I.

1 Normas de Bioseguridad. Uso del

Microscopio
INTRODUCCIÓN
Esta práctica se ha diseñado para conocer y enfatizar en las normas de seguridad,
utilizados en el desarrollo de los laboratorios de microbiología, que el estudiante deberá
tomar en cuenta en el transcurso de un laboratorio, esto con el único fin de resguardar la
bioseguridad individual y colectiva del grupo. Se incluye en esta práctica también el recordar
algunos elementos básicos de biología adquiridos por el estudiante, tal como el uso del
microscopio, equipo que será muy utilizado en los laboratorios.

II. OBJETIVOS
Al finalizar el estudiante será capaz de:
a) Explicar correctamente las normas de bioseguridad que debe de tomar en
cuenta en el desarrollo de los laboratorios de Microbiología.
b) Describir las diferentes partes del microscopio, la función y el uso adecuado
de este.

III. MATERIALES Y EQUIPO A SUMINISTRAR PARA CADA GRUPO

- un microscopio por lado de mesa
- un frotis coloreado de Bacillus subtilis ó Escherichia coli
- Portalaminas
- Papel limpialentes

IV. MATERIALES QUE TRAERA EL ESTUDIANTE:

Gabacha, guantes descartables, lentes protectores, mascarilla corrientes, lápiz
graso, papel toalla, bolsa plástica (para guardar gabacha) y cerillos.

V. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
a) ORGANIZACION DEL LABORATORIO
Su instructor le hará una breve descripción de la organización de los laboratorios así
como la ubicación del equipo, algunos materiales y reactivos a utilizar.
-Ubicación de microscopios, incubadoras y baño de maría.

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b) NORMAS DE SEGURIDAD BÁSICAS EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
Todo estudiante debe tener presente que durante el desarrollo de las prácticas de
laboratorio estará manejando material infeccioso o potencialmente infeccioso, y que es
preciso que guarde estrictamente un mínimo de normas de seguridad para su protección y
la de sus compañeros.

1. El equipo personal de seguridad básico consta de: gabacha manga larga,

guantes, mascarilla y lentes. La gabacha deberá estar confeccionada
preferentemente con tela resistente a la penetración de líquidos, manga larga y que
cubra hasta la rodilla. Debe utilizarse en todo momento en forma abotonada y
mantenerse limpia.

2. La costumbre estudiantil de utilizar la gabacha como mantel, sábana y/o

colchoneta (entre otros) es una práctica anti-profesional y desde todo punto de vista
reprochable. En áreas no contaminadas como comedores, bibliotecas, auditorios,
salas de reuniones, etc. NO DEBERA USAR LA GABACHA DE LABORATORIO.

3. Una vez terminada la práctica, la gabacha deberá llevarse a casa en bolsa

plástica para ser lavada en forma individual.

4. Durante el desarrollo de su trabajo evite el contacto de cualquier material

presumiblemente contaminado con las manos, boca, ojos, nariz, cara y cabello, ya
que corre el riesgo de contaminación.

5. Si accidentalmente se contaminara los ojos con algún cultivo, enjuáguese

inmediatamente con abundante agua tibia. Sí en el caso fuese la boca, enjuáguese
con solución débil de peróxido de hidrógeno 1%. (Solicítela a su instructor).

6. Coloque sus objetos personales (libros, mochilas, etc) en la zona especificada por
su instructor. Nunca los deje amontonados en el área de trabajo ya que pueden
contaminarse al quedar expuestos a los cultivos microbianos o a muestras clínicas.

7. Mantenga sus uñas recortadas y evite durante el trabajo, el uso de anillos,

pulseras u otras prendas que puedan contribuir a su contaminación.
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8. No deberá fumar, maquillarse, hablar por celular o manipular dispositivos
electrónicos, comer, masticar chicle o beber durante y en el área de laboratorio.

9. Desinfecte adecuadamente las mesas de trabajo antes y después de cada

práctica.

10. El lavado de manos es obligatorio al finalizar su trabajo y antes y después de

quitarse los guantes, especialmente si estos se rompieran o tuvieron alguna filtración
o bien al finalizar su trabajo.

11. En caso de romper un tubo, caja de Petri u otro frasco que contenga
microorganismos o que se derrame su contenido, comuníquelo inmediatamente al
instructor (Si no lo comunica la responsabilidad de contaminación será del
estudiante), auxilie a su instructor según las indicaciones que reciba y cubra el
material derramado con desinfectante, coloque un papel absorbente encima y espere
de 10 a 15 minutos. Después remueva todo el material y descártelo en un recipiente
especial para material contaminado.
En caso de que el tubo tenga un microorganismo patógeno que se transmita
por aerosoles, deberá comunicarlo inmediatamente a su instructor. El instructor
comunicará a todos estudiantes que se retiren del laboratorio y no volverán a entrar
hasta esperar la intervención de personal auxiliar del Departamento para eliminar la
posible contaminación.

12. Todo material en uso que presuma está contaminado (pipetas, cajas de Petri,
tubos, láminas, etc.), deberá ser colocado, al terminar de usarse, en los depósitos
especiales para cada caso. Identifique la ubicación de los recipientes por su rótulo

13. Si sus manos o ropa se contaminan por accidente, pida la colaboración de su

instructor para que se le aplique el antiséptico correspondiente; no intente hacerlo
usted pues posiblemente contaminará el frasco que lo contiene.

14. Las bacterias en un frotis fijado sin colorear pueden no estar muertas, por lo tanto
manéjelos con cuidado.

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15. Se evitarán contaminaciones indeseables si se mantiene el material de laboratorio
en el sitio asignado y si Ud. No coloca ningún artefacto (libro, manual, cuaderno, etc.)

16. El agua de lavado que se acumula en las bandejas de coloración debe

descartarse en el resumidero del lavabo abriendo el grifo para dejar correr el agua.

17. Para evitar accidentes graves verifique la ubicación de las salidas de emergencia
y del extintor de incendios. Ante una emergencia ayude a quien lo requiera.

c) USO DEL DESINFECTANTE

Siempre debe aplicarlo sobre su mesa de trabajo tanto al iniciar y como al
finalizar su práctica de laboratorio. Los desinfectantes tienen diferente naturaleza
química y concentración y se aplican sobre objetos o materia inerte con el fin de
eliminar microorganismos, en especial los patógenos. Los que más se utilizan son el
cloruro de benzalconio al 0.1 % y el fenol al 5%. Deben almacenarse en frascos bien
rotulados y de fácil aplicación; se distribuye uniformemente sobre la mesa con una
esponja de hule. No utilice el desinfectante en volúmenes o cantidades demasiado
pequeñas; pero tampoco exagere. Úselo de manera racional y recuerde que la
efectividad descansa en su naturaleza y su concentración, pero también en el tiempo
en que éste permanece en contacto con el objeto contaminado. Por su carácter
irritante los desinfectantes deben manipularse con precaución, por lo que es
recomendable lavarse bien las manos con abundante agua y jabón después de
utilizarlos.

d) USO DEL MECHERO

Para encender el mechero debe ser muy cuidadoso. Funciona a base de gas
propano y el flujo está regulado por medio de dos válvulas; una adaptada a la tubería
central y la que trae el mechero. Cuando se va a utilizar, deben tenerse en mente
ciertas recomendaciones:
9 Cerciórese o revise de que ambas válvulas estén cerradas y de que la
manguera o tubo que facilita el paso del gas desde la tubería al mechero, esté
en buenas condiciones.
9 Colóquelo a una distancia aproximada a los 25 centímetros de la orilla de
su mesa de trabajo; en caso de emergencia, esta distancia le permitirá cierto

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 9 Encienda el mechero colocando el chispero o el fósforo encendido, a un
lado del tubo y cercano a la boquilla del mismo; nunca sobre la boquilla.
9 Apague el mechero inmediatamente después de finalizado su trabajo. No lo
deje encendido sin ninguna utilidad.
9 Pida a su instructor que le explique cómo usar la llave piloto del mechero

e) COMO ESTERILIZAR EL ASA BACTERIOLÓGICA.

Este procedimiento utiliza el principio de incineración para esterilizar
materiales Sentado en posición correcta frente al mechero, tome el asa por el mango
y lleve el extremo contaminado hacia el centro de la llama. Cuando se haya tomado
un color rojo vivo, levántela lentamente hasta que todo el alambre haya tomado ese
color. Realizado este paso, el asa debe permanecer en el área del mechero sin hacer
contacto con ningún tipo de superficie. Si no se cumple lo anterior, debe esterilizarla
de nuevo.

f) USO DE DESCARTES
Todo material o artículo que haya terminado su vida útil en una determinada práctica
o técnica, debe descartarse de inmediato en su respectivo lugar. Sobre la mesa de
trabajo así como también en sus proximidades, encontrará varios depósitos, la
mayoría de los cuales sirven para colectar el material a descartar. Sobre la mesa
encontrará frascos que contienen agua jabonosa o con desinfectante, estos sirven
para descartar láminas y laminillas; depósitos metálicos para aplicadores de madera y
en las proximidades, baldes para material contaminado y basura: además de
bandejas para colorear.
Si ha utilizado portaobjetos y cubre-objetos en un montaje, al momento de
descartarlas, sepárelas con un palillo o con un objeto similar de manera que sean
depositados en el lugar adecuado.

g) INFORMACION SOBRE EL MICROSCOPIO

Del microscopio corriente se conocen dos tipos: El Simple y el Compuesto. Los
microscopios simples son instrumentos que solo sirven para amplificar las imágenes de
los objetos a investigar, ejemplo: las lupas. Los microscopios compuestos son aquellos en
los que se incluyen estructuras de soporte y elementos que son capaces de amplificar,
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clarificar e identificar estructuras que no se pueden observar con uno simple. En estos
últimos se incluyen lentes ópticos, iluminación y partes mecánicas de ajuste. El
microscopio compuesto consta de tres sistemas: a) mecánico, b) óptico y c) iluminación.

a) Sistema Mecánico
Este sistema contiene las siguientes partes:
PIE: La base que sostiene el aparato para situarlo.
BRAZO: Se utiliza para trasladarlo de un lugar a otro.
TUBO ESTATIVO: Mantiene fija la distancia entre el ocular y el objetivo.
TORNILLO MACROMETRICO: logra movimiento grande y enfoque aproximado.
TORNILLO MICROMETRICO: para movimiento fino y enfoque exacto (nitidez).
REVOLVER: Sostiene los objetivos y permite los cambios de uno a otro objetivo.
PLATINA: Placa que sostiene la preparación y permite el paso de luz.
CARRO: Sirve para mover la preparación; se logra desplazamiento de izquierda a
derecha y de adelante hacia atrás y viceversa.
CREMALLERA DEL CONDENSADOR: Sube y baja el condensador.
b) Sistema Óptico
Este sistema está formado por:
OCULARES: Lentes que están en la parte superior del tubo estativo y permite al
observador ponerlo al contacto directo con el ojo.
OBJETIVOS: Juego de lentes situados en el revólver: panorámico 4X, seco débil 10X,
seco fuerte 40X, e inmersión 100X.
CONDENSADOR: Lentes que permiten concentrar los rayos de luz procedentes de la
fuente de iluminación.
c) Sistema de iluminación
FUENTE DE LUZ: La fuente de iluminación de los microscopios es una lámpara, la luz
emitida por esta fuente pasará por el diafragma y condensador. Si las lentes están
sucias, húmedas o rayadas, la imagen será oscura y la observación del objeto en
estudio será difícil.
DIAFRAGMA: Dispositivo unido al condensador, amplía y disminuye la apertura.
FILTRO: Vidrio unido al condensador, Atenúa la intensidad de luz y selecciona los
rayos luminosos.

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 DESARROLLE EL HABITO DE LIMPIAR LOS OCULARES Y LOS OBJETIVOS
CADA VEZ QUE USTED USE EL MICROSCOPIO. Siempre use papel
especializado para limpiar lentes, NUNCA USE PAPEL FILTRO O
CUALQUIER SUSTITUTO. (Pídalo a su instructor)

Principios del funcionamiento del Microscopio compuesto.

El principio básico que sustenta la observación y el estudio de una muestra u objeto
bajo el microscopio, se apoya en el hecho de que se utilizan dos tipos de lentes; el
primero (el objetivo), tiene la propiedad de agrandar el tamaño de la imagen del objeto
en estudio y el segundo (el ocular), de agrandar o aumentar el tamaño de la imagen
proporcionada por el objetivo.
Si un haz de rayos luminosos provenientes de una fuente, es desviado hacia el
objetivo por un espejo adecuadamente colocado, éstos serán refractados por el
condensador antes de llegar a la muestra en estudio. Los que pasan por el
condensador, emergen para concentrarse a nivel del plano en donde se encuentra el
objeto en estudio. Al atravesar el objetivo, proyectan hacia el ocular, una imagen real,
invertida y mayor. Esta imagen, es proyectada primero hacia una serie de dos o tres
lentes que se encuentran ubicados inmediatamente por encima del objetivo y sirven
para corregir deficiencias y mejorar la imagen y la nitidez de la misma, pero no para
agrandarla.
De toda la cantidad de rayos emitida inicialmente, sólo relativamente pocos
llegan al ocular: Unos se pierden al llegar al condensador, platina a través del objeto y
al objetivo. Para evitar una pérdida mayor de los rayos, que van desde el objeto en
estudio hasta el objetivo y obtener un aumento mayor, se utilizan los objetivos 100X
también llamados de inmersión. Estos tienen una distancia focal muy corta y una
abertura numérica muy pequeña o muy limitada pero mayor poder de resolución. A
éste se le coloca una gota de aceite transparente o incoloro de índice de refracción
similar al del vidrio y se regula el diafragma del condensador, para permitir el paso de
mayor cantidad de luz hacia el objetivo. La presencia del aceite, evita una mayor
dispersión de éstos.

TÉCNICA DE ENFOQUE.
1. Revise si la fuente de luz del microscopio está adecuadamente conectada.
2. Observe si la lámpara enciende al accionar el switch y si el objetivo 4X está en
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 posición de trabajo. Deje encendida la lámpara
3. Coloque el frotis bacteriano proporcionado sobre la platina. Centre el frotis.
4. Con el tornillo macrométrico suba o baje completamente la platina. Con el mismo
tornillo, ascienda o descienda lentamente según el caso hasta lograr un enfoque
aproximado. Haga girar el tornillo micrométrico hasta observar el objeto y la imagen
se vea clara y precisa. Centre la imagen visualizada
5. Coloque el objetivo 10X en posición de trabajo y proceda a enfocar la imagen
visualizada utilizando solamente el tornillo micrométrico.
6. Coloque el objetivo 40X y luego el 100X, siguiendo el procedimiento desarrollado
en el paso anterior.
7. Antes de iniciar la búsqueda del objeto en observación con el objetivo 100X,
coloque una pequeña gota de aceite de inmersión en el centro del campo que
observó con el 40X en el área del porta objetos en donde se observa que hay una
mayor concentración de rayos. Proceda con el tornillo micrométrico y visualice al
objeto en estudio procurando obtener una imagen nítida. Finalizado el proceso de
búsqueda, identificación y estudio, retire la lámina porta objetos de la platina y
coloque el objetivo 4X en posición de trabajo.
8. Descarte el porta-objetos
9. Limpie cuidadosamente y sin presionar las lentes con papel fino, absorbente y
limpio, con el objeto de remover el remanente de aceite de inmersión del objetivo
100X.
10. Observe si el objetivo 4X quedó en posición de trabajo.
11. Apague la fuente de luz, desconecte el cable tomándolo directamente del toma
corriente, no lo hale, enrolle el cable alrededor del microscopio y déjelo sobre la
mesa.

INDICACIONES ÚTILES.
Usted es el responsable del microscopio asignado. Cuídelo y evite problemas
innecesarios.
No toque las lentes con los dedos. El sudor y ácidos grasos pueden opacarlas.
No juegue con ningún componente del microscopio y NO LO ARRASTRE
SOBRE LA MESA.
Siempre manténgalo en posición correcta.
Si no funciona adecuadamente, notifique de inmediato al instructor.
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 Si tiene cubierta, asegúrese de cubrirlo totalmente.
Si debe trasladarlo, tómelo del brazo con una mano y con la otra, sostenga su
base.
No maltrate el microscopio, el buen manejo del mismo, alarga su vida útil.

VI. PREGUNTAS
1. En general la microscopía se utiliza en Microbiología con dos propósitos
fundamentales, escríbalos:
1___________________________________________________________________
2___________________________________________________________________

2. El poder de Resolución de un microscopio esta determinado por:

____________________________________________________________________
__________________________________
3. Escriba ¿Cuál es la principal limitación del Microscopio de luz?
____________________________________________________________________
__________________________________

4. ¿Cual es la diferencia entre un microscopio de campo brillante (de luz) con el Campo
oscuro?
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
Escriba 2 bacterias que se pueden observar con el Microscopio de campo oscuro:
________________________________ y __________________________________

VII. BIBLIOGRAFIA
Murray PR, Rosentahl KS y Pfaller MA. Microbiología Médica. 6a edicion. Elsevier España.
2009.
Brooks GF. Butel JS y Morse SA. Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg.
Traducido por Ilian Naget Arsoft Saaub. 18ª. Edición. El manual Moderno, México D.F. 2005.

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PARTES DEL MICROCOPIO COMPUESTO
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