Universidad Central de Venezuela

Facultad de Medicina
Escuela de Bioanálisis
Cátedra de Bioquímica “C”

Estudio del funcionalismo

Hepático en el Laboratorio
Clínico

Integrantes:
Chrystiam Sorondo
Lusiana Rangel
Yenireth Martinez
 Bilirrubina.
Producto del catabolismo del grupo heme.

250-300 mg por día.

 80% Hemoglobina.
20% enzimas, proteínas,
mioglobina y citocromos.
 Síntesis de bilirrubina
(reacciones enzimnticas).
Oxigenasa.
Heme Biliverdina

Reductasa.

Bilirrubina.
Trasformación de Biliverdina a
Bilirrubina

Biliverdin
a

Bilurrubina
 No Conjugada ó
Indirecta

95 % Unida a Albúmina.

Bilirrubina.

Conjugada ó
Directa
Bilirrubina Conjugada.
Ácido
glucurónico

Transferasa de
UDP-
glucuronilo

Bilirrubina diglucurónida
Bilirrubina Sérica.

Descomposición.
Producción.
Depuración.
 Medición de Bilirrubina.
Van den Bergh y Snapper. 1913.
Modificación de Jendrassik y Grof.
Recomendada por NCCLS.
La bilirrubina conjugada (directa) se copula con
el ácido sulfanílico diazotizado (nitrito de sodio)
en ácido clorhídrico para formar un complejo
coloreado que es medido a 540nm.
 Método de Jendrassik y
Grof.
Para determinar Bilirrubina no conjugada, ésta
debe hacerse soluble en agua, mediante el uso de
un acelerador.
Reacción química que usa al óxido nitroso (N2O)
para formar un complejo de color (Azobilirrubina)

Bilirrubina No conjugada =
Bil (t) – Bil (conj).
Método de Jendrassik y Grof.
Procedimiento:

Bilirrubina Total
Calibrador (10
  Blanco mg/dL) Muestra
Reactivo "Total"
(ml) 1.0 1.0 1.0
Oxidante (gotas) 1 1 1
Agua (ml) 0.05 - -
Calibrador (ml) - 0.05 -
Muestra (ml) - - 0.05

Incubar a T.A por 5 min MÍNIMO.

Leer a 540 nm antes de 30 min.
 Método de Jendrassik y Grof.
Bilirrubina Directa
Calibrador
(10
mg/dL) Blanco
  Blanco Mx. Muestra
Reactivo “Directa"
(ml) 1.0 1.0 1.0 1.0
Oxidante (gotas) 1 1 - 1
Agua (ml) 0.1 - - -
Calibrador (ml) - 0.1 - -
Muestra (ml) - - 0.1 0.1

Incubar a T.A por 3 min EXACTOS.

Leer a 540 nm rápidamente. (puede haber sobreestimación por
bilirrubina indirecta.)
 Otros Métodos.
Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).

Cromatografía en capa fina.

 Variables.
 Pre-analíticas.

 Analíticas:
Hemólisis, lipemia, luz, conservación,
temperatura, tiempos de reacción.

 Post-Analíticas.
Bilirrubina Delta
Bilirrubina que se une covalentemente con la
albúmina, que no se disocia y no aparece en la bilis.

Tiene una vida media de 15 a 20 días.

Se encuentra
 Bilirrubina Delta
Delta Biliproteína

Complejo
Albúmina-Bilirrubina
Unido covalentemente

NO ES
HIDROSOLUBLE
Metabolismo de la Bilirrubina Delta
 Análisis de Bilirrubina Delta
Actualmente la determinación de Bilirrubina en
muchos laboratorios de rutina se hace mediante las
reacciones con la prueba Diazo:

Bilirrubina de reacción directa Conjugada

Bilirrubina de reacción indirecta NoConjugada

 Determinación de fracciones de
Bilirrubina por HPLC
Lauff, en 1982 separó las fracciones de
Bilirrubina mediante esta técnica.
◦ Alfa No conjugada
◦ Beta Monoconjugada
◦ Gamma Diconjugada
◦ Delta Biliproteína
 Determinación de fracciones de Bilirrubina
por Tecnología de Slide Seco o
Microslides

Bilirrubina Delta = Bilirrubina Total – (B conjugada + B no

conjugada)
 Utilidad Clínica
Normalizado la
Responsable
función hepática

Se evalúa su relación con respecto a la bilirrubina directa en procesos colestásicos

y hepatobiliares.
Caso clínico.