ELECTROFORESIS

JARLIN ARRIETA SEGURA

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
ELECTROFORESIS

Es un método de laboratorio en el que se

utiliza una corriente eléctrica
controlada con la finalidad de separar
biomolèculas según su tamaño y carga
eléctrica a través de una matriz
gelatinosa.
FUNDAMENTO

 Moléculas + carga eléctrica, colocadas

en campo eléctrico = fuerza de
atracción al polo opuesto
 Molec. con carga + se desplazan hacia el
cátodo
 Molec. con carga – se desplazan hacia el
ánodo  
 
 La energía cinética de las moléculas
aumenta con la temperatura, por ello a
mayor temperatura mayor difusión.
El movimiento de las moléculas está
gobernado también por dos fuerzas
adicionales:
Lo que genera una fuerza que se opone
al movimiento.
Esto se denomina difusión y sigue la
llamada ley de Fick.
La suma de todas estas fuerzas porvoca
que las moléculas no migren de una
manera homogénea, de tal manera que,si
la moléculas son colocadas en un cierto
lugar de la solución, los iones
comenzarán a moverse formando un
frente cuya anchura aumentrá con el
tiempo
Catalizadores empleados en la
formación del gel de
poliacrilamida
 Persulfato de amonio (agente oxidante)
y TEMED como agente reductor.
 Persulfato de amonio y 3-dimetilamino
propio-nitrilo (DMAPN).
 Peróxido de hidrógeno, sulfato de
hierro y ácido ascórbico.
 La polimerización no ocurre a bajo pH,
ya que requiere radicales de monómeros
libres formados por catálisis básica de
radicales oxígeno del persulfato.
 La fotopolimerización con riboflavina no
es inhibida por el oxígeno, sin embargo,
en ambos casos el TEMED actúa como
agente reductor suave y acelera la
polimerización.
DETERMINACION DE
PROTEINAS
 proteínas no tienen una estructura
predecible como los ácidos nucleicos, y
por tanto sus velocidades de migración
no son similares entre ellas.
 Las proteínas se desnaturalizan
mediante la adición de un detergente
+un agente reductor (dodecilsulfato
sodico y 2-mercaptoetanol)
 Cuando se ha completado la
electroforesis, las moleculas mas
pequeñas han llegado al anodo,hay
revelacion mediante un colorante
especifico
 Tincion de plata
 Azul de coomassie
 Tincion fluerescente
 Las bandas en diferentes separaciones
paralelas que están a la misma distancia
del principio significa que contienen
moléculas que han atravesado el gel a la
misma velocidad
 Las bandas observadas en el marcador
pueden ser comparadas con las obtenidas
en la mezcla desconocida para determinar
su tamaño o punto isoeléctrico
 La electroforesis en gel se utiliza en
biología molecular, genética y bioquímica:
 La electroforesis en gel de muestras
grandes de ADN y ARN se efectúa en
geles de agarosa.
 La electroforesis de proteínas se lleva a
cabo en geles de poliacrilamida-SDS
isoelectroenfoque, geles nativos o
electroforesis bidimensional.
 Electroforesis capilar.
 Extracción en gel.
 Existen 3 formas diferentes de realizar
electroforesis en geles de
poliacrilamida:

 lámina vertical

 varilla cilíndrica

 lámina horizontal.
PLACAS: MONTAJE
 EQUIPO
 REFERENCIAS

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