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a.) BASE TEÓRICA

Los preparados en fresco o en seco, son métodos de análisis que nos van a
permitir, gracias al microscopio y otras herramientas de laboratorio, la
visualización de una complejidad de elementos que a simple vista no son
captados por el ojo humano.

Desde la invención del primer microscopio, se tenía una idea de la

existencia de organismos cuantiosamente pequeños, pero con el tiempo
surgió algo más sofisticado: ³el microscopio electrónico ´. Ahora sí era posible
visualizar subestructuras, líquidos e incluso la verdadera forma del objeto e n
observación; cosas que no se podían apreciar con verdadera exactitud
antiguamente.

Pero no solo este instrumento ayudaba en la visualización de

elementos muy pequeños. Había que valerse de ciertos procedimientos que
permitieran una mejor proyección de la imagen en la lente del microscopio.
Uno de ellos vendría a ser ³los preparados´, ya sea en fresco o en seco, y
que iban a jugar, por separado, un papel preponderante en una investigación
microscópica.

b.) IMPORTANCIA
Si no hacemos ninguna especie de ³preparado´ antes de hacer una
observancia de cualquier elemento al microscopio, no sería posible la
completa visualización del objeto en mención.

Por ejemplo, esto ha servido de gran ayuda en el campo de la medicina

y la biología; principalmente en lo que a pruebas y análisis de sangr e se
refiere, un ³preparado en fresco´ permitía hacer un recuento de sus diversos
 elementos formes y así poder descartar cualquier anormalidad en el principal
fluido corporal. A la vez, permitió hacer un reconocimiento del ADN de cada
individuo con un simple ³raspado bucal´, gracias al gran aumento de la lente y
al ³preparado en seco´, las cuales nos daban una identificación de cada
persona con su respectivo código genético.

La utilización de los instrumentos en el laboratorio, son de gran ayuda

no solo en un campo científico sino en muchos, ya que cualquier método de
observación microscópica va a tener como base a un preparado y a la
utilización de materiales que se van a complementar con el microscopio.

c.) OBJETIVOS

þ Describir y utilizar a los instrumentos que participan en un preparado e n

fresco o en seco, y el procedimiento para su elaboración.

þ Reconocimiento y manejo del microscopio en la visualización de

microorganismos y elementos formes.

þ Reconocer el campo de amplitud de un microscopio compuesto y qué

utilidad le podemos aplicar.
  





a.) MATERIALES
þ Aguja y jeringa.
þ Liga.
þ Láminas y Laminillas
þ Tubo de ensayo.
þ Centrífuga.
þ Muestra de sangre.
þ Azul de metileno
þ Solución salina (NaCl) al 0.9 %
þ Microscopio compuesto.

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b.) MÉTODO
En el laboratorio se realizó la extracción de sangre venosa a un compañero
para la demostración de cómo hacer un preparado en fresco, para ello se
realizaron los siguientes pasos:

1. En primer lugar, y por separado, se agregó en un tubo de ensayo el

anticoagulante ³heparina´, y se hizo una pequeña sacudida a este para
poder esparcir el anticoagulante por casi toda su área interna .
2. Por otro lado, al compañero s e le sujetó una liga al brazo haciendo
presión, para evitar un rápido retorno de la sangre y notar una hinchazón
de la vena, esto iba a permitir saber cuál era el punto de aplicación de la
aguja para la extracción de sangre.
3. Por otro lado se le realizó asepsia al brazo con algodón y alcohol,
tratando de limpiar toda la región cutánea donde se iba a realizar la
extracción de sangre.
4. Se colocó adecuadamente el casquillo de la aguja a la jeringuilla hasta
encajar correctamente, tratando de que el bisel de la punta quedara
expuesto hacia la parte superior cuando iba a ser penetrada en tejido
cutáneo.
5. Se extrajo cierta cantidad de sangre hacia la jeringuilla.
6. En el tubo de ensayo anteriormente mencionado, se mezcló la sangre
con la solución salina (NaCl) al 0.9% y el anticoagulante.

A partir de este punto, el procedimiento se divide en dos:

Observación de la muestra en el microscopio sin ³azul de metileno´

7. Se colocó una gota de sangre en la lámina portaobjeto y luego se la
cubrió con una laminilla, se presionó ligeramente para eliminar las
burbujas que se pudieran formar, logrando así la expansión de la gota de
sangre.
8. Por último se llevó al microscopio para su visualización.
 Observación de la muestra en el microscopio con ³azul d e metileno´
9. Nuevamente una gota de sangre se colocó en la lámina, esta vez se le
agregó un pigmente denominado ³azul de metileno´, y al igual que el
procedimiento anterior, se le cubrió con una laminilla .
10. Y este preparado se llevó al microscopio.

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      el procedimiento más usado para su

utilización es ³El raspado bucal´. Que consta de los siguientes pasos:

þ Se realiza un frotis de mucosa bucal con un hisopo de madera.
þ Se coloca una muestra recogida por el hisopo en el porta objetos, y esta
muestra se fija a temperatura ambiental o se lleva al fuego a 30º C .
þ Se le aplica una coloración, un lavado, un secado y luego pasa a
observación.
þ Si se requiere una visualización con mayor aumento se puede utilizar el
pigmento ³aceite de inmersión´ el cual nos permitiría realizar una
observación en el microscopio de hasta ³1000 X´.

3. RESULTADOS
En el microscopio se pudo observar con gran facilidad a los elementos formes de
la sangre, ambos en solución salina (NaCl al 09%) . Pero por una parte se realizó
una observación: 1) sin el pigmento respectivo; y 2) con el pigmento azul de
metileno.

1) Observación realizada sin ningún pigmento: Se puedo apreciar una gran

cantidad de glóbulos rojos pero demasiado juntos, no se logró distinguir muy bien
uno de otros.

2.) Observación realizada con el pigmento ³azul de metileno´ : En esta caso se

pudo ver con mayor exactitud a los glóbulos rojos, e incluso hasta la forma que
tenían.
 3.) Hubo una cantidad de sangre que con anterioridad a estos experimentos se
depositó en un tubo de ensayo para ser llevada a centrifugación. Después de un
lapso fue quitada la muestra de la centrífuga para su observación y se pudo
visualizar dos fases en el tubo ensayo: en la parte superior un líquido de color
claro amarillento que constituía el plasma y en la parte baja los glóbulos rojos.

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4. DISCUSIONES

Los colorantes usados en el laboratorio son cierta especie de líquidos que tienen
diferentes capacidades para dar color, permiten una mejor observación de los
organismos vistos en el microscopio y mejor aún no alteran la composición o
funcionamiento del objeto en cuestión. Gracias a estas propiedades es que se
utiliza, en este caso, para muestras de sangre en un preparado en fresco, como
se hizo en el laboratorio para la segunda muestra.

El preparado en fresco hecho en el laboratorio nos permitió visualizar

de manera significativa a los glóbulos rojos. Se mezcló la sangre con la solución
salina al 0.9%, esto debido a que el plasma t iene la misma osmolalidad
(concentraciones de sustancias disueltas en la sangre). Si bien es cierto, aún
 con esta mezcla, la visualización en el microscopio era muy desordenada, pero
una vez que se aplicó ³el azul de metileno´ la imagen quedó perfectamente
distinguida, se podía observar a los glóbulos rojos más ordenados y separados
que los vistos sin pigmentación.

En lo que respecta a las muestras sanguíneas en estudios de

laboratorio, existen diversos métodos para su obtención. En este caso la técnica
empleada para la extracción de sangre, fue la de ³venopunción´, es decir, su
extracción de una vena con una jeringa hipodérmica provista de aguja. Al sujetar
la liga alrededor del brazo en plano proximal al sitio de la venopunción, la sangre
se va a acumular en el vaso correspondiente a la pinchadura, este aumento de la
volemia local hace que la vena sobresalga, lo cual se intensifica al abrir y cerrar
el puño, y así facilitar la venopunción.

5. CONCLUSIONES

U Cualquier elemento de laboratorio es indispensable para la obtención «

U Cabe resaltar la importancia del microscopio como instrumento de laboratorio.

Sin su utilización como objeto de visualización no se podría observar a los
microorganismos más minúsculos que puedan existir. Sus partes y sus
funciones están en especial, elaboradas para este tipo de experimentos. Con
su amplia gama de aumentos nos es posible saber de mundos que el ojo
humano no puede darnos a conocer.

U La observación que haríamos con un microscopio compuesto nunca va a ser

la misma de la que podríamos hacer con un microscopio electrónico. El
segundo supera ampliamente al primero, incluso hasta en 1000 veces mayor
su poder de resolución. Pero fue gracias al primero que permitió dar a
conocer al hombre un micro mundo que nunca se hubiese podido imaginar.
6. BIBLIOGRAFÍA
þ TORTORA GRABOWSKY. Principios de Anatomía y Fisiología. Novena
Edición.
þ CHANG, REIMOND. Química. Novena Edición.
þ Biblioteca Multimedia de Consulta Encarta 2008. Microsoft Corporation.