CARACTERISTICAS

* G (+), familia Bacillaceae, esporulados, anaerobios, sin cápsula.

* Bacilos rectos o ligeramente curvados de 2-10 x 0,5-2 micras.
* Esporas ovales, subterminales y deformán la célula cuando se producen.
* El comportamiento metabólico no es uniforme referentes a la proteolisis y a
la producción de exotoxinas.
* Producen 7 toxinas serolicamente diferentes y aunque con acción farmacologic
a igual se les designa con letras de la A a la G y las cepas productoras también l
levan la misma nomenclatura.
* Moviles mediante flagelos perítricos y con 4 antígenos distintos: somático, flag
elar, esporas. endotoxinas.
* Es el productor del Botulismo
* Es una toxiinfección alimentaria producida por ingerir alimentos con la toxi
na.
* La forma vegetativa es sensible, la cepa E se puede destruir a 45º, debido a
que son psicótrofas.
* La mayor parte de cepas fermentan carbohidratos
* No reducen los nitritos a nitratos
* Producen sulfidrico y acetil metil carbinol (VP+).
* Las esporas son más resistentes al calor, resisten 105º durante 10 minutos, a
excepción de las esporas de las cepas E que se inactivan a 80º durante 6-10 minutos.
* Las esporas en condiciones normales de sequedad en el ambiente viven años.
* pH óptimo de 4,6 - 8 para la célula vegetativa
* Temperatura óptima de 25-35º
* Sensible a las sal, necesitan una concentracion de sal inferior al 10% y A
w > 0,935 y condiciones de anaerobiosis.
HABITAT Y EPIDEMIOLOGIA
* El reservorio es el ire, tierra y polvo, también pueden estar en el agua; ex
iste botulismo animal con clínica similar, la intoxicación con conservas caseras es
más frecuente que con las conservas industriales.
* La incidencia está asociada a los distintos tipos de suelo: Cepa A, suelos n
eutros o alcalinos; Cepa B, suelos ricos en materia orgánica; Cepa C,D suelos vari
ados; Cepa E, suelos húmedos.
* La presencia de otras cepas competitivas junto al clostridium pueden influ
ir en el crecimiento de este. De esta forma los lactobacilos y enterobacterias o
riginan ácidos que impiden el crecimiento del Clostridium, otros microorganismos p
roducen pH neutro o alcalino como muchas bacterias o mohos en las conservas de t
omate y de esta forma favorecen al clostridium.
* Los alimentos que podrían estar implicados: las conservas (vegetal y animal)
sobre todo las caseras ya que estas no suelen reunir las condiciones térmicas ade
cuadas y no se inactivan todas las esporas, tienen que darse condiciones de anae
robiosis, por regla general los alimentos ácidos y salados son inhibidores. La mie
l es peligrosa debido a un potencial uso en niños, puede aparecer el Botulismo inf
antil.
PATOGENIA
Es debida a la producción de toxinas que aparecen al crecer el microorganismo en l
os alimentos. Las toxinas son proteicas y termolábiles, se destruyen a 100º durante
5 minutos, a 80º durante 30 minutos o a 70º durante 60 minutos. Se producen como pro
totoxinas que necesitan ser activadas por enzimas proteoliticos que pueden ser d
e origen endogeno o exógeno. Las toxinas purificadas obtenidas en el laboratorio a
parecen como complejos de toxinas y otras sustancias (hemaglutininas). Los difer
entes tipos de toxinas se diferencian en el grado de polimerización, en la composi
ción de aa y en el requerimiento de activación del enzima. Las toxinas botulínicas A s
on muy tóxicas (neurotóxicas), tienen gran afinidad por las células nerviosas.
MECANISMO DE ACCION
Son ingeridas con los alimentos, absorbiendose en el estómago o intestino delgado,
tambien a través de heridas en condiciones de anaerobiosis; pasan a sangre y a la
linfa donde son transportadas a los lugares de acción, llegan a las terminaciones
nerviosas colinérgicas del S.N periférico, inhibiendo la liberación de acetil colina,
de todas formas existe impulso nervioso y la sensibilidad de la célula no está alte
rada, no tienen actividad sobre el sistema nervioso central.
CLINICA
Incubación de 18-36 horas.
Síntomas: parálisis flácida, simétrica y descendente, en principio no cursa con fiebre a
unque posteriores infecciones si pueden darla. El individuo se mantiene conscien
te, pulso normal, nauseas, vómitos, visión borrosa, dilatación del ojo, dificultad de
deglución, las mucosas orales presentan aspecto seco, debilidad muscular, la muert
e aparece por parada cardiorespiratoria al cabo de una semana. existen antitoxin
as comerciales, si es tratado puede haber recuperación pero de larga convalecencia
. El botulismo a aprtir de heridas presenta clinica similar, pero no existe cuad
ro gástrico. El botulismo infantil se caracteriza por: estreñimiento, al cabo de 1-3
0 días de la ingestión aparece dificultad en la succión, llanto, en los casos más graves
muerte súbita (la miel juega un papel importante)
PREVENCION Y CONTROL
Someter a los alimentos conservados de acidez escasa a alta temperatura. Con los
productos cárnicos curados se usan tratamientos térmicos no esterilizantes a 60º con
nitritos como agente conservante y de baja Aw.
INVESTIGACION
Se trata de poner de manifiesto y detectar la toxina en el alimento, solo cuando
se producen casos de botulismo es interesante buscar la espora y toxina en el a
limento.. La toxina botulinica es muy tóxica por lo que su manipulación debe hacerse
con cuidado, puede producirse la inmunización del personal así como disponer insitu
de la antitoxina bajo control facultativo.
Preparación de la muestra
Se esteriliza la lata por donde se va abrir con alcohol y se flamea con cuidado
porque las toxinas son sensibles al calor, se debe observar las caracteristicas
del envase: si está hinchado, color,... Se mezclan a partes iguales muestra y tampón
fosfato, homogeneizamos y se centrifuga a 3500 rpm durante 30 minutos a 4º, desde
esta forma precipitan todos los sólidos y queda sobrenadante claro, en el sobrena
dante se detecta la toxina y en el sedimento se detectan las cálulas o esporas.
Sedimento
Se alienta para eliminar la flora competitiva y formas vegetativas, se debe trab
ajar con muestras no calentadas para ver la presencia de toxina E, hacen falta 3
baterías de tubos con 15 ml de caldo de carne cocida, en tres tubos caliento a baño
a 60º, otros 3 tubos caliento a 80º y otros tres tubos sin calentar. Siembro cada t
ubo con 1 ml. de muestra y luego se someten a la misma temperatura durante 30 mi
nutos. En los tubos de 60º y 80º mueren las formas vegetativas y esporas del grupo E
, en los tubos a temperatura ambiente no muere nada. Luego incubamos a 30º durante
5 días, si al cabo de 5 días no hay crecimiento se dejan otros 15 días por si tarda e
n germinar, se hace la tinción de Gram y ver si son positivos. El cultivo se centr
ifuga refrigerado y obtengo un sobrenadante (b) y un sedimento. A partir del sed
imento se siembra en agar yema de huevo para anaerobios y se incuba a 30º durante
72 horas. Las colonias de clostridium son con borde regular rodeadas de precipit
ado amarillento debido a la actividad lipolítica que da lugar a ácidos grasos que pr
ecipitan son de aspecto nacarado. Se seleccionan las colonias típicas y se vuelven
a sembrar en caldo de carne cocida o en caldo tripticasa peptona glucosa extrac
to de levadura con tripsina. Si se sospecha de esporas E, para activarla incubam
os a 25-26º.
Sobrenadante
Tengo dos: el de la suspensión fosfato y el del cultivo.
Se divide en tres alicuotas: una se calienta a 100º durante 5 minutos; otra sin ca
lentar se diluye 1:5 y a la otra se añade tripsina 1 % tampón fosfato. Con esto se i
noculan 2 ratones blancos de un peso de 18-20º y se añade 0,5 ml vía intraperotoneal.
Se observan los síntomas durante 72 horas. Normalmente a las 24 horas el pelo apar
ece erizado, la respiración dificil, contracción abdominal, debilidad en las extremi
dades, paralisis progresiva, disnea y muerte. ( existen sueros comerciales antitóx
icos)
Para tipificar la toxina:
1.- Se diluye 1:5 la antitoxina polivalente en solución fisiológica esteril 0,85 % y
se mezclan, 0,5 ml. de muestra y 0,5 ml. de antitoxina se mezcla bien y reposo
1 hora. Inoculo a dos ratones con 0,5 ml vía intraperitoneal y veo la clínica.
2.- Inocular vía intraperitoneal los ratones con 0,5 ml de las antitoxinas, dejamo
s 1 hora y posteriormente se inocula la muestra ( 0,5 ml. diluida 1:5 ), se deja
72 horas y se ven los resultados.