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Técnicas de colecta y tinción de parásitos 4 de marzo 2010 Principales técnicas de colecta de
Técnicas
de colecta
y tinción
de
parásitos
4 de marzo
2010
Principales técnicas de colecta de parásitos encontrados en animales
domésticos y fauna silvestre, estudio, preparación y conservación.
Practica III

Técnicas de colecta y tinción de parásitos

2010

Técnicas de colecta y tinción de parásitos

Práctica 3

Universidad Nacional Autónoma de México.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Laboratorio de Microbiología

ROJAS MORALES ALBERTO-MONROY VILLANUEVA ADAIR-; EQUIPO6 2752

RESULTADOS

Técnicas de colecta y tinción de parásitos 2010 Técnicas de colecta y tinción de parásitos Práctica
FIGURA 1.- Protozoarios flagelados encontrados en el intestino de un hámster. Figura 4.- quistes encontrados en
FIGURA 1.- Protozoarios flagelados
encontrados en el intestino de un hámster.
Figura 4.- quistes encontrados en materia
fecal de gato, sacados directamente del
intestino
FIGURA 2.- MICROFILARIA OBSERVADA EN
LA SANGRE DE SAPO, A GOTA GRUESA.
Figura 5.- alguna especie de paracito con
forma de cilindro, se encontraron en el riñón
de rata

FIGURA 3.- filaria encontrada en los pulmones del sapo

Figura 6.- Microfilaria encontrada en tejido de rata Página 2 de 8

Análisis de resultados:

delgados y transparentes. No se pudo determinar más sobre su especie.

Fig. 1: debido a sus características se le clasifico como giardia:

El género giardia comúnmente comprende seis especies: giardia agilis, Giardia lamblia, giardia duodenalis, giardia microti, giardia muris y guardia Psittaci, los cuales son distinguidos basándose en la morfología y estructura de Sus trofozoitos. Se eligió en especial guardia muris por ser específica para hámster además de que se encontraba parasitando el intestino de este roedor y su gran parecido a la forma de una giardia.

Análisis de resultados: delgados y transparentes. No se pudo determinar más sobre su especie. Fig. 1:

Fig. 4: debido a sus características se le clasifico como quiste (posiblemente también ooquiste) de toxoplasma:

La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa ocasionada por un protozoo parásito que se llama Toxoplasma gondii,
La toxoplasmosis
es
una enfermedad
infecciosa ocasionada por un protozoo
parásito que se llama Toxoplasma gondii, un
parásito intracelular obligado. La
enfermedad es considerada una zoonosis,
siendo los hospedadores definitivos el gato y
otras 6 especies de felinos.
Fig. 2: debido a sus características se le
clasifico como Microfilaria:
Las filariasis son producidas por nematodos
filiformes, generalmente largos. Los adultos
tienen localización tisular y las formas
embrionarias o Microfilarias, se encuentran
en los tejidos o en la sangre, donde son
tomados por los artrópodos vectores. No se
pudo determinar más sobre la especie.
Fig. 5: no se encontró información acerca de
este parasito por lo que solo se mencionaran
algunos parásitos q habitan en los riñones:
Análisis de resultados: delgados y transparentes. No se pudo determinar más sobre su especie. Fig. 1:

Fig.

3:

debido

a

sus

características

se

le

Stephanurus dentatus Los adultos pueden llegar a medir 0.5 centímetros de longitud, se encuentran en los riñones, las paredes de los uréteres y la grasa peritoneal. Capillaria plica (el gusano de la vejiga del perro) es un nematodo parásito, el más a menudo encontrado en la vejiga urinaria, y de vez en cuando en los riñones, de perros y de zorros. También ha sido encontrado en el gato doméstico, y varios mamíferos salvajes.

clasifico como filaria:

Filaria, nombre común de un nematodo parásito de los vertebrados. Muchas filarias causan enfermedades conocidas conjuntamente como filariasis. El ciclo vital de las filarias depende de dos huéspedes, un vertebrado y un artrópodo que suele ser un insecto. Los gusanos adultos son

Análisis de resultados: delgados y transparentes. No se pudo determinar más sobre su especie. Fig. 1:
Análisis de resultados: delgados y transparentes. No se pudo determinar más sobre su especie. Fig. 1:

Fig. 6: ya se describió con anterioridad este parasito (ver fig2) este fue encontrado en rata.

Conclusión:

En base a esta práctica concluimos

reproduce hasta que el contenido intestinal inicia el proceso de deshidratación, momento en el que comienza el enquistamiento del trofozoitos. Pierde los flagelos, adquiere una morfología ovalada, se rodea de una pared quística y madurez. Los quistes expulsados junto a las heces ya son infectantes. Cuando dichos quistes son ingeridos por un nuevo hospedador, llegan al duodeno, donde se disuelve la pared quística, dando así lugar a un individuo tetranucleado que se divide inmediatamente en dos trofozoitos binucleados que se anclan al epitelio intestinal, cerrando así su ciclo vital.

que las

enfermedades parasitarias están ampliamente distribuidas en todos los organismos, siendo de particular interés para nuestro campo de estudio las zoonosis ya que aquejan al ser humano, y ponen en grave riesgo su salud y aun mas su vida. Por lo que es de gran importancia su estudio y

comprensión no solo las técnicas de recolección y tinción; si no muy en particular los ciclos de vida de los parásitos, ya que estos nos permiten tener un arma eficaz para la erradicación de estas enfermedades

Cuestionario: 1. Desarrolle el ciclo biológico de o los parásitos que encontró en la práctica. De
Cuestionario:
1. Desarrolle el ciclo biológico de o los
parásitos que encontró en la práctica. De
no haber encontrado ningún parásito, el
asesor le asignará el o los parásitos que
desarrolle.
Filarias
El ciclo vital de las filarias depende de dos
huéspedes, un vertebrado y un artrópodo
que suele ser un insecto. Los gusanos
Conclusión: En base a esta práctica concluimos reproduce hasta que el contenido intestinal inicia el proceso

Giardia lamblia

Giardia lamblia vive en forma de trofozoitos

en

la

luz

del

intestino delgado

(principalmente en el duodeno) adherido a las vellosidades intestinales por medio de los

discos

bilobulados.

Se

alimenta

y

se

adultos son delgados y transparentes. El macho suele ser la mitad de largo que la hembra. Un canal alimentario sencillo se abre cerca del extremo anal del cuerpo; la hembra presenta dos tubos, que se abren a una vagina anterior, y forman el útero. Los huevos se desarrollan mientras avanzan por el útero. Cuando son liberados, contienen ya Microfilarias, o gusanos juveniles de alrededor de 0,008 cm de longitud, envueltos individualmente por una membrana. Cuando se incorporan a la circulación periférica del huésped, estas Microfilarias son absorbidas por un insecto hematófago, casi siempre alguna especie de mosquito. Las Microfilarias se desprenden de sus envueltas en el

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2010

estómago del insecto y penetran en su tórax. Tras una ulterior fase de desarrollo en él, los gusanos jóvenes se abren camino hasta la probóscide del insecto. Cuando éste vuelve a alimentarse de la sangre de un vertebrado, las Microfilarias penetran bajo la piel del segundo huésped y se incorporan a su torrente sanguíneo a través de la perforación realizada por el insecto o bien penetran en los tejidos subcutáneos. Muchas Microfilarias no van más allá, pero algunas acaban encontrando capilares y, a través del sistema circulatorio, acaban llegando al sistema linfático, donde se transforman en gusanos adultos.

En el hospedador intermediario, incluyendo

los

felinos,

los

parásitos

invaden

células,

formando un compartimento llamado vacuola parasitófora que contienen bradizoitos. Las vacuolas forman quistes en tejidos, en especial en los músculos y

cerebro. Debido a que el parásito está dentro de las células, el sistema inmune del

hospedador

no

detecta

estos

quistes.

La

resistencia a los antibióticos varía, pero los quistes son difíciles de erradicar enteramente. T. gondii se propaga dentro de

estas vacuolas por una serie de divisiones binarias hasta que la célula infestada eventualmente se rompe,
estas vacuolas por una serie de divisiones
binarias hasta que la célula infestada
eventualmente se rompe, liberando a los
taquizoitos. Estos son motiles, y la forma de
reproducción asexual del parásito. A
diferencia de los bradizoitos, los taquizoitos
libres son eficazmente eliminados por la
inmunidad del hospedador, a pesar de que
algunos logran infectar otras células
formando bradizoitos, manteniendo así el
ciclo de vida de este parásito.
Los quistes tisulares son ingeridos por el gato
(por ejemplo, al alimentarse de un ratón
infectado). Los quistes sobreviven el paso
por el estómago del gato y los parásitos
infectan las células epiteliales del intestino
delgado en donde pasan por la reproducción
sexual y la formación de ooquiste, que son
liberados con las heces. Otros animales,
incluyendo los humanos ingieren los
ooquiste (al comer vegetales no lavados
adecuadamente) o los quistes tisulares al

Toxoplasma gondii El ciclo de vida del T. gondii tiene dos fases. La fase sexual del ciclo de vida ocurre solo en miembros de la familia Felidae (gatos domésticos y salvajes), haciendo que estos animales sean los hospedadores definitivos del parásito. La fase asexual del ciclo de vida puede ocurrir en cualquier animal de sangre caliente, tales como otros mamíferos y aves. Por ello, la toxoplasmosis constituye una zoonosis parasitaria. [

comer carne cruda o cocida inapropiadamente. Los parásitos entran a los macrófagos de la pared intestinal para luego distribuirse por la circulación sanguínea y el cuerpo entero.

  • 2. Nombre y explique el fundamento de dos técnicas de fijación, para protozoarios y helmintos, aparte de las incluidas en el anexo.

Técnicas de colecta y tinción de parásitos 2010 FIJADORES: TINCIONES Formaldehido Para preservar esporas de microsporidia,
Técnicas de colecta y tinción de parásitos
2010
FIJADORES:
TINCIONES
Formaldehido
Para preservar esporas de microsporidia, quistes
ooquiste
de
protozoarios
se
utiliza el
formaldehido al 5.0% y para huevos y larvas de
helmintos al 10%. Si la muestra de heces contiene
quistes y huevos se recomienda usar el fijador al
10%.
Formaldehido 0.5% 5.0mL
Solución salina (NaCl 0.85%)
95.0mL
El formaldehido se diluye con solución salina.
Para mantener la morfología de los parásitos en
condiciones óptimas se recomienda el fijador
amortiguado. A 100mL del fijador se le adiciona
0.08g de una mezcla de sales y se homogeniza
(sales: se mezclan 6.10g de fosfato de sodio
monobásico y se almacena en un frasco
herméticamente cerrado). Cuando se utiliza el
fijador a temperatura ambiente, los huevos de
helmintos de pared gruesa pueden seguir su
desarrollo; para asegurar que los huevos no sigan
su desarrollo se recomienda usar el fijador a 60ºC
Schaudinn
Este fijador facilita la preservación de quistes,
trofozoitos, huevos y larvas.
Hematoxilina férrica modificada
La hematoxilina es un colorante natural, cuyo
producto de oxidación (la hemateína) cumple la
función de colorante. La hemateína por sí sola
tiene poca afinidad por los tejidos por lo tanto
debe utilizarse con un mordiente. De acuerdo al
mordiente tendremos las distintas hematoxilinas,
entre ellas la férrica y la fosfotúngstica.
Hematoxilina Férrica > Es una coloración muy
estable, que resulta útil para estudiar detalles
celulares finos pues brinda una tinción nítida y
bien diferenciada (ej. Extracción muscular).
En este caso se usan como mordientes sales de
hierro, las que actúan a la vez como agentes
oxidantes. La laca férrica que forman estas
hematoxilinas presenta color negro o azul negro.
Hematoxilina Fosfotúngstica > Esta técnica se
utiliza para el estudio del sistema nervioso central
y tejido conjuntivo, en particular estrías
musculares y fibras. En este caso el mordiente
utilizado es el ácido fosfotúngstica. Resultados:
cromatina, eritrocitos y cilios se colorean azul
oscuro, las estriaciones musculares azul casi
negro y los citoplasmas se colorean rosa pálido.
Solución concentrada
Cloruro de mercurio
Agua destilada
Etanol 95%
Solución de trabajo
Solución concentrada
Ácido acético glacial
Para obtener buenas tinciones se recomienda
usar el fijador Schaudinn.
11.40g
200.0mL
100.0mL
10.0g
1000.0mL
47.0mL
3.0mL
10.0g
10.0g
Se mezcla el cloruro de mercurio y el agua
destilada con agitación constante; después se
añade el etanol, se homogeniza y se almacena en
frascos ámbar a temperatura ambiente. Esta
solución concentrada puede durar varios meses.
Solución concentrada A
Hematoxilina
Etanol absoluto
Solución concentrada B
Sulfato ferroso de amonio
Sulfato férrico de amonio
Ácido clorhídrico
Agua destilada
10.0mL
1000.0mL
Las soluciones se almacenan a temperatura
ambiente y su vida media es de 6 meses.

La solución de trabajo se prepara en el momento en que se va a preservar la muestra con las estructuras parasitarias. La muestra con el especímenes parasitarios se homogeniza con la solución de trabajo pero se mantiene una relación 1:3 (muestra: fijador).

Solución de trabajo Solución concentrada A

15.0mL

Solución concentrada B

15.0mL

PROCEDIMIENTO

Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlo con solución salina isotónica; es necesario que la capa quede delgada. Antes de que las heces se sequen, se fija con Schaudinn durante sesenta

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2010

minutos. (Se puede dejar toda la noche en el fijador). Para eliminar los cristales del cloruro de mercurio se colocan las preparaciones en una solución de etanol al 70%-yodo durante cinco minutos. (La solución alcohol yodo se prepara añadiendo unas gotas de yodo a 3% al etanol a 70%). Posteriormente, en etanol al 95% y en etanol al 70% (en ambos pasos durante cinco minutos). Se lavan al chorro de agua, dejando que el agua fluya durante 10 minutos. Los portaobjetos se colocan en la solución de trabajo durante cinco minutos. Se lavan al chorro de agua durante 10 minutos. Se deshidratan en etanol al 70%, 95% y etanol absoluto (Cada paso será de 5 minutos). Se transfieren las laminillas a xileno durante 10 minutos. Se cubren las laminillas con bálsamo de Canadá se coloca un cubreobjetos del número 1 y se dejan secar. Negro de Clorazol Esta tinción se usa para teñir el esqueleto cuticular de los insectos, entero o en partes aisladas. El negro de Clorazol en un colorante que se fija extraordinariamente a la cutícula dando diferentes tonos de coloración que hacen aparecer los más finos detalles. Se recomienda utilizarla con muestras de materia fecal sin fijador.

PROCEDIMIENTO

Se hace un frotis con las heces, y se evita que se seque. Se sumerge en el colorante durante 1-2 horas. Se coloca en etanol al 95%, durante 5 minutos. Después en etanol al 100% por cinco minutos (se repite este paso una vez más). Se pasa al tolueno o xileno durante cinco minutos (Repetir una vez). Se cubren las preparaciones con resina o bálsamo de Canadá, se coloca un cubreobjetos del número 1 y se deja secar. Resultados: la cutícula toma el color de azul a negro según el grosor de la cutícula y el tiempo de exposición al colorante (Fig. 2A, 2B). Si no se quiere hacer el montaje definitivo en bálsamo de Canadá, las piezas se pueden guardar indefinidamente en lactofenol o en alcohol bencílico para observar directamente en el microscopio, sólo hay que evitar que el lactofenol o el alcohol bencílico se evaporen.

3. Nombre y desarrolle el ciclo biológico de dos nematodos hematófagos y parásitos del humano. NEMATODOS
3.
Nombre y desarrolle el ciclo biológico de
dos nematodos hematófagos y parásitos
del humano.
NEMATODOS HEMATOFAGOS
170.0mL
160.0mL
20.0mL
20.0mL
12.0mL
618.0mL
5.0g

Solución A Etanol 90% Metanol 100% Ácido acético glacial Fenol líquido Ácido fosfotúngstica 1% Agua destilada Solución B Negro de Clorazol Solución A

1000.0mL

Se tritura el colorante (negro de Clorazol) con algunos mililitros de la solución A, y se sigue triturando hasta obtener una pasta sin grumos; se añade más solución A, se muele, se deja sedimentar y se vacía el sobrenadante en otro recipiente. Se sigue moliendo y se vacía hasta que todo el colorante esté en solución. El colorante se almacena de 4-6 semanas antes de usarse.

Wuchereria bancrofti es un parásito nematodo, causante de la parasitosis humana llamada filariasis linfática y transmitida por varias especies de mosquitos. Su nombre fue dado por razón de los científicos Otto Wucherer y Joseph Bancroft, afecta a más de 120 millones de personas, principalmente en África, Suramérica y otros países tropicales y subtropicales. De no tratarse la infección, puede resultar en una enfermedad denominada elefantiasis. Ciclo de vida

Técnicas de colecta y tinción de parásitos 2010 W. bancrofti completan su ciclo de vida en
Técnicas de colecta y tinción de parásitos
2010
W. bancrofti completan su ciclo de vida en dos
hospedadores: los seres humanos sirven como el
hospedador definitivo y los mosquitos son los
hospedadores intermediarios. Los parásitos
adultos residen en el sistema linfático y son
vivíparos, es decir, sus crías se desarrollan en el
vientre de la hembra.
Microfilaria
El primer estadio del parásito se denomina
Microfilaria y están presentes el sistema
circulatorio. Las Microfilarias continuamente
migran de la circulación profunda hasta
La circulación periférica. Durante el día están
presentes en las venas profundas y durante la
noche migran a la circulación periférica, desde
donde el gusano es transferido al vector. Los
vectores artrópodos más comunes son los
mosquitos de las especies Culex, Anopheles,
Aedes, y Mansonia. Dentro de su segundo
hospedador, la Microfilaria madura a la larva
motil. Un mosquito, del género Armigeres
ingiriendo sangre de un dedo humano.
Trichuris trichiura
A: Eliminación por materia fecal de huevos
inmaduros.
B: En presencia de condiciones optimas (25 - 30°
C
y elevada humedad) el huevo se torna maduro
(larva desarrollada) e infectante en el lapso de 2-
Larva
Cuando el mosquito infestado se alimenta,
deposita en la sangre del hospedador humano, la
forma larval del gusano. La larva migra hacia los
ganglios linfáticos, predominantemente a nivel de
las piernas (la ingle) y el área genital, lugar donde
se desarrolla en la forma adulta del parásito en el
curso de aproximadamente un año. Para
entonces, las hembras adultas pueden producir
nuevas Microfilarias. O vacunas preventivas.
4 semanas.
C: Este huevo infectante es vehiculizado hasta el
hombre (único hospedero) a través de tierra y
alimentos contaminados con la misma.
D: El hombre ingiere los huevos maduros
produciéndose la liberación de la larva en el
intestino delgado y su migración hasta el ciego
donde se diferenciará a gusano adulto y luego de
que la hembra se encuentre fecundada
comenzará la liberación de huevos al tubo
digestivo para que estos sean eliminados con la
materia fecal.
Referencias:
PARASITOLOGÍA MÉDICA. Jorge Tay
Zavala, Ramón Lara Aguilera et.al. 5ª
edición. Editorial Méndez editores.
México 1995.
Biagi Francisco. “Enfermedades
parasitarias. Editorial el Manual
Moderno. 3ra ed. México, 2004.
.
DPDx
-
Parasites
and
Health
[Internet].
[cited
2010
Mar
Onchocerca volvulus
4];Available
from:
La Oncorcercosis es un padecimiento producido
en el hombre por un nematodo: Onchocerca
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/HT
ML/Para_Health.htm
volvulus