UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES - CUAUTITLÁN

Alumnos:

Asignatura: Química Analítica III

Reporte practica No. 1

“Determinación espectrofotométrica de Azul de Timol, mediante
una curva de calibración”

Semestre: 2011-I

Carrera: Química Industrial

 Práctica No. 1. “Determinación espectrofotométrica de Azul de Timol,
mediante una curva de calibración”

Objetivos de la práctica
Objetivos generales
• Conocer los fundamentos, partes básicas y el manejo general de espectrofotómetro
molecular a fin de obtener resultados confiables.
• Reproducir el espectro de absorción del azul de timol e identificar la longitud de
onda de máxima absorción.
• Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos para efectuar adecuadamente la
cuantificación del analito mediante una curva de calibración.
Objetivos particulares
• Construir una curva de calibración y emplearla como método para la determinación
de una sustancia de interés, así como conocer las ventajas y desventajas de su uso.
• Relacionar la Ley de Lambert-Beer con la ecuación de una recta, comprendiendo
que dicha ley afirma que la absorbancia es proporcional a la concentración y que
ésta no es la única propiedad que está en función de la misma.
• Distinguir la diferencia entre espectrofotometría y espectroscopía.
• Entender la importancia de identificar la longitud máxima de absorción.

Introducción:
Una de las técnicas de análisis química más empleada, en la industria y la investigación,
son las curvas de calibración que son gráficos que relacionan una propiedad de la sustancia
de interés con la concentración de la misma (resulta un tanto obvio decir que dicha
propiedad debe guardar relación directamente proporcional con la concentración). Existen
varias formas de realizarlas, por mencionar algunas:
Curvas de calibración sin dilución, curvas de calibración con dilución, curvas de
calibración indirectas sin dilución, curvas de calibración por adiciones patrón y
combinaciones de éstas. En la práctica que se realizó se llevo a cabo la construcción de una
curva de calibración sin dilución y la propiedad medida fue la absorbancia y/o
transmitancia (se dice “s” por tratarse de propiedades complementarias y basta con medir
una de ellas para obtener la otra).
Para medir la absorbancia se hace uso de la técnica espectrofotométrica, que se refiere al
uso de la luz para medir las concentraciones de sustancias químicas, el fundamento teórico
es el siguiente:
Fuente de luz Selector de onda Muestra Detector de luz
(monocromador) (Celda)
Determinada energía radiante pasa por la muestra, la muestra absorbe una fracción de luz y
la potencia radiante que sale es menor a la que ingresa. Así exactamente esa cantidad de luz
que la muestra absorbe es la Absorbancia (y la que deja pasar es la transmitancia) y está
relacionada directamente con la concentración debido a que entre más moléculas de la
sustancia estén presentes en la muestra, mayor energía radiante absorberán.
Ahora bien, un indicio de que las sustancias son capaces de absorber radiación en el
intervalo del espectro electromagnético visible, es el color, y las sustancias que poseen
color deben dicha cualidad a contener grupos cromóforos (que contienen electrones de
valencia con energías de excitación relativamente bajas), este caso específico estudiamos al
azul de timol, cuya estructura es:

En la cual podemos ver que posee electrones σ, π y n (libres), y son precisamente los que
participan en las transiciones de energía y que producen el color en la molécula.

Diagrama de flujo:
Determinación
Espectrofotométrica de azul de timol

Preparar soluciones.

NaOH Stock
0.1 de
M Azul de Timol. Pesar 25 mg y aforar a 250 mL con NaOH
Solución
0.1 M
problema.
Pesar 2.0 g y aforar a 500 mL. Se proporcionará por el profesor.

Sistemas.

Aforar a 50 mL
cada uno c/ NaOH
0.1 M
 1 2 3 4 5 6

1 mL 2 mL 3mL 4mL 5mL 6mL

Stock stock stock stock stock stock

Calibración del
espectrofotómetro.

Con el SISTEMA 6 se efectúa el

(Abs vs λ) .

Para ello variar λ en el equipo de

560-720 nm a intervalos de 10
nm; calibrando después de cada
cambio de λ; medir la A y %T
del mismo sistema para cada λ y Comprobar la linealidad de la curva
graficar (medir la A a los sistemas). La A
de la solución problema debe de
estar dentro de los valores de la
curva de calibración.
Identificar λ de mayor
absorción, ponerlo en equipo
y calibrarlo (medir todos los
sistemas)
Para cada sistema medir la A
(diluido al más concentrado),
enjuagando la celda con el
sistema siguiente y graficar

Resultados
Tabla No. 1. Resultados para el espectro de absorción de azul de timol
λ A %T
560 0.596 25.4
570 0.682 20.8
580 0.77 17
590 0.83 14.8
600 0.718 19.2
610 0.61 24.4
620 0.47 33.8
630 0.315 48.4
640 0.194 64
650 0.108 78
660 0.066 85.8
Gráficos del espectro de Absorción y % de Transmitancia de azul de timol
 Tabla No. 2. Resultados obtenidos para las curvas de calibración
Concentración de
Sistema AT (M) A- %T -logT
1 4.28E-06 0.134 73.6 0.133122186
2 8.57E-06 0.266 54.2 0.266000713
3 1.28E-05 0.4 40.2 0.395773947
4 1.71E-05 0.552 28 0.552841969
5 2.14E-05 0.684 20.8 0.681936665
6 2.57E-05 0.815 15.4 0.812479279
Problema 0.287 51.6 0.287350298
* Los cálculos para las concentraciones de AT están en el anexo A.
Gráficos de las curvas de calibración

Análisis de resultados

Determinación de la concentración de la muestra problema

La ley de Lambert-Beer es: A=εbC
Relacionándola con la ecuación de la recta es: A=εC+b
Despejando la concentración:
C=Aε-b

Por el método de mínimos cuadrados o regresión lineal se obtiene la ecuación de la curva

de calibración A = f(M de azul de Timol); y=32050x-0.0053, R2 =0.9996
Donde:
y=Aabsorbancia, adimensional
32050= ε coeficiente de absortividad,Lmol
x=C concentración, M,mol/L
-0.0053=b indicador de errores de calibración, dimensiones de la propiedad
R2 = Coeficiente de correlación (confirma la linealidad de la recta)
En este caso b “se desprecia” ya que el valor de la celda es de 1cm (pero existen celdas con
otras dimensiones).
Sustituimos los valores de la ecuación de la recta y la absorbancia de la muestra problema
diluida para obtener su concentración:
C=0.28732050+0.0053=5.3089x10-3M

Utilizando el principio de equivalencia se obtiene la concentración de la muestra real:

*Decidimos efectuar una dilución de la muestra problema para obtener un valor de absorbancia que estuviera
dentro del rango de nuestra curva de calibración, de acuerdo al color que observamos, recordando también
que la Ley de Beer tiene limitaciones en soluciones concentradas.
Datos:
C1 = X V1 = 6ml C2 = 5.3089x10-3M V2 = 50ml
C1=C2V2V1
C1=5.3089x10-3(50)6=0.0442M

El procedimiento es el mismo para la curva de calibración -logT = f(M de Azul de Timol)

Ecuación: y=31989x-0.0059, R2 = 0.9994; A=εC+b
Sustituyendo en la ecuación de Beer para obtener la concentración de la muestra problema
diluida:
C=Aε-b

C=0.28731989+0.0059=5.91x10-3M

Utilizando el principio de equivalencia se obtiene la concentración de la muestra real:

C1=5.91x10-3(50)6=0.0492M

Sabiendo que R2≈1 de ambas curvas de calibración podemos decir que son confiables para
la determinación de azul de timol.
Al comparar las curvas de calibración podemos observar que son similares, esto es porque
el –logT = A. La diferencia entre las curvas radica en que el espectrofotómetro no
proporciona valores de más de tres cifras significativas para la Absorbancia e indica el %
de Transmitancia pero como podemos observar la diferencia es muy pequeña, además de
que los gráficos son muy similares debido a que la Absorbancia y la Transmitancia son
propiedades complementarias (mas no iguales).

Conclusiones
• Los objetivos planteados fueron cumplidos satisfactoriamente, ya que comprobamos
que una curva de calibración es muy confiable si cumple con los requerimientos
(Utilizar soluciones diluidas, crear al menos 6 soluciones estándares, R2≈1, entre
otros).
• Se aprendió a utilizar el espectrofotómetro así como su fundamento teórico.
• Se construyó correctamente la curva de calibración para la precisa cuantificación
del azul de timol en la muestra problema.
• Se aprendió que las curvas de calibración pueden ser usadas para distintas muestras
problema, mientras que el valor de la propiedad medida se encuentre dentro del
rango que tiene la curva de calibración.
• Para la correcta construcción de la curva de calibración se debe de elegir la longitud
de onda correcta para producir la mejor linealidad, en caso de la medición de una
sola substancia la longitud de absorbancia máxima constituye la mejor selección,
por otra parte si se trata de una mezcla de substancias se debe tomar en cuenta la
longitud de absorbancia con menor interferencia. En este caso se eligió 590nm y se
debió a que el azul de timol presenta una coloración “azul en pH básico” cuyo color
complementario es el naranja y su longitud de onda es de 580-680nm.
• La espectroscopía es el estudio que engloba todas las técnicas que se basan en la
medición de espectros, mientras que la espectrofotometría es una técnica
espectroscópica que mide transmisiones fotónicas (la absorción o transmisión de
luz) de una sustancia ya que aprovecha el intercambio de energía entre la radiación
electromagnética y la materia, todas las sustancias tienen una absorción o
transmisión únicas.
• A pesar de ser un método muy confiable, la espectrofotometría tiene su fundamento
en la ley de Lambert-Beer y esta tiene sus limitaciones (solo sirve para soluciones
diluidas <0.01 M) ya que relaciona la Absorbancia directamente con la
concentración.
• Las sustancias que poseen color absorben en la región del espectro electromagnético
visible (380-800nm). Mientras que las que no lo poseen absorben en la región UV
(10-380nm).
Bibliografía:

HARRIS Daniel C., “Análisis Químico Cuantitativo”, 2ª, Reverté, España 2001, 97-98
pp.
SKOOG Douglas A., et al. “Principios de análisis instrumental”, 5ª, Mc Graw Hill,
España 2001, 353-360 pp.
SKOOG Douglas A., et al. “Fundamentos de química analítica”, 5ª, Thomson, México,
2005, 727-729 pp.
WILLARD Hobart H., “Métodos instrumentales de análisis”, Continental, México
1978, 110-111 pp.
*ANEXO A. Cálculos para obtener la concentración molar de Azul de Timol y de los
sistemas estándares.

[Azul de timol] = 0.025 g AT x 1 mol = 2.1431 x 10 -4 M

0.25 L 466.6 g

Csis 1 = (2.1431 x 10 -4 M) (1 mL) = 4.2862 x 10-6 M

50 mL

Csis 2 = (2.1431 x 10 -4 M) (2 mL) = 8.5724 x 10-6 M

50 mL

Csis 3 = (2.1431 x 10 -4 M) (3 mL) = 1.28586 x 10-5 M

50 mL

Csis 4 = (2.1431 x 10 -4 M) (4 mL) = 1.71448 x 10-5 M

50 mL

Csis 5 = (2.1431 x 10 -4 M) (5 mL) = 2.1431 x 10-5 M

50 mL

Csis 6 = (2.1431 x 10 -4 M) (6 mL) = 2.57172 x 10-5 M

50 mL