Técnicas

4 de marzo
de colecta
y tinción
de 2010
parásitos
Principales técnicas de colecta de parásitos encontrados en animales
domésticos y fauna silvestre, estudio, preparación y conservación. Practica III
 Técnicas de colecta y tinción de parásitos 2010

Técnicas de colecta y tinción de parásitos

Práctica 3
Universidad Nacional Autónoma de México.
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.
Laboratorio de Microbiología
ROJAS MORALES ALBERTO-MONROY VILLANUEVA ADAIR-; EQUIPO6 2752

RESULTADOS

Figura 4.- quistes encontrados en materia

fecal de gato, sacados directamente del
FIGURA 1.- Protozoarios flagelados intestino
encontrados en el intestino de un hámster.

Figura 5.- alguna especie de paracito con

FIGURA 2.- MICROFILARIA OBSERVADA EN forma de cilindro, se encontraron en el riñón
LA SANGRE DE SAPO, A GOTA GRUESA. de rata

FIGURA 3.- filaria encontrada en los Figura 6.- Microfilaria encontrada en tejido
pulmones del sapo de rata
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Análisis de resultados: delgados y transparentes. No se pudo
determinar más sobre su especie.
Fig. 1: debido a sus características se le
clasifico como giardia:
El género giardia comúnmente comprende
seis especies: giardia agilis, Giardia lamblia,
giardia duodenalis, giardia microti, giardia
muris y guardia Psittaci, los cuales son
distinguidos basándose en la morfología y
estructura de Sus trofozoitos.
Fig. 4: debido a sus características se le
Se eligió en especial guardia muris por ser
clasifico como quiste (posiblemente también
específica para hámster además de que se
ooquiste) de toxoplasma:
encontraba parasitando el intestino de este
La toxoplasmosis es una enfermedad
roedor y su gran parecido a la forma de una
infecciosa ocasionada por un protozoo
giardia.
parásito que se llama Toxoplasma gondii, un
parásito intracelular obligado. La
enfermedad es considerada una zoonosis,
siendo los hospedadores definitivos el gato y
otras 6 especies de felinos.

Fig. 2: debido a sus características se le

clasifico como Microfilaria:
Las filariasis son producidas por nematodos
filiformes, generalmente largos. Los adultos
tienen localización tisular y las formas
embrionarias o Microfilarias, se encuentran
en los tejidos o en la sangre, donde son
tomados por los artrópodos vectores. No se
pudo determinar más sobre la especie.
Fig. 3: debido a sus características se le
clasifico como filaria:
Fig. 5: no se encontró información acerca de
este parasito por lo que solo se mencionaran
algunos parásitos q habitan en los riñones:
Stephanurus dentatus Los adultos pueden
llegar a medir 0.5 centímetros de longitud, se
encuentran en los riñones, las paredes de los
uréteres y la grasa peritoneal.
Capillaria plica (el gusano de la vejiga del
perro) es un nematodo parásito, el más a
menudo encontrado en la vejiga urinaria, y
de vez en cuando en los riñones, de perros y
de zorros. También ha sido encontrado en el
gato doméstico, y varios mamíferos salvajes.

Filaria, nombre común de un nematodo

parásito de los vertebrados. Muchas
filarias causan enfermedades conocidas
conjuntamente como filariasis. El ciclo vital Fig. 6: ya se describió con anterioridad este
de las filarias depende de dos huéspedes, parasito (ver fig2) este fue encontrado en
un vertebrado y un artrópodo que suele rata.
ser un insecto. Los gusanos adultos son
Conclusión:
En base a esta práctica concluimos que las
enfermedades parasitarias están
ampliamente distribuidas en todos los
organismos, siendo de particular interés para
nuestro campo de estudio las zoonosis ya
que aquejan al ser humano, y ponen en
grave riesgo su salud y aun mas su vida. Por
lo que es de gran importancia su estudio y
comprensión no solo las técnicas de
recolección y tinción; si no muy en particular
los ciclos de vida de los parásitos, ya que
estos nos permiten tener un arma eficaz para
la erradicación de estas enfermedades
Cuestionario:
1. Desarrolle el ciclo biológico de o los
parásitos que encontró en la práctica. De
no haber encontrado ningún parásito, el
asesor le asignará el o los parásitos que
desarrolle.
Giardia lamblia
Giardia lamblia vive en forma de trofozoitos
en la luz del intestino delgado
(principalmente en el duodeno) adherido a
las vellosidades intestinales por medio de los
discos bilobulados. Se alimenta y se
reproduce hasta que el contenido intestinal
inicia el proceso de deshidratación,
momento en el que comienza el
enquistamiento del trofozoitos. Pierde los
flagelos, adquiere una morfología ovalada, se
rodea de una pared quística y madurez. Los
quistes expulsados junto a las heces ya son
infectantes. Cuando dichos quistes son
ingeridos por un nuevo hospedador, llegan al
duodeno, donde se disuelve la pared
quística, dando así lugar a un individuo
tetranucleado que se divide inmediatamente
en dos trofozoitos binucleados que se anclan
al epitelio intestinal, cerrando así su ciclo
vital.
Filarias
El ciclo vital de las filarias depende de dos
huéspedes, un vertebrado y un artrópodo
que suele ser un insecto. Los gusanos
adultos son delgados y transparentes. El
macho suele ser la mitad de largo que la
hembra. Un canal alimentario sencillo se
abre cerca del extremo anal del cuerpo; la
hembra presenta dos tubos, que se abren a
una vagina anterior, y forman el útero. Los
huevos se desarrollan mientras avanzan
por el útero. Cuando son liberados,
contienen ya Microfilarias, o gusanos
juveniles de alrededor de 0,008 cm de
longitud, envueltos individualmente por
una membrana. Cuando se incorporan a la
circulación periférica del huésped, estas
Microfilarias son absorbidas por un insecto
hematófago, casi siempre alguna especie
de mosquito. Las Microfilarias se
desprenden de sus envueltas en el
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estómago del insecto y penetran en su
tórax. Tras una ulterior fase de desarrollo
en él, los gusanos jóvenes se abren camino
hasta la probóscide del insecto. Cuando
éste vuelve a alimentarse de la sangre de
un vertebrado, las Microfilarias penetran
bajo la piel del segundo huésped y se
incorporan a su torrente sanguíneo a
través de la perforación realizada por el
insecto o bien penetran en los tejidos
subcutáneos. Muchas Microfilarias no van
más allá, pero algunas acaban encontrando
capilares y, a través del sistema
circulatorio, acaban llegando al sistema
linfático, donde se transforman en gusanos
adultos.
Toxoplasma gondii
El ciclo de vida del T. gondii tiene dos fases.
La fase sexual del ciclo de vida ocurre solo en
miembros de la familia Felidae (gatos
domésticos y salvajes), haciendo que estos
animales sean los hospedadores definitivos
del parásito. La fase asexual del ciclo de vida
puede ocurrir en cualquier animal de sangre
caliente, tales como otros mamíferos y aves.
Por ello, la toxoplasmosis constituye una
zoonosis parasitaria.[
En el hospedador intermediario, incluyendo
los felinos, los parásitos invaden células,
formando un compartimento llamado
vacuola parasitófora que contienen
bradizoitos. Las vacuolas forman quistes en
tejidos, en especial en los músculos y
cerebro. Debido a que el parásito está dentro
de las células, el sistema inmune del
hospedador no detecta estos quistes. La
resistencia a los antibióticos varía, pero los
quistes son difíciles de erradicar
enteramente. T. gondii se propaga dentro de
estas vacuolas por una serie de divisiones
binarias hasta que la célula infestada
eventualmente se rompe, liberando a los
taquizoitos. Estos son motiles, y la forma de
reproducción asexual del parásito. A
diferencia de los bradizoitos, los taquizoitos
libres son eficazmente eliminados por la
inmunidad del hospedador, a pesar de que
algunos logran infectar otras células
formando bradizoitos, manteniendo así el
ciclo de vida de este parásito.
Los quistes tisulares son ingeridos por el gato
(por ejemplo, al alimentarse de un ratón
infectado). Los quistes sobreviven el paso
por el estómago del gato y los parásitos
infectan las células epiteliales del intestino
delgado en donde pasan por la reproducción
sexual y la formación de ooquiste, que son
liberados con las heces. Otros animales,
incluyendo los humanos ingieren los
ooquiste (al comer vegetales no lavados
adecuadamente) o los quistes tisulares al
comer carne cruda o cocida
inapropiadamente. Los parásitos entran a los
macrófagos de la pared intestinal para luego
distribuirse por la circulación sanguínea y el
cuerpo entero.
2. Nombre y explique el fundamento de dos
técnicas de fijación, para protozoarios y
helmintos, aparte de las incluidas en el
anexo.
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FIJADORES:
Formaldehido
Para preservar esporas de microsporidia, quistes
ooquiste de protozoarios se utiliza el
formaldehido al 5.0% y para huevos y larvas de
helmintos al 10%. Si la muestra de heces contiene
quistes y huevos se recomienda usar el fijador al
10%.
Formaldehido 0.5% 5.0mL
Solución salina (NaCl 0.85%) 95.0mL
El formaldehido se diluye con solución salina.
Para mantener la morfología de los parásitos en
condiciones óptimas se recomienda el fijador
amortiguado. A 100mL del fijador se le adiciona
0.08g de una mezcla de sales y se homogeniza
(sales: se mezclan 6.10g de fosfato de sodio
monobásico y se almacena en un frasco
herméticamente cerrado). Cuando se utiliza el
fijador a temperatura ambiente, los huevos de
helmintos de pared gruesa pueden seguir su
desarrollo; para asegurar que los huevos no sigan
su desarrollo se recomienda usar el fijador a 60ºC
Schaudinn
Este fijador facilita la preservación de quistes,
trofozoitos, huevos y larvas.
Solución concentrada
Cloruro de mercurio 11.40g
Agua destilada 200.0mL
Etanol 95% 100.0mL
Solución de trabajo
Solución concentrada 47.0mL
Ácido acético glacial 3.0mL
Se mezcla el cloruro de mercurio y el agua
destilada con agitación constante; después se
añade el etanol, se homogeniza y se almacena en
frascos ámbar a temperatura ambiente. Esta
solución concentrada puede durar varios meses.
La solución de trabajo se prepara en el momento
en que se va a preservar la muestra con las
estructuras parasitarias. La muestra con el
especímenes parasitarios se homogeniza con la
solución de trabajo pero se mantiene una
relación 1:3 (muestra: fijador).
TINCIONES
Hematoxilina férrica modificada
La hematoxilina es un colorante natural, cuyo
producto de oxidación (la hemateína) cumple la
función de colorante. La hemateína por sí sola
tiene poca afinidad por los tejidos por lo tanto
debe utilizarse con un mordiente. De acuerdo al
mordiente tendremos las distintas hematoxilinas,
entre ellas la férrica y la fosfotúngstica.
Hematoxilina Férrica > Es una coloración muy
estable, que resulta útil para estudiar detalles
celulares finos pues brinda una tinción nítida y
bien diferenciada (ej. Extracción muscular).
En este caso se usan como mordientes sales de
hierro, las que actúan a la vez como agentes
oxidantes. La laca férrica que forman estas
hematoxilinas presenta color negro o azul negro.
Hematoxilina Fosfotúngstica > Esta técnica se
utiliza para el estudio del sistema nervioso central
y tejido conjuntivo, en particular estrías
musculares y fibras. En este caso el mordiente
utilizado es el ácido fosfotúngstica. Resultados:
cromatina, eritrocitos y cilios se colorean azul
oscuro, las estriaciones musculares azul casi
negro y los citoplasmas se colorean rosa pálido.
Para obtener buenas tinciones se recomienda
usar el fijador Schaudinn.
Solución concentrada A
Hematoxilina 10.0g
Etanol absoluto 1000.0mL
Solución concentrada B
Sulfato ferroso de amonio 10.0g
Sulfato férrico de amonio 10.0g
Ácido clorhídrico 10.0mL
Agua destilada 1000.0mL
Las soluciones se almacenan a temperatura
ambiente y su vida media es de 6 meses.
Solución de trabajo
Solución concentrada A 15.0mL
Solución concentrada B 15.0mL
PROCEDIMIENTO
Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlo
con solución salina isotónica; es necesario que la
capa quede delgada. Antes de que las heces se
sequen, se fija con Schaudinn durante sesenta
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minutos. (Se puede dejar toda la noche en el
fijador).
Para eliminar los cristales del cloruro de mercurio
se colocan las preparaciones en una solución de
etanol al 70%-yodo durante cinco minutos. (La
solución alcohol yodo se prepara añadiendo unas
gotas de yodo a 3% al etanol a 70%).
Posteriormente, en etanol al 95% y en etanol al
70% (en ambos pasos durante cinco minutos).
Se lavan al chorro de agua, dejando que el agua
fluya durante 10 minutos.
Los portaobjetos se colocan en la solución de
trabajo durante cinco minutos.
Se lavan al chorro de agua durante 10 minutos.
Se deshidratan en etanol al 70%, 95% y etanol
absoluto
(Cada paso será de 5 minutos).
Se transfieren las laminillas a xileno durante 10
minutos. Se cubren las laminillas con bálsamo de
Canadá se coloca un cubreobjetos del número 1 y
se dejan secar.
Negro de Clorazol
Esta tinción se usa para teñir el esqueleto
cuticular de los insectos, entero o en partes
aisladas. El negro de Clorazol en un colorante que
se fija extraordinariamente a la cutícula dando
diferentes tonos de coloración que hacen
aparecer los más finos detalles. Se recomienda
utilizarla con muestras de materia fecal sin
fijador.
Solución A
Etanol 90% 170.0mL
Metanol 100% 160.0mL
Ácido acético glacial 20.0mL
Fenol líquido 20.0mL
Ácido fosfotúngstica 1% 12.0mL
Agua destilada 618.0mL
Solución B
Negro de Clorazol 5.0g
Solución A 1000.0mL
Se tritura el colorante (negro de Clorazol) con
algunos mililitros de la solución A, y se sigue
triturando hasta obtener una pasta sin grumos;
se añade más solución A, se muele, se deja
sedimentar y se vacía el sobrenadante en otro
recipiente. Se sigue moliendo y se vacía hasta que
todo el colorante esté en solución. El colorante se
almacena de 4-6 semanas antes de usarse.
PROCEDIMIENTO
Se hace un frotis con las heces, y se evita que se
seque. Se sumerge en el colorante durante 1-2
horas. Se coloca en etanol al 95%, durante 5
minutos. Después en etanol al 100% por cinco
minutos (se repite este paso una vez más).
Se pasa al tolueno o xileno durante cinco minutos
(Repetir una vez).
Se cubren las preparaciones con resina o bálsamo
de Canadá, se coloca un cubreobjetos del número
1 y se deja secar.
Resultados: la cutícula toma el color de azul a
negro según el grosor de la cutícula y el tiempo
de exposición al colorante (Fig. 2A, 2B). Si no se
quiere hacer el montaje definitivo en bálsamo de
Canadá, las piezas se pueden guardar
indefinidamente en lactofenol o en alcohol
bencílico para observar directamente en el
microscopio, sólo hay que evitar que el lactofenol
o el alcohol bencílico se evaporen.
3. Nombre y desarrolle el ciclo biológico de
dos nematodos hematófagos y parásitos
del humano.
NEMATODOS HEMATOFAGOS
Wuchereria bancrofti es un parásito nematodo,
causante de la parasitosis humana llamada
filariasis linfática y transmitida por varias especies
de mosquitos. Su nombre fue dado por razón de
los científicos Otto Wucherer y Joseph Bancroft,
afecta a más de 120 millones de personas,
principalmente en África, Suramérica y otros
países tropicales y subtropicales. De no tratarse la
infección, puede resultar en una enfermedad
denominada elefantiasis.
Ciclo de vida
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W. bancrofti completan su ciclo de vida en dos
hospedadores: los seres humanos sirven como el
hospedador definitivo y los mosquitos son los
hospedadores intermediarios. Los parásitos
adultos residen en el sistema linfático y son
vivíparos, es decir, sus crías se desarrollan en el
vientre de la hembra.
Microfilaria
El primer estadio del parásito se denomina
Microfilaria y están presentes el sistema
circulatorio. Las Microfilarias continuamente
migran de la circulación profunda hasta
La circulación periférica. Durante el día están
presentes en las venas profundas y durante la
noche migran a la circulación periférica, desde
donde el gusano es transferido al vector. Los
vectores artrópodos más comunes son los
mosquitos de las especies Culex, Anopheles, Trichuris trichiura
Aedes, y Mansonia. Dentro de su segundo A: Eliminación por materia fecal de huevos
hospedador, la Microfilaria madura a la larva inmaduros.
motil. Un mosquito, del género Armigeres B: En presencia de condiciones optimas (25 - 30°
ingiriendo sangre de un dedo humano. C y elevada humedad) el huevo se torna maduro
(larva desarrollada) e infectante en el lapso de 2-
Larva 4 semanas.
Cuando el mosquito infestado se alimenta, C: Este huevo infectante es vehiculizado hasta el
deposita en la sangre del hospedador humano, la hombre (único hospedero) a través de tierra y
forma larval del gusano. La larva migra hacia los alimentos contaminados con la misma.
ganglios linfáticos, predominantemente a nivel de D: El hombre ingiere los huevos maduros
las piernas (la ingle) y el área genital, lugar donde produciéndose la liberación de la larva en el
se desarrolla en la forma adulta del parásito en el intestino delgado y su migración hasta el ciego
curso de aproximadamente un año. Para donde se diferenciará a gusano adulto y luego de
entonces, las hembras adultas pueden producir que la hembra se encuentre fecundada
nuevas Microfilarias. O vacunas preventivas. comenzará la liberación de huevos al tubo
digestivo para que estos sean eliminados con la
materia fecal.

Referencias:
 PARASITOLOGÍA MÉDICA. Jorge Tay
Zavala, Ramón Lara Aguilera et.al. 5ª
edición. Editorial Méndez editores.
México 1995.
 Biagi Francisco. “Enfermedades
parasitarias. Editorial el Manual
Moderno. 3ra ed. México, 2004.
.  DPDx - Parasites and Health
[Internet]. [cited 2010 Mar
Onchocerca volvulus
4];Available from:
La Oncorcercosis es un padecimiento producido
en el hombre por un nematodo: Onchocerca http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/HT
volvulus ML/Para_Health.htm

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