PRUEBAS

DIAGNSTICAS
PARA VIH
NGELA VICTORIA YOVERA PUICAN

MDICO PATLOGO CLNICO

DEFINICIN DE
INFECCIN POR VIH
ADULTOS Y NIOS > 18
MESES:
Prueba confirmatoria positiva.
Cumpla con los criterios de caso SIDA.

DEFINICIN DE
INFECCIN POR VIH
NIOS < 18 MESES:
Prueba positiva para anticuerpos no es
definitiva.
Se considera positivo:
Tiene resultados positivos en dos momentos diferentes.
Tcnica recomendada: deteccin de cido nucleico o
aislamiento viral
Cumple con los criterios de caso SIDA.

DIAGNSTICO DE
INFECCIN POR VIH
Personas con ITS.
Personas con pareja que muestran comportamiento
de riesgo.
Trabajadores sexuales.
Farmacodependientes.
Pacientes multitransfundidos.
Compaeros sexuales de seropositivos.
Hijos de madre VIH positivas.
Pacientes con sntomas sugerentes.
Donantes de sangre o de rganos o tejidos.

PRUEBAS DE
LABORATORIO
Mtodos Directos:

Evidencian/cuantifican
la
presencia
de
antgenos
en
la
muestra.
PCR cualitativa,
PCR cuantificada
Cultivo y aislamiento
viral,
Antigenemia P-24.

PRUEBAS DE
LABORATORIO
Mtodos
Indirectos:
Evidencian la presencia
o
ausencia
de
anticuerpos totales en
la muestra.
Son los ms utilizados.

Pruebas
laboratoriales
Screening (tamizaje):
Prueba rpida
ELISA

Confirmatorio:
Western Blot
IFI

Pruebas complementarias
Recuento de Linfocitos CD4/CD8
Carga viral
PCR

1.MTODOS INDIRECTOS
a. Pruebas de screening serolgicas
Aglutinacin
Dot blot
Inmunocromatografa

Pruebas rpidas disponibles en el mercado

Multispot
HIV-1/HIV-2
Uni-Gold
Recombigen
OraQuick Advance

Reveal
G2

1.MTODOS INDIRECTOS
a. Pruebas de screening serolgicas
I. Tcnicas inmunoenzimticas (EIA)
EIA indirecto con antgeno obtenido de lisado vrico (primera
generacin)
EIA indirecto o competitivo con antgeno obtenido de protenas
recombinantes y/o pptidos sintticos (segunda generacin)
EIA de tipo sndwich o de inmunocaptura, con antgeno obtenido de
protenas recombinantes y/o pptidos sintticos y deteccin
conjunta de anticuerpos especficos de clase IgG, IgM e IgA (tercera
generacin)
Deteccin combinada de anticuerpos especficos y antgeno de VIH
(cuarta generacin)

 PRUEBAS DE ELISA:
Primera Generacin: Los
antgenos utilizados provienen
del lisado viral de un cultivo
Segunda Generacin: Los
antgenos corresponden a
protenas recombinantes o
Pptidos sintticos.
Tercera Generacin: Pptidos
recombinantes sintticos de VIH1, 2, 0.
Cuarta Generacin: Se
adicion el p24.

b. Pruebas confirmatorias
I. Western blot
II. Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
III. Radioinmunoprecipitacin (RIPA)
IV. Inmunoensayo lineal (LIA)

Pruebas de Deteccin
ELISA: Deteccin de Anticuerpos (resultado en horas)

PRUEBAS RAPIDAS: Resultado en minutos

Nos dan RESULTADOS PRELIMINARES, requieren

prueba confirmatorias

Morfologa
y Estructura
del HIV

Conceptos
Bsicos

Familia: Retroviridae
Gnero: Lentivirus
Forma esfrica
110nm
RNA

Capsde
viral
TR
integrase
e
protease

Envelop
e

HIV1

ciclo de vida del HIV

Western
Blot

Prueba de confirmacin
Principio: Ensayo
inmunoenzimtico
Detecta anticuerpos contra
protenas especficas del VIH 1
Interpretacin: visual
Muestras: suero y plasma
Volumen: 20 l
Tiempo: 3.5 hrs
Sensibilidad: 100%
Especificidad: 100%

Nomenclatura de las bandas en Western Blot

WESTERN BLOT
E
Antgeno

Anticorpo
1ario

E
Conjugado

Esquema

Legenda

WESTERN BLOT

WESTERN BLOT
Incubacion con la muestra

WESTERN
BLOT
Substrato revelacin

Criterios de interpretacin del Western blot para

infeccin por el VIH, segn algunos organismos
internacionales

INMUNOFLUORESC
ENCIA
INDIRECTA

 Usa material humano de Clulas T infectadas

que expresan antgenos de VIH-1.
Las clulas se fijan a la superficie de una
laminilla de vidrio, se utilizan clulas no
infectadas como control.
Cuando los anticuerpos del VIH estn
presentes en suero o plasma se unen a las
clulas infectadas pero no a las clulas no
infectadas.

Inmunofluorescencia indirecta

Antgeno tisular

Inmunofluorescencia
indirecta

suero de paciente(IgG)

Inmunofluorescencia
indirecta

+ anti-IgG humana con

marca fluorescente

Inmunofluorescencia
indirecta

Microscopio
de luz UV

Fluorocromo: molcula qumica q absorbe luz a una longitud

de onda (energa) y emite a una longitud superior (menor
energa)
Fluoroforos mas comunes: Isotiocianato de Fluorescena.
Rodamina
O

HO

O
C
OH
R2
R1

 La inmunofluorescencia indirecta se ha
utilizado ampliamente como prueba
confirmatoria para la infeccin por el VIH-1 y
lo siguen haciendo laboratorios con amplia
experiencia con la prueba.
Su desempeo es bueno pero requiere de
personal debidamente entrenado para su
lectura y de microscopio de fluorescencia

LIA: inmunoensayo
lineal
Incorporan en un soporte plano
,equivalente a la tira de nitrocelulosa
, varias protenas recombinantes o
pptidos sintticos correspondientes a
diferentes protenas del VIH-1 y en
algunos casos del VIH-2
Su sensibilidad es similar al WB y
presenta menos reacciones cruzadas.

LIA: inmunoensayo
lineal
Estas pruebas que son sensibles y especificas
pueden considerarse como pruebas
confirmatorias y en algunos sitios
reemplazan al WB.

Causas de resultado
falso-positivo:
Relativas al suero:
Relativo a la calidad y manipulacin de la muestra:
Calidad, extraccin, almacenamiento y contaminacin de la
misma, estabilidad y calidad de los reactivos.

Relativas a la presencia de auto anticuerpos:

Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).

Relativas a otras condiciones:

Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis,
Enfermedades hemato -oncolgicas, alcoholismo,
embarazo, etc.

Causas de resultado
falso- negativo:
Periodo de ventana
Pobre respuesta inmune
Tratamiento con inmunosupresores
Procesos malignos
Trasplante de mdula sea
Prdida de estabilidad de los
reactivos

Seleccin de pruebas
rpidas de VIH
apropiadas
Es necesario tomar en cuenta tres factores:
El objetivo de hacer la prueba.
Sensibilidad y especificidad de la prueba.
Prevalencia de la infeccin de VIH en la poblacin
que ser tamizada con las pruebas.

Eleccin de Pruebas
rpidas de VIH
Los tres objetivos para hacer un tamizaje de
anticuerpos contra VIH son:
Tamizaje de donadores de sangre u rganos.
Para fines epidemiolgicos
Diagnstico de personas infectadas.

Sensibilidad y
especificidad de la
prueba
Estos dos factores son crticos para diferenciar entre una
persona infectada y una que no est infectada.
Pruebas altamente sensibles disminuyen la posibilidad
de obtener resultados falsos negativo.
Las pruebas altamente especficas disminuyen la
posibilidad de tener resultados falsos positivo.
La mejor eleccin depender del objetivo de hacer la
pruebas.
Los estndares mnimos son: Sensibilidad >99%y
especificidad >95% preferiblemente validadas en
nuestra poblacin.

Deteccin de
anticuerpos contra el
VIH

Pruebas de
Tamizaje

Sensibilidad

Falsos negativos es bajo

Pruebas de
Confirmacin

Especificidad

Falsos positivos es bajo

Algoritmo de diagnstico por

laboratorio para la infeccin
por el VIH

GRACIAS