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Pruebas Bioquímicas Para

Enterobacterias
Fundamentos

Eduardo Bermudez Chavez 1


IMVIC
• INDOL
• ROJO DE METILO
• VOGES PROSKAUER
• CITRATO DE SIMMONS

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Medio SIM
• INDOL
• ACIDO SULFIDRICO
• MOVILIDAD

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SIM
INDOL
• Para identificar el Indol, el medio tiene peptonas,
y el aminoácido triptófano el cual si las
bacterias tienen la enzima triptofanasa hace
que se libere el indol (grupo funcional del
triptofano).
• Si se libera el indol, éste reacciona con
Paradimetil Benzaldeido (Kovac)
• Color Rojo  positivo
• Color Amarillo  Negativo (no se liberó indol
porque la bacteria no tiene triptofanasa)

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SIM
ACIDO SULFHIDRICO H2S
• El medio tiene tiosulfato, el cual libera
ácido sulfhídrico que es un gas. Éste
reacciona con la Sal de Hierro y forma un
precipitado negro que es sulfuro
ferroso.
• Color Negro  Positivo (debido al
precipitado)
• Sin precipitado Negro  Negativo.

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SIM
MOVILIDAD
• Movilidad Negativa: Si la cepa crece solo
en la picadura es inmóvil.

• Movilidad Positiva: Si crece en todo el


medio, es móvil.

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MR - VP
• Es un caldo glucosado

• PRUEBAS QUE SE REALIZAN:


• ROJO DE METILO
• VOGES PROSKAUER

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MR - VP
ROJO DE METILO
• Algunas bacterias obtienen energía de la
glucosa del medio. Se forma piruvato
(ácido piruvico) y toma diferentes vías:
• algunas bacterias fermentan (se usan en
productos lácteos)
• otras forman alcoholes (levaduras)
• Otras utilizan el ciclo de krebs.
• En otras hay vías que producen ácidos
mixtos.
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MR - VP
ROJO DE METILO
• Las que producen ácidos mixtos,
acidifican el medio (bajan el pH)
• Estas bacterias son rojo de metilo
positivas.
• POSITIVO  Color Rojo
• NEGATIVO  Color Amarillo

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MR - VP
VOGES PROSKAUER
• Esta prueba se utiliza para ver la producción de
Acetoína (Acetil Metil Carbinol)
• Se le agregan 6 gotas de Alfa Naftol que es un
catalizador.
• Al agregar 3 gotas de sosa o potasa reacciona
con la Acetoìna y forma un precipitado:
• POSITIVO  Color ROJO
• NEGATIVO Amarillo, café, oscuro.
(dependiendo la antigüedad del reactivo)
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AGAR CITRATO
(CIT)
• Este medio no tiene carbohidratos
• Tiene Azul de Bromotimol como Indicador
• La prueba es para ver si la bacteria utiliza como
fuente de carbonos al citrato, el cual se
encuentra en el ciclo de krebs.
• El medio tiene Citrato de Sodio y Sal de Amonio.
• Si utiliza el citrato Ver resultados en el bisel
(porque es en el ciclo de krebs, oxidativo):
• POSITIVO  Color Azul
• NEGATIVO  Color Verde (original)
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CIT
• También puede cambiar de color i utiliza la sal
de amonio (NH4), porque se alcaliniza el medio:

• Color Azul  Cit POSITOVO (pH Acalíno)


• Color Verde Cit NEGATIVO (Neutro)
• Color Amarillo Cit NEGATIVO (ácido)

• Puede no cambiar de color, pero si hay


crecimiento es positivo, ver otras pruebas.
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TSI
• Tiene Glucosa, lactosa, sacarosa, azufre,
y sal de hierro.

• Se realizan las pruebas:


• Fermentación de glucosa
• Fermentación de lactosa
• Ácido sulfhídrico
• Gas de Glucosa
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TSI
• Color original sin sembrar: Rojo (Naranja)
• Gas de Glucosa positivo  Formacion de
burbuja pequeña o botado del medio.
• H2S positivo  Precipitado Negro.

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TSI
• FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS
• Fondo Amarillo  Glucosa +
• Bisel Rojo  Lactosa - , Sacarosa –

• Bisel Amarillo y Fondo Amarillo  GLuc + Lac +


y Sac+.

• El medio tiene 1 g de glucosa, 10 gramos de


lactosa y 10 gramos de sacarosa, por litro.
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LIA
• Este medio, tiene peptonas y aminoácidos
(lisina).
• Se realiza la prueba:
• H2S (mismo fundamento)
• Descarboxilación de Lisina. (o desaminación)
• La prueba consiste en buscar la enzima lisina
descarboxilasa de ciertas bacterias la cual
descarboxila a la Lisina (aminoacido).

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LIA
(Descarboxilación de Lisina)
• Al descarboxilar queda solo la amina
(putresina o cadaverina). La cual da al
medio un pH alcalino.
• POSITIVO  Color Morado (alcalino)
• NEGATIVO  Color Amarillo (ácido).
• Cuando hay mucho ácido el bisel también
es amarillo.

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LIA
(Desaminación de Lisina)

• proteus no descarboxila, solo desamina y se


forma:
• Un ácido débil que reacciona con la sal de hierro
y forma complejo naranja.
• Y un amonio que alcaliniza el medio y da un
color morado.
• En conjunto se forma un color púrpura o rojo en
el bisel.
• (solo en proteus que es lisina -)
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MIO
El Medio tiene:
• Color Original  Morado (ligeramente Alcalino)
o Blanco (muy alcalino)
• Glucosa (original pH >7, cuando se utiliza la
glucosa el pH vuelve a 6.5)
• Tiene púrpura de Bromocresol como indicador.

PARA VER
• Movilidad (mismo fundamento)
• Indol (mismo fundamento)
• Descarboxilacion de Ornitina (ODC)

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MIO
Descarboxilacion de Ornitina
• La ornitina descarboxilasa es una enzima
que actúa a pH 6.5
• Si la bacteria tiene ésta enzima
descarboxila al aminoacido ornitina y
también se desamina al mismo tiempo.
• Los productos son CO2 + H2O + AMINA
(putresina o cadaverina) los cuales son
compuestos alcalinos.
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MIO
Descarboxilación de Ornitina
• Debido a los productos alcalinos se
alcaliniza el medio y los resultados son:
• Positivo  Color Morado (Alcalino)
• Negativo  Amarillo (ácido)

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CALDO MALONATO (MAL)
Malonato
• El fundamento es igual al citrato.
• Para ver si utiliza al malonato como fuente
de carbonos.

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CALDO UREA
• Caldo Original Color Amarillo
• TIENE
• Rojo fenol como indicador
• Peptonas
• Carbohidratos como fuente de C.
• UREA

• FUNDAMENTO: Ver la hidrólisis de la urea.

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UREA
• Ver si la bacteria tiene la enzima Ureasa
que hidroliza la urea y produce
amoniaco.
• Si se produce Amoniaco es Positivo.
• Positivo Rojo o Rosa Mex (Alcalino).
• Negativo Color Amarillo(Acido).

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AGAR FENILALANINA
FAD
• Ver la desaminación de la Fenilalanina
(aminoácido).
• Algunas bacterias tienen la enzima fenilalanina
desaminasa, que actua sobre la fenilalanina.
• Se produce acido fenil pirúvico.
• Este reacciona con el cloruro férrico. Y da
coloración verde.
• Positivo  Color Verde
• Negativo  Color Amarillo (original).
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FOTOS DE RESULTADOS

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