas, constituye una franja de tejido alargado en sentido cefalocaudal del que derivan los sistemas urinario y
genital, y lateral, que se caracteriza por delaminarse y
constituir dos hojas (parietal y visceral); de esta ltima
derivan el sistema cardiovascular, el pericardio, la pleu-

49

ra y el peritoneo. El espacio entre ambas hojas origina


el celoma intraembrionario.
Las clulas del carcinoma embrionario tienen varias
caractersticas distintivas. Son capaces de la diferenciacin de multilinaje (en las tres capas germinativas); esta
capacidad se conserva por las clulas aisladas clnicas
que funcionan como clulas madre pluripotentes. Las
clulas madre embrionarias pueden producir teratomas,
tumores que contienen tipos celulares de mesodermo,
ectodermo y endodermo. En contraste con las clulas
del carcinoma embrionario, las clulas madre embrionarias se comportan estables en su capacidad de integracin en el embrin y de producir quimeras viables. Las
clulas madre embrionarias producen una progenie diferenciada funcional en todos los tejidos y rganos. La
incorporacin celular en la embriognesis confirma no
solamente que las clulas madre embrionarias son pluripotentes, sino que tambin demuestra que pueden responder apropiadamente a las seales de desarrollo para
la proliferacin, diferenciacin, migracin y remodelacin. Las clulas madre embrionarias no son capaces de
generar un blastocisto; por ello no se deben describir
como totipotentes.

Posturas internacionales
en terapia celular
Los sectores conservadores y retrgrados de la ONU
pretenden prohibir la clonacin humana en todas sus
formas, argumentando que atentan contra la vida y la
dignidad humanas. En el mundo an existe un pensamiento conservador para prohibir la investigacin en la
medicina regenerativa. La prohibicin de la clonacin
teraputica y la postura conservadora que presiona con
frenar en Mxico la investigacin con clulas madre de
una naciente lnea de investigacin que ya se cultiva en
varios pases desarrollados obligan a la comunidad
cientfica mexicana a permanecer en la incertidumbre
legislativa y a continuar rezagados de los avances cientficos y legislativos de los pases progresistas. El discurso de los grupos conservadores sostiene que el embrin humano es un ser que debe ser protegido por la ley
a partir de la concepcin. Aqu se encuentra el primer
punto de confusin: ellos manejan el trmino concepcin homologndolo al de fertilizacin del ovocito.
Es claro que en la Biblia tal homologa no existe, puesto
que cuando fue escrita se ignoraba por completo el proceso de fertilizacin del ovocito humano. La idea sagrada de concepcin deriva del hecho de que la mujer concibe (es consciente) que est embarazada, es decir, ella
sabe que lo est por los sntomas correspondientes, que

50

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

ya eran del conocimiento de la comunidad de aquel entonces. Ahora, gracias a la investigacin cientfica, se
sabe que los sntomas del embarazo corresponden a los
cambios hormonales que ocurren despus de la implantacin del blastocisto en el tero (matriz) de la mujer.
Como la homologacin de concepcin y fertilizacin es
muy reciente, los grupos conservadores tendrn que reconocer que se trata de una interpretacin actualizada
del concepto bblico original; tal actualizacin se deriva
de la investigacin cientfica y no de una verdad revelada en el sentido teolgico. De manera que conceptos
derivados de la ciencia son tambin aprovechados por
quienes histricamente han intentado limitar el desarrollo del pensamiento cientfico.
Respetando la idea bblica original de concepcin en
trminos de la reproduccin humana, debera aceptarse
que el inicio del desarrollo humano sera a partir de la
implantacin. El periodo comprendido entre la fertilizacin del ovocito y su implantacin en el tero es de 7 a
10 das. A partir de este momento, el cuerpo de la futura
madre inicia una serie de adaptaciones para nutrir al embrin, nica va para proseguir su desarrollo en la matriz. Antes de implantarse, sin embargo, el ovocito fertilizado se desarrolla de manera independiente hasta
transformarse en una esfera hueca, todava microscpica, llamada blastocisto, de unas 130 a 150 clulas. Se
calcula que entre 20 y 50% de los ovocitos fertilizados
son eliminados gracias a un mecanismo biolgico de
proteccin que evita la implantacin de blastocistos con
algn dao que provocara malformaciones en el feto
despus de la implantacin. Sin embargo, en aqullos
que escapan a la vigilancia temprana, las alteraciones se
hacen evidentes en el desarrollo fetal y con frecuencia
en el recin nacido. La eliminacin natural de embriones antes de la implantacin no es percibida por la mujer, de manera que al no ser consciente del microaborto que le ha ocurrido no tiene sentimiento de culpa.
Tampoco lo tiene cuando, de manera consciente, evita
la fertilizacin del ovocito abstenindose de tener relaciones sexuales en el periodo ovulatorio, nica manera
de controlar la fertilidad autorizada por la Iglesia Catlica. Como en el caso del proceso de fertilizacin, el
conocimiento del ciclo menstrual y su regulacin hormonal son productos de la investigacin cientfica y no
verdades reveladas a grupos particularmente seleccionados. Aunque el ovocito humano es la nica clula capaz
de originar a un ser humano de forma natural no inducida, la probabilidad de que esto ocurra es asombrosamente pequea. De alrededor de 6 millones de ovocitos
que inician su desarrollo en cada ovario, slo cerca de
400 llegan a ser expulsados por el proceso de ovulacin,
1 cada 28 das durante la vida reproductiva de la mujer.

(Captulo 2)

Ms an, de los pocos que llegan a ser fertilizados,


varios son eliminados antes de la implantacin, por causas naturales. De esta forma, el potencial de cada ovocito para formar a un ser humano se reduce a ciertas probabilidades. Slo 1 en 1 milln de ovocitos que inician
su desarrollo en los ovarios podra llegar a formar a un
ser humano.
Los ovocitos humanos, al igual que los de muchas
otras especies de mamferos, son capaces de iniciar el
desarrollo, incluso hasta la etapa de blastocisto, sin ser
fertilizados por un espermatozoide, lo que se conoce
como partenognesis. Es decir, los ovocitos por s mismos son responsables del desarrollo hasta la etapa de
blastocisto, lo cual hace difcil sostener que en este
periodo ya se est ante la presencia de un ser humano
con identidad gentica nica. Si el ovocito por s mismo
puede alcanzar la etapa morfolgica de blastocisto,
dicha etapa previa a la implantacin depende de la capacidad que tienen los ovocitos para iniciar el desarrollo
y no de la aportacin gentica del espermatozoide. De
hecho, esa capacidad del ovocito (no del embrin) es la
que se aprovecha en la clonacin teraputica para la
transferencia de ncleos de clulas somticas. En contraste con la clonacin reproductiva, la meta de la clonacin teraputica no es clonar a un ser humano, sino clonar las clulas de un paciente con el fin de mejorar su
calidad de vida.
El blastocisto contiene dos tipos celulares: las clulas
trofoblsticas formarn parte de la placenta y las clulas
de la masa celular interna formarn al embrin y sus
membranas protectoras. En esta etapa se est entonces
frente a un conglomerado de clulas y slo algunas de
ellas tienen la capacidad de formar al embrin propiamente dicho. Nada, fuera de su posicin en el blastocisto, permite entrever la presencia de un ser humano en
esas clulas. Es importante mencionar que desde el punto de vista gentico, todas las clulas heredan una copia
de los genes del ovocito fertilizado, incluyendo las que
formarn la parte fetal de la placenta y las membranas
(amnios y corion) que son desechadas despus del parto. Aceptando que la identidad individual de cada ser
humano est en la copia nica de DNA adquirida
durante la fertilizacin, a nivel molecular las diferencias entre individuos de la misma especie son mnimas.
Los genes humanos son apenas 1% diferentes de los de
otras especies de primates y tenemos 95% de genes similares a los de los ratones. Respecto a la identidad de nuestra particular copia de DNA que tal vez pudiera tomarse
como parte de nuestra dignidad individual, millones de
clulas con idnticas copias de DNA que identifican al
individuo mueren normalmente en el organismo todos
los das.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


En este sentido, resulta absurdo defender la identidad
de un ser humano en trminos de su DNA caracterstico,
de sus clulas o de los procesos que controlan el desarrollo embrionario. De manera que por las razones
expuestas y muchas otras no mencionadas, es claro que
la naturaleza biolgica de la vida humana es similar a la
de los dems seres vivos. Defender la dignidad humana
basndose en pretendidos argumentos embriolgicos
revelados carece de seriedad cientfica. La dignidad humana no es un problema biolgico, ms bien parece la
arena en donde sacerdotes, telogos, polticos y grupos
de poder sacan partido llevando agua a su molino y engaando a la gente con informacin falsa o no sustentada de la verdad del rigor cientfico, retrasando el beneficio de la investigacin y la teraputica en este campo
tan prometedor de la medicina regenerativa, al obstaculizar la utilizacin de las clulas madre embrionarias.
Debido precisamente a estas posturas reactivas con
respecto a las clulas madre embrionarias, se han estudiado otras fuentes de clulas madre que no tengan restricciones bioticas ni religiosas. En este contexto, las
espermatogonias de ratones adultos conservan la capacidad de diferenciarse en diversos tipos celulares, y sus
perspectivas para aplicacin en terapia celular son prometedoras. En contraste con las ovogonias en los ovarios fetales, las espermatogonias de los testculos siguen
proliferando hasta la muerte del individuo. En condiciones normales, la funcin de las espermatogonias progenitoras es la produccin de espermatozoides mediante
el proceso de espermatognesis. El nicho tisular donde se lleva a cabo la espermatognesis son los tubos seminferos, constituidos por clulas germinales en diversas etapas de maduracin y las clulas de Sertoli que las
sustentan. Adems del contacto fsico, las espermatogonias requieren mltiples factores elaborados por las clulas de Sertoli para la diferenciacin de espermatozoides. De manera que hasta ahora no ha sido posible
reproducir el proceso completo de espermatognesis a
partir de espermatogonias aisladas in vitro. En la literatura existen varios estudios que reportan la proliferacin in vitro de espermatogonias aisladas; sin embargo,
su mantenimiento es limitado y pronto mueren por apoptosis.
Aprovechando la tecnologa de ratones transgnicos,
K. Guan y col. desarrollaron un protocolo que permiti
demostrar la presencia de clulas madre multipotentes
entre las espermatogonias aisladas de ratones adultos.
El gen Stra8 se expresa en las espermatogonias antes de
iniciarse el proceso de espermatognesis. Empleando el
promotor del gen Stra8 acoplado al gen de la protena
verde fluorescente (GFP), los autores generaron ratones
transgnicos en cuyos testculos las espermatogonias

51

expresan la GFP de manera especfica. Adems de ser


detectadas con facilidad mediante el microscopio de
fluorescencia, tambin es posible separarlas con el citofluormetro de flujo (FACS). Al cruzar los ratones
Stra8PVF con ratones transgnicos Rosa26 que expresan la enzima LacZ en todas sus clulas, obtuvieron
dobles transgnicos con clulas marcadas susceptibles
de ser separadas e identificadas por sus marcadores
celulares correspondientes. Al cultivar las clulas
(somticas y germinales) obtenidas de los testculos de
ratones dobles transgnicos (Stra8PVF x LacZ), los
investigadores lograron en dos semanas poblaciones
celulares enriquecidas con espermatogonias verdes.
A continuacin, con el equipo FACS separaron las clulas verdes y las sometieron a diversos procedimientos
encaminados a estudiar su plasticidad. Tres de esos procesos demostraron la enorme potencialidad de las espermatogonias aisladas con el protocolo implementado
por los autores:
1. Al cultivarlas en condiciones estndar establecidas para el mantenimiento de clulas madre embrionarias, los investigadores demostraron que las
espermatogonias son capaces de generar derivados celulares de las tres capas embrionarias: ectodermo, mesodermo y endodermo.
2. Los experimentos in vivo demostraron que las
espermatogonias verdes fluorescentes inyectadas
en los tubos seminferos de ratones privados de
sus propias espermatogonias fueron capaces de
colonizar los tubos y llevar a cabo el proceso de espermatognesis.
3. Al microinyectar espermatogonias verdes en la
cavidad de blastocistos (embriones preimplantados) se desarrollaron embriones quimricos cuyos
tejidos mostraron clulas con el marcador verde
en casi todos los rganos, incluyendo las gnadas.
Al nacer, algunos ratones quimricos contenan
clulas germinales verdes, con lo cual qued demostrada la enorme potencialidad de las espermatogonias del ratn y la eficiencia del procedimiento empleado. De esta forma se demostr que
en los testculos de ratones adultos existen clulas
madre multipotentes capaces de originar todos los
tipos celulares del organismo. Sin embargo, queda
todava un largo camino antes de que un protocolo
similar pueda desarrollarse para su aplicacin en
la medicina regenerativa para seres humanos. Primero hay que demostrar que en los tubos seminferos del hombre tambin existen espermatogonias troncales multipotentes. Por razones obvias
no se pueden generar individuos transgnicos para

52

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


experimentar, por lo que habra que intentar identificarlas en biopsias de testculo, tcnica por dems muy invasiva.

Relacin entre el vulo


y el espermatozoide
Los componentes de la capa externa que rodean al vulo
cambian la permeabilidad a los iones de la membrana
plasmtica del espermatozoide. Estos cambios forman
parte esencial de la comunicacin necesaria entre los
gametos para que ocurra la fecundacin y se genere un
nuevo individuo. Los componentes del vulo regulan la
motilidad del espermatozoide e inducen la reaccin
acrosmica, reaccin que se requiere para que el espermatozoide pueda fusionarse con el vulo. Al igual que
todas las clulas, el espermatozoide posee canales inicos de membrana. Estos canales son protenas que atraviesan la membrana y tienen dominios que forman un
poro que permite el paso eficiente de los iones a travs
de ella. Un solo canal inico es capaz de catalizar el paso
de 107 o 108 iones/seg. El espermatozoide es una clula
diferenciada terminal muy pequea e incapaz de sintetizar protenas, de tal manera que sus canales inicos se
sintetizan durante la espermatognesis. Las clulas espermatognicas, particularmente los espermatocitos en
paquiteno, son ms grandes que el espermatozoide y es
ms fcil hacer registros electrofisiolgicos de pinzamiento zonal de membrana (patch clamp) con fines de
investigacin. Los canales de Ca2+ dependientes de voltaje estn formados por varias subunidades: a1 contiene
el poro, el sensor de voltaje y se asocia con las subunidades auxiliares a2d y b. Adems de transcritos para las
subunidades a1A, C, E, 1G y H, que codifican para
varios tipos de Ca2+ voltajedependientes, se han encontrado los cuatro tipos de transcritos para b en las clulas
espermatognicas y en el espermatozoide maduro. La
calmodulina modula las corrientes de Ca2+ tipoT que
tienen estas clulas y el espermatozoide maduro. Estas
corrientes fluyen a travs de canales de Ca2+ tipoT que
participan en la reaccin acrosmica. Tambin se ha
caracterizado un canal selectivo para K+ muy sensible
al bloqueo por Ba2+. Este canal es un rectificador
entrante (Kir) modulado por el pHi. Experimentos in
vitro, con espermatozoides maduros, que miden potencial de membrana y reaccin acrosmica sugieren que
este canal participa en la capacitacin espermtica, la
cual es un proceso de maduracin que debe sufrir el espermatozoide en el tracto genital femenino para poder
fecundar al vulo.

(Captulo 2)

Desarrollo sexual embrionario


La reproduccin sexual se basa en la existencia de individuos fisiolgica y morfolgicamente diferentes. La
diferenciacin sexual es el proceso que lleva al establecimiento de tales diferencias. En vertebrados, la diferenciacin sexual se inicia en las gnadas, primordios
embrionarios a partir de los cuales se desarrollan ovarios y testculos en hembras y machos, respectivamente.
Uno de los eventos biolgicos ms importantes que ocurren durante el desarrollo de un ovario o un testculo a
partir de una gnada indiferenciada es el control del inicio de la meiosis embrionaria (consta de dos divisiones
del ncleo de las clulas sexuales, con una sola divisin
longitudinal de los cromosomas. Cada clula hija recibe
la mitad del nmero de cromosomas de la clula progenitora, manteniendo la constancia del nmero de cromosomas en cada especie). Tanto la meiosis como la
fertilizacin (unin del huevo y el espermatozoide)
constituyen la base necesaria para la reproduccin de
organismos sexuados. Con el proceso de meiosis, los organismos adquieren combinaciones ventajosas de genes,
lo que nos da la variabilidad de caractersticas que nos
hacen nicos. Sin embargo, la meiosis tambin puede ser
el marco de una fuente de enfermedades cromosmicas.
Las clulas germinales (predecesoras de ovocitos y
espermatozoides en hembras y machos, respectivamente) llevan a cabo la meiosis. Aunque este proceso es
fundamentalmente el mismo en ambos sexos, existen
diferencias cronolgicas entre la meiosis de hembras y
machos. La diferencia ms evidente se da en etapas muy
tempranas del desarrollo, cuando en las gnadas indiferenciadas de hembras, las clulas germinales (CG) inician la meiosis, mientras que en los machos las CG no
la inician. Este dimorfismo sexual en la conducta de las
CG es el resultado de una sustancia que inhibe la meiosis producida por otro tipo celular presente en la gnada
indiferenciada de los machos (clulas somticas). De
esta manera, es vlido sugerir que todas las CG tienen
un potencial de diferenciacin hacia hembra, independientemente de su sexo gentico. A menos que lleguen
a la gnada masculina, su comportamiento sera dirigido hacia el inicio de la meiosis. Sin embargo, la nica
evidencia que sostiene a esta hiptesis es el hallazgo, en
fetos de macho, de clulas germinales que inician la
meiosis fuera del testculo, en tanto que las ubicadas en
el interior del testculo fetal no la inician.
La cepa de ratn (D4/XEGFP) acarrea un transgn
que expresa la protena verde fluorescente (GFP) unida
al cromosoma X. Dicha cepa se utiliza como marcador
de CG de hembra. Se ha utilizado con xito la tcnica
de separacin celular magntica para lograr aislar las

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


CG provenientes de embriones fluorescentes. De esta
manera se puede detectar la ubicacin de las CG por
microscopia de fluorescencia y confocal. Las CG aisladas y fluorescentes se mezclan con clulas somticas de
machos no transgnicos y se cultivan para su posterior
anlisis. De forma interesante, las CG que expresan la
protena verde fluorescente son capaces de formar parte
de los cordones testiculares, interactuar con clulas somticas del testculo e iniciar la meiosis. Esto sugiere
que las CG XX se encuentran determinadas para iniciar
la meiosis desde la etapa de gnada indiferenciada, y
que la sustancia que previene la meiosis secretada por
clulas somticas de macho slo tiene efecto inhibidor
sobre las CG de los machos, quiz debido a que en las
CG XY existen receptores para algn factor secretado
por las clulas somticas que inhibe el inicio de la meiosis. Las CG XX, al no expresar estos receptores, no responden a la sustancia inhibidora de meiosis. Tambin se
ha demostrado la participacin de genes autosmicos en
la diferenciacin sexual, lo que descarta la accin exclusiva de cromosomas sexuales. Los gonadosomas presentan, en sus brazos cortos, genes con funcin autosmica, entre los cuales se encuentran, en ambos
cromosomas sexuales (X y Y): 9q33, 10q, 11p13 (WT
1), 17q24 (SOX 9), Xp21 (regin DSS, gen DAX 1),
Yp11.3 (regin SRY, gen TDF). Ambos embriones,
masculino y femenino, tienen primordios comunes, indiferenciados, con tendencia inherente a feminizarse
salvo que se presente una interferencia activa por factores masculinizantes. La gnada se diferencia en ovario
a menos que las gnadas embrionarias indiferenciadas
sean desviadas por el TDF. De algn modo los genes
que determinan la masculinidad causan la persistencia
de la regin medular, de la que se formarn los tbulos
seminferos. En la mujer este tejido entra en regresin
y la proliferacin de la capa cortical forma la sustancia
del ovario.
Se ha localizado el locus DSS (dosis sensible de reversin sexual) en individuos con fenotipo femenino,
por lo que se ha propuesto que junto con el gen DAX1
(ambos ubicados en el cromosoma X) actan como eslabones en la formacin de ovario y testculo. Los testculos de un feto masculino en desarrollo imponen su masculinidad sobre los estados neutro o femenino mediante
la sntesis de testosterona. En un feto masculino castrado, existan o no ovarios, el sexo secundario o fenotpico corresponder a un producto femenino, y en casos
de ausencia de testosterona o insensibilidad a ella se
producir el sndrome de feminizacin testicular, con
genitales externos femeninos. En la semana 6 existen
dos pares de sistemas de conductos genitales masculino
y femenino: los conductos de Wolf o mesonfricos, que

53

alcanzan la cloaca destinada a convertirse en el seno


urogenital, y los conductos de Mller o paramesonfricos originados de una invaginacin del epitelio celmico, los cuales se abren en un extremo en la cavidad celmica y descienden por la porcin de los conductos de
Wolf, los cruzan y se unen en la lnea media para formar
el canal terovaginal cuya extremidad caudal cerrada
alcanza el conducto de Mller en la cara posterior del
seno urogenital.
En el hombre el conducto de Wolf se diferencia en
epiddimo, conducto deferente, ampolla del conducto y
vescula seminal; en la mujer desaparece casi en su totalidad. En la mujer, el conducto de Mller se convierte
en trompas de Falopio, tero, crvix y parte de la vagina. La actividad estimulante del testculo fetal sobre el
conducto de Wolf es androgenodependiente; la actividad inhibitoria sobre el de Mller depende de un factor
sintetizado por las clulas de Sertoli. La estimulacin
del epiddimo y del conducto deferente o de las trompas
de Falopio y del tero es un fenmeno local no controlado por hormonas circulantes, sino dependientes de su
cercana a la gnada. Por otra parte, la masculinizacin
de los genitales externos es provocada por andrgenos
circulantes. La masculinizacin de los genitales externos es secundaria a la presencia de andrgenos circulantes, apareciendo uretra y prstata (seno urogenital),
pene (tubrculo genital) y escroto (rodetes genitales).
En la mujer: vestbulo, dos tercios inferiores de la vagina y labios menores (seno urogenital), cltoris (tubrculo genital) y labios mayores (rodetes o tumefacciones
genitales).

Terapia celular con clulas madre


La terapia celular representa una de las opciones teraputicas ms importantes para detener y muchas veces
curar padecimientos crnicos para los que no existe
solucin con la medicina convencional. Para la realizacin de todas las investigaciones la histologa ha estado
relacionada con el desarrollo tecnolgico. En la actualidad los conocimientos histolgicos constituyen bases
inevitables para el desarrollo vertiginoso de las ciencias
mdicas, muy particularmente en todas las investigaciones relacionadas con la terapia celular. La utilizacin
de esta tcnica teraputica muestra resultados alentadores para la solucin de mltiples enfermedades o la mejora clnica de otras; uno de los rganos donde se evidencia el xito es el corazn: los resultados de estudios
experimentales donde se inyectaron clulas madre humanas en miocardio deteriorado de un extenso grupo de
ratas mostraron, cuando se compararon estos animales

54

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

con un grupo control, una mejora significativa tanto


clnica como tisular. Expertos alemanes, pioneros en el
uso de esta tcnica en humanos, han llevado a cabo ensayos controlados en pacientes con infarto de miocardio
y han comprobado cmo la terapia celular mejora de
manera significativa la funcin, la irrigacin y el metabolismo de la zona infartada. Estas investigaciones evidenciaron que los enfermos que recibieron terapia celular autloga con clulas de su mdula sea tuvieron
mejor consumo de oxgeno, capacidad para el ejercicio
y aporte sanguneo de sus miocardios comprometidos
por falta de riego coronario. Adems, se ha demostrado
que el trasplante de mioblastos (clulas progenitoras
procedentes de msculos de las piernas) en las reas daadas del corazn de muchos pacientes que ya han recibido esta terapia es algo factible y seguro. El temor a que
procedimientos de esta naturaleza eleven el riesgo de
arritmias muy serias parece estar disminuyendo. Con la
elevada incidencia de pacientes que padecen insuficiencias cardiacas que ya existe en casi todo el mundo,
muchos expertos confan en que las terapias regenerativas del miocardio disminuyan la escasez de donantes
que existe para trasplante cardiaco, adems de que
existe un grupo de desventajas, desde las reacciones de
rechazo hasta problemas eticomorales presentes en los
trasplantes de rganos que tendran su solucin en este
tipo de tratamiento. La terapia celular con clulas madre
constituye un mtodo poco agresivo de tratamiento y es
muy espectacular en sus resultados de regeneracin celular y orgnica. Se consideran clulas madre aquellas
clulas dotadas simultneamente de la capacidad de
autorrenovacin y de originar clulas hijas comprometidas en determinadas rutas de desarrollo, sin perder sus
propiedades, que se convertirn finalmente en tipos celulares especializados que pueden dar lugar a otro tipo
de clulas y tejidos.
Las clulas madre se pueden desarrollar en cualquier
tipo de las 250 clases diferentes de clulas corporales:
por ejemplo, en clulas cardiacas, en clulas intestinales
o en clulas cutneas. En este sentido, se pueden sustituir clulas atrofiadas o muertas por clulas madre:
como una panacea, las capaces de todo debern llenar
de nueva vida las zonas enfermas del organismo. Actualmente ya es posible obtener clulas madre que se
mantienen como tales en cultivos en el laboratorio, y
que bajo determinados estmulos pueden conducir a poblaciones de clulas diferenciadas, como se ha estado
haciendo en el grupo de investigacin de los autores
(SITECEM). Existen dos tipos bsicos de clulas madre:
1. Clulas madre embrionarias: se obtienen ya sea
de fetos abortados o de vulos fertilizados que han

(Captulo 2)

sobrado de una fecundacin in vitro (FIV). Son


tiles para propsitos mdicos o de investigacin
porque pueden producir clulas para casi todos los
tejidos del cuerpo.
2. Clulas madre adultas: no son tan verstiles para
propsitos de investigacin porque son especficas para ciertos tipos de clulas, como sangre,
intestinos, piel y msculos. El trmino clula madre adulta puede confundir porque tanto los nios
como los adultos las tienen.
Existen muchas reas de la medicina en las que la investigacin de clulas madre tiene una repercusin significativa. Por ejemplo, hay una diversidad de enfermedades y lesiones en las cuales las clulas o el tejido de
paciente se destruyen y deben ser reemplazados por un
trasplante de tejido o de rganos. Las clulas madre pueden generar un nuevo tejido en estos casos y hasta curar
enfermedades para las cuales actualmente no existe una
teraputica adecuada. Entre las enfermedades en las que
se han obtenido avances revolucionarios estn la enfermedad de Alzheimer y la de Parkinson, diabetes, lesiones de la mdula espinal, cardiopatas, enfermedades
con eventos cardiovasculares, artritis, cncer, quemaduras, enfermedades autoinmunitarias, etc. Las clulas
madre tambin pueden ser usadas para obtener una mejor comprensin de cmo funciona la gentica en las
etapas iniciales del desarrollo celular. Esto puede ayudar a entender por qu algunas clulas se desarrollan
anormalmente y conducen a anomalas congnitas y
cncer, con lo cual se pueden desarrollar estrategias
para prevenir algunas de estas enfermedades. Las clulas madre tambin se utilizan para probar y desarrollar
frmacos. Debido a que se pueden utilizar clulas madre
para crear cantidades ilimitadas de tejido especializado,
se pueden realizar pruebas para determinar la reaccin
de los frmacos en estos tejidos especializados antes de
probarlos en animales o en seres humanos.
Recientemente el gobierno ingls permiti la investigacin con embriones humanos para obtener clulas
madre. Se suele utilizar un proceso semejante al usado
en la clonacin animal: se toma un vulo al cual se le
extrae el material nuclear; se extrae el ncleo de una
clula adulta del individuo por clonar y luego se transfiere el ncleo extrado de la clula adulta al vulo. A
partir de aqu hay un cigoto artificial que podr, tras su
desarrollo embrionario, crecer hasta convertirse en un
individuo clnico, genticamente idntico al individuo
del que se extrajo la clula adulta. Si en las primeras
fases del desarrollo del embrin se extraen las clulas de
la masa celular interna del blastocisto y se logra especializarlas, podr obtenerse obtener cualquier tejido para

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo


trasplante. Entre los contenidos histolgicos fundamentales necesarios para la fundamentacin de esta terapia
estn: caractersticas histolgicas de los tejidos bsicos
del organismo; conocimientos bsicos de los diferentes
modelos celulares; caractersticas histolgicas de la
mdula sea como rgano hematopoytico; interpretacin de conceptos como divisin celular, potencialidad
celular, diferenciacin celular, clula madre o indiferenciada; caractersticas histolgicas del aparato cardiovascular; elementos bsicos de angiognesis; papel
de algunas clulas en la remodelacin tisular.
Mientras que los tratamientos con medicamentos dejan de trabajar despus de que sus componentes se han
disuelto por el proceso metablico del cuerpo, la terapia
celular con clulas madre tiene un efecto mucho ms
prolongado, porque estimula al cuerpo a curarse y revitalizarse a s mismo. Las clulas madre constituyen entonces una interesante alternativa de investigacin,
sobre todo por el potencial teraputico cada vez ms
descifrado por los investigadores. Los cientficos dedicados a la terapia celular sustentan que sta funciona de
la misma forma que un trasplante de rgano, donde se
provoca que las clulas cansadas funcionen como clulas nuevas y esta nueva informacin se mantenga por
ms tiempo. Sin embargo, cuando se discute sobre temas como la clonacin y ahora sobre clulas madre, es
importante considerar las implicaciones ticas que su
manipulacin conlleva y no desconocer que en el campo
de la biologa de las clulas madre queda an mucho por
hacer. En Europa la efectividad de la terapia celular es
ampliamente aceptada. Por ejemplo, en Alemania hay
ms de 5 000 investigadores que aplican este tratamiento. Entre los mtodos de salud de mayor auge en la
dcada actual, la terapia celular ocupa un lugar destacado; esta denominacin significa el empleo de clulas
madre con fines teraputicos. Aunque ya se sabe que
pertenece a los procedimientos ms antiguos de la medicina, no es sino hasta 1958 que se funda la Asociacin
Internacional de Investigacin de la Terapia Celular,
con sede en Frankfurt (Alemania), que tiene pleno reconocimiento ante la OMS. El organismo adulto dispone
de mecanismos para renovar o regenerar tejidos y rganos daados, a partir de la multiplicacin de clulas
diferenciadas originadas de clulas madre. La morfognesis embrionaria y fetal utiliza estos mecanismos para
obtener una homeostasis celular fisiolgica. En el individuo adulto existe una poblacin escasa de clulas
madre indiferenciadas en todos los tejidos y rganos.
Estas clulas adultas troncales intrnsecas son capaces
de diferenciarse para regenerar el tejido u rgano en el
que yacen, pero su eficacia reparadora es muy limitada
por su escaso nmero. Por esta circunstancia, con el im-

55

plante de clulas madre se obtiene un beneficio teraputico considerable. Existen dos tipos de terapia celular:
la terapia celular heteroplstica se refiere al uso de clulas madre embrionarias, mientras que la terapia celular
autoplstica se basa en el uso de clulas madre del propio individuo.
Se ha demostrado plasticidad potencial de las clulas
madre adultas contenidas en la mdula sea en: msculo
cardiaco, msculo esqueltico, clulas endoteliales, hgado, adipocitos, osteocitos, condrocitos, neuronas, clulas gliales, clulas epiteliales, epidrmicas y secretoras de hormonas. Se ha demostrado experimentalmente
que las clulas madre adultas, procedentes de la mdula
sea animal y administradas sistemticamente, son capaces de salir del sistema circulatorio, invadir un rgano
isqumico y diferenciarse en neuronas, clulas endoteliales o cardiomiocitos para reducir el dficit neurolgico y mejorar la contractilidad miocrdica en modelos
de isquemia en el cerebro y el corazn, respectivamente. Las clulas madre implantadas pueden permanecer
indiferenciadas y sintetizar factores angiognicos y de
crecimiento como protenas de la familia del factor de
crecimiento para fibroblastos (FGF), que impedirn la
extensin de la lesin isqumica favoreciendo la angiognesis e inhibirn, adems, la muerte por apoptosis.
Los datos experimentales apoyan el inters cientfico de
la medicina regenerativa empleando clulas madre
adultas autlogas (terapia celular autoplstica) o clulas
madre adultas alognicas (terapia celular heteroplstica). Hasta ahora, los estudios preliminares en humanos que emplean clulas madre adultas demuestran que
esta terapia carece de efectos secundarios (edema o
transformacin celular). Adems, el empleo de clulas
madre adultas como terapia regenerativa en diferentes
situaciones patolgicas humanas tiene las ventajas, en
contra de lo que sucede con el terico uso futuro de clulas madre embrionarias humanas, de no necesitar ningn tratamiento inmunosupresor y evita, adems, cualquier problema tico y religioso.
Al principio se pensaba que las clulas madre adultas
estaban predeterminadas a diferenciarse a un tipo celular procedente de su mismo tejido de origen o al menos
de su misma capa embrionaria; sin embargo, esta idea
ha sido reevaluada por varios grupos de investigadores
cuyos estudios sugieren que las clulas madre adultas
son capaces de diferenciarse funcionalmente a clulas
especializadas procedentes de capas embrionarias distintas de las de su origen (plasticidad); incluso, algunos
de estos grupos han sido capaces de probar la pluripotencialidad de clulas madre adultas procedentes de la
mdula sea o sistema nervioso central. Esta capacidad biolgica propia de estas clulas adultas se funda-

56

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Mdula sea

Hematopoytica
Mesenquimales

Ovales

Laterales

MAPC

Figura 21. Poblaciones de clulas madre presentes en la


mdula sea (clulas madre del adulto).

menta en su capacidad de alterar drsticamente su fenotipo en respuesta a los cambios del microambiente donde
se desarrollan. La plasticidad fue reconocida por primera
vez en estudios realizados en progenitores derivados de
la mdula sea, donde se observaron cambios en el fenotipo en clulas inmaduras bajo condiciones controladas
que simulaban microambientes diferentes al medular.
Los mecanismos moleculares que llevan a los cambios de linaje celular dentro del sistema hematopoytico
estn siendo estudiados. Sin embargo, los resultados
ms recientes acerca de la plasticidad de las clulas madre adultas contradicen el dogma sobre la diferenciacin de las clulas madre restringidas a su tejido de origen. Las evidencias obtenidas tanto in vivo como in
vitro muestran que las clulas madre adultas, originadas
de un tejido determinado, tienen la capacidad de producir clulas con una expresin genotpica caracterstica
de otros tejidos cuando se transfieren a un microambiente diferente al original. De manera muy particular
se ha prestado atencin a la capacidad de las clulas madre adultas de la mdula sea de producir clulas con
propiedades muy similares a hepatocitos, neuronas y
cardiomiocitos.
Existen cuatro modelos que explican los posibles
mecanismos que llevan a las clulas madre adultas a
diferenciarse a clulas de un tejido diferente al original
en respuesta a cambios del microambiente o procesos de
reparacin tisular:
1. El primer modelo es el que corresponde al conocido convencionalmente sobre diferenciacin celular, en el que una clula progenitora restringida hacia un solo linaje da origen a clulas de su misma
estirpe.

(Captulo 2)

2. El segundo modelo se refiere a la capacidad que


tienen las clulas madre adultas de diferenciarse
en progenitores ms activos en el ciclo celular que
pueden dar origen a su vez a clulas de linajes celulares diferentes.
3. En el tercer modelo de transdiferenciacin, las
clulas madre de un tejido particular bajo condiciones de un microambiente diferente al original
adquieren la capacidad de generar clulas de muy
diversos linajes.
4. El ltimo modelo hace referencia a la capacidad
de las clulas maduras para desdiferenciarse y rediferenciarse a clulas del mismo tejido que le dio
origen a un tejido diferente.
Las clulas madre adultas ms estudiadas hasta ahora
son las que se derivan de la mdula sea; all se han
identificado por lo menos tres grupos: clulas madre estromales mesenquimatosas, clulas madre hematopoyticas, poblacin colateral y clulas progenitoras adultas multipotentes (MAPC) (figura 21).
Las clulas madre estromales son capaces de diferenciarse a tejidos mesodrmicos funcionales y constituyen un modelo muy til en aplicaciones clnicas en enfermedades, tanto en terapia celular regenerativa como
en terapia gnica. Las clulas madre adultas identificadas en mdula sea son clulas madre hematopoyticas,
responsables de la renovacin constante de las clulas
sanguneas.
Las clulas madre hematopoyticas aparecen en el
embrin entre la tercera y la cuarta semana de gestacin;
estas clulas migran desde el saco vitelino hasta el hgado y el bazo, y por ltimo llegan a la mdula sea a travs de la circulacin fetal durante el segundo y el tercer
trimestre de gestacin. Estas clulas han sido aisladas
de sangre perifrica y mdula sea; tienen la capacidad
de autorrenovarse y diferenciarse en dos grupos progenitores hematopoyticos: progenitor mieloide y progenitor linfoide, los cuales a su vez se diferencian hacia
linajes de clulas sanguneas especializadas. El proceso
de movilizacin de las clulas madre hematopoyticas
est caracterizado por la migracin y la tendencia selectiva de estas clulas a retornar a la mdula sea. La capacidad de autorrenovacin de las clulas madre hematopoyticas est regulada por un complejo mecanismo en
el cual estn involucrados el microambiente medular,
citocinas estimuladoras e inhibidoras, as como tambin
la matriz extracelular. Estas interacciones estn mediadas por molculas de adhesin celular, las cuales se expresan en las clulas madre hematopoyticas, clulas
endoteliales y clulas del estroma medular. Durante el
desarrollo embrionario, las clulas madre hematopoy-

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

ticas que van a dar lugar a las clulas sanguneas migran


desde el hgado fetal hacia la mdula sea a travs de los
vasos sanguneos; una vez all reinvaden este tejido con
altos niveles de clulas maduras e inmaduras, las cuales
son liberadas nuevamente a la circulacin, mientras que
una pequea cantidad de clulas madre indiferenciadas
se mantienen dentro de la mdula sea produciendo de
forma continua clulas maduras e inmaduras de linaje
mieloide y linfoide.
Las clulas madre hematopoyticas son la base biolgica de los trasplantes de mdula sea para pacientes
que padecen de patologas como leucemias y aplasias
medulares. Sin embargo, la obtencin de donantes compatibles con el receptor y los costos que implican estos
procedimientos han creado la necesidad de buscar fuentes alternas para la obtencin de clulas madre hematopoyticas, como la sangre de cordn umbilical (SCU).
En humanos, la afortunada novedad ha consistido en
reconocer la existencia de clulas madre pluripotentes
en otros tejidos y rganos adultos, con la suficiente flexibilidad como para generar clulas con diferentes linajes con caractersticas y funciones especializadas como
miocitos, neuronas y hepatocitos. En un individuo adulto hay tejidos en los que algunas de sus clulas se dividen activamente, pero en otros no. Entre los que se dividen estn la mdula sea y la piel; en ellos se encuentran
clulas madre de la mdula sea y de la piel. Estas clulas se reproducen y generan clulas especializadas de
sangre y de piel, respectivamente. En otros tejidos se
han encontrado tambin clulas madre especializadas,
capaces de reproducirse y de generar tejidos especializados. Estas clulas madre especializadas son muy
escasas y difciles de aislar. Al principio se pens que las

57

clulas madre especializadas podan generar clulas especializadas del mismo tipo; sin embargo, se ha observado que pueden llegar a generar clulas con una especializacin diferente de la original. As, clulas madre
neuronales de la mdula espinal han producido diferentes tipos de clulas sanguneas. Estudios en ratas han
obtenido clulas hepticas partiendo de clulas madre
de mdula espinal. Cada da surgen nuevos ejemplos de
clulas madre adultas que producen clulas especializadas diferentes de las esperadas. Esto demuestra que las
clulas madre presentes en el individuo adulto son mucho ms flexibles de lo que se pensaba. De aqu se derivan grandes expectativas de terapias innovadoras. Parece que las clulas madre adultas tienen un gran
potencial y quiz ms facilidades que las clulas madre
embrionarias, puesto que se pueden partir de clulas del
propio individuo y, por lo tanto, tienen la misma carga
gentica. Adems, evitan las controversias ticas de
manipular y destruir embriones.
Se ha demostrado que las clulas madre hematopoyticas pueden contribuir a la homeostasis de tejidos no
hematopoyticos. Las investigaciones sobre este tema
se han realizado en general mediante la evaluacin del
quimerismo que se puede producir en determinados rganos cuando se realiza un trasplante alognico de mdula sea o de clulas madre hematopoyticas extradas
de sangre perifrica despus de su movilizacin por medio de un factor estimulador. En algunos trabajos tambin se han utilizado como material de estudio casos en
que se ha hecho un trasplante de rgano. En ambas situaciones, donantes y receptores eran de sexo diferente,
lo que permita usar el cromosoma Y como marcador
para identificar la existencia de quimerismo en tejidos

Clula madre
con receptor
para quimocina
Quimocina
Integracin,
transdiferenciacin
y regeneracin
Zona de tejido daado

Figura 22. Mecanismo propuesto para explicar la migracin de las clulas madre a tejidos lesionados. La capacidad de las clulas madre adultas para, en determinadas situaciones, adquirir caractersticas de clulas especficas de otros tejidos se ha atribuido a un proceso calificado como plasticidad celular.

58

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

de casos femeninos. En los trasplantes de clulas hematopoyticas los donantes eran siempre masculinos,
mientras que una situacin inversa se us en los casos
de trasplantes de rganos, ya que el rgano trasplantado
siempre provena de una donante. En los trasplantes
experimentales de clulas hematopoyticas practicados
en ratones, en la hembra receptora se observaron clulas
con el marcador masculino en diferentes localizaciones,
que incluan msculo esqueltico y cardiaco, neuronas,
hepatocitos, clulas endoteliales, alveolos pulmonares,
bronquios, tracto digestivo y piel. Tambin se pudieron
comprobar en humanos diferentes porcentajes de clulas con el marcador masculino en diferentes sitios de la
receptora, que incluan osteoblastos, hepatocitos, epitelio gastrointestinal, cardiomiocitos, piel y clulas de
Purkinje. En los trasplantes de rganos tambin se ob-

(Captulo 2)

serv quimerismo en el rgano femenino trasplantado;


as, en el trasplante heptico se encontraron hepatocitos
con el marcador masculino y en los corazones trasplantados, cardiomiocitos con el marcador Y procedente de
clulas del receptor masculino. Todos estos datos sugieren que las clulas procedentes de la mdula sea pueden llegar a travs de la circulacin a los tejidos no
hematopoyticos, donde pueden adquirir caractersticas de las clulas del tejido donde se implanten. Las
lesiones tisulares pueden originar cambios en el microambiente de un rgano determinado y desempear
una importante funcin en la atraccin de las clulas
madre circulantes. Una posibilidad sera la produccin
en la zona daada de quimocinas especficas, las cuales
atraen a las clulas madre dotadas de receptores que les
permitan unirse con ellas (figura 22).

REFERENCIAS
1. Amit M: Feederlayer free culture system for human embryonic stem cells. Methods Mol Biol 2007;407:1120.
2. Bernardo AS, Docherty K: Stem cells and metabolic diseases. Biochem Soc Trans 2008;36(Pt 3):363365.
3. Bertrand JY, Kim AD, Teng S, Traver D: CD41+ cmyb+
precursors colonize the zebrafish pronephros by a novel
migration route to initiate adult hematopoiesis. Development
2008;135(10):18531862.
4. Biffi A, Cesani M: Human hematopoietic stem cells in gene
therapy: preclinical and clinical issues. Curr Gene Ther
2008;8(2):135146.
5. Carlson B: Embriologa humana y biologa del desarrollo.
3 ed. Espaa, Elsevier, 2005.
6. Chambers I, Silva J, Colby D, Nichols J, Nijmeijer B et al.:
Nanog safeguards pluripotency and mediates germline
development. Nature 2007;450(7173):12301234.
7. Choumerianou DM, Dimitriou H, Kalmanti M: Stem
cells: promises versus limitations. Tissue Eng Part B Rev
2008;14(1):5360.
8. Fernndez GMP: Manual de biologa del desarrollo. 3 ed.
Mxico, El Manual Moderno, 2002.
9. Flanagan LA, Lu J, Wang L, Marchenko SA, Jeon NL et
al.: Unique dielectric properties distinguish stem cells and
their differentiated progeny. Stem Cells 2008;26(3):656665.
10. Funa NS, Saldeen J, Akerblom B, Welsh M: Interdependent
fibroblast growth factor and activin A signaling promotes the
expression of endodermal genes in differentiating mouse
embryonic stem cells expressing Src Homology 2domain
inactive Shb. Differentiation 2008;76(5):443453.
11. Gonzlez LGM, Sosa LCA, Jurez MJL, Trejo BNI,
Nez SM et al.: Terapia celular y aplicacin de clulas
madre en la enfermedad de Parkinson (Revisin). Neurol
Neurocir Psiquiat 2007;40(3):8091.
12. Guo W, Lasky JL, Chang CJ, Mosessian S, Lewis X et al.:
Multigenetic events collaboratively contribute to Ptennull
leukaemia stemcell formation. Nature 2008;453(7194):
529533.

13. Hanley NA: Commonalities in the endocrinology of stem


cell biology and organ regeneration. Mol Cell Endocrinol
2008;288(12):15.
14. Hanyu NK, Sonobe NH, Tanigawa A, Lasko P, Nakamura
A: Drosophila Pgc protein inhibits PTEFb recruitment to
chromatin in primordial germ cells. Nature 2008;451(7179):
730733.
15. Hernndez RP: Medicina regenerativa II. Aplicaciones,
realidad y perspectivas de la terapia celular. Rev Cubana
Hematol Inmunol Hemoter 2006;22:111.
16. Hernndez RP: Regeneracin biolgica. Secretos de la naturaleza. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 2006;
22:110.
17. Hochstim C, Deneen B, Lukaszewicz A, Zhou Q, Anderson DJ: Identification of positionally distinct astrocyte subtypes whose identities are specified by a homeodomain code.
Cell 2008;133(3):510522.
18. IshizuyaOka A, Shi YB: Thyroid hormone regulation of
stem cell development during intestinal remodeling. Mol
Cell Endocrinol 2008;288(12):7178.
19. Jun HS: Regeneration of pancreatic beta cells. Front Biosci
2008;13:61706182.
20. Kakarala M, Wicha MS: Implications of the cancer stem
cell hypothesis for breast cancer prevention and therapy. J
Clin Oncol 2008;26(17):28132820.
21. Lee M, Vasioukhin V: Cell polarity and cancercell and tissue polarity as a noncanonical tumor suppressor. J Cell Sci
2008;121(Pt 8):11411150.
22. LinksIzadpanah R, Kaushal D, Kriedt C, Tsien F, Patel B
et al.: Longterm in vitro expansion alters the biology of adult
mesenchymal stem cells. Cancer Res 68(11):42294238.
23. Links Schulz RM, Zscharnack M, Hanisch I, Geiling M,
Hepp P et al.: Cartilage tissue engineering by collagen
matrix associated bone marrow derived mesenchymal stem
cells. Biomed Mater Eng 2008;18(1 Suppl):S55S70.
24. Liu T, Wu J, Huang Q, Hou Y, Jiang Z et al.: Human
amniotic epithelial cells ameliorate behavioral dysfunction

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo

25.

26.

27.

28.
29.

30.

31.

32.

33.

34.
35.

36.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

37.

and reduce infarct size in the rat middle cerebral artery occlusion model. Shock 2008;29(5):603611.
Lohmann F, Bieker JJ: Activation of Eklf expression during hematopoiesis by Gata2 and Smad5 prior to erythroid
commitment. Development 2008;135(12):20712082.
Loo D, Beltejar C, Hooley J, Xu X: Primary and multipassage culture of human fetal kidney epithelial progenitor cells.
Methods Cell Biol 2008;86:241255.
Lorthongpanich C, Yang SH, Piotrowska NK, Parnpai R,
Chan AW: Development of single mouse blastomeres into
blastocysts, outgrowths and the establishment of embryonic
stem cells. Reproduction 2008;135(6): 805813.
Mantel C, Broxmeyer HE: Sirtuin 1, stem cells, aging, and
stem cell aging. Curr Opin Hematol 2008;15(4):326331.
Masui S, Ohtsuka S, Yagi R, Takahashi K, Ko MS et al.:
Rex1/Zfp42 is dispensable for pluripotency in mouse ES
cells. BMC Dev Biol 2008;8:45.
McElroy SL, Kee K, Tran N, Menses J, Giudice LC et al.:
Developmental competence of immature and failed/abnormally fertilized human oocytes in nuclear transfer. Reprod
Biomed Online 2008;16(5):684693.
Mndez BE, Snchez GDJ, Ramrez SI, Ocharan HE,
Nnez SM et al.: Effect of caveolin1 scaffolding peptide
and 17bestradiol on intracellular calcium kinetics evoked
by angiotensinII in human vascular smooth muscle cells.
Am J Physiol Cell Physiol 2007;293(6):19531961.
Min IM, Pietramaggiori G, Kim FS, Passegu E, Stevenson KE et al.: The transcription factor EGR1 controls both
the proliferation and localization of hematopoietic stem cells.
Cell Stem Cell 2008;2(4):380391.
Moore H, Udayashankar R, Aflatoonian B: Stem cells for
reproductive medicine. Mol Cell Endocrinol 2008;288(12):
104110.
Moore KL, Persaud TV: Embriologia clinica. 7 ed. Espaa, Elsevier, 2006.
Navarrolvarez N, Soto GA, Yuasa T, Yamatsuji T, Shirakawa Y et al.: Longterm culture of Japanese human
embryonic stem cells in feederfree conditions. Cell Transplant 2008;17(12):2733.
Parekkadan B, Berdichevsky Y, Irimia D, Leeder A, Yarmush G et al.: Cellcell interaction modulates neuroectodermal specification of embryonic stem cells. Neurosci Lett
2008;438(2):190195.
Perin L, Giuliani S, Sedrakyan S, DA Sacco S, De Filippo
RE: Stem cell and regenerative science applications in the
development of bioengineering of renal tissue. Pediatr Res

59

2008;63(5):467471.
38. Rohen JW: Embriologa funcional. Una perspectiva desde
la biologa del desarrollo. 3 ed. Mxico, Panamericana,
2008.
39. Sadler TW: Langman, embriologa mdica. 10 ed. Mxico,
Panamericana, 2007.
40. Snchez GDJ, Moro MA, Castillo HC, Hernndez PR,
Medina SR et al.: Ozone exposure induces iNOS expression
and tyrosine nitration in rat aorta. Environ Toxicol Pharmacol 2004;17:17.
41. Snchez GDJ, Trejo BNI: Biologa celular y molecular.
Mxico, D.F., Editorial Alfil, 2006.
42. Snchez GDJ, Trejo BNI: Prcticas de histologa. Mxico,
Editorial Alfil, 2007.
43. Tare RS, Babister JC, Kanczler J, Oreffo RO: Skeletal
stem cells: Phenotype, biology and environmental niches
informing tissue regeneration. Mol Cell Endocrinol 2008;
288(12):1121.
44. Tian X, Kaufman DS: Differentiation of embryonic stem
cells towards hematopoietic cells: progress and pitfalls. Curr
Opin Hematol 2008;15(4):312318.
45. Tse W, Bunting KD, Laughlin MJ: New insights into cord
blood stem cell transplantation. Curr Opin Hematol 2008;
15(4):279284.
46. Umezawa A, Makino H: Cell source for regenerative medicine. Nippon Rinsho 2008;66(5):865872.
47. Van Blerkom J: Mitochondria as regulatory forces in oocytes, preimplantation embryos and stem cells. Reprod
Biomed Online 2008;16(4):553569.
48. Waghmare SK, Bansal R, Lee J, Zhang YV, McDermitt
DJ et al.: Quantitative proliferation dynamics and random
chromosome segregation of hair follicle stem cells. EMBO J
2008;27(9):13091320.
49. Wasserstrom A, Adar R, Shefer G, Frumkin D, Itzkovitz
S et al.: Reconstruction of cell lineage trees in mice. PLoS
ONE 2008;3(4):e1939.
50. Wei W, Wen L, Huang P, Zhang Z, Chen Y et al.: Gfi1.1
regulates hematopoietic lineage differentiation during zebrafish embryogenesis. Cell Res 2008;18(6):677685.
51. Xing JG, Lee LE, Fan L, Collodi P, Holt SE et al.: Initiation
of a zebrafish blastula cell line on rainbow trout stromal cells
and subsequent development under feederfree conditions
into a cell line, ZEB2J. Zebrafish 2008;5(1):4963.
52. Yun C, Mendelson J, Blake T, Mishra L, Mishra B: TGF
beta signaling in neuronal stem cells. Dis Markers 2008;
24(45):251255.

60

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 2)

Captulo

Biologa celular y molecular


de las clulas madre

INTRODUCCIN

La apoptosis es la muerte celular programada o suicidio


celular controlado genticamente; el envejecimiento celular que causa apoptosis tambin es programado. Esta
forma de muerte es diferente de la muerte no apoptsica
o por necrosis. La apoptosis tiene un papel importantsimo en el desarrollo embriolgico de prcticamente
todos los tejidos y rganos. En la apoptosis es posible
distinguir diversas fases: fase D1, en la que se produce
la expresin de nuevos genes y protenas que inducen la
siguiente fase, o fase F, donde se produce la fragmentacin del DNA y previa de la fase D2, donde finalmente
se produce la fragmentacin de la clula en los denominados cuerpos apoptsicos. El rasgo caracterstico de la
muerte celular por apoptosis son las membranas celulares intactas aunque la clula se est destruyendo por
dentro. Las clulas apoptsicas son eosinfilas con HE.
La apoptosis es inducida por p53 a travs de la transcripcin de genes como Bax. Otros inductores de apoptosis son FAS/APO1/CD95. Se trata de dos anticuerpos monoclonales capaces de inducir la muerte celular
programada y dirigidos contra los antgenos Fas y
APO1, que en realidad son el mismo y corresponden
a receptores de membrana de los factores de necrosis tumoral (FNT) y de crecimiento nervioso (NGF). El ligando especfico de Fas, FasL, es una protena de membrana. Fas se expresa en muchos tejidos y en particular
en los linfocitos, donde induce la apoptosis una vez terminada la respuesta inmunolgica.
NFkb es un factor de transcripcin que produce la
induccin de diversos genes celulares (citocinas y sus
receptores) y que podra tambin desempear un importante papel en la apoptosis. Cuando NFkb produce
heterodmeros p50/p52 se genera la activacin de la

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Las clulas madre pasan a travs de una secuencia regular de crecimiento y divisin llamada ciclo celular, el
cual es la secuencia cclica y ordenada de procesos en
que la clula crece y se divide en dos clulas hijas. Consiste en interfase, mitosis y citocinesis. El lapso requerido para completar un ciclo celular es el de regeneracin.
Las clulas que no se estn dividiendo no pertenecen a
este ciclo, sino que estn fuera, en fase G0. La duracin
del ciclo celular vara segn la estirpe celular, siendo la
duracin media del ciclo completo de unas 24 h. El ciclo
celular se divide en cuatro fases o cuatro estados metablicos distintos que se denominan G1, S, G2 (interfase)
y M (mitosis). La mitosis o periodo de divisin o fase
M puede durar desde pocas horas hasta varios das, dependiendo del tipo de clula y de factores externos
como la temperatura y los nutrimentos disponibles; a su
vez se divide en dos sucesos:
1. Mitosis o divisin nuclear (cariocinesis): es la divisin celular en que una clula madre se divide en
dos clulas hijas idnticas. Esta fase se divide en
profase, metafase, anafase y telofase. En mitosis
es donde se visualizan los cromosomas al microscopio al ser paralizados con colchicina. Tiene una
duracin promedio de 1 h.
2. Citocinesis o divisin citoplasmtica para generar
dos clulas hijas: habitualmente, pero no siempre,
la citocinesis acompaa a la mitosis en una secuencia coordinada de procesos.

61

62

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

transcripcin de Bcl2, pero no cuando se generan homodmeros p50/p50 que reprimen su expresin.
La activacin de endonucleasas es dependiente de
Ca++ y Mg++ y genera la digestin enzimtica (endonuclelisis) y, por lo tanto, los fragmentos de DNA. En
este sentido es importante el papel de las enzimas fijadoras de calcio, como la calmodulina, que a travs de la
activacin de la adenilatociclasa causan un aumento de
AMPc y de la actividad proteincinasa que generan la
muerte celular.

(Captulo 3)

cromosmico de una especie es mantenida por la mitosis. Las molculas y estructuras citoplasmticas aumentan en nmero; en la fase S los cromosomas se duplican
y en la fase G2 comienza la condensacin de los cromosomas y el ensamblado de las estructuras especiales
requeridas para la mitosis y la citocinesis. Durante la
mitosis, los cromosomas duplicados son distribuidos
entre los dos ncleos hijos, y en la citocinesis se divide
el citoplasma, separando la clula materna en dos clulas hijas (figura 31).

Fase o intervalo G1
MITOSIS

La interfase es el periodo durante el cual la clula crece,


replica su DNA y se prepara para la siguiente divisin.
Este periodo est comprendido entre divisiones celulares y es la fase ms larga del ciclo celular, ocupando casi
95% del ciclo. Consta de varias fases (G1, S y G2).
A excepcin de los gametos (del griego gametes, esposo, y gamete, esposa), cada clula somtica de un individuo posee un nmero idntico de cromosomas (46
sencillos o 23 pares en el ser humano). De cada progenitor proviene un miembro del par. Cada miembro del par
se denomina homlogo y as el ser humano tiene 23 pares de homlogos. El nmero original de cromosomas
de una clula se denomina nmero diploide (del griego
di, doble, y ploos, pliegue). La continuidad del nmero

G (del ingls gap, intervalo) es la primera fase del ciclo


celular en que existe crecimiento celular con sntesis de
protenas y de RNA. En esta fase tienen lugar las actividades de la clula: secrecin, conduccin, endocitosis,
etc. Comenzando a partir de la citocinesis de la divisin
anterior, la clula hija es pequea y posee un bajo contenido de ATP resultante del gasto efectuado en el ciclo
anterior, por lo que en este periodo se produce la acumulacin del ATP necesario y el incremento de tamao
celular. Es el periodo que trascurre entre el fin de una
mitosis y el inicio de la sntesis de DNA. En esta fase la
clula es diploide o 2n; tiene una duracin de entre 6 y
12 h y durante este tiempo la clula duplica su tamao
y su masa debido a la continua sntesis de todos sus componentes como resultado de la expresin de los genes
que codifican las protenas responsables de su fenotipo
particular. Es el periodo que ms variacin de tiempo

La clula duplica su tamao


Clulas Fase G
1
hijas

Se separan
los dos juegos
de cromosomas

Fase S

Divisin
clular

Mitosis

El citoplasma
se divide

Duplicacin del DNA (4n)


y protenas asociadas

Fase G 2
Los cromosomas
empiezan a condensarse
Figura 31. Esquema del ciclo celular. La divisin celular se compone de mitosis o divisin del ncleo y citocinesis o divisin del
citoplasma. La mitosis ocurre despus de completarse las tres fases preparatorias que constituyen la interfase: fase G1, S y G2.

Biologa celular y molecular de las clulas madre


presenta, pudiendo durar das, meses e incluso aos. Las
clulas que no se dividen nuevamente (como las neuronas y las del msculo esqueltico) pasan toda su vida en
este periodo, que en estos casos se denomina G0.

Intervalo S o fase S
Es la fase de sntesis o replicacin del DNA y es la segunda fase del ciclo. Comienza cuando la clula adquiere el tamao suficiente y el ATP necesario. Con la
duplicacin del DNA el ncleo contiene el doble de protenas nucleares y de DNA que al principio. Tiene una
duracin de unas 6 a 8 h (figura 32).

Fase G2
Es el tiempo que transcurre entre la duplicacin del
DNA y el inicio de la mitosis. Dado que el proceso de
sntesis consume gran cantidad de energa, la clula entra nuevamente en un proceso de crecimiento y adquisicin de ATP que proporcionar energa durante el proceso de mitosis. En esta fase contina la duplicacin de
protenas y RNA, y el contenido de DNA es tetraploide

Organismo diploide
unicelular

Organismo diploide
multicelular

Fecundacin
Mitosis

Gametos
haploides
Cigoto
diploide

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Mitosis

Mitosis
Mitosis

Organismos
diploides

Organismo
diploide

Figura 32. Esquema de la divisin celular. A. Organismos


unicelulares. La divisin celular es una verdadera reproduccin, ya que por este mecanismo se producen dos clulas
hijas. B. Organismos multicelulares. stos derivan de una
sola clula o cigoto que da origen al organismo completo por
medio de divisiones mltiples y repetidas.

63

o 4n. Si se observa al microscopio, se perciben cambios


en la estructura celular que indican el principio de la
divisin celular. Tiene una duracin de entre 3 y 4 h.
Los organismos multicelulares se derivan de una sola
clula o cigoto. Las divisiones mltiples de sta y sus
descendientes determinan la formacin, desarrollo y
crecimiento del individuo. Sin embargo, en organismos
unicelulares la divisin celular es en realidad una verdadera reproduccin, ya que por este proceso se producen
dos clulas hijas idnticas a la clula progenitora.
La mitosis es el proceso de separacin de cromosomas y divisin de las clulas eucariotas, clulas somticas (clulas no germinales) que llevan la copia del material gentico. Este proceso asegura que cada clula que
nace de otra tenga los mismos datos genticos que la
clula madre. La mitosis cumple la funcin de distribuir
los cromosomas duplicados de tal modo que cada nueva
clula obtenga una dotacin completa y similar a la clula madre y a su clula hermana de cromosomas. La
capacidad de la clula para llevar a cabo esta distribucin depende del estado condensado de los cromosomas
durante la mitosis y del acoplamiento de microtbulos
denominado huso mittico. En los estadios tempranos
de la mitosis, cada uno de los cromosomas consiste en
dos copias idnticas, llamadas cromtidas, que se mantienen unidas por sus centrmeros. Al mismo tiempo se
organiza el huso, cuya formacin se inicia a partir de los
centrosomas. Tanto en las clulas animales como en las
vegetales, el entramado del huso est formado por fibras
que se extienden de los polos al ecuador de la clula.
Otras fibras estn unidas a las cromtidas al nivel de los
cinetocoros (protenas asociadas con los centrmeros).
La profase finaliza con la desintegracin de la envoltura nuclear y la desaparicin de los nucleolos. Durante
la metafase (del griego meta, despus), las cromtidas,
dirigidas por las fibras del huso, se mueven hacia el centro de la clula. Al final de la metafase se disponen en el
plano ecuatorial. Durante la anafase (del griego ana, en
oposicin) se separan las cromtidas hermanas y migran
a los polos opuestos. Durante la telofase (del griego telos,
finalizacin) se forma una envoltura nuclear alrededor de
cada grupo de cromosomas, el huso comienza a desintegrarse y los cromosomas se desenrollan para entrar nuevamente a interfase. El plano de la divisin celular se
establece en la fase G2 tarda del ciclo celular, cuando los
microtbulos del citoesqueleto se reorganizan en una
estructura circular conocida como banda de preprofase.
Aunque esta banda desaparece al comenzar la profase,
determina la ubicacin futura del ecuador y de la placa
celular. Los microtbulos de la banda se reensamblan
luego en el huso, en una zona clara que se origina alrededor del ncleo en el curso de la profase (figura 33).

64

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 3)
Simtrico

A
Clula
madre

Asimtrico

Cromosomas
condensados
C
B

Cromatina

Clulas
hijas
Clula madre
Clulas diferenciadas

Figura 33. En la interfase, los cromosomas son visibles dentro del ncleo slo como delgadas hebras de material filamentoso
llamado cromatina. Por medio del proceso de mitosis los cromosomas se distribuyen de tal manera que cada nueva clula obtiene
la mitad del material gentico. A. Cuando comienza la mitosis, los cromosomas condensados, que ya se duplicaron durante la
interfase, se hacen visibles bajo el microscopio ptico. Finalmente, la divisin celular mittica produce dos clulas hijas genticamente idnticas a la clula original. 1. Mitosis. 2. Profase. 3. Metafase. 4. Anafase. 5. Telofase. 6. Citocinesis. B. Fisin binaria
en bacterias: este mecanismo de reproduccin celular es asexual, y se muestra una bacteria dividindose por la mitad (citocinesis). C. Divisin celular asimtrica de las clulas madre.

MEIOSIS

Su nombre deriva del griego meiosis, reduccin, y


meion, menor. Es un proceso de reduccin cromosmica a la mitad pero sin perder la informacin gentica que
mantiene los rasgos estructurales y funcionales del organismo. En la meiosis I (etapa reduccional) se reduce
el nmero diploide (4n) de cromosomas a la mitad o
haploide (2n), pero aun los cromosomas son dobles. En
la meiosis II (etapa ecuacional) se mantiene el nmero
cromosmico haploide (del griego palos, nico) conseguido en la etapa anterior, pero los cromosomas son
simples (1n). La n significa 23 cromosomas simples.
La meiosis proporciona, a travs de la reproduccin
sexual, una variabilidad gentica gracias al sobrecruzamiento, y la reduccin evita que en la fecundacin haya
un alto nmero de cromosomas con el mismo material
gentico que el de las clulas progenitoras, lo que les da
ventaja gentica a los organismos superiores que se perpetan por reproduccin sexual.
En las clulas germinales, la meiosis es el proceso de
divisin celular en el que se forman los gametos haploides a partir de las clulas germinales diploides. En la fecundacin, los gametos (vulos y espermatozoides) haploides se fusionan, restablecindose en el cigoto el
nmero diploide. Las clulas somticas son diploides
durante casi todo el ciclo de vida, mientras que los ga-

metos son haploides. Los errores en la meiosis son responsables de las principales anomalas cromosmicas.
La meiosis tiene una primera divisin reduccional,
meiosis I o primera divisin meitica, y una segunda divisin ecuacional, meiosis II o segunda divisin meitica. Entre estas dos etapas consecutivas no existe la
etapa S, por lo que no se duplica el material gentico,
sino que se reduce. A partir de una clula 4n se obtienen
cuatro clulas 1n. En la especie humana, a partir de cada
espermatocito primario diploide se forman, en el hombre, cuatro espermtides haploides, que posteriormente
se diferencian en cuatro espermatozoides (figura 34).
Por otra parte, en la mujer cada ovocito primario diploide formar un solo ovocito haploide; los ncleos haploides restantes forman los cuerpos o corpsculos
polares que se desintegran (figura 35).

Control del ciclo celular


En el ao 2001, Paul M. Nurse, Leland H. Hartwell y R.
Timothy Hunt obtuvieron el premio Nobel de Medicina
y Fisiologa por haber descubierto las ciclinas y las cinasas dependientes de ciclinas o CDC (CDK, por sus siglas en ingls). La regulacin del crecimiento y de la
divisin celular es muy compleja. La divisin celular se
activa por las seales de transduccin intracelulares que
a su vez han sido puestas en marcha por la estimulacin

Biologa celular y molecular de las clulas madre


de los factores de crecimiento sobre sus receptores. El
ciclo celular est bajo un control gentico muy estricto
en el que interviene un complejo entramado de genes y
protenas que aseguran la normal proliferacin y divisin celular.
Una de las caractersticas que definen a las clulas tumorales es su capacidad para entrar en el ciclo celular
y progresar bajo condiciones en las cuales una clula
normal estara en periodo quiescente G0. La regulacin
del ciclo celular es fundamental para mantener el equilibrio homeosttico entre crecimiento celular, diferenciacin, supervivencia y muerte celular. En el adulto algunas clulas estn continuamente entrando en ciclo
celular; tal es el caso de las clulas hematopoyticas que
estn convenientemente activadas por los factores de
crecimiento, pero otras pasan largo tiempo en periodo
G0, como las clulas hepticas (de 1 a 2 aos), e incluso
toda la vida, como ocurre con las neuronas.

Puntos de restriccin del ciclo celular


El ciclo celular est finamente regulado. Esta regulacin ocurre en distintos momentos y puede involucrar
la interaccin de diversos factores; entre ellos la falta de
nutrimentos y los cambios en temperatura o pH pueden
hacer que las clulas detengan su crecimiento y su divisin. Cuando las clulas normales cesan su crecimiento
por diversos factores, se detienen en un punto tardo de
la fase G1, denominado punto de restriccin R o priEspermatocito
primario
despus de la
replicacin
de DNA

DNA 4n y
46 cromosomas
dobles
Meiosis I

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

DNA 2n y 23
cromosomas
dobles

Ovocito primario
despus de la
replicacin de
DNA

65

DNA 4n y 46
cromosomas
dobles
Meiosis I
DNA 2n y 23
cromosomas
dobles

Ovocito
secundario

Meiosis II
Ovocito
maduro
(22 + X)

DNA 1n y 23
cromosomas
dobles
Cuerpos polares
(22 + X)

Figura 35. Esquema de la meiosis en la mujer. Cada ovocito primario diploide 4n formar un solo ovocito haploide 1n;
los ncleos haploides restantes formarn los cuerpos o corpsculos polares que se desintegran.

mer punto de control del ciclo celular. En algunos casos,


antes de alcanzar el punto R, las clulas pasan de la fase
G1 a un estado especial de reposo, llamado G0, en el cual
pueden permanecer durante das, semanas o aos. Una
vez que las clulas sobrepasan el punto R, siguen necesariamente a travs del resto de las fases del ciclo y luego se dividen.
El punto de restriccin G2M se presenta al final de
la fase G2, en la que la clula debe comprobar dos condiciones antes de proseguir: que ha duplicado la masa celular para dar lugar a dos clulas hijas y que ha completado
la replicacin del DNA una sola vez (tetraploide o 4n).
El punto de restriccin M regula la fase de mitosis.
Slo permite continuar con la divisin celular si todos
los cromosomas estn alineados sobre el huso mittico
y ste est intacto (figura 36).

Espermatocito
secundario

CICLINAS

Meiosis II
(22 + X)

DNA 1n
y 23
cromosomas
simples

(22 + Y)

Espermtides

Figura 34. Esquema de la meiosis en el hombre. A partir


de cada espermatocito primario diploide 4n se obtienen cuatro espermtides haploides 1n, que posteriormente se diferenciarn en cuatro espermatozoides.

Las ciclinas son una familia de protenas que, como lo


indica su nombre, son sintetizadas y destruidas durante
una determinada fase del ciclo celular. Hasta la fecha se
han descrito las siguientes ciclinas: A, B1, B2, C, D1,
D2, D3, E, F, G1, G2, H, I, K, T1 y T2. Todas ellas contienen una regin comn conocida como secuencia
ciclina (cyclin box), de 150 aminocidos, que es un dominio relativamente conservado y responsable de la
unin y activacin de las CDC. Las mutaciones en esta
regin inhiben tanto la unin como la activacin. Las

66

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Punto de
restriccin R
CDC 4/6 + ciclina D

CDC2 + ciclina E
Punto de
control G1

CDC2 + ciclina A

(Captulo 3)

cin del DNA. As, el complejo ciclina A/CDC2 parece


tener un papel en el control de la elongacin de la sntesis de DNA.

MUERTE CELULAR
PROGRAMADA (APOPTOSIS)

En la apoptosis pueden diferenciarse varias fases:


Punto de
control G1

Punto de
control G2
CDC2 + ciclina B/A

Figura 36. Modelo del motor CDCciclina durante el ciclo


celular en clulas eucariotas y de los puntos de restriccin. El
punto de restriccin R se manifiesta en la fase G1. El punto
de restriccin G2M se presenta al final de la fase G2. El
punto de restriccin M se ubica en la mitosis y slo permite
continuar con la divisin celular si todos los cromosomas
estn alineados sobre el huso mittico y ste est intacto.

ciclinas C, D y E (o ciclinas de G1) son protenas de vida


corta que funcionan principalmente durante la fase G1
y en la transicin de G1S, siendo destruidas por la va
de la ubicuitina.

Cinasas dependientes de ciclina (CDC)


Las cinasas anexan un grupo fosfato a las protenas. Las
CDC y las ciclinas son las principales controladoras del
ciclo celular, provocando que la clula pase de G1 a S o
de G2 a M. Las CDC son una familia de protenas cinasas que se unen a ciclinas especficas y son activadas por
ellas. Hasta la fecha se han descrito al menos nueve
CDC: CDC2 (tambin llamada CDC1, p34 o FPM, factor promotor de la fase M o factor promotor de la maduracin y que est formado por la CDC y las ciclinas que
desencadenan la progresin del ciclo celular, como
ciclina B), CDC2, CDC3, CDC4, CDC5, CDC6,
CDC7, CDC8 y CDC9. Las CDC4, CDC5 y CDC6 forman complejos con las ciclinas de la familia D y funcionan durante la fase G0/G1 del ciclo.
Una de las funciones de los complejos ciclina
D/CDC4 es fosforilar la protena del retinoblastoma
(Rb) y activar as la expresin de genes necesarios para
la entrada en la fase S. La CDC2 puede unirse tambin
a miembros de la familia de la ciclina D, pero ms
comnmente se asocia con las ciclinas A y E, y est
implicada en el inicio de la fase S, es decir, en la replica-

1. Efectora: adopcin sin retorno del compromiso


hacia la muerte. Se caracteriza por el aumento en
el contenido de calcio (Ca++) intracelular, que origina la activacin de ciertos grupos enzimticos
(endonucleasas y proteasascaspasas), junto con
cambios en el citoesqueleto celular, produciendo
cambios en el tamao y forma celular.
2. Degradativa: se degradan los cidos nucleicos y
hay ms cambios en la membrana celular. Los
cuerpos apoptsicos son fagocitados por macrfagos, impidiendo la salida del contenido celular al
exterior y evitando inflamacin. En esta fase se activan las endonucleasas que se encargan de fragmentar el DNA; adems, se producen cambios
marcados en el citoesqueleto y se condensa la cromatina.
3. Limpieza: los macrfagos (clulas fagocticas
que captan partculas extraas como polvo y carbn) eliminan todas las clulas apoptsicas, sin
que eso afecte al tejido circundante, atrados por
ligandos especficos; en el caso de los epitelios, las
clulas vecinas fagocitan los cuerpos apoptsicos
(figura 37).

Necrosis y apoptosis
En el organismo son comunes dos formas de muerte celular: necrosis y apoptosis. Las caractersticas morfolgicas de ambas permiten, en la mayora de los tejidos,
establecer claras diferencias. En la apoptosis destacan
las alteraciones morfolgicas del ncleo frente a las del
citoplasma, a la inversa de lo que ocurre en la necrosis
en general. A diferencia de la apoptosis, la necrosis es
una forma de muerte celular que resulta de un proceso
pasivo, accidental, y que es consecuencia de la destruccin progresiva de la estructura con alteracin definitiva de la funcin normal en un dao irreversible. Este
dao es desencadenado por cambios ambientales como
isquemia, temperaturas extremas y traumatismos. En la

Biologa celular y molecular de las clulas madre


Enzimas lticas

Prdida de
microvellosidades
y uniones

Cuerpo
apoptsico

Cambios nucleares

Fragmentacin

67

Cuerpo
apoptsico

Fagocitosis

Figura 37. Esquema de la apoptosis o muerte celular programada. Este proceso celular es dependiente de energa; al realizarse
de manera controlada, no afecta a las clulas vecinas. A. Cuando comienza este proceso, se sintetizan enzimas lticas y se producen cambios estructurales, lo que se llama cebamiento. B. Las clulas pierden contacto con sus vecinas, su citoplasma y su ncleo
se retraen y los cromosomas se fragmentan. C. Se forman los fragmentos apoptsicos por fragmentacin celular; el ncleo tambin se fragmenta. D. Las clulas vecinas fagocitan los cuerpos apoptsicos.

necrosis se observan numerosas clulas vecinas sometidas a este proceso, que cubren una extensin variable
con desintegracin. La destruccin de la membrana
celular permite el escape al exterior de elementos txicos que provocan un proceso inflamatorio que tendr
efecto nocivo en el organismo segn la extensin del
proceso y la cromatina sufre una dispersin irregular
(figura 38).

FAMILIAS DE MOLCULAS
RELACIONADAS CON LA APOPTOSIS

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Receptores de muerte
Las molculas implicadas en el proceso de apoptosis
que se han mantenido a lo largo de la evolucin desarrollan un programa de apoptosis iniciado por seales que
provienen del interior celular. Cuando la clula es potencialmente peligrosa para el sistema donde est integrada, se pone en marcha la maquinaria de apoptosis
para eliminarla.
Los mamferos han desarrollado mecanismos para
llevar a cabo esta forma de apoptosis, que es especialmente importante en el sistema inmunitario. En la apoptosis instructiva tienen un papel fundamental los receptores de muerte, situados en la superficie de la clula, y
que reciben la seal de ligandos de muerte especficos
para cada uno de ellos. Los receptores pueden dar la
seal directamente a las caspasas en pocos segundos, disparando as el programa de apoptosis.

Los receptores de muerte pertenecen a la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral (en espaol, FNT, y en ingls, TNF) (TNFR1), cuyos miembros
tienen en comn un dominio extracelular rico en cistena. Otro rasgo comn a todas estas molculas sealadoras de apoptosis es la presencia de una secuencia
situada en su dominio intracitoplasmtico, que servira
para acoplar al receptor con el resto de la maquinaria
apoptsica. La va de receptores transmembrana establece conexiones con el espacio extracelular, recibiendo seales proapoptsicas desde el exterior y de las clulas adyacentes. Existen dos familias de receptores de
muerte (figura 39):

Apoptosis

Plasmalema
intacto

Normal

Fragmentos
apoptsicos

Fuga de
material
nocivo

Necrosis

Fragmentacin
del plasmalema

Figura 38. Apoptosis y necrosis (esquema comparativo).


Centro, clula normal. A la derecha, signos de necrosis; a
la izquierda, cambios celulares de apoptosis con cuerpos
apoptsicos y conservacin de organelos hasta estadios
avanzados del proceso.

68

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


FasL

TNF
Mitocondria
Apoptosis

TNFR1

Fas

TRADD
FADD
Cas8
Citocromo C

Caseff
DNosa

Degradacin
de protenas
Muerte
celular

Figura 39. Esquema de la va de receptores transmembrana. Se muestran las dos familias de receptores de
muerte: protena CD95 (APO1/Fas) y receptor 1 del factor
de necrosis tumoral (TNFR1). Estas vas establecen conexiones con el espacio extracelular recibiendo seales proapoptsicas desde el exterior y activan el sistema de caspasas efectoras (Caseff) para inducir la apoptosis.

1. Protena CD95 (APO1/Fas).


2. Receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1).

Familia de las caspasas


En el mecanismo molecular que controla la apoptosis actan varios agentes, de los cuales uno de los ms importantes y mejor estudiados es el complejo cisteinoasprtico, proteasas denominadas caspasas. Se han descrito 11
caspasas en clulas humanas que provocan una degradacin proteica bien definida hasta llegar a la formacin de
cuerpos apoptsicos. Algunas caspasas son iniciadoras y otras efectoras del proceso cataltico, y actan
sobre endonucleasas, que son las responsables directas
de la fragmentacin del DNA. La cadena de activacin
por corte proteica tiene sucesivos cortes dependientes de
la ubicacin del cido asprtico que se repite en la estructura de la enzima. Se han descrito hasta 40 sustratos en
la catlisis, proceso que en clulas cultivadas demora entre 30 y 40 min. La activacin de las caspasas, que existen
en calidad de procaspasas inactivas, se produce por diversas vas en que participan varios complejos moleculares.

La apoptosis se desarrolla por


vas dependiente e independiente
de caspasas
La muerte independiente de caspasas puede resultar del
estmulo causado por la permeabilizacin de la mem-

(Captulo 3)

brana lisosomal (LMP) con la subsiguiente liberacin


de catepsinproteasas. La va dependiente de caspasas
tiene dos rutas principales:
a. La va intrnseca involucra a MOMP, la cual resulta en el ensamblaje del complejo de activacin
de caspasas a travs de caspasa 9 y Apaf1 (el apoptosoma).
b. La va extrnseca involucra la estimulacin de
miembros de la familia de los receptores de TNF,
CD95 (Fas)Apo1, TRAIL (receptores de muerte).
Existen dos vas de sealizacin de apoptosis donde interviene la mitocondria en el panorama de muerte celular:
1. La primera es por medio de MOMP (mitochondrial outer membrane permeabilization), que ocasiona la creacin de un poro formado por las protenas de la familia de Bcl2, Bax y Bak, activadas
por su dominio BH3 en respuesta a una seal de
apoptosis, resultando en la liberacin de protenas
del espacio intermembrnico de la mitocondria incluyendo a citocromo C, Smac/DIABLO y Omi/
HtrA2. El citocromo C activa a APAF1, la cual
se oligomeriza y forma el apoptosoma, el cual activa a la caspasa 9. La caspasa 9 activa a las caspasas ejecutoras. El inhibidor de las caspasas (IAP)
bloquea la funcin de la caspasa 9 y es bloqueado
por Smac y Omi.
2. La segunda ruta de muerte celular es desencadenada por especies reactivas de oxgeno (ERO) que
cambian la permeabilidad de la membrana interna, provocando edema y ruptura de la matriz; este
tipo de muerte provoca un proceso semejante a la
muerte por necrosis. Mientras que las evidencias
indican que estas dos rutas de apoptosis a travs de
la mitocondria son distintas, se cree que puede haber superposicin entre ellas.

APOPTOSOMA

En todos estos sistemas, el complejo formado por receptores, adaptadores y procaspasa 9 se denomina apoptosoma. Es la formacin de este complejo lo que da lugar
a la activacin de la procaspasa 9. En el caso de Apaf1,
para llevar a cabo el proceso de formacin de este apoptosoma es necesaria la presencia de ATP y de citocromo
C. De esta manera, la liberacin de citocromo C por
parte de la mitocondria puede mediar la activacin de la
procaspasa 9.

Biologa celular y molecular de las clulas madre

69

Cuadro 31. Marcadores de superficie de las clulas madre pluripotentes


Tipo de clula
Antgeno
SEA1
SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
GCTM20
CD9
Osteopontino
PECAM1
(CD31)

28 clulas

Mrula

MCI

Trofoblasto

hECC

hESC

++
++
+++
++

+
+
+
+
+
+

++

+
+
+
+
+
+
++

+++ = muy alta expresin; ++ = alta expresin; + = expresin; = sin expresin (espacios en blanco); MCI = masa celular interna; hECC = clulas
de carcinoma embrionario; hESC = clulas madre embrionarias humanas.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Clulas madre embrionarias (ESC)


Todas las clulas que conforman al organismo humano,
incluyendo las clulas madre del adulto (ASC), provienen de las clulas madre embrionarias (ESC). Estas
clulas expresan antgenos embrionarios estadioespecficos (SSEA), fosfatasa alcalina y gran cantidad de telomerasa. En los mamferos, las clulas de la masa celular
interna son pluripotenciales. Despus de la implantacin,
las clulas pluripotenciales se restringen al epiblasto del
embrin. Las clulas del epiblasto son autorrenovables
y pluripotentes hasta el periodo de gastrulacin, cuando
de manera progresiva se diferencian en las tres capas
germinativas y sus derivados (cuadro 31).
La adquisicin y el mantenimiento de la capacidad
pluripotente de las ESC del ratn requieren el efecto
aditivo del factor inhibitorio de la leucemia (LIF) y de
la protena morfognica de hueso (BMP). Las protenas
BMP inducen la expresin de genes inhibitorios de la
diferenciacin por medio de la transcripcin de factores
Smad. LIF activa STAT3, de este modo STAT3 activa
los factores transcripcionales de homeodominio OCT4
y Fox D3. Un factor transcripcional que recientemente
se identific y que es independiente de LIF/STAT3 es
Nanog, muy importante para la pluripotencialidad y autorrenovacin de las ESC tanto en ratones como en humanos.
Las ESC dan lugar a las capas germinativas del embrin conocidas como ectodermo, mesodermo y endodermo, y se pueden obtener en cultivo celular (figura
310).
Todos los tejidos diferenciados del adulto derivan de
estas tres capas. A medida que avanza la ontognesis,
las clulas de las capas germinativas se diversifican de
manera progresiva en patrones espaciales especficos

para controlar la morfognesis. De manera ms avanzada en el desarrollo, la diversificacin precede a la determinacin de cada clula progenitora del fenotipo celular en cada tejido. Las clulas madre se dividen para
amplificar la cantidad de clulas progenitoras, las que
finalmente se diferencian a clulas funcionales. El sistema nervioso es un tejido derivado del ectodermo, y los
sistemas urogenital, musculoesqueltico y cardiovascular de manera primaria son derivados mesodrmicos.
La piel, el aparato digestivo y el respiratorio se forman
de componentes derivados del ectodermo, el mesodermo y el endodermo, mediante vas de sealizacin complejas dependientes de Ca2+ y citocinas (figura 311).

B
Trofoblasto

C
Anticuerpos

Complemento

MCI = Masa
celular
interna
E

Cultivo
Figura 310. Obtencin de lnea celular de clulas madre
(ES) por inmunociruga. A. Blastocistos. B. Incubacin con
anticuerpos. C. Incubacin con complemento. D. Lisis del
trofoblasto. E. Cultivo de las clulas de la MCI.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Citocinas

Canal de Ca2+

Ca2+

Receptor de citocinas

Fosforilacin de
protenas

Apoptosis
Expresin gnica
Proliferacin

Diferenciacin

Figura 311. Vas de sealizacin en la proliferacin y diferenciacin de las clulas madre.

Los cultivos de ESC humanas se establecieron a partir de blastocistos humanos congelados que provienen
de fertilizacin in vitro y que se utilizan para reproduccin asistida y a partir de clulas germinativas primordiales de embriones de cinco a nueve semanas de edad.
Para crear ESC, la masa celular interna (MCI) se re-

(Captulo 3)

mueve del blastocisto y se disocian las clulas, que se


cultivan sobre una capa de fibroblastos alimentadores.
En la actualidad ya es posible obtener clulas madre
pluripotenciales a partir de clulas madre del adulto,
mediante el proceso de desdiferenciacin. Las clulas
madre crecen al adicionarse el factor FGF2 para el humano; este factor mantiene a las clulas en un estado indiferenciado (figura 312).
Despus de que estas clulas son desprovistas del factor
FGF2, se siembran a alta densidad en cultivo en suspensin en medio con metilcelulosa; las clulas se diferencian en cuerpos embrioides que contienen precursores
de los tejidos derivados de cada capa germinal. Los
cuerpos embrioides se transfieren a condiciones de cultivo que facilitan la adhesin a un sustrato. Aqu las clulas crecen y se diferencian en diversos tipos celulares
especficos. En el grupo de investigacin de los autores
se han establecido protocolos que permiten llevar a
estas clulas hacia la diferenciacin de neuronas, cardiomiocitos, condrocitos, clulas pancreticas, etc.
(figura 313). A partir de ESC cultivadas se han caracterizacin los mecanismos moleculares de la pluripotencialidad, que son:

Flujo de
diferenciacin

Ectodermo

70

Clulas madre
Clulas madre de
carcinoma embrionario
del adulto

Cerebro y nervios
Piel
Glndulas

Cigoto

Teratomas

Sangre

Clulas madre
pluripotenciales generadoras
de todos los tipos de
clulas especializadas
Feto

Endotelio
Mesodermo

Cultivos de
clulas madre

Adulto

Blastocisto

Rin
Corazn
Hueso

Masa celular
interna

Clulas madre
embrionarias germinales

Clulas madre
embrionarias

Figura 312. Origen de las clulas madre humanas pluripotentes; actualmente se obtienen desdiferenciando clulas
madre adultas.

Endodermo

Msculo
Clulas germinales
primordiales (PGC)

Pncreas
Hgado

Figura 313. Potencial regenerador de las clulas madre


generadas en cultivos celulares.

Biologa celular y molecular de las clulas madre


1. La influencia de algunos factores extracelulares
sobre la pluripotencialidad y la autorrenovacin
(ligandos, citocinas y receptores).
2. Vas de sealizacin activadas en clulas pluripotenciales (como las vas JakSTAT y cascadas de
cinasas tipo ERK).
3. Programas genticos transcripcionales que operan
en las clulas pluripotenciales.
4. La funcin y regulacin gentica durante el desarrollo temprano del embrin.

Oct4

Oct4

Sox2

Nanog

71

Oct4
FoxD3

Rex1

Fgf4
Uf1

Control de la transcripcin

Fbx15

Las ESC se cultivan en una capa de fibroblastos que secretan el factor LIF, tambin conocido como factor que
inhibe la diferenciacin o factor inhibidor de leucemia.
Este factor pertenece a la familia de interleucina 6, que
incluye a la misma IL6, a la oncostatina M, al factor
neurotrfico ciliar (CNTF) y a la cardiotrofina 1. Estos
factores actan en muchas clulas, por lo que se dice que
tienen un efecto pleiotrpico y son capaces de mediar,
dependiendo del tipo celular, la proliferacin y la diferenciacin, o ambas funciones.
Estos procesos son regulados por diferentes factores
que inducen el crecimiento y la diferenciacin e incluyen factores solubles y aqullos anclados en la membrana celular y componentes de la matriz extracelular.
Existen citocinas que actan sobre la va de la superfamilia de receptores para citocinas y que se caracterizan
por activar cinasas de tirosina no receptoras de la familia janus cinasa (JAK) que fosforilan residuos de tirosina en el receptor y tambin activan a la familia de
molculas que pertenecen a transductores de seales y
activadores de la transcripcin (STAT). Esta va participa de manera destacada en la autorrenovacin de las
clulas madre embrionarias del ratn, lo anterior inducido por el factor inhibitorio de la leucemia (LIF, factor

Tbn
Tdgf1
Clula madre
pluripotencial inmortal

Ehox
hGDF3

Figura 314. Factores de trascripcin responsables de perpetuar la pluripotencialidad de las clulas madre en cultivos
celulares.

que se utiliza en los protocolos de propagacin de clulas madres embrionarias de ratn). La va descrita tambin participa en otras vas de transduccin de seales
activadas por medio de otros receptores, como el receptor tipo cinasa de tirosina (RTK), receptores acoplados
a protenas G, receptor para el factor transformante beta
y receptores tipo Wnt (figura 314). Entre los factores
que mantienen a las ESC indiferenciadas y multiplicndose est el LIF, que proviene de clulas fibroblsticas
embrionarias alimentadoras, adems de otros factores
de transcripcin (cuadro 32 y figura 315).

Cuadro 32. Factores de transcripcin y marcadores de pluripotencialidad


E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Tipo de clula
Antgeno

28 clulas

Mrula

ICM

Trofoblasto

hECC

hESC

Oct4
Sox2
Fgf4
Utf1
Rex1
FoxD3/gnesis
TDGF1/cripto1
Nanog
Taube nuss
hGDF3
Fbx15

++
++
+++
++

+
+
+
+
+
+

++

+
+
+
+
+
+
++

++, alta expresin; +, expresin; +/, baja expresin; espacios en blanco, desconocido. MCI = masa celular interna; hECC = clulas de carcinoma
embrionario humano; hESC = clulas madre embrionarias humanas.

72

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


ECM

LIF

ECM

FGF

Wnt
gp130/LIFR

PI3K

FGFR

BMPR1

Stat3

Stat3

Integrinas
GSK3

PI3K

?
ASmad

Stat3
Akt
Stat3

m = murino
h = humano

Oct4

Membrana
celular

JAK

JAK

beta
catenin

BMP4

ECM

Integrinas

(Captulo 3)

Nanog

myc

m/hESC

SOCS

myc

mESC

CoSmad

Id

hESC

mESC

Ncleo

Figura 315. Mapa de las vas de sealizacin que regulan la autorrenovacin de las clulas madre pluripotenciales.

CITOCINAS INVOLUCRADAS EN LAS


VAS DE SEALIZACIN DE LAS ESC

La superfamilia de receptores para citocinas comprende


protenas transmembrnicas que pueden formar homodmeros o heterodmeros, e incluso formar oligmeros
o la unin de uno o ms ligandos. La unin de ligando
a estos receptores genera cambios conformacionales en
la regin intracelular del receptor y provoca el reclutamiento o la activacin de cinasas de tirosina de la familia JAK (JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2), o ambos. El receptor activado fosforila residuos de tirosina en las
molculas cinasas y en la regin citoplsmica del mismo receptor; lo anterior forma los sitios de anclaje para
los integrantes de la familia STAT (STAT1, STAT2,
STAT3, STAT4, STAT5a, STAT5b y STAT6) y para otras
protenas con dominios homlogos a SRC 2 (SH2).
Las interacciones anteriores que suceden en la parte
interna o citoplsmica de los receptores activados promueven la formacin de homodmeros STAT que viajan
al ncleo y se unen a secuencias promotoras (elementos
de unin a STAT) que regulan genes. Es posible que los
receptores de citocinas, en lugar de activar la va de protenas STAT, se involucren en estimular las vas de la
protena cinasa activada por mitgenos (MAPK) y la de
cinasa de fosfatidil inositol 3 fosfato (PI3K).
El final de la sealizacin por citocinas se realiza por
varios mecanismos: las fosforilaciones se pierden por la

accin de fosfatasas llamadas fosfatasas SH2 (SHP2),


que tambin son reclutadas a la parte interna del receptor; la actividad transcripcional de STAT es inhibida por
el factor inhibidor de STAT activado (PIAS). Recientemente se han descubierto otros mecanismos de regulacin negativa, como la seal de supresin de citocinas
(SOCS) (cuadro 33).

La autorrenovacin de clulas madre


embrionarias depende de las citocinas
Austin Smith y col. aislaron la glicoprotena soluble que
inhibe la diferenciacin de las clulas madre y establecieron que la autorrenovacin depende de seales paracrinas de clulas alimentadoras (fibroblastos) sobre las
que se siembran las clulas madre en cultivo. Se caracteriz el factor LIF que se utiliza en la autorrenovacin
de las clulas madre, el cual es parte de la familia de las
interleucinas tipo IL6, que incluye a la misma IL6,
IL11, a la oncostatina M, al factor neurotrfico ciliar,
a la cardiotrofina 1 y a la citocina semejante a la cardiotrofina. Estas citocinas tienen efectos pleiotrpicos en
diferentes tipos celulares y activan genes blanco involucrados en la supervivencia, apoptosis, proliferacin,
diferenciacin y supresin de la diferenciacin.
El factor LIF se une con su receptor (LIFR) de baja afinidad y con el receptor gp130; este complejo es indispensable para la activacin de las vas JAKSTAT y MAPK,
como se ha demostrado en ratones mutantes (cuadro 34).

Biologa celular y molecular de las clulas madre

73

Cuadro 33.
Clase 1
GenBank
NM_002701
NM_003212
LO7335
NM_003240
AL558479
BF510715
NMN_009556

Unigene
Hs.2860
H2.75561
Hs816
Hs.25195
Hs. 125359
Hs.1755
Hs.335787

Class II

Gen
Oct3/4
TDGF1
Sox2
Lefty A
Thy1
FGF4
Rex1 (ZFP42)

SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
TRA254
GCTM2

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Marcadorers moleculares de las hESC en estadios indiferenciados de pluripotencialidad. Los de clase I estn bien caracaterizados, mientras que
los de clase II son antgenos de superficie que se estn caracterizando.

El problema principal en el cultivo de las clulas pluripotenciales madre es mantener la autorrenovacin inhibiendo la diferenciacin. Lo anterior se ha logrado
manteniendo las clulas con medio de cultivo sin suero,
que contiene componentes que sustituyen al suero y factor de crecimiento fibroblstico 2 que se ha visto que
mantiene a las clulas en proliferacin con pocos eventos de diferenciacin. Amit y col. demostraron que las
ESC pueden mantenerse con los factores FGF2, TGF
beta, LIF y con una matriz de fibronectina extracelular.
La ausencia de los factores que son miembros de la
familia de IL6, la eliminacin de la capa de fibroblastos alimentadores y la inactivacin de las protenas
STAT3 llevan a las ESC a diferenciarse.
Las evidencias de estudios en la expansin de clulas
madre hematopoyticas sugieren que el control de diferenciacin proviene de la concentracin de citocinas del
microambiente, de tal forma que cuando disminuyen
puede inducirse la diferenciacin y cuando aumentan se
favorece la autorrenovacin.
Otro factor de transcripcin importante para mantener
la pluripotencialidad es Oct 3/4; un incremento de dos
veces su expresin induce la formacin de endodermo
primitivo y mesodermo. Hace poco tiempo, un grupo de
investigacin descubri que la protena con dominios
homeo llamada Nanog es otra clave en la regulacin de
la pluripotencialidad. En los embriones en el estadio de
preimplantacin se ha observado que se requiere la expresin de este factor para la formacin de las clulas
del epiblasto. De este modo Nanog es capaz de restrin-

gir el potencial de diferenciacin generado por Oct 3/4.


Tanto Oct 3/4 como Nanog son importantes para
mantener la identidad de las ESC LIF en combinacin
con BMP4 (protena de morfognesis de hueso 4) es capaz de mantener la pluripotencialidad y capacidad de
autorrenovacin de las clulas madre pluripotenciales.
La funcin de BMP es inducir la expresin de un factor
inhibitorio de la diferenciacin Id por medio de la va de
las protenas Smad, y LIF y Oct4 mantienen la pluripotencialidad (figura 316).

Vas de transduccin de seales en las


clulas madre pluripotenciales humanas
Las clulas madre pluripotenciales humanas (ChESC)
se derivan de la masa celular interna (MCI) en los das
5 a 8 del estado de blastocisto o mrula embrionarios
(figura 317). Estas clulas tienen un cariotipo estable,
se renuevan y tienen un gran potencial para diferenciarse en clulas de las tres capas germinativas, tanto in
vitro como in vivo. Las hESC representan una esperanza
como fuente de clulas para la terapia celular, para el
desarrollo de frmacos y como modelos del desarrollo
temprano del humano.
Para obtener las hESC es necesario aislar la MCI a
partir del trofoectodermo por medio de la inmunociruga (que con anticuerpos elimina clulas ajenas a la
MCI) o por aislamiento mecnico. Las clulas se cultivan sobre una capa de fibroblastos embrionarios de ra-

Cuadro 34.
Gene
LIF
LIFR
gp130
STAT3
OCT4

Ratones mutantes
Desarrollo a trmino y frtiles entre 25 y 30%
Mueren a los 25 das de nacidos
Mueren a los 12 das de nacidos
Desarrollan blastocisto sin MCI
Desarrollo hasta blastocisto

Expresin de la embriognesis
Trofoectodermo y membranas extraembrionarias
MCI y tejido extraembrionario
MCI y tejido extraembrionario
Diferentes tejidos embrionarios
Mrula, MCI y clulas germinales primordiales (CGP)

74

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Accin de las citocinas en el desarrollo
Fertilizacin

Recin nacido

(MEC), como fibronectina y matrigel. Sin embargo, estas combinaciones de sustratos se complementan con
suero o con clulas alimentadoras, que tienen el problema de una posible contaminacin con patgenos de otra
especie. Recientemente se ha ensayado un sistema de
cultivo libre de clulas alimentadoras de otra especie,
resolvindose el problema al derivar clulas alimentadoras de las mismas clulas madre pluripotenciales humanas. Tambin se pueden mantener hESC indiferenciadas
en suero humano usando medios en el desarrollo de clulas alimentadoras autlogas.

Adulto

Factores de autorrenovacin y
marcadores de pluripotencialidad de las
clulas madre pluripotenciales humanas

Ncleo
Oct4

Stat3

Blastocisto

Gastrulacin

12.5

gp130

LIFR

LIF

Organognesis

Figura 316. Citocinas y vas de sealizacin en el desarrollo. LIF y Oct4 matienen la pluripotencialidad y la autorrenovacin de las clulas madre.

tn que mantiene, por medio de factores de crecimiento,


indiferenciado el cultivo de clulas embrionarias. Sin
embargo, esto representa un problema porque con el uso
de otra especie en el cultivo de clulas humanas se corre
el peligro de contaminacin con virus o patgenos
extraos (figura 310).
Para solucionar lo anterior se ha probado con una
combinacin de componentes de la matriz extracelular

Mrula
Ectodermo

Blastocisto

Pluripotente

ESC

MCI

Clulas
germinales
Mesodermo

CBP

EGC

Endodermo
In vitro

Ectodermo

Mesodermo

Se conocen en la actualidad muchos marcadores de pluripotencia y autorrenovacin que se describen en los


cuadros 32 y 35.

Marcadores de superficie celular


Las hESC indiferenciadas se pueden caracterizar por la
expresin de marcadores de superficie como el antgeno
especfico de estadio embrionario (SSEA) 3 y 4, por el

Cuadro 35. Marcadores de


autorrenovacin y pluripotencia
de las hESC y mESC
Antgeno

Cigoto

Totipotente

(Captulo 3)

Endodermo

Multipotente

Progenitor

rganos

In vitro
Figura 317. Potencialidad y capacidad de diferenciacin y
regeneracin de las ESC obtenidas de la MCI de un blastocisto in vitro o in vivo.

SSEA1
SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
TRA249
TRA254
GCTM2
Fosfatasa alcalina
Telomerasa
TRF1
TRF2
Nanog
Oct3/4
Sox2
Rex1
Foxd3
Dppa5/Esg1
FGF4

hESC

mESC

+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+ (variable)
+ (variable)
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

Biologa celular y molecular de las clulas madre


antgeno de rechazo tumoral (TRA) y por el marcador
tumoral de clula germinal (GCTM). Una caracterstica
comn a las clulas ESC de humano y de ratn es la alta
expresin de la enzima fosfatasa alcalina.

Nanog, Oct3/4 y Sox2

Niveles de Oct3/4

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Elongacin

Translocacin

Nanog es un factor de transcripcin tipo secuencia hometica, esencial en el mantenimiento de la masa celular interna in vivo y en las ESC in vitro. Nanog est presente en la MCI y en las poblaciones celulares mESC y
hES indiferenciadas y se regula a la baja cuando existe
diferenciacin. En el ratn, la eliminacin de Nanog genera una diferenciacin del endodermo primitivo. Al
analizar clulas pluripotenciales manipuladas por eliminacin de genes se deduce que Nanog es capaz de mantener la pluripotencia al suprimir la expresin de los factores transcripcionales Gata4/Gata6/Cdx. No se conocen
por completo los mecanismos involucrados en la regulacin de Nanog. Sin embargo, se sabe que posee un
efecto pivote en la transcripcin de los factores Oct3/4 y
Sox2, que tienen regiones de unin muy cercanas a la
regin promotora de Nanog (figura 316 y cuadro 35).
Oct3/4 es un factor de transcripcin de dominios
POU que regula genes al unirse a la secuencia octamrica repetida AGTCAAAT dentro de la regin promotora de los mismos. El factor transcripcional Oct3/4
acta en conjunto con el factor Sox2, un miembro de la
familia Sox de factores transcripcionales con box HMG
(secuencia aminoacdica caracterstica de estos factores
transcripcionales), que se unen a regiones cercanas a los
repetidos octmeros de Oct3/4. Estos factores tienen
una funcin importante en la autorrenovacin y son expresados en concentracin elevada en las lneas de clulas ESC.

Endodermo y
mesodermo
1.5
1.0

75

Clulas madre
pluripotenciales
(ESC)

0.5

Trofoectodermo

Figura 318. La prdida de Sox2 tambin contribuye al desarrollo del endodermo extraembrionario. Se cree que el
complejo OctSox puede regular regiones promotoras de
Fgf4, Utf1 y Fbx15.

Elongacin

Figura 319. Perpetuidad de la longitud de los telmeros


por la telomerasa en cada ciclo celular. Los telmeros contienen secuencias repetidas del hexanucletido TTAGGG.
TR = RNA de la telomerasa; TERT = trascriptasa reversa de
la telomerasa.

Las variaciones en la expresin de estos factores


influyen en el destino de las clulas ESC; por ejemplo,
los incrementos en Oct3/4 promueven la formacin de
endodermo y mesodermo (figura 318) y si baja la
expresin de stos se promueve la aparicin del trofoectodermo.

TELOMERASA

Los telmeros son secuencias de DNA que protegen los


extremos de los cromosomas eucariticos manteniendo
estabilidad y evitando la fusin entre cromosomas y la
prdida de informacin. Estas estructuras tienen la
secuencia hexanucleotdica bsica TTAGGG repetida
en serie que sobresale del cromosoma y se pliega sobre
s misma formando una estructura de asa en T. En las
clulas somticas los telmeros se acortan con cada
divisin celular. Eventualmente los telmeros se acortan tanto que alcanzan un tamao crtico y las clulas
entran en senescencia o en apoptosis. Las clulas y tejidos con capacidad de autorrenovarse y que proliferan
rpidamente superan este problema por medio de la
expresin de la enzima telomerasa. La telomerasa est
formada de dos subunidades: una transcriptasa reversa
y un componente de RNA telomerasa que porta una secuencia de RNA molde (figura 319).
Las clulas madre pluripotenciales humanas expresan elevadas concentraciones de la enzima telomerasa
y de su actividad que disminuyen durante la diferenciacin. As, se considera la expresin de la telomerasa

76

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Figura 320. Va de sealizacin de LIF/ERK. Esta va


recluta las cinasas JAK que activan la va STAT3 e induce
la transcripcin.

como un marcador de indiferenciacin en las hES, lo


que tambin les confiere la propiedad de inmortalidad
cuando se mantienen en cultivo celular.
Factores extrnsecos de autorrenovacin
de las clulas madre embrionarias
La seal de LIF
En 1981 el grupo de Martin y col. aisl de la MCI de
blastocistos murinos una poblacin de clulas ES que
mantuvieron sobre cultivos de clulas alimentadoras
STO/MEF (clulas de fibroblasto murino/fibroblastos
embrionarios murinos). Sin embargo, cuando las clulas se pasaban a un plato de cultivo cubierto de gelatina,
las clulas sufran diferenciacin, lo que sugera que las
clulas alimentadoras producan factores necesarios
para mantener la autorrenovacin prolongando la proliferacin de las mESC.
Estas observaciones fueron apoyadas por los hallazgos de Smith y col. en 1987, que fueron capaces de mantener indiferenciadas mESC en ausencia de clulas alimentadoras al utilizar medio de cultivo condicionado a
partir de clulas de hgado de rata bfalo. Los anlisis
del medio condicionado identificaron un factor de 20 a
35 KDa polipeptdico que llamaron DIA (actividad
inhibitoria de diferenciacin).
Posteriormente se vio que el DIA se sustitua sin problemas con el factor LIF (factor inhibitorio de la leucemia mieloide), el cual es similar al DIA en estructura y
funcin. El LIF es un miembro de la familia de las citocinas IL6 y se une a un receptor que forma un complejo
de dos protenas transmembrnicas que son LIFRb y
gp130. La unin de LIF a su receptor genera el reclutamiento de protenas JAK cinasas por debajo de la mem-

(Captulo 3)

brana y activa la va de sealizacin de STAT3 e induce


la expresin de genes que participan en la autorrenovacin (figura 320).
Diferentes factores se han implicado en la regulacin
de la va de LIF, entre los que se incluye al factor trombopoyetina de crecimiento megacarioctico (Tpo) que
activa a STAT3, IGF2 y CD9. No existe a la fecha evidencia que involucre a la va de sealizacin de LIF con
Nanog/Oct3/4/Sox2 y viceversa. LIF es esencial para el
mantenimiento de las mESC en un estado indiferenciado in vitro. Sin embargo, otros factores del suero como
BMP tambin estn involucrados en el mantenimiento
de la autorrenovacin de las mESC. Tambin se ha visto
que la unin de LIF a su receptor inicia seales antagnicas a la autorrenovacin, por ejemplo la activacin de
la va de ERK que promueve la diferenciacin.
Despus de la estimulacin de la protena transmembrnica gp130, la protena SHP2 unida al receptor es
fosforilada y recluta un complejo formado por la protena 2 de unin a factor de crecimiento (Grb2) y a la
protena SOS (hija de seven less), que es un factor intercambiador de nucletidos de guanina. El reclutamiento
de SOS en la membrana (por debajo de la misma) activa
a la protena G Ras, con el reclutamiento de la protena
Raf. De esta manera, RAF es fosforilado y activa una
cascada formada por cinasas que fosforilan una tras otra
MAPK/ERK cinasas (MEK); los factores transcripcionales activados se translocan al ncleo e inician la transcripcin de genes asociados con la diferenciacin (figura 320).
El balance entre las vas de LIF y ERK tiene una importante funcin en la regulacin de la autorrenovacin
y determina el destino de las mESC indiferenciadas. El
receptor LIFRb y gp 130 tambin se expresan en las lneas de hESC; se ha reportado la activacin de la va de
STAT por el LIF humano. Sin embargo, esto no es suficiente para mantener la pluripotencia in vitro; se ha visto que Nanog, Oct3/4 y TRA son regulados de manera
negativa cuando se activa la va dependiente de gp 130.

Va de transduccin de seales de TGFb


La va de TGFb est involucrada en un amplio rango de
decisiones del destino celular y otros procesos celulares
(p. ej., proliferacin celular, diferenciacin y apoptosis)
tanto en el periodo embrionario como en el estado adulto. Hay dos ramificaciones de la seal de TGFb implicadas en el proceso de autorrenovacin en las ESC: la va
TGFb/nodal/activina y la va de la BMP (protena morfogentica de hueso), que ms adelante se abordan.

Biologa celular y molecular de las clulas madre

77

Va de transduccin de seales
TGFb/nodal/activina
Esta va, que depende de la seal de TGFb, involucra la
activacin de Smad2/3, la cual es fosforilada y forma
complejo con coSmad4 antes de que se transloque al
ncleo. La regulacin negativa depende de Smad 7, que
es inhibitoria (figura 321). La importancia de la activacin de Smad2/3 en la autorrenovacin de las hESCs se
ha demostrado de manera reciente.

Va de nodal
En vertebrados, nodal es un inductor del mesodermo y
endodermo involucrado en la determinacin de los ejes
derecho e izquierdo en los embriones de ratn, pollo y
rana. La sobreexpresin de nodal activa el desarrollo del
mesodermo en embriones de pollo, Xenopus, pez cebra
y ratn. Diferentes investigaciones han relacionado a
nodal en la autorrenovacin de clulas madre embrionarias de ratn y humano. Se supone que nodal en ratn
tiene una importante funcin en la formacin del epiblasto y en la expresin de marcadores de pluripotencialidad. En las hESC, nodal se expresa a la baja cuando se
inicia la diferenciacin. La sobreexpresin de nodal
inhibe la diferenciacin a neuroectodermo de las hESC,
induce la formacin de endodermo visceral y mantiene
los marcadores de pluripotencialidad (figura 322).

Va de sealizacin de activina

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Las activinas se aislaron en 1986 a partir del fluido folicular de porcino y se consideraron como protenas go-

Figura 322. Va de sealizacin de Nodal. Las familias


Lefty (leftright determinatio factor) y cerberus (CerbS) la
bloquean.

nadales involucradas en la sntesis y secrecin de hormona pituitaria estimulante del folculo (FSH). Ahora
se sabe que la sntesis de activinas no est restringida tan
slo a los ovarios y a los testculos. De hecho, las activinas estn presentes en un amplio rango de tejidos y rganos incluyendo placenta, mdula sea, bazo y algunas
regiones del cerebro, donde actan como factores de
crecimiento o citocinas paracrinas y autocrinas. Las
activinas tienen un amplio rango de funciones biolgicas que incluyen la diferenciacin del endodermo a partir de las hESC, inhibicin de la diferenciacin neuronal
en clulas P19 de carcinoma embrionario de ratn, y
participan en asociacin con BMP4 en la diferenciacin
del mesodermo en mESC. Tambin la activina participa
en la diferenciacin de las clulas b a partir de precursores pancreticos humanos.
Recientemente se han detectado activinas en el medio condicionado provenientes de las clulas fibroblsticas embrionarias de ratn, lo que las ha relacionado
con un mecanismo de autorrenovacin de las clulas
madre embrionarias. Sin embargo, en la actualidad no
se ha elucidado lo anterior, los genes blanco de la va de
la activina. Las activinas son protenas homodimricas
miembros de la superfamilia de las TGFb que interactan con los receptores para activina y que posteriormente activan la va de Smad 2/3. Es posible que las activinas tambin interacten con otras vas, como la de Wnt.

Va de sealizacin de la protena
morfogentica de hueso (BMP)
Figura 321. Va de sealizacin de TGFb. Esta va activa
Smad 2/3, que se fosforila y transloca al ncleo con Smad4.

Las protenas BMP pertenecen a la superfamilia de las


TGFb (figura 323). Hay cuatro receptores para BMP:
BMP1a (ALK2, ALK), BMP1b y BMPRII. La seal se

78

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Figura 323. Va de sealizacin de BMP. Los sistemas


Cordina y Noggin bloquean esta va.

inicia por la unin del factor BMP al receptor heterodimrico formado por BMPRIa y BMPRII, que lleva a la
activacin de Smad1/5/8 que forman un complejo heterogneo con Smad4 antes de ser translocados al ncleo.
Los mecanismos de regulacin negativa de esta va provienen de Smad7 y de los supresores de la seal de citocinas (SOCS). La va de las BMP termina con la expresin de factores Id (inhibidor de la diferenciacin).

Va de sealizacin de FGF y PI3K


La familia de factores de crecimiento de FGF es capaz
de iniciar un amplio margen de respuestas celulares

(Captulo 3)

como proliferacin, migracin, diferenciacin, interrupcin del ciclo celular y autorrenovacin de las ESC.
Esta funcionalidad tan diversa se puede explicar por la
naturaleza promiscua de los factores FGF en su interaccin con sus receptores, as como por la presencia de
diferentes isoformas de receptores para FGF que son generadas por procesamiento alternativo de los genes FGF.
FGF2 es un componente esencial para el mantenimiento de las hESC in vitro. Hay reportes que sugieren
que FGF promueve la autorrenovacin de las hESC al
antagonizar con la va de las BMP por la inhibicin de
Smad1 y el bloqueo resultante de la diferenciacin. Esta
regulacin antagnica de BMP por FGF puede no ser un
fenmeno unidireccional.
La seal mediada por FGFPI3K/AKT puede estar
sujeta a regulacin por BMP2, la cual inhibe la degradacin de la protena supresora de tumores, PTEN, que es
un efector negativo de PI3K.

Va de WNT/bcatenina
La va de Wnt (wingless, nombre proveniente de un mutante de la mosca Drosophila sin alas) est involucrada
en la proliferacin y determinacin del destino celular.
Las alteraciones en la regulacin de esta va llevan a carcinognesis, como en el cncer de colon. En ausencia de
la seal de Wnt, la protena citoplsmica bcatenina se
asocia, para ser destruida, con el complejo formado por
axina, sintetasa de glucgeno cinasa 3b y la protena
adenomatosispoliposis del colon (APC). Al unirse a

Figura 324. Va de sealizacin de Wnt. Cuando Wnt se une a Frz, se activa Dsh, que inhibe la destruccin del complejo. La
Bcatenina acta como un coactivador transcripcional del factor de la clula T (TCF).

Biologa celular y molecular de las clulas madre


este complejo, la catenina es fosforilada y despus unida a ubiquitina, que la lleva al proteasoma para su degradacin. La va que se conoce comienza por la unin de
Wnt con el receptor Frizzled (Frz), lo que activa, por debajo de la membrana, a la protena Dishevelled (Dsh)
que inhibe la destruccin del complejo. A partir de sta,
un in, la protena b catenina se acumula en el citoplas-

79

ma y se transloca al ncleo, donde acta como un coactivador transcripcional del factor de clulas T (TCF, tambin conocido como factor potenciador linfoide LEF).
La va de Wnt esta relacionada con la autorrenovacin de las clulas madre del epitelio intestinal, de las
clulas madre de la piel y de las clulas madre embrionarias humanas (figura 324).

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

REFERENCIAS
1. Akala OO, Park IK, Qian D, Pihalja M, Becker MW et al.:
Longterm haematopoietic reconstitution by Trp53/
p16Ink4a/p19Arf/ multipotent progenitors. Nature
2008;453(7192):228232.
2. Unwalla H, Rossi JJ: Tatregulated expression of RNA
interference: triggers for the treatment of HIV infection. Curr
HIV/AIDS Rep 2008;5(1):4043.
3. Bera TK, Saint Fleur A, Ha D, Yamada M, Lee Y et al.:
Selective POTE paralogs on chromosome 2 are expressed in
human embryonic stem cells. Stem Cells Dev 2008;17(2):
325332.
4. Biochem Biophys Res Commun 2005;338(3):13071315.
5. Brivanlou AH, Gage FH, Jaenisch R, Jessell T, Melton D
et al.: Stem cells. Setting standards for human embryonic
stem cells. Science 2003;300(5621):913916.
6. Byrnes WM: Why human altered nuclear transfer is
unethical: a holistic systems view. Natl Cathol Bioeth Q
2005;5(2):271279.
7. Camargo FD, Chambers SM, Drew E, McNagny KM,
Goodell MA: Hematopoietic stem cells do not engraft with
absolute efficiencies. Blood 2006;107(2):501507.
8. Chambers SM, Boles NC, Lin KY, Tierney MP, Bowman
TV et al.: Hematopoietic fingerprints: an expression database of stem cells and their progeny. Cell Stem Cell 2007;
1(5):578591.
9. Ciavarella S, De Matteo M, Cafforio P, Dammacco F, Silvestris F: Mesenchymal stem cells and bone regeneration.
Recenti Prog Med 2008;99(2):7582.
10. Crittenden SL, Kimble J: Analysis of the C. elegans germline stem cell region. Methods Mol Biol 2008;450:2744.
11. Dhawan J, Rando TA: Stem cells in postnatal myogenesis:
molecular mechanisms of satellite cell quiescence, activation
and replenishment. Trends Cell Biol 2005;15(12):666673.
12. Eiges R, Benvenisty N: A molecular view on pluripotent
stem cells. FEBS Lett 2002;529:135141.
13. Gonzlez LGM: Terapia celular, medicina regenerativa y
antienvejecimiento. Rev Ejrcito Fuerza Area Mex 2008;
102(4):69.
13. Gonzlez LGM, Sosa LCA, Jurez MJL, Trejo BNI,
Nez SM et al.: Terapia celular y aplicacin de clulas
madre en la enfermedad de Parkinson (Revisin). Neurol
Neurocir Psiquiat 2007;40(3):8091.
14. Goodsell DS: The molecular perspective: doublestranded
DNA breaks. Stem Cells 2005;23(7):10211022.
15. Bohlson SS, Silva R, Fonseca MI, Tenner AJ: CD93 is rapidly shed from the surface of human myeloid cells and the

16.
17.

18.

19.

20.

21.
22.

23.

24.

25.

26.

27.

28.

soluble form is detected in human plasma. J Immunol 2005;


175(2):12391247.
Goodsell DS: The molecular perspective: RAD51 and
BRCA2. Stem Cells 2005;23(9):14341435.
Gustafsson MV, Zheng X, Pereira T, Gradin K, Jin S et
al.: Hypoxia requires notch signaling to maintain the undifferentiated cell state. Dev Cell 2005;9(5):617628.
Hargus G, Kist R, Kramer J, Gerstel D, Neitz A et al.:
Loss of Sox9 function results in defective chondrocyte differentiation of mouse embryonic stem cells in vitro. Int J Dev
Biol 2008;52(4):323332.
Koestenbauer S, Zech N, Juch H et al.: Embryonic stem
cells: similarities and differences between human and murine
stem cells. American Journal of Reproductive Immunology
2006:55;169180.
Koestenbauer S, Zech NH, Juch H, Vanderzwalmen P,
Schoonjans L et al.: Embryonic stem cells: similarities and
differences between human and murine embryonic stem
cells. Am J Reprod Immunol 2006;55(3):169180.
Kristensen DM, Kalisz M, Nielsen JH: Cytokine signalling
in embryonic stem cells. APMIS 2005;113:756772.
Kubota H, Brinster RL: Culture of rodent spermatogonial
stem cells, male germline stem cells of the postnatal animal.
Methods Cell Biol 2008;86:5984.
Liang J, Wan M, Zhang Y, Gu P, Xin H et al.: Nanog and
Oct4 associate with unique transcriptional repression complexes in embryonic stem cells. Nat Cell Biol 2008;10(6):
731739.
Lorthongpanich C, Yang SH, Piotrowska NK, Parnpai R,
Chan AW: Development of single mouse blastomeres into
blastocysts, outgrowths and the establishment of embryonic
stem cells. Reproduction 2008;135(6):805813.
Mndez BE, Snchez GDJ, Ramrez SI, Ocharan HE,
Nnez SM et al.: Effect of caveolin1 scaffolding peptide
and 17{beta}estradiol on intracellular calcium kinetics
evoked by angiotensinii in human vascular smooth muscle
cells. Am J Physiol Cell Physiol 2007;293:19531951.
Morales M, Liu Y, Laiakis EC, Morgan WF, Nimer SD et
al.: DNA damage signaling in hematopoietic cells: a role for
Mre11 complex repair of topoisomerase lesions. Cancer Res
2008;68(7):21862193.
Pang Y, Cui P, Chen W: Incipient establishment of human
bone marrow mesenchymal stem cells bank. Zhongguo Xiu
Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi 2005;19(7):578582.
Pritsker M, Doniger TT, Kramer LC, Westcot SE,
Lemischka IR: Diversification of stem cell molecular reper-

80

29.
30.

31.
32.

33.
34.
35.

36.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


toire by alternative splicing. Proc Natl Acad Sci USA
2005;102(40):1429014295.
Puceat M: TGFb in differentiation of embryonic stem cells.
Cardiovascular Research 2007;74:256261.
Rao M: Conserved and divergent paths that regulate selfrenewal in mouse and human embryonic stem sells. Dev Biology 2004;275:269286.
Roskoski R: Structure and regulation of Kit proteintyrosine
kinasethe stem cell factor receptor.
Snchez GDJ, Moro MA, Castillo HC, Hernndez PR,
Medina SR et al.: Ozone exposure induces iNOS expression
and tyrosine nitration in rat aorta. Environ Toxicol Pharmacol 2004;17:17.
Snchez GDJ, Trejo BNI: Biologa celular y molecular.
Mxico, D. F., Editorial Alfil, 2006.
Snchez GDJ, Trejo BNI: Prcticas de histologa. Mxico,
D. F., Editorial Alfil, 2007.
Stewart R, Stojkovic M, Lako M: Mechanisms of selfrenewal in human embryonic stem cells. European Journal of
Cancer 2006;42:12571272.
Waghmare SK, Bansal R, Lee J, Zhang YV, McDermitt
DJ et al.: Quantitative proliferation dynamics and random
chromosome segregation of hair follicle stem cells. EMBO J
2008;27(9):13091320.

(Captulo 3)

37. Karantzal E, Schulz H, Hummel O, Hubner N, Hatzopoulos A et al.: Histone deacetylase inhibition accelerates the
early events of stem cell differentiation: transcriptomic and
epigenetic analysis. Genome Biol 2008;9(4):R65.
38. Wang JC, Dick JE: Cancer stem cells: lessons from leukemia. Trends Cell Biol 2005;15(9):494501.
39. Rajasekhar VK, Vemuri MC: Molecular insights into the
function, fate, and prospects of stem cells. Stem Cells 2005;
23(8):12121220.
40. Wang JC: Evaluating therapeutic efficacy against cancer
stem cells: new challenges posed by a new paradigm. Cell
Stem Cell 2007;1(5):497501.
41. Wobus A, Boheler K: Embryonic stem cells: Prospects for
developmental biology and cell therapy. Physiol Rev 2005;
85:635678.
42. Yuan X, Zhou Y, Casanova E, Chai M, Kiss E et al.:
Genetic inactivation of the transcription factor TIFIA leads
to nucleolar disruption, cell cycle arrest, and p53mediated
apoptosis. Mol Cell 2005;19(1):7787.
43. Zamore PD, Haley B: Ribognome: the big world of small
RNAs. Science 2005;309(5740):15191524.
44. Roskoski R: Signaling by Kit proteintyrosine kinase the
stem cell factor receptor. Biochem Biophys Res Commun
2005;337(1):113.

Captulo

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Manejo de las clulas madre


en el laboratorio

INTRODUCCIN

radiaciones ultravioleta para impedir el crecimiento de


los microorganismos.

La primera lnea celular de origen tumoral que se logr


cultivar con xito en el laboratorio se obtuvo de Henrietta Lacks y se llam HeLa. Esta paciente falleci en
1951 en el Hospital de la Universidad Johns Hopkins,
en Baltimore. Sin embargo, en todo el mundo se utilizan
sus clulas para realizar mltiples trabajos de investigacin biomdica. Debido a que son clulas cancergenas
obtenidas de cncer cervical, son inmortales, porque al
igual que las clulas madre tienen la enzima telomerasa
activa que les permite mantener intactos sus telmeros.
La obtencin y el cultivo a largo plazo de clulas madre
embrionarias (ESC) requieren medios y equipo especializados. Se han establecido procedimientos para obtener clulas madre, por ejemplo por disociacin manual (cortando), que requiere un estereomicroscopio
costoso y una cmara de flujo de laminar.
Como se puede ver, hace falta una visin global de
cmo establecer y equipar un laboratorio para manejo
de clulas madre humanas, as como manuales de procedimientos estandarizados de operaciones prcticas
para mantener la asepsia y proteger las clulas de contaminacin microbiana. El diseo fsico adecuado de un
laboratorio para cultivos especializados de clulas madre facilitar el trabajo en l: se elige un lugar exclusivo
para los procedimientos, con mnimo flujo de trfico; se
prefiere sin ventanas porque con ello se evitan corrientes de aire y variaciones de la temperatura, o contaminacin por microorganismos debido a los pequeos flujos
de aire por una ventana mal cerrada, as como equipo de

EQUIPO

La siguiente lista de lo que se exige para equipar un


laboratorio para la propagacin a largo plazo de clulas
madre pluripotenciales humanas contiene nicamente
lo esencial.
S Campanas de flujo laminar clase II o III de biotecnologa con luces de UV localizadas de preferencia adyacentes a las cmaras de cultivos celulares;
cmaras de cultivo celular con conductos de flujo
areo hacia el exterior del edificio para facilitar
desinfeccin y facilitar la circulacin de aire. Es
mejor si los sistemas de aire acondicionado se localizan en el propio cuarto de cultivo, y se debe
aumentar tanto como sea posible la distancia entre
los conductos de circulacin area y las cmaras
de cultivo, pues con ello se reduce el riesgo de contaminacin con partculas o microorganismos.

Equipo mnimo
S Pipetas P2, P10, P20, P100, P200, P1000, P5000
con capacidad de 2 mL a 5 mL con sus respectivos
portapipetas.
S Sistema de vaco con trampa para lquidos.
81

82

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Colocar los instrumentos de laboratorio al alcance de la


mano. Como precaucin adicional se incluye un vaso
con soluciones desinfectantes (benzal, etanol, etc.) para
limpiar utensilios en todo momento. Los tubos deben
asegurarse contra cadas y el piso deber ser limpiado
con etanol, y usar un filtro entre el cultivo y la persona
que trabaje en el laboratorio para evitar contaminacin.
S Campana de flujo laminar equipada con sistema
de bioseguridad nivel II o superior con control de
temperatura en el rea completa donde se trabaje
con los cultivos celulares. Esto es til al manipular
clulas madre, para lo cual se requiere un brazo
robtico y un dispositivo para evitar contaminacin.
S Incubadoras para cultivos celulares, preferentemente con cuatro a seis compartimientos individuales por cada incubadora, para limitar el flujo areo y las fluctuaciones de temperatura y humedad.
S Microscopio invertido de contraste de fase y fluorescencia equipado con lentes objetivos 4x, 10x,
20x, 40x, 63x y 100x para clulas, equipado con
cmara digital integrada para documentar clulas
y si es posible computadora con programa analizador de imgenes, para poder determinar cualquier
cambio morfolgico en los cultivos.

Organizacin y tcnica asptica


1. Una cmara digital, computadora y software para
medir tamao y forma de las colonias.
2. Termos de diferentes capacidades para almacenar
nitrgeno lquido.
3. Refrigeradores y congeladores para almacenar
factores de crecimiento, medios de cultivo, suero
y materiales lbiles. De ser posible, tener crioprotectores y congeladores para criopreservacin en
rampas de temperatura, como los utilizados en
procedimientos de fertilizacin asistida.
4. Centrfuga para separacin celular.
5. Mechero de Bunsen para preparar el material de
vidrio y las agujas para manipular colonias de
clulas madre.
6. Recipientes diversos para trabajo en laboratorio
de cristalera y aluminio, como el frasco de Dewar.
7. Planta elctrica de emergencia para alimentar las
incubadoras de cultivo de tejido, congeladores y
otro equipo importante.
8. Un rea adyacente fuera del laboratorio (exclusa)
para cambio de ropa y zapatos y lavado de manos,
as como un almacn para material estril y un rea

(Captulo 4)

donde esterilizar el material de trabajo. Se debe trabajar con niveles adecuados de nitrgeno lquido
para evitar la prdida del material criopreservado.
9. Procurar que el ambiente del laboratorio sea estril, minimizando as el riesgo de contaminacin de
los cultivos celulares. Es necesario que con esta
tecnologa slo trabaje el personal mnimo indispensable.
A continuacin se listan las sustancias requeridas para
formar un medio de cultivo libre de suero: Nacetilcistena, cido oleico, albmina, cido ascrbico, biotina,
progesterona, putrescina, acetato de retinol, catalasa, sulfato cprico, etanolamina, galactosa, glutatin reducido,
HEPES, hidrocortisona, insulina, cido linoleico, piruvato sdico, selenita sdica, enzima superxido dismutasa, acetato de tocoferol, transferrina, triiodotironina,
trolox, vitamina B12, sulfato de zinc y antibiticos.

Tcnica asptica
La contaminacin de bajo nivel puede permanecer no
detectada por largos periodos, sobre todo si las clulas
madre han crecido en medios con antibiticos. Los modelos de crecimiento de clulas anormales suelen ser un
buen indicador de contaminacin, as como los cambios
en turbidez, color y el pH de los medios de cultivo, para
lo cual se debe medir el pH de forma peridica. Los medios de cultivo para clulas madre son ricos en nutrientes requeridos para la divisin celular, por esta razn son
propicios para el rpido crecimiento bacteriano o fngico. Ciertas contaminaciones son visibles (p. ej., con
hongos, donde se observa la turbidez y los sedimentos),
no as los micoplasmas y otros agentes contaminantes,
para lo cual se recomienda, adems de los cuidados normales, contar con mtodos adicionales que detecten
cualquier cambio en el crecimiento del cultivo, en la coloracin o en el pH del medio.

Cmo reducir el riesgo de contaminacin


Los siguientes procedimientos reducen el riesgo de contaminacin bacteriana, fngica y por micoplasma:
S Limpiar la campana de flujo laminar, las incubadoras y cmaras de aislamiento, y esterilizar toda
el rea de laboratorio, de preferencia con una mezcla de etanol a 70% incluyendo todos los materiales posibles.
S Procurar que todos los materiales que ingresen en
el laboratorio sean estriles antes de ponerlos en

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


el rea de trabajo. Programar la desinfeccin de
toda el rea con solucin de etanol a 70% para controlar la calidad de los cultivos de clulas madre.
Limpiar cada mes las incubadoras de cultivo de tejido, estableciendo el ciclo descontaminacin/esterilizacin. Asegurarse de limpiar todos los empaques de las puertas de las incubadoras para
evitar el crecimiento de hongos. Tambin, cada
tres meses eliminar todos los consumibles y reactivos que no se utilizaron, porque se pueden contaminar con esporas fngicas o bacterias. Esterilizar
en autoclave o por medio de radiacin UV todos
los instrumentos de laboratorio antes de utilizarlos.

vos para detectar algunas otras seales de contaminacin microbiana, como enlentecimiento de la proliferacin, cambios en la morfologa y muerte de las clulas.

Recomendaciones para el manejo celular


Organizar el rea de trabajo para no tener que pasar las
manos sobre los medios de cultivo. Antes de aspirar las
clulas de diferentes medios de cultivo se deber tomar
la precaucin de cambiar la punta de la pipeta; en general, existen dos paradigmas en el cultivo celular (figura
41).

Manejo de lneas celulares


para terapia celular

REALIZACIN DE CULTIVOS
CELULARES

Despus de un minucioso lavado y desinfeccin de manos y haberse vestido con material estril, verificar que
todos los instrumentos de laboratorio estn igualmente
estriles. Tener a la mano una solucin desinfectante.
Posteriormente verificar los sistemas de flujo laminar y
usar el filtro de aire para evitar contaminacin. Slo
despus de estos procedimientos puede considerarse
que se trabaja en condiciones de seguridad biolgica
clase II como mnimo. Para cultivar tejidos es recomendable utilizar medios de cultivo enriquecidos con antibiticos slo en ocasiones muy justificadas y por cortos
periodos, para evitar daar permanentemente las clulas. Desde luego, cuando se usen medios de cultivo libres de antibiticos, debern tomarse en consideracin
los parmetros mencionados para detectar rpidamente
una contaminacin. Observar con regularidad los cultiE Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

83

Sin duda alguna la seleccin adecuada de una lnea celular de clulas madre es determinante para una buena respuesta en la aplicacin clnica de la terapia celular o
para realizar un buen trabajo de investigacin; por ello
es necesario tomar en cuenta los siguientes factores:
En padecimientos cronicodegenerativos existen daos muy importantes en rganos blanco. Para la aplicacin de una terapia celular alognica deben usarse ESC
por su capacidad pluripotencial o ASC desdiferenciadas
a linajes multipotenciales como mnimo, e incluso pluripotenciales, como se ha reportado recientemente en
las revistas de ciencia ms prestigiosas. Si la fuente de
clulas para aplicacin de la terapia celular es autloga,
no hay problema del potencial celular de las ASC; sin
embargo, se les debe dar la capacidad adecuada con un
medio de cultivo especialmente diseado para que su
plasticidad y capacidad de diferenciacin a clulas
especializadas sea ptima.
Si no se cuenta con instalaciones de laboratorio con
las caractersticas mencionadas y un riguroso control de

N2/B27 medio + FGF2

N2 medio + FGF2

Sustrato
poco adhesivo
A

Neuroesferas

Cultivo

Cultivo disociado
5 x 105 clulas/mL

N2/B27
Laminina1

Figura 41. Los dos paradigmas del cultivo celular. A. neuroesferas. B. Disgregacin.

84

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

calidad y tecnologa de punta, se pueden adquirir o importar clulas madre que provengan de un laboratorio
de prestigio y con un control de calidad estricto.
Normalmente se envan las clulas en criopreservacin a 196 _C en nitrgeno lquido, es decir, se adicionaron medios crioprotectores para protegerlas de la
formacin de cristales de agua mientras se logran temperaturas de congelacin por medio de rampas descendentes de temperatura. Para conservarlas es necesario
bajarlas gradualmente de temperatura ambiente a 4 _C,
despus a razn de 1 _C/min; la temperatura se disminuye con una cmara de precongelacin a 80 _C y finalmente se almacenan a 196 _C dentro de un tanque
isotrmico con nitrgeno lquido. Hay muestras que han
sido criopreservadas y se encuentran viables despus de
20 aos, pero en teora las clulas madre deben durar
hasta 5 000 aos en criopreservacin.
Comnmente, cuando se reciben las clulas en contenedores para clulas criopreservadas, se tienen que revisar
minuciosamente para detectar contaminacin, observar
cambios del medio como turbidez, color e incluso olor.
Deben manejarse estos criopreservados con tcnica estril y preparar los medios bsicos para agregar la celularidad a temperatura de refrigeracin para no afectar la
criopreservacin celular y evitar lisis celular, ya que
esto puede condicionar un aumento de lipopolisacridos y una reaccin febril y de malestar general en el paciente.
Se deben montar las lneas celulares destinadas a regeneracin celular en una base enriquecida con oligoelementos, aminocidos y antioxidantes, en proporcin
1:10 segn sea la medida del contenedor, de preferencia
en una solucin fisiolgica. Ante problemas de patologas no relacionadas con diabetes mellitus pueden usarse soluciones glucosadas por periodos cortos porque la
glucosa favorece el desarrollo microbiano. Es preciso
que las clulas madre preparadas para terapia celular no
permanezcan mucho tiempo en medios de cultivo. En
ocasiones slo es necesario utilizar medios de cultivo
como el factor de crecimiento fibroblstico beta (FGFb)
con Lglutamato y despus realizar el procedimiento de
criopreservacin con medios que contengan glicerol. Al
seleccionar la lnea celular para utilizarla en algn padecimiento especfico es necesario considerar que en la
mayora de problemas cardiovasculares y hematolgicos se pueden utilizar clulas madres somticas, es decir, obtenidas del torrente sanguneo o de mdula sea
del propio individuo. stas, despus de un procedimiento de marcaje de molculas de superficie (anticuerpos
vs. CD34), se separan por citometra de flujo de alta
velocidad y pueden administrarse al paciente de manera
local, regional o sistmica. Por su gran compatibilidad

(Captulo 4)

inmunitaria no representan problema para el receptor y


se ha demostrado la induccin de regeneracin amplia
con este tipo de terapia celular autloga.
Por otra parte, en el lupus eritematoso sistmico
(LES) los resultados son sorprendentes. Sin embargo,
en alopecia areata y en problemas de origen andrognico es necesario utilizar clulas con caractersticas plurimultipotenciales, con lo que garantizan excelentes resultados. Los problemas hepticos, del tubo digestivo y
osteoarticular responden tambin de manera sorprendente con la aplicacin con clulas madre plurimultipotenciales. Para la aplicacin de la terapia celular en fase
experimental de las ESC11 es necesario revisar la legislacin local vigente y conocer cules son los procedimientos de manejo de los blastocistos humanos reconocidos, sobre todo si se trata de donaciones de estos
embriones, y contar con todos los permisos que establece la legislacin local, as como con lneas celulares de
bancos reconocidos en todo el mundo y con registro
vigente.

Manejo de lneas celulares


para terapia celular
Es preciso que cuando el paciente es estudiado y se confirma el diagnstico, se decida la lnea celular adecuada
que se aplicar en la terapia celular, para lo cual en experiencia de los autores existen varios principios:
Si el padecimiento es de origen cardiovascular, las
clulas madre deben ser manejadas en cultivo con FGFb
y Lglutamato; en caso de obtenerse de otro laboratorio
o banco celular, se mantendrn a temperatura de congelacin, para no perder la criopreservacin. Despus se
prepara el medio de cultivo base a temperatura de semicongelacin, 2 o 3 _C; esta base debe ser rica en oligometales, aminocidos y factores inductores de diferenciacin que inducen el avance de las fases del ciclo
celular G1 y G2 volviendo competentes a las clulas con
una respuesta y velocidad mayores que la diferenciacin en estas estirpes celulares. Se recomienda una
sesin semanal de aplicacin de terapia celular durante
un periodo de cinco semanas como mnimo, lo que
constituye un ciclo de tratamiento, aunque para ciertos
casos, como enfermedades cronicodegenerativas, neurolgicas, vitligo, etc., se pueden requerir de dos a cuatro o cinco ciclos de tratamiento para obtener resultados
ptimos de regeneracin.
Si el padecimiento es de origen osteoarticular, las
clulas madre se lavan con solucin salina isotnica a
1.

La aplicacin de terapia celular con ESC se realiza en


algunos pases de Europa, Amrica, etc.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


temperatura de semicongelacin para no afectar la criopreservacin y luego se incluyen en una base rica en
K28 y un derivado procanico D2 e inductores del ciclo
celular inicial, para lograr la competencia necesaria y
una diferenciacin ms rpida. Si el padecimiento es de
origen nervioso se utilizan medios de tipo GAAMA II
y se enriquecen con inductores del ciclo celular tardo,
con los cuales se han demostrado resultados excelentes.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Clulas madre en el lquido


amnitico humano (AFSC)
Desde la dcada de 1970 un estudio de microscopia
electrnica report la presencia de clulas madre entre
los diversos tipos celulares que proliferan en cultivos
obtenidos a partir de lquido amnitico humano (Priest
et al.: Origin of cells in human amniotic fluid cultures:
ultrastructural features. Lab Invest 1978;39:106109).
Aunque varios estudios posteriores reafirmaron la veracidad del hallazgo, un reporte reciente que empleaba
tecnologa de punta lo confirm de manera concluyente. Paolo de Coppi y col., del Instituto de Medicina
Regenerativa de la Universidad Wake Forest y del Hospital de Nios de la Escuela de Medicina de la Universidad de Harvard (Isolation of amniotic stem cell lines
with potential for therapy. Nature Biotech 25:100106),
aislaron cantidades significativas de clulas madre del
lquido amnitico humano y de ratn (AFSC, por las
siglas en ingls de amniotic fluid derived stem cells),
aprovechando la presencia de la protena cKit en la
membrana de estas clulas.
Al cultivarlas encontraron que se dividen cada 36 h
y no mostraban signos de envejecimiento (reduccin de
telmeros o modificacin cromosmica) ni diferenciacin espontnea aun despus de 250 ciclos de divisin
en cultivo, criterio que refuerza su carcter de clulas
madre. Las clulas AFSC poseen caractersticas que las
distinguen de las ESC obtenidas a partir de embriones,
las clulas madre germinales (GSC) que dan origen al
vulo o los espermatozoides y las clulas madre hematopoyticas (HSC) que dan lugar a las clulas sanguneas, de manera que su origen ontognico es todava
desconocido.
Con el propsito de demostrar la pluripotencia de las
clulas AFSC, los investigadores emplearon diversos
mtodos experimentales. Agregaron al medio de cultivo mezclas de factores inductores, permisivos, inhibidores o todos, pudiendo dirigir la diferenciacin de las
clulas AFSC hacia derivados de las tres capas germinativas embrionarias. Por ejemplo, en presencia de glice-

85

rol, factor de crecimiento de hepatocitos, dexametasona, FGF, insulina, transferrina y selenio, se indujeron las
clulas AFSC para diferenciarse como hepatocitos. Con
el empleo de otras mezclas de factores ya establecidas
para conducir o facilitar la diferenciacin de diversos
tipos celulares, los autores reportan haber logrado la diferenciacin de miocitos, neuronas, endotelios, adipocitos, osteocitos y clulas productoras de insulina. La
posibilidad de que pudiera tratarse de poblaciones de
clulas madre heterogneas se descart con el empleo
de retrovirus como marcadores de linaje celular. Los
autores lograron demostrar que, a partir de una clula
AFSC o un grupo pequeo de ellas, fue posible derivar
tambin los seis tipos celulares previamente encontrados con el total de clulas AFSC.
Por otra parte, dos tipos de experimentos indican el
potencial teraputico de las clulas AFSC. Algunas
clulas se encauzaron in vitro hacia el linaje ectodrmico neurognico y se implantaron en ventrculos laterales del cerebro de ratones recin nacidos. Aunque las
clulas AFSC de humano se distribuyeron en varias
regiones del cerebro, parecen haber sobrevivido slo
durante dos meses. Una explicacin probable es que se
trata de un implante entre especies diferentes, donde la
permanencia no es posible. El otro experimento fue con
clulas mesenquimticas osteognicas derivadas de
AFSC. Despus de propiciar la diferenciacin de tejido
seo en cultivo, se hizo un trasplante subcutneo en ratones inmunodeprimidos. A las 18 semanas fue evidente la produccin de hueso promovido por las clulas
AFSC humanas en el ratn.
Las clulas AFSC, a diferencia de las clulas madre
embrionarias (ESC), no parecen ser tumorognicas y su
pluripotencialidad parece ubicarse entre las clulas
ESC y las ASC. Pueden obtenerse con relativa facilidad
por medio de amniocentesis de rutina, biopsias de vellosidades corinicas prenatales e incluso a partir de biopsias de placentas a trmino. Ser posible entonces establecer bancos de muestras congeladas como los de
cordn umbilical ya existentes, de gran utilidad para
una posible terapia celular autloga en la vida posnatal.

CLONACIN DE MAMFEROS

El xito con la clonacin de la oveja Dolly en 1996 demostr que los ncleos de clulas no germinales tomados de individuos adultos repiten el desarrollo embrionario al ser trasplantados a un ovocito. A partir de
entonces se abri un gran debate internacional por te-

86

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

mor a que el desarrollo de una tecnologa de clonacin


en mamferos con fines reproductivos pudiera usarse algn da para la clonacin de seres humanos. Al margen
de las discrepancias ticas y filosficas iniciadas con la
clonacin de Dolly, es indudable que la investigacin ha
avanzado y los resultados experimentales obtenidos en
diferentes especies de mamferos se discuten tambin
en mbitos de la ciencia y la biotecnologa.
La aplicacin potencial de la clonacin teraputica
en la medicina y la implementacin de la clonacin
reproductiva en la industria agropecuaria siguen despertando el inters de un creciente nmero de investigadores. Asimismo, en el terreno de la investigacin bsica, la clonacin de Dolly atrajo a nuevos grupos de
investigadores para aplicar metodologas moleculares y
avanzar en la solucin de algunos problemas del desarrollo planteados por la embriologa clsica.
Aunque el avance ha sido mucho ms lento que el esperado por algunos optimistas, el reciente nacimiento
de la yegua Prometea2 contradice en cierta medida a los
investigadores que opinaban que la prctica de la clonacin aplicada a grandes especies estaba todava a varios
lustros de distancia. Cesare Galli, del laboratorio de
Tecnologa Reproductiva en Cremona, Italia, report
recientemente en Nature (2003;424:635) el nacimiento
de un sobreviviente de los 17 embriones implantados en
varias madres receptoras. El exitoso embrin que lleg
a trmino result ser hembra y lo ms asombroso es que
la madre que la gest y actualmente se encarga de amamantarla es su propia hermana gemela. Esto es diferente
a lo que ocurri con la oveja Dolly, cuyo nacimiento requiri la contribucin de tres ovejas (la donadora del ncleo, la donadora del ovocito y la subrogada en cuyo
tero se gest).
Los resultados previos obtenidos con la clonacin de
mamferos han sido en general costosos e ineficientes.
Aunque es indudable que existe la posibilidad de reproducirlos por clonacin, es evidente que la tecnologa
empleada requiere una optimizacin especfica para
cada grupo.
La diversidad celular en el desarrollo embrionario
depende de la expresin diferencial del genoma del individuo. Dicha expresin depende a su vez de procesos
de regulacin de complejidad creciente conforme el desarrollo avanza. Al inicio, la regulacin parece depender esencialmente de factores presentes en el citoplasma del ovocito cuya funcin es regular la divisin
y posiblemente el destino temprano de las primeras
2.

La yegua Prometea es producto de la transferencia del


ncleo de una clula somtica tomada de la piel de la misma
yegua que la pari.

(Captulo 4)

clulas. Despus, la regulacin de la expresin diferencial del genoma embrionario depende del contexto intercelular con patrones de sealizacin de corto, mediano y largo alcance. El conocimiento fino del control que
armoniza la expresin del genoma en los diferentes niveles de organizacin es sin duda la meta ms clara de
la moderna embriologa molecular o biologa del desarrollo.
A pesar del significativo progreso iniciado en 1953
por Watson y Crick con el descubrimiento de la conformacin molecular del DNA y el haber completado recientemente la secuencia de bases que integran al genoma humano, quedan grandes interrogantes en la
biologa. Los factores maternos en el citoplasma del
ovocito colaboran con el ncleo de una clula somtica
proveniente de un individuo adulto, que se introduce en
l. La reprogramacin del genoma del ncleo trasplantado requiere cambios en la conformacin molecular de
la cromatina (DNA y protenas) que permitan el acceso
de los factores reguladores de origen materno. As, el
estudio de los factores del ovocito responsables tanto de
los cambios en la conformacin de la cromatina como de
los implicados en la regulacin positiva o negativa de los
genes del ncleo transferido representa el actual reto para
abordar la clonacin con bases cientficas.
Una de las principales limitantes para avanzar en el
conocimiento de la clonacin de mamferos es la dificultad para obtener los ovocitos. Al respecto, un grupo
multinacional encabezado por H. Shler, en la Universidad de Pensilvania, report haber obtenido por primera
vez la diferenciacin de ovocitos in vitro a partir de
clulas madre embrionarias (Sciencexpress, mayo de
2003). Aprovechando la expresin especfica del gen
Oct4 por parte de las clulas germinales primordiales
(CGP, precursoras de ovocitos o espermatozoides), los
investigadores generaron una lnea de ratones transgnicos que expresan el gen de la protena verde fluorescente (GFP) utilizado como gen reportero. A partir de
estos animales se obtuvieron ESC pluripotentes que
fueron cultivadas en el laboratorio. Aunque al inicio del
cultivo todas las clulas madre derivadas del epiblasto
embrionario expresan la protena Oct4, conforme avanza el tiempo de cultivo las clulas tienden a diferenciarse en diversos tipos (msculo, hueso, vasos sanguneos,
neuroblastos, etc.), y slo las germinales primordiales
(CGP) y sus descendientes (ovocitos o espermatozoides) mantienen su expresin.
Mediante ingeniera gentica, Shler y su grupo eliminaron los dos promotores del gen Oct4 que se activan
en el epiblasto y conservaron al promotor de las clulas
germinales. Al expresarse de manera simultnea con el
gen de la GFP, las clulas germinales fluorescentes

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


pudieron aislarse y someterse a diversas condiciones de
cultivo. Se demostr que las clulas fluorescentes repiten en cultivo las diversas etapas de desarrollo hasta llegar a la de ovocito maduro, tal como ocurre en el ratn
intacto. Lo ms sorprendente de este estudio fue la activacin partenogentica (desarrollo embrionario espontneo sin fecundacin) de los ovocitos desarrollados en
cultivo. Los blastocistos (etapa en la que el embrin se
implanta en el tero) que se generan son muy similares
a los embriones normales. Producir ovocitos in vitro a
partir de lneas celulares bien caracterizadas es una
fuente de fcil acceso para la identificacin de los factores necesarios tanto en la regulacin inicial del desarrollo normal como de aqullos involucrados en la reprogramacin del genoma de los ncleos trasplantados
para la clonacin reproductiva o teraputica.
Se han manejado tres enfoques de la clonacin: el
primero tiene que ver con los xenotrasplantes. El empleo de rganos de cerdo para sustituir al limitado nmero de donantes humanos lo report un equipo de
investigadores coreanoestadounidenses en la revista
Science (2002;295:1089). Con el fin de evitar el rechazo
inmunitario de los trasplantes se inactiv (knock out) el
gen de la a1,3 galactosiltransferasa, enzima responsable de la produccin de residuos de un azcar que forma
parte de glucoprotenas de la superficie celular de las
clulas porcinas que provocan la reaccin aguda de
rechazo. El gen mencionado fue inactivado en clulas fetales de cerdo cultivadas. Despus, los ncleos se transfirieron a vulos enucleados de la misma especie, iniciaron su desarrollo in vitro y se implantaron en una madre
nodriza, donde terminaron su desarrollo. Un macho y
tres hembras supervivientes a la manipulacin resultaron sanos y listos para reproducirse con el fin de generar
una cepa de animales para continuar la investigacin.
El segundo enfoque se realiz en ratones. Los investigadores del instituto Advanced Cell Technology en
Worcester, Massachusetts, reportaron ser los primeros
en curar la inmunodeficiencia en una cepa de ratones.
Primero clonaron ratones transfiriendo ncleos de clulas epiteliales de la cola de animales inmunodeficientes
a vulos enucleados obtenidos de hembras normales y
se desarrollaron en el laboratorio hasta blastocisto.
Disociando la masa celular interna (grupo de clulas
que forman el embrin), se generaron clulas madre a
las que se les corrigi el defecto gentico causante de la
inmunodeficiencia. Al inyectar estas clulas madre a los
animales inmunodeficientes donadores de los ncleos
se inici la regeneracin de linfocitos capaces de generar anticuerpos.
Finalmente, el tercer enfoque es el de generar rganos a partir de clulas de animales clonados. Se trata

87

de un trabajo en bovinos en el que investigadores, tambin del Advanced Cell Technology de Massachusetts,
dicen haber reconstruido un rin a partir de clulas madre embrionarias de bovino. Se tomaron clulas de la
piel de la oreja de una vaca, se cultivaron e individualmente se fusionaron con vulos para generar blastocistos. Se obtuvieron clulas madre de la masa celular interna y aqullas que se diferenciaron como clulas
renales fueron cultivadas en una estructura tridimensional que permite la formacin de una estructura semejante a un rin. Lo importante es que al trasplantar estas
formaciones renales a la vaca donadora de los ncleos
clonados no hubo rechazo y se recuper buena parte de
la funcin renal. En la metodologa descrita previamente de clonacin teraputica, tambin llamada terapia
por trasplante nuclear, se requiere en todos los casos un
vulo que inicie su desarrollo hasta la etapa de blastocisto y a partir del cual se obtengan las clulas madre
empleadas en los diferentes procedimientos.

Ratones partenognicos
con capacidad reproductiva
Las clulas de mamfero son diploides, contienen un
juego de genes y cromosomas heredado del padre y otro
de la madre. En algunos casos, la expresin de un gen
depende de si su origen es paterno o materno. Por ejemplo, el gen que codifica al factor2 de crecimiento
(Igf2), parecido a la insulina, se requiere durante el crecimiento prenatal. Los ratones que no lo expresan nacen
con un tamao que es la mitad de la talla normal. Slo
la copia paterna de Igf2 se transcribe y si un ratn tiene
mutado el gen paterno, nace con talla reducida, mientras
que si la copia materna es la mutada, su crecimiento es
normal.
Otro ejemplo de la importancia de la combinacin
adecuada en la expresin de genes de ambos padres est
documentado en experimentos que han generado embriones de ratn que contienen cromosomas slo de la
madre o slo del padre.
En embriones que slo tienen cromosomas derivados
de la madre, los tejidos extraembrionarios que se requieren para el soporte del embrin se desarrollan poco
y como resultado el embrin muere despus de su implantacin en el tero, mientras que los embriones que
slo tienen cromosomas del padre muestran un crecimiento lento, pero los tejidos extraembrionarios se desarrollan mejor. De manera que, sin tomar en cuenta la
diferencia obvia de los cromosomas sexuales, los genomas maternos y paternos no son equivalentes, sino que
acarrean una marca o huella que conduce a la expre-

88

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

sin gnica diferencial en el embrin, fenmeno llamado impronta genmica, que est regulado por modificaciones epigenticas, que son modificaciones en el
patrn de expresin de un gen que se heredan de una clula a otra y que no involucran cambios en la secuencia
del DNA.
En abril de 2004 Tomohiro Kono, bilogo de la Universidad de Agricultura de Tokio, y col. publicaron en
la revista Nature (2004;428:860864) resultados experimentales que muestran que la expresin diferencial de
genes paternos y maternos es un candado fundamental
para la reproduccin partenogentica en los mamferos.
La partenognesis es un proceso en el cual un ovocito
se desarrolla y se convierte en embrin sin necesidad de
ser fecundado por un espermatozoide. Este proceso es
comn en numerosas especies de insectos, nemtodos
y plantas, pero nunca se ha observado de manera natural
en los mamferos.
Se han hecho varios intentos en ovejas y ratones, pero
los resultados no haban sido satisfactorios, ya que los
embriones obtenidos por partenognesis no progresaban y moran en las primeras etapas del desarrollo. Los
investigadores fusionaron en esta ocasin ovocitos de
ratn (dos juegos de genoma de origen materno), uno
inmaduro proveniente de ratonas recin nacidas y otro
completamente maduro, con el fin de evaluar si se desarrollaban embriones viables.
La idea es que manipulando la impronta genmica se
podra controlar la expresin de genes que son sujetos a
este tipo de regulacin. En los estadios tempranos de
maduracin del ovocito, el genoma no ha sido modificado epigenticamente y por lo tanto no ha adquirido la
huella materna, de modo que se podrn transcribir algunos genes que slo se expresan cuando son heredados
por el padre. Los ovocitos inmaduros tenan otra caracterstica: se obtuvieron de ratonas a las que se les haba suprimido el gen H19, el cual est sujeto a impronta genmica y slo se expresa la copia materna y de manera
alternativa con el gen Igf2; es decir, si H19 se transcribe,
el Igf2 materno no, por lo que este ltimo slo se manifiesta a partir de la copia paterna. Adems de H19, los
cientficos removieron DMD, una regin que favorece la
actividad de H19 en el cromosoma materno. Con estas
manipulaciones los investigadores pretendan mimetizar
la prdida de la actividad paterna de H19.
Al combinar el genoma de los ovocitos de estas ratonas con ovocitos maduros de ratonas normales los resultados fueron inesperados y sorprendentes: nacieron dos
ratonas aparentemente normales, vivas, una de las cuales se desarroll hasta la madurez y tuvo descendencia.
Tambin demostraron que no slo cambiaron la actividad de H19 e Igf2, sino que el cambio en la regulacin

(Captulo 4)

de estos dos genes modific la actividad de muchos


otros genes regulados por impronta genmica, expresndose de manera normal en estos dos ratones. A pesar
de que las dos ratonas que nacieron vivas representan
apenas 0.54% (2 de 371) de los embriones logrados por
estos mtodos, este trabajo demuestra que la impronta
genmica es una de las barreras principales para la partenognesis natural en mamferos, por lo que la participacin del padre en la reproduccin es fundamental.

Clonacin teraputica humana


Desde el primer cultivo exitoso de clulas madre embrionarias pluripotenciales humanas en 1998, la investigacin a este respecto se ha intensificado por la posibilidad de aprovechar estas clulas capaces de proliferar y
diferenciarse hacia cualquier tipo de especializacin o
tejido con fines teraputicos. La investigacin en este
campo es controvertida debido a que algunas veces es
necesario que se destruyan los blastocistos humanos
(etapa embrionaria entre el quinto y sptimo da del desarrollo). Muchas legislaciones incluyen una ley de proteccin al embrin que prohbe su manipulacin de no
ser en su propio beneficio. Sin embargo, existe la posibilidad de generar blastocistos, a travs de tcnicas de
clonacin, para obtener clulas madre.
La clonacin teraputica ofrece la posibilidad de obtener clulas madre embrionarias que despus de su diferenciacin hacia tejidos especficos ayudarn a evitar las
incompatibilidades inmunitarias si el ncleo de la clula
somtica proviene del paciente que ser tratado con estas
clulas. Sin embargo, existen en los tejidos clulas madre
adultas autorrenovables que podran ser utilizadas para el
mismo propsito y cuya obtencin es ticamente aceptable. Adems, los doctores Bert Vogelstein, de la Universidad Johns Hopkins, Bruce Alberts, presidente de la
Academia Nacional de Ciencias de EUA y Kenneth
Shine, presidente del Instituto de Medicina de ese pas,
en un artculo del 15 de febrero de 2002 en Science
(295:1237) proponen que se deje de usar el trmino clonacin teraputica, ya que crea confusin y es conceptualmente inexacto. Argumentan que, en lenguaje cientfico, clonacin significa producir copias de entidades
biolgicas, ya sea un gen, una clula o un organismo.
Sin embargo, para el pblico en general el vocablo
clonacin se refiere al procedimiento de transferencia
de ncleos de una clula somtica a un ovocito al que se
le ha eliminado su propio ncleo. Dicho procedimiento
de transferencia nuclear puede ser utilizado para propsitos que no son necesariamente la produccin de una
copia o clona de un organismo, entre ellos la generacin

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


de clulas madre embrionarias para investigar su posible uso en el reemplazo de tejidos enfermos de pacientes
o para estudiar el efecto de enfermedades genticas sobre la diferenciacin celular. Por ello, consideran desafortunado el empleo del trmino clonacin teraputica para referirse a la produccin de clulas madre
potencialmente tiles en terapias celulares regenerativas, ya que el objetivo no es hacer una copia idntica del
paciente, sino crear tejidos compatibles con los suyos.
Tambin les preocupaba que la interpretacin equvoca de este trmino influyera al Senado de EUA a
aprobar una ley que prohibiera cualquier transferencia
de ncleos somticos en humanos, impidiendo as una
variedad de experimentos de importancia mdica y ticamente aceptables. Proponen la expresin trasplante
nuclear, que consideran ms precisa, para designar la
investigacin sobre las clulas madre, que claramente la
diferenciara de la clonacin reproductiva de humanos
(que de acuerdo con la Academia Nacional de Ciencias
de EUA debera prohibirse) y ayudara al pblico a
comprender que son distintas.
En muchos casos, las clulas madre trasplantadas no
solamente son capaces de dirigirse hacia el tejido requerido, sino tambin de reemplazar a clulas daadas. La
investigacin realizada con clulas madre adultas por su
procedencia no representa un problema tico, y sobre
ellas hay una mayor experiencia, tanto de su potencial
diferenciacin como de su uso teraputico. Se tiene mucha experiencia con las clulas madre provenientes de
la mdula sea, que en su ambiente normal generan los
diferentes tipos de clulas sanguneas. Es singularmente importante el trasplante de clulas hematopoyticas
en pacientes con leucemia y para la reconstruccin de
la mdula sea en pacientes con otro tipo de tumores
que son sometidos a quimioterapia o radioterapia.
Estas clulas madre adultas tienen la capacidad de
generar no slo clulas sanguneas, sino un mayor nmero de clulas especializadas. Se ha visto que en animales con distrofia muscular, el trasplante de clulas
madre de mdula sea de ratones sanos da origen a clulas en su esqueleto y msculo cardiaco que s producen
distrofina. Tambin se han derivado, a partir de clulas
madre hematopoyticas, clulas epiteliales en pulmones, intestino y piel. Otros investigadores han aislado
clulas madre humanas de tejido graso removido quirrgicamente que en cultivo pueden generar clulas de
hueso, msculo y cartlago adems de adipocitos, aunque no se ha demostrado que en las clulas obtenidas a
partir de la grasa no se encuentren algunos otros tipos
de clulas madre.
En otros experimentos con animales se demostr que
los factores de crecimiento neuronal provocaban que las

89

clulas madre hematopoyticas se diferenciaran hacia


clulas neurales, lo que muestra una plasticidad mesodrmica a ectodrmica. En ratones, las clulas madre de
msculo han sido capaces de reconstituir la hematopoyesis. Asimismo, a partir de clulas madre del hgado se
pueden desarrollar clulas musculares de corazn, y
clulas del hgado a partir de clulas madre sanguneas,
lo que demuestra que las clulas madre adultas tienen
una pluripotencialidad similar a las embrionarias. Otra
posible fuente de clulas madre son los cordones umbilicales de recin nacidos. Su conveniencia para trasplantes en pacientes con leucemia ha sido bien documentada con miles de casos. Una desventaja es el
limitado nmero de clulas que pueden obtenerse de
cada cordn umbilical.
En ratas se ha demostrado que las clulas madre de
cordn umbilical se han logrado diferenciar en neuronas
y que han sido implantadas de manera exitosa, curando
algunos problemas neurolgicos. Actualmente se estn
aplicando en humanos las investigaciones de tratamiento
de enfermedades congnitas realizadas con clulas
madre en modelos animales bajo el concepto de terapia
celular. En la actualidad es posible utilizar la sangre de
cordn umbilical para regenerar el cerebro. Al inyectar
sangre de cordn umbilical en ratas de laboratorio ancianas, investigadores de la Universidad de Florida (EUA)
han hallado mejoras en el microentorno de la regin del
hipocampo del cerebro de los animales y un subsecuente
rejuvenecimiento de las clulas madre progenitoras nerviosas. Los resultados de su estudio se publicaron en la
edicin digital de BMC Neuroscience en 2008.
La neurognesis de las clulas cerebrales desciende
drsticamente a medida que aumenta la edad, en su mayor parte por un empobrecimiento del microambiente
cerebral, coment Alison Willing, una de las autoras
del estudio. El aumento en la neurognesis que conseguimos parece deberse a un descenso de la inflamacin. Antes de este estudio, otra investigacin de la
USF descubri que reduciendo la neuroinflamacin en
ratas ancianas mediante el bloqueo de la sntesis de la
citocina proinflamatoria IL1 se poda recuperar cierto
descenso de la neurognesis asociada con la edad y mejorar la funcin cognoscitiva. La sangre de cordn umbilical tiene un potencial similar para reducir la inflamacin y para restaurar algunas de las capacidades
perdidas de las clulas madre progenitoras.
En este estudio el nmero de clulas proliferativas
aument en las 24 h siguientes a la inyeccin de sangre
de cordn umbilical y este aumento se mantuvo al menos durante 15 das siguiendo un tratamiento sencillo.
La inyeccin de clulas de sangre del cordn umbilical
puede reducir la neuroinflamacin. Nuestros resultados

90

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

apuntan a la posibilidad de que una terapia celular podra convertirse en un acercamiento efectivo para mejorar el microambiente del cerebro anciano y restaurar
algunas habilidades perdidas.
El reporte en la revista Sciencexpress (12 de febrero
de 2004) de un equipo coreano de la Universidad Nacional de Sel reactiv la polmica sobre la clonacin de
embriones humanos. A diferencia del grupo denominado Raeliano, que report varios embarazos con fetos
clonados e incluso el nacimiento de un beb, el equipo
coreano de Sel public sus logros con seriedad y rigor
cientfico. Sin embargo, en un anuncio sorpresivo y bajo
la atencin de la comunidad cientfica mundial, el cientfico coreano se retract de las declaraciones acerca de
la clonacin humana y fue castigado por su gobierno.
Con el nacimiento de la oveja Dolly en Edimburgo en
1996 y la obtencin de clulas madre embrionarias a
partir de blastocistos humanos fertilizados in vitro en
1998, se abri la innovadora corriente de investigacin
ya citada de la clonacin teraputica, donde se toma el
ncleo de una clula de algn tejido adulto y se transfiere al interior de un ovocito enucleado. Si este procedimiento de reconstruccin del cigoto tiene xito, se
inicia el desarrollo hasta la etapa de blastocisto en el laboratorio, pero se detendr a menos que sea trasplantado al tero receptivo de una hembra.
Mientras que de la clonacin teraputica se pretende
obtener clulas pluripotenciales de la masa celular
interna del blastocisto que puedan multiplicarse indefinidamente en el laboratorio, en la clonacin reproductiva el blastocisto implantado en el tero desarrollar un
embrin ntegro que al nacer contendr la rplica del
genoma del individuo donador del ncleo transferido.
Cabe aclarar, sin embargo, que la identidad es menor
que la de los gemelos univitelinos o idnticos, quienes
comparten genoma y citoplasma del mismo ovocito debido a que las mitocondrias tambin tienen su propio genoma, que se hereda slo por va materna.
Empleando tcnicas de ingeniera gentica en clulas
madre derivadas de blastocistos clonados pueden corregirse mutaciones en genes identificados como responsables de padecimientos en pacientes con alteraciones
genticas. Al menos en ratones, este procedimiento ha
sido realizado con relativo xito al aliviar la deficiencia
de linfocitos causada por la mutacin del gen Rag2 (Tsai
et al.: Dev Cell 2002;2:707). Como suele suceder en la
investigacin cientfica, adems de los resultados tericamente esperados en este trabajo se obtuvieron otros
resultados que abren nuevas incgnitas sobre la complejidad de los procesos de diferenciacin celular.
La introduccin de genes manipulados en laboratorio
en el ncleo celular para su posible incorporacin al

(Captulo 4)

genoma es azarosa y requiere un nmero considerable


de clulas para aumentar su eficiencia. As pues, es necesario tener lneas celulares de blastocistos clonados
que adems de ser pluripotentes mantengan una elevada
capacidad de multiplicarse en el laboratorio. La pluripotencia se refiere a la capacidad de una clula de dividirse y dar origen a diversas estirpes celulares (linajes).
En el desarrollo normal, slo el ovocito es totipotente,
porque en la primera etapa del desarrollo origina tanto
clulas del trofoblasto (que formarn la placenta) como
clulas de la masa celular interna (que formarn el embrin). Estas ltimas son separadas para la obtencin de
clulas madre consideradas pluripotentes, porque
aunque pueden diferenciarse en diversos linajes celulares del embrin, no pueden hacerlo como clulas trofoblsticas.
Adems de hacerlo en ratones, en bovinos tambin se
ha logrado establecer lneas de clulas madre embrionarias clonadas. Sin embargo, hasta ahora los esfuerzos
para obtenerlas en monos y humanos haban sido infructuosos (Simerly et al.: Science 2003;300:297). Es
en este marco donde se ubica la polmica y el fraude del
equipo coreano ya mencionado. En marzo de 2004 investigadores de la Universidad Nacional de Sel asombraron a la comunidad cientfica internacional al lograr
la primera derivacin de clulas madre embrionarias
humanas (hESC) con la tcnica de transferencia nuclear, mejor conocida como clonacin teraputica
(Science, 12 de marzo de 2004:1669).
Sin embargo, en aquella ocasin los investigadores
coreanos encabezados por los doctores W. S. Hwang y
S. Y. Moon recibieron severas crticas tanto por la cuestionable validez de sus resultados como por la supuesta
falta de tica en la obtencin del material biolgico.
Brevemente, el protocolo del equipo de la Universidad
Nacional de Sel consisti en la obtencin de 242 ovocitos de los ovarios de 16 mujeres voluntarias bien informadas de los objetivos de la investigacin. Una vez
extrados los ovocitos, se cultivaron en un medio que les
permiti madurar. Del grupo original de ovocitos se seleccionaron 176 que lograron madurar in vitro. El criterio fue la eliminacin del primer cuerpo polar y su
detencin en metafase II despus de la primera divisin
meitica.
En esta etapa de maduracin el ovocito es expulsado
del folculo ovrico por el proceso de ovulacin y
junto con las clulas foliculares del cumulus oophorus
es depositado en la regin proximal del oviducto, donde
normalmente espera ser fertilizado por un espermatozoide. A los 176 ovocitos maduros se les hizo la transferencia nuclear previa extraccin de sus cromosomas
detenidos en metafase II. La primera innovacin de la

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


tcnica coreana fue extraer los cromosomas por extrusin a travs de una pequea perforacin de la membrana y comprimiendo suavemente el ovocito.
En reportes anteriores, la extraccin de los cromosomas se haba hecho por succin con una micropipeta.
Hay que hacer notar que tanto el aparato cromosmico
extrado del ovocito como el ncleo transferido se mencionan errneamente como DNA por la mayora de
los medios de divulgacin cientfica. Lo que en realidad
se ha hecho hasta ahora con las tcnicas de clonacin es
manipular un complejo molecular complejamente estructurado (la cromatina) que incluye, adems del
DNA, diversas protenas y otros factores del ncleo celular cuya funcin todava se desconoce.
La transferencia nuclear hecha por el equipo coreano
se realiz por fusin elctrica del ovocito con la clula
somtica donadora siguiendo un protocolo similar al de
otros grupos. Es probable que aqu haya un punto dbil
del reporte del grupo de Sel, ya que emplearon como
donadoras nucleares clulas foliculares del cumulus que
acompaan al ovocito en el momento de la ovulacin.
Aunque los autores muestran evidencias que sugieren el
origen somtico de los ncleos clonados, la posibilidad
de que se trate de lneas celulares procedentes de blastocistos partenogenticos no puede descartarse por completo. No obstante, los autores aportan datos que, aunque dudosos, son una variante del protocolo para la
transferencia nuclear a ovocitos humanos.
Establecen un tiempo ptimo para reprogramar el
genoma del ncleo trasplantado, un nuevo mtodo para
activar al cigoto reconstruido y un medio de cultivo para
optimizar su desarrollo hasta blastocisto. Quiz cierta
parte de la metodologa empleada y propuesta pueda ser
reproducida o modificada para afinar dicho procedimiento. El proyecto fue realizado por 14 investigadores
y ha soportado las crticas al trabajo publicado en al
menos dos vertientes, las de la comunidad acadmica y
las del pblico en general. Para la primera, en caso de
que tenga algo de cierto, esta investigacin representa
slo un avance ya esperado con base en los resultados
previos obtenidos por otros grupos en varias especies de
mamferos. Adems, la necesidad de optimizar un protocolo particular para cada especie es bien conocida y
el xito, adems de una buena organizacin y capacidad
del equipo, dependa de tener un nmero adecuado de
ovocitos humanos para que los resultados fueran estadsticamente significativos.
Desde el punto de vista biotico representa un problema grave desperdiciar tantos ovocitos para este fin y
por ello es muy discutido el uso de tantos ovocitos humanos. Se comenta que el haber conseguido a 16 mujeres voluntarias para iniciar el estudio con 242 ovocitos

91

fue la principal ventaja que tuvo el equipo de la Universidad de Sel sobre los grupos de investigacin competidores que trabajan en pases con ms restricciones
legales y culturales. En el trabajo mencionado, el grupo
coreano obtuvo una sola lnea de hESC a partir de 242
ovocitos donados por 16 mujeres voluntarias. En cambio, en una investigacin posterior (Science 2005;308:
1777) obtuvieron 11 lneas a partir de 185 ovocitos.
En el segundo reporte establecen importantes mejoras tcnicas, adaptando las nuevas condiciones experimentales a la singularidad biolgica de las clulas
humanas, en contraste con los experimentos previos en
los que se haba empleado una tcnica similar a la reportada para la clonacin de especies animales. Adems, en
el trabajo anterior, los investigadores coreanos haban
transferido ncleos de clulas foliculares a ovocitos de
la misma mujer, por lo que se plante la posibilidad de
que la nica lnea de hESC obtenida en aquella ocasin
fuera producto de la activacin partenogentica del
ovocito y no derivada de la clonacin del genoma del
ncleo transferido.
En el segundo reporte existe un notable incremento
en la eficiencia en trminos del nmero de ovocitos empleados por lnea de hESC obtenida (10 veces mejor),
y demuestran sin ambigedad que las lneas de hESC se
derivan de los ncleos transferidos. Adems, en el
segundo trabajo el grupo coreano transfiri ncleos de
clulas de la piel tomadas de pacientes de edades y sexos
diferentes.
En todos los casos se obtuvieron hESC con la misma
identidad inmunitaria del paciente donador del ncleo
(complejo mayor de histocompatibilidad). Qued demostrado as que en humanos, al igual que en otros mamferos, es posible obtener hESC por transferencia nuclear (TN) sin importar la edad ni el sexo de los
pacientes. Los ncleos transferidos por el equipo coreano corresponden a pacientes que sufren padecimientos
donde la regeneracin o incluso la curacin definitiva
pudiera ser la clonacin teraputica: hipogamahipogama globulemia congnita, dao de la mdula espinal
y diabetes juvenil. Las 11 lneas de hESC derivadas crecen normalmente en el laboratorio, sin alteraciones cromosmicas (aneuploidias), conservan su pluripotencia
(capacidad para diferenciar diversos tipos celulares) y
mantienen la identidad de su DNA con la del paciente
donador.
Desde el punto de vista embriolgico esta investigacin es trascendente, al haber logrado la derivacin de
hESC a partir de clulas originadas de las tres capas embrionarias primarias: clulas hematopoyticas de origen mesodrmico, clulas neurales de origen ectodrmico y clulas pancreticas de origen endodrmico. En

92

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

este contexto se est ya en el umbral del empleo teraputico de las hESC derivadas por transferencia nuclear
(hESCTN). Tambin se hace necesario vigilar la estabilidad fisiolgica de las hESCTN, ya que son clulas
cuyo genoma es ajeno al citoplasma heredado del ovocito empleado como receptor del ncleo transferido.
Al menos dos organelos celulares heredados del citoplasma del cigoto reconstruido debern mantener un
equilibrio armnico con el genoma del ncleo transferido: las mitocondrias y los centriolos heredados del
ovocito y el espermatozoide, respectivamente. Durante
el desarrollo normal todos los linajes celulares que forman los tejidos heredan copias de esos organelos que
mantienen la capacidad de autorreplicarse. La heteroplastia de las mitocondrias y la homoplastia de los centriolos en las hESCNT representan una desviacin del
desarrollo normal que pudiera influir en el xito de la
terapia de reemplazo de tejidos daados.
Los factores epigenticos involucrados en el desarrollo normal y la diferenciacin celular controlada estn
en el principio de su exploracin, y su relevancia para
la clonacin teraputica es innegable. El conocimiento
sobre la impronta epigentica (modificaciones reversibles del DNA durante el desarrollo), su borrado, reestablecimiento y estabilidad estn avanzados en modelos
animales. Sin embargo, queda todava por realizar un
estudio similar en humanos en el que se comparen los
cambios epigenticos en las hESC derivadas de ovocitos fertilizados in vitro (conocidas desde hace algunos
aos) con la situacin epigentica de las actuales hESC
derivadas por TN. Por ltimo, a nivel del DNA genmico, falta establecer con precisin las consecuencias
que pudieran tener las posibles alteraciones en el comportamiento del binomio de la inmortalidad telomerasatelmero en las hESCTN de clulas envejecidas
tomadas de individuos posnatales (nios y adultos).

Clonacin reproductiva humana


Con el desarrollo de la biologa molecular y la biotecnologa en menos de 50 aos se descifr la estructura del
DNA, se aprendi su lenguaje y ahora, despus del proyecto del genoma humano, puede leerse la informacin
contenida en los cromosomas.
Por ello, hemos dejado de ser observadores del proceso evolutivo y somos capaces de modificar las instrucciones genticas de plantas, animales y la de nosotros mismos. Esta recin adquirida habilidad ha trado
consigo enormes esperanzas acerca de su utilizacin en
la medicina y en el control de enfermedades como el
cncer, la tuberculosis y la esquizofrenia. Sin embargo,

(Captulo 4)

la posibilidad de que estos conocimientos hagan realidad la clonacin reproductiva humana ha causado una
tecnofobia generalizada.
Como resultado, diversos grupos han pedido una total prohibicin de la clonacin en cualquiera de sus formas, sin importar las razones por las que se pretenda
continuar con este tipo de investigaciones. Los movimientos clonofbicos estn destinados al fracaso, ya
que, nos guste o no, el nacimiento del primer beb clonado puede haber ocurrido ya.
En este siglo XXI se ha instalado de lleno la medicina
regenerativa con su bastin principal, la terapia celular
con clulas madre; tambin estamos entrando de lleno
en la era de los clones, ya que hasta el momento la ciencia ha creado mediante este proceso ovejas, vacas,
gatos, y actualmente existen en el mundo al menos una
docena de laboratorios que tienen la capacidad de clonar
seres humanos. La clonacin humana es algo inevitable;
la curiosidad cientfica, la fama, y la demanda para tal
tecnologa lo garantizan. Sin embargo, es poco probable
que en el futuro este procedimiento est al alcance de
cualquier persona y que nuestras sociedades lleguen a
estar divididas dependiendo del modo en que sus individuos sean concebidos. Las razones de ello son el elevado costo econmico y tico, as como el riesgo que
tendrn que enfrentar las personas interesadas en producir copias de s mismas.
La clonacin no es una ciencia exacta y en promedio
se requieren 100 intentos para obtener el nacimiento de
un organismo sano viable. A esto debe aadirse la posibilidad de invertir mucho dinero y obtener un resultado
no deseado pues, como ocurri al clonar un gato en
2001, el producto puede no ser fsicamente idntico a su
progenitor gentico. En casos como ste la clonacin ha
sido una herramienta muy til, pues ha demostrado que
no somos exclusivamente el producto de nuestros genes, sino de cmo estos se expresan e interaccionan con
nuestro medio ambiente. El clonar una oveja, un gato o
una vaca tiene sus ventajas, pues nadie parece preocupado por evaluar su coeficiente intelectual y compararlo
con sus progenitores. En el caso de un humano esto podra no ser tan trivial, sobre todo si se considera que se
desconoce casi por completo cmo funcionan la memoria y cmo los genes influyen en la inteligencia.
A los futuros padres debe advertrseles tambin de la
posibilidad de que el producto, desde el punto de vista
cognoscitivo, podra no ser una copia de ellos. Y si ste
es el caso, debera aadirse una clusula al contrato de
clonacin en la que se especifique que no podr haber
devolucin del producto si viene defectuoso de origen.
Tambin es probable que la vida de un clon sea muy diferente a la nuestra, en particular con respecto a su

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


expectativa de sobrevivencia. La oveja Dolly, primer
organismo clonado, falleci vctima de envejecimiento
prematuro o de que naci siendo vieja.
En el caso de la clonacin humana, adems de poner
en peligro a la especie, nuestros valores o la riqueza y
diversidad gentica generada durante millones de aos
de evolucin; el tema sirve de botn a las acciones precipitadas de polticos oportunistas en respuesta a la prensa
internacional. En varios pases, incluido Mxico, se han
tomado medidas legales para prohibir la clonacin y
manipulacin de clulas derivadas de tejidos embrionarios sin conocer a fondo estas tecnologas y quitando la
oportunidad al avance mdicocientfico de poder sanar
enfermedades hasta hoy incurables. Esto retrasar el desarrollo de tcnicas que beneficiaran a millones de personas en todo el mundo. Algunas de las aplicaciones mdicas de esta tecnologa ya se usan en la terapia celular.
Cada ao, miles de personas reciben un tratamiento
con anticuerpos para controlar enfermedades como la
hepatitis, el ttanos y trastornos autoinmunitarios. Sin
embargo, estos anticuerpos son difciles de obtener
mediante las tcnicas utilizadas actualmente y se corre
el riego de contaminacin por patgenos an no descritos, como ocurri con el virus del SIDA. Investigadores
de la compaa Hematech, en Dakota, EUA, estn tratando de convertir vacas en fbricas de anticuerpos humanos mediante una tcnica semejante a la utilizada
para clonar a Dolly. Estos animales produciran leche
enriquecida con estas protenas, que despus de ser
purificadas podran ser utilizadas en seres humanos. De
tener xito, esto revolucionara la produccin de sueros
hiperinmunitarios y de vacunas, disminuyendo los costos de produccin y beneficiando potencialmente a millones de personas.
Otro grupo de investigacin ha clonado cerdos, con
la intencin de modificar la informacin gentica de los
genes que codifican para el MHC para que sus rganos,
como el corazn o los pulmones, sean idnticos a los rganos humanos y puedan ser utilizados en pacientes que
de otro modo moriran esperando un donador compatible.
Recientemente, un grupo de investigadores de Australia aisl clulas madre de cerebros de ratas adultas.
Este mtodo ha mostrado, sin embargo, que slo 1 de
cada 300 clulas del cerebro es progenitora.
De forma interesante, el profesor escocs Ian Wilmut, padre de la oveja Dolly, ya no quiere clonar ms,
sino reprogramar clulas de la piel para obtener clulas
madre pluripotenciales con las mismas propiedades que
las embrionarias, segn anunci en la revista alemana
Bild der Wissenschaft en Stuttgart, donde en una entrevista en la edicin de abril de 2008 seal: He cam-

93

biado de opinin. No es correcto pedir vulos a las mujeres cuando las probabilidades de xito en la clonacin
son tan escasas.
La donacin de vulos representa un riesgo para las
mujeres, aunque sea escaso, recalc el cientfico, que
trabaja en el Instituto Roslin para la Medicina Regenerativa, cerca de Edimburgo. En 2005 Wilmut, quien revolucion la tecnologa de clulas madre al clonar en
1996 la primera oveja del mundo, Dolly, obtuvo el permiso de las autoridades britnicas para clonar embriones humanos con el fin de investigar las causas de la
esclerosis lateral amiotrfica (ELA), una patologa provocada por la degeneracin de las neuronas motoras.
Un grupo de investigadores japoneses liderado por
Shinya Yamanaka, de la Universidad de Kioto, anunci
en noviembre de 2007 que haba reprogramado clulas
drmicas y las haba transformado en clulas madre pluripotentes, semejantes a las que se obtienen de los embriones. Wilmut subray que a partir de ahora quiere
dedicarse a esa tcnica de obtencin de clulas madre,
pues pese a que en un futuro cercano las clulas embrionarias seguirn siendo el sistema de referencia, ms
adelante quedar claro que las reprogramadas son
igual de buenas. Segn la revista cientfica alemana,
Wilmut ya comenz en febrero de 2008 a reprogramar
clulas de la piel de enfermos de esclerosis lateral amiotrfica. Su objetivo es dejarlas cultivar y derivar en neuronas, para estudiar as nuevos tejidos.
Un equipo de cientficos ingleses lograron crear los
primeros embriones hbridos humanoanimales en la
Universidad inglesa de Newcastle. Estos embriones,
desarrollados a partir de la inyeccin de material gentico de clulas epidrmicas humanas en vulos de vaca
enucleados sobrevivieron hasta tres das y forman parte
de una investigacin sobre varias enfermedades. El experimento fue autorizado por la Autoridad de Embriologa y Fertilizacin Humana semanas antes de que la Cmara de los Comunes votara sobre el proyecto de ley de
investigacin embrionaria y fertilidad, muy criticado
por la Iglesia catlica. De acuerdo con la BBC, el organismo regulador, que tiene potestad para conceder licencias en algunos casos, no quera perjudicar la investigacin.
Debido a las presiones, el primer ministro, Gordon
Brown, se vio obligado a conceder la libertad de voto a
los diputados laboristas en los aspectos ms polmicos
de su proyecto de ley, que regula la creacin de embriones hbridos destinados a la investigacin con fines teraputicos. La Iglesia catlica se opone a este tipo de investigaciones porque considera que son un ataque contra
los derechos humanos y pueden dar lugar a monstruosas
aberraciones. Por su parte, los cientficos dicen que la

94

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

creacin de embriones hbridos con ncleos celulares


humanos en vulos animales (que se utilizaran para
cultivar clulas madre y despus se destruiran, sin llegar a la fase de fetos) compensara la actual escasez de
donaciones de vulos humanos.
Los cientficos de Newcastle utilizaron vulos de
vaca precisamente por la falta de vulos humanos. En
declaraciones a la cadena noticiosa, el profesor John
Burn argument que su investigacin es totalmente
tica ya que, adems de haber sido autorizada, experimenta con un puado de clulas a las que nunca se les
permitir desarrollarse. Tras este primer paso, el equipo de cientficos intentar ahora que este tipo de embriones sobrevivan unos seis das, para poder extraer entonces clulas madre que podran usarse para investigar
tratamientos de enfermedades mediante terapia celular.

Usos potenciales de clulas madre


en la terapia celular
1. El crecimiento de neuronas y clulas gliales para
reparar las lesiones de la mdula espinal que resultan en parlisis de las extremidades.
2. La formacin de clulas musculares cardiacas
para reemplazar el tejido cicatrizal secundario a
infarto del miocardio.
3. El aislamiento de clulas cerebrales que secreten
dopamina para el tratamiento de la enfermedad de
Parkinson.
4. El trasplante de clulas pancreticas para producir
insulina, como tratamiento regenerativo para la
diabetes.
5. El crecimiento y purificacin de clulas de mdula
sea para el tratamiento de leucemias.
6. Terapia de regeneracin celular y de antienvejecimiento.
7. La modificacin gentica de clulas sanguneas
para hacerlas resistentes a la infeccin por virus
del SIDA, inmunomodulacin en el cncer y en
afecciones autoinmunitarias, etc.
8. Otras.
La importancia que tiene continuar el desarrollo de mtodos que permitan el uso de clulas madre es incuestionable. En el mundo existen cerca de 400 millones de
personas cuya vida podra ser salvada, o al menos mejorada sustancialmente, con la terapia celular con clulas
madre, como ya se est haciendo en Mxico.
Pases de primer mundo como Suiza, Gran Bretaa
y EUA han autorizado el uso de clulas madre para la

(Captulo 4)

investigacin con finalidad teraputica. Las autoridades


britnicas aprobaron el uso de embriones de animales
para crear clulas madre humanas. La Autoridad de Fertilizacin Humana y Embriologa decidi aceptar dicha
investigacin, mediante la cual el DNA humano es inyectado en embriones de vacas o conejos a los que se ha
retirado su material gentico. Los proyectos sern decididos caso por caso, ya que esta investigacin es crtica
para descubrir un tratamiento eficaz contra el Alzheimer y el Parkinson, entre otros. Se pretende utilizar embriones de animales porque el suministro de embriones
humanos es limitado y tiene implicaciones ticas.
Sin embargo, el riesgo de producir bebs genticamente modificados podra ser desastroso; por esta razn
y debido a la presin cada vez ms creciente en el
mundo de la aplicacin de la medicina regenerativa,
sera conveniente que la legislacin mundial diera apertura controlada al uso de las clulas madre humanas sin
manipulacin gentica adicional que pudiera desencadenar consecuencias peligrosas, pese al hecho de que
los estudios considerados slo permitirn el desarrollo
de los embriones por unos pocos das hasta la etapa de
mrula o blastocisto.

CULTIVOS DE CLULAS MADRE

Como las clulas madre embrionarias se obtienen de la


mrula o blastocisto, tienen que disociarse tratndolas
con enzimas proteolticas (como la tripsina y la colagenasa) y con agentes como el Ca++, del que depende la
adhesin celular. Para las clulas madre se sigue un protocolo de manejo similar. Los tejidos se disocian mediante agitacin suave, mientras que para separar los diferentes tipos celulares a partir de una suspensin
celular mixta se utilizan varios mtodos que aprovechan
las diferentes propiedades fsicas de las clulas. Por
ejemplo, las clulas grandes pueden separarse de las
pequeas, y las clulas ms densas de las menos densas,
mediante centrifugacin.
Otra estrategia se basa en la tendencia de algunos
tipos de clulas a adherirse con fuerza al cristal o al plstico, lo cual permite separarlas de clulas que se adhieran menos. La tcnica ms desarrollada de separacin
celular se basa en el marcaje especfico de las clulas
madre con anticuerpos acoplados a un colorante fluorescente, y posterior separacin de las clulas marcadas
de las no marcadas mediante un clasificador celular
activado por fluorescencia. Este procedimiento, conocido como seleccin o sorting, se lleva a cabo en un

Manejo de las clulas madre en el laboratorio


citmetro de flujo en donde las clulas pasan en fila a
travs de un haz de luz lser, determinndose la fluorescencia de cada clula. Una vez que se han separado y
caracterizado las clulas madre embrionarias, se pueden utilizar citocinas y factores de crecimiento para
inducir su diferenciacin hacia estirpes celulares especficas.

95

caracterizan in vivo: las clulas madre diferenciadas a


fibroblastos secretan colgeno, las clulas derivadas del
msculo esqueltico embrionario se fusionan formando
fibras musculares gigantes que se contraen espontneamente en la caja de cultivo, las clulas nerviosas emiten
axones que son excitables elctricamente y que establecen sinapsis con otras clulas nerviosas, y las clulas
epiteliales forman extensas lminas con muchas de las
propiedades que caracterizan a los epitelios in vivo.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Cultivo celular en cajas


Las clulas madre en cultivo sobreviven, se multiplican
e incluso expresan propiedades diferenciales en condiciones adecuadas. Las clulas madre pueden visualizarse al microscopio o analizarse bioqumicamente, y
tambin se pueden estudiar los efectos de la adicin o
eliminacin de molculas determinadas, como hormonas o factores de crecimiento. Adems, en cultivos mixtos pueden estudiarse las interacciones entre un tipo celular y otro. Los experimentos con clulas madre en
cultivo se denominan in vitro (en vidrio), a diferencia de
los experimentos realizados en organismos intactos o in
vivo (en el organismo vivo).
Los experimentos originales implicaban el cultivo de
pequeos fragmentos de tejido, denominados explantes. Si bien esta tcnica sigue utilizndose, en la actualidad los cultivos se suelen preparar a partir de suspensiones de clulas madre obtenidas por disociacin de
tejidos, como ya se ha dicho. A diferencia de las bacterias y de muchas clulas vegetales, la mayor parte de las
clulas animales no estn adaptadas para crecer en suspensin, de manera que necesitan una superficie slida
sobre la cual crecer y dividirse. En la actualidad este soporte lo constituye la superficie de plstico de una placa
de cultivo. Sin embargo, los distintos tipos de clulas
madre tienen requerimientos diferentes; algunos de
ellos no crecen o no logran diferenciarse a menos que
la placa de cultivo est recubierta de componentes de
matriz extracelular (MEC) como la laminina, el colgeno, la fibronectina, etc.
Los cultivos preparados directamente a partir de los
tejidos de un organismo, con fraccionamiento previo o
sin l, reciben el nombre de cultivos primarios. En la
mayora de los casos las clulas madre de los cultivos
primarios pueden recuperarse de la placa de cultivo y
utilizarse para formar un gran nmero de cultivos
secundarios de clulas madre en vas de diferenciacin.
De esta forma, las clulas madre pueden ser subcultivadas repetidamente durante semanas, meses o aos sin
agotar la fuente de clulas, ya que stas se dividen indefinidamente por su actividad de telomerasa permanente.
Estas clulas muestran in vitro las propiedades que las

Lneas de clulas madre


La mayora de las clulas de vertebrados mueren tras un
nmero finito de divisiones en cultivo: por ejemplo, los
fibroblastos humanos en cultivo sobreviven durante algunos meses, dividindose nicamente entre 50 y 100
veces antes de morir. Esta vida limitada est relacionada
tambin con la vida limitada del humano. Sin embargo,
en cultivo surgen en ocasiones algunas clulas que han
sufrido alguna mutacin que las hace inmortales. Estas
clulas proliferan indefinidamente y pueden propagarse
como una lnea celular inmortal, como es el caso de las
clulas HeLa comentado al principio del captulo. La
extensin de la vida de un cultivo celular in vitro procedente de tejidos u rganos se logr gracias al uso de mltiples medios de cultivo, enriquecidos con sueros y suplementos, que al almacenarse en incubadoras simulan
el microambiente de un organismo vivo. Muchos laboratorios de investigacin en todo el mundo emplean los
cultivos celulares para validar sus mtodos de anlisis
y experimentos.
Los datos derivados de los ensayos en cultivos celulares pueden culminar en la publicacin de un artculo
en una revista especializada, en una patente o en la aplicacin de un tratamiento mdico contra algn padecimiento. Gracias al empleo de los cultivos celulares se
han realizado grandes avances en beneficio de las ciencias biomdicas.
Las clulas HeLa fueron indispensables para obtener
la vacuna de la polio y podran, algn da, ayudar a curar
el cncer. Otro ejemplo son las investigaciones de
George Kehler y Csar Milstein, quienes obtuvieron
anticuerpos monoclonales con especificidad predefinida a partir de la fusin de dos clulas distintas utilizando cultivos celulares. Hoy en da la tecnologa de los
anticuerpos monoclonales es indispensable para el
diagnstico y el tratamiento teraputico de varias enfermedades.
Las principales instituciones internacionales que resguardan y distribuyen cultivos de clulas madre con
propsitos de aplicacin clnica y de investigacin, ade-

96

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


Mdula
espinal

Aislamiento
celular

Digestin
enzimtica
Filtro de
nailon

Cultivo

Separacin

Mielina y detritus
Gradiente de Percoll
Eritrocitos

Clulas
lavadas
Cultivo

Figura 42. Protocolo de aislamiento de clulas madre de


mdula espinal de adulto. El tejido se somete a digestin
enzimtica y disociacin mecnica. Por filtracin se separan
los fragmentos grandes y la suspensin de clulas. Las
clulas madre se separan con gradientes de densidad de
Percoll, se lavan y se cultivan (adaptado de: Shannon
Macauley).

ms de Suiza y Espaa, son la American Type Culture


Collection (ATCC, en EUA), la European Collection of
Animal Cell Cultures (ECACC, en Inglaterra), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen
(DSMZ, en Alemania) y el Japanese Collection of
Research Bioresources Cell Bank (JCRB Cell Bank, en
Japn). Estas organizaciones emplean un sistema criognico y genealgico de conservacin y control de calidad de los cultivos celulares con el objetivo de evitar
mantener una lnea celular en cultivo extensivo o continuo cuando no se requiera, para evitar riesgos de contaminacin cruzada con otra lnea celular o microbiana,
y para que no se pierda el genotipo o fenotipo de inters.
De esta manera se garantizan la continuidad y la reproducibilidad de los resultados en la investigacin.
La importancia de manejar cultivos celulares para las
industrias farmacuticas radica en su aplicacin en estudios toxicolgicos. El empleo de modelos animales

(Captulo 4)

para la evaluacin de la respuesta biolgica que incitara


a dicho frmaco en humanos es crucial; no obstante, los
cultivos celulares han brindado un excelente modelo
para el estudio alternativo de citotoxicidad, bioequivalencia, sensibilidad y neutralizacin de frmacos, con
resultados similares o mejores que en un modelo animal. Esto se suma a las nuevas legislaciones de varios
pases que prohben experimentar con animales, como
Alemania, donde se prohbe la obtencin de anticuerpos
monoclonales de lquido asctico de animales. Lo anterior ha obligado a buscar otros mtodos de anlisis.
Los cultivos celulares resuelven estas dificultades
porque permiten validar frmacos a travs de bioensayos como experimentos de ciclo celular, diferenciacin,
proliferacin, inhibicin, motilidad, quimiotaxis,
muerte celular por apoptosis, citotoxicidad y necrosis.
Estos protocolos no slo permiten estudiar la efectividad de los frmacos, sino tambin la actividad biolgica
de diversas protenas naturales, sintticas o recombinantes, como citocinas, quimiocinas, hormonas, receptores, proteasas, molculas de adhesin y anticuerpos.
Tan sobresaliente es el papel que desempean los
cultivos celulares que hoy en da muchas firmas comerciales prestigiadas han implementado estos bioensayos
en sus protocolos para evaluar rpida, reproducible y
confiablemente la actividad biolgica de productos desarrollados por ellos. Tan slo basta mirar la hoja tcnica de un producto para reconocer que se utiliz un cultivo celular para medir la actividad biolgica de su
molcula.
Las lneas celulares obtenidas a partir de clulas cancerosas difieren de las que se obtienen a partir de clulas
normales en varios aspectos; por ejemplo, a menudo las
lneas de clulas cancerosas crecen sin adherirse a ninguna superficie y proliferan en una placa de cultivo en
mucha mayor densidad que la de las clulas normales.
A pesar de que todas las clulas de una lnea celular son
muy similares entre s, a menudo no son idnticas. La
uniformidad gentica de una lnea celular puede mejorarse con la clonacin celular, mediante la cual se asla
una nica clula y se le permite proliferar hasta formar
una colonia.
Un clon celular es cualquier poblacin de clulas
derivadas de una nica clula ancestral. Una de las aplicaciones ms importantes de la clonacin celular ha
sido el aislamiento de lneas celulares mutantes con
defectos en determinados genes de manera natural o
inducida. Si la expresin de un gen se elimina de forma
permanente, se denomina expresin knock out, pero si
se introduce un gen extrao supernumerario y funcional
del genoma nativo de forma artificial, se denomina
expresin transgnica (figura 42).

Manejo de las clulas madre en el laboratorio

INMUNOLOCALIZACIN
PARA PROTENAS

Los marcadores de las clulas madre pueden identificarse mediante anticuerpos especficos con un sistema
de revelado adicional, lo que permite visualizar las clulas en el microscopio de luz en el caso de la inmunohistoqumica, o con un microscopio de fluorescencia o con
focal mediante la tcnica de inmunofluorescencia. Las
clulas madre en suspensin tambin pueden identificarse, clasificarse y separarse mediante citometra de
flujo o por seleccin de clulas.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Sistema avidinabiotina
La avidina es una glicoprotena derivada del huevo con
afinidad extremadamente elevada (afinidad constante >
1015 M1) para la biotina. Muchas molculas de biotina
pueden acoplarse a una protena, permitiendo a la protena biotinilada unirse a ms de una molcula de avidina. Si la biotinilacin se realiza en condiciones ptimas, la actividad biolgica de la protena puede
conservarse. Por los enlaces covalentes con que se une
la avidina con diferentes ligandos, como fluorocromos,
enzimas o marcadores, el sistema avidinabiotina puede utilizarse para estudiar una amplia variedad de estructuras biolgicas.
Este sistema ha demostrado ser particularmente til en
el descubrimiento y localizacin de marcadores celulares
especficos, molculas de superficie, antgenos, glucoconjugados y cidos nucleicos, empleando anticuerpos
biotinilados, lectinas o sondas de cidos nucleicos. El
mtodo ABC, o mtodo del complejo preformado, es
una variante del sistema avidinabiotina. Despus de la
aplicacin de un anticuerpo primario o secundario biotinilado se agrega un complejo preformado entre avidina
y una enzima biotinilada. El sistema de avidinabiotina
proporciona la mayor sensibilidad en fluorescencia y en
la deteccin basada en enzimas, versatilidad que permite un intercambio fcil o la introduccin de marcadores mltiples, y la habilidad de localizar o descubrir
antgenos difciles de ver o de medir con otras tcnicas.

Inmunohistoqumica con peroxidasa


Despus de obtener clulas madre de su sitio natural,
por ejemplo las de origen epidrmico ubicadas en el es-

97

trato basal o las cultivadas in vitro, se inhibe la peroxidasa endgena por incubacin con una solucin de metanol
y perxido de hidrgeno a 30% (34 mL de metanol y 6
mL de H2O2) durante 2 h en un vaso de Coplin. Despus
de lavar con alcohol de 96%, agua y amortiguador salino
de fosfatos (PBS), se bloquean los sitios libres antignicos con suero a 3% en PBS/Triton 0.3% por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso y se aplican los anticuerpos primarios contra los antgenos blanco a una
dilucin 1:100 en la solucin de bloqueo. Se incuba toda
la noche en cmara hmeda a 4 _C. Despus de este
tiempo, las laminillas se lavan dos veces en agitacin de
100 revoluciones por minuto (rpm) con PBS y se agregan
los anticuerpos secundarios: antirratn, conejo, cabra o
humanos biotinilados dirigidos contra los anticuerpos
primarios correspondientes a una dilucin 1:200 en la
solucin de bloqueo y se dejan incubar por 1 h a temperatura ambiente en agitacin de 20 rpm; luego se lava nuevamente dos veces en agitacin de 100 rpm con PBS. Las
preparaciones se colocan nuevamente 30 min en la cmara
hmeda en contacto con el complejo avidinabiotina en
PBS. La reaccin antgenoanticuerpo se detecta empleando una solucin que contiene 40 mL de H2O2 a 30%,
ya que es el sustrato de la enzima peroxidasa, 1 mg del cromgeno diaminobencidina (DAB) que funciona como
aceptor de electrones, disuelto en 1 mL de PBS. Despus
de 15 min de exposicin a esta solucin, las laminillas se
lavan con agua corriente, se contratien con hematoxilina
de Harris, se deshidratan y se montan con resina sinttica
y cubreobjetos de 25 x 25 a 50 mm del nmero 1. Posteriormente se observan al microscopio adecuado.

Inmunohistoqumica
con fosfatasa alcalina
Despus de obtenidas las clulas madre, se lavan con
amortiguador salino de fosfatos (PBS), se bloquean los
sitios libres antignicos con suero a 3% en PBS/Triton
0.3%, por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso
y se aplican los anticuerpos primarios, por ejemplo, monoclonal IgG1 de ratn antiantgeno blanco, a una dilucin 1:100 en la solucin de bloqueo. Se incuba toda la
noche en cmara hmeda a 4 _C. Terminado este tiempo, las laminillas se lavan dos veces en agitacin de 100
rpm con PBS y se agregan 50 mL de anticuerpo secundario cabra antirratn y anticonejo acoplado a fosfatasa alcalina y se deja incubar por 1 h a temperatura ambiente
en agitacin de 20 rpm; luego se lavan de nuevo dos
veces en agitacin de 100 rpm con PBS.
La reaccin antgenoanticuerpo se detecta con 100 mg
del cromgeno rojo rpido en naftol solucin y amorti-

98

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

guador Tris ms levamisol para inhibir fosfatasa alcalina endgena. Despus de 15 min de exposicin a esta
solucin, las laminillas se lavan con agua corriente, se
contratien con hematoxilina de Harris y se montan con
glicerol o resina de montaje hidrosoluble y cubreobjetos
de 25 x 25 a 50 mm del nmero. Despus de sellar las
preparaciones permanentemente con esmalte de uas o
cemento ahulado, se observan al microscopio y se toman fotografas.

Inmunofluorescencia
Esta tcnica se realiza para observar y analizar los marcadores de las clulas madre en microscopios de fluorescencia (epifluorescencia) o microscopios confocales. Despus de lavar las clulas madre con agua y PBS,
se bloquean los sitios libres antignicos para evitar pegado inespecfico con suero a 3% en PBS/Triton X100
a 0.1% por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso
de la solucin y se colocan los anticuerpos primarios
contra los antgenos blanco a una dilucin 1:100 en cmara hmeda, y se dejan incubando toda la noche a temperatura ambiente.
Terminado este tiempo, las laminillas se lavan tres
veces con PBS y se agregan los anticuerpos secundarios
acoplados a fluorocromos (FITC, cianina 5 o Cy5,
TRITC, etc.) contra los anticuerpos primarios correspondientes a una dilucin 1:100, y se dejan incubar por
50 min en la cmara hmeda oscura; luego se vuelven
a lavar tres veces con PBS, se montan en los cubreobjetos con la resina de montaje hidrosoluble y se sellan con
cemento ahulado o esmalte de uas. Despus se observan con el microscopio adecuado para fluorescencia.

Hibridacin in situ (ISH)


Esta tcnica se aplica a la deteccin de secuencias especficas de cidos nucleicos, ya sea de RNA o de DNA,
a nivel del ncleo o citoplasma. La conjuncin entre las
tcnicas histolgicas y el marcaje de sondas de cidos
nucleicos ha permitido identificar las clulas involucradas en el proceso que se estudia en el contexto de un tejido. Las ventajas del uso de la ISH sobre otras tcnicas
es muy amplia; se pueden utilizar tejidos fijados con
formaldehdo e incluidos en parafina y almacenados durante aos, a diferencia de la mayora de las tcnicas que
estudian la expresin celular y utilizan tejido fresco. La
ISH es una herramienta muy poderosa para identificar
la expresin de genes especficos de las clulas madre

(Captulo 4)

mediante la identificacin de su mRNA. La ISH tambin puede identificar clulas de cualquier estirpe celular
que expresen genes especficos (mRNA), para detectar
qu tipo de clulas estn infectadas con microorganismos patgenos y estudiar caractersticas intrnsecas del
genoma, identificacin de genes (DNA), sexo o alteraciones cromosmicas. Incluso se pueden evaluar de manera semicuantitativa y cualitativa las caractersticas y
niveles de expresin de genes en particular. Por un lado
se puede tener abundancia de material biolgico almacenado por aos sin detrimento en la estructura y calidad de los cidos nucleicos, y por otro se utilizan algunas clulas madre obtenidas de los cultivos in vitro o
cantidades minsculas del tejido (cortes de 3 a 5 mm).
El procedimiento de la ISH involucra una serie de
pasos que se pueden resumir como sigue: las clulas
madre se colocan en laminillas recubiertas de molculas
cargadas que permiten una unin fuerte entre la clula
y la superficie del vidrio, como el silano y la Poli
LLisina. Despus de garantizar la completa hidratacin de las clulas madre se realiza la permeabilizacin,
la cual se logra al tratar la muestra con la enzima proteinasa K a muy baja concentracin (1 a 5 mg/mL) o pepsina; con estas enzimas se digieren estructuras proteicas
que estorban el paso de sondas marcadas hacia el citoplasma o el ncleo celular.
Despus se realiza el proceso de prehibridacin o
bloqueo de sitios que potencialmente podran generar
uniones inespecficas entre la sonda que va a utilizarse
y las secuencias de RNA o DNA existentes en las clulas. Se utiliza una solucin de prehibridacin que entre
sus componentes utiliza tambin DNA fraccionado de
esperma de salmn. La funcin de estos fragmentos de
DNA desnaturalizado en cadena sencilla es unirse a los
sitios inespecficos para evitar que la sonda se enlace en
secuencias incorrectas.
El siguiente paso es el de la hibridacin, en la cual
una sonda especfica se une a una secuencia complementaria, ya sea en el citoplasma o en el ncleo. Con los
tratamientos previos a la hibridacin se logra que las
clulas madre sean permeables a la sonda, que por lo
general es una secuencia de DNA de cadena sencilla de
20 a 50 bases.
En este paso es crucial calentar la muestra a 80 _C
(temperatura de desnaturalizacin) para permitir la desnaturalizacin de estructuras secundarias de RNA y que
la sonda se una a la secuencia complementaria. Este
paso se contina a 37 a 45 _C durante 24 h para permitir
que la sonda sature los sitios de unin en el citoplasma
celular. Al finalizar el paso anterior se deben eliminar
el exceso de sonda y algunas uniones inespecficas, para

Manejo de las clulas madre en el laboratorio

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

lo cual se realizan lavados hipertnicos que eliminan la


sonda no incorporada. Los lavados se realizan a una
astringencia tal que se eliminan el exceso de sonda y las
uniones falsas entre la sonda y secuencias inespecficas.
Finalmente se monta la preparacin (montaje de la
preparacin); si se utiliz una sonda marcada con molculas fluorescentes, se coloca sobre la muestra una sustancia que conserva la fluorescencia, como la resina de
montaje VECTASHIELDR. Se cubre la preparacin
con un cubreobjetos y se sella con esmalte para uas
transparente. El procedimiento que se acaba de describir se denomina ISH directa, ya que la sonda utilizada
emite por s misma la seal fluorescente. Pero si la
sonda contiene estreptavidina, se puede usar un anticuerpo secundario biotinilado con su respectivo paso de
revelado con diaminobencidina (DAB) para utilizar
microscopia de luz, ya que la DAB tiene un color caf
tabaco caracterstico.
En este caso la tcnica se denomina ISH indirecta, ya
que utiliza un sistema de revelado adicional que reacciona con la sonda. Cuando se evala la expresin de
genes se debe considerar que en el ambiente, en la piel
del experimentador, en el aire exhalado y en prcticamente todas las superficies existen las enzimas RNAasas que pueden degradar los mRNA del tejido que se va
a analizar; por lo tanto, todo el material de laboratorio
que se utiliza para esta tcnica debe descontaminarse a
fin de eliminar estas enzimas RNAasas. Para tal efecto,
antes de iniciar la hibridacin se hornea a 300 _C por 4
h todo el material de metal y de vidrio; el agua que se
utiliza se trata con dietilpirocarbonato (DEPC), que elimina la actividad de las RNAasas, y se debe trabajar en
condiciones adecuadas de biologa molecular utilizando campana de flujo laminar, mechero de Bunsen, gafas, bata, cubrebocas, guantes, etc.

Aspectos bioticos
sobre las clulas madre
El pblico en general, como siempre, est confundido
por las declaraciones hechas por lderes religiosos y
polticos que de buena o mala fe aprovechan la difusin
realizada por los medios masivos de comunicacin. En
el concepto del grupo de investigacin de la AMMR
(Asociacin Nacional de Medicina Regenerativa), la
polmica trasciende la posibilidad de una discusin
cientfica, situndose en el plano de las creencias desarrolladas por las diversas idiosincrasias. En Mxico,
con una mayora de catlicos, result polticamente
ventajoso para muchos diputados votar por la prohibi-

99

cin de cualquier forma de investigacin en clonacin


humana. Se argumenta que la vida humana es sagrada
y que su dignidad como tal se inicia en el momento de
la fecundacin.
Es obvio que la transferencia nuclear a un ovocito
enucleado en el laboratorio est lejos de ser una fecundacin en su sentido original. Sin embargo, se dice que
si el cigoto artificialmente reconstruido tiene potencialidad para desarrollarse como ser humano, la defensa
de su derecho a nacer no debe distinguirse de la defensa
que se hace para cualquier individuo que se desarrolla
normalmente. Aunque planteado as el argumento parece vlido, lo que en realidad se est defendiendo es la
potencialidad del ovocito para desarrollarse como ser
humano.
Desde el punto de vista biolgico, el ovocito ovulado
del ovario humano cada 28 das es potencialmente un
ser humano. Si voluntariamente se evita su fecundacin
con mtodos de abstinencia, ritmo biolgico, dispositivos mecnicos o frmacos, se estar interfiriendo conscientemente con la potencialidad del ovocito para
desarrollarse como ser humano. Adems, cualquier clula somtica del cuerpo humano tiene la potencialidad
de convertirse en un ser humano al contener el genoma
completo.
De alrededor de 400 ovocitos ovulados por una mujer
durante su vida reproductiva, slo algunos cumplen con
su potencialidad en el sentido descrito para desarrollarse como seres humanos. Para lograrlo, los ovocitos
requieren pasar por una compleja seleccin natural (factores biolgicos) y, en el caso de la especie humana,
tambin por una seleccin cultural (factores psicolgicos, culturales, sociales, econmicos, etc.). El concepto
de potencialidad del ovocito para desarrollarse como
un individuo adulto en trminos biolgicos es esencialmente probabilstico. En cambio, si se maneja el mismo
concepto en trminos ticos, tal vez sea posible distinguir la diferencia en la intencionalidad de la clonacin reproductiva y la teraputica. En la primera se busca reproducir a un individuo con una rplica del genoma
del donante del ncleo transferido. Al respecto, los resultados hasta ahora obtenidos con animales unifican a
la mayora de la comunidad cientfica, que todava no
recomienda este tipo de clonacin en seres humanos.
En la clonacin teraputica, en cambio, la intencin
es obtener clulas clonadas de un paciente donador, capaces de regenerar tejidos daados por factores genticos o traumticos. Es indudable que los avances de la investigacin en esta rea van a continuar con o sin la
aprobacin de los grupos actualmente opositores. Aunque costosa, la tecnologa de clonacin teraputica se
establecer a mediano plazo como una alternativa mdi-

100

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

ca de rutina, y las leyes prohibitivas actualmente vigentes en varios pases, incluido Mxico, tendrn que ser
revisadas y modificadas en beneficio de la poblacin en

(Captulo 4)

general, ya que las enfermedades hasta ahora incurables, como la diabetes, pueden regenerarse de forma
alentadora con la terapia celular con clulas madre.

REFERENCIAS
1. Abuljadayel IS: Harnessing pluripotency from differentiated cells: a regenerative source for tissuespecific stem
cell therapies. Curr Stem Cell Res Ther 2006;1(3):325331.
2. Afii S, Lyden D: Therapeutic stem and progenitor cell trasplantation for organ vascularization and regeneration. Nat
Med 2003;9:702712.
3. Aoi T, Yae K, Nakagawa M, Ichisaka T, Okita K et al.:
Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver
and stomach cells. Science 2008; [Epub ahead of print].
4. Blau HM, Brazelton TR, Weimann JM: The evolving concept of a stem cell: entity or function? Cell 2001;105:829841.
5. Blow N: Stem cells: in search of common ground. Nature
2008;451(7180):855858.
6. Brstle O, Jones KN, Learish RD, Karram K, Choudhary
K et al.: Embryonic stem cellderived glial precursors: a
source of myelinating transplants. Science 1999;285:
754756.
7. Carlson B: Embriologa humana y biologa del desarrollo.
3 ed. Espaa, Elsevier, 2005.
8. Cohen M, Itsykson P, Reubinoff B: Neural differentiation
of human ES cells. Curr Protoc Cell Biol 2007;Chapter 23:
Unit 23.7.
9. Cyranoski D: Stem cells: a national project. Nature 2008;
451(7176):229.
10. Daley GQ: Towards the generation of patientspecific pluripotent stem cells for combined gene and cell therapy of
hematologic disorders. Hematology Am Soc Hematol Educ
Program 2007;2007:1722.
11. Do JT, Han DW, Schler HR: Reprogramming somatic
gene activity by fusion with pluripotent cells. Stem Cell Rev
2006;2(4):257264.
12. Fu X, Sun X, Li X, Sheng Z: Dedifferentiantion of epidermal cells to stem cells in vivo. Lancet 2001;358:1067.
13. Gonzlez LGM: Terapia celular, medicina regenerativa y
antienvejecimiento. Rev Ejrcito Fuerza Area Mex 2008;
102(4):69.
13. Gonzlez LGM, Sosa LCA, Jurez MJL, TrejoBahena
NI, Nez SM et al.: Terapia celular y aplicacin de clulas
madre en la enfermedad de Parkinson (Revisin). Neurol
Neurocir Psiquiat 2007;40(3):8091.
14. Grant MB, May WS, Caballero S, Brown GA, Guthrie
SM et al.: Adult hematopoietic stem cells provide functional
hemangioblast activity during retinal neovascularization.
Nat Med 2002;8:607612.
15. Guo Y, Lubbert M, Engelhardt M: CD34 hematopoietic
stem cells: current concepts and controversies. Stem Cells
2003;21:1520.
16. Harris DT, Rogers I: Umbilical cord blood: a unique source
of pluripotent stem cells for regenerative medicine. Curr
Stem Cell Res Ther 2007;2(4):301309.
17. Hyun I, Hochedlinger K, Jaenisch R, Yamanaka S: New
advances in iPS cell research do not obviate the need for

18.

19.

20.

21.

22.
23.

24.

25.

26.

27.

28.

29.

30.

31.
32.

human embryonic stem cells. Cell Stem Cell 2007;1(4):


367368.
Jackson KA, Mi T, Goodell MA: Hematopoietic potential
of stem cells isolated from murine skeletal muscle. Proc Natl
Acad Sci USA 1999;96:1448214486.
Jiang HB, Tian WD, Liu LK, Xu Y: In vitro odontoblast
like cell differentiation of cranial neural crest cells induced
by fibroblast growth factor 8 and dentin noncollagen proteins. Cell Biol Int 2008 [epub ahead of print].
Jiang Y, Jahagirdar BN, Reinhardt RL, Schwartz RE,
Keene CD et al.: Pluripotency of mesenchymal stem cells
derived from adult marrow. Nature 2002;418:4149.
Kappas NC, Bautch VL: Maintenance and in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells to form blood vessels. Curr Protoc Cell Biol 2007;Chapter 23:Unit 23.3.
Krbling M, Estrov Z: Adult stem cells for tissue repair A
new therapeutic concept? N Engl J Med 2003;349:570582.
Krbling M, Katz RL, Khanna A, Ruifrok AC, Rondon
G et al.: Hepatocytes and epithelial cells of donor origin in
recipients of peripheral blood stem cells. N Engl J Med 2002;
346:738746.
Krause DS, Theise ND, Collector MI, Henegariu D,
Hwang S et al.: Multiorgan, multilineage engrafment by
a single bone marrowderived stem cell. Cell 2001;105:
369377.
Kumar S, Chanda D, Ponnazhagan S: Therapeutic potential of genetically modified mesenchymal stem cells. Gene
Ther 2008 [epub ahead of print].
Lewitzky M, Yamanaka S: Reprogramming somatic cells
towards pluripotency by defined factors. Curr Opin Biotechnol 2007;18(5):467473.
Martin GR: Isolation of a pluripotent cell line from early
mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 1981;78:
76347638.
Matsumura H, Tada T: Cell fusionmediated nuclear
reprogramming of somatic cells. Reprod Biomed Online
2008;16(1):5156.
McWhir J, Schnieke AE, Ansell R, Wallace H, Colman A
et al.: Selective ablation of differentiated cells permits isolation of embryonic stem cell lines from murine embryos with
a nonpermissive genetic background. Nature Genet 1996;
14:223226.
Mndez BE, Snchez GDJ, Ramrez SI, Ocharan HE,
Nnez SM et al.: Effect of caveolin1 scaffolding peptide
and 17?estradiol on intracellular Ca2+ kinetics evoked by
angiotensin II in human vascular smooth muscle cells. Am J
Physiol Cell Physiol 2007;293:C1953C1961.
Moore KL, Persaud TV: Embriologa clnica. 7 ed. Espaa, Elsevier, 2006.
Nakagawa M, Koyanagi M, Tanabe K, Takahashi K, Ichisaka T et al.: Generation of induced pluripotent stem cells

Manejo de las clulas madre en el laboratorio

33.

34.
35.
36.

37.

38.

39.

40.
41.
42.
43.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

44.

without Myc from mouse and human fibroblasts. Nat Biotechnol 2008;26(1):101106.
Park IH, Zhao R, West JA, Yabuuchi A, Huo H et al.:
Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with
defined factors. Nature 2008;451(7175):141146.
Pera MF: Stem cells. A new year and a new era. Nature
2008;451(7175):135136.
Lensch MW, West JA: Looking into the future of cellbased
therapy. South Med J 2008;101(1):7982.
Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, Jaiswal RK, Douglas R et al.: Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cell. Science 1999;284:143147.
Porada CD, Zanjani ED, Almeida PG: Adult mesenchymal stem cells: a pluripotent population with multiple
applications. Curr Stem Cell Res Ther 2006;1(3):365369.
Quaini F, Urbanek K, Beltrami AP, Finato N, Beltrami
CA et al.: Chimerism of the transplanted heart. N Engl J Med
2002;346:515.
Rao M, Condic ML: Alternative sources of pluripotent stem
cells: scientific solutions to an ethical dilemma. Stem Cells
Dev 2008;17(1):110.
Rohen JW: Embriologa funcional. Una perspectiva desde la
biologa del desarrollo. 3 ed. Mxico, Panamericana, 2008.
Rosenthal N: Prometheuss vulture and the stemcell promise. N Engl J Med 2003;349:267274.
Rossant J: Stem cells and early lineage development. Cell
2008;132(4):527531.
Sadler TW: Langman, embriologa mdica. 10 ed. Mxico,
Panamericana, 2007.
Snchez GDJ, Moro MA, Castillo HC, Hernndez PR,
Medina SR et al.: Ozone exposure induces iNOS expression
and tyrosine nitration in rat aorta. Environ Toxicol Pharmacol 2004;17:17.

101

45. Snchez GDJ, Trejo BNI: Biologa celular y molecular.


Mxico, Editorial Alfil, 2006.
46. Snchez GDJ, Trejo BNI: Prcticas de histologa. Mxico,
Editorial Alfil, 2007.
47. Shamblott MJ, Axelman J, Wang S, Bugg EM, Littlefield
JW et al.: Derivation of pluripotent stem cells from cultured
human primordial germ cells. Proc Natl Acad Sci USA
1998;95:13:726731.
48. Terada N, Hamazaki T, Oka M, Hoki M, Mastalerz DM
et al.: Bone marrow cells adopt the phenotype of other cells
by spontaneous cell fusion. Nature 2002;416:542545.
49. Thomson JA, ItskovitzEldor J, Shapiro SS, Waknitz
MA, Swiergiel JJ et al.: Embryonic stem cell lines derived
from human blastocysts. Science 1998;282:11451147.
50. Tsonis PA: Stem cells and betacells. Curr Stem Cell Res
Ther 2008;3(1):5354.
51. Verfaillie CM, Pera MF, Lansdorp PM: Stem cells: Hype
and reality. Hematology 2002;1:369391.
52. Vodyanik MA, Slukvin II: Hematoendothelial differentiation of human embryonic stem cells. Curr Protoc Cell Biol
2007;Chapter 23:Unit 23.6.
53. Waese EY, Kandel RR, Stanford WL: Application of stem
cells in bone repair. Skeletal Radiol 2008 [epub ahead of
print].
54. Wang X, Willenbring H, Akkari Y, Torimaru Y, Foster M
et al.: Cell fusion is the principal source of bonemarrow
derived hepatocytes. Nature 2003;422:897901.
55. Wei G, Schubiger G, Harder F, Mller AM: Stem cell plasticity in mammals and transdetermination in Drosophila:
common themes? Stem Cells 2000;18:409414.
56. Willing AE, Garbuzova DS, Sanberg PR, Saporta S:
Routes of stem cell administration in the adult rodent. Methods Mol Biol 2008;438:383401.

102

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 4)

Captulo

La terapia celular en la prctica mdica

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

INTRODUCCIN

Las clulas madre pueden diferenciarse en otras y regenerar tejidos. La estrategia funciona, pero nadie sabe
cmo, ni por qu. Para amortizar todo el potencial que
tiene la terapia celular habr que entender sus mecanismos y la clave parece estar en la biologa celular. Para
empezar, habr que descifrar qu ocurre dentro del ovocito para que su ncleo se reprograme. Este conocimiento es un paso previo antes de poder dirigir con precisin la diferenciacin de una clula en otra.
La teora de regeneracin con clulas madre propone que las clulas madre son liberadas en forma natural por la mdula sea y otros depsitos naturales. En
condiciones favorables de salud el nmero de clulas
madre que alcanzan el torrente sanguneo y viajan a los
tejidos que tienen mayor necesidad de reemplazo de clulas se mantiene constante para prevenir enfermedades, debilitamiento y daos mayores en los organismos.
Sin embargo, cuando un rgano est sujeto a lesiones o
enfermedades, este rgano dispara compuestos que
emiten una seal para que las clulas madre sean liberadas de sus estados de quiescencia para ser liberadas a la
circulacin; sin embargo, el nmero de clulas madre
disponibles en circulacin no es suficiente para resolver
el problema, establecindose la insuficiencia, dao o
enfermedad en el organismo.
La terapia celular con clulas madre1 se origin en el
trabajo cientfico enfocado en resolver los problemas de
la radiobiologa clnica (radiooncologa), especficamente de la radiosensibilidad que existe en las clulas

En el siglo XIX August Weismann estableci que los organismos multicelulares estaban formados por dos tipos
de clulas: las somticas y las germinales. Mientras que
las primeras desaparecen cuando el individuo muere, las
segundas persisten cuando el individuo tiene descendientes. Aunque la idea de la inmortalidad del plasma
germinal postulada por Weismann en el contexto de
aquellos tiempos y de que la recin creada teora celular
parecera obsoleta, es evidente que el investigador alemn intuy la existencia de factores persistentes que son
transmisibles entre una generacin y otra. La clonacin
de la oveja Dolly abri de nueva cuenta la necesidad de
conceptualizar el desarrollo en trminos de un sistema
multicelular donde la regulacin de la expresin gentica fuera ms all de la secuenciacin del DNA. No
obstante, en la actualidad es posible manipular las clulas in vitro con relativa facilidad, lo cual las desva de
su destino original y las obliga a mostrar su potencial
plasticidad fuera de su nicho original.
Fue el prembulo al concepto actual que se tiene de
las clulas madre o stem cells, el cual seala que:
son aquellas clulas capaces de multiplicarse de
manera indefinida en el laboratorio y susceptibles de
diferenciarse en diversos tipos celulares tanto in vivo
como in vitro. La reciente factibilidad de poder generar clulas germinales a partir de clulas madre somticas sugiere que la clsica distincin entre las clulas
somticas y las germinales habra desaparecido en trminos del concepto biolgico de inmortalidad propuesto por Weismann.

1. Tratamiento en que se administra o induce a las clulas


madre (stem cells) para que se diferencien en el tipo celular
especfico que se necesita para reparar clulas daadas o
sustituir a las que se destruyeron en los tejidos (Del ingls:
cellbased therapies y regenerative medicine).

103

104

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

% Clulas madre en circulacin

130

Figura 51. Clulas asesinas naturales (NK) en bazo de


ratn. Las flechas sealan las clulas NK detectadas con
inmunohistoqumica con fosfatasa alcalina para NK. 400 X.

cancerosas2 y las clulas normales. Este trabajo pionero


fue realizado por James Edgar Till y Ernest McCulloch
en Toronto y sus experimentos involucraban la metodologa de inyectar clulas de la mdula sea en ratones
irradiados. Observaron ndulos en el bazo de los ratones; los ndulos aparecan en proporcin al nmero de
clulas de mdula sea inyectadas. Dieron a esos ndulos el nombre de colonias del bazo3 (spleen colonies)
y posteriormente especularon sobre su origen. Estos experimentos realizados desde 1961 en el Ontario Cancer
Institute del Princess Margaret Hospital culminaron en
la demostracin de la existencia de las clulas madre
(stem cells) en 1963. Las clulas madre del bazo sobreviven al reconocimiento de los linfocitos y las clulas
NK4 (figura 51) porque no expresan molculas de
reconocimiento antignico como el complejo mayor de
histocompatibilidad. Esto ha permitido que los experimentos de terapia celular con la introduccin de clulas
madre de diferentes especies (xenognicos) o individuos de la misma especie (alognicos) no se pierdan,
brindando resultados teraputicos prometedores.
Las clulas madre inyectadas endovenosamente no
son detectadas por el sistema inmunitario y posteriormente se identificaron las clulas madre multipotencia-

Las clulas cancerosas ms agresivas se comportan


como las clulas tronco. Si los cnceres son causados por
las clulas tronco afectadas, los estudios sobre la capacidad de diferenciacin de una clula pueden conducir a las
nuevas herramientas que podran reconocer tempranamente a los tumores y destruirlos con eficacia.
3. Spleen colonies.
4. Natural killer: asesinas naturales (respuesta inmunitaria
natural).

Control

p < 0.003
121%

120

110

100

90
0

30

60
Minutos

90

120

Figura 52. FACs highspeed sorters. Esta tecnologa permite identificar y separar clulas madre provenientes de mdula sea o de la sangre perifrica del paciente. Con ello se
realizan estudios clnicos como ste que muestra un incremento de 30%* de clulas madre despus de la terapia en
pacientes humanos. Los voluntarios descansaron una hora
antes de establecer niveles de lineamiento base. Despus de
haber tomado las primeras muestras de sangre, los voluntarios tomaron PxP StemEnhance vs. placebo. Luego, las
muestras de sangre fueron tomadas en 30, 60 y 120 min despus de tomar la materia consumible. El nmero de las clulas madre que circulaban fue cuantificado a travs de un anlisis de las muestras de sangre usando el mtodo de activacin fluorescnica para la seleccin celular (FACS). (*Un
incremento de 25 a 30% de clulas madre circulando en el
cuerpo est dentro del rango fisiolgico y no constituye un
dao al organismo. La cantidad de mdula sea activa llega
aproximadamente a 2 600 g (5.7 lbs), con aproximadamente
1.3 trillones de clulas en la mdula. Un incremento de 25 a
30% en las clulas madre en circulacin corresponde aproximadamente a 3 millones de clulas, equivalente a 0.0003%
de las clulas madre presentes en la mdula sea.)

les5 formadoras de las clulas sanguneas de origen


adulto (HSC6); stas pueden aislarse actualmente empleando la tecnologa de citometra de flujo de alta velocidad, marcando las clulas con anticuerpos monoclo5.

2.

Terapia

Son clulas madre encontradas en el adulto; pueden formar una cantidad limitada de tipos celulares cuando no se
ha dado ningn estmulo para su diferenciacin; es decir,
cuando han crecido in vitro. El trmino pluripotenciales debe
distinguirse de multipotenciales, ya que el primero significa
que pueden diferenciarse en todos los derivados celulares
del ectodermo, endodermo y mesodermo. stas incluyen
cada uno de los ms de 250 tipos celulares en el cuerpo humano adulto.
6. Del ingls: hematopoietic stem sells procedentes de mdula sea.

La terapia celular en la prctica mdica

105

Cuadro 51. Descripcin de las caractersticas que definen a las clulas madre
Caractersticas
Autorrenovacin
Estado de indiferenciacin
Pluripotentes
Integracin en el desarrollo
embrionario
Proliferacin indiferenciada
in vitro
Diferenciacin in vitro

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Formacin de teratomas

Descripcin
Estas clulas son capaces de proliferar y producir clulas idnticas renovndose a s mismas
Estas clulas no son especializadas y son iguales a las clulas de la masa celular interna
del blastocisto
Bajo ciertas condiciones estas clulas pueden diferenciarse y generar ciertas lneas celulares
Estas clulas permiten desarrollar animales quimricos cuando son integradas en estadios
tempranos del embrin, mrula y blastocisto, pudiendo expresar diferentes genotipos y
fenotipos (mosaicismo)
Bajo ciertas condiciones de cultivo celular estas clulas pueden proliferar manteniendo
lneas celulares estables e indiferenciadas
Al remover ciertas citocinas del cultivo celular y ciertos medios de cultivo celular, las clulas
forman cuerpos embrioides (estructuras esfricas similares a los blastocistos)
Algunos tipos de clulas madre, sobre todo las derivadas de teratomas, producen tumores
benignos (teratomas) cuando son inyectadas subcutnea o intraperitonealmente en ratones inmunosuprimidos

nales7 (sorting). La proporcin es: 1 clula madre sangunea por cada 15 000 clulas madre de la mdula sea
(figura 52). El crecimiento de las empresas dedicadas a
la criopreservacin de sangre de cordn umbilical representa una especie de nuevo seguro mdico, ya que con
esto se asegura una fuente de clulas madre para un trasplante autlogo en el futuro en caso de ser necesario.
Despus del descubrimiento de las clulas madre8
(cuadro 51) por Till y McCulloch en 1961 se fueron
exponiendo las propiedades que caracterizan a la clula
madre y la definen como tal: capacidad de proliferar sin
diferenciarse durante periodos prolongados, en principio durante el tiempo de vida del rgano del que procede. Adems, las clulas madre tienen la capacidad de
diferenciarse hasta formar clulas maduras y funcionales. Una clula madre es capaz de generar clulas maduras existentes en distintos tejidos maduros. Tambin las
clulas madre tienen la capacidad diferenciadora in
vivo; en otras palabras, una clula madre es capaz, una
vez injertada en un animal de experimentacin, de diferenciarse hacia clulas maduras y funcionales. Otro
concepto importante es el de pluripotencialidad y multipotencialidad. Aunque estos trminos y otros similares
se han utilizado con cierta ambigedad, al hablar de
clulas madre pluripotenciales se habla de clulas con
las caractersticas antes descritas capaces de diferenciase in vitro e in vivo a tejidos derivados de cualquiera
de las otras capas embrionarias: ectodermo, mesodermo
y endodermo.
7. FACs highspeed
8. Stem cells.

sorters.

Las clulas madre embrionarias humanas obtenidas


de la masa celular interna del blastocisto o de la cresta
gonadal fetal han demostrado la capacidad de diferenciarse a tejidos de diferentes orgenes embrionarios tanto
tanto somticos como clulas germinales. Su capacidad
proliferativa es prcticamente ilimitada, en parte gracias a que expresan actividad telomerasa. En un principio, aunque siempre se consider su enorme potencialidad, existen numerosos obstculos para su utilizacin
clnica. Surgi el concepto de que las clulas madre embrionarias podran inducir la formacin de teratomas al
ser infundidas en animales de experimentacin (tumores benignos), mientras que el control de su diferenciacin tambin es complejo. Adems de las clulas madre
pluripotenciales, existen las clulas madre multipotenciales. Tanto en animales de experimentacin como en
el ser humano se han identificado clulas madre en diferentes tejidos, como en cerebro, hgado, msculo, mdula sea, epidermis y epitelio gastrointestinal.9 Estas
clulas son capaces de proliferar durante tiempos prolongados, pero su capacidad diferenciadora se limita en
general a los tejidos existentes en los rganos de los cuales se derivan y por ello se llaman clulas madre multipotenciales.
Recientemente diversos estudios han indicado que
las clulas madre de origen embrionario son capaces de
generar tejidos que se derivan de una capa embrionaria
9. Seale

P, Rudnicki MA: A new look at the origin, function,


and stemcell status of muscle satellite cells. Dev Biol
2000;218(2):115124. Uchida N, Buck DW, He D et al.:
Direct isolation of human central nervous system stem cells.
Proc Natl Acad Sci USA 2000;97(26):1472014725.

106

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

Blastocisto

Origen: derivado de la
preimplantacin o
periimplantacin del
embrin

Clulas madre
embrionarias (ESC)

Autorrenovacin: las clulas


pueden dividirse
haciendo copias de s
mismas durante largos
periodos de tiempo antes
de diferenciarse

Pluripotenciales: las clulas


madre embrionarias pueden
crecer en clulas de las tres
capas germinales manteniendose
en cultivos celulares por
largo tiempo
Las tres capas germinales y un ejemplo de tipo celular derivado

Ectodermo:
neuronas tcnicas
de Golgi

Mesodermo:
corpsculo de Hassal
y linfocitos T
HyE

Endodermo:
hepatocitos en la vena
central, tcnica de Wilder

Figura 53. Versatilidad y capacidad de transdiferenciacin de las clulas madre de origen embrionario.

diferente (ectodermo, mesodermo y endodermo).10 Este


concepto se ha denominado versatilidad de las clulas
madre o capacidad de transdiferenciacin. Aunque
demostrar la capacidad transdiferenciadora de una clulas exige la utilizacin de criterios estrictos y muchos de
los trabajos publicados no cumplen estos requisitos, la
existencia de esta propiedad por parte de algunas poblaciones celulares est aceptada. As, por ejemplo, se ha
10.

Anderson DJ, Gage FH, Weissman IL: Can stem cells


cross lineage boundaries? Nat Med 2001;7(4):393395. Alison MR, Poulsom R, Jeffery R et al.: Hepatocytes from non
hepatic adult stem cells. Nature 2000;406(6793):257.
Lagasse E, Connors H, AlDhalimy M et al.: Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo.
Nat Med 2000;6(11):12291234. Makino S, Fukuda K,
Miyoshi S et al.: Cardiomyocytes can be generated from
marrow stromal cells in vitro. J Clin Invest 1999;103(5):
697705. Mezey E, Chandross KJ, Harta G et al.: Turning
blood into brain: cells bearing neuronal antigens generated
in vivo from bone marrow. Science 2000;290(5497):
17791782. Orlic D, Kajstura J, Chimenti S et al.: Bone
marrow cells regenerate infarcted myocardium. Nature
2001;410(6829):701705.

demostrado que clulas obtenidas de mdula sea (mesodermo) son capaces de generar tejido heptico (endodermo) o tejido neuronal (ectodermo) in vivo. Tambin
las clulas madre aisladas del SNC son capaces de producir clulas especializadas como las hematopoyticas,
entre otras (figura 53).
El descubrimiento de marcadores para identificar las
clulas madre (cuadro 52) permiti identificarlas y a
la vez separarlas en dos grandes grupos (cuadro 53).
Ello fue posible gracias al desarrollo de diferentes tcnicas, como el ya mencionado FAC y tcnicas de inmunohistoqumica. Los marcadores de superficie son protenas especializadas con azcares localizadas en la
membrana citoplasmtica; las ms utilizadas para las
tcnicas FACs sorters son: SSEA1 o CD15, FAL o trisacrido 3fucosilNacetillactosamina. Los factores
de transcripcin son protenas que se unen al DNA nuclear y ayudan en el encendido y apagado de genes
especficos; entre stos la ms conocida es la protena
Oct4 (factor de transcripcin de la familia POU), que se
expresa en las lneas celulares totipotenciales y pluripo

La terapia celular en la prctica mdica

107

Cuadro 52. Principales marcadores moleculares para clulas madre


Marcador
CD133
CD34
ckit
CD30
Gnesis
GCNF
Oct4
SSEA1

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Sca1
SCF

Caractersticas
Protena de superficie de clulas madre nerviosas que dan origen a gla y neuronas
Protena de superficie de las HSC
Protena de superficie de las clulas de la mdula sea
Protena de superficie de las clulas madre pluripotenciales
Factor de transcripcin expresado por las ESC durante su estado de indiferenciacin
Factor de transcripcin expresado por las clulas madre pluripotenciales
Factor de transcripcin esencial para el establecimiento y mantenimiento de clulas madre totipotentes y pluripotenciales
Glucoprotena expresada por las clulas madre pluripotenciales durante el periodo temprano del desarrollo
embrionario
Protena de superficie presente en las clulas de mdula sea BMSC
Protena de membrana que se incrementa durante la proliferacin de las clulas madre presentes en ESC y
HSC

tenciales, en las clulas madre embrionarias (ESC) y en


algunas lneas germinales inmortales (EG).
El advenimiento del estudio y comprensin de las clulas madre ha permitido tambin el surgimiento de una
nueva era, la de la medicina regenerativa, que consiste
en aprovechar los mecanismos naturales de renovacin
celular para reparar los tejidos daados. Las clulas madre11 se definen como clulas indiferenciadas, con la
capacidad de autorrenovarse ante determinadas seales
y de especializarse para realizar una funcin concreta
(Shihabudidn et al., 1999). Dependiendo del tipo de
clulas madre y de su capacidad de generar estirpes celulares diferenciadas, pueden ser totipotentes/pluripotentes o multipotentes, pero todas las clulas madre son
capaces de generar uno o ms tipos de clulas diferenciadas (cuadro 51). Gran parte de los estudios con clulas
madre se han realizado en ratones y humanos (cuadro
52); estos estudios han permitido conocer que estas clulas surgen durante el desarrollo embrionario.
Desde 1998 el grupo de Thomson12 se adelant al dar
a conocer los hallazgos que ms tarde reclamara el grupo britnico encabezado por Evans RG (padre de la fertilizacin in vitro o FIV), quienes demostraron la posibilidad de obtener clulas madre pluripotenciales a
partir de la capa celular de la masa interna del blastocisto humano. Numerosos estudios comenzaron a demostrar la gran capacidad proliferativa y diferenciadora de
estas clulas y sus potenciales aplicaciones en el tratamiento de enfermedades humanas como la diabetes, la
enfermedad de Parkinson y la insuficiencia cardiaca.13
11. Del tallo, troncales, progenitoras, etc.
12. Thomson JA, Itskovitz EJ, Shapiro SS,

Waknitz MA,
Swiergiel JJ et al.: Embryonic stem cell lines derived from
human blastocysts. Science 1998;282(5391):11451147.

Indudablemente, la utilizacin de clulas derivadas de


embriones o fetos humanos conlleva una serie de problemas tanto ticos como cientficos que propiciaron la
bsqueda de otras alternativas, y ms concretamente la
posibilidad de la utilizacin de clulas madre obtenidas
a partir de tejidos adultos.14
Sin embargo, este nuevo concepto en la medicina no
slo ha planteado nuevas posibles vas teraputicas de
estudio, como las llamadas terapias celulares, sino que
tambin ha abierto sin duda la caja de Pandora que
exige no slo un debate cientfico sino tico por parte de
la sociedad en general.
Concepto de medicina regenerativa nivel II y nivel
III: en este ltimo caso aborda la terapia celular aplicando clulas madre o induciendo su proliferacin dentro y fuera del organismo, para luego introducirlas por
va endovenosa, subcutnea, intramuscular, etc. Hoy en
da es posible el nivel III de regeneracin, ya que la tecnologa de la que se dispone permite mantener las clulas madre en crecimiento durante muchos aos en cajas
para cultivo (SICETEM).
Estas clulas madre pueden mantenerse en reservorios de criopreservacin que permiten conservar su ca13. Jackson KA, Majka SM, Wang H et al.: Regeneration of
ischemic cardiac muscle and vascular endothelium by adult
stem cells. J Clin Invest 2001;107(11):13951402. Kondziolka D, Wechsler L, Goldstein S et al.: Transplantation of
cultured human neuronal cells for patients with stroke. Neurology 2000;55(4):565569. Schuldiner M, Yanuka O, ItskovitzEldor J et al.: From the cover: effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97(21):
1130711312.
14. Krause DS, Theise ND, Collector MI et al.: Multiorgan,
multilineage engraftment by a single bone marrowderived
stem cell. Cell 2001;105(3):369377.

108

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

Cuadro 53. Comparacin de las caractersticas de las clulas madre de origen embrionario y adulto
Clula madre
de origen embrionario

Clula madre
de origen adulto

S**

No

+++
S
"
No
No
+++
No

++
S
++
S
S
++
S

Riesgo de formacin de teratomas (tumores


benignos de clulas germinales) in vivo*
Capacidad proliferativa
Pluripotencialidad
Control de la diferenciacin
Terapia celular autloga
Acortamiento de telmeros
Expresin de telomerasa
Riesgo de infecciones intracitoplasmticas

* Ratones atmicos inmunosuprimidos.


** Clulas madre germinales (EG) y clulas madre de los teratomas y teratocarcinomas.

pacidad para formar diferentes tipos de clulas que van


del msculo hasta la sangre, y potencialmente se pueden
diferenciar en cualquier tipo celular que constituye el
cuerpo.
La proliferacin de clulas madre de origen adulto o
embrionario en bancos de clulas es una promesa de
salud humana, ya que permite que su suministro sea casi
ilimitado. Esto es posible porque estas clulas madre
tienen la capacidad de autorrenovarse in vitro manteniendo su estado de indiferenciacin, lo que permite
extender su aplicacin en la prctica mdica, la cual ir
creciendo con el paso del tiempo y se ir diversificando,
ya que sus aplicaciones en la prctica mdica abarcan
fines clnicos especficos de la terapia celular nivel III
hasta la formacin de rganos in vitro (ingeniera de
tejidos) como fuente de reemplazo de rganos para trasplante. Tambin se han considerado como modelos de
experimentacin que faciliten la investigacin en farmacologa y toxicologa.
Otra fuente humana de clulas madre pluripotenciales con el mayor potencial teraputico y que pueden emplearse en la prctica mdica son las de origen embrionario (embrionic stem cells, ESC) y que se han obtenido
de la masa celular interna del blastocisto, conformada
por 50 a 150 clulas (figura 54). ste se forma en el periodo de preimplantacin embrionaria, que ocurre habitualmente de cuatro a cinco das despus de que un oocito ha sido fecundado por el espermatozoide.
Las clulas madre provenientes de los bancos fueron
obtenidas por donacin de las pacientes que recibieron
LIV (fertilizacin in vitro) despus de obtener el xito
(hijo nacido); con estos procedimientos los blastocistos
fueron criopreservados e iban a ser desechados por un
procedimiento similar al de la donacin de rganos. Estos blastocistos fueron donados para investigacin mdica, de donde se han obtenido millones de clulas madre embrionarias de origen humano, sin necesidad de

recibir nuevas donaciones de blastocistos. En noviembre de 2006 los cientficos argentinos Ester Polak y Jos
Cibelli activaron por primera vez vulos humanos sin
requerir espermatozoides, lo que podra permitir obtener clulas madre sin formar embriones, de manera que
hoy en da la formacin de blastocisto puede generarse
a partir de la donacin de un oocito, el cual inicia la formacin del blastocisto mediante una descarga elctrica

Figura 54. Mrula y blastocisto en el periodo de preimplantacin embrionaria. A. Mrula. B. Blastocisto temprano. C. Blastocisto tardo con zona pelcida. D. Expulsin
de la zona pelcida (hatching).

La terapia celular en la prctica mdica


(partenognesis)15 sin necesidad de la fertilizacin por
un espermatozoide.

inmortales dotadas de las dos propiedades ya mencionadas: autorrenovacin y pluripotencia, caractersticas


importantes para poder ser utilizadas en terapia celular.

TERAPIA CELULAR CON


CLULAS MADRE

Clulas madre germinales (EGC)


Se localizan en la cresta germinal del feto, lugar donde
se produce la diferenciacin de la lnea germinal (no se
recomienda utilizar este tipo de clulas en la terapia
celular por el posible riesgo de que formen teratomas o
tumores benignos de clulas germinales al ser inyectadas
en los pacientes.) La terapia celular con este tipo de clulas slo se ha ensayado en animales. El uso de estas clulas debe estar contraindicado en pacientes inmunosuprimidos. Sin embargo, podra ser de utilidad en algunas
circunstancias de esterilidad o terapia gnica en un futuro
no muy lejano, o para la investigacin sobre los efectos
teratognicos y toxicolgicos de los nuevos frmacos.

La terapia consiste en introducir clulas madre de diversos orgenes y tipos, las cuales pueden provenir de tejidos recientes, ser criopreservadas despus de que se han
cultivado en medios celulares, o bien liofilizadas, donde
la clula muere pero se conservan sus constituyentes
bioactivos. Estas clulas madre pueden provenir de animales superiores (bovinos, ovinos, etc.): terapia celular
xenognica, o bien provenir de humanos: terapia celular
alognica. Tambin pueden provenir del mismo paciente, de manera que se trata de una terapia celular autloga.

Diferentes orgenes de las clulas madre


Clulas madre de origen embrionario
Este grupo a su vez se subdivide en tres tipos:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

109

Clulas madre embrionarias (ESC)


Se derivan de la masa celular interna del embrin en el
estadio de blastocisto y son totipotentes/pluripotentes.
A partir de ellas y despus de muchas divisiones celulares surgirn las que formarn parte del tejido especializado. Sin embargo, aunque las clulas de la masa celular
interna del blastocisto son pluripotentes, no son en s
mismas clulas madre dentro del embrin, porque no se
mantienen indefinidamente como tales en condiciones in
vivo, sino que se diferencian sucesivamente en los diversos tipos celulares durante la fase intrauterina. Lo que
ocurre es que cuando se extraen del embrin y se cultivan
bajo ciertas condiciones in vitro, se convierten en clulas
15. La partenognesis (del griego parQenoz parthenos = vir-

gen + genesiz gnesis = generacin) es una forma de reproduccin basada en el desarrollo de clulas sexuales femeninas no fecundadas, que se da con cierta frecuencia en platelmintos, rotferos, tardgrados, crustceos, insectos, anfibios y reptiles, ms raramente en algunos peces y excepcionalmente en aves. La partenognesis fue descubierta por
Charles Bonnet. Jan Dzierzon fue el primero en descubrir la
partenognesis de los znganos de las abejas. Puede interpretarse tanto como reproduccin asexual o como sexual
monogamtica, puesto que interviene en ella una clula sexual o gameto.

Clulas madre de los teratomas


y teratocarcinomas
Se localizan en las gnadas en forma de tumoracin.
Las clulas diferenciadas del tumor se forman a partir
de clulas madre pluripotentes de carcinoma embrionario que se derivan, a su vez, de clulas primordiales germinales del embrin (posimplantacin). Son tumores
que contienen una gran variedad de tipos celulares que
incluyen desde clulas musculares, cartlago, hueso,
epitelio, neuroectodermo primitivo hasta estructuras
ganglionares y epitelio glandular. Es decir, se derivan de
las tres capas embrionarias que tiene un embrin (endodermo, mesodermo y ectodermo). Se han cultivado clulas diferenciadas del tumor y se ha comprobado que
mantienen capacidad pluripotencial. Uno de los experimentos ms espectaculares fue que despus del tratamiento de una lnea celular de un tumor testicular con
cido retinoico, las clulas se diferenciaron a clulas
nerviosas (figura 55) (no es recomendable que este
tipo de clulas se empleen en la terapia celular, por el
posible riesgo de que formen teratomas o tumores benignos al ser inyectadas en los pacientes). La terapia
celular con este tipo de clulas slo se ha ensayado en
animales. La aplicacin de estas clulas debe estar contraindicada en pacientes inmunosuprimidos. Sin embargo, podra ser de utilidad en algunas circunstancias
de ingeniera de tejidos, generacin en los proyectos de
investigacin biomdica, tal vez como implantes para el
tratamiento de la alopecia andrognica.
Clulas madre de origen adulto (ASC)
Derivadas de las clulas embrionarias, poseen capacidad multipotencial a lo largo de la vida del tejido; es de-

110

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

Masa celular
interna

Fertilizacin

Blastocisto

ESC

Embrin
y
feto

EG

Teratocarcinoma y
feratomas

ASC
Clulas madre
pluripotentes y multipotentes

Figura 55. Clulas madre de origen embrionario y adulto. Esquema reproducido de la publicacin: Peter JD, John G: The end
of the beginning for pluripotent stem cells. Nature 2001;414:9297.

cir, son capaces de originar clulas especializadas de un


rgano concreto en el embrin y tambin en el adulto.
El ejemplo ms claro de este tipo celular es el de las clulas madre de la mdula sea, capaces de generar todos
los tipos celulares de la sangre y del sistema inmunitario. Aunque desde hace tiempo se conoce la existencia
de dichas clulas en los diferentes tejidos, en los ltimos
aos diferentes autores han identificado estas clulas
que provienen de la mdula sea y que, como la sangre
o la epidermis, presentan un gran ndice de proliferacin. An ms sugerente es que algunas de ellas presentan la suficiente flexibilidad o plasticidad como para
generar clulas especializadas de otros linajes (fenmeno de transdiferenciacin). Esto ha supuesto una sorpresa alentadora, ya que aumenta la perspectiva de obtener a largo y mediano plazo terapias celulares sin los
problemas ticos que conducen a la destruccin de embriones congelados.
Son preguntas clave cmo, cundo y por qu una clula madre en un tejido adulto empieza a diferenciarse.
Existen dentro del nicho o hbitat celular mltiples
mecanismos que producen tanto seales internas como
externas que permiten que se produzcan divisiones
simtricas y asimtricas, y que darn juego al mantenimiento de las propias clulas madre, como el inicio de
la diferenciacin celular. Esto se produce a partir de factores de trascripcin que actan en genes especficos
(figura 56).
Con la experiencia clnica de haber aplicado terapia
celular con clulas madre multipotentes alognicas a

una poblacin de ms de 1 000 pacientes, una dosis


aproximada de 106 clulas divididas en dos vas endovenosa e intramuscular cada siete das (SICETEM), los
autores se han atrevido a elaborar una teora que trata de
explicar con base cientfica cmo la introduccin de
clulas madre alognicas de origen humano acta en los
organismos enfermos y envejecidos, observndose un
efecto teraputico evidente tanto para el paciente como
para los mdicos, el cual se hace evidente desde la primera aplicacin (efecto inmediato) y puede observarse
hasta en un periodo de 15 a 6 meses (efecto mediato).
Algunos pacientes pueden presentar sntomas leves
asociados transitorios.
La hiptesis SnchezGonzlezSosa dice: Cuando las clulas madre alognicas ingresan a la circulacin
ocurren varios acontecimientos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Tropismo y colocacin.
Integracin.
Transdiferenciacin.
Reclutamiento de clulas madre endgenas.
Reparacin.
Regeneracin.
La divisin celular asimtrica est siempre presente en todas las fases ya mencionadas, es decir:
antes, durante y despus de la reparacin y regeneracin del sitio afectado.

El mecanismo de accin de la terapia celular con clulas


madre puede ser adems estudiado en dos sentidos:

La terapia celular en la prctica mdica


1. Efecto inmediato y mediato (tiempo de regeneracin).
2. Efecto directo e indirecto. El directo ocurre por integracin celular y el indirecto es debido a las citocinas que liberan las clulas madre.

Terapia celular con clulas madre


en la prctica mdica
En el cuadro 54 se presenta el nmero aproximado de
personas que tan slo en EUA requieren terapia celular
con clulas madre para curar, regenerar, detener o revertir la enfermedad y la investigacin de las mismas
(Wobus AM et al., 2005).
Las clulas madre se han aislado de diferentes fuentes: de medula sea, de clulas de tumores (figura 55)
de organismos jvenes y adultos. Hoy en da incluso se
cuenta con clulas madre provenientes de la sangre del
cordn umbilical, las cuales pueden reforzar la terapia

Clulas madre
pluripotenciales
Clulas madre
neurales

Divisin celular asimtrica

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Clulas progenitoras
especficas de lnea
Tejidos
diferenciados
Neuronas

Neuronas
Astrocitos

Neuronas
Astrocitos
Clulas
gliales

Tejido adulto
Figura 56. Posibles orgenes de las clulas madre adultas.
Reproduccin tomada de la publicacin: Peter JD, John G:
The end of the beginning for pluripotent stem cells. Nature
2001;414:9297.

111

Cuadro 54. Personas afectadas por


enfermedad crnica degenerativa en los EUA
que requieren de terapia celular con clulas
madre*
Diagnstico
Enfermedades cardiovasculares
Enfermedades autoinmunitarias
Diabetes
Osteoporosis
Cncer
Enfermedad de Alzheimer
Enfermedad de Parkinson
Quemaduras
Lesiones de la mdula espinal y
parlisis
Anomalas congnitas
Total

Nmero de personas
afectadas
58 millones
30 millones
16 millones
10 millones
8.2 millones
4 millones
1.5 millones
0.3 millones
0.25 millones
150 000 por ao
128.4 millones

* Physiol Rev 2005;85:635678.

celular con clulas madre autlogas que hasta el momento han sido ensayadas y tienen un gran potencial
para tratar con xito muchas enfermedades. Sin embargo, existe una falsa controversia por supuestos problemas de ndole biotica y tcnica, que ensombrecen la
prctica mdica de la terapia celular con clulas madre
de origen humano.
Por desgracia existe un temor infundado sobre la supuesta respuesta deletrea que puede aparecer al aplicar
la terapia celular, motivo por el cual hay un importante
auge en los procedimientos de terapia celular con clulas madre autlogas de origen humano. La respuesta
ms temida es la enfermedad de injerto contra husped,
la cual se origin al considerar errneamente el trasplante de mdula sea alognico como equivalente al
trasplante alognico de clulas madre.
Esta racionalizacin generalizada ha etiquetado a la
terapia celular con clulas madre como posible generadora de un supuesto rechazo de las clulas madre para
el husped y una posible respuesta injerto contra
husped; esta prejuiciosa aseveracin ha condicionado
en muchas ocasiones que personas e incluso mdicos
consideren que la terapia celular con clulas madre alognicas no sea un hecho factible. Sin embargo, hoy en
da ya son muchas las evidencias y experimentos cientficos que han demostrado lo contrario, haciendo de la
terapia celular con clulas madre humanas tanto en su
concepto alognico como autlogo, y aplicndola por
diversas vas (parenteral, endovenosa, intramuscular y
local), una de las teraputicas ms plausibles para la
prctica mdica del siglo XXI. La recomendacin
actual para la terapia celular con aplicacin en la prc-

112

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

tica mdica son las ESC, las clulas madre de cordn


umbilical y las clulas madre de adulto. Debern estudiarse las clulas madre EG, ECC y de teratoma, cuya
aplicacin en la prctica mdica podra permitir el descubrimiento de efectos teratognicos de las nuevas
innovaciones farmacolgicas y otros usos cientficos
(ver la figura 12, en el Captulo 1).
En la dcada pasada surgi una descripcin molecular de las interacciones aloinmunitarias y el proceso de
la recuperacin inmunitaria que conduca a la tolerancia. Esta seguridad en la prctica mdica puede ser
explicada por el trabajo experimental realizado en 2003
por el grupo de Barrett AJ. Despus del trasplante alognico de clulas madre en un receptor antignicamente
distinto, confiere un efecto teraputico contra el rechazo injerto contra husped. El Dr. Juan Barrett y col.
describieron la base celular y molecular de la alorrespuesta; est emergiendo un mapa detallado de la recuperacin inmunitaria celular postrasplante y destaca la
importancia de linfocitos postmicos en los primeros
meses crticos que siguen al trasplante de clulas madre.
Posteriormente la profesora Anne Dickinson y col.
describieron polimorfismos genticos extraHLA que
determinan la naturaleza de la reconstitucin inmunolgica despus del trasplante alognico de clulas madre
(SCT). Otros trabajos han demostrado el papel inmunomodulador de las clulas madre tanto autlogas como
alognicas, de manera que aun las clulas madre no histocompatibles pueden suprimir la activacin de linfocitos. Las clulas madre suprimen fuertemente la inmunidad celular del husped al inhibir la proliferacin del
linfocito T, en una restriccin inmunolgica dependiente
de la dosis. El trasplante alognico de clulas madre en
pacientes con osteognesis imperfecta incrementa la
formacin de osteoblastos en 2%, lo que demuestra que
los precursores mesenquimticos presentes en la mdula sea tienen efecto teraputico real. Las clulas madre
tienen el potencial de inhibir la proliferacin de los linfocitos T a travs de vas inmunosupresoras mediadas por
CD8; esto permite el trasplante alognico sin rechazo.
La eficacia y seguridad de las clulas madre se
obtiene tambin de la experiencia en el trasplante de
mdula sea con fines de restauracin o regeneracin de
las clulas daadas o perdidas por enfermedades o lesiones. El ejemplo de esta teraputica es el reemplazo de
las clulas perdidas por la quimioterapia oncolgica en
las leucemias (requiere terapia celular con el trasplante
de mdula sea). El llamado trasplante de mdula sea
es en realidad un trasplante de progenitores hematopoyticos (clulas madre adultas muy diferenciadas).
Estos progenitores hematopoyticos se pueden obtener
de tres formas:

(Captulo 5)

a. Extrayendo mdula sea de los huesos que la contienen.


b. Movilizando los progenitores hematopoyticos de
la mdula sea a la sangre perifrica y obtenindolos mediante un procedimiento conocido como
afresis.
c. Tambin del cordn umbilical.
Todos estos procedimientos tienen como objetivo final
obtener los progenitores hematopoyticos multipotentes, clulas madre de origen adulto, que tengan la mayor
capacidad de implantarse en la mdula sea de un paciente, y dar lugar a un nuevo sistema inmunitario y hematolgico sano. El trasplante de progenitores hematopoyticos es un procedimiento rutinario en la prctica
mdica mediante el cual se intercambia la mdula sea
de un paciente por una mdula sea nueva, ya sea del
mismo paciente (trasplante autlogo) o de otra persona
(trasplante alognico).
Los antgenos leucocitarios humanos (HLA, acrnimo en ingls de human leukocyte antigen) son antgenos
formados por molculas que se encuentran en la superficie de casi todas las clulas de los tejidos de un individuo, y tambin en los glbulos blancos (o leucocitos) de
la sangre. HLA es el nombre que recibe el complejo mayor de histocompatibilidad en humanos. Cumplen con
la funcin de distinguir lo propio de lo ajeno y aseguran
la respuesta inmunitaria, capaz de proteger al organismo de algunos agentes extraos que generan infecciones. Ese conjunto de molculas y las formas en que
son transmitidas de padres a hijos constituyen un sistema tambin denominado de histocompatibilidad (de
histo, tejido) o de individualidad (para diferenciar lo
propio de lo ajeno), el denominado sistema HLA. Su
descubrimiento ha permitido a la medicina dar un salto
especfico en las posibilidades de xito de un trasplante,
abriendo un camino prometedor cuyo gran escollo haba sido el rechazo. En la dcada de 1970, ya descubierto el sistema HLA se pudo comprender mejor el fenmeno del rechazo y de la enfermedad del injerto contra
el receptor, y trasplantar con menos inconvenientes, segn criterios de compatibilidad.
Tambin se ha podido descubrir la conexin entre determinados perfiles HLA y una mayor frecuencia de enfermedades autoinmunitarias como el lupus eritematoso sistmico, la miastenia gravis y el sndrome de
Sjgren, u otras como la espondilitis anquilosante y la
enfermedad celiaca. Existen lugares estratgicos en el
sistema HLA que sirven para examinar si una persona
puede ser compatible con otra en caso de injerto: HLA
A, HLAB, HLAC, HLADR y HLADQ. El tipo de
molcula antgeno presente en A, B, C, DR y DQ es lo

La terapia celular en la prctica mdica


HLAA

HLAB

113

c
d

HLADR

HLAB
A

HLADR

HLAA
ac
C

ad

bc

bd

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 57. A. Se ilustra la convencin utilizada en los dibujos para representar los haplotipos del sistema HLA. B. Se ilustra la
manera en que los hijos heredan la mitad de haplotipos de cada progenitor. C. Se ilustra cmo los hijos podrn heredar cualquiera
de las cuatro combinaciones del material gentico transferido por los padres con base en el sistema HLA.

que determina la posibilidad de aceptacin del tejido


(rgano o mdula sea) de un donador por parte del organismo de un receptor.
El trasplante alognico tiene a su vez distintas variedades segn el donador y la similitud del sistema HLA.
Cuando el donador es un hermano gemelo univitelino
se denomina trasplante singnico; cuando el donador es
un familiar HLA idntico se llama trasplante alognico
de hermano HLA idntico; cuando el donador es un familiar que comparte un solo haplotipo del sistema HLA
se conoce como trasplante haploidntico y el donador es
un familiar cualquiera (padre, madre, hermanos, primos...) que comparte slo la mitad de los genes implicados en el sistema HLA; cuando el donador es un donador no emparentado se denomina trasplante de donador
no emparentado. Es importante reconocer de qu tipo de
trasplante se habla, ya que tanto la utilidad como los
resultados varan de unos a otros. Para llevar a cabo este
procedimiento (muy costoso, por cierto), es necesario
realizar un acondicionamiento en el que se usan diversos frmacos (en general quimioterapia), radioterapia o
ambos tratamientos; se destruye la mdula sea del paciente y en el caso de un trasplante alognico se genera
un estado de inmunosupresin para evitar el rechazo de
los progenitores hematopoyticos forneos que se infundirn al paciente. El trasplante de progenitores hematopoyticos se usa para tratar diversos tipos de enfermedades: aplasia de mdula sea, enfermedades
hereditarias, leucemias, linfomas e inmunodeficiencias, entre otras enfermedades (figura 57).
Para que dos personas sean compatibles, los antgenos presentes en cada uno de esos lugares deben ser
idnticos o tener ciertas coincidencias. Esto se detecta
por medio de un anlisis de sangre en el que la muestra
es sometida a varias tcnicas de laboratorio y puede incluir el anlisis de cido desoxirribonucleico (DNA).

Los antgenos se identifican por un nmero y pueden


ser enormemente variados. Se conocen ms de 300 para
el lugar A, alrededor de 500 para B, ms de 150 para C,
400 para DR y ms de 50 para DQ. Como la investigacin es permanente, esos nmeros aumentan todo el
tiempo.
El DNA transmitido de padres a hijos est en el cromosoma del ncleo de las clulas de todo el organismo,
incluidos los glbulos blancos de la sangre. Est qumicamente constituido por un encadenamiento de elementos bsicos que se podran comparar con las letras de un
abecedario. Esos elementos bsicos o letras qumicas se
combinan en palabras que constituyen un texto organizado que transmite un mensaje. En ese texto se pueden
reconocer diferentes partes o secciones, denominadas
genes. El DNA se hereda de los padres en una combinacin peculiar para cada hijo. Los genes del sistema HLA
se transmiten casi siempre en bloque. Cada bloque se
denomina haplotipo. El padre aporta un haplotipo (mitad del genotipo) y la madre otro, dando origen al genotipo HLA, perfil gentico propio del nuevo ser. Es este
perfil (o huella gentica) el que debe coincidir en los
lugares estratgicos para que dos tejidos se acepten. En
el sistema HLA, el material gentico se transmite de
padres a hijos segn lo explica el cuadro 55.
Sistema HLA
Madre
Haplotipo A

Padre

Hapotiplo B

Haplotipo C

Haplotipo D

Hijos
Combinacin 1

Combinacin 2

Combinacin 3

Combinacin 4

Genotipo
ac

Genotipo
ad

Genotipo
bd

Genotipo
bc

114

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Los hijos podrn heredar cualquiera de estas cuatro


combinaciones del material gentico transferido por los
padres. En la figura 57 se pueden apreciar los dos haplotipos del padre a y b y los dos de la madre c y d: cul
heredar cada hijo depender del azar. Existen 50% de
posibilidades de que dos hermanos compartan un solo
haplotipo, 25% de que no compartan ninguno y 25% de
que coincidan en ambos haplotipos. Las personas con
genotipo ac, ad, bc y bd descienden de progenitores que aportan los haplotipos a y b, por un lado, y c y
d, por otro, ya que un individuo est siempre constituido
por material gentico proveniente de los seres que le
dieron la vida.
Cualquiera de las cuatro combinaciones posibles indica que ese ser proviene de los mismos padres, pero
slo ciertas coincidencias en la combinacin heredada
hacen que un hermano sea compatible con otro dentro
del sistema HLA. Segn el tipo de trasplante, receptor
y donador debern compartir uno o dos haplotipos.
Sin embargo, el sistema HLA se aplica en trasplante
de mdula sea. En la prctica mdica de los autores con
terapia celular aplicando clulas madre alognicas no
ha sido necesario realizar una tipificacin del donador
de las clulas madre ni del husped. Esto hace que la terapia celular sea una tcnica innovadora, si bien es
cierto que pueden obtenerse clulas madre de la mdula
sea y que un trasplante de mdula sea podra requerir,
para un mejor resultado, una tipificacin de HLA al realizar lavados de las biopsias obtenidas de la mdula sea
del fmur y ser suspendidas en medio de Eagles modificado de Dubeco (DMEM), enriquecido con 10% de suero fetal bovino, y despus de realizar una seleccin de
clulas madre hematopoyticas y las clulas madre
mesenquimatosas. El rechazo de trasplante con clulas
madre se vuelve casi nulo. Para separar estas clulas se
emplean paquetes comerciales que utilizan perlas magnticas. En stas vara el tipo de anticuerpos que se utilicen para marcar las clulas inmunolgicamente. Esto ha
facilitado que el estudio biolgico de las clulas madre
de origen adulto (ASC) sea el ms extenso y se ha efectuado en estudios bsicos desde ratn hasta humano.
Tanto en las enfermedades neurodegenerativas como
en el Parkinson se pretende usar clulas madre de origen
embrionario (ESC) que son capaces de generar neuronas dopaminrgicas in vitro al ser tratadas con factores
neurotrficos (Gonzlez LGM et al., 2007). En las que
se pretende regenerar el corazn despus de un infarto
del miocardio (IAM) es necesario aislar o utilizar clulas
madre cardiacas de origen adulto. El IAM corresponde
a la principal causa de muerte en Mxico, y si bien los
avances en la ciruga de bypass y la angioplastia percutnea de las coronarias con colocacin de stents cardiacos

(Captulo 5)

han mejorado la sintomatologa de la angina estable e


inestable, no siempre tienen la capacidad de restaurar la
funcin sobre todo en IAM, que evoluciona a dilatacin
ventricular e insuficiencia cardiaca congestiva (ICC).
La terapia celular con lneas celulares de cardiomiocitos previno el adelgazamiento cardiaco y la dilatacin
ventricular. Este tipo de terapia celular se denomin cardiomioplastia celular y el pionero fue el Dr. Menasche,
en Pars. En su estudio clnico fase I, algunos pacientes
referidos para una ciruga de bypass con infartos extensos eran sometidos a una biopsia muscular, de la cual se
aislaban mioblastos que eran cultivados de forma externa (terapia celular, medicina regenerativa nivel II) y que
fueron inyectados alrededor del infarto en el tiempo
quirrgico del bypass. En un periodo de uno a dos aos
despus de la ciruga de bypass y la terapia celular, 10
pacientes se encontraron libres de sntomas coronarios
y mejoraron la funcin cardiaca de forma general, la
cual fue evaluada en el ecocardiograma, lo cual sugiri
una restauracin de la funcin en la zona infartada.
Los estudios de medicina nuclear con tomografa por
emisin de positrones (PET) y tomografa por emisin
de fotn nico (SPECT) mostraron viabilidad en la
regin del infarto en zonas que no estaban presentes en
el periodo preoperatorio. Murieron dos pacientes, uno
por choque cardiognico y otro 17 meses despus por un
accidente vascular cerebral de tipo isqumico. En las
autopsias se observ que los mioblastos se encontraban
engarzados en la regin del infarto, demostrndose la
viabilidad del trasplante de clulas. Aunque las clulas
se encontraban entre los miocitos, no presentaban la
caracterstica de sincronizacin del latido porque no
expresaban uniones estrechas (gap junctions). Presentaron arritmias 4 pacientes y requirieron implante de
desfibriladores y amiodarona. En la actualidad este procedimiento de cardiomioplastia celular requiere una inyeccin de millones de mioblastos.
Hasta hace poco se aceptaba que no se renovaban las
neuronas despus de un dao por isquemia o por algn
otro trauma. Aunque desde 1960 existan ya informes
de la plasticidad cerebral y algunos de ellos incluso
apuntaban hacia la posibilidad de que nuevas clulas
nerviosas eran formadas en mamferos adultos, este conocimiento no fue aplicado sino hasta la dcada de
1990, mientras la investigacin mdica se centraba en
la limitacin del dao una vez ocurrido. Las recientes
investigaciones de terapia celular estn tratando de averiguar qu clulas pueden dar origen a las nuevas neuronas y podran ser cultivadas y administradas para restaurar la funcin del cerebro. Al igual que en el miocardio,
al parecer existen algunos remanentes de clulas madre
en las neuronas adultas, y algunas de estas clulas adul-

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


tas todava retienen la capacidad de generar neuronas y
neuroglias.
Estos resultados son muy interesantes, porque hacen
pensar que las clulas madre en el cerebro establecen un
mecanismo que permite la regeneracin. Por desgracia,
estas nuevas neuronas son generadas slo en algunos
sitios del cerebro, como el hipocampo. Adems, se est
conociendo la forma de identificar y aislar clulas madre nerviosas, as como de profundizar en los proceso
de diferenciacin y regeneracin de las clulas nerviosas muy especializadas. Hoy en da se han identificado
en el adulto clulas madre nerviosas (NSC) en gran variedad de localizaciones del cerebro. Los precursores
neuronales cultivados en la zona ventricular y subventricular forman colonias llamadas neuroesferas.
Se ha demostrado que los cultivos de neuroesferas
contienen clulas del sistema nervioso perifrico y son
capaces de diferenciarse en neuronas y clulas de la gla.
En la sustancia blanca subcortical del cerebro adulto se
han identificado clulas madre parcialmente diferenciadas que dan origen a la gla; estas clulas se han aislado
por medio de flujometra de alta velocidad activada por
fluorescencia, ya sea por transfeccin de protena verde
fluorescente o por marcaje de clulas con anticuerpos.
Estas clulas aisladas al ponerse en cultivo celular han
dado origen a oligodendrocitos y en menor cantidad a
neuronas. Los autores de esta publicacin (Gonzlez
Lpez GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA),
basndose en los resultados clnicos que han obtenido
con la aplicacin de la terapia celular con clulas madre
alognicas multipotenciales, tienen la alentadora esperanza de que la aplicacin endovenosa e intramuscular
de clulas madre nerviosas permita resolver problemas
tan complejos como la esquizofrenia, entre otros. Hasta
el momento los avances ms importantes se han realizado con los modelos experimentales de enfermedades
neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson,
la enfermedad de Huntington, la enfermedad de Lou
Gehrig (mejor conocida como esclerosis lateral amiotrfica) y las lesiones del sistema nervioso central
secundarios a isquemia o trauma.
Sin embargo, las aplicaciones en la prctica mdica
de la terapia celular con clulas madre que ms repercusin pueden tener en Mxico son en la diabetes mellitus,
que suele subdividirse en dos grandes enfermedades: la
DM1 (dependiente de insulina), caracterizada por un
proceso autoinmunitario de destruccin de las clulas
productoras de insulina que provoca la falta de esta hormona, y la DM2 (no dependiente de insulina), que representa 90% de los casos diagnosticados. Su aparicin
se debe a la combinacin de la resistencia a la accin de

115

la insulina por parte de los tejidos perifricos y una alteracin de la funcin de la clula pancretica.
La disfuncin parece ser el resultado de la incapacidad de las clulas b para producir y secretar insulina
cuando aumenta la demanda de sta. La diabetes afecta
a 4 a 5% de la poblacin mundial, aunque la cantidad de
individuos que la padecen aumenta con mucha rapidez,
sobre todo en los pases desarrollados. Es la alteracin
metablica ms frecuente entre los humanos y conduce
tambin a la aparicin de complicaciones secundarias
como retinopata, neuropata y alteraciones cardiovasculares. En un estudio poblacional realizado por el Consejo
Asesor sobre la Diabetes, en Catalua (1997), se observ
que la prevalencia de la enfermedad conocida es de 6.7%
y que aumenta en relacin con la edad, de manera que la
prevalencia de DM2 global (conocida y no conocida) es
de 10.3 en la poblacin de 30 a 89 aos de edad.
En la actualidad, para los dos tipos de diabetes existen terapias que resultan insatisfactorias porque no ofrecen curacin de la enfermedad, y en la mayora de los
casos no podrn evitar la aparicin de las complicaciones secundarias asociadas a ella. El trasplante de islotes
pancreticos ha sido sin duda una ventajosa estrategia
para restaurar la masa de clulas funcionales en los
pacientes diabticos y poder as conseguir la normoglucemia; no obstante, presentan limitaciones por el rechazo
del injerto y el nmero de pncreas necesarios para la
obtencin de una cantidad ptima de islotes (al menos
dos donadores/pacientes). Esto comporta la necesidad de
identificar nuevas terapias genticas, por ejemplo, la
obtencin de clulas productoras de insulina a partir de
clulas pluripotentes. Sin embargo, es necesario profundizar en el conocimiento de los mecanismos moleculares
de la propia clula b que se intenta reestablecer. La viabilidad de esta nueva estrategia celular depende principalmente de tres importantes prerrequisitos:
S Identificacin de clulas pluripotenciales o de
unas clulas progenitoras pancreticas que tengan
la capacidad de autorreplicarse y generar clulas
diferenciadas.
S Identificacin de las seales proliferativas que
permiten expandir, de manera especfica, estos
progenitores pancreticos.
S Identificacin de seales instructivas que induzcan la diferenciacin de estas clulas pluripotenciales o progenitoras en clulas funcionales que
secreten la insulina correctamente procesada, de
manera pulstil, en respuesta a concentraciones fisiolgicas de glucosa.

116

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

A diferencia de las clulas que provienen del mesodermo


(cardiomiocitos) y las que provienen del ectodermo
(clulas nerviosas), pueden ser diferenciadas espontneamente in vitro las clulas derivadas del endodermo,
entre las que se incluyen las clulas del pncreas, que
requieren la presencia de factores en general desconocidos y que son los que dirigen la diferenciacin celular.
Bsicamente se han sido utilizado dos estrategias de
seleccin para clulas con capacidad de diferenciacin
beta celular:
1. Estrategia de atrapamiento. Las clulas madre
son transfectadas con una construccin que lleva
un gen de resistencia a un antibitico (neomicina),
el cual est bajo el control del gen de la insulina.
De esta manera se seleccionan las clulas que al
diferenciarse activarn slo a dicho promotor;
despus se aade a la construccin un marcador no
txico fcilmente perceptible: la protena verde
fluorescente (GFP), de manera que las clulas
expresan insulina y protena verde, lo que permite
una mejor seleccin de stas. De ese modo se estableci la lnea celular IB/3x99 derivada directamente de un cultivo de clulas ES de ratn, las cuales tienen la capacidad de formar los agregados de
las clulas que secretaron la insulina de una manera dependiente de la glucosa. Para probar la capacidad funcional de estas clulas in vivo, los agregados celulares fueron implantados en el bazo de
ratones. La mayora de los animales tuvieron control de la glucosa sangunea. Sin embargo, 40% de
los trasplantados desarrollaron hiperglucemia a
las 12 semanas. El estudio tambin establece claras dificultades. Varias razones pueden explicar la
prdida de las clulas trasplantadas: prdida de
caractersticas genotpicas en ausencia de la presin selectiva, muerte inducida de la clula quiz
por motivo del nuevo nicho celular, rechazo por
parte del husped al injerto celular y produccin
de tumores.
2. Marcadores selectivos de clulas madre pancreticas. La nestina es una protena filamentosa
que se ha identificado como marcador de clulas
madre del sistema nervioso central. Por existir
muchas similitudes entre ellas y las del pncreas,
Lumelsky propuso la nestina como un marcador
especfico de clula madre endocrina. El protocolo utilizado por estos investigadores demostr
que tras la privacin en el medio de cultivo del leukimia factor inhibitor (LIF) o al suplementar ste
con bFGF, era posible la formacin de agregados
celulares que expresaran no slo insulina sino

(Captulo 5)
tambin glucagn, somatostatina y polipptido
pancretico, hormonas que se encuentran en los
islotes de Langerhans. No se identific ningn
marcador exocrino (amilasa, carboxipeptidasa
A). Los anlisis histolgicos demostraron que los
cmulos celulares tenan caractersticas comunes
con la estructura normal del islote; sin embargo,
slo 50% de las clulas expresaban insulina. Estudios funcionales de secrecin dieron muestras de
respuesta en forma dosisdependiente. La estrategia de seleccionar clulas que expresaran la protena nestina ha sido criticada, aunque numerosas
evidencias podran confirmar que puede ser un
buen marcador, a pesar de que existe un solapamiento en los factores de transcripcin de la neurognesis y la endocrinognesis. Factores clave
nerviosos del bHLH, como neurogenina 12, neuro D y neuro D2, pueden ayudar a activar el gen de
la insulina en una clula neuronal, y son factores
idnticos (Neuro D) o muy similares (Ngn1 o 2) a
esos componentes del bHLH, necesarios para la
funcin y el desarrollo pancreticos de la clula de
la endocrina (Neuro D y Ngn3).

No obstante, el marcador especfico endodrmico


HNF3b se expresa en clulas derivadas de las embrionarias, adems de otros marcadores que deben ser explorados para poder comprender el proceso ntimo de cmo
una clula indiferenciada se transforma en clula con
fenotipo beta.
En el caso del pncreas adulto no hay consenso sobre
el tipo celular que podra ser la verdadera clula madre
pancretica. Se ha descrito que en el pncreas existe un
proceso de neognesis, es decir, de formacin ex novo
de islotes pancreticos, que aumenta en diferentes situaciones tanto en humanos como en modelos animales.
Algunos autores postulan que despus de una pancreatectoma parcial, algunas clulas ductales maduras podran empezar a proliferar y diferenciarse hasta dar origen a una clula con capacidad multipotencial. La
direccin de diferenciacin de estas clulas dependera
de seales externas o morfgenas. En este caso se hablara de clulas madre funcionales de manera parecida a
las que se han descrito en el hgado y en otros tejidos.
Otros autores han descrito la existencia de posibles stem
cells en los mismos islotes pancreticos y han sugerido
que stas son una fuente de nuevas clulas del islote. Por
lo tanto, aunque los experimentos han demostrado que en
el pncreas existe un proceso regenerativo tanto intraislote como extraislote, la deteccin y caracterizacin de
las clulas madre pancreticas est resultando un trabajo
difcil. La falta de unos marcadores claros, as como de

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


ensayos fiables, ha obstaculizado esta difcil tarea. No
obstante, se sabe que nuevas clulas se generan durante
la vida adulta y que, en parte, provienen de clulas que
estn en el ducto pancretico. Una rigurosa caracterizacin del proceso del desarrollo embrionario del pncreas,
de los mecanismos moleculares de proliferacin y apoptosis de los islotes pancreticos, as como de los posibles
candidatos a clulas madre descritos, tendra que permitir aislar las stem cells adultas pancreticas.
La posibilidad de una expansin y diferenciacin de
estas clulas permite la esperanza de obtener una cantidad suficiente de clulas que ayuden al desarrollo de la
terapia celular. An ms apasionante es la posibilidad
de que a partir de una pequea muestra de tejido del
paciente se pueda aislar y obtener in vitro nuevos islotes
que podran ser trasplantados al propio paciente y de
esta manera evitar problemas de rechazo. Podra decirse
que se est ante una nueva era del conocimiento en el
campo de la medicina regenerativa, ya que es un nuevo
campo interdisciplinario que aplica los principios de
las ciencias biomdicas bsicas y de las ciencias de la
medicina clnica en la obtencin de sustitutos biolgicos para restaurar, mantener o mejorar la funcin tisular en los pacientes enfermos. Mltiples publicaciones
estn marcando el advenimiento de la terapia celular
con clulas madre en la prctica mdica, y tambin
estn apareciendo diversas opiniones de ndole social,
filosfica, religiosa, poltica y tica.
Un conocimiento errneo que se tiene de manera generalizada es la creencia de que todas las clulas madre
tienen la capacidad de formar tumores al ser inyectadas
en los huspedes inmunocomprometidos; este temor se
origin de los experimentos de formacin de teratomas
en ratones inmunodeprimidos en quienes se utilizaron
clulas madre de origen tumoral. Este hecho evit por
algn tiempo que los mdicos consideraran la aplicacin de la terapia celular en la prctica mdica. Sin
embargo, al menos es posible utilizar dos tipos de clulas
madre humanas con ese fin: las clulas madre embrionarias (ESC) obtenidas de la masa interna del blastocisto y
clulas madre adultas (de tejidos posnatales, ASC, mdula sea, sangre adulta o cordn umbilical).
La generacin de ESC es a partir de la masa celular
interna del blastocisto y son las que poseen la mxima
potencialidad para diferenciarse en todos los tipos celulares. La supuesta necesaria destruccin del blastocisto
ha generado ansiedad en la opinin pblica y una interminable discusin en donde se anteponen juicios de
valor entre la necesidad de avanzar en el conocimiento
para salvar vidas y la de curar enfermedades, entremezclndose los derechos individuales de las clulas que
pueden tener el potencial de convertirse en embriones

117

humanos. La importancia teraputica que pudiera llegar


a tener la terapia celular con clulas madre con miras a
sustituir tejidos daados por causas patolgicas o traumticas es el principal argumento de los que propugnan
por la no prohibicin de la investigacin y uso en la
prctica mdica de las ESC humanas.
Dos avances recientes ofrecen la posibilidad de resolver el dilema tico planteado por las ESC y uno es la
derivacin de oocitos a partir de ESC. Aunque en este
caso no se evita la destruccin de un primer blastocisto
fundador, el hecho de poder generar ovocitos a partir de
ESC establecidas como lneas celulares hace innecesaria la destruccin de nuevos embriones. Los ovocitos
obtenidos in vitro representaran una fuente inagotable
para la transferencia nuclear de clulas somticas de pacientes en quienes la terapia regenerativa podra ser la
mejor o nica opcin para su alivio o cura. Es claro que
la alternativa de generar oocitos en el laboratorio tendra tambin aplicaciones en la medicina reproductiva
para casos de infertilidad. Sin embargo, en este caso no
es posible eludir la discusin sobre las implicaciones
ticas de la clonacin reproductiva. La mejor alternativa surgi recientemente con el trabajo pionero de Takahashi y Yamanaka,16 quienes lograron derivar ASC
multipotentes a partir de clulas epiteliales de ratones
adultos a las que trasfectaron slo cuatro genes (Oct3/4,
Sox2, Klf4 y cMyc). En principio, esos cuatro genes
que actan como factores de trascripcin sustituyen a
factores citoplsmicos del ovocito que reprograman
la cromatina del ncleo trasplantado. Los autores denominaron a sus clulas iPS (induced pluripotent stem),
que al ser transferidas a blastocistos normales demostraron su capacidad para diferenciarse en todos los tipos
celulares del embrin, incluyendo clulas germinales.
Mejorando su propia tcnica, el grupo de Yamanaka17
logr demostrar que las clulas germinales derivadas de
iPS son frtiles. Los resultados han sido corroborados
en dos laboratorios diferentes,18 de manera que se trata
de un verdadero avance biotecnolgico.
Sin embargo, deben considerarse al menos dos aspectos antes de dejarse llevar por el entusiasmo despertado por el nuevo hallazgo. Uno es la aplicacin clnica
de la tcnica desarrollada en ratones. El empleo del oncogn cMyc resultara peligroso por su capacidad para
generar un proceso canceroso en humanos. Asimismo,
los autores usaron retrovirus como vehculos transfectantes, lo cual desde luego resultara inadmisible para
transformar clulas humanas con miras a ser trasplanta16. Cell 2006;126:363.
17. Okita et al.: Nature 2007;448:313.
18. Wernig et al.: Nature 448:318, 2007; Maherali et al.: Cell

Stem Cell 2007;1:55.

118

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

das a pacientes. El otro aspecto es la contribucin al


conocimiento bsico respecto a los mecanismos celulares responsables de reprogramar el genoma de las
clulas de individuos adultos. Las clulas transfectadas
con los cuatro genes se integraron a todos los tejidos al
ser introducidas en blastocistos normales, y su capacidad para diferenciarse dependi de las seales que
haban recibido en el desarrollo del embrin normal.
La utilizacin de clulas madre sanguneas autlogas
(HSC) tiene un verdadero inconveniente; hoy en da el
gran avance de la inmunologa ha esclarecido la fisiopatologa de muchas enfermedades autoinmunitarias y se
sabe que algunas clulas del sistema inmunitario que
atacan a los tejidos propios involucran factores de
riesgo gentico; muchos de estos genes slo se expresan
en las clulas sanguneas. Por lo tanto, la terapia celular
con clulas del cordn umbilical muy posiblemente no
resolvera el problema mdico, ya que estas clulas
poseen el material gentico que implica el riesgo. Estos
avances en las ciencias biomdicas hacen necesario
buscar otras fuentes de obtencin de clulas madre,
como las mismas clulas tumorales o las clulas madre
embrionarias de mamferos superiores como los primates. Se han publicado otras aplicaciones para la salud,
como el estudio toxicolgico de nuevos medicamentos.
La creacin de bancos de HSC, ESC y otras clulas
madre ser cada vez ms un procedimiento rutinario
muy comn gracias al crecimiento de donadores voluntarios y de sangre de cordn umbilical. Cerca de 4 000
a 10 000 muestras independientes permitiran implementar bancos de clulas madre capaces de satisfacer la
demanda para el trasplante clnico o para proteccin
contra accidentes de la radiacin.19 Por lo anterior, el
supuesto inconveniente asociado con el riesgo de histocompatibilidad y el inters econmico han impulsado la
proliferacin de bancos criognicos para aislar y almacenar sangre de cordn umbilical, los que se han encargado de difundir la falacia de la supuesta incompatibilidad alognica de las clulas madre vendiendo a todas
las embarazadas (a priori) la idea de contratos de servicios como programas preventivos que garantizan la donacin autloga por congelacin de clulas madre del
cordn umbilical.
Esta falacia y otras razones tambin han impulsado
el apoyo econmico a la biologa molecular, la cual est
incursionando con la aplicacin de tcnicas de DNA
recombinante y clonacin. Estas hiptesis a priori tambin han impulsado el desarrollo de ensayos clnicos
19. La

demanda puede incrementarse en caso de guerra o


bioterrorismo nuclear o por el uso de armas qumicas o biolgicas con un enfoque en producir dao de la mdula sea.

(Captulo 5)

para tratar enfermedades con clulas madre no embrionarias, es decir, de origen adulto, los cuales han demostrado tener buenos resultados en problemas de ndole
inmunohematolgica, gentica, cncer, diabetes juvenil, Parkinson, ceguera y las lesiones de mdula espinal.
Estos investigadores los han llevado a la prctica mdica y se cuenta con estudios clnicos en fase IIII.
A partir del ao 2001 se incrementaron las publicaciones que refuerzan la terapia celular con clulas
madre embrionarias de origen humano (ESC), lo que ha
fortalecido las evidencias cientficas de su capacidad de
diferenciacin en clulas que pueden ayudar a regenerar
o recuperar la funcin de: sistema nervioso, tejido
hematopoytico, corazn, sistema circulatorio (endotelial), islotes de Langerhans pancreticos (clulas beta),
hgado, hueso, trofoblasto y otros tejidos celulares.
Estos trabajos finalmente han fructificado en la
reciente premiacin que realiz el Instituto Karolinska
de Estocolmo, Suecia, a Sir Martin J. Evans,20 Mario
Capecchi21 y Oliver Smithies,22 galardonados con el
premio Nobel 2007 de Fisiologa y Medicina por su trabajo sobre ESC y que permitieron introducir cambios
genticos especficos con DNA recombinante en ratones (knockout). Estas clulas madre embrionarias poseen telmeros ms largos que las de origen adulto y
estn menos diferenciadas, por lo que su capacidad de
regeneracin es mayor.
Los trabajos referidos con anterioridad y muchos
ms llevaron a los autores de este libro (Gonzlez
Lpez GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA) a
realizar cientos de aplicaciones endovenosas e intramusculares de terapia celular con clulas madre multipotentes de origen alognico en pacientes con enfermedades cronicodegenerativas rebeldes a los tratamientos
convencionales que de forma voluntaria aceptaron recibir el tratamiento de acuerdo con lo establecido en la
normatividad de Helsinki (SITECEM).
20. Naci en 1941 en la Gran Bretaa, ciudadano britnico,
Doctor en Ciencias en la especialidad de Anatoma y
Embriologa, graduado en 1969, University College, Londres, Reino Unido. Director de la Escuela de Biociencias y
Profesor de gentica de los mamferos en la Cardiff University, Reino Unido.
21. Naci en1937 en Italia, ciudadano estadounidense, Doctor en Ciencias en la especialidad de Biofsica graduado en
1967, Harvard University, Cambridge, EUA. Investigador
del Howard Hughes Medical Institute y Profesor Distinguido
en Biologa y Gentica Humana en la Universidad de Utah,
Salt Lake City, EUA.
22. Naci en 1925 en la Gran Bretaa, ciudadano estadounidense, Doctor en Ciencias en la especialidad de Bioqumica
en 1951, Oxford University, Reino Unido, Profesor de Excelencia en Patologa y Laboratorio de Medicina en la Universidad de carolina del Norte en Chapel Hill, EUA.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


El Dr. GonzlezLpez opina que desde hace ms de
10 aos se han aplicado clulas madre humanas alognicas sin que se observen reacciones de rechazo inmunolgico, y mucho menos reacciones tan graves como la
de injerto contra husped. Estamos totalmente convencidos de que la terapia celular con clulas madre alognicas puede emplearse en prcticamente cualquier
patologa crnica degenerativa o traumtica dentro del
campo de la medicina regenerativa. Esto se hace evidente, ya que en nuestra experiencia clnica la terapia
celular con clulas madre humanas alognicas nos ha
permitido observar una mejora asombrosa en mltiples
patologas como el vitligo, Parkinson, Alzheimer,
secuelas neurolgicas secundarias a eventos vasculares
cerebrales, esclerosis mltiple, diabetes mellitus, retinitis pigmentaria y neoplasias.
La terapia celular es muy segura, ya que las clulas
reemplazan las clulas faltantes que han muerto en los
tejidos ocasionando la aparicin de los sntomas y signos de las enfermedades; se trata de padecimientos crnicos asociados tambin con el envejecimiento. Sin
embargo, tambin se trata de un fenmeno natural muy
convincente si se observa cmo las clulas madre tienen
la capacidad de modular el sistema inmunitario. El
embarazo es el mejor ejemplo, ya que el sistema inmunitario de la madre en condiciones normales no rechaza
a la mrula, blastocisto en su camino desde la ampolla
de la trompa de Falopio hasta la parte posterior del tero
en el tiempo conocido como ventana de implantacin,
permitiendo el desarrollo del embrin y el feto. Si el sistema inmunitario reconociera las clulas madre, stas
seran destruidas por el sistema inmunitario del husped. Una de las posibilidades teraputicas menos consideradas para la terapia celular con clulas madre es
durante el embarazo; el ambiente gestacional de un feto
permite obtener mejores resultados teraputicos que en
el adulto. El importante avance para el diagnstico prenatal permite hoy en da aislar clulas y DNA fetal a partir de sangre materna. El ambiente prenatal ofrece la va
intracavitaria peritoneal, tolerancia inmunolgica, lo
cual permite el trasplante alognico e incluso xenognico. En promedio, se requieren 10 000 clulas madre
por kilogramo de peso.
La tolerancia inmunitaria se define como la ausencia
especfica de respuesta inmunitaria frente a un antgeno, ya sea propio o extrao, inducida por el contacto
previo con dicho antgeno. Se trata de un estado activo
(no es una simple ausencia de respuesta) dotado de
especificidad y memoria. Esta tolerancia tiene una
importancia capital en el proceso de trasplante de rganos. Los antgenos que inducen este estado de tolerancia
se denominan tolergenos, para distinguirlos de los que

119

provocan respuesta inmunitaria (inmungenos). La tolerancia se puede desarrollar de modo natural, como
cuando un ser en desarrollo se vuelve incapaz de responder a sus propias molculas (autointolerancia).
Cuando este sistema falla, se producen patologas por
autoinmunidad. La tolerancia inducida experimentalmente es un estado de ausencia de respuesta a un antgeno que normalmente sera inmunognico. Para ello,
el antgeno ha de administrarse bajo ciertas condiciones. La tolerancia es un estado adquirido (aprendido),
no innato, que se induce ms fcilmente en linfocitos
inmaduros, cuando no hay seal coestimulatoria, y que
requiere que el antgeno persista para que dicho estado
permanezca. La regeneracin con clulas madre implica tambin a los linfocitos y a una mayor generacin
de linfocitos inmaduros que pueden instaurar estados de
tolerancia inmunolgica.
Segn la experiencia de los autores, en la serie 1 000
casos de pacientes a los que se les aplic terapia celular
en ms de cinco ocasiones con clulas madre alognicas, hasta el da de hoy no se ha observado ninguna reaccin de anafilaxia, que es una reaccin inmunolgica
generalizada del organismo y una de las ms graves y
potencialmente fatales complicaciones, ante el contacto
con un alergeno con el que anteriormente ya haba tenido contacto. Asimismo, no se han observado reacciones
alrgicas a las clulas madre, y aunque la distincin
clara es difcil, la anafilaxia se distingue de la alergia por
la extensin de la reaccin inmunitaria, que habitualmente comprende uno o ms sistemas orgnicos (respiratorio, vascular, cardiaco, etc.). En su serie de casos clnicos, los autores no han observado ningn choque
anafilctico, el cual se suele detectar cuando se utilizan
medios de contraste en radiologa o se aplican algunos
frmacos teraputicos como la penicilina.
En la prctica mdica de la terapia celular con clulas
madre debe evitarse el empleo de anestsicos y bloqueadores neuromusculares, ya que estos frmacos son utilizados extensamente en procedimientos quirrgicos y
suelen usarse de manera simultnea, por lo que la mayora de las veces es difcil determinar cul fue el causante.
Entre los anestsicos generales, la alfadiona y el tiopental son los causantes principales y como anestsico
local, la lidocana. Tambin se debe evitar el uso de frmacos antiinflamatorios del tipo del cido acetilsaliclico, productos utilizados para contraste radiogrfico
(procedimientos como urografas, angiografas, colangiografas, etc.), especialmente aqullos que contengan
derivados del yodo, as como los utilizados por va intravenosa, y el uso de frmacos antibiticos, que son
causa muy frecuente de anafilaxia. Se han identificado
como agentes frecuentes los derivados de la penicilina,

120

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

las cefalosporinas, las sulfamidas y las tetraciclinas, y


la estreptoquinasa, un tromboltico usado en el tratamiento del infarto agudo de miocardio. Existen otros
frmacos que tambin pueden inducir anafilaxia, aunque con menor frecuencia, como la vitamina B1, derivados del dextrn y el glucagn, entre otros. Cabe mencionar que tericamente cualquier frmaco tiene potencial
alergnico, aunque en la prctica pocos de ellos han
mostrado estar relacionados con relativa frecuencia a la
anafilaxia.
Despus de aplicar cada inyeccin 12 x 106 clulas
madre se debe vigilar durante 5 min si ocurren cambios
que sugieran reaccin anafilctica, como: palidez, diaforesis (sudoracin), prurito (comezn), ronchas y edema generalizado o regional (facial, alrededor de los ojos
o boca), taquicardia (frecuencia cardiaca superior a
90/min), hipotensin (presin arterial sistlica < 90
mmHg) y arritmias ventriculares, manifestadas con pulso dbil, ruidos cardiacos irregulares o dbiles, extremidades fras y sncope (desmayo), edema de glotis/epiglotis o broncoconstriccin severa, manifestando
disnea (respiracin difcil, sensacin de falta de aire),
disfona (alteracin de la voz), estridor (respiracin ruidosa, semejante a un silbido), sibilancias (ruidos semejantes, auscultados con estetoscopio) y cianosis (coloracin azul oscuromorada en labios, uas u otros sitios),
diarrea, vmitos, ansiedad, desorientacin, mareos, parestesias (sensaciones anormales como fro o entumecimiento en las extremidades o la cara), convulsiones y
prdida de la conciencia, en caso de que se presentaran
estos signos y sntomas.
Se deber aplicar clorhidrato de adrenalina por va
intravenosa en una dosis de 0.25 a 1 mg, diluido en 10
mL de suero fisiolgico y aplicado muy lentamente. El
medicamento suele ser bien tolerado. El riesgo de arritmia cardiaca es mnimo comparado con el peligro de no
administrarlo. En las formas menos graves se prefiere
la va intramuscular, incluso subcutnea, de la misma
dosis. Repetir a los 15 min si la mejora no es muy notoria. Administrar oxgeno por puntas nasales, mascarilla
y de ser necesario cnula endotraqueal para atenuar la
hipoxia tisular concomitante al choque. Los corticoides
son muy tiles para prevenir las reacciones tardas. Es
aconsejable la hidrocortisona, 200 mg IV/6 h.
El Dr. Snchez seala que el potente efecto teraputico observado en los pacientes que han recibido su protocolo de terapia celular con clulas madre humanas
alognicas se puede analizar en dos fases: la fase I (inmediata) deriva de los hallazgos obtenidos en los experimentos de Parekkadan y col. del ao 2007, quienes
descubrieron que el lquido derivado de los cultivos de
clulas madre (mesenquimatosas) protege del dao

(Captulo 5)

heptico fulminante a las 36 h en el modelo experimental en ratas con GalN. En la fase II (mediata), en donde
las clulas proliferan, se trasladan por trofismo al sitio
de la lesin o enfermedad, se ponen en contacto con las
clulas del husped que tienen la capacidad de orientar
su diferenciacin; en ese momento puede producirse el
fenmeno de herencia horizontal (hiptesis Snchez
Vzquez), la cual ha sido muchas veces comprobada en
organismos procariotas, ya que en el laboratorio han observado los autores cmo los melanocitos humanos son
capaces de transportar cidos nucleicos en los que se incluye mRNA de una clula eucariota a otra. Esta transferencia gentica horizontal se realiza con vectores y es
el fundamento de la terapia gnica.
Es muy probable que las clulas madre sean el vector
natural ms eficiente para transferir material gentico
nuevo y no enfermo a los tejidos envejecidos y enfermos; esto tambin puede explicar cmo las clulas madre pueden inducir en el husped un efecto teraputico
que puede ser duradero, ya que las clulas madre diferenciadas no son afectadas por el reconocimiento del
sistema inmunitario, ya que comparten protenas antignicas con el husped. Otra explicacin es el fenmeno de mosaicismo, que es la diversidad gentica observada en un mismo individuo, de manera que coexisten
dos o ms poblaciones de clulas con distinto genotipo.
O tal vez un trmino mejor que mosaicismo sea quimerismo, el cual se refiere tambin a la diversidad genotpica en las clulas de un organismo con poblaciones de
clulas con distinto material gentico, pero que proviene de la unin de clulas con dos cigotos distintos,
mientras que en el primer caso son originadas a partir
del mismo cigoto.
Las quimeras y el mosaicismo son compatibles con
la vida. Aunque de manera natural se estudian como
causa de anomala gentica y se consideran como un
error muy temprano en la divisin celular del cigoto,
esta mutacin se transmitir a las clulas derivadas de
las que ha mutado, pero no a las restantes. Esto origina
dos poblaciones de clulas distintas. El mosaicismo
puede afectar a cualquier tejido del individuo.
En el mosaicismo somtico coexisten clulas normales y anormales en un mismo individuo (puede afectar
o no a la lnea germinal). Obviamente, en el caso de la
terapia celular las clulas husped seran las anormales
y las de la terapia celular, las normales. En condiciones
patolgicas la mutacin no puede ser transmitida a la
descendencia a menos que algunas clulas de la lnea
germinal estuvieran afectadas. Sus consecuencias son
que si se produce una mutacin en una clula de la piel,
a nivel gentico se transmitir a las clulas que se deriven de ella, pero no a las restantes. Por lo tanto, a partir

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


de ese momento coexisten en un mismo sujeto clulas
con distinta informacin gentica. La distribucin de
las clulas es visible sobre todo en la piel, donde forman
patrones conocidos como lneas de Blaschko, tablero de
ajedrez o formas similares a hojas.
En el mosaicismo gonadal la mutacin afecta a una
de las clulas germinales y por lo tanto a una parte de los
gametos (vulos o espermatozoides). Las mutaciones
pueden transmitirse a la descendencia.
El Dr. SosaLuna opina que el fenmeno del mosaicismo inverso permite entender cmo la terapia celular
con clulas madre alognicas de origen humano puede
incrementar el nmero de clulas no afectadas por dao
gentico, crnico o degenerativo. Esta hiptesis no permite sustentar la necesidad de aplicacin de terapia celular con clulas madre alognicas, como en el caso del
sndrome de Down, en donde el dao es generalizado en
todas las clulas y la presencia de mosaicismo es de
buen pronstico clnico, con la intencin de incrementar el nmero de clulas quimricas del individuo que no
presenten la trisoma en el cromosoma 21, adems de
las que ya son normales en el paciente. Casos similares
son los pacientes que padecen el sndrome de la triple X
(con mosaicismo), el sndrome de Turner o el de Klinefelter, en donde pueden coexistir diversos mosaicismos
como el llamado 46/47 mosaico de XY/XXY, ya que
algunas de las clulas del paciente contienen los cromosomas de XY, y algunas contienen los cromosomas de
XXY (la anotacin de 46/47 indica que las clulas de
XY tienen el nmero normal de 46 cromosomas totales
y las clulas de XXY tienen 47 cromosomas totales).
La terapia celular con clulas madre alognicas tal
vez pueda dar origen a un mosaicismo quimrico inverso y funcional. sta puede ser una de las explicaciones
razonables desde el punto de vista farmacolgico, siendo
posible que las clulas madre, una vez diferenciadas en
clulas especializadas e integradas en sitios especficos
del paciente, sobrevivan a la vigilancia inmunolgica.
O cmo explicar que un paciente con vitligo presente
repigmentacin gradual de sus manchas hipocrmicas
y que un paciente con Parkinson deje de temblar y que
un paciente con diabetes mellitus tipo 1 evolucione al
estado normoglucmico sin requerir insulina recombinante humana?
Investigaciones recientes han comprobado el potencial clnico de la aplicacin de ESC en modelos experimentales de diabetes tipo 1, donde las terapias celulares
con clulas madre ESC curaron a los ratones. Los investigadores tambin observaron la tolerancia que permite
un cotrasplante de clulas de los islotes pancreticos
(ratn a ratn) alognicas y xenognicas (humano a
ratn) para reemplazar las clulas b destruidas. Estos

121

resultados fueron muy alentadores, lo que oblig a los


autores a aplicar clulas madre alognicas de humanos
a humanos, no slo en pacientes con diabetes mellitus,
sino en otros que padecan muchas enfermedades autoinmunitarias como la artritis reumatoide, la esclerosis
mltiple, el lupus eritematoso sistmico, la fibromialgia
reumtica, asma y dermatitis atpica, entre otras, obteniendo excelentes resultados.
Se considera que en el futuro muy prximo la terapia
celular que emplea las clulas madre con el genoma
humano intacto es el vector ideal, por lo que la terapia
gnica que emplea vectores virales ser sustituida
como paradigma de tratamiento de la medicina del
siglo XXI. Ya que en caso de requerirse la modificacin
o introduccin de cambios genticos en el organismo,
tendra dos opciones teraputicas: inyectarle al paciente
virus modificados genticamente (terapia gnica) con el
riesgo de infeccin o ponerle una inyeccin con clulas
madre (terapia celular) que podran provenir de manera
natural de otros seres humanos (nativas alognicas) o
del paciente mismo (clulas madre autlogas), las cuales previamente deberan haber sido cultivadas o criopreservadas a partir de la sangre de su cordn umbilical
y transfectadas en un laboratorio de biologa molecular
nivel III con un virus como vector. Esto permite introducir modificaciones en el genoma empleando tcnicas
que convencionalmente son conocidas como de DNA
recombinante. En lo particular, los autores prefieren recibir terapia celular con clulas madre nativas y alognicas.
Algunos de los supuestos problemas que planteaba
la terapia celular alognica, derivados de la generalizacin de las experiencia clnica en los trasplantes de mdula sea, eran los de ndole inmunolgica, de manera
que se crea errneamente que los elementos del sistema
inmunitario del husped acabaran rechazando el injerto
de clulas madre alognicas. Sin embargo, la terapia
alternativa de obtencin, expansin y diferenciacin de
las clulas madre requiere el trasplante de stas con el
supuesto riesgo obvio de un posible rechazo de este
injerto celular. A pesar de tener abundante experiencia
clnica, no se pueden extrapolar los resultados de ambas
tcnicas, ya que las clulas no poseen vascularizacin
(ya que son clulas), a diferencia de los rganos para
trasplante como rin, hgado, pncreas, corazn, etc.
Se requieren tcnicas microquirrgicas avanzadas
para lograr anastomosis de las arterias y venas, de manera que los rechazos agudos a esos trasplantes de rganos se deban al dao por obliteracin de los vasos sanguneos que principalmente ocurren en las arterias
anastomosadas que nutren a los rganos injertados.
Adems, est demostrado que el rechazo de un injerto

122

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

se debe a la existencia de reconocimiento por parte de


los linfocitos T citotxicos a molculas del complejo de
histocompatibilidad mayor (MHC) clases I y II, expresadas en la superficie celular del endotelio de los vasos
anastomosados, ocasionndose adems isquemia aguda. En el caso de la terapia celular con clulas madre alognicas se trata de microtrasplantes de clulas que no
necesitan ser nutridas a travs de vasos sanguneos o capilares, ya que tienen la capacidad de migrar de manera
similar al proceso, como ocurre en las metstasis. Adems, creen los autores que genera una tolerancia similar,
la cual se potencializa por un fenmeno de tolerancia por
inyecciones repetidas de vacunas antialrgicas.
Adems, si se considera que recientemente se han encontrado niveles bajos de expresin de estas molculas
(MHC) en clulas madre embrionarias humanas (ESC),
aunque tambin stas aumentan al diferenciarse in vitro,
no llegarn nunca a los niveles que se observan en los
rganos enteros injertados. Por la poca o nula experiencia in vivo se conoce poco del poder antignico de
dichas clulas, si bien ciertos estudios ponen de manifiesto que son suficientes los niveles bajos para inducir
una respuesta inmunolgica. No deben olvidarse las
clulas asesinas naturales que intervienen de manera
activa en el incontable nmero de reacciones bioqumicas, fisiolgicas y celulares que conducen al rechazo; no
se ha observado la expresin del MHC de clase II en las
clulas madre. Existen, sin embargo, proyectos de que,
al igual que los de rganos, se creen bancos de clulas
madre isotipadas con el sistema HLA, para de este
modo elegir el isotipo ms adecuado para cada paciente.
Los autores de esta publicacin (GonzlezLpez
GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA) recomiendan que en la prctica mdica todo paciente hombre o mujer que reciba terapia celular con clulas madre
sea considerado como una embarazada en sus primeros 10 das de etapa de desarrollo y por lo tanto deber
recibir una alimentacin balanceada (rica en aminocidos, cido flico, minerales y vitaminas). Los pacientes
varones y mujeres deben evitar exponerse a riesgos teratognicos, por ejemplo la exposicin a infecciones
como el Toxoplasma gondi. En la medida de lo posible
deber evitar la administracin de frmacos. En realidad, hoy en da se dispone de muchos frmacos de los
cuales slo unos cuantos han demostrado ser teratognicos, tanto en experimentacin animal como en estudios
en humanos. Sin embargo, en la inmensa mayora de
ellos la realidad es que se desconocen con exactitud los
posibles riesgos que puede representar su ingestin.
Como regla general, debe sealarse que si no son necesarios, debe evitarse su ingestin durante la terapia
celular con clulas madre.

(Captulo 5)

Hay que sealar que durante la gestacin el periodo


de mayor riesgo para que se produzca una malformacin congnita (teratognesis) son las 10 primeras semanas. Posteriormente se entra en una fase de maduracin
y perfeccionamiento de los rganos en el feto, exceptuando el aparato genital y el sistema nervioso central.
Por lo anterior debe evitarse en lo posible la ingesta de
cualquier medicamento, exponerse a estudios de rayos
X o de medicina nuclear, radioterapia y quimioterapia
al menos durante y despus de las primeras 10 semanas
en las que se haya aplicado la ltima inyeccin con
clulas madre.
Qu medicamentos podran utilizarse durante la terapia celular? Entre los frmacos en los cuales los estudios controlados no han demostrado riesgos o no existen
pruebas de riesgo en la especie humana estn el paracetamol, la doxilamina o dimenidrato, la heparina, la penicilina y cefalosporinas.
Cualquier medicamento, como pueden ser los frmacos antihipertensivos e hipoglucemiantes y anticoagulantes, por va bucal e insulina, debern conservarse
porque son indispensables para el control del padecimiento de base. El tratamiento mdico debe continuar
tal como el mdico lo prescriba y la terapia celular
siempre deber manejarse como un tratamiento complementario.
Los siguientes medicamentos deben evitarse en lo
posible y pueden estar contraindicados durante la terapia celular: acetoexamida, cido etacrnico, cido valproico, altetramina, aminoglucsidos, aminoglutetimina,
aciatropina, barbitricos, benzodiacepinas, busulfan,
carboplatino, carmustina, ciclofosfamida, cisplatino,
citarabina, clorambucil, cloroquina, daunorubicina, dicumarnimos, diurticos, tiacdicos, hetopxido, fenacemida, fenitona, fluxoridina, fludarabina, fluoracilo,
flutamida, triancinolona, hidantoda, hidarubicina, ifosfamida, inhibidores de la enzima de conversin de la
angiotensina, litio, lomustina, melfalan, meprobanato,
mercaptopurina, metimazol, parametadiona, pipobromano, primidona, procarbacina, propiltiuracilo, progestgenos, tetraciclinas, tioguanina, tamoxifeno, trimetadiona, minblastina, vincristina y yoduro potsico.
Los siguientes medicamentos, por ser teratognicos,
estn contraindicados durante la terapia celular y no debern ser tomados por un periodo mnimo de 10 semanas: cido acetohidroxmico, cido quenodeoxiclico,
cido hetacrnico, aminopeptidina, andrgenos, benzofetamina, danazol, derivados de la ergotamina, dietilbresbestrol, estrgenos, etetrinato, goserelina, isotretinona, leuprorelina, lobastina, metotrexato, nafarelina,
penicilamina, plicamicina, quinina, rababirina, trilostano, urofilitrofina, yodo 131.

La terapia celular en la prctica mdica

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La lista de medicamentos contraindicados se ir modificando a medida que se conozcan mejor las seales
internas y externas que afectan a las clulas madre. Numerosos estudios bsicos realizados en Drosophila
melanogaster (mosca de la fruta) y ratn han demostrado la existencia de una serie de controles internos que
a modo de reloj marcan a las clulas el nmero de divisiones simtricas antes de empezar el proceso de diferenciacin que dar lugar a una estirpe celular concreta.
A pesar de los pocos conocimientos que se tienen de dichos procesos, los estudios bsicos indican la existencia
de protenas especficas (activadoras/inhibidoras) involucradas en el ciclo celular y el papel importante de la
longitud del telmero (del griego telos, final, y meros,
parte), como los extremos de los cromosomas formados
por regiones repetidas de DNA no codificantes, con funciones muy concretas en la estabilidad molecular. La
cantidad de repeticiones que se encuentran en el telmero es variable incluso en diferentes clulas de un
mismo individuo. Sin embargo, el promedio tiende a ser
constante para cada especie. Por otra parte, la telomerasa
(formada por un complejo protenacidocido) es una
polimerasa producida por las clulas germinales embrinicas que permite la elongacin de los telmeros. Se sabe
que la telomerasa es reprimida en las clulas somticas
maduras, lo que comporta un acortamiento del telmero
al final de cada divisin celular. Cuando la longitud del
telmero alcanza cierto lmite, se interrumpen las mitosis
y quedan las clulas en estadio Go de su ciclo.
Tambin se puede hablar de controles externos: un
conjunto de seales paracrinas y autocrinas entre las clulas madre/hijas y las vecinas; entre ellas se destacan
los factores secretados, que son los ms conocidos, y los
factores de la mdula sea, entre los que se incluyen
numerosas citocinas.
S Interaccin clulaclula por medio de protenas
de membrana.
S Integraciones de las clulas con la matriz extracelular por medio de receptores de membranas integrinas.
En muchos de estos casos la seal externa interacciona
con el receptor de membrana, lo que se traduce en el
interior de la clula como un sinnmero de sealizaciones; es decir, un conjunto de reacciones bioqumicas
(fosforilaciones y desfosforilaciones de protenas) que
finalmente acaba en la activacin y desactivacin de un
grupo de genes. Esto implica que la clula puede cambiar su patrn de expresin, lo que en determinados
casos significa un paso ms en su ruta de diferenciacin,
su proliferacin, e incluso puede significar la muerte

123

celular programada (apoptosis) mientras existe un delicado equilibrio entre estos procesos celulares.

Plasticidad celular y transdiferenciacin


de las clulas madre
Investigaciones actuales ofrecen ms evidencia de que
las clulas madre adultas tienen capacidad pluripotencial en respuesta a un estrs tisular. Existen numerosos
trabajos cientficos que demuestran que la colonizacin
por parte de clulas madre circulantes en sangre perifrica de rganos sometidos a dao tisular tiene la capacidad de regenerar o reparar el tejido daado. Sin embargo, los resultados deben ser cuidadosamente analizados
aunque existen evidencias claras de dichos procesos. El
proceso de transdiferenciacin requiere que una clula
ponga en marcha mecanismos de desdiferenciacin y
rediferenciacin que darn origen a otro tipo celular.
En los ltimos aos ha surgido un nuevo concepto y
es el de la fusin celular. Este fenmeno fue demostrado
recientemente en experimentos realizados con cultivo
de clulas procedentes de la mdula sea con clulas del
corazn, del hgado o nerviosas. La fusin entre estas
clulas provoca un aporte de material gentico nuevo
que podra permitir la sustitucin de las clulas que se
estn degenerando por otras nuevas. Sin embargo, estas
desdiferenciaciones aparentes resultaron en la produccin de clulas hbridas (tetraploides). Dichas aberraciones cromosmicas impiden su utilizacin en algn
tipo de terapia celular. Por otra parte, existen trabajos
que demuestran que los cultivos de clulas madre podran producir cambios en la cintica del ciclo celular o
adhesin celular, alteraciones adquiridas a consecuencia del cultivo. A pesar del desprestigio provocado por
el fraude cientfico de S. Hwang en Corea, los esfuerzos
por avanzar en la derivacin de clulas madre embrionarias humanas (ESC) no se han detenido.
El grupo de Robert Lanza, del Advanced Cell Technology, en Worcester, Massachusetts, acaba de publicar un
artculo en Nature23 que reporta la obtencin de dos
lneas de clulas madre humanas a partir de blastocistos
humanos.
A primera vista parecera una publicacin ms sobre
la derivacin de ESC de las varias reportadas desde la
polmica publicacin de J. Thompson y col., en 1998.24
Sin embargo, en este trabajo reciente, los investigadores
mitigaron la resistencia de los grupos que con tanta vehemencia se oponen a la investigacin en esta nueva
rea de la biomedicina. En los reportes previos la deri23. Klimanskaya et al.: Publicacin en lnea, 23 de agosto de

2006.
24. Science 282:1145.

124

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

2
Blastocisto
5

Cultivo de clulas madre

Figura 58. Tcnica biotica de clulas madre embrionarias (ESC). 1. El ovocito humano recin fertilizado se cultiva
hasta la etapa de 8 a 10 blastmeros. 2. Con una micropipeta se extrae un blastmero. 3. Por medio de un protocolo
de cultivo se induce su proliferacin para obtener lneas de
clulas madre multipotentes. 4. El embrin operado contina su desarrollo hasta la etapa de blastocisto con apariencia normal. Operaciones similares con fines de diagnstico
gentico prenatal han mostrado la viabilidad de los embriones operados.

vacin de ESC se haca disociando blastocistos (embriones previos a la implantacin) obtenidos de embriones congelados en clnicas de reproduccin asistida.
Aunque el destino de la inmensa mayora de esos embriones es su eliminacin (tarde o temprano), su potencialidad para desarrollar un ser humano en caso de ser
implantados favorece el argumento de que su manipulacin con fines experimentales constituye un atentado a
la dignidad humana y debe ser penalizado.
El reciente trabajo del Advanced Cell Technology fue
realizado con 16 cigotos (vulos fertilizados) humanos
que fueron descongelados y puestos en condiciones de
cultivo, donde iniciaron su desarrollo hasta la etapa de
8 a 10 clulas (blastmeros). De acuerdo con criterios
de calidad, los embriones fertilizados in vitro se clasifican en grados I a V, dependiendo de la divisin armnica de los blastmeros y su grado de fragmentacin.
Para el estudio slo fueron seleccionados embriones de
grados IIII. Por medio de micromanipulacin se extrajo de cada embrin un blastmero que se coloc en condiciones ptimas para su multiplicacin. Por otra parte,
los embriones de los que se extrajeron los blastmeros
continuaron su desarrollo in vitro hasta la etapa de eclosin, de manera similar a los embriones intactos fertilizados in vitro en clnicas de reproduccin asistida
(figura 58).

(Captulo 5)

De acuerdo con un protocolo diseado por los autores, los blastmeros aislados fueron cultivados para su
multiplicacin en presencia de clulas nodrizas de ratn
y humanas. Slo los blastmeros obtenidos de embriones de grados I y II dieron origen a dos lneas de clulas
madre que mantuvieron su estabilidad gentica (cariotipo) durante ms de 18 meses. La expresin de genes
caractersticos de ESC y la demostracin de que no
hubo fusin con clulas empleadas como nodrizas en
los cultivos refuerzan la credibilidad del estudio reportado por el grupo de Lanza.
Un estudio hecho con ratones en el mismo laboratorio25 demostr que los embriones sometidos a un procedimiento semejante al utilizado en humanos se desarrollaron de manera normal y que su porcentaje de
implantacin fue similar al de los embriones intactos.
Es probable entonces que lo mismo ocurra con los embriones humanos a los que se les extrajo uno de sus primeros blastmeros.
De hecho, la extraccin de blastmeros para diagnstico prenatal es ya una prctica establecida en algunas
clnicas de reproduccin asistida equipadas con tecnologa avanzada. En estos casos es posible detectar la presencia de genes de riesgo elevado que en su estado homocigtico pongan en peligro la viabilidad o transmitan
padecimientos congnitos. Los embriones fertilizados
in vitro carentes de genes de riesgo elevado son seleccionados para su implantacin, incrementando as la
probabilidad de un desarrollo normal.
Los autores reportan que sus experimentos se realizaron con cigotos excedentes de mujeres sometidas a
fertilizacin in vitro a las que se les indujo ovulacin
mltiple para aumentar la probabilidad del embarazo.
Las donadoras otorgaron su consentimiento por escrito
despus de haber sido informadas sobre el estudio, de
acuerdo con la normatividad tica de la institucin. Sin
embargo, es poco probable que los grupos opositores a
la investigacin con clulas madre embrionarias humanas aprueben los resultados de Lanza y col.
Por otra parte, el trabajo publicado ha recibido tambin severas crticas por parte de la comunidad cientfica. Aunque no se trata de un trabajo fraudulento como
el de S. Hwang, la manera en que se presenta el estudio
de Lanza y col. es sensacionalista, disminuyendo as la
seriedad y el rigor cientfico de una buena contribucin.
En el reporte no se enfatiz que los 16 embriones empleados para la investigacin finalmente fueron destruidos y que se utilizaron 91 blastmeros y no 16, como se
hubiera esperado si slo se hubiese tomado un blastmero por embrin. El dilema tico entre los partidarios
25.

Cheng Y et al.: Nature 2006;439:416.

La terapia celular en la prctica mdica

Endodermo
Mesodermo

E
Bancos de
lneas
celulares

ADN
recombinante

Endodermo

D1

II) Terapia gnica

Gen teraputico

Clulas madre
embrionarias
E1

125

Vector
viral

F
Procesos de
diferenciacin
celular
in vitro

FAC

D2
E2

Clulas madre
adultas

I)
Expansin
clonal

III) Diferenciacin
identificacin y
purificacin de
lneas celulares
comerciales

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 59. Terapia celular. Esquema que representa las fuentes de obtencin de clulas madre para su posterior aplicacin local
o sistmica. A. Representa la fertilizacin del oocito por el espermatozoide, que se puede realizar de manera natural, artificial o
in vitro. B. Representa la mrula con los blastmeros, clulas totipotenciales; esto ocurre a partir del tercer da de la fecundacin.
C. El blastocisto aparece el quinto da posterior a la fecundacin y en su interior se encuentran las clulas madre embrionarias
(ES), que tienen la caracterstica de ser pluripotenciales. D. Clulas madre (D1 de origen embrionario y D2 de origen adulto). E.
Bancos criognicos con diferentes lneas de clulas madre (E1: lneas celulares comerciales de origen embrionario para terapia
celular alognica y xenognica; E2: lneas celulares adultas para terapia celular autloga, alognica y xenognica). F. La terapia
celular requiere que las clulas madre sean cultivadas previamente en diferentes medios de cultivo con tres propsitos: expansin
celular o clonal (I), modificacin gentica con DNA recombinante (II) y para su aislamiento, identificacin y diferenciacin in vitro
(III). Los blancos teraputicos reconocidos a nivel hospitalario ms frecuentes son: 1) miocardio (corazn); 2) mdula sea (sangre); 3) sustancia nigra y estriado (cerebro). Las SC pueden dar origen a diferentes tipos celulares derivados de: i) ectodermo;
ii) mesodermo; iii) endodermo.

del avance cientfico y los grupos tradicionalistas conservadores sigue y seguir por mucho tiempo; sin embargo, la terapia celular es ya una realidad (figura 59).

PROYECTO DEL GENOMA HUMANO

El gran avance para la medicina regenerativa nivel III


se vislumbr con el Proyecto del Genoma Humano y el
desarrollo de la tecnologa del DNA recombinante, y de
manera paralela la tecnologa para el cultivo de clulas
y tejidos y la disponibilidad de marcadores y anticuer-

pos para la identificacin de clulas madre. El genoma


se define como la estructura en secuencia y ordenamiento de todos los cromosomas de una especie. Cada
molcula de DNA se empaqueta en un cromosoma separado, y la informacin gentica total almacenada en
los cromosomas de un organismo constituye su genoma.
El valor C determina la cantidad total del DNA haploide completo y oscila entre 106 pb en el caso de los
micoplasmas hasta ms de 1011 pb en plantas y anfibios.
El genoma humano termin de ser descifrado en junio
de 2000; contiene dos copias de cada cromosoma, una
heredada del padre y otra de la madre, que en conjunto
suman 3.3 x 109 pares de bases nitrogenadas o 3 300
megabases (figura 510). En los cromosomas sexuales
esta regla se repite en las mujeres, que tienen frmula

126

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

Genoma humano

Genoma mitocondrial
16 569 pb
37 genes

Genoma nuclear*
3 300 Mb
40 000 genes
5%

95%

Genes

DNA
extragnico
nico o modelo
repetitivo
Seudogenes
10%
90%
DNA
DNA no
codificante
codificante
Fragmentos
gnicos

Intrones

2 genes
rRNA

22 genes
tRNA

13 genes

60% nica o
bajo nmero
de copias

40%
moderada
altamente
repetitivas

Transposones

Repetidos
en tndem
Satlite

Repetidos
dispersos

SINE
LINE

Minisatlite Microsatlite

Figura 510. Esquema de la composicin del genoma humano con sus componentes nucleares y mitocondrial. El genoma
humano descifrado en junio del ao 2000 contiene dos copias de cada cromosoma, una heredada del padre y otra de la madre,
que en conjunto suman 3.3 X109 pb o 3 300 megabases. El RNA juega una nutrida y variada actividad, pasa la informacin gentica
a la descendencia en el apagado de genes. * Centrosomas, que ayudan a separar a los cromosomas pareados, as como otros
organelos se replican a su propio momento, sin la gua del DNA.

XX. Sin embargo, en el hombre los cromosomas sexuales son diferentes: el cromosoma sexual Y es aportado
por el padre y el cromosoma sexual X por la madre, de
tal manera que son copias nicas.
Los cromosomas humanos cambian su estructura y
actividad de acuerdo con el estado de la clula en relacin con el ciclo celular: en la fase M o mitosis se condensan y son transcripcionalmente inactivos, pero en la
interfase se descondensan y se vuelven muy activos en
la sntesis de RNA.
Se considera que en los humanos existen alrededor
de 40 000 genes y que slo 10% del genoma codifica
para protenas o para molculas de RNA. Adems de replicarse a s mismo, la funcin principal del genoma
codificante es copiar secuencias de DNA en secuencias
de RNA, proceso denominado transcripcin. El RNA copiado puede ser un premRNA, que luego de ser procesado puede dar lugar a varios mRNA maduros y codificar para una protena o ms de una. El rRNA (ribosomal)
y el tRNA (de transferencia) tambin se transcriben a
partir del genoma. Se dice entonces que cada regin del
DNA que produce una molcula de RNA funcional
constituye un gen.
El Proyecto Genoma Humano (PGH) consisti en secuenciar los 3 300 millones de nucletidos, pares de bases o letras (A, T, G, C) y el mapa de localizacin de los

casi 40 000 genes que lo componen. Se encontr que


hasta 5 000 genes son causantes de enfermedades genticas. Adems, se demostr que los seres humanos compartimos 99.9% del genoma. El restante 0.1% vara entre cada individuo, siendo las variaciones ms comunes
los polimorfismos o cambios de un nucletido simple o
SNP (single nucleotyde polymorphysm). Slo 1 de cada
1 000 bases difiere de un ser humano a otro; hasta el
momento se han identificado cerca de 3.3 millones de
estas diferencias, muchas de las cuales son intrascendentes.
La variacin genmica entre individuos da como resultado que cada miembro de nuestra especie tenga caractersticas genmicas nicas. Cerca de 35% del genoma contiene secuencias repetidas, lo que se conoce
como DNA basura, 25% del genoma humano est casi
desierto (espacios libres entre un gen y otro). Existe al
menos 98% de identidad con el DNA de los chimpancs
y otros primates.
Tambin se encontr que el ser humano tiene slo el
doble de genes que la mosca del vinagre y un tercio ms
que el gusano comn C. elegans. Slo 5% del genoma
codifica protenas, y se calcula que existen unas
250 000 a 300 000 protenas distintas; por lo tanto, cada
gen podra estar involucrado en la sntesis de 10 protenas en promedio.

La terapia celular en la prctica mdica


La siguiente fase, denominada Proyecto Proteoma
Humano (HUPO), representa una nueva fase en el estudio de los genes, tomando en cuenta que las protenas
representan el segundo nivel de expresin gnica (traduccin gnica). El proyecto HapMap consiste en desarrollar un mapa de constitucin gentica de un individuo con respecto a uno de los miembros de un par de
genes allicos (haplotipos) y los SNP especficos que
identifican al genoma humano; su objetivo es explorar
el genoma en relacin con los fenotipos y las variaciones genticas que afectan a la salud y la enfermedad.
Estudios actuales estn demostrando que la regeneracin celular del miocardio infartado proviene de la
diferenciacin de clulas madre residentes en el miocardio y de las provenientes de la mdula sea. Desafortunadamente este proceso puede ser insuficiente para prevenir la insuficiencia cardiaca en los infartos masivos y
en los pacientes con cardiomiopatas.
Las tcnicas de microarreglos, secuenciacin de
DNA y bases de datos son las herramientas para descifrar lo que est ms all de nuestro entendimiento. Qu
se deducir de todo este trabajo? De momento, la tarea
ha aportado una nueva figura, la del bilogo de sistemas, interesado en poner orden a lo que hoy en da sigue
siendo un rompecabezas. El progreso limita la dificultad de trasladar patrones biolgicos a modelos computacionales.

BIOGENRICOS

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Cuntas protenas tiene el ser humano?


Con dificultad se han logrado contar los genes. Las protenas se pueden empalmar de diversas maneras y combinarse con numerosos grupos funcionales, haciendo
imposible contar su nmero por ahora.
Durante el ao 2002 la industria biotecnolgica celebr el vigsimo aniversario de la aprobacin del primer
producto biofarmacutico: la insulina. El vencimiento
de las patentes de estos primeros biofarmacuticos
abri la posibilidad de comercializarlos como biogenricos.
Los biogenricos consisten en protenas recombinantes, anticuerpos monoclonales o cidos nucleicos
equivalentes a un teraputico original que se pueden
manufacturar tras la expiracin de las patentes de invencin. Han sido denominados de diferente manera: biosimilares, biocomparables, genricos biofarmacuticos,

127

productos biotecnolgicos libres de patentes (OPBP),


productos clnicos biolgicos similares (adoptado por la
Unin Europea, UE). Sin embargo, el trmino ms usado en la literatura ha sido el de biogenricos. El mercado
de estos nuevos productos podra generar ganancias de
alrededor de los 5 400 millones de dlares para el ao
2008 si se consigue un ambiente regulador favorable
que les permita alcanzar el mercado mundial.
El debate de la aprobacin de estos productos se ha
centrado en establecer la similitud entre el biogenrico y el producto biolgico de referencia. Cuando el
mismo producto es manufacturado por diferentes fabricantes, que es lo que ocurrir con los biogenricos, el
nmero de variables, como la construccin de origen, el
proceso de fermentacin, la purificacin, el envasado y
el almacenaje, podran generar productos que no sean
estrictamente idnticos.
La actividad de un producto biolgico depende de la
secuencia de aminocidos, la estructura tridimensional,
modificaciones postraduccionales como fosforilaciones y glicosilaciones (caractersticas inherentes de la
sustancia), la ruta de administracin, as como el sistema inmunitario del husped; cualquier alteracin puede generar un producto diferente que en consecuencia
tendra que cumplir con las pruebas de seguridad y eficacia de medicamentos.
Los fabricantes han pugnado ante la Food and Drug
Administration (FDA), agencia reguladora de EUA, por
el uso de una ruta abreviada para la aprobacin de los
genricos, establecida en 1982 en el acta HatchWaxman Seccin 505(b)(2). Esta legislacin permite que
una droga obtenga la aprobacin sin ensayos de seguridad y eficacia si su ingrediente activo es idntico a la
droga del innovador y se metaboliza de igual forma. En
esta premisa estaran cayendo los primeros biogenricos: factor estimulante de colonias de granulositos
(GCSF), interferones (INF), hormona de crecimiento
humana (Hg), insulina y eritropoyetina (EPO).
La legislacin en la UE tiene como camino regulador
las Directivas 2003/63/EC y 2004/27/EC a travs de la
Agencia Europea de Evaluacin de Medicamentos
(EMEA), que establece un camino regulador abreviado
basado en la demostracin de la naturaleza similar de
dos productos biolgicos, avalados por la informacin
de estudios preclnicos y clnicos. Hasta ahora ningn
producto biogenrico ha sido aprobado para su venta en
Europa o EUA, pero cualquier proceso de revisin y
aprobacin de productos biogenricos requerira el anlisis profundo del caso, as como el apoyo en estudios clnicos que demuestren la seguridad y eficacia del mismo.
Mientras esperan aprobaciones en mercados occidentales, las compaas de biogenricos estn apuntan-

128

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

do a pases con barreras regulatorias ms bajas y menos


proteccin intelectual; por ejemplo, Teva Pharmaceutical Industries Ltd. est fabricando hGH, interfern
a2b y GCSF en Lituania y los est vendiendo fuera
de EUA y Europa Occidental. Por otra parte, la compaa Dragon Pharmaceutical Inc., biofarmacutica con
sede en Vancouver e instalaciones en Nanking, China,
est produciendo EPO y llevndola a mercados como
China, India, Egipto, Brasil, Per, Ecuador, Trinidad y
Tobago, Repblica Dominicana y Kosovo. A finales del
ao 2005 se aprob la venta del primer producto biogenrico en Australia: OmnitropeT Sandoz, que es una
versin de la hormona de crecimiento humana, lo que
abre un escenario optimista para diversas compaas
que estn en espera de aprobaciones futuras.
No hay que perder de vista que la produccin de biogenricos puede ser parte importante del crecimiento de
las empresas farmacuticas convencionales en relacin
a la evolucin de los tratamientos de enfermedades en
todo el mundo, en tanto que otras compaas seguirn
invirtiendo en la mejora de formulaciones, vas de administracin, conjugaciones de protenas con polietilenglicol (PEG) de la primera generacin de biofarmacuticos, desarrollando los supergenricos, para poder
mantenerse o competir en este nuevo mercado.

TICA, CIENCIA Y CLULAS MADRE

La comunidad cientfica, al igual que otras comunidades, puede dividirse en conservadores y liberales, pesimistas y optimistas. Sin embargo, por la manera en que
reaccionan ante hallazgos que cuestionan el conocimiento establecido, los cientficos pueden ser crdulos
o escpticos.
La primera reaccin ante la clonacin de la oveja
Dolly en 199726 fue de escepticismo. La teora establecida, varios intentos fallidos e incluso la comprobacin
de un anterior fraude denunciado justificaban la actitud
de los escpticos. No obstante, la posterior clonacin en
serie de ratones por otro grupo en un laboratorio de reconocido prestigio, seguida de la clonacin de varias especies de mamferos en diversos laboratorios, convenci a la gran mayora de investigadores (no a todos) sobre
la veracidad del trabajo de Wilmut y col., generadores de
Dolly, y de que es posible la clonacin de mamferos.
Por otra parte, la derivacin de clulas madre embrionarias (ESC) a partir de blastocistos humanos, pu26.

Wilmut I et al.: Nature 385:810813.

(Captulo 5)

blicada en 1998 por el grupo de J. A. Thomson,27 gener


nuevas expectativas en la comunidad mdica por su probable aplicacin en la denominada terapia celular o regenerativa. Al menos en teora, las ESC son clulas
multipotenciales capaces de multiplicarse indefinidamente en el laboratorio y, lo ms importante, de generar
clulas progenitoras de clulas especializadas para reemplazar tejidos daados. Estudios hechos con ESC de
ratn han demostrado que la teora est bien fundamentada y que vale la pena continuar trabajando en esta
nueva rea de investigacin.
La derivacin de ESC de blastocistos generados por
transferencia nuclear combina las tcnicas de clonacin
con la manipulacin de ESC. En principio, el desarrollo
de esta metodologa ofrece la posibilidad de emplear la
clula de la piel (u otro tejido) de un paciente, transferir
su ncleo a un ovocito, derivar ESC y, a partir de ellas,
inducir la diferenciacin de clulas progenitoras de clulas sanguneas, cardiacas, neurales, clulas beta productoras de insulina, etc. Al injertar al paciente donador
del ncleo las clulas progenitoras, se esperara poder
corregir algn padecimiento degenerativo con un mnimo de rechazo inmunolgico.
Incluso en casos de padecimientos genticos (p. ej.,
algunas formas de leucemia, asma y diabetes) sera posible corregir el gen daado con ingeniera gentica
en las ESC poseedoras del propio genoma del paciente
y curar su padecimiento con una terapia de reemplazo
celular. Algunos estudios preliminares realizados en ratones han mostrado la factibilidad de la teora y sugieren
a los optimistas que el empleo de ESC clonadas puede
llegar a ser una realidad para la terapia celular regenerativa del futuro. Sin embargo, como los resultados aun en
animales de laboratorio son todava modestos, el escepticismo de los investigadores pesimistas sigue siendo
grande.
La noticia sobre el fraude cientfico cometido por el
grupo de W. S. Hwang, de la Universidad de Sel, cay
como balde de agua fra sobre los optimistas respecto a
la clonacin teraputica. La publicacin de junio de
200528 del grupo coreano indicaba haber logrado derivar 11 lneas de ESC humanas clonadas de pacientes con
diversos padecimientos. De haber sido cierto, los investigadores coreanos se habran adelantado aos a sus competidores de otros pases. De hecho, no fueron pocas las
solicitudes de investigadores provenientes de todo el
mundo para realizar estancias en tan avanzado laboratorio.
Cmo fue posible que una persona o un grupo de investigadores cometieran tan grave falta? Los fraudes
27.
28.

Science 282:11451147.
Science 308:17771783.

La terapia celular en la prctica mdica


cientficos, por desgracia, no son raros ni recientes; la
historia registra buen nmero de ellos. Por fortuna, la investigacin cientfica ha avanzado a travs de la investigacin honesta, y el evidente desarrollo de la ciencia
contempornea demuestra con creces el predominio numrico de los buenos investigadores.
El trmino buen investigador conlleva al menos
dos acepciones:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

1. El que hace bien la investigacin (original, creativo, dedicado, etc.).


2. El que interpreta y reporta sus resultados con honestidad (sin prejuicios ideolgicos o comerciales,
intereses polticos, conflicto de intereses, etc.).
El caso de W. S. Hwang y algunos de sus colaboradores
muestra cmo un equipo con gran capacidad tecnolgica y abundantes recursos humanos puede ser vctima
de su propia ambicin al pretender engaar a la comunidad cientfica internacional. En contraste con la actividad puramente poltica, en la que se puede engaar a la
mayora el tiempo suficiente para detentar el poder o
enriquecerse, la actividad cientfica fraudulenta borra
por completo el prestigio mal habido. Al retirarse, los
polticos de dudosa honestidad suelen vivir bien aun sin
poder; en cambio, los cientficos deshonestos pierden
para siempre el respeto y la credibilidad de sus colegas.
A pesar de la oscuridad a la que fue sumergido el
prestigio de la investigacin biomdica coreana por
culpa del fraude de W. S. Hwang, la actitud de la comunidad cientfica coreana es digna de elogio. No fue un
comit extranjero, sino un comit coreano de expertos
el que se encarg de demostrar la falsedad de los resultados reportados en la publicacin sospechosa de fraudulenta. Predomin la bsqueda de la verdad cientfica
como valor sin fronteras (tal como es) sobre un nacionalismo mal entendido que, en ltima instancia, slo
habra dado un prestigio efmero a la ciencia coreana.
Es indudable que la imagen de la ciencia que proyectan los medios masivos de comunicacin al pblico
en general es de vital importancia. El tema de la clonacin humana activ la reaccin de grupos conservadores opuestos a la investigacin en ESC humanas. Aunque es difcil predecir el efecto negativo que pudiera
tener la extensa difusin del caso coreano, por el momento existe una cierta confusin que parece haber fortalecido la posicin de los grupos conservadores. Es
posible que haya disminuido el inters de algunos investigadores jvenes por las ESC.
Asimismo, puede haber una influencia negativa sobre los encargados de financiar proyectos sobre ESC.
Sin embargo, es de esperarse que la investigacin en

129

esta rea del conocimiento vaya a continuar con pasos


ms slidos y cautelosos, de manera que tarde o temprano se establecer con rigor y seriedad hasta dnde podr
llegar la aplicacin mdica del conocimiento bsico
sobre la biologa de las ESC animales y humanas.

CLULAS MADRE, CLONACIN


Y LEGISLACIN

El 8 de marzo de 2005 la Asamblea General de la Organizacin de las Naciones Unidas (ONU) adopt una
declaracin que pide a los Estados miembros prohibir
todas las formas de clonacin que sean incompatibles
con la dignidad y la proteccin de la vida humanas. La
declaracin (aprobada con 84 votos a favor, 34 en contra
y 37 abstenciones) se da como resultado de la profunda
divisin que el tema haba producido entre los Estados
miembros a travs de dos propuestas previas, una claramente restrictiva, encabezada por Costa Rica y respaldada por EUA, y la otra, ms permisiva, encabezada por
Blgica, que haba sido secundada por pases como
Espaa, Francia, Inglaterra, Alemania y Mxico. El
asunto verdaderamente controvertido se refiere a la clonacin teraputica y a la investigacin con clulas humanas de origen embrionario, ya que la prohibicin
sobre la clonacin reproductiva es generalizada.
Al respecto de la votacin del ao 2005, sorprende de
forma positiva que la representacin mexicana haya
modificado diametralmente su posicin anterior en
apoyo de la propuesta que abra espacios para realizar
investigacin sobre el potencial teraputico de las clulas madre de embriones humanos, lo que puede salvar
millones de vidas.
Afortunadamente, la declaracin de la ONU no es de
observancia obligatoria para los pases miembros y permite a las legislaciones nacionales definir sus propias
normas tomando en cuenta valores culturales, filosficos y religiosos locales. En consecuencia, el debate se
transfiere a los mbitos nacionales, lo que significa que
si la comunidad cientfica mexicana pretende que su
opinin sea tomada en cuenta por nuestros legisladores,
habr de realizar una labor de cabildeo ante los distintos
grupos parlamentarios. En este sentido, una de las principales instancias cientficas que pueden coordinar, formalizar e impulsar nuestras opiniones es la Academia
Mexicana de Ciencias, por lo que se recomienda estar
al pendiente de las noticias de un comit formado ex
profeso.
Una legislacin demasiado restrictiva dejar a Mxico al margen de los avances teraputicos que segura-

130

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

mente se darn en pases que permitan las investigaciones, en detrimento de nuestro desarrollo mdico y
cientfico. Una legislacin demasiado permisiva podra
no ser aceptable para otros actores sociales del debate,
que tambin pretenden ser escuchados. La legislacin
mexicana debera autorizar las investigaciones por comits cientficos y ticos que garanticen su calidad cientfica y su buen procedimiento, as como el requisito de
una carta de consentimiento informado de los padres
biolgicos a quienes pertenecen los embriones mantenidos en almacenamiento. En este sentido podra ser semejante a la aprobada por varios pases europeos.
Se entiende la clonacin como cualquier proceso del
cual resulte la creacin de una copia gentica idntica
o cercana a lo idntico de una molcula de DNA, clula,
planta, animal o ser humano o, en otras palabras, el proceso de produccin de organismos genticamente
idnticos. La clonacin ocurre de manera natural y los
gemelos idnticos son el ejemplo clsico de este evento;
sin embargo, la clonacin que nos interesa es aqulla
que puede ser generada en el laboratorio utilizando
embriones humanos que podran dar origen a seres
humanos. Desde el punto de vista del Derecho, la clonacin humana con fines reproductivos prcticamente no
tiene partidarios y est prohibida y condenada en todo
el mundo. El documento internacional que hace patente
ese rechazo es la Declaracin Universal de la UNESCO
de 1997, que prohbe expresamente un tipo de clonacin
humana, la que pudiera realizarse con fines reproductivos. Por otro lado, se debate intensamente respecto a la
legitimidad de la clonacin teraputica, la cual tiene
como objetivo obtener clulas madre genticamente
idnticas a las de un paciente, a fin de utilizarlas en su
curacin, aunque para su obtencin se requiera utilizar
un embrin.
La investigacin con clulas madre embrionarias se
encuentra en el centro del debate tico debido a que, por
un lado, stas tienen un enorme potencial para reemplazar clulas, crear y regenerar cualquier tejido, as como
establecer terapias para tratar diversas enfermedades y,
por el otro, porque su obtencin requiere que se emplee
un embrin. Clonar es una accin reproductiva, independientemente del fin que se le d al producto de tal
reproduccin, como ocurre en la clonacin teraputica,
o dejarlo crecer y nacer, como sucede en el caso de la
clonacin reproductora. Mxico se ha mantenido al
margen de reglamentar expresamente sobre este tema,
ya que ni en la Ley General de Salud ni en las disposiciones reglamentarias se hace mencin del proceso de la
clonacin en ninguna de sus facetas.
El 2 de diciembre de 2003 la Cmara de Diputados
aprob la minuta con proyecto de decreto por la que se

(Captulo 5)

adiciona una fraccin V al artculo 5_, y un artculo 7_


bis al Captulo I del Ttulo Segundo de la Ley de los Institutos Nacionales de Salud, turnndose para sus efectos
constitucionales a la Cmara de Senadores. A travs de
este proyecto se creaba el Instituto Nacional de Medicina Genmica, y el artculo 7_ bis estableca lo siguiente:
Artculo 7_ bis. El Instituto Nacional de Medicina
Genmica tendr las siguientes atribuciones:
I. Realizar estudios e investigaciones clnicas, epidemiolgicas, experimentales, de desarrollo tecnolgico
y bsicas en las reas de su especialidad, para la comprensin, prevencin, diagnstico y tratamiento de las
enfermedades, rehabilitacin de los afectados, as como
promover medidas de salud, y en ningn caso podrn
ser sujetos de investigacin las clulas madre humanas
de embriones vivos, o aqullas obtenidas por trasplante
nuclear.
La aprobacin de esta minuta constituye el primer intento en Mxico para regular la clonacin teraputica.
Pero de la revisin de este proyecto por parte de la
Cmara de Senadores result la eliminacin de la ltima
parte de este precepto legal. Los senadores integrantes
de las Comisiones Unidas de Salud y Seguridad Social,
de Ciencia y Tecnologa y de Estudios Legislativos del
Senado eliminaron esta parte con el siguiente argumento: La medicina genmica no tiene que ver con la
clonacin humana, con la manipulacin de embriones,
con la manipulacin de clulas madre ni con la reproduccin asistida. Es por ello que se considera necesario
retirar del proyecto original de la minuta turnada por la
H. Cmara de Diputados la redaccin establecida en la
ltima parte del inciso primero del artculo 7_ bis de la
Ley de los Institutos Nacionales de Salud. De las
tareas pendientes del Poder Legislativo est el generar
un marco jurdico que permita el respeto a los individuos
a decidir conocer o no su propia informacin genmica.
Suprimida la prohibicin con base en estos argumentos, es claro que el Poder Legislativo dej para un mejor
momento la regulacin de la clonacin, por lo que Mxico sigue siendo parte del grupo de pases que no tienen
una legislacin especfica al respecto. En palabras de la
doctora Marcia Muoz, del Instituto de Investigaciones
Jurdicas: La ausencia absoluta de normas sobre la clonacin les ha concedido a estos pases el adjetivo de
parasos genticos, por la posibilidad de realizar la clonacin reproductiva.
Ante este vaco jurdico, los diputados y senadores
del Partido Accin Nacional sometieron una iniciativa
para adicionar los artculos 100Bis y 100Ter y reformar el artculo 465 de la Ley General de Salud, para prohibir la clonacin humana en todas sus formas, inicia-

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


tiva que fue turnada a las Comisiones de Salud y de
Ciencia y Tecnologa de la Cmara de Diputados el 30
de junio de 2004, la cual establece lo siguiente:
Artculo nico. Se adiciona un artculo 100 Bis y
100 Ter y se reforma el artculo 465 de la Ley General
de Salud, para quedar como sigue:
Artculo 100Bis. Queda prohibida la investigacin,
manipulacin o intervencin que tenga como fin realizar
cualquier tipo y forma de clonacin humana, as como la
importacin de productos derivados de la misma.
Se entender por clonacin humana: la reproduccin
asexual a travs de la introduccin de material nuclear
de una clula somtica humana dentro de un ovocito fertilizado o sin fertilizar cuyo ncleo haya sido removido
o inactivado para producir un organismo vivo en cualquier etapa de su desarrollo.
Artculo 100Ter. Se prohbe la creacin de embriones o clulas activadas por cualquier tecnologa, independientemente de la etapa del proceso embrionario humano, que combine de cualquier manera genes de
especies diferentes a la humana.
Artculo 465. Al profesional, tcnico o auxiliar de las
disciplinas para la salud y, en general, a toda persona
relacionada con la prctica mdica que realice actos de
investigacin, manipulacin o intervencin clnica en
seres humanos sin sujetarse a lo previsto en el Ttulo
Quinto de esta ley se le impondr prisin de uno a ocho
aos, suspensin en el ejercicio profesional de uno a tres
aos y multa por el equivalente de cien a dos mil das de
salario mnimo general vigente en la zona econmica de
que se trate. Si la conducta se lleva a cabo con menores,
incapacitados, ancianos, sujetos privados de libertad o,
en general, con personas que por cualquier circunstancia no pudieran resistirse, la pena que fija el prrafo
anterior se aumentar hasta en un tanto ms.
Esta iniciativa sin duda alguna abrir nuevamente las
puertas del debate que sobre la clonacin humana se inici con anterioridad. Cabe recordar que la comunidad
cientfica se haba pronunciado al respecto, emitiendo
sus opiniones: Francisco Bolvar Zapata advierte sobre
el riesgo de inhibir el desarrollo de la ciencia mdica y
la biotecnologa en Mxico si se legisla de manera parcial y miope en materia de clonacin, sin considerar el
potencial extraordinario de esta tecnologa para la solucin de muchos problemas. Para Fernando Cano Valle
es importante retomar posturas que permitan aclarar los
diversos fines con que la clonacin surge y se mantiene.
Asegura que cientficos y legisladores se pronuncian
por la prohibicin o la moratoria indefinida para la
investigacin en clonacin no reproductiva. En palabras de Patricia Ostrosky, es evidente que existen diferentes opiniones acerca de en qu momento se inicia la

131

vida de un ser humano y del uso de las lneas celulares


tronco embrionarias. Sin embargo, ante todos los beneficios potenciales, cabe la pregunta: cun tico es no
utilizarlas?
Ruy Prez Tamayo seala que una prohibicin como
sta pone en riesgo el futuro de la investigacin en Mxico en esta rea, pues representa una lnea de investigacin potencial y extraordinariamente rica y, una vez
ms, nos vamos a quedar a la zaga de los avances que
se vayan a producir. Por ltimo, Luis de la Barreda
Solrzano considera que no debemos renunciar a seguir
avanzando en la ruta de la mejora de la salud y de la
calidad de vida de nuestra especie, ni nos debe paralizar
el temor a lo desconocido, pues afrontando lo ignoto hemos logrado portentos cientficos que nos han beneficiado considerablemente. Pero es preciso que cada paso
sea racional.
Con el propsito de proporcionar a los diputados informacin cientfica confiable sobre las implicaciones
para la salud que tienen la medicina genmica y la experimentacin con clulas madre, investigadores de diversas instituciones acudieron a la Cmara de Diputados.
Mara Teresa Tusi, investigadora de Biomdicas y jefa
de la Unidad Perifrica de Biologa Molecular y Medicina Genmica del Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn, precis que este
tipo de estudios posibilita el desarrollo de terapias ms
adecuadas para el tratamiento de enfermedades tan importantes como la diabetes, padecimiento que en la actualidad afecta a 8 millones de mexicanos.
Al hablar acerca de esta enfermedad, producida por
un mal funcionamiento del pncreas, indic que constituye un verdadero problema de salud mundial, y uno de
los mtodos para combatirla es mediante el conocimiento de los genes que predisponen a la enfermedad,
as como a travs de la regeneracin de clulas pancreticas (islotes de Langerhans) productoras de insulina.
Los cientficos coincidieron en que el trabajo con clulas madre est pasando por un momento clave en el
mundo y Mxico puede colocarse al mismo nivel que
los pases desarrollados, ya que se trata de un campo relativamente nuevo, con implicaciones muy importantes en
la teraputica y la medicina predictiva y preventiva.
Durante la Convencin Internacional de la Organizacin de las Naciones Unidas, celebrada en 2007 para
discutir la conveniencia o no de permitir la clonacin
humana, se hizo evidente que los delegados en ese organismo estn lejos de representar la opinin de la mayora de los habitantes de sus pases, y su opinin depende
de instrucciones gubernamentales o, en el caso de los
pases ms pobres con gobiernos errticos, la opinin
que expresan es a titulo puramente personal.

132

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Los representantes occidentales del llamado Primer


Mundo de ninguna manera forman un frente comn.
Los pases latinoamericanos tampoco se distinguieron
por su unidad de principios e hicieron gala de sus diferencias. No es extrao que el resto de pases de Asia y
frica con las tres cuartas partes de la humanidad y
su diversidad cultural tambin sostuvieran posiciones encontradas.
Los debates se traducen simultneamente a tres idiomas: ingls, francs y espaol, de manera que si algn
delegado no comprende con claridad al menos alguno
de esos tres idiomas, o si habla un idioma raro y difcil
de traducir, queda mal comunicado y puede introducir
confusin en los debates.
Es obvio que en el contexto internacional actual, nadie en su sano juicio va a defender pblicamente la posibilidad de traer a este mundo bebs nacidos empleando
tcnicas de clonacin. El horror instintivo ante la posibilidad de que la biotecnologa llegue a cambiar nuestra
reproduccin sexual por una manera de reproduccin
asexual totalmente ajena a nuestra imagen histrica unifica el rechazo. Algunos representantes de pases industrializados se vieron relativamente magnnimos al apoyar e incluso exhortar a los dems pases a prohibir la
clonacin reproductiva en sus territorios.
El no ver todava una clara ventaja econmica para
llevar a cabo la clonacin reproductiva y conservar el
nmero de sus temerosos votantes explica la posicin
del gobierno estadounidense al frente del grupo ms
conservador. Otros pases industrializados, como el
Reino Unido, Francia y Alemania, asumen una postura
cautelosa y prefieren mantener una moratoria a la clonacin reproductiva hasta que se tengan ms y mejores
elementos cientficos y ticos que permitan reconsiderar la prohibicin en un futuro no muy lejano. Evidentemente, los pases industrializados seran los exportadores
de la tecnologa requerida y sus principales beneficiarios.
Las industrias biotecnolgicas son transnacionales
con matrices en el Primer Mundo y no es difcil predecir
que tendran capacidad para vender el equipo y los reactivos necesarios a clnicas de clonacin reproductiva si
el negocio resultara lucrativo y no hubiera objeciones
legales para implementar aqulla dentro y fuera de su territorio. Toda manipulacin biotecnolgica implica un
riesgo y aunque la clonacin humana nos preocupa ms,
los efectos a largo plazo sobre la naturaleza no implican
mayor riesgo biolgico que otras tcnicas biotecnolgicas que ya se estn utilizando y que son motivo de enconadas discusiones. Al haber unanimidad en acordar la
prohibicin de la clonacin reproductiva, pareca que la
conferencia de Nueva York haba tenido xito, justificando as el gasto que, al menos para los pases ms po-

(Captulo 5)

bres, implica el enviar delegados hasta esa lejana ciudad.


Sin embargo, surgi el fantasma de la llamada clonacin teraputica. Con la oveja Dolly se abri la posibilidad de utilizar el citoplasma del ovocito para reprogramar el genoma (conjunto de genes) de un paciente
y clonar no una rplica del individuo, como en la clonacin reproductiva, sino clulas pluripotentes con copias
del genoma del mismo paciente que en teora no seran
rechazadas al serle trasplantadas. En principio, el valor
teraputico de esta tcnica sera el contar con clulas
ideales para reemplazar tejidos que, por haber sido destruidos, no podran autorregenerarse, como sucede en
lesiones al sistema nervioso central y al corazn, y en
algunos padecimientos degenerativos como la diabetes
tipo 2, la enfermedad de Parkinson, el Alzheimer, etc.
Debido a que la manipulacin para llevar a cabo la
clonacin teraputica es la misma que para iniciar la
clonacin reproductiva, se desencaden una acalorada
discusin entre los delegados: por un lado el grupo encabezado por las delegaciones francesa y alemana,
quienes proponen prohibir la clonacin reproductiva
pero dejar que cada pas legisle sobre la clonacin teraputica, y, por el otro, aquellos delegados empeados en
una prohibicin a nivel internacional de cualquier modalidad de clonacin humana. En este grupo destacaron
los delegados de EUA y Espaa.
Los argumentos de los fervientes defensores de la
prohibicin total se basaban esencialmente en dos frentes: los que argumentan que permitir la clonacin teraputica es abrir la puerta a la clonacin reproductiva y
los que afirman con argumentos morales o religiosos
que el embrin humano es sagrado y nada justifica su
uso con fines experimentales. Desde luego que cuando
se trata de argumentos morales, basados en concepciones religiosas o filosficas, la discusin entre lo que
debe o no debe permitirse corre el riesgo de ser interminable y suele concluir con un apretado consenso que a
muchos dejar insatisfechos.
En la conferencia especial de la ONU se entr durante cinco das en un ciclo de argumentos a favor o en contra de la prohibicin de la clonacin teraputica y desgraciadamente no se logr el consenso. El acuerdo
unnime para prohibir la clonacin reproductiva fue
neutralizado por el desacuerdo sobre la clonacin teraputica y finalmente se propuso continuar la discusin
en una conferencia futura. Como la mayora de los pases todava carecen de una legislacin sobre la clonacin humana y los intentos de mdicos poco escrupulosos para llevarla a cabo son reales, el resultado de la
conferencia de septiembre fue lamentable. La propuesta
francoalemana fue sin duda la ms razonable y resulta
difcil entender la posicin de todo o nada asumida

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


por varias delegaciones. Ms all de los motivos prcticos y lucrativos que condujeron a la clonacin de Dolly,
es evidente que la posibilidad de emplear una tecnologa
similar para clonar humanos ha desencadenado de
nuevo una discusin semejante a la provocada por Darwin y Wallace en el siglo XIX. Hasta qu lmites somos
los humanos cualitativamente diferentes de otras especies? A partir de qu etapa del desarrollo es ya un ser
humano el embrin? Existen diferencias cualitativas
entre ovocitos, embriones, fetos y nios?
Francisco Bolvar Zapata, investigador del Instituto
de Biotecnologa (IBT) y recientemente nombrado
miembro de la Junta de Gobierno de la UNAM, advirti
del riesgo de inhibir el desarrollo de la ciencia mdica
y la biotecnologa en Mxico si se legisla de manera parcial y miope en materia de clonacin, sin considerar el
potencial extraordinario de esta tecnologa para la solucin de muchos problemas. Consider que la legislacin debe contemplar el fomento a la investigacin
cientfica y a la ciencia, y se pronunci por la participacin de la sociedad en la discusin del uso de las tcnicas de ingeniera gentica para desarrollar organismos
transgnicos, que est ligada al uso de las tcnicas de
ingeniera celular para el desarrollo de la clonacin
celular con propsitos teraputicos.
La clonacin humana est prohibida, pero las tcnicas de clonacin celular deben permitirse... estarn
siempre con nosotros y lo importante es sealar qu
experimentos son adecuados, cules no deben permitirse y qu reglamentacin desarrollar en este sentido,
porque lo importante es no frenar el desarrollo de la
ciencia mdica y la biotecnologa, cuyo potencial es
extraordinario, puntualiz.
Durante su participacin en el coloquio Derecho y
Medicina en 2007, organizado por el Instituto de Investigaciones Jurdicas y la Coordinacin de los Institutos
Nacionales de Salud de la Secretara del Ramo en torno
a la clonacin humana, seal que con la revolucin
biolgica que estamos viviendo, a diferencia de lo que
ocurra hace algunos aos, el conocimiento cientfico
afecta con rapidez la vida humana y en distintos mbitos, lo cual obliga a usar el conocimiento de manera responsable y a sealar los lmites para experimentos que
representan an riesgos muy elevados.
Cientficos y legisladores se pronuncian por la prohibicin o la moratoria indefinida para la investigacin en
clonacin no reproductiva, que se ve como una esperanza de vida para personas con enfermedades genticas,
para desarrollar nuevos frmacos y disminuir el dficit
de rganos para trasplantes con menos riesgo al rechazo. Lo importante es cmo reprogramar clulas adultas
sin clonacin y sin usar embriones para formar tejidos.

133

Estas clulas tienen un enorme potencial para reemplazar clulas, crear y regenerar cualquier tejido, y establecer terapias para tratar diversas enfermedades. Las
lneas celulares tronco embrionarias (LESC) se obtienen
a partir de las clulas que forman la masa interna del blastocisto (estado que dura del cuarto al sptimo da despus
de la fertilizacin del vulo por el espermatozoide), pueden extraerse y cultivarse en el laboratorio para dar origen a otras que, dependiendo de las condiciones, pueden
proliferar in vitro ilimitadamente o diferenciarse en cualquier tipo de clula. Pero ya no pueden formar un embrin y, en contraste con las clulas de los primeros estadios, se les considera slo pluripotenciales.
Conociendo lo que pasa en los sistemas de lneas de
clulas tronco embrionarias (LESC), ms que todos los
tejidos que puedan crearse, lo ms importante ser conocer los mecanismos que regulan esta plasticidad gentica, pues posiblemente tendr ms aplicaciones que
la de trasplante de tejidos, ya que nos permitir manipular las clulas madre que tiene el individuo adulto.
Las LESC pueden utilizarse para estudiar el proceso
de diferenciacin dirigida y contestar cmo se forman
los diferentes tipos celulares, cmo se equivocan y producen malformaciones y cmo conocer e identificar los
mecanismos de teratognesis y de alteraciones genticas y as evitarlos. El conocimiento de la biologa bsica
de la clula pluripotencial establecer el camino para
cientos de aplicaciones clnicas futuras y la creacin de
medicamentos que acten especficamente sobre los
genes para inducir la diferenciacin de las clulas madre
del organismo. Los mtodos para obtener LESC son
poco efectivos; por ejemplo, en un estudio reportado el
ao pasado, 162 vulos donados por 12 voluntarias se
pudieron fertilizar; 50 llegaron al estado de blastocisto
y slo se establecieron 3 LESC.
Aunque la creacin e investigacin de LESC est prohibida en Austria, Francia, Alemania, Irlanda y Noruega,
se permite en Dinamarca, Finlandia, Hungra, Espaa,
Suecia e Inglaterra. En EUA se aprob el financiamiento
con fondos federales slo para la investigacin con las 64
LCE ya existentes, pero se prohibi la creacin de nuevas y cualquier investigacin con embriones humanos.
Las clulas embrionarias representan por su naturaleza la mejor opcin clnica para los pacientes, dado que
poseen el mayor potencial de desarrollo de cualquiera
de las clulas tronco, y adems el establecimiento de
LESC permitir estudiar la biologa bsica de la clula
troncal y los mecanismos de control que en un futuro
cercano lograrn modular la diferenciacin de las clulas troncales en el paciente adulto que lo necesite. Es
evidente, coment, que existen diferentes opiniones
acerca de en qu momento se inicia la vida de un ser hu-

134

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

mano y del uso de LESC; sin embargo, ante todos los


beneficios potenciales, cabe la pregunta: cun tico es
no utilizarlas?
Por su parte, Luis Covarrubias Robles, del IBT, habl
de las clulas tronco, del control de los procesos regenerativos en mamferos y acerca de la relevancia de la clonacin como parte del proceso cientfico, la cual no
surge de manera espontnea con la finalidad de hacer
copias, quiz primero animales y despus humanas,
sino con un propsito cientfico: responder preguntas de
cmo se transmite la informacin gentica y, si acaso,
producir embriones nonatos para aplicarlos en la clonacin teraputica. Seal que el proceso de clonacin se
realiza ahora en diferentes organismos, como ovejas,
vacas, cerdos y ratones, a partir de clulas adultas, pero
a pesar de estos progresos es un proceso an ineficiente.
La clonacin teraputica es una fusin entre el desarrollo de las clulas troncales y el desarrollo de la clonacin, donde el objetivo de sta no es generar un individuo genticamente similar, sino producir clulas
troncales embrionarias que llevan la informacin gentica de donde provienen. Tambin podemos regenerar
tejidos a partir de clulas tronco especficas de un tejido
de adulto, como del sistema sanguneo en el caso de leucemia. El ponente argument que la clonacin teraputica es relevante porque existen varias clulas tronco
producidas a partir de tejido humano que in vitro muestran las mismas caractersticas que las clulas tronco
embrionarias de ratn, que tienen la amplia capacidad
para diferenciarse y, por lo tanto, son candidatos para
tratar ciertas enfermedades.
Por cuestiones no resueltas hay que hacer un reconocimiento y buscar el mejor provecho de la investigacin
de dichas clulas, pues se ha demostrado en animales que
las clulas troncales embrionarias son susceptibles de
desarrollar cncer. Por otra parte, an queda por analizar si los organismos clonados son sanos, pues la oveja
Dolly ya ha sufrido alteraciones y otros roedores afecciones inmunolgicas. Aunque la clonacin humana
con fines reproductivos no se ha logrado, la sociedad y
la comunidad cientfica la rechazan, pues an falta mucho por hacer y tal vez sea imposible, concluy.
Manuel Ruiz de Chvez, de la Coordinacin de los
INS, se pronunci por permitir la clonacin de clulas
madre con fines teraputicos. Debe permitirse clonarlas para generar tejidos tiles; crear rganos para reemplazar los daados.
Cabe sealar que este coloquio se dio en el marco de
un convenio de colaboracin establecido entre la Coordinacin de los INS y el Instituto de Investigaciones
Jurdicas para el intercambio acadmico vinculado al
desarrollo de la gentica moderna, a la investigacin y

(Captulo 5)

la formacin de recursos humanos de mxima especialidad en el campo y al anlisis de la aplicacin de los


avances cientficos en la atencin de los problemas de
salud que aquejan a la poblacin, y que requieren una
moderna regulacin de acuerdo con los pronunciamientos y la idiosincrasia de la sociedad mexicana y conforme a lo que legisle el Congreso de la Unin.
En Inglaterra, una comisin de la Cmara de los Lores determin que la clonacin humana debe permitirse
bajo estrictas condiciones, lo que permite ahora que
cientficos de ese pas inicien la clonacin de embriones
humanos para la investigacin enfocada al tratamiento
de enfermedades y se establezca el primer banco de
clulas embrionarias en el mundo. La resolucin de la
Comisin fue ampliamente apoyada por la Asociacin
Mdica Britnica. Por otra parte, en EUA, el presidente
George W. Bush inst al Senado de su pas a seguir el
ejemplo de la Cmara Baja del Congreso y votar por la
prohibicin total de los estudios sobre la clonacin
humana. En julio pasado la Cmara de Representantes
del Congreso de EUA aprob un proyecto de ley en el
que se prohbe la produccin de todos los embriones que
sean genticamente idnticos a los de un donador. Muchos en el Senado estadounidense se oponen a usar la
clonacin para crear seres humanos, aunque existe apoyo para la denominada clonacin teraputica, que desarrolla embriones de clulas madre para utilizarlos en
la investigacin de potenciales tratamientos de enfermedades. El Senado est considerando dos proyectos:
uno que prohbe toda investigacin de clonacin humana y otro que prohbe la clonacin reproductiva, pero
permite la clonacin teraputica.
En el ao 2003 el presidente de la Academia Nacional de Medicina (ANM) seal que se debe alentar en
Mxico la clonacin teraputica: clonar para generar tejidos tiles, para hacer crecer nuevos vasos sanguneos
en un corazn afectado, para crear rganos que puedan
reemplazar a los que estn daados, debe ser permitido
y su desarrollo alentarse, no inhibirse, asegur Juan
Ramn de la Fuente, presidente de la Academia Nacional de Medicina en el ao 2003, al inaugurar el ao acadmico 139 de este organismo, en una ceremonia presidida por el Primer Mandatario de la Nacin, Vicente
Fox. Consider que en Mxico, para dar inicio al siglo
XXI, debe permitirse la prctica de algunos tipos de clonacin, pues sus mtodos representan un avance cientfico importante que el pas debe alentar. La posibilidad
de reparar rganos enfermos mediante su regeneracin
biolgica, dijo, representa un formidable avance. Lamentablemente, ms por ignorancia que por mala fe, se
ha desatado una tempestad absurda en torno a la clonacin teraputica, que es distinta a la reproductiva. Al

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


afirmar que la ciencia es nuestra aliada, no nuestra
adversaria, precis que habr que seguir afinando los
aspectos ticos y legales que permitan un marco adecuado para la operacin correcta de los desarrollos en materia de clonacin. Asimismo, advirti que frenar este
proyecto aduciendo razones econmicas sera un gran
error cuyo costo mucho ms elevado habrn de pagar las
prximas generaciones de mexicanos. El doctor De la
Fuente se refiri tambin a los avances logrados para la
obtencin de nuevos frmacos provenientes del estudio
cada vez ms sistematizado de los genes o de las protenas que de ellos se derivan, los cuales empiezan a mostrar sus beneficios extraordinarios. Se trata de frmacos
ms seguros, poderosos y selectivos, aunque tambin
ms costosos, lo cual constituye un problema serio pero,
so pena de quedar sepultada para siempre en el rezago,
la medicina nunca ms podr ignorar a la biologa molecular. Nada ha sido ni ser tan trascendente como el
desarrollo de las nuevas disciplinas emanadas de la biologa molecular. En este mismo acto, el presidente Fox
asegur a los miembros de la Academia Mexicana de
Ciencias (AMC) que interesaba a su gobierno analizar
temas que afectan al bienestar del pas y del mundo,
como el bioterrorismo y las adicciones, y los invit a
participar en el anlisis del efecto de los programas sociales, as como de las consecuencias ticas de la investigacin mdica y las relaciones entre Medicina y Derecho. Antes de declarar inaugurado el ao acadmico
reconoci la labor de la ANM como pilar de la medicina
en Mxico por promover la investigacin, difusin y
aplicacin del conocimiento, de acuerdo con los criterios ms rigurosos y en apego a valores ticos.
A partir de la clonacin de la oveja Dolly en Escocia
se desencaden una verdadera avalancha de informacin en los medios masivos de comunicacin. Como resultado, la opinin pblica de los pases industrializados
presion a sus gobiernos para legislar sobre el peligro
potencial que implica el desarrollo de una tecnologa
que eventualmente lleve a la clonacin de seres humanos. As, con algunas variantes en la forma, Inglaterra,
la Comunidad Europea, EUA, Canad y Japn prohibieron la clonacin humana con fines reproductivos,
centrando el debate en la imposicin o no de restricciones a la investigacin que pudiera conducir a la clonacin con fines teraputicos en humanos. La importancia
mdica de investigar en esta rea se relaciona con la
posibilidad de obtener clulas pluripotenciales genticamente idnticas al paciente que requiere reemplazar
tejidos irreversiblemente daados. En teora, se podra
tomar el ncleo de una clula del paciente y trasplantarlo al vulo enucleado (sin su dotacin gentica) de
una mujer donadora y permitir que inicie su desarrollo

135

en el laboratorio hasta formar un complejo multicelular


(etapas de mrula o blastocisto, previas a su implantacin en el tero o matriz). Disociando estas primeras
clulas, se podran mantener proliferando y una vez
establecidas las condiciones para conducir su diferenciacin hacia los tejidos que se requiriera reemplazar,
podran trasplantarse sin peligro de rechazo inmunolgico, ya que su genoma nuclear sera igual al del paciente en cuestin.
Sin embargo, quedan todava muchos problemas por
resolver antes de intentar llevar a cabo experimentos de
clonacin teraputica. Las condiciones para conducir
a esas primeras clulas embrionarias hacia su diferenciacin de manera controlada todava se desconocen.
Experimentos clsicos de embriologa demostraron que
la mayora de las clulas embrionarias pierden gradualmente su pluripotencialidad conforme avanza el desarrollo y siguen caminos conducentes a su diferenciacin
como clulas especializadas (neuronas, fibras musculares, fibroblastos, etc.). Otras clulas, en cambio, conservan cierto rango de pluripotencia y dan origen a diversos tipos celulares aun en el individuo adulto. A estas
clulas se las ha denominado en castellano clulas
tronco o precursoras (stem en ingls).
Un ejemplo est en las clulas precursoras del cerebro. Aunque durante mucho tiempo se estableci que
las neuronas de la corteza cerebral adulta eran irreemplazables, en 1988 lvarezBuylla (Arturo lvarez
Buylla es un alumno egresado de la licenciatura de Investigacin Biomdica Bsica del IIB, UNAM) y
Nottebohm29 demostraron que grupos de neuronas se
regeneran peridicamente en aves adultas. Cuatro aos
despus, Lois y lvarezBuylla30 demostraron que lo
mismo ocurre en el cerebro de mamferos. Estos trabajos pioneros sobre la existencia de clulas madre en
el cerebro abrieron un nuevo paradigma en la plasticidad del sistema nervioso y su posible aplicacin clnica.
Entre los ms espectaculares estn los resultados obtenidos por Clarke y col.,31 quienes encontraron que las
clulas madre del ratn identificadas por el grupo de
lvarezBuylla conservan la potencialidad para diferenciarse no slo en neuronas, sino tambin en mltiples linajes celulares, como fibras musculares esquelticas y cardiacas, epitelio pulmonar e intestinal, etc.
Otros investigadores han demostrado la capacidad de
las clulas de la mdula sea (que normalmente dan origen a clulas sanguneas) para diferenciarse como neuronas o en vasos que irrigan al corazn. Estos y algunos
29.
30.
31.

Nature 335:353354.
Proc Natl Acad Sci 90:20742077.
Science 2000;288:16601663.

136

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

manas para investigacin. Los que estn a favor y pertenecen a la comunidad cientfica consideran que resulta
muy limitante restringir la investigacin al uso de las
lneas celulares que cumplen la normatividad aprobada.
Todava se desconoce con precisin el grado de pluripotencia de esas clulas que fueron obtenidas con diversas
metodologas y mantenidas con duracin y condiciones
tambin diversas.
As, proponen la discusin de una legislacin tendiente a permitir el establecimiento de nuevas lneas
derivadas de embriones humanos preimplantados con el
fin de conocer mejor las condiciones ptimas que garanticen su pluripotencia. Por otra parte, el grupo que se
opone a cualquier tipo de manipulacin de clulas embrionarias humanas pertenece en su mayora a comunidades religiosas y sus argumentos giran en torno al valor
sagrado de la vida humana en cualquiera de sus etapas
durante el desarrollo embrionario.
Obviamente, la legislacin recin aprobada en EUA
implica necesariamente el uso de clulas embrionarias
humanas, y el hecho de que no permita obtener nuevas
lneas de clulas madre de embriones obtenidos despus
del 9 de agosto de 2001 no hace menos sagrado el origen
humano de las clulas para cuya investigacin ya existen fondos autorizados por el NIH.
Un tercer frente se ha agregado a la controversia sobre las clulas madre obtenidas de embriones humanos
preimplantados: el grupo que propone que dichas clulas pueden ser sustituidas por clulas madre obtenidas
de individuos adultos, con ello la actual controversia
quedara resuelta. Tomar clulas del paciente, manipularlas en el laboratorio y reintegrarlas al mismo paciente

otros hallazgos recientes se suman a la evidencia de que


hay clulas multipotentes en el individuo adulto capaces de regenerar clulas daadas de otros tejidos. Se reaviva as el debate sobre el empleo experimental de clulas stem obtenidas a partir de embriones preimplantados
que incluiran la clonacin teraputica.
Las legislaciones ms liberales estn en el Reino
Unido y en Japn, donde se aprob la investigacin empleando clulas madre embrionarias obtenidas de embriones humanos preimplantados bajo cierta normatividad. Entre otras normas estn el compromiso del
investigador de no intentar la clonacin con fines reproductivos y de que la mujer donadora apruebe el uso del
embrin con fines teraputicos. En EUA el presidente
Bush aprob financiar la investigacin de clulas madre embrionarias humanas, pero solamente con las lneas establecidas (antes del 9 de agosto de 2001) por
compaas privadas en EUA o generadas en otros pases
(Australia, Israel, la India y Suecia), siempre que renan
ciertos lineamientos, como que las clulas provengan de
embriones extra almacenados en clnicas de reproduccin asistida que hayan sido conservados despus de
que con uno de ellos se logr un embarazo; que los padres donadores hayan otorgado su aceptacin por escrito sobre el uso experimental del embrin (los embriones
preimplantados de reserva se mantienen congelados y
con el tiempo se destruyen), y que en ningn caso se
haya pagado a los padres donadores por el uso de los
embriones para obtener clulas stem.
La iniciativa del presidente Bush ha dejado insatisfechos a la mayora de los miembros de grupos que estn
a favor o en contra del uso de clulas embrionarias hu-

Ciencias bsicas
biomdicas
Observaciones

Biologa celular
u experimentos
in vitro

(Captulo 5)

Estudios clnicos
Fase I, II y III

Formulacin
de mecanismos
hiptesis y
Formulacin
teorias
de hiptesis y
teoras teraputicas

Observaciones
preclnicas

Mecanismos
+

Mecanismos

Resultados

Efectos adversos detectados


Figura 511. La terapia celular se encuentra actualmente en etapa clnica al alcance de cualquier persona y ha superado con xito
los estudios experimentales y preclnicos con animales, donde demostr su potencial efecto regenerativo/curativo.

La terapia celular en la prctica mdica


en principio no implica la destruccin de un ser humano
potencial. Por lo tanto, el grupo que defiende la dignidad
o lo sagrado de la vida humana no se opone a esta lnea
de investigacin. Por otra parte, la obtencin de clulas
madre de adultos es menos complicada que la de las embrionarias y ofrece grandes posibilidades para su estudio.
Todava hay un largo camino por recorrer en la biologa
celular de las clulas madre, pero se sabe que los dos
tipos celulares tomados en diferentes etapas del desarrollo poseen una pluripotencia similar. ste es el principal
argumento de los investigadores que defienden la necesidad de explorar todas las posibilidades metodolgicas a
fin de fundamentar cientficamente la necesidad o no de
emplear clulas madre de embriones humanos preimplantados. De forma alentadora para la medicina clnica,
la terapia celular es ya una realidad despus de dcadas
de estudios preclnicos en animales (figura 511). Por
esta razn, se la considera la medicina del siglo XXI.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

LA TERAPIA CELULAR CON CLULAS


MADRE, MEDICINA REGENERATIVA Y
ANTIENVEJECIMIENTO EN LA PRCTICA
MDICA

Con este nuevo enfoque de la medicina con miras a alcanzar el mximo beneficio de salud y longevidad a partir de los conocimientos de vanguardia disponible, muchos enfermos, familiares y personas sanas estn cada
da ms preocupados por preservar o incrementar un
buen estado de salud y muchos estn solicitando los servicios de atencin mdica que brinda la SITECEM (Sociedad Internacional de Terapia Celular con clulas
madre, Medicina Regenerativa y el antienvejecimiento
S. C., tel 22223000). Para ello se requiere solicitar
una consulta mdica previa en donde se valora el estado
de salud, analizando la posibilidad de que sea candidato
para recibir un tratamiento con base en terapia celular
con clulas madre, el cual es el nico tratamiento disponible que puede impactar en forma real o verdadera
sobre el envejecimiento biolgico y el estado de salud
de las personas. Y que quede claro que nunca podr
afectar al envejecimiento cronolgico (edad cumplida
en aos). Sin embargo, desde el punto de vista de calidad de vida y salud, es el envejecimiento biolgico el de
mayor trascendencia, ya que es factible de sufrir una
aceleracin o desaceleracin, la cual se refleja en el
grado de senescencia de las clulas que constituyen los
tejidos de los aparatos y sistemas del cuerpo humano. Si

137

bien hoy en da existen muchas terapias que tienen la


capacidad de modificar la apariencia fsica (medicina y
ciruga esttica errneamente considerada como medicina antienvejecimiento), externa, motivo por el cual
la seguridad y autoestima mejora, tienen un resultado
menos eficiente para mejorar el estado general de salud
y calidad de vida desde el interior del organismo, es decir, puede mejorar artificialmente el envejecimiento
cronolgico al engaar al ojo con la apariencia, pero el
envejecimiento biolgico pobremente se ve modificado, de manera que la insuficiencia cardiaca, renal, arterial, venosa, divertculos, disminucin de la memoria,
fuerza muscular, ereccin, libido, cataratas, atencin,
etc., y muchas funciones continuarn disminuyendo
gradualmente y debilitndose con el pasar de los aos;
obviamente el tiempo puede ser mayor o menor, y los
cambios en la aceleracin dependern de los estilos de
vida que habitualmente se tengan.
El envejecimiento biolgico es afectado por diversos
factores de riesgo, como estilos de vida inadecuados,
factores ambientales como la irradiacin solar y la contaminacin, carga gentica heredada de los padres, etc.
La sociedad actual est cada da ms interesada en mantener, preservar o recuperar la salud y con miras a alcanzar la longevidad. La terapia celular con clulas madre
impacta de forma muy satisfactoria, ya que los pacientes perciben la mejora de su estado de salud y calidad
de vida, motivo por el cual nos recomiendan con sus
conocidos para que acudan a solicitar nuestros servicios; sus testimonios y vivencias son nuestro mejor sistema de difusin. Los mejores resultados se observan en
aquellos pacientes en los que la evolucin de su enfermedad ha sido crnica, sobre todo en los que han recibido mltiples tratamiento, ya sea de ndole convencional, medicina alpata especializada, procedimientos
quirrgicos o de tipo alternativo, esotrico y holstico,
sin haber obtenido los resultados que pudieran satisfacer mnimas expectativas de mejora.
A pesar del gran auge cientfico y tecnolgico, todava los tratamientos mdicos y quirrgicos se hacen
insuficientes, por lo que los protocolos de terapia celular con clula madre desde un enfoque preventivo o
curativo se hacen cada da ms necesarios5 y estn indicados sobre todo en los padecimientos crnicodegenerativos y de ndole geritrica.
Otras enfermedades relacionadas con alteraciones
del sistema inmunitario tambin estn teniendo una tendencia al incremento: las rinitis alrgicas, el asma bronquial, las dermatitis atpicas y en especial el vitligo:
estn alcanzando cada vez ms los primeros lugares en
morbilidad. Por ejemplo, el vitligo ocupa del 2_ al 5_
lugar en las enfermedades que afectan a la piel, con una

138

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

incidencia internacional de 2%, afectando de manera


preferencial a las mujeres y a pacientes con otros padecimientos autoinmunitarios que se pueden asociar a enfermedades de las glndulas del sistema endocrino
como el pncreas (clulas B) y tiroides. Cabe sealar
adems que la incidencia ms alta para el vitligo se observa en tres pases: India, Japn y Mxico. Como
equipo mdico estamos siendo testigos presenciales de
los excelentes resultados que se obtienen al aplicar terapia celular con clulas madre en casos de enfermedades
incurables o con mala respuesta al tratamiento mdico;
es el caso del vitligo, alopecia areata, dermatitis atpica, psoriasis, etc., que adems han sido rebeldes al tratamiento dermatolgico. Nuestros pacientes estn presentando una gran mejora despus de haber recibido de
5 a 15 sesiones de terapia celular con clulas madre
diseadas en forma especfica para cada enfermedad.
Otros casos excepcionales son los pacientes que estn
presentando sorprendentes mejoras con el tratamiento
de clulas madre para regenerar los tejidos de los enfermos que presentan insuficiencia renal crnica, as como
los pacientes con dolores e inflamaciones crnicas de
tipo osteoarticular y en la columna vertebral, los cuales
son ocasionados por diversos padecimientos como son:
artrosis, osteoartritis, fibromialgia reumtica, artritis
reumatoide, lupus eritematoso sistmico y hernias discales; en todo ello est plenamente indicada y justificada la terapia celular con clulas madre.
Debido a que muchas de las enfermedades y padecimientos con alta incidencia son el resultado de estilos de
vida inadecuados y por tal motivo son susceptibles de
ser prevenidas, tambin ofrecemos cursos y servicios
integrales que incluyen terapias con enfoque biopsicosocial (biolgico, psicolgico y social) tendientes
a modificar y mejorar estilos de vida hacindolos ms
saludable para aumentar el periodo e intensidad en la
regeneracin y antienvejecimiento celular alcanzado
con la terapia celular con clulas madre. Estn diseados para que tanto los pacientes tratados, como sus familiares y personas interesadas incrementen su calidad
de vida y estado de salud en todos los aspectos. En nuestras consultas, asesoras, conferencias, cursos y diplomados ayudamos a las personas en general a estudiar,
aprender y ensear sobre los procesos de envejecimiento y regeneracin biolgica, respondiendo a preguntas
frecuentes como: Qu son y cmo actan las clulas
madre en nuestro cuerpo?, por qu se escucha tanto en
las noticias acerca de clulas madre?, cul es el efecto
que tiene la terapia celular con clulas madre?, cules
son los trabajos cientficos que apoyan las terapias con
base en clulas madre? Qu es lo que sucede con las
clulas madre que llegan a nuestro cuerpo? Por qu es

(Captulo 5)

tan segura la tcnica que desarrollamos de terapia celular con clulas madre? Por qu no es posible que las clulas madre que empleamos para nuestros procedimientos de terapia celular con clulas madre nos lleven a
aberraciones como el cncer o infecciones de transmisin sangunea?, cmo puedo ayudar a incrementar la
regeneracin y duracin de clulas madre en mi circulacin aumentando y manteniendo una salud ptima?
Puedo tomar medicinas mientras estoy recibiendo la
terapia celular con clulas madre? Se puede tratar a
nios con terapia celular con clulas madre? En conclusin, se explican las bases cientficas que fundamentan
nuestros procedimientos de terapia celular con clulas
madre, y cmo podemos ayudar a las clulas madre en
sus funciones de regeneracin, procurando en la medida
de lo posible la longevidad y la sanidad de las enfermedades, reforzando en forma complementaria con la adquisicin de mejores hbitos higinicosalimenticios y
estilos de vida ms saludables que las protegen y alargan su vida media en nuestro cuerpo.
La importancia de la terapia celular con clulas
madre, medicina regenerativa y el antienvejecimiento
radica en que la gran mayora de los padecimientos y
enfermedades que hasta ahora han sido catalogados por
la medicina en nmero aproximado de 30 000, muchas
de ellas no pueden ser prevenidas, ya que su origen y
mecanismo de produccin es todava motivo de investigacin cientfica y los tratamientos disponibles que se
conocen slo son efectivos en 30% de ellas. Por lo anterior los grandes esfuerzos de las ciencias biomdicas
han fructificado con el desarrollo de tratamientos, medicamentos y procedimientos mdicoquirrgicos,
siendo el ms grande conocido como la teraputica del
siglo XXI, la de clulas madre.
La carencia de tratamientos adecuados para la gran
mayora de las enfermedades ha llevado a los mdicos
y cientficos de todo el mundo, a buscar nuevas estrategias, el nuevo paradigma de la medicina es la regeneracin de las clulas y el antienvejecimiento: cmo podemos reparar los tejidos? Y de esta forma se procura la
sanidad y la longevidad de las personas. Durante los
principios de este siglo XXI se estn sustentando las
bases que estn desplegando un gran desarrollo y expansin a escala mundial; la terapia celular, las clulas
madre, la medicina regenerativa y el antienvejecimiento; todos ellos son los principales campos de accin de nuestra sociedad, la cual surge como parte del
esfuerzo cientfico internacional, y para poner en prctica y difundir el cmulo de descubrimientos cientficos, clnicos y experimentales que estn surgiendo en
torno a las clulas madre (stem cells), los avances en el
diagnstico y tratamiento de las enfermedades y los

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


trastornos y padecimientos que se asociacin con el envejecimiento de las poblaciones, como son: Parkinson,
Alzheimer, diabetes mellitus, cardiopatas, esclerosis
mltiple, artritis, artrosis, osteoartritis, hernias discales,
cncer, enfermedades de la sangre y del sistema inmunitario, etc.
A mediados de 1990, los cientficos de Inglaterra y
EUA hicieron crecer las primeras clulas madre humanas pluripotenciales in vitro, en cajas Petri. Rpidamente otros cientficos en diversas puntos del orbe
tuvieron xito en hacerlas crecer por muchas generaciones y se ha logrado ocasionar su diferenciacin en prcticamente cualquier tipo de clulas, por ejemplo neuronas y gla (clulas del cerebro), miocitos (clulas del
corazn y del msculo), hepatocitos (clulas del hgado), etc. Posteriormente otros grupos de cientficos lograron hacer crecer clulas madre multipotenciales provenientes de la mdula sea y del cordn umbilical
(clulas madre adultas). En un principio el esfuerzo no
tuvo tanto xito, dado que es difcil cultivar este tipo de
clulas madre in vitro por un nmero determinado de
generaciones. Esto condujo a la idea de que las clulas
madre que se haban asilado primeramente de la masa
celular interna del blastocisto tienen mayor potencial
que las clulas madre adultas, ya que son inmortales y
no tienen lmite determinado de generaciones para su
cultivo in vitro. Sin embargo, descubrimientos en los ltimos aos, estn estableciendo que las clulas madre
pluripotenciales y multipotenciales tienen una capacidad comparable para la terapia celular y la medicina
regenerativa.
Muchos estudios cientficos serios han demostrado
que la liberacin de las clulas madre en el torrente sanguneo puede llevar a una salud ptima; los estudios de
Orlic en la biblioteca de NIH y el de Werner y col. concluyen el efecto de mejora con clulas madre en circulacin. A travs del trabajo de Krause se pudo ver que
las clulas madre se convirtieron en clulas funcionales
de la piel, el hgado, colon, intestino, estmago, esfago, riones y pulmones. Segn se ha documentado,
las clulas madre pueden convertirse en clulas del
cerebro, clulas del corazn, clulas del msculo, clulas del pncreas, prcticamente cualquier tipo de clula
en el cuerpo. Esto ha dado origen a la teora de la generacin con clulas madre la cual sustenta que: cuando
las clulas madre son liberadas en la circulacin provenientes de diversos reservorios y migran por el torrente
circulatorio, finalmente van a sustituir o renovar a
aquellas clulas que tienen mayor necesidad de regeneracin o reemplazo. Es el fenmeno de tropismo, que se
refiere al fenmeno de migracin que ocurre cuando las
clulas madre se encuentran en la circulacin y alcanzan

139

el sitio daado o enfermo. Este fenmeno fundamenta


la terapia celular con clulas madre, el cual ocurre debido a que, cuando un rgano est sujeto a estrs o dao,
este rgano dispara molculas con actividad biolgica
que emiten una seal para que las clulas madre liberadas en el torrente circulatorio acudan a regenerar o sanar
el tejido enfermo o lesionado. El rgano lesionado tambin lanza compuestos que favorecen la proliferacin y
diferenciacin de las clulas madre para que se transformen en el tipo de clula especializada que requiere ese
rgano en particular para ser sanado. Entonces las clulas madre que fueron liberadas de la inyeccin siguen el
camino de la concentracin de esos compuestos y dejan
el torrente sanguneo para migrar al rgano en donde
pueden continuar proliferando y comenzando a diferenciarse en clulas de ese rgano en particular; este proceso es conocido con el nombre de transdiferenciacin.
En nuestra experiencia clnica se ha observado que los
efectos de la terapia celular con clulas madre se dejan
sentir generalmente despus de la tercera semana de tratamiento continuo semanal.

DESARROLLO DE LA SITECEM, S. C.
EN MXICO

En Mxico, despus de ms de siete aos de investigacin en laboratorio y tres aos de investigacin clnica,
los tres autores mdicos militares con posgrados en
especializacin mdica y grado acadmico en ciencias
biomdicas han logrado obtener excelentes resultados
clnicos, despus de aplicar la terapia celular con clulas
madre y de evaluarla en ms de 10 centenas de pacientes
con enfermedades crnicodegenerativas. Por ello
decidieron poner a disposicin del pblico en forma de
ejercicio privado de la profesin mdica esta avanzada
teraputica, sobre todo en los pacientes nacionales y
extranjeros que la requieren, con lo que han logrado
materializar el nivel III de la medicina regenerativa y los
primeros avances reales en el tratamiento mdico del
envejecimiento biolgico de las personas.
La terapia celular con clulas madre esta surgiendo
como una especializacin teraputica de la medicina
que est dando esperanza a muchos enfermos, sobre
todo aquellos pacientes que la requieren por presentar
padecimientos crnicos y degenerativos, sin teraputica
eficaz tanto a nivel nacional como en extranjeros. En la
SITECEM S. C. se ha alcanzado el nivel ms avanzado
de esta nueva disciplina, es decir, el nivel III de la medicina regenerativa y el antienvejecimiento biolgico de
las personas.

140

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Los mejores resultados de terapia celular con clulas


madre se observan en pacientes con enfermedades cuyos tratamientos a base de medicamentos o cirugas son
muy riesgosos o los resultados obtenidos no han sido
satisfactorios. La terapia celular con clulas madre es
mucho mas avanzada que muchos tratamientos convencionales, ya que la mayora de stos se basan en la prescripcin de medicamentos, que en su gran mayora son
sustancias activas constituidas por molculas extraas
al cuerpo humano (frmacos o xenobiticos), si bien
muchos de ellos son orgnicos y fueron descubiertos de
la extraccin de compuestos y extractos de plantas medicinales, muchos de ellos posteriormente han logrado
ser sintetizados de forma artificial en laboratorios. La
gran mayora de los medicamentos solamente tienen la
capacidad de regular las funciones de los aparatos y sistemas que conforman el cuerpo humano; y en mayor o
menor medida, casi siempre pueden presentar efectos
secundarios e incluso txicos. Por otro lado, el gran
avance de la ciruga durante el siglo XX permiti retirar
y reparar la gran mayora de los tejidos, ahora con procedimientos de invasin mnima (laparoscopia), siendo
el mejor de los casos el xito de los procedimientos de
trasplante de rgano y la implantacin de prtesis mecnicas o de tejidos procedentes de otros donadores (crneas, huesos, piel, etc.). Todos estos avances, como ya
se seal, slo tienen la capacidad de atender la tercera
parte de los padecimientos que estudia la medicina.
Adems, la gran mayora de las enfermedades asociadas
al envejecimiento inician con daos celulares y la prdida de clulas ocasionados por la muerte de las mismas, que constituyen debilitamiento de los tejidos, ocasionando insuficiencia de los rganos que integran los
aparatos y sistemas del cuerpo humano. De forma normal en los individuos jvenes y sanos las clulas madre
recuperan la prdida natural de clulas, ocasionada por
agentes nocivos de diversa ndole; cuando la recuperacin de clulas es insuficiente al dao ocasionado por el
ambiente, estilo de vida, enfermedad o lesin (quemadura, traumas, accidentes, etc.), surgen las enfermedades. La terapia celular con clulas madre es comparable al trasplante de clulas en forma peridica de la
totalidad de clulas que constituyen el cuerpo humano
en contraparte con lo que ocurre con el envejecimiento
biolgico, donde hay una deplecin y senescencia gradual de las clulas que constituyen el organismo ocasionando su debilitamiento generalizado y susceptibilidad
a las enfermedades, cncer e infecciones, el cual es mayor conforme ms pasa el tiempo.
La seguridad de la terapia celular con clulas madre
que aplica la SITECEM radica, a que este es el proceso
natural con el cual los organismos pluricelulares se

(Captulo 5)

regeneran y se reparan. En todos los individuos las clulas madre existen y se encuentran en diversos reservorios, como la mdula sea. Desafortunadamente las
agresiones recibidas con el tiempo se van acumulando
y aunado al proceso de senescencia celular condicionan
un estado de insuficiencia de clulas, el cual gradualmente no puede ser compensado por el proceso natural
antes sealado, ya que esta insuficiencia celular tambin afecta el nmero o la funcionalidad de las clulas
madre en sus reservorios endgenos. La funcin natural
de renovacin celular que realizan las clulas madre va
sufriendo merma, la cual puede ser agudizada en los
procesos patolgicos que originan las enfermedades. La
terapia celular con clulas madre es el tratamiento ms
avanzado e idneo para procurar la salud en muchas
enfermedades. Recientes publicaciones cientficas confirman cada da ms el potencial que tienen las clulas
madre en circulacin para poder llegar a varios rganos
y convertirse en clulas de ese rgano, ayudando a que
ste se recupere y mantenga una salud ptima. Se han
conducido muchos estudios por varios equipos cientficos alrededor del mundo, incluyendo el Instituto Nacional de Salud de EUA (NIH), los cuales establecen claramente que cuanto ms altos sean los niveles de clulas
madre en circulacin, mayor ser la habilidad del
cuerpo para mantener una salud ptima. Una publicacin reciente en el New England Journal of Medicine
informa que el nivel de clulas madre en la sangre fue
uno de los mejores indicadores para la salud cardiovascular. Se ha demostrado que al elevar el nmero de clulas madre en la sangre, esto ocasiona una mejor salud en
muchas maneras. Por las investigaciones de Krause se
pudo ver que las clulas madre se convirtieron en clulas funcionales de la piel, el hgado, colon, intestino, estmago, esfago, riones y pulmones. Las clulas madre tambin pueden convertirse en clulas del cerebro,
clulas del corazn, clulas del msculo, clulas del
pncreas, prcticamente cualquier tipo de clulas en el
cuerpo, segn se ha documentado. Los estudios anteriores ms los de Orlic y Werner y col. sugieren claramente
que el nmero de clulas madre en circulacin son un
factor clave; cuanto mayor sea la cantidad de clulas
madre en circulacin, mayor ser la habilidad del cuerpo de regenerarse. Estos estudios tambin apoyan la
teora del antienvejecimiento biolgico ya que al pasar el tiempo estas clulas se encuentran en menor nmero; tal vez esta disminucin sea la que condicione la
mayor vulnerabilidad, as como caractersticas biolgicas de las personas de ms de 60 aos de edad. Si nosotros inyectamos clulas madre en la circulacin de estos
pacientes sern ms capaces de autorregenerarse, ya
que estas clulas tienen la capacidad de migrar a partir

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


de la circulacin a los rganos, aparatos y sistemas que
se estn envejeciendo. Las clulas madre al transdiferenciarse en las clulas endoteliales y otras clulas especializadas que conforman los rganos y tejidos del
cuerpo revitalizan al anciano. Esto se ve an ms agudizado cuando por motivo de alguna enfermedad alguna
estirpe celular se encuentra bajo un gran reto o estrs;
tal es el caso de las clulas productoras de insulina
(clulas B del pncreas) y en los pacientes con diabetes
mellitus tipo 2, tarde que temprano el sobreesfuerzo de
trabajo ocasiona su fatiga condicionando la insuficiencia de insulina y el incremento de la glucosa sangunea
caracterstica de esta enfermedad, lo que puede ocasionar aumento de sed, aumento de la frecuencia para orinar y aumento del apetito.
Cuando se aplica una lnea de clulas madre dirigida
a la transdiferenciacin de clulas B y a la regeneracin
de las glndulas endocrinas en pacientes con diabetes
mellitus tipo 2, o aun en pacientes con riesgo de padecerla, la medicina regenerativa puede aplicarse en un
enfoque preventivo para evitar o retrasar el dao a la
salud. Cuando los individuos se encuentran sanos pero
el envejecimiento cronolgico ya tiene un impacto lo
suficientemente grande (lo que ocurre a partir de las tercera a cuarta dcada de vida), la aplicacin de clulas
madre (terapia celular) ocasiona la disminucin e inclusive desaparicin por el paso del tiempo de sntomas y
signos que van apareciendo conforme se va estableciendo el envejecimiento biolgico: debilidad, vulnerabilidad a las agresiones de la piel (arrugas, canas, manchas
en la piel) y en muchas ocasiones la susceptibilidad a las
enfermedades (neumonas, infecciones, enfermedad
pulmonar obstructiva crnica, divertculos, diabetes
mellitus, etc.). Entre ms pronto se detecte esta sintomatologa, ms efectivo ser el resultado regenerativo y de
antienvejecimiento que la terapia con clula madre
pueda ejercer. Cuando los pacientes presentan la sintomatologa anterior es necesario implantar clulas madre
nuevas no envejecidas y disear de acuerdo al diagnstico mdico (diabetes mellitus, cardiopata isqumica,
Alzheimer, Parkinson, divertculos, artrosis, etc.) el
tipo de lnea celular y el nmero de sesiones a utilizar.
Asimismo, se prescriben mejores estilos de vida, los pacientes deben dejar vicios como el alcohol, tabaco, mala
alimentacin y otros estilos de vida inadecuados, los pacientes aprenden a protegerse contra factores ambientales como las irradiaciones y a fortalecer el sistema
inmunitario y antioxidante para hacer frente a la contaminacin y al mismo envejecimiento. Cuntos aos
podemos llegar a vivir? Slo 1 de cada 10 000 personas
cumple 100 aos; sin embargo, tres lneas de investigacin sugieren que la esperanza de vida puede ser mayor

141

que la actual con la restriccin calrica, reduccin del


nivel del IGF1 (factor 1 de crecimiento similar a la
insulina) y proteccin del organismo frente a los radicales libres. Demostrar su utilidad en los humanos puede
llevar aos. Merecer la pena vivir ms? Si el tratamiento antienvejecimiento elimina los achaques de la
edad, sin duda que s vale la pena.

CUESTIONARIO BSICO
DE CALIDAD DE VIDA

La calidad de vida hace referencia a la percepcin que


tiene un individuo de su propio bienestar fsico y mental. Numerosos factores contribuyen a la calidad de
vida, incluyendo los que influyen en lo buena que es
la vida, la felicidad de un individuo y su capacidad para
desenvolverse de manera independiente y disfrutar de
la vida.
La calidad de vida relacionada con la salud
(CVRS) hace referencia a los aspectos afectados por las
enfermedades y su tratamiento. Por ejemplo, el dolor
asociado a una enfermedad y las limitaciones en el funcionamiento que requieren dependencia de la ayuda de
los dems en las actividades habituales de la vida diaria
reducen la calidad de vida de un individuo.
La habilidad de liberar las clulas madre a la circulacin a travs de nuestros protocolos de terapia celular,
medicina regenerativa y antienvejecimiento es de gran
relevancia, ya que las clulas madre en circulacin aparentemente disminuyen al aumentar en edad. De esta
manera, se podra concluir que los nios y bebs tienen
un sistema de clulas madre muy efectivo y no necesita apoyo. Sin embargo, han aplicado terapia celular en
nios menores de 10 aos como apoyo al tratamiento de
quimioterapia y radioterapia en leucemias agudas, as
tambin en pacientes peditricos con sndromes genticos como la trisoma del cromosoma 21 (sndrome de
Down), Turner, etc., y tambin en nios con problemas
del neurodesarrollo, autistas, debilidad mental, parlisis cerebral infantil, dficit de atencin y jvenes con
esquizofrenia. Estamos recibiendo testimonios con informacin acerca de experiencias muy fuertes indicando que la terapia celular con clulas madre podra brindar beneficios significantes para los nios pequeos.
El Dr. Sosa seala: La terapia celular con clulas
madre es la forma ms segura de tratar los daos que
sufre el material gentico que se encuentra en el ncleo
celular y las mitocondrias. Estos daos son uno de los
factores ms relevantes del proceso de envejecimiento

142

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 5)

Cuestionario bsico de calidad de vida


Para uso de oficina: CR/IDNUM:

Lugar:

Fecha:
Lugar:
Seleccione el que corresponda
1. Pretest
2. Post test
3. Seguimiento
4. Otro
1. En general, cmo dira usted que se encuentra su salud?
1. Excelente

2. Muy buena

3. Buena

4. Considerable

5. Mala

Las siguientes situaciones son acerca de las actividades que usted hara tpicamente en un da normal. Su salud actual le limita
estas actividades? Si es as, cunto?
S, me limita
S, me limita un
No, no me limita
mucho
poco
en lo absoluto
2. Actividades moderadas, como mover una
mesa, empujar una aspiradora, jardinera o caminar a
un paso moderado
3. Subir varios pisos por las escaleras
Durante las pasadas 4 semanas, ha tenido usted alguno de los siguientes problemas con su trabajo u otras actividades diarias
como resultado de su salud fsica?
4. Lleva a cabo menos de lo que usted quisiera?
1. S

2. No

5. Estuvo limitado/a en el tipo de trabajo u otras actividades?


1. S

2. No

Durante las pasadas 4 semanas, ha usted tenido alguno de los siguientes problemas con su trabajo u otras actividades diarias
como resultado de cualquier problema emocional (tal como sentirse deprimido/a ansioso/a)?
6. Lleva a cabo menos de lo que usted quisiera?
1. S

2. No

7. No trabaj o realiz otras actividades tan cuidadosamente como usted acostumbra


1. S

2. No

8. Durante las pasadas 4 semanas, cunto interfiri el dolor con su trabajo normal (incluyendo ambos trabajos: dentro
y fuera de la casa)?
Para nada

Moderadamente

Un poco

Bastante

Extremadamente

Para cada pregunta, por favor d la respuesta que est ms cerca de la manera en que se ha estado sintiendo.
Cunto tiempo de las ltimas
4 semanas?
9. Se ha sentido calmado/a y
tranquilo/a?
10. Tuvo mucha energa?

Todo el
tiempo

La mayora
del tiempo

Un buen
tiempo

Algo de
tiempo

Muy poquito
tiempo

En ningn
momento

11. Se ha sentido triste o


desamparado/a?
12. Qu tanto tiempo interfirieron
sus problemas emocionales o su
estado fsico con sus
actividades sociales
(como visitaramistades
miembros de la familia, etc.)
Entrevistador/a:

Fecha:

Nota: este cuestionario debe aplicarse antes de iniciar la terapia celular y despus de cinco sesiones de clulas madre.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica


biolgico y la senescencia celular. En los ancianos se
producen un mayor nmero de alteraciones estructurales de los cromosomas (material gentico), los cuales
estn compuestos de cido desoxirribonucleico (DNA).
En los cromosomas de personas que presentan envejecimiento biolgico se observan entrecruzamientos de
DNA y con frecuencia se producen roturas de una sola
cadena; disminuyen las mutilaciones del DNA perdindose las secuencias telmericas en dicho cido nucleico. Tambin al envejecimiento biolgico se suma la
agresin ambiental (en la que se incluyen infecciones
diversas, accidentes, traumatismos y otras enfermedades cuyo origen y fisiopatologa todava no se conoce),
as como la agresin endgena, la cual se divide en las
alteraciones del DNA heredado de nuestros padres, la
cual se asocia con la aparicin de enfermedades crnicodegenerativas como la diabetes mellitus, hipertensin, cncer, etc. Estas agresiones continan con la serie
de impactos nocivos y si bien la estructura primaria de
las protenas no se altera con el envejecimiento del
DNA, las agresiones ambientales y endgenas aumentan los cambios posteriores a la traduccin. Los daos
en las protenas pueden explicarse mejor por una mala
alimentacin (rica en carbohidratos, escasa en aminocidos y protenas) y dao en las mitocondrias, que tambin se deterioran con el tiempo, aunque no siempre lo
hacen de forma constante. Las mitocondrias tambin
sufren de alteraciones del DNA de las mismas que condicionan estados de estrs oxidativo, ocasionan alteraciones en los procesos bioqumicos de desaminacin, oxidacin, entrecruzamiento y glucosilacin no enzimtica.
Las clulas madre que se utilizan para la terapia celular que se ha desarrollado por la SITECEM S. C. contienen DNA intacto, as como sus mitocondrias saludables,
y adems organelos que las constituyen, la solucin
especial en la cual son suspendidas para su aplicacin
paraenteral en los pacientes, as como el mismo citoplasma que constituye a las clulas madre. Contienen
muchas protenas y biomolculas, las cuales incluso
todava no son conocidas o descubiertas, pero que tienen la capacidad potencial de revertir muchos de los
efectos del envejecimiento y de las enfermedades. Por
ejemplo, las clulas madre pluripotenciales son ricas en
la enzima llamada telomerasa, la cual tiene la funcin
de reparar las secuencias telmricas de DNA en los
extremos de los cromosomas del ncleo. La importancia
del acortamiento de los telmeros es que es el marcador
ms importante asociado a la senescencia celular y al
envejecimiento biolgico. Desde el punto de vista de
terapia gnica, podemos considerar que las clulas
madre son el mejor vector, y pueden ser consideradas
como microesferas inteligentes (ya que son organis-

143

mos vivos microscpicos, con la total capacidad de autorreplicacin, as como de tropismo, tienen la capacidad de reconocer y viajar al sitio del dao o lesin, o
enfermedad en donde se pueden autorreplicar, pasar a
una fase de quiescencia celular o entrar en un proceso
de transdiferenciacin. Estas clulas al entrar en contacto con las clulas y estructuras del tejido especializado obtienen la informacin y sealizacin necesaria
que les permite diferenciarse en el tipo celular faltante
o lesionado. Adicionalmente la hiptesis del SITECEM, de los doctores SnchezGonzlezSosa, radica
en considerar a la clula madre como vector de terapia
celular, ya que las clulas madre sanas contienen en su
interior el genoma humano completo y saludable, el
cual, a diferencia de los protocolos de terapia gnica, se
encuentra intacto, y no ha sido modificado o tocado por
manos, tcnicas o instrumentos humanos. El DNA se
encuentra en su estado de indiferenciacin, es decir;
todos los genes que codifican protenas pueden ser
expresados y pueden dar origen a todas las biomolculas, las caractersticas especiales de los ms de 250 diferentes tipos celulares especializados que constituyen los
tejidos del cuerpo humano. Cabe resaltar que en la
SITECEM S. C. se considera que las clulas madre no
(negativo) deben ser modificadas, alteradas o siquiera
tocadas, sobre todo en su maquinaria gentica (DNA),
y nos reservamo la estrategia de protegerlas lo ms posible de todos los agentes nocivos que puedan degenerar
la maquinaria de DNA. Son protegidas contra radiaciones, cambios de temperatura, pH, osmolaridad, agentes
infecciosos, etc. De manera que las clulas que se trasplantan tienen una edad biolgica aproximada de cero
aos (nuevas). Por lo anterior la terapia celular con clulas madre tiene un gran potencial en los padecimientos
que cursan con dao gentico o enfermedades hereditarias, por ejemplo la retinitis pigmentaria, el sndrome de
Down, la diabetes mellitus, hipertensin arterial, etc.

SERVICIOS DE LA SITECEM, S. C.

En la SITECEM se ofrecen en forma privada servicios


profesionales de alta especialidad y vanguardia.

Atencin mdica
Se dirige al pblico en general y se ofrece consulta mdica especializada en regeneracin y antienvejecimiento, que incluye la evaluacin, el diagnstico y el trata-

144

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

miento con base en la terapia celular, las clulas madre


y los diversos procedimientos de vanguardia que se
estn integrando a este campo del conocimiento cientfico y clnico, dentro del ejercicio privado de la profesin mdica a nivel internacional ofreciendo servicios
sencillos, seguros y con calidez y calidad. De manera
complementaria se ofrecen servicios de: auxiliares dignsticos, terapia hiperbrica, carboxiterapia, ozonoterapia, terapia baritrica, nutricin, psicoterapia y farmacia especializada.

Difusin y educacin
El otro servicio es dirigido a mdicos y personas interesadas a travs de la organizacin internacional de doctorados, maestras, diplomados, posgrados, cursos,
eventos, congresos, foros, seminarios relativos a la terapia celular, clulas madre, medicina regenerativa y el
antienvejecimiento.

Investigacin y desarrollo
Este servicio est dirigido a las empresas y los organismos pblicos y privados, las fundaciones y los pacientes
que se encuentren interesados en el desarrollo de proyectos de investigacin en los que se incluye el desarrollo de terapia celular con clulas madre autlogas o de
sus hijas que han sido criopreservadas en bancos de clulas madre, generalmente provenientes del cordn umbilical o de la mdula sea.

Criopreservacin de clulas
de cordn umbilical
Este sistema se dirige a las mams embarazadas que
desean contar con el servicio de criopreservacin y asilamiento de clulas madre del cordn umbilical de sus
hijos por nacer.

Misin
1. Agrupar, orientar, tratar, asistir mdicamente, investigar cientficamente, capacitar y certificar a
los que ingresen a la sociedad respecto a todo lo
relacionado con la terapia celular, con las clulas
madre, la medicina regenerativa y antienvejecimiento, en todo el mundo.

(Captulo 5)

2. Ofrecer servicios de atencin mdica con calidad


y calidez, basados en la terapia celular con clulas
madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento a las personas con diversas enfermedades
como son las crnicas degenerativas y padecimientos asociados al envejecimiento de procedencia nacional y extranjera.
3. Enseanza y capacitacin en materia de salud,
longevidad, terapia celular, clulas madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento, a los
socios y personas interesadas a travs de cursos,
seminarios, diplomados, maestras, doctorados,
congresos, exposiciones, eventos cientficos, acadmicos, artsticos y culturales, en el mbito nacional e internacional.
4. Promover la investigacin y enseanza sobre la terapia celular, las clulas madre, la medicina regenerativa y antienvejecimiento.
5. Fomentar el acercamiento y enlace con asociaciones nacionales e internacionales.
6. Impartir cursos, diplomados, seminarios, maestras, doctorados, cursos de posgrado sobre terapia
celular, clulas madre, medicina regenerativa y
antienvejecimiento.
7. Establecer alianzas de investigacin y comercializacin con la finalidad tanto de importar como de
exportar todo lo relacionado con la terapia celular
con clulas madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento, con instituciones gubernamentales, organismos internacionales, empresas e instituciones mdicocientficas nacionales y de todo
el mundo.
8. Editar, distribuir y vender libros, publicaciones,
artculos, gacetas, material audiovisual.
9. El registrar patentes y marcas nacionales e internacionales.

Visin
Establecimiento de clnicas, centros, hospitales, consultorios, albergues, casas de medio camino, casas para ancianos, servicio de traslado de pacientes (ambulancias),
spa, gimnasios, clnicas, centros de relajacin, recreacin y esparcimiento, cafeteras y restaurantes con preparacin de alimentos, servicio de banquetes que favorezcan la regeneracin celular y la longevidad de las
personas con los ms altos principios morales, ticos y de
calidad en la atencin mdica y con fundamentos cientficos sustentados en la terapia celular, en las clulas
madre, en la medicina regenerativa y en el antienvejecimiento en todo el mundo.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

La terapia celular en la prctica mdica

145

COMPROMISO PROFESIONAL
DE LA PRCTICA MEDICA EN
TERAPIA CELULAR

neracin y fortalecimiento de los tejidos del cuerpo, de


gran relevancia en los pacientes de la tercera edad y los
gravemente enfermos, incrementando la calidad de vida
de stos.

Nuestro principal compromiso es con el paciente, el


cual es de trascendental importancia. Por ello se debe
esforzar en mejorar continuamente nuestros servicios
profesionales en forma personalizada, considerando al
ser humano en forma integral con calidad y calidez,
siempre respetando la tica profesional y el trabajo de
otros colegas, se deben instaurar polticas de calidad, as
como en el establecimiento de procedimientos y trabajo
en equipo, en los centros de atencin que emprendan.
Consideremos el esfuerzo econmico y social que ha
realizado y realizan nuestros pacientes, por lo que de ser
posible se debe solicitar el menor nmero necesario de
estudios diagnsticos para establecer con precisin el
diagnstico y evaluar los tratamientos que estn recibiendo nuestros pacientes, de manera que cuando ya no
son necesarios se indica que sean suspendidos en forma
gradual y siempre bajo estricto control mdico.
Aunque todas las personas son candidatas a recibir la
terapia celular con clulas madre, la aplicacin de sta
ser cuando los pacientes cumplan con las indicaciones
establecidas en los protocolos. Por tal motivo nosotros
desde la primera consulta evaluamos los diagnsticos
establecidos y respetamos en la medida de lo posible los
tratamientos antes prescritos por sus mdicos tratantes.
El manejo de todos nuestros pacientes se debe realizar a travs del trabajo multidisciplinario de mdicos
expertos con ms de un posgrado en ciencias y medicina
o que acrediten el diplomado respectivo de la SITECEM S. C. Siempre bajo los ms producentes principios
de honestidad, el equipo mdico coordina todos los
esfuerzos de salud para alcanzar el mximo rendimiento
de salud y longevidad que el estado de salud previo al
tratamiento pueda alcanzar en beneficio de nuestros
pacientes.
Los pacientes que padecen cncer as como otras enfermedades que pueden llevar rpidamente a finalizar la
vida como el VIH pueden ser candidatos a recibir de
forma complementaria a su tratamiento de antirretrovirales, radioterapia y quimioterapia, ciclos de terapia
celular con clulas madre. Si bien somos honestos en
sealar que la terapia celular con clulas madre no logra
curar las enfermedades terminales graves y que las clulas madre no destruyen a las clulas tumorales, y tampoco eliminan grmenes patgenos crnicos, siempre
contribuirn en mayor o menor medida, dependiendo de
las condiciones biolgicas de cada persona, en la rege-

PROCEDIMIENTO GENERAL DE
ATENCIN MDICA PARA LA
TERAPIA CON CLULAS MADRE

Los pacientes deben solicitar una cita a los telfonos del


consultorio (2222 3000) o control de atencin mdica,
para que sean atendidos por mdicos especialistas y
diplomados de la SITECEM S. C., deben acudir en su
primera cita con una fotocopia o su credencial de IFE u
otra identificacin con fotografa, as como con los estudios de laboratorio y gabinete que tenga disponibles;
son tiles las biometras hemticas, funcionales hepticas, depuraciones de creatinina en orina de 24 h, exmenes generales de orina, SPECT, PET, radiografas, electrocardiogramas, tomografas, resonancias magnticas,
ultrasonidos, electroencefalogramas, potenciales evocados, etc. Despus de realizar una historia clnica,
exploracin fsica, anlisis de los estudios de laboratorio y gabinete, se evala si es candidato o no recibir la
terapia celular con clula madre; se disea y programa
un ciclo mnimo de cinco sesiones de administracin
intravenosa de clulas madre en forma individualizada;
se estudia si se requiere aplicar en forma local intramuscular, subcutnea, etc. La va de administracin y tipo
de clulas madre (lneas celulares) que necesita cada
paciente, por ejemplo si el paciente padece de enfermedad de Parkinson, requiere de clulas madre que se conviertan en neuronas productoras de dopamina. Si el paciente padece de vitligo se necesita de una lnea de
clulas que se transforman diferencindose en melanocitos; si el paciente presenta infartos del miocardio e
insuficiencia cardiaca, requiere lneas celulares que se
diferencien en miocitos y endotelio; si el paciente presenta diabetes mellitus se necesita una lnea de clulas
que se diferencien en clulas B productoras de insulina;
si el paciente tiene artrosis en las rodillas o cadera se
necesita una lnea especial de clulas madre que se
transformen en clulas formadoras de cartlago articular conocidas como condrocitos; stas se aplican en forma intravenosa y pueden tambin ser depositadas en
forma local en la regin anatmica de las placas de crecimiento. Si el paciente es de la tercera edad (mayor de 60
aos) o padece de diabetes mellitus con complicaciones
microvasculares como neuropata diabtica, retinopata

146

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

o neuropata, generalmente se requieren tres lneas celulares para poder regenerar los procesos de isquemia con
la formacin de clulas endoteliales y nuevos vasos sanguneos, as como regenerar las neuronas y gliales que se
encuentren daados en todo el sistema nervioso, y clulas que se diferencien en los distintos tipos celulares que
conforman las glndulas de secrecin endocrina que normalmente declinan sus funciones con el envejecimiento.
Las reacciones que ocurren tras la administracin de
la terapia celular con clulas madre son mnimas o nulas, raramente se presentan en forma de leves malestares
y dolores, los cuales son de muy buen pronstico ya que
indican regeneracin celular en los sitios a los que estn
llegando las clulas madre. Si el padecimiento se encuentra en el cerebro y se aplica una lnea celular para
neurogeneracin en un paciente con enfermedad de Alzheimer o Parkinson, el paciente puede presentar dolor
de cabeza; si el paciente est recibiendo una lnea de
regeneracin articular por presentar artrosis u osteoartritis, podr percibir aumento de dolor en la regin de la
cadera en algn punto de la articulacin con irradiacin
lumbar, el cual ir gradualmente desapareciendo. Si el
paciente est recibiendo una lnea de regeneracin para
la piel por estar enfermo de vitligo presentar gradualmente un enrojecimiento en las zonas blancas acompaado de ligero prurito y puntilleo, el cual se va difuminando en las zonas de lesin previa a un proceso de
repigmentacin normal. En los pacientes de la tercera
edad, la piel envejecida es renovada por lo que pueden
aparecer zonas de descamacin similares a las que ocurren despus de un bao de sol ligero, con la epidermis
nueva. En general los pacientes pueden referir tener
hambre, cansancio y sueo despus de recibir una
sesin de terapia celular con clulas madre y tambin
han referido que puede quitrseles el apetito. Los malestares cuando se presentan tienen una duracin menor a 48
h, y consisten en sensacin de fiebre o febrcula en ocasiones slo es la sensacin y la temperatura se encuentra
< 37 _C, los sntomas de malestar general mejoran con
la administracin de paracetamol u otro analgsico similar (TempraR, TaylexR o AdvilR). Es necesario que se
cumpla con las indicaciones, sobre todo la prescripcin
de dietas especiales y medicamentos complementarios
especiales (XangoR, LebasiR, PxPR, StemEnhiancerT, y Transfer FactorT, ImmunocalR, etc.) para ayudar
a la regeneracin y al antienvejecimiento segn sea el
caso. Estos productos apoyan las funciones de las clulas madre en el cuerpo. Dada la naturaleza de ambos, el
concepto y el producto, es imprescindible llevar a cabo
un esfuerzo significativo para educar a la gente, para
que de esa manera adquieran el conocimiento de esta
nueva tecnologa.

(Captulo 5)

As como los antioxidantes son importantes para proteger las clulas del dao ocasionado por los radicales
libres, los productos que apoyan a las clulas madre
son tambin importantes para ayudar a sus clulas madre y mantener el funcionamiento adecuado de los rganos y tejidos del cuerpo.
Generalmente, en forma individualizada a cada paciente se le programan las sesiones semanales de terapia
celular con clulas madre. Las lneas celulares, vas de
administracin, as como el nmero de sesiones, son diseados y prescritos por el mdico especialista. De
acuerdo a la evolucin del paciente se pueden modificar
la dosis (nmero de sesiones), lneas celulares y vas de
administracin. Habitualmente, para que el paciente
pueda percibir un efecto de mejora se requieren por lo
menos cinco sesiones (dosis mnima) y la dosis promedio recomendada es de 15 sesiones; a esto se le conoce
como ciclo de terapia celular. Cada ciclo de terapia
celular puede ser de 5 a 15 sesiones en las que se aplica
volmenes con ms de 10 000 000 de clulas madre
suspendidas en 3 mL de solucin especial, las cuales
generalmente se administran por va intravenosa y ms
de 1 500 000 clulas madres suspendidas en 0.5 mL de
solucin especial para aplicacin intramuscular y local.
Antes de comenzar y al finalizar el ciclo de terapia celular, es necesario realizar evaluaciones mdicas; la frecuencia y los estudios complementarios dependern del
estado de gravedad, edad y respuesta del paciente a la
terapia celular. Hay casos en los que se requiere una sola
lnea celular, por lo que el tratamiento resulta ms econmico, y el cual se incrementa con base en la cantidad
de lneas celulares, que por lo menos son tres.
Los ciclos de terapia celular se programan cuando los
pacientes no estn recibiendo otro tipo de ciclos, sobre
todo los de radioterapia o quimioterapia (terapias contra
el cncer), ya que durante estos tratamientos las clulas
sufren severos daos evitando su efecto regenerativo,
ya que muchas de ellas mueren antes de lograr dividirse
y transdiferenciarse en el tejido blanco del tratamiento.
Los ciclos de terapia celular deben suspenderse o aplazarse ya que se encuentran contraindicados, cuando los
pacientes presentan cuadros agudos de enfermedad
como parasitosis, infecciones vitrales y bacterianas (paludismo, toxoplasmosis, dengue, faringitis, etc.) e infecciones que cursan con fiebre elevada de diversa ndole (virus, hongos y bacterias), sobre todo cuando los
patgenos han alcanzado la circulacin sangunea (sepsis). Estos pacientes deben recibir el tratamiento antibitico o antiparasitario. Y una vez que el proceso ha
sido resuelto, y se tiene el resultado de la evaluacin podrn ser candidatos para recibir el ciclo de terapia celular. Los pacientes con infecciones crnicas como la he-

La terapia celular en la prctica mdica


patitis, tuberculosis, etc., son la excepcin. Todos los
ciclos de terapia celular son evaluados bajo el criterio
del mdico tratante y siempre bajo consentimiento del
paciente. Esto se debe a que las clulas madre pueden
ayudar en estas situaciones de infeccin crnica en la
reparacin de los daos ocasionados por los largos procesos de inflamacin. Los pacientes con infeccin por
VIH y SIDA pueden recibir el beneficio de la regeneracin del sistema inmunitario ocasionado por la transfe-

147

renciacin de clulas madre no infectadas en linfocitos


competentes, el cual generalmente puede encontrarse
daado, debilitado e incluso gravemente destruido. Cabe
sealar que estas intervenciones se encuentran todava en
sus fases experimentales aunque con muy buenos resultados. Los costos aproximados de cada sesin de terapia
celular varan de 5 000 dlares a 30 000 dlares estadounidenses dependiendo de la lnea, tipo, origen y concentracin de clulas madre de cada inyeccin o implante.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

REFERENCIAS
1. Alison M, Sarraf C: Hepatic stem cells. J Hepatol 1998;29:
678683.
2. Alison MR: Hepatocyte from nonhepatic adult stem cells.
Nature 2000;406:257260.
3. Arvidsson A, Collin T, Kirik D, Kokaia Z, Lindvall O:
Neuronal replacement from endogenous precursors in the
adult brain after stroke. Nat Med 2002;8:963970.
4. Barker JN, Wagner JE: Umbilical cord blood transplantation: current practice and future innovations. Crit Rev Oncol
Hematol 2003;48:3543.
5. Becker AJ, McCulloch EA, Till JE: Cytological demonstration of the clonal nature of spleen colonies derived from transplanted mouse marrow cells. Nature 1963;197:452454.
6. Bishop AE, Butteri LDK, Polak JM: Embrionic stem cells.
J Pathol 2002;197:424429.
7. Bjrklund A, Svendsen CN: Chimeric stem cells. Trends in
Molecular Medicine 2001;7:144146.
8. Blackburn EH, Szostak JW: Molecular structure of centromeres and telomereses. Ann Rev Biochem 1984;53:163194.
9. Block GD, Locker J, Bowen WC: Population expansion,
clonal growth and specific differentiation patterns in primary
culture of hepatocites induced by HGF/SF, EGF and TGF
in a chemically defined (HGM) medium. J Cell Biol
1996;132:11331149.
10. Bonner Weir S, Baxter LA, Schuppin GT, Smith FE: A
second pathway for regeneration of the adult exocrine and
endocrine pancreas: a possible recapitulation of embrionic
development. Diabetes 1993;42:17151720.
11. BonnerWeir S, Sharma A: Pancreatic stem cells. J Pathol
2002;197:519526.
12. BonnerWeir S, Sharma A: Pancreatic stem cells. J Pathol
2002;197:519526.
13. Bouwens L, Wang RN, De Bali E et al.: Citokeratins as
markers of ductal cell differentiation and isle neogenesis in
the neonatal rat pancreas. Diabetes 1994;43:12791283.
14. Carpenter MK, Inokuma MS, Denham J, Mujtaba T,
Chiu CP et al.: Enrichment of neurons and neural precursors
from human embryonic stem cells. Exp Neurol 2001;172:
383397.
15. Dang SM, Gerecht NS, Chen J, Itskovitz EJ, Zandstra
PW: Controlled, scalable embryonic stem cell differentiation
culture. Stem Cells 2004;22:275282.
16. Donovan PJ, Gearhart J: The end of the beginning for pluripotent stem cells. Nature 2001;414:9297.

17. Evans MJ, Kaufman MH: Establishment in culture of pluripotential stem cells from mouse embrios. Nature 1981;291:
154156.
18. Evers et al.: Stem cells in clinical practice. J Am Coll Surg
2003;197:458478.
19. Ferrari G: Muscle regeneration by bone marrowderived
myogenic progenitors. Science 1998;279:15281530.
20. Gallo R, Zazzeroni F, Alesse E: REN: a novel, developmentally regulated gene that promotes neural cell differentiation.
J Cell Biol 2002.19;158(4):731740.
21. Gepts W: Pathological anatomy of the pancreas in juvenile
diabetes. Diabetes 1965;14:619633.
22. Gertow K, Wolbank S, Rozell B et al.: Organized development from human embryonic stem cells after injection into
immunodeficient mice. Stem Cells Dev 2004;13:421435.
23. Gonzlez GM, Sosa LCA, Jurez MJL et al.: Terapia celular y aplicacin de clulas madre en la enfermedad de Parkinson (Revisin). Neurol Neurocir Psiquiat 2007;40(3):8091.
24. Guz I, Nasir I, Teitelman G: Regeneration of pancreatic
cells from intraislet precursor cells in an experimental
model of diabetes. Endocrionology 1996;142:49564968.
25. Hoffman DI, Zellman GL, Fair CC et al.: Cryopreserved
embryos in the United States and their availability for
research. Fertil Steril 2003;79:10631069.
26. Hori J, Tat Fong NG, Shatos M, Klassen H, Streilein JW
et al.: Neural progenitor cells lack immunogenicity and resist
destruction as allografts. Stem Cells 2003;21:405416.
27. Jenny M, Uhl C, Roche C, Duluc I, Guillermin V et al.:
Neurogenin3 is differentially required for endocrine cell fate
specification in the intestinal and gastric epithelium. G Embo
J 2002;21(23):63386347.
28. Koh LP, Chao NJ: Umbilical cord blood transplantation in
adults using myeloablative and nonmyeloablative preparative regimens. Biol Blood Marrow Transplant 2004;10:122.
29. Lee DH, Park S, Kim EY et al.: Enhancement of reclosure
capacity by the intraamniotic injection of human embryonic
stem cells in surgically induced spinal open neural tube
defects in chick embryos. Neurosci Lett 2004;364:98100.
30. Liechty KW, MacKenzie TC, Shaaban AF, Radu A,
Moseley AM et al.: Human mesenchymal stem cells engraft
and demonstrate sitespecific differentiation after in utero
transplantation in sheep. Nat Med 2000;6(11):12821286.
31. Lumelsky N, Blondel O, Laeng P, Velasco I, Ravin R et al.:
Differentiation of embryonic stem cells to insulinsecreting

148

32.

33.

34.

35.
36.

37.

38.

39.
40.

41.
42.

43.
44.

45.

46.

47.

48.

49.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


structures similar to pancreatic islets. Science 2001;92:
13891394.
Madrazo I, Leon V, Torres C et al.: Transplantation of
fetal substantia nigra and adrenal medulla to the caudate
nucleus in two patients with Parkinsons disease. N Engl J
Med 1988;318:51.
Martin G: Isolation of a pluripotent cell line from early
mouse embrios cultured in medium conditioned by teratocarcinoma cells. Proc Natl Acad Sci 1981;78:76347638.
Martin GR: Isolation of a pluripotent cell line from early
mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 1981;78:
76347638.
Mato MME: Clulas madre: un nuevo concepto de medicina
regenerativa. Rev Cubana Endocrinol 2004;15:18.
Mezey E, Chandross KJ: Bone marrow: a possible alternative source of cells in the adult nervous system. Eur J Pharmacol 2000;405(13):297302.
Offield MF, Jetton TL, Laboski P: PDX1 is required for
pancreatic outgrowth and differentiation of the rostral duodenum. Development 1996;122:983985.
Park S, Lee KS, Lee YJ et al.: Generation of dopaminergic
neurons in vitro from human embryonic stem cells treated
with neurotrophic factors. Neurosci Lett 2004;359:99103.
Petersen BE: Bone marrow as a potential source of hepatic
oval cells. Science 1999;284:11681170.
Potten C: Stem cells in gastrointestinal epithelium: numbers, characteristics and death. Phil Trans R Soc Lond B
1998;353:821830.
Poulsom R, Alison MR, Forbes SJ, Wright NA: Adult stem
cell plasticity. J Pathol 2002;197:441456.
Reubinoff BE, Pera MF, Fong CI, Trouson A, Bongso A:
Embrionic stem cells lines from human blastocists: somatic
differentation in vitro. Nature Biotechnol 2000;18:399404.
Reya T, Morrison SJ, Clarke MF, Weissman IL: Stem cells,
cancer, and cancer stem cells. Nature 2001;414:105111.
Shapiro AM, Lakei JR, Rian EA: Islet transplantation in
seven patients with type I diabetes mellitus using a glucocorticoidfree immunosuppressive regimen. N Engl J Med
2000;27:230238.
Sharma A, Zangen DH, Reitz P: The homeodomain protein
IDX1 increases after an early burst of proliferation during
pancreas regeneration. Diabetes 1999;48:507513.
Siminovitch L, McCulloch EA, Till JE: The distribution of
colonyforming cells among spleen colonies. J Cell Comp
Physiol 1963;62:327336.
Soria B, Roche E, Berna G, LeonQuinto T, Reig JA et al.:
Insulinsecreting cells derived from embryonic stem cells
normalize glycemia in streptozotocininduced diabetic
mice. Diabetes 2000;49(2):157162.
Soria B, Skoudy A, Martin F: From stem cells to beta cells:
new strategies in cell therapy of diabetes mellitus. Diabetes
2001;44(4):407415.
Takahashi K, Yamanaka S: Induction of pluripotent stem
cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by
defined factors. Cell 2006;126:663676.

(Captulo 5)

50. Teitelman G, Alpert S, Polak JM, Martnez A, Hanahan


D: Precursor cells of mouse endocrine pancreas copexpress
insulin, glucagon and the neuronal proteins tirosine hidroxilase and neuropeptide I but not pancreatic polipeptide. Development 1993;118:10311039.
51. Thomson JA, Itskovitz EJ, Shapiro SS et al.: Embryonic
stem cell lines derived from human blastocysts. Science
1998;282:11451147.
52. Till JE, McCulloch EA: A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells. Radiation Research 1961;14:213222.
53. Vescovi AL, Rietze R, Magli MC, Bjornson C: Hematopoietic potential of neural stem cells. Nat Med 2002;8(6):
535;author reply 536537.
54. Wagers AJ, Sherwood RI, Christensen JL, Weissman IL:
Little evidence for developmental plasticity of adult hematopoietic stem cells. Science 2002;27:22562259.
55. Wagers AJ, Sherwood RI, Christensen JL, Weissman IL:
Little evidence for developmental plasticity of adult hematopoietic stem cells. Science 2002;27:297(5590):22561159.
56. Weaver CV, Sorenson RL, Kaung HC: Immunocitochemical localization of insulinimmunoreactive cells in the ducts
of rats treated with tripsin inhibitor. Diabetologia 1985;28:
781785.
57. Xu G, Stoffers DA, Habener JF, Bonner WS: Exendin4
stimulates both Cell replication and neogenesis, resulting
in increased Cell mass and improved glucose tolerance in
diabetic rats. Diabetes 1999;48:49094918.
58. Ying QL, Nichols J, Evans EP, Smith AG: Changing
potency by spontaneous fusion. Nature 2002;4:416.
59. Zulewski H, Abraham EJ, Gerlach MJU: Multipotential
nestinpositive stem cells isolated from adult pancreatic islets
differentiate ex vivo into pancreatic endocrine, exocrine and
hepatic phenotypes. Diabetes 2001;50:521533.
60. Orlic D, Kajstura J, Climenti S, Limana F, Jakoniuk I,
Quaini F, Nadal GB, Bodine DM, Leri A, Piero A: Mobilized bone marrow cells repair the infracted Herat, improving
function and survival. PNAS 2001;98(18):1034410349.
61. Werner N, Kosiol S, Schiegl T, Ahlers P, Walenta K, Link
A, Bohm M, Nickenig G: Circulating endothelial progenitor
cells and cardiovascular outcomes. N Engl J Med 2005;
353(10):9991007.
62. Krause DS, Theise ND, Collector MI, Henegariu O,
Hwang S et al.: Multiorgan, multilineage engraftment by
a single bone marrowderived stem cell. Cell 2001;105:
369377.
63. Eglitis MA, Mezey VA: Hematopoietic cells differentiate
into both microglia and macroglia in the brains of adult mice.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997;94:40804085.
64. Camargo FD, Green R, Capetenaki Y, Jackson KA,
Goodel MA: Single hematopoietic stem cells generate skeletal muscle through myeloid intermediates. Nature 2003;
9(12):15201527.
65. Ianus A, Holz GG, Theise ND, Hussain MA: In vivo derivation of glucosecompetent cells from bone marrow without
evidence of cell fusion. J Clin Invest 2003;111:843850.

Captulo

Terapia celular y bioingeniera de tejidos

INTRODUCCIN

isqumicos la MEC se encuentra alterada y las clulas madre implantadas pueden encontrar problemas para adaptarse e integrarse al tejido. El colgeno tipo I, responsable del soporte estructural,
disminuye desde 80% hasta casi la mitad, mientras que el colgeno tipo III aumenta de 10 a 35%;
este desequilibrio entre la proporcin fisiolgica
del tejido contribuye a generar un estado disfuncional con complicaciones potencialmente fatales, como arritmias ventriculares.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

El tejido conectivo se origina del mesodermo, consta de


clulas y matriz extracelular (MEC) compuesta por sustancia fundamental en estado de sol o gel. Las clulas
principales del tejido conectivo son los fibroblastos. La
estructura general del tejido conectivo presenta una red
dispersa de clulas de sostn que producen la MEC, un
entramado organizado y abundante de protenas fibrilares organizadas en un gel hidratado de glucosaminoglicanos (GAG).
Con la ingeniera de tejidos y la terapia celular con
clulas madre se pueden aislar clulas autlogas de un
paciente para hacerlas crecer en ambientes controlados
de cultivo, para regenerar el sitio afectado. Son terapias
avanzadas que ofrecen esperanza de salud, vida y seguridad a los pacientes. La ingeniera de tejidos tiene dos
estrategias fundamentales:

TERAPIA CELULAR CON CLULAS


MADRE. MEDICINA DEL SIGLO XXI
Las clulas madre tambin se conocen como clulas
troncales o clulas progenitoras (del ingls stem cells,
clula tronco). El estudio de las clulas madre con
aplicacin o fines teraputicos cientficos (bioingeniera de tejidos) se inici a principios de la dcada de
1970, cuando Till McCulloch y ms tarde Becker y col.
observaron cmo las clulas simples de mdula sea
podan generar todos los tipos de clulas hematopoyticas in vivo. La terapia celular con clulas madre es la
mejor terapia de la medicina regenerativa y antienvejecimiento y est fundamentada en las ciencias biomdicas. Mdicos altamente capacitados, con tres posgrados
en ciencias, preparan diferentes lneas celulares con
clulas madre para ser trasplantadas por va intravenosa
e intramuscular, con la finalidad de tratar enfermedades
incurables como Alzheimer, Parkinson, esclerosis mltiple, vitligo, diabetes mellitus, infartos, artropatas,
hernias discales, defectos del nacimiento y del desarro-

1. La generacin in vivo y el reclutamiento de clulas


que pueden sustituir la infraestructura daada
(MEC) en el rea lesionada. Con esta estrategia, la
terapia celular se aplica directamente en el sitio lesionado, permitiendo que las clulas madre se integren al sitio daado y que adems recluten clulas endgenas que colaboren en la regeneracin.
2. La ingeniera in vitro de tejido en placas de cultivo
mediante clulas sembradas obtenidas por biopsia
del paciente y que posteriormente sern trasplantadas para regenerar el sitio lesionado. La cardiomioplastia celular pretende regenerar el miocardio mediante terapia celular, pero en corazones
149

150

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

llo, y enfermedades relacionadas con el envejecimiento,


entre otras. La medicina regenerativa se basa en la aplicacin de las clulas madre y su capacidad de convertirse en clulas de diferentes tejidos. Las clulas madre
se clasifican en embrionarias y somticas o adultas. Durante varios aos se consider que la clula madre hematopoytica era la nica clula en la mdula sea con
capacidad generativa. Sin embargo, los estudios recientes han mostrado que la composicin de la mdula sea
es ms compleja, pues en ella se ha identificado un grupo
heterogneo de clulas madre adultas entre las que estn
las hematopoyticas, las mesenquimatosas (estromales),
poblacin lateral, clulas progenitoras adultas multipotentes (MAPC). Varios estudios han indicado que la potencialidad de algunos tipos de clulas madre adultas es
mayor que lo esperado, pues en determinadas condiciones han mostrado capacidad para diferenciarse en clulas de diferentes linajes, lo cual las acerca a la potencialidad de las clulas embrionarias. Esto ha creado nuevas
perspectivas para el tratamiento de diferentes enfermedades con clulas madre adultas, lo que al inicio se pensaba que slo poda hacerse con las embrionarias. La
terapia celular, la aplicacin de elementos subcelulares
y la ingeniera de tejidos forman parte de la medicina
regenerativa para reemplazar por clulas sanas a las
clulas daadas por diversos procesos en determinados
tejidos.
De manera natural, los tejidos del cuerpo a lo largo
de la vida sufren un desgaste, del que se defienden desarrollando la capacidad intrnseca de autorrenovacin de
los tejidos que se desgastan. Si no existiera esta renovacin, la esperanza de vida de los seres vivos se reducira
considerablemente.
Por otro lado, una gran parte del amplio elenco de las
enfermedades que afectan al ser humano se basa en la
degeneracin y muerte de los distintos tejidos que conforman el cuerpo, sea de manera aguda (infartos) o crnica (degeneracin y envejecimiento).
El avance de la medicina ha desarrollado tcnicas
que consiguen reparar los tejidos: los trasplantes. La introduccin de los trasplantes en la medicina moderna ha
supuesto una revolucin que algunos han comparado
con el descubrimiento de la penicilina.
El tratamiento con clulas madre puede beneficiar a
algunos pacientes con ciertos padecimientos como trastornos cardiovasculares, enfermedades autoinmunitarias, degenerativas y metablicas, y lesiones del sistema
nervioso central por trauma o del sistema vascular.
La mayora de los tratamientos de terapia celular a nivel mundial ofrecen xenotrasplantes de clulas que no
son humanas, sino que provienen de tejidos de animales
jvenes.

(Captulo 6)

Cuadro 61. Enfermedades que pueden


ser tratadas, de acuerdo con la experiencia
de la SICETEM, S. C.
Infarto del miocardio
Antienvejecimiento, menopausia, andropausia, estrs,
ansiedad, etc.
Diabetes mellitus tipos 1 y 2, hipotiroidismo, obesidad,
colesterol y triglicridos altos
Secuelas neurolgicas por diversos eventos vasculares
cerebrales, hipxicos, isqumicos y hemorrgicos, e
infecciosos
Enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer,
demencia, esquizofrenia, lesiones raquimedulares, etc.
Vitligo, alopecia, alergias crnicas, asma, esclerodermia,
esclerosis mltiple y lupus eritematoso sistmico
Sndrome de Down, sndrome de Turner, autismo, deficiencia mental, parlisis cerebral, etc.
Artrosis, osteoartritis, artritis reumatoide, fibromialgia reumtica, hernias discales y parlisis faciales por puntos
Cncer, tumores benignos, defectos del nacimiento, etc.

Despus de muchos aos de investigacin clnica en


ms de 1 000 pacientes, los doctores Gerardo M. Gonzlez, Javier Snchez Gonzlez y Carlos Sosa Luna desarrollaron en Mxico una terapia con clulas madre
(stem cell) de origen humano.
Dicha terapia se est aplicando exitosamente en trasplantes alognicos, con la ventaja de que no son costosos y no requieren hospitalizacin ni procedimientos de
radiologa intervencionista o quirrgicos que pongan en
peligro la vida del paciente.
La nueva terapia celular con clulas madre de origen
humano ofrece esperanza y seguridad a los pacientes,
fundamentadas en las ciencias biomdicas.
Los mdicos investigadores preparan lneas celulares con clulas madre humanas para ser trasplantadas
alognicamente por va intravenosa e intramuscular,
con el fin de tratar algunos padecimientos (cuadro 61).

Potencialidad celular
La clasificacin ms comn de las clulas troncales se
fundamenta en la potencialidad que tienen para originar
clulas de diferentes estirpes, lo cual est relacionado
con el grado de diferenciacin de las clulas troncales.
Segn lo anterior existen clulas troncales totipotenciales, clulas troncales pluripotenciales, clulas troncales
multipotenciales y clulas troncales de tejidos especficos. La potencialidad representa la capacidad y las posibilidades de diferenciacin de las clulas y se manifiesta
en el mbito natural de acuerdo con el orden jerrquico

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


de su desarrollo. De acuerdo con su potencial de diferenciacin, las clulas madre se han clasificado en totipotentes, pluripotentes y multipotentes.
Las clulas madre totipotentes son aqullas que en
condiciones apropiadas son capaces de formar un individuo completo, pues pueden producir tejido embrionario y extraembrionario. As, en el ciclo evolutivo posfecundacin, el cigoto u vulo fertilizado se considera una
clula totipotente, capaz de dar origen a todo el organismo. Igual sucede con la etapa siguiente de mrula, en
que todas las clulas son totipotentes. En el ratn se
plantea que la totipotencia slo persiste hasta el estadio
evolutivo de ocho clulas.
Las clulas madre pluripotentes son las que tienen la
habilidad de diferenciarse a tejidos procedentes de cualquiera de las tres capas germinales embrionarias. Aunque estas clulas por s solas no pueden producir un individuo porque necesitan el trofoblasto, s originan
todos los tipos de clulas y tejidos del organismo. En
esta categora estaran las clulas provenientes de la
masa celular interna del blastocisto.
En la categora siguiente estaran las clulas madre
multipotentes, que pueden diferenciarse en distintos
tipos celulares procedentes de la misma capa embrionaria, lo que las capacitara para la formacin de tipos celulares diferentes, pero no de todos. Tradicionalmente,
las clulas madre adultas se haban ubicado en esta etapa de la evolucin celular. Sin embargo, en los ltimos
aos se ha hecho evidente que la potencialidad de algunos tipos de clulas madre adultas es mayor que la que
habitualmente se les confera, pues se evidenci que podan diferenciarse en tejidos derivados de cualquiera de
las capas embrionarias, sealndose como el caso ms
tpico el de las clulas madre hematopoyticas. Este fenmeno ha sido calificado como versatilidad de las clulas madre adultas, tomando en cuenta la flexibilidad que
tienen algunas de ellas para formar clulas especializadas de otros linajes. Para esto se ha planteado que cuando
su entorno natural es sustituido por otro, cambian su programa de diferenciacin de acuerdo con las nuevas seales de diferenciacin que reciben, por lo que se les ha
asignado capacidad pluripotencial, y en este sentido se
asemejaran a las clulas madre embrionarias.
Estos hechos contradicen el dogma clsico en biologa celular de la capacidad diferenciativa limitada de las
clulas madre adultas. El cambio del programa de diferenciacin podra estar relacionado con variaciones en
las seales internas y externas que recibiran las clulas
en las interacciones que tendran con todos los elementos constitutivos del nuevo microambiente, hbitat o
nicho en que se situaran en el organismo. Entre esos
elementos podran considerarse, entre otros factores:

151

protenas promotoras e inhibidoras del ciclo celular,


factores secretados por las clulas vecinas, interacciones intercelulares y con la matriz extracelular del tejido
mediante protenas de membrana. Recientemente se ha
propuesto una interesante explicacin para estos cambios basada en las modificaciones que podran suceder
en diferentes fases del ciclo celular, en la modulacin de
la cromatina y en la variacin de los receptores de la
membrana celular.
En el orden jerrquico inferior se situaran las clulas
unipotentes, que son aqullas que slo se pueden diferenciar en un tipo celular, y que en algunos trabajos han
sido calificadas como clulas en trnsito, clulas progenitoras comprometidas o clulas precursoras.
Finalmente estn las clulas diferenciadas, las que
han alcanzado su plena maduracin y una actividad funcional especfica.

Ventajas y desventajas de las clulas


madre embrionarias y adultas
Las clulas troncales se caracterizan por ser indiferenciadas, tener capacidad de autorrenovacin y, ante determinadas seales, an poco conocidas, especializarse
para realizar una funcin concreta. Gran parte de los
estudios se han realizado en ratones e indican que en las
primeras etapas del desarrollo embrionario surge este
tipo de clulas que al diferenciarse forman un gran nmero de estirpes celulares que constituyen los tejidos
del embrin.
Las clulas troncales, tambin llamadas clulas madre, se clasifican en dos grandes grupos: troncales embrionarias y troncales adultas (de origen somtico). La
diferencia principal entre ambos grupos radica en el
grado de indiferenciacin o potencialidad que conservan para originar diferentes tipos celulares. Las clulas
troncales embrionarias pueden dar origen a clulas de
todos los tejidos del animal. De acuerdo con su grado de
indiferenciacin o potencialidad para originar diferentes clulas, se clasifican en: totipotenciales, pluripotenciales, multipotenciales y progenitoras de tejido. Las
dos primeras slo se encuentran en el embrin; las dos
ltimas, en el organismo adulto.
La identificacin de clulas troncales en diferentes
tejidos del cuerpo adulto y el hecho de que generan clulas troncales del embrin humano han despertado un
enorme inters entre los cientficos, principalmente por
las posibles aplicaciones teraputicas que aqullas pueden tener, por ejemplo, produccin de rganos completos para sustituir rganos afectados, como el rin y el
corazn, evitando as la bsqueda de donantes o la rege-

152

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

vulo fertilizado Blastocisto


(1 da)
(5 a 6 das)

Gstrula
(14 a 16 das)
Masa interna
de clulas

(Captulo 6)

Hgado
Lesin o
enfermedad

Clulas madre
endgenas
(clulas ovales)

Piel

2
1

Lesin
3

Masa externa
de clulas
Hepatocitos
Endodermo
(capa interna)
Pncreas
Hgado
Tiroides
Pulmn
Vejiga
Uretra

Mesodermo
(capa media)
Mdula sea
Msculo
esqueltico, liso
y cardiaco
Corazn y vasos
sanguneos

Ectodermo
(capa externa)
Piel
Neuronas
Glndula
pituitaria
Ojos
Odo

Clulas madre (troncales)

(exgeno)
Terapia celular
con clulas madre
Clulas madre
endgenas
(clulas de la cripta)

Lesin o
enfermedad
Factores de
crecimiento y
diferenciacin

Tubo digestivo

Esquema de regeneracin orgnica total

Figura 61. Los mdicos especializados de la SITECEM preparan clulas madre (troncales), que son clulas inmaduras del
cuerpo que actan como una masa iniciadora, debido a que pueden hacer copias idnticas de s mismas. Esto mantiene una
provisin constante de clulas iniciadoras listas para madurar dentro de varias capas distintas interna, media o externa de
tejido en respuesta a las necesidades del cuerpo. Se inyectan de acuerdo con la historia clnica y el diagnstico establecido del
paciente.

neracin de clulas en tejidos, y para aplicar terapias en


enfermedades neurodegenerativas, como la de Alzheimer y la de Parkinson, entre otras. Entre las aplicaciones
de las clulas troncales se observa la creacin de animales transgnicos, como ratones, ratas, cerdos y primates,
pues ellos constituyen una herramienta novedosa para
producir modelos animales donde existen las alteraciones genticas de enfermedades del hombre, que permiten seguir la manifestacin equivalente de signos y sntomas, facilitando el hecho de probar tratamientos para
desarrollar terapias ms efectivas.
Otro aspecto de las clulas troncales es su utilizacin
en la medicina veterinaria para implementar tecnologas
innovadoras en la crianza y manipulacin gentica de
animales domsticos.
Sin embargo, a pesar del potencial de este tipo de clulas, se han generado grandes controversias en relacin
con su investigacin y uso, lo cual ha ocasionado una
enorme confusin en cuanto a la informacin que se tiene sobre ellas y sus logros.
Recientemente se han descubierto las propiedades
pluripotenciales de algunos tipos de clulas madre adultas, lo que ha creado grandes perspectivas teraputicas
por su aplicacin autloga en la regeneracin de tejidos.
Por otra parte, se ha tratado de contraponer sus indicaciones con las de las clulas madre embrionarias, pero
todava es prematuro para definir la superioridad de
unas sobre las otras. Por el momento, ambos tipos de c-

lulas madre tienen ventajas y desventajas que quiz podran modificarse en el futuro.
Entre las ventajas de las clulas madre embrionarias
humanas est que pueden formar cualquier tipo de tejido y mantenerse indefinidamente en cultivo (figura
61). En su contra tendran los problemas ticos que
provienen de la necesidad de extraerlas de su medio natural, que es un embrin en desarrollo, lo que equivaldra
a la interrupcin de la vida de un nuevo ser ya en proceso
de formacin. Adems, su procedencia alognica es en la
actualidad una limitante relativa que puede controlarse
debido a la inmunobiologa tan peculiar de estas clulas.
Tambin se pueden utilizar clulas embrionarias provenientes del propio paciente, lo que equivaldra a un autotrasplante sin los problemas del rechazo que se presenta
con el trasplante de clulas alognicas.
Una opcin prometedora consiste en el mtodo de
transferencia de un ncleo de clula somtica del propio
paciente a un vulo desnucleado, con lo que se crea un
embrin derivado de una clula somtica (embrin artificial), el cual se lleva hasta la fase de blastocisto para la
obtencin de las clulas embrionarias que se utilizaran
en el enfermo y que tendran las caractersticas de clulas
autlogas.
Este procedimiento se denomina clonacin teraputica, que ya ha sido aceptado por gran parte de la comunidad cientfica, mientras que se mantiene la oposicin a la
clonacin con fines reproductivos (figura 62).

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


Otra desventaja es la incertidumbre sobre las condiciones necesarias para la diferenciacin hacia lneas celulares especficas, aunque se espera que en este campo
pueda avanzarse con rapidez a medida que se vayan incrementando los conocimientos que las investigaciones
actuales y perspectivas podran proporcionar. Una desventaja adicional es su potencialidad teratognica latente.
En cuanto a las ventajas de las clulas madre adultas,
se plantea que dada su procedencia autloga, no producen trastornos inmunitarios ni presentan problemas ticos. Pueden ser de diferentes tipos y obtenerse de distintas fuentes; algunas tienen un amplio potencial de
autorrenovacin y posibilidades de modificar su diferenciacin y utilizacin para la transferencia gnica.
Entre las desventajas se cree que la mayor parte de estas
clulas tienen una autorrenovacin limitada y una manipulacin en laboratorio compleja y costosa. Sin embargo, los resultados obtenidos en algunos ensayos clnicos
con clulas madre adultas de la mdula sea han abierto
la posibilidad de un mtodo de obtencin ms accesible.
Las clulas madre tienen la capacidad de dividirse
por periodos indefinidos en cultivos y dar lugar a las clulas especializadas. Se describen lo mejor posible en el
contexto del desarrollo humano normal.
El desarrollo humano comienza cuando un espermatozoide fertiliza un huevo y crea una clula que tenga el
potencial de formar un organismo entero. Este huevo
fertilizado es totipotente, lo que significa que su potencial es total. En las primeras horas despus de la fertili-

Ncleo

Clula
adulta

153

zacin, esta clula se divide en clulas totipotentes idnticas; esto significa que si cualquiera de estas clulas es
colocada en el tero de una mujer, tiene el potencial de
convertirse en feto. De hecho, los gemelos idnticos se
desarrollan cuando dos clulas totipotentes se separan y
se convierten en dos individuos genticamente idnticos. Unos cuatro das despus de la fertilizacin y despus de varios ciclos de la divisin celular, estas clulas
totipotentes comienzan a especializarse, formando una
esfera hueca de clulas llamada blastocisto. El blastocisto tiene una capa externa de clulas y en su interior
hay un racimo de clulas internas llamadas masa celular
interna.
La capa externa de clulas continuar formando la
placenta y otros tejidos necesarios para el desarrollo fetal en el tero. Las clulas de la masa celular interna seguirn desarrollndose y formando todos los tejidos del
cuerpo humano. Aun cuando estas clulas pueden formar cada tipo de clula encontrado en el cuerpo humano, no pueden formar un organismo, porque no pueden
formar tejidos extraembrionarios ni la placenta. Las clulas de la masa celular interna son pluripotentes; pueden dar lugar a muchos tipos de clulas, aunque no todos
los tipos de clulas necesarias para el desarrollo fetal
porque su potencial no es total. Las clulas madre pluripotentes experimentan una especializacin adicional en
las clulas madre que darn lugar a las clulas que tienen una funcin determinada. Estas clulas madre especializadas se llaman multipotentes y tambin se encuentran en nios y adultos.

Citoplasma

Fines
1. Investigacin
2. Tratamiento

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Embrioblasto
(masa celular
interna)

Clulas
madre
embrionarias

Fusin

Embrin
Mrula

Blastocisto
Reproduccin
Obtencin de un
individuo
B
genticamente
igual al donante
del ncleo celular

vulo

Citoplasma

Ncleo

Figura 62. Aplicaciones de la clonacin de embriones humanos. A. Clonacin teraputica (permitida). B. Clonacin reproductiva
(prohibida).

154

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Actualmente, las lneas de las clulas pluripotentes


humanas se han desarrollado a partir de dos fuentes de
forma experimental en modelos animales:
1. En el trabajo hecho por el Dr. Thomson, las clulas
madre pluripotentes fueron aisladas directamente
de la masa celular interna de embriones humanos
en etapa de blastocisto. El Dr. Thomson utiliz
embriones excedentes obtenidos por fertilizacin
in vitro (FIV) de clnicas de infertilidad. Los
embriones fueron desarrollados para propsitos
de reproduccin, no de investigacin. Se obtuvo el
consentimiento de las donantes. El Dr. Thomson
aisl clulas de la masa celular interna y las cultiv, produciendo una lnea celular pluripotente.
2. El Dr. Gearhart aisl las clulas madre pluripotentes
del tejido fetal obtenido de embarazos terminados.
Se obtuvo el consentimiento de las donantes despus de que hubieron tomado de manera independiente la decisin de terminar su embarazo. Aunque las clulas desarrolladas en el laboratorio del
Dr. Gearhart y en el laboratorio del Dr. Thomson se
obtuvieron de diversas fuentes, son muy similares.
El uso de la transferencia nuclear de la clula somtica
(SCNT) puede ser otra fuente de obtencin de clulas
madre pluripotentes. En estudios con animales usando
SCNT, a un ovocito se le extrae el ncleo, luego se asla
una clula somtica, otro cigoto o un espermatozoide,
y se fusiona con el cigoto enucleado. La clula fundida
resultante y sus descendientes son totipotentes hasta la
etapa de mrula. Las clulas de la masa celular interna
de este blastocisto se pueden utilizar para desarrollar
lneas celulares pluripotentes.

APLICACIONES DE LAS CLULAS


MADRE PLURIPOTENTES
Y MULTIPOTENTES

Las clulas madre pluripotentes, estimuladas para convertirse en clulas especializadas, ofrecen la posibilidad
de una fuente renovable de clulas y tejidos para tratar
enfermedades neurodegenerativas como Parkinson y
Alzheimer, lesin de la mdula espinal, quemaduras,
enfermedad cardiaca, diabetes, osteoartritis y artritis
reumatoide. El trasplante de clulas madre sanas al
msculo del corazn proporciona una nueva esperanza
para los pacientes con enfermedad cardiaca crnica.

(Captulo 6)

Trabajos preliminares en ratones y otros animales han


demostrado que las clulas madre sanas trasplantadas
en el corazn trabajan con xito en el tejido del corazn
junto con las clulas husped. En la diabetes, la produccin de insulina por las clulas pancreticas especializadas se interrumpe. Existe evidencia de que la terapia
celular atena la necesidad de inyecciones de insulina
y de hipoglucemiantes.
Las clulas madre o troncales tienen el potencial de
curar muchas enfermedades humanas porque:
S Son como clulas en blanco, con el potencial de
convertirse en cualquier tipo de clula del cuerpo
humano.
S Perduran; los embriones, en particular, pueden
proveer una cantidad ilimitada de clulas madre.
S Son regenerativas, pudiendo ser usadas como una
fuente viva para la autorreparacin.
Sabemos que nuestro cuerpo est formado de clulas de
diferentes tipos (clulas de la sangre, clulas de la piel,
clulas cervicales). Sin embargo, a menudo nos olvidamos de que todos estos tipos diferentes de clulas surgieron de una sola clula, el huevo fertilizado. Los bilogos del desarrollo estudian los extraordinarios
eventos que ocurren entre el momento de la fertilizacin
del huevo y la formacin de un nuevo individuo.
S Los primeros pasos simplemente involucran a la
divisin celular: una clula se convierte en dos
clulas, dos clulas en cuatro clulas, etc.
S Cada una de estas clulas individuales en el desarrollo temprano no est especializada (diferenciada), es decir, no posee an una funcin especfica
en el organismo, aunque tiene la capacidad de contribuir a la formacin de los rganos de un individuo. As, se la conoce como totipotente.
S Estas clulas se llaman clulas madre embrionarias y tienen tanto la capacidad de autorrenovarse,
manteniendo as un suministro continuo de clulas madre, como tambin la habilidad de dar origen a clulas especializadas (diferenciadas), como
las clulas del hgado o del cerebro.
S Se cree que una vez que se diferencian, las clulas
permanecen en este nuevo estado, por lo general
perdiendo su habilidad para dividirse.
En los adultos tambin existen clulas madre y permiten
que ciertos tejidos se regeneren durante la vida. Tambin tienen la capacidad de autorrenovarse y diferenciarse en linajes mltiples. De hecho, la lista que identifica las clulas madre en adultos y las lneas especficas

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


de clulas progenitoras (con habilidades limitadas de
autorrenovacin) est aumentando.
El uso clnico principal de las clulas madre es como
una fuente de clulas donantes, las cuales se usan en el
reemplazo de clulas durante las terapias de trasplante.
Las clulas madre pueden obtenerse de varias fuentes:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

S Embriones de repuesto: las clulas madre pueden provenir de embriones extra que han sido almacenados en clnicas de fertilidad y que no fueron utilizados por las parejas donantes para la
concepcin de hijos.
S Embriones de propsito especial: son embriones creados por medio de fertilizacin artificial in
vitro (en el laboratorio) con el propsito especfico de obtener clulas madre.
S Embriones clonados: son embriones clonados en
laboratorios por medio del mtodo de transferencia somtica nuclear, con el fin de recolectar sus
clulas madre.
S Fetos abortados: los fetos de desarrollo temprano que han sido abortados contienen clulas madre, las cuales pueden ser recolectadas.
S Cordones umbilicales: este tejido posparto posee
potencial para la investigacin.
S Tejidos u rganos adultos: se pueden obtener clulas madre de tejidos u rganos provenientes de
adultos vivos durante la ciruga.
S Cadveres: el aislamiento y supervivencia de clulas progenitoras neurales de tejidos post mortem
(hasta 20 h despus de la muerte) ha sido reportado
y proporciona una fuente adicional de clulas
madre humanas.
Las clulas madre embrionarias deben obtenerse cuando el embrin se encuentre en un estado temprano de su
desarrollo, es decir, cuando el huevo fertilizado se haya
dividido hasta formar unas 100 clulas. stas se separan
y se mantienen en un envase de cultivo celular, detenindose as el desarrollo embrionario que lleva a la
creacin de un individuo. Es por esto que la investigacin en clulas madre embrionarias es el tpico de debates ticos. El uso de clulas madre de adultos ocasiona
menos dilemas ticos. Sin embargo, las clulas madre
de adultos pueden no tener el mismo potencial para usos
mdicos teraputicos que las obtenidas de los embriones.
Los blastocistos se obtienen haciendo lavados del
tero con DPBS o con algn medio de cultivo adicionado con 10 o 16% de suero fetal bovino. Despus, los
blastocistos intactos se cultivan sobre clulas nodrizas
que secreten LIF. A los 4 o 5 das los blastocistos se
adhieren y las clulas del ambrioblasto crecen forman-

155

do colonias redondas y compactas, las cuales son aisladas y disgregadas con tripsina, para sembrarlas sobre
clulas nodrizas nuevas; Despus de 3 o 4 das nuevamente se buscan las colonias redondas compactas y se
realizan los subcultivos.
Para obtener slo las clulas del embrioblasto se utiliza la tcnica de inmunociruga, que consiste en la
destruccin mediada por el complemento de las clulas
del trofoblasto, mediante un anticuerpo que se une a dichas clulas; as, el embrioblasto puede ser separado fcilmente de los remanentes de las clulas trofoblsticas;
despus se colocan las clulas sobre clulas nodrizas.
Entre 9 y 15 das ms tarde se forman colonias esfricas
y compactas que pueden ser aisladas y disociadas para
la realizacin de subcultivos.

Caractersticas in vitro
de las clulas madre embrionarias
Durante el crecimiento de las clulas troncales embrionarias se realizan diferentes pruebas para conocer si efectivamente son clulas troncales embrionarias indiferenciadas; este proceso se denomina caracterizacin. Las
pruebas ms utilizadas en los laboratorios donde se cultivan lneas de clulas madre embrionarias son:
1. Crecimiento y subcultivo. Consiste en la realizacin de varios pases de propagacin para verificar que las clulas sigan manteniendo las caractersticas morfolgicas de colonias troncales
embrionarias indiferenciadas; es decir, que continen desarrollando colonias de clulas esfricas y
compactas por encima de las clulas nodrizas. En
un principio se pensaba que era indispensable
hacer crecer las clulas troncales embrionarias
junto con clulas nodrizas, para evitar que las primeras se diferenciaran; posteriormente se descubri que la mayora de las clulas troncales requieren un factor producido por las clulas
nodrizas, sin el cual se diferencian; este factor es
una citocina llamada LIF y su expresin es estimulada por las clulas troncales. Desde entonces,
las clulas troncales pueden cultivarse en ausencia
de clulas nodrizas, agregando LIF o citocinas, relacionadas como bFGF, SF y SCF; en algunas especies se han obtenido lneas de clulas troncales
que pueden mantenerse indiferenciadas sin necesidad de LIF.
2. Marcadores moleculares. Existen diversos marcadores moleculares para identificar a las clulas
troncales; entre los ms importantes se encuentran:

156

3.

4.

5.

6.

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa


a. Marcadores de superficie. Son protenas especializadas o azcares localizados en el nivel de
la membrana citoplasmtica. De estas molculas de superficie la ms utilizada para deteccin
es la SSEA1, o CD 15, FAl o trisaccharide
3fucosylNacetyllactosamine.
b. Factores de transcripcin. Son protenas que se
unen al DNA y ayudan en el encendido y apagado de genes especficos, como la protena
Oct4 (factor de transcripicin de la familia
POU), que se expresa en lneas celulares totipotenciales y pluripotenciales en clulas embrionarias tempranas y en algunas lneas de clulas
germinales.
Enzimas citoplasmticas. Una prueba de rutina
consiste en detectar la presencia de la enzima fosfatasa alcalina, que se expresa en grandes cantidades
en las clulas troncales embrionarias que permanecen en un estado indiferenciado.
Pruebas de cariotipo. Mediante esta prueba se
determina si los cromosomas son normales y estables. Este mtodo permite apreciar si los cromosomas estn daados o si el nmero de cromosomas
ha cambiado, aunque con esta tcnica no se pueden
detectar mutaciones genticas finas; es decir, en la
secuencia de DNA.
Diferenciacin. Se realizan ensayos para obtener
estirpes celulares que provengan de las tres hojas
germinales: ectodermo, endodermo y mesodermo.
Estos ensayos muestran la pluripotencialidad.
Formacin de cuerpos embrioides. Las clulas
troncales se cultivan en medio de cultivo lquido,
en ausencia de clulas nodrizas y sin factores que
las mantengan indiferenciadas, con la finalidad de
que formen agregados celulares denominados
cuerpos embrioides. Estas estructuras tienen clulas multidiferenciadas que siguen rutas similares
a las del embrin, pero sin la organizacin axial ni
la elaboracin de un plan de desarrollo corporal.
Asimismo, si se les adiciona cido retinoico, los
agregados celulares pueden propiciar cierto tipo de
clulas, aunque invariablemente darn origen a una
mezcla heterognea de clulas.

Clulas madre embrionarias y adultas


Las clulas madre embrionarias tienen ventajas y desventajas para uso teraputico, las cuales se mencionan
a continuacin:

(Captulo 6)

Ventajas
S Flexibles: tienen el potencial de formar cualquier
clula del cuerpo.
S Inmortales: un linaje celular puede potencialmente suministrar una cantidad infinita de clulas
con caractersticas definidas con cuidado.
S Fcilmente obtenibles: los embriones humanos
pueden obtenerse en las clnicas de fertilidad.
Desventajas
S Difciles de controlar: el mtodo para inducir al
tipo de clula a tratar una enfermedad en particular
debe ser definido y optimizado.
S Entrar en conflicto con el sistema inmunitario
del paciente: es posible que las clulas trasplantadas difieran en su perfil inmunitario de las del receptor y que sean entonces rechazadas.
S Ser ticamente controversiales: las personas
que creen que la vida comienza en el momento de
la concepcin dicen que el llevar a cabo investigaciones en embriones humanos no es tico aunque
el donante otorgue su consentimiento.
Las clulas madre adultas tambin poseen caractersticas
tanto adecuadas como difciles para el uso teraputico.
Ventajas
S Ya estn ms o menos especializadas: la induccin puede ser ms sencilla.
S Son inmunolgicamente resistentes: los receptores de los productos de sus propias clulas madre no sufren rechazo inmunitario.
S Son flexibles: las clulas madre adultas pueden
ser usadas para formar otros tipos de tejido.
S Tienen una disponibilidad variada: algunas clulas madre adultas son fciles de cosechar, mientras que cosechar otras, como por ejemplo, las clulas madre neurales (del cerebro), podra ser
peligroso para el donante.
Desventajas
S Estar disponibles en cantidades mnimas: es difcil obtenerlas en grandes cantidades.
S Finitas: no viven tanto tiempo bajo cultivo como
las clulas madre embrionarias.
S Genticamente inadecuadas: las clulas madre
cosechadas pueden llevar consigo mutaciones que
causan enfermedades o que pueden daarse durante la experimentacin.

Terapia celular y bioingeniera de tejidos

Transdiferenciacin de
las clulas madre adultas
Se cree que las clulas madre adultas estn restringidas
a producir clulas diferenciadas, especficas a los rganos de los cuales fueron aisladas. Recientemente han
sido reportados varios ejemplos en los cuales se demuestra que estas clulas madre, bajo ciertas condiciones, pueden ser inducidas a producir otros tipos de clulas (transdiferenciacin), por ejemplo:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

S Las clulas neurales madre (NSC, por sus siglas en


ingls) pueden dar origen a clulas de la sangre y
de msculo esqueltico.
S Las clulas de la mdula sea pueden dar origen
a msculo, a clulas del hgado y a astrocitos.
Cuando las NSC se utilizaron para formar msculo, no
se necesitaron ms inductores que el haberlas cultivado
con clulas de msculo progenitoras (mioblastos) o haberlas inyectado directamente al msculo. Estos resultados son prometedores para las terapias de trasplante
de clulas, debido a que los experimentos sugieren que
los tejidos receptores pueden instruir a las clulas trasplantadas y conseguir el resultado deseado. De esta manera los cientficos pueden considerar si es mejor para
las clulas madre ser diferenciadas in vitro (artificialmente) antes del trasplante o trasplantarlas directamente a los tejidos defectuosos. Algunos experimentos han
mostrado que las clulas madre trasplantadas naturalmente fueron capaces de migrar a regiones donde las clulas haban muerto debido a un derrame cerebral (por
un proceso llamado isquemia).
Las clulas madre ofrecen la oportunidad de trasplantar una fuente viva para la autorregeneracin. Los
trasplantes de mdula de los huesos (BMT, por sus siglas en ingls) son una reconocida aplicacin clnica del
trasplante de clulas madre. Los BMT pueden repoblar
la mdula sea y restaurar todos los tipos de clulas de
la sangre despus de que un paciente ha recibido elevadas dosis de quimioterapia o radioterapia, las cuales se
usan como tratamiento principal para eliminar las clulas
endgenas cancerosas. El aislamiento de clulas madre
y clulas progenitoras adicionales se est desarrollando
ahora para apoyar a muchas otras aplicaciones clnicas,
algunas de las cuales se describen a continuacin.
El conocimiento de las clulas madre ha hecho posible que los cientficos puedan hacer crecer nueva piel a
partir de cabellos removidos de la cabeza del paciente.
Las clulas madre de la piel (llamadas queratinocitos)
residen en los folculos del cabello y pueden ser removi-

157

das al arrancar el pelo con la raz. Estas clulas pueden


cultivarse para formar un equivalente epidrmico de la
piel de los pacientes y proveer tejido para un injerto
autlogo, eliminando el problema del rechazo. En la actualidad, este mtodo est siendo estudiado en pruebas
clnicas como alternativa a los injertos quirrgicos usados en los casos de lceras venosas y vctimas de quemaduras.
Las clulas madre neurales eran consideradas hasta
hace poco como estrictamente embrionarias. Numerosos
descubrimientos han comprobado que esto es incorrecto.
La identificacin y localizacin de clulas madre neurales, tanto embrionarias como adultas, ha sido un foco
importante de la investigacin reciente. Algunos objetivos importantes para los trasplantes de clulas madre
neurales son los pacientes con derrames cerebrales,
lesiones al cordn espinal y enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson. Esta enfermedad conlleva
la prdida de clulas que producen el neurotransmisor
dopamina. El primer ensayo doble ciego de trasplantes
de clulas fetales para tratar la enfermedad de Parkinson
report una supervivencia y liberacin de dopamina
proveniente de las clulas trasplantadas y una mejora
funcional en los sntomas clnicos. Sin embargo, algunos pacientes desarrollaron efectos secundarios, lo cual
sugiere que hubo una sobresensibilizacin a la dopamina o demasiada dopamina producida. A pesar de que
estos efectos secundarios no se haban anticipado, el
xito del experimento a nivel celular es significativo.
De nuevo, se necesitan ms estudios y que continen los
estudios actuales. Hay ms de 250 pacientes que han recibido trasplantes de tejidos humanos fetales.

AVANCES EN BIOTECNOLOGA

S Diacrin ha estado desarrollando lo que llaman


xenotrasplantes, usando clulas fetales de cerdo.
Han comenzado las pruebas clnicas en pacientes
que han sufrido un derrame cerebral. Actualmente
estos pacientes necesitan recibir algn tratamiento
en las primeras 24 h despus del derrame para
poder obtener resultados teraputicos efectivos.
Muchos pacientes no reciben tratamiento a tiempo
porque los sntomas no son obvios al principio. La
terapia de Diacrin puede ser aplicada entre semanas y meses despus del trauma inicial.
S La estrategia de NeuroNova consiste en cultivar
clulas humanas adultas provenientes de donantes, diferenciarlas en cultivo para que produzcan

158

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

el tipo de clula deseada (neuronas dopaminrgicas que se pierden en la enfermedad de Parkinson)


y luego trasplantarlas directamente al cerebro de
los pacientes.
S Neurotech est utilizando clulas endoteliales
cerebrales alteradas (modificadas para producir
Interleucina2 humana) como una inmunoterapia
para el tratamiento de gliomas. Los resultados de
los experimentos en ratas han mostrado que estas
clulas recogen las clulas del tumor, lo cual ha
resultado en el inicio de un estudio clnico.
S Tratamiento para la diabetes: la diabetes afecta a
16 millones de personas en EUA y es causada por
el metabolismo anormal de la insulina. Normalmente la insulina es producida y segregada por
estructuras celulares del pncreas llamadas islotes
de Langerhans. Hace poco tiempo que se han podido generar clulas que expresan la insulina a
partir de clulas madre de ratn. Adems, estas clulas se autoorganizan para formar estructuras que
no slo se parecen mucho a los islotes pancreticos normales, sino que tambin producen insulina. Las investigaciones futuras necesitan enfocarse en formas de optimizar las condiciones para
la produccin de insulina, con el fin de proveer
una terapia basada en clulas madre para tratar la
diabetes que pudiera reemplazar la necesidad de
inyectarse insulina constantemente.

MATRIZ EXTRACELULAR (MEC)

Los componentes bioqumicos caractersticos de la


MEC son biopolmeros mixtos, formados por cadenas
de monosacridos y cadenas peptdicas, y entre ellos
hay desde glucoprotenas hasta proteoglicanos. La glucoprotena ms abundante de la MEC es el colgeno,
aunque tambin contiene fibrina y elastina, minerales
(hidroxipatita, una forma de fosfato clcico de la matriz
sea) y fluidos como plasma sanguneo o suero con antgenos en suspensin. Tambin forman parte de la MEC
los oligosacridos de las glucoprotenas, que forman
parte integral de la membrana plasmtica, y de los glucolpidos, los cuales en conjunto forman el glucocliz.
Muchas clulas estn ligadas a componentes de la MEC
por medio de protenas especializadas integradas en la
membrana plasmtica y que se llaman integrinas. Por la
cara citoplasmtica las actinas se conectan con la trama
superficial del citoesqueleto; por la cara externa se co-

(Captulo 6)

nectan con protenas como colgeno, lamininas y fibronectina. Sus componentes fundamentales son:
1. Protenas fibrilares.
2. Glucoprotenas estructurales en pequea proporcin que participan en la adhesin celular.
3. Glucosaminoglicanos (GAG).

Protenas fibrilares
Existen cuatro protenas que forman fibrillas en la matriz extracelular. La funcin de estas protenas formadoras de fibras es ofrecer diferentes propiedades tensiles
y elsticas a los tejidos de sostn y dar anclaje a otros
elementos celulares de los tejidos. Las protenas fibrosas son los elementos bsicos estructurales de los tejidos
conectivos.
1.
2.
3.
4.

Elastina.
Fibrilina.
Fibronectina.
Colgeno.

Al microscopio ptico y electrnico se observan estructuradas en tres tipos de fibras, que se denominan fibras
de tejido conectivo. Estas microfibrillas conectan los
componentes de la MEC.
1. Fibras elsticas.
2. Fibras reticulares.
3. Fibras colgenas.
Las fibras son de dos tipos moleculares: colgenas y
elsticas, ya que las fibras reticulares contienen colgeno en su estructura. Las fibras colgenas son flexibles
y muy resistentes a la traccin. Existen mltiples variedades de colgeno que dan lugar, al menos, hasta a 12
tipos de fibras colgenas. Las fibras elsticas se caracterizan por su elasticidad y su matriz est constituida por
una protena no glucosilada llamada elastina. Con la
edad disminuyen las microfibrillas, y la elastina se fragmenta y se desintegra.
El colgeno es la protena ms abundante del organismo. Se sintetiza por los fibroblastos y se presenta en
fibras y haces de fibras como escleroprotena; se organiza en unidades moleculares bsicas llamadas tropocolgeno. Es el componente esencial de los tendones y de
la MEC que rodea a las clulas seas en el hueso. Tambin es un componente del tejido conectivo de hueso,
crnea, dentina y tendones. Existen 20 tipos de cadenas
polipeptdicas de colgeno que se combinan y producen

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


distintos tipos desde el punto de vista morfolgico,
dependiendo de la combinacin de 25 cadenas distintas
polipeptdicas que se trenzan para formar las unidades
de tropocolgeno.
Los colgenos que tienen sus triples hlices truncadas se denominan FACIT e incluyen los tipos IX, XII,
XIV, XVI y XIX. El colgeno tipo I se encuentra en la
dermis (70% de lo que se denomina piel es colgeno).
Otros colgenos estn en los cartlagos, el tero y la
pared de los vasos sanguneos, en la lmina basal y en
el tejido conectivo subyacente. Las fibrillas de colgeno
colaboran en la formacin de un continuo estructural
uniendo entre s a grupos de clulas para formar un
tejido. De acuerdo con la estructura que forman, se dividen en:
1.
2.
3.
4.
5.

Colgenos fibrilares tipo I, II, III, V y XI.


Colgenos de cadena corta tipo VIII y X.
Colgeno de la membrana basal tipo IV.
Colgeno tipo FACIT: IX, XII, XIV y XIX.
Otros colgenos tipo VI, VII, IX, XII y XIII.

El colgeno contiene gran cantidad de glicina y prolina,


as como aminocidos que no fueron insertados por el
ribosoma, como la hidroxiprolina y la hidroxilisina,
aminocidos transformados mediante la accin de vitamina C. El colgeno est formado por una protena precursora llamada tropocolgeno que est formada por
tres cadenas polipeptdicas llamadas cadenas a, las cuales se sintetizan por los fibroblastos. Estas cadenas tienen una configuracin helicoidal levgira. Las tres
cadenas se pliegan y se fijan mediante enlaces transversales para formar una triple hlice dextrgira.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Glucoprotenas estructurales
extracelulares o protenas adhesivas
(adhesinas)
Son protenas no filamentosas que intervienen en la interaccin clulaMEC e interactan con receptores especficos de la superficie celular. La fibronectina es la
ms abundante y presenta una estructura filamentosa.
Esta protena est por toda la MEC y se deposita sobre
la superficie de diversos tipos celulares, favoreciendo la
adhesin de clulas entre s. Su funcin es contribuir al
anclaje de los epitelios a la MEC y formar parte de la
lmina basal.
Las protenas mejor caracterizadas son:
1. Fibronectina.

2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

159

Trombospondina.
Laminina.
Vitronectina.
Entactina.
Tenascina.
Selectinas.
Anexinas.

Las molculas de adhesin celular (CAM) se unen a receptores especficos ubicados en otras clulas o a la
MEC, facilitando las interacciones celulares y la migracin de ellas por los diferentes tejidos. Tambin transducen seales reguladoras de la transcripcin celular
luego de la interaccin con sus ligandos.
Estructuralmente existen cinco familias de CAM:
1.
2.
3.
4.
5.

Cadherinas.
Integrinas.
Selectinas.
Superfamilia de inmunoglobulinas.
Protenas de la MEC.

Las CAM son un grupo diverso de protenas involucradas en procesos biolgicos de vital importancia, como
la embriognesis, la reparacin tisular, la diferenciacin, el crecimiento, la comunicacin y la movilizacin
celular. Las CAM son glucoprotenas ubicadas en la
superficie celular que actan como receptores celulares,
aunque tambin se encuentran en la matriz tisular, y
mediante ellas se efectan las interacciones especficas
clulaclula y clulamatriz. Estas glucoprotenas tienen en un extremo un grupo carboxiloterminal, que se
encuentra fijo en el citoplasma y en el citoesqueleto.
Despus del carboxilo terminal est la regin transmembrnica, que atraviesa la membrana celular. El
resto de la glucoprotena se ubica extracelularmente y
termina en un grupo aminoterminal que da a la molcula
la especificidad para unirse a otras CAM.
Las CAM pueden ser monomricas, dimricas y
heterodimricas. Estas protenas pueden ser homoflicas o heteroflicas. Son homoflicas aqullas que se
unen especficamente a otras CAM idnticas a ellas
mismas, y heteroflicas las que lo hacen con otros receptores o CAM diferentes. Una determinada CAM puede
unirse de manera homotpica si lo hace con receptores
ubicados en el mismo tipo de clulas donde se encuentra.
La unin de CAM de clulas diferentes se llama heterotpica. Hay CAM constitutivas de una clula y otras que
requieren activacin previa antes de expresarse.
Las molculas de adhesin celular neural (NCAM)
son glucoprotenas de membrana, dos son transmembrnicas y la tercera est unida a la superficie celular
mediante un anclaje glucosilfosfatidilinositol (GPI).

160

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Las molculas de adhesin cumplen dos funciones


principales:
1. Se unen a ligandos especficos ubicados en otras
clulas o en la MEC, facilitando las interacciones
celulares y la migracin de ellas por los diferentes
tejidos.
2. Transducen seales reguladoras de la transcripcin
de genes despus de interactuar con sus ligandos.
Las cadherinas estn presentes en la superficie de las
clulas epiteliales; su molcula est compuesta por 700
a 750 aminocidos, 4 de los cuales son homlogos. Son
protenas homodimricas que median adhesiones intercelulares homoflicas dependientes de calcio y temperatura que se unen a cadherinas idnticas expresadas en
clulas homotpicas o heterotpicas para establecer contacto clulaclula. Participan en la separacin histognica, migracin de las clulas y la diferenciacin de los
tejidos embrionarios, as como en la formacin de uniones entre clulas adyacentes.
Se han clasificado como E, P, N, R y M de acuerdo
con el lugar donde fueron caracterizadas (endotelio, trofoblasto, sistema nervioso, retina y mioblastos). Las
cadherinas intervienen en la adhesin celular, persistencia de los espacios intercelulares, desarrollo y crecimiento embrionario, implantacin de los blastmeros y
la morfognesis.
Las integrinas son glucoprotenas heterodimricas
de membrana (con una cadena a y una b); se han caracterizado 16 subunidades a y 8 subunidades b. Estas subunidades se unen por medio de enlaces no covalentes,
formando ms de 20 combinaciones diferentes.
Las selectinas o LECCAM se expresan en clulas
relacionadas con la fisiologa vascular (leucocitos, plaquetas y endotelio) y contienen un dominio lectina. Las
selectinas tienen tres dominios extracelulares. Aunque
las selectinas tienen un dominio corto intracelular, pueden transducir seales regulatorias que afectan la funcin de las integrinas y la produccin de citocinas. Estas
molculas median la adhesin laxa de los leucocitos a
las clulas endoteliales activadas durante los procesos
inflamatorios y son necesarias para la migracin de los
linfocitos a los ndulos linfoides perifricos durante la
circulacin y recirculacin linfocitaria. La familia de
las selectinas puede expresarse como molculas de superficie (E y L selectinas); aqullas pueden ser almacenadas en los grnulos a de las plaquetas o en los cuerpos
de WeibelPalade de las clulas endoteliales (Pselectina), o actuar como molculas solubles (Lselectina).
Las tres selectinas tienen relacin con la interaccin
clulaclula entre leucocitos y clulas endoteliales. Su

(Captulo 6)

funcin ms importante es la adhesin inicial de neutrfilos y monocitos al endotelio activado por citocinas, lo
que permite luego la quimiotaxis mediada por integrinas y la migracin transendotelial. Sus ligandos son carbohidratos fucosilados, sialilados o sulfatados (p. ej., el
Sialil LewisX que se expresa sobre los leucocitos); las
adhesiones que llevan a cabo son por lo general de tipo
heteroflico, dependientes de calcio y de carcter transitorio (duran slo milisegundos). Estas molculas median la adhesin laxa de los leucocitos a las clulas
endoteliales activadas durante los procesos inflamatorios y son necesarias para la migracin de los linfocitos
a los ndulos linfoides perifricos durante la circulacin
y recirculacin linfocitaria.
Las molculas de la superfamilia de inmunoglobulinas (Ig) son receptores celulares que incluyen un gran
nmero de protenas. Todas comparten una regin de 60
a 100 aminocidos entre dos cisternas y dispuestos en
dos bandas antiparalelas unidas por puentes disulfuro.
Estas bandas forman un pliegue de inmunoglobulina
que constituye un dominio. Todos los miembros de esta
familia poseen al menos uno de estos dominios. Algunas de estas protenas son secretadas y dejan de ser receptores de superficie.
Pueden ser monomricas, dimricas o heterodimricas y subdividirse en:
S Tipo C1: involucradas en el reconocimiento de
los antgenos; se incluyen aqu los receptores antignicos de los linfocitos T y B, los anticuerpos y
las molculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH).
S Tipo C2: protenas de adhesin celular y fijadoras
del complemento; incluyen molculas de acciones
muy diversas, desde adhesin neuronal (NCAM),
coestimulacin celular (CD28, CD80, CD86,
CTLA4) y molculas de adhesin como CD31.

Glucosaminoglicanos (GAG)
y proteoglicanos
Componentes fluidos o matriz amorfa, los GAG o mucopolisacridos son polisacridos complejos. Entre los
ms comunes en la sustancia extracelular estn el cido
hialurnico o hialuronano (el de mayor tamao y no est
sulfatado), el condroitinsulfato, el dermatansulfato, el
heparansulfato y el queratansulfato. stos, al combinarse con protenas, forman proteoglicanos. Los GAG
son molculas muy cidas, con numerosas cargas negativas que atraen grandes cantidades de sodio y agua, lo
cual aumenta la turgencia de la MEC; por ello, la dermis

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


es una masa gelatinosa con gran capacidad de hidratacin y con influencia en la turgencia y tirantez de la piel.
Los GAG son grandes cadenas de polisacridos que se
dividen en cuatro grupos dependiendo de su estructura:
1.
2.
3.
4.

cido hialurnico.
Condroitinsulfato y dermatansulfato.
Heparansulfato y heparina.
Queratansulfato.

Los proteoglicanos son una familia de molculas caracterizadas por un ncleo proteico al cual se unen una o
ms cadenas laterales de glucosaaminoglicano, mediante las cuales interactan con las protenas de la
matriz y con factores de crecimiento. Adems de formar
parte de la MEC, tambin se expresan en superficies
celulares para facilitar su unin a la matriz. Entre estas
molculas est el sindecano (antgeno CD138), que se
ubica en la superficie de las clulas epiteliales, permitiendo su unin al colgeno y estabilizando los epitelios.
Los proteoglicanos pueden localizarse en el exterior de
las clulas, intercalados en las membranas de las clulas, o acumularse intracelularmente en grnulos. Los
proteoglicanos son grandes aniones policovalentes; las
cargas negativas fijan cationes (Na, K y Ca) en los espacios de cada dominio.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

DESARROLLO DE LA PLACENTA

El desarrollo del producto en el tero est ligado anatmica y metablicamente al de la placenta, rgano de
existencia transitoria que durante 9 meses funciona
como pulmn, rin, intestino y glndula encargados de
cubrir las necesidades fetales. Durante su breve existencia, la placenta suministra todas las sustancias que el
feto necesita; es la nica va activa selectiva para obtener y eliminar productos de desecho; posee metabolismo propio, capaz de modificar molculas de procedencia fetal o materna. Bajo la influencia que ejerce la
presencia de progesterona, el endometrio se prepara
para la implantacin. En la actualidad se dispone de dos
marcadores de receptividad epitelial: bioqumico y
morfolgico.
El marcador bioqumico es la existencia de un patrn
de integrinas adecuado (glucoprotenas de membrana
celular, cuya funcin es la fijacin de las clulas a la
matriz extracelular mediante lugares de reconocimiento
especfico en la membrana extracelular, consistentes en

161

el tripptido argininaglicinaasprtico). Se conoce la


existencia de 15 subunidades a y b; dichas subunidades
se asocian formando dmeros que confieren posibilidad
de adhesin a sustratos. El tripptido argininaglicina
asprtico es la secuencia de reconocimiento presente en
distintas matrices extracelulares como fibronectina, vitronectina, colgeno, fibringeno, factor von Willebrand, osteopontina, tenascina, laminina y entactina.
Durante la ventana de implantacin (das 20 a 24), que
corresponde al periodo de mxima receptividad del
endometrio, existe coexpresin de subunidades a1, a4
y b3 en el epitelio endometrial. La b3 abre la ventana y
la desaparicin de a4 la cierra.
El marcador morfolgico est dado por la presencia
de formaciones saculares en la porcin apical de las clulas epiteliales (pinpodos) el da 20 del ciclo y permanecen de 24 a 48 h. Su funcin parece ser la succin de
lquido endometrial haciendo coalescer las paredes
endometriales y favoreciendo la aposicin del embrin.

Periodo de adhesin
Por accin de la progesterona los capilares sanguneos
aumentan su permeabilidad en el lugar en que se producir la adhesin, desencadenada por produccin local de
prostaglandinas PGE2 y PGF2a.
En el estroma endometrial se producen cambios por
accin del trofoblasto, principalmente en el punto de
implantacin. Las clulas del estroma uterino se alargan, el citoplasma se llena de glucgeno y gotas de lpido, dando la apariencia de un panal de miel (reaccin
decidual). La clula sintetiza glucgeno, glucoprotenas y receptores a factores de crecimiento semejantes a
insulina, cuyos efectos se desconocen.
En las primeras fases del embarazo, las glndulas
permanecen en estado secretor. Las clulas se observan
distendidas, con citoplasma claro y ncleos grandes e
hipercromticos (fenmeno de AriasStella). Las glndulas endometriales comparten antgenos de membrana
con el citotrofoblasto. La expresin de antgenos de histocompatibilidad mayor MHC tipo I est ausente en la
decidua de la octava a la dcima semana de gestacin;
las MHC tipo II estn presentes en pequeas cantidades.
En la matriz extracelular se forma una densa red
fibrosa que slo se disuelve en el lugar de implantacin
del blastocisto por la accin de enzimas proteolticas
trofoblsticas o la liberacin de relaxina por parte de
clulas endometriales. A medida que avanza el embarazo, las clulas del estroma originan una membrana
basal, constituida por colgena tipo IV, laminina, proteoglicano, heparnsulfato y glucoprotenas.

162

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Durante las primeras fases del embarazo, en los ganglios linfticos uterinos se localizan clulas derivadas
de la mdula sea, cuya morfologa es semejante a linfocitos grandes. Estas clulas se dispersan por toda la
decidua o se agrupan con linfocitos T. Se encuentran,
adems, macrfagos positivos para HLA clase II, en la
decidua y adyacentes a las arterias espiraladas. Conforme avanza la gestacin, el nmero de macrfagos y
clulas T deciduales permanece relativamente constante, pero el de linfocitos de grnulos grandes disminuye.
La mayora de los cambios deciduales de las primeras etapas del embarazo dependen de los niveles hormonales maternos y no del trofoblasto, adems de la accin
de citocinas sintetizadas por clulas del estroma; secreciones de clulas T, macrfagos y expresin del receptor para interleucina IL4 por las clulas epiteliales
glandulares deciduales, que podra desempear un papel estimulante del crecimiento de las clulas epiteliales. Los esteroides ovricos regulan integrinas y citocinas endometriales as como los pinpodos, preparando
al endometrio para su periodo de mxima receptividad.
El endometrio detecta la presencia del embrin, libera
molculas que actan sobre el embrin para hacerlo
competente para la implantacin. El embrin secreta
interleucina IL1, que acta sobre el endometrio para
que incremente integrinab3 y favorezca la adhesin
embrionaria. Los sistemas enzimticos que regulan la
implantacin estn determinados por citocinas, molculas de adhesin, TGFb y hormonas.
El endometrio que reviste la cavidad uterina se divide
en tres regiones segn su relacin con el producto de la
gestacin: decidua basal, situada directamente debajo
de la vescula corinica, que formar la placenta en
colaboracin con el corion; decidua capsular, que cubre
el resto de la vescula blastodrmica, y decidua parietal,
que reviste la cavidad uterina restante. El mecanismo
molecular por el cual el trofoblasto y el epitelio endometrial parecen relacionarse es a travs de las molculas
de adhesin, fundamentalmente la unin de integrinas
del endometrio con sus receptores (fibronectina, laminina, etc.) situados en el blastocisto o a la inversa.
S Citocinas. Factor fundamental en la implantacin
embrionaria.
S Factor estimulante de colonias 1 (CSF1). Citocina que favorece la adhesin del blastocisto al endometrio.
S Factor inhibidor de leucemia (LIF). Citocina que
favorece la adhesin del blastocisto al endometrio.
S Interleucina1 (IL1). Involucrada en el proceso
de adhesin; su bloqueo especfico inhibe la implantacin.

(Captulo 6)

A partir de la fase de mrula, un grupo de pequeas clulas perifricas (micrmeras) se diferencian desde las
clulas centrales (macrmeras) para dar origen al trofoblasto. El blastocisto temprano consta de 64 clulas; 15
de la masa celular interna estn destinadas a desarrollar
el embrin y las 49 restantes se transformarn en trofoblasto. As pues, los tejidos embrionarios y extraembrionarios difieren en una fase muy temprana del desarrollo en la que la divisin celular es muy rpida.
Inicialmente el trofoblasto constituye una capa unicelular que se dispone en la periferia de la futura yema embrionaria. A medida que la nidacin progresa, las clulas trofoectodrmicas del polo embrionario se adhieren
directamente al revestimiento uterino y lo invaden,
evento que se ve facilitado posiblemente por la secrecin de proteasas por parte del trofoblasto.

Periodo de invasin
Una vez ocurrida la nidacin prosigue la penetracin
del endometrio materno por el trofoblasto embrionario.
A medida que el embrin se aproxima al final de la
segunda semana, el trofoblasto desplaza, disocia y sustituye a las clulas epiteliales (implantacin por desplazamiento). Despus de la invasin del blastocisto hacia
el interior de la mucosa uterina, unos 7 u 8 das posconcepcin, el trofoectodermo produce dos tipos celulares
sumamente proliferativos e invasores, necesarios para
establecer contacto con la circulacin sangunea materna y elaborar la estructura bsica de la placenta. Despus de la implantacin, el trofoblasto comienza a moldearse en masas de aspecto semejante a vellosidades,
que en un principio constan totalmente de epitelio, sin
ncleo, de tejido conectivo y separadas por lagunas
maternas. El revestimiento de la vellosidad placentaria
se origina a partir de dos capas de trofoblasto:
a. Interna o citotrofoblasto (clulas de Langerhans),
constituida por grandes clulas individuales, ovaladas o redondeadas, con ncleo vesiculoso de
cara abierta y nucleolo voluminoso, aparato de
Golgi y retculo endoplsmico granular poco desarrollados y abundantes mitocondrias. Estas
clulas se reproducen activamente por mitosis.
b. Externa o sincitiotrofoblasto, que originada del citotrofoblasto presenta numerosos ncleos sin paredes celulares. El sincitiotrofoblasto tiene mltiples microvellosidades, su superficie libre estar
baada por la sangre materna de la cmara intervellosa, mientras que su cara basal descansa sobre el
citotrofoblasto. Posee numerosos ncleos sin con-

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


torno celular, retculo endoplsmico rugoso y aparato de Golgi muy desarrollados, numerosas mitocondrias, gotitas lipdicas y ribosomas libres.

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

En sus primeras fases, la placenta est dominada por el


componente celular trofoblstico (vellosidad primaria: citotrofoblasto y sincitiotroblasto). Posteriormente
se integra a la vellosidad un ncleo mesodrmico central (vellosidad secundaria: citotrofoblasto, sincitiotrofoblasto y mesodermo extraembrionario) y finalmente se constituye la circulacin vellosa mediante
capilares sanguneos (vellosidad terciaria: citotrofoblasto, sincitiotrofoblasto, mesodermo extraembrionario y endotelio de los capilares sanguneos).
El proceso de diferenciacin del citotrofoblasto a lo
largo de la etapa invasiva comprende mltiples pasos:
cuando se agrupan en columnas, pierden su capacidad
de divisin; a medida que invaden la pared uterina
aumentan la expresin de metaloproteinasa MMP9,
HLAG (molcula de histocompatibilidad de clase I,
importante para evitar el rechazo del feto por parte de
la madre) y hormonas especficas que incluyen lactgeno placentario humano (h LP).
S Receptor laminina a6 b4. Se expresa en clulas
epiteliales del citotrofoblasto y disminuye cuando
se diferencia el tejido.
S Fibronectina y receptor a5 b1. Aumentan en las
columnas celulares de citotrofoblasto cuando se
diferencia. Disminuye la invasin del trofoblasto.
S Colgeno IV y receptor a1 b1. Aumentan la invasin del trofoblasto.
S Integrinas a. Modulan el proceso invasivo.
S Ecadherina. Disminuye en zonas donde la invasin es activa.
S VEcadherina. Aumenta la invasin, se expresa
en el endotelio de vasos de sangre fetal y columnas
celulares.
El sincitiotrofoblasto que reviste la vellosidad se caracteriza por sus propiedades de absorcin y secrecin. Se
adelgaza e incrementa el nmero de microvellosidades
en algunas regiones (zonas de transferencia) donde se
lleva a cabo el mayor intercambio de sustancias, mientras que en otras permanece engrosado, con abundantes
conglomerados nucleares y retculo endoplsmico rugoso (zonas de sntesis). En el sincitiotrofoblasto se observan adems microcuerpos con funciones digestivas
o degenerativas y grnulos densos de paquetes de hormonas polipeptdicas. La lmina basal est formada por

163

colgeno tipo IV permeable a la mayora de las sustancias que cruzan la barrera placentaria.
Se ha localizado trofoblasto metablicamente activo
en: amniocorion, zona de unin maternofetal, citotrofoblasto de las columnas celulares corticales, trofoblasto
intersticial que invade la decidua basal, clulas gigantes
del trofoblasto que emigran al miometrio, citotrofoblasto intraarterial endovascular y ncleos trofoblsticos en
pulmn materno.
El tejido conectivo laxo que ocupa el centro de la
vellosidad consta de dos tipos de clulas:
a. De Hofbauer, ovoides, de ncleo excntrico,
cuyas funciones son fagocitosis y equilibrio
hidroelectroltico.
b. Fibroblastos. El estroma de las vellosidades est
formado por tejido conjuntivo fibroso laxo, rico en
agua, y fibras reticulares (las fibras colgenas
estn ausentes hasta el final del primer trimestre).
La sustancia fundamental del tejido conjuntivo posee
gran cantidad de cido hialurnico y del condroitn sulfrico, relacionados con la permeabilidad de la placenta. A partir de las semanas 7 y 8 disminuye la viscosidad
de la sustancia fundamental por despolimerizacin del
cido hialurnico y condroitn sulfrico, adems del aumento de la actividad de la hialuronidasa, lo que crea
condiciones favorables para el metabolismo materno
fetal.
Entre la lmina basal y el corion se forma un rbol
velloso placentario conformado por vellosidades corinicas. Los troncos vellosos y sus ramas contienen vasos
sanguneos y redes capilares a travs de los cuales circula sangre fetal. La superficie de las vellosidades coriales
est baada por sangre materna, extravasada de las arterias deciduales, que circula por los espacios intervellosos o lagunas (placenta hemocorial). La mayora de las
vellosidades quedan libres en los espacios de la decidua
basal, pero algunas se ponen en contacto ntimo con los
tejidos maternos (vellosidades fijas o empotradas);
otras forman columnas de tejido trofoblstico sin soporte conectivo (columnas celulares).
En las vellosidades jvenes del primer trimestre los
vasos coriales son centrales, escasos y de dimetro pequeo, y la relacin entre clulas del citotrofoblasto y
el sincitiotrofoblasto es equivalente; en las del tercer trimestre el sincitiotrofoblasto se adelgaza, las clulas de
citotrofoblasto y de Hofbauer desaparecen casi por
completo y los vasos sanguneos incrementan su tamao y su nmero. A partir del sptimo mes, la sangre
materna y fetal se halla separada por una membrana de

164

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

5 a 6 mm, constituida fundamentalmente por sincitiotrofoblasto y endotelio capilar.


A medida que crece la placenta los vasos sanguneos
de la decidua materna experimentan dos tipos de relaciones con el citotrofoblasto. En primer lugar, dentro
del lumen de los vasos se encuentran agregados de citotrofoblasto, tanto en la superficie apical del endotelio
como reemplazando a ste, de tal modo que parecen
unidos directamente a la pared del vaso en las semanas
6 a 8 y afectan las arterias espirales desde el extremo distal hasta la unin de la decidua basal con el miometrio,
por lo que se observan clulas de citotrofoblasto en la
luz de las arterias (fase intraluminal). En un segundo
tipo de interaccin, las clulas del citotrofoblasto se
encuentran detrs de la pared del vaso, colonizando el
msculo liso de ste y unindose subyacentemente al
endotelio (fase intramural).
Al final del segundo trimestre los vasos estn formados exclusivamente por clulas del citotrofoblasto y no
se aprecian clulas endoteliales en los segmentos del
miometrio; el tejido muscular y elstico es sustituido
por fibrina y el vaso adquiere aspecto sinusoidal, lo que
permite que la sangre materna entre a presin en las lagunas. Este tipo de fenmenos se acompaa de eventos
bioqumicos que favorecen la vasodilatacin e impiden
la oclusin del vaso por restos celulares, agregacin plaquetaria y adhesin celular propiciada por la lesin vascular. Finalmente, el trofoblasto deportado se disemina
a travs de las venas uteroplacentarias hacia la circulacin materna y emboliza en los pulmones.
La circulacin continua de sangre materna a travs
del espacio intervelloso es un proceso dinmico que requiere la adaptacin constante de cada cotiledn placentario a las necesidades cambiantes del feto. Estudios
recientes en gestaciones interrumpidas voluntariamente
han sido incapaces de detectar flujo sanguneo real en
el espacio intervelloso antes de la semana 12. Estos hallazgos han llevado a pensar que en la etapa inicial de la
gestacin los extremos de las arterias espirales estn
obstruidos por tapones intravasculares de trofoblasto, y
que el liquido que ocupa el espacio intervelloso es probablemente una mezcla de filtrado del plasma materno
y secrecin de glndulas uterinas. Las arterias espirales
se ensanchan progresivamente, y hacia la semana 12 o
13 los tapones trofoblsticos se permeabilizan, permitiendo la circulacin libre de flujo sanguneo materno
hacia el espacio intervelloso.
Estos fenmenos invasivos, de las arterias espirales
por el trofoblasto y la ausencia de conexin con el espacio intervelloso, permiten que el embrin quede protegido de las elevadas presiones que el flujo arterial ma-

(Captulo 6)

terno proporcionara sobre unas vellosidades coriales


inmaduras. La invasin precoz anormal del espacio intervelloso por el flujo materno se ha sugerido como
causa de aborto temprano.
La barrera placentaria consta de tres capas de origen
fetal: sincitiotrofoblasto, citotrofoblasto y estroma, que
incluyen la pared endotelial de los capilares. La placenta madura es de color rojo oscuro o violceo (este
color est determinado por la presencia de sangre), con
forma de disco, dimetro de 15 a 20 cm, grosor de 3 cm,
peso de 500 a 600 g y dos caras: materna, insertada
sobre la decidua basal, caracterizada por la presencia de
15 a 30 lobulillos o cotiledones, y fetal, que permanece
en contacto con el amnios y el cordn umbilical, en cuya
superficie se distinguen las ramificaciones de los vasos
sanguneos placentarios.
Las principales funciones de la placenta son transporte y sntesis, adems de proteccin, termorregulacin y defensa inmunitaria, entre otras. Entre las hormonas glucoproteicas que se sintetizan en el
sincitiotrofoblasto estn:
S GCH: hormona gonadotropina corinica.
S GH: hormona del crecimiento o lactgeno placentario.
S CCH: hormona corticotrpica.
S TRH: hormona liberadora de tirotropina.
S CFR: hormona liberadora de somatomamotropina, estrgenos y progesterona.
Receptor de progesterona (RP)
Se encuentra en el ncleo de la clula decidualizada,
msculo liso, endotelio y epitelio glandular.
Progesterona (P)
Efecto supresor sobre receptores de estrgenos. Regula
la accin de mucinas, protena endometrial asociada
con el embarazo, protena plasmtica A asociada con el
embarazo, prolactina, uteroglobina, protena 24Kda, citocinas, pptidos opioides, relaxina, renina, anhidrasa
carbnica y lactoferrina, entre otras. Inhibe respuesta
linfocitaria, produce crecimiento del tero, inhibe la
contractilidad uterina, hiperpolariza la clula miometrial, reduciendo su excitabilidad.
Estradiol (E2)
Regula la proliferacin de las clulas endometriales
mediante unin del mismo a sus receptores nucleares

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


RE, seguido por activacin de stos, interaccin con elementos de respuesta hormonal de genes especficos y
modificacin de tasas de transcripcin en clulas diana.
Estimula la expresin de factores de crecimiento (factor
de crecimiento de insulina, factor de transformacin del
crecimiento y factor de crecimiento epidrmico).
HGC
Mantiene la funcin del cuerpo lteo al inicio del embarazo. Diferenciacin sexual de productos masculinos.
Inhibe la proliferacin linfocitaria mediante unin a
macrfagos y prostaglandinas. Estimula la secrecin de
relaxina y prolactina.
Lactgeno placentario

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Actividad lipoltica con movilizacin de depsitos grasos, incremento de cidos grasos libres y triglicridos
plasmticos. Aumento de la resistencia a la insulina, con
disminucin del consumo de glucosa por parte de la madre. Estimula la incorporacin de aminocidos a las protenas. Accin sinrgica con la insulina. Aumento de insulina circulante como respuesta a sobrecarga de glucosa.
S Adrenocorticotropina. Anloga a ACTH materna.
Su significado biolgico se desconoce.
S Tirotropina. Efecto desconocido.
S GnRH. Hormona del citotrofoblasto cuya funcin se desconoce.
S Inhibina. De origen citotrofoblstico. Inhibe la
secrecin de FSH e impide la ovulacin durante el
embarazo. Estimula la sntesis de HGC
S Protenas especficas de embarazo. Se desconoce
su significado biolgico. Se le ha relacionado con
la aceptacin inmunolgica del injerto semialognicofetal.
S Prostanoides. Funcionan como segundos mensajeros. Control de la resistencia vascular placentaria.
S Factores de crecimiento. Regulan proliferacin,
diferenciacin y metabolismo celulares.

PERSPECTIVAS ACTUALES DE LAS


CLULAS PROGENITORAS ADULTAS

Las SC tienen una capacidad asombrosa de desarrollarse y reproducirse formando luego todos los rganos del

165

nuevo ser humano durante el embarazo. Muchos cientficos tienen la esperanza de usar SC para reparar tejidos daados por enfermedades incurables, como en el
caso de demencia de Alzheimer, diabetes o parlisis de
mdula espinal. El problema es que los cientficos
extraen las SC de embriones recin formados en el laboratorio y durante el procedimiento matan al embrin
humano. Asimismo, debido a la necesidad de obtener
ms embriones humanos para estos procesos, se est
considerando la posibilidad de clonar embriones humanos (como en una fbrica o produccin en serie)
para matarlos y obtener cantidades significativas de SC
para experimentos: sta es la llamada clonacin teraputica.
Otra posibilidad de obtencin de SC est en los embriones congelados que han sobrado de los procesos
de fecundacin in vitro (FIV), que se realizan cuando las
parejas estriles buscan engendrar artificialmente. En
los laboratorios de FIV se engendran varios bebs y se
van implantando en el tero de la madre por grupos; si
se tiene xito con alguno de los primeros, entonces sobrarn algunos embriones. Estos embriones estn almacenados y como los padres ya han engendrado al
beb que queran, no desean ms hijos.
Desde septiembre de 2001 la asignacin de fondos
gubernamentales a las investigaciones con clulas estaminales (SC) ha estado limitada a las investigaciones en
SC de adultos o SC de embriones ya sacrificados antes
del da en que se emiti la ley. Ya no se permite en Norteamrica la investigacin en SC o la clonacin teraputica con fondos gubernamentales. Sin embargo, las
investigaciones y experimentos en seres humanos continan en pases como Corea del Sur, que en 2005 hizo
propaganda de haber logrado clonar un ser humano, o
en manos de corporaciones privadas que buscan obtener
en el futuro ingresos significativos provenientes de los
posibles descubrimientos mdicos.
Las clulas estaminales de adultos (ASC) son la alternativa humana y cristiana a la clonacin de seres
humanos. Ahora las ASC se obtienen fcilmente de la
sangre, la mdula sea y el cordn umbilical. Por ms
de 30 aos se vienen usando exitosamente, por ejemplo,
ASC para trasplantes de mdula sea en la lucha contra
el cncer, como se hace en la SICETEM.
La revista Lancet, una de las ms prestigiosas publicaciones cientficas a nivel mundial, dedic el nmero
del 16 de julio de 2004 al tema de las SC. Se publicaron
varios artculos de cientficos que solicitaban al presidente Bush y al Congreso promover la investigacin en
SC incluyendo como medio la clonacin teraputica
descrita antes. Sin embargo, tambin en ese mismo
nmero Lancet public tres artculos muy interesantes

166

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

acerca de los avances en clulas estaminales de adultos.


El primer articulo, de Wollert y otros cientficos alemanes (Lancet 364;9429;10 a 16 de julio de 2004, 141
148), es un estudio en pacientes que sufrieron infartos
cardiacos y tienen el corazn daado.
A un grupo de ellos se les inyect ASC de la mdula
sea y a otro grupo no. El grupo que recibi ASC experiment una mejora cardiaca significativa comparado
con el grupo de control. Ahora se sabe que la ASC de la
mdula sea se transforma en clula cardiaca y tambin
es probable que la ASC de la mdula sea induzca que
las clulas cardiacas daadas produzcan sustancias llamadas citocinas que mejoran la reparacin del corazn,
entre otros efectos posibles. Pero este estudio en seres
humanos demuestra claramente que las ASC de mdula
sea pueden ayudar a reparar otros rganos, como el
corazn.
El segundo estudio, de Seo y col. (Lancet 364; 9429;
10 a 16 de julio de 2004, 149155), es un estudio de clulas estaminales adultas periodontales (de la boca);
stas se aislaron y se procesaron en el laboratorio, luego
se inyectaron en roedores, y se comprob que las ASC
pudieron reparar tejido periodontal en roedores, demostrndose as que las ASC tienen una capacidad de regeneracin grande a pesar de lo que algunos cientficos
creen. El tercer estudio, de Joannides (Lancet 364;
9429; 10 a 16 de julio de 2004;172177), reporta cmo
se aislaron clulas precursoras de tejido nervioso cerebral a partir de un experimento hecho con ASC de piel.
Estos tres estudios muestran claramente cmo las ASC
son muy tiles para reparar tejidos daados; estas ASC
se han extrado fcilmente de personas adultas sin poner
en peligro la vida de ningn embrin.
Todos estos estudios recientes y muchos otros similares ofrecen una alternativa de ASC para la investigacin
cientfica sin necesidad de sacrificar embriones humanos. La mayora de los cientficos del mundo tienen
como aliados a los millones de pacientes del mundo que
tienen enfermedades incurables o crnicas a quienes les
han prometido que la investigacin en SC originar la
cura para sus malestares o la de sus seres queridos. Est
el claro ejemplo de Nancy Reagan, que vio morir a su
esposo, el ex presidente Ronald Reagan, con demencia
de Alzheimer, y ahora promueve la investigacin de SC
para buscar la cura para ese mal. Y esto es importante;
muchos de nosotros, cientficos o no cientficos quisiramos ser curados de una de estas enfermedades
mediante la investigacin.
La investigacin en SC trae la posibilidad y la promesa de descubrimientos cientficos importantes.
Segn la OMS hay unas 5 000 enfermedades raras
(ER), de las cuales unas 4 000 son causadas por alguna

(Captulo 6)

anomala gentica. En opinin de los autores, todas las


enfermedades tienen una base gentica. Se desconocen
datos precisos sobre la frecuencia real de la mayora de
las ER debido a la inexistencia de sistemas de notificacin de casos. Todo esto supone un obstculo para la
prevencin, el diagnstico y el tratamiento de las ER, y
es imprescindible mejorar el conocimiento en este campo incentivando la investigacin epidemiolgica, bsica y clnica.
Otro de los grandes problemas de las enfermedades
raras es la dificultad de encontrar un tratamiento adecuado y frmacos eficaces. En estos momentos el costo
de desarrollo de un medicamento es altsimo y el periodo medio de desarrollo se estima entre 10 y 14 aos.
Cuando por fin el medicamento ve la luz, el laboratorio
fabricante aspira legtimamente a recuperar la inversin. Es fundamental, pues, lograr que el Estado destine
recursos econmicos al sector de las ER desarrollando
un sistema de prevencin primaria, de diagnstico precoz, de tratamiento y rehabilitacin, de asistencia farmacutica, de informacin y educacin sanitaria, de
apoyo a la investigacin y desarrollo de medicamentos
hurfanos e igualdad de acceso en todo el territorio nacional, sin discriminacin.

TERAPIA GNICA

La terapia gnica pretende desarrollar nuevos mtodos


de ingeniera gentica, ya que las clulas son muy flexibles y fcilmente se les puede introducir genes curativos. El tema de la terapia gnica es de gran inters,
aunque por desgracia no ha avanzado todo lo rpidamente que se esperaba. La idea es muy sencilla y atractiva: reemplazar con un gen aqul que no est funcionando o que funciona mal, porque curar o arreglar un
gen defectuoso es mucho ms difcil. El primer intento
de aplicar la terapia gnica fue con la inmunodeficiencia total que presentaban dos nias del sndrome conocido como nio burbuja. Esta inmunodeficiencia se
debe a la dificultad de procesar bioqumicamente en la
sangre la adenosina. Este caso lo presentaron los investigadores norteamericanos como una solucin ya viable. Y, por si acaso, se les inyectaba la enzima deficiente: la adenosina deaminasa, con lo que estaban seguros
de no tener problemas. Estudios paralelos demostraron
la eficacia aparente de la transmisin del gen. Ms recientemente, en Francia han sido tratados varios nios
con inmunodeficiencia, aparentemente con buenos resultados, pero dos de ellos desarrollaron cncer, as que
la terapia se suspendi.

Terapia celular y bioingeniera de tejidos


Las razones por las que la terapia gnica no ha avanzado con rapidez son sobre todo dos:

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

S Primera: existe dificultad en conseguir vectores


adecuados que no perjudiquen al organismo y que
estn dirigidos en especial al rea objetivo. [Nota:
A ttulo general, se dice que un vector es un agente
que transporta algo de un lugar a otro. Y en bioqumica, un vector es un fragmento de cido desoxirribonucleico que puede unir otro fragmento ajeno
y transferirlo al genoma de otros organismos.]
S Segunda: el metabolismo celular y la clula son
mucho ms complicados de lo que todava se sabe.
Por desgracia, el problema de los vectores se agudiz
hace dos aos con una de las enzimas, la ornitina transcarbamilasa, que se aplic a un voluntario, Lesinger,
que falleci por un exceso en el virus transportador. La
terapia gnica se consider al principio como una herramienta teraputica de inters, en especial en enfermedades monognicas hereditarias, entre las que estn las
inmunodeficiencias, la fibrosis qustica, la hipercolesterelemia familiar, etc. Tanto los investigadores como
las compaas farmacuticas tienen mayor inters en
enfermedades ms comunes como el cncer y las enfermedades neurolgicas, y tambin en las aplicaciones de
carcter teraputico o preventivo, como las vacunas
genticas.
Los cidos nucleicos son molculas muy lbiles
(inestables y que se transforman con facilidad en otra
cosa) y fcilmente hidrolizables en fluidos biolgicos.
Por esta razn se requiere el concurso de vectores para
facilitar su transferencia a las clulas. Existen dos tipos
principales de vectores: virales y no virales. Y mientras
que los primeros aprovechan el tropismo y la capacidad
de los virus para infectar clulas, los vectores no virales
se muestran menos eficaces, aunque son sistemas ms
seguros y pueden ser formulados con mayor facilidad
como medicamentos. Un sistema no viral est constituido por dos elementos: uno es el transportador, constituido por lpidos, polmeros, etc., y el otro es la construccin gnica. En todos los casos, el vector debe
interactuar con la superficie celular, internalizar el complejo, liberar el DNA, alcanzar el ncleo, ser expresado
y, segn los casos, el producto final debe ser exportado
como producto de secrecin. La eficiencia final del sistema depende, pues, de los dos elementos, y las mejoras
en ambos son esenciales.
El profesor Salvador Alio lleva trabajando muchos
aos en terapia gnica con vectores no virales, basada
en la utilizacin de los cidos nucleicos como medicamentos. En este sentido, uno de sus objetivos principa-

167

les es la introduccin celular selectiva de cidos nucleicos teraputicos, mediante procedimientos seguros y
eficaces. Entre los sistemas no virales puede distinguirse el DNA desnudo, que ha sido utilizado con xito en
algunos experimentos e, incluso en la actualidad, en
modelos in vivo utilizando el procedimiento denominado hidrodinmico, basado en la administracin directa
intravenosa de plsmidos en grandes volmenes.
Entre los trabajos ms recientes estn los de Nick
Lemoine e Iain McNeish sobre terapia gnica del cncer
con vectores virales. Desde 1996 se han investigado al
menos otros 20 protocolos para intentar restaurar la funcin del p53 utilizando la identificacin de genes supresores, incluso en combinacin con quimioterapia, pero
con xito limitado.
En el cuadro 61 se recoge el uso potencial de estas
nuevas tcnicas aplicadas a patologas concretas. Se
destaca la mencin de la osteognesis imperfecta como
enfermedad a tratar partiendo de un estudio previo de
Horwitz.

CLONACIN TERAPUTICA

El inicio de las discusiones y consideraciones sobre las


clulas madre, troncales o totipotentes se debe al xito
de la inseminacin artificial. Estos temas tomaron por
sorpresa a la sociedad y a la Iglesia sin la gran resistencia que s ha sido percibida en los ltimos tiempos por
las posibilidades de la clonacin teraputica, que en
Espaa incluye la posibilidad de utilizar para fines de
experimentacin los embriones sobrantes conservados
en las clnicas de inseminacin artificial.
Las expectativas del uso de la clonacin teraputica
en humanos, sobre todo si se mejora el rendimiento en
la clonacin, son enormes. En 2005 investigadores surcoreanos trabajaron con 30 embriones humanos, utilizando clulas somticas de las mujeres que donaron sus
vulos, con lo que evitaron posibles problemas con
mitocondrias; o sea que por el momento la clonacin
teraputica humana se ha realizado slo con mujeres. Al
parecer se utilizaron 242 vulos procedentes de 16
mujeres y se obtuvieron 30 blastocistos, de los cuales se
tomaron unos 20 grupos de clulas y de ellos una sola
lnea de clulas madre. Todava se necesita mejorar la
tcnica y quedan muchas incgnitas por estudiar (figura
63).
Se est avanzando mucho en la investigacin con clulas madre, y las empresas biotecnolgicas y farmacuticas han apostado fuerte por ello. Los recientes avan-

168

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

(Captulo 6)

Cuadro 61. Aplicaciones clnicas de la medicina regenerativa mediante el uso de clulas madre adultas
Enfermedad

Modelo

Fuente de clulas
madre

Va de
administracin

Osteognesis
imperfecta

BMT clnico (alognico)

Mdula sea

Intravenosa

Tirosinemia tipo I
(hgado)

BMT experimental

Lnea celular en
cultivo; mdula
sea purificada

Intravenosa

Hepatitis B o C

BMT experimental
o sangre perifrica

Intravenosa

Cirrosis heptica

BMT experimental
o sangre perifrica

Sangre perifrica
de mdula sea
purificada. Interfern B
Lnea celular en
cultivo; sangre
perifrica

Infarto
del miocardio

BMT experimental

Clulas madre de
Intravenosa
sangre perifrica

BMT experimental

Mdula sea; lnea Intravenosa


celular en cultivo

GCSFinducido
por clulas
madre

Clulas madre de
Intracardiaca
sangre perifrica

ces cientficos generan muchas expectativas, nuevos


dilemas y, fruto de nuestras esperanzas, algunas exageraciones. Hace unos cuatro aos que una empresa americana anunci que haba clonado por primera vez
varios embriones humanos para investigacin en trasplantes. Los investigadores de la compaa decan que
su finalidad era la clonacin teraputica, es decir, conseguir clulas madre embrionarias con el genoma del donante, utilizando la transferencia nuclear para evitar el
rechazo de los posibles usos de las clulas madre.
La clonacin por transferencia nuclear ya se utiliz
en 1952 para estudiar el desarrollo en anfibios, pero ha
demostrado ser ms difcil en mamferos. Hay especies
animales que se resisten a la clonacin y las especies que
se han podido clonar, como ratones, ovejas, vacas y cerdos, lo han hecho con una eficiencia muy baja. La oveja
Dolly naci despus de 276 intentos fallidos. Los inten-

Intravenosa

Resultado
Incremento de la
mineralizacin
sea