Jurnal Natur Indonesia 6(2): 67-74 (2004)

ISSN 1410-9379 Bakteri resisten merkuri dari PETI Kalimantan Barat 67

Bakteri Resisten Merkuri Spektrum Sempit dari Daerah Bekas

Penambangan Emas Tanpa Izin (PETI) Mandor, Kalimantan
Barat
Risa Nofiani, Gusrizal

Jurusan Kimia, FMIPA (Persiapan), Universitas Tanjungpura, Pontianak 78124

Diterima 04-02-2004 Disetujui 03-03-2004

ABSTRACT
There are 18 mercury-resistant bacterias narrow spectrum have been isolated from ex illegal gold mining area
with tailing 6 years. This isolation was carried out in September 2002. Mercury-resistant bacterias narrow spectrum
is cultivated on solid selected medium refer to Canstein et al, (2002) which is added with 10 mikrogram/mL
HgCl2. After identified followed Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology System, there were found 14
mercury-resistant bacterias narrow spectrum as Enterobacter hafniae and 4 of them as Enterobacter cloacae.
Based on antibiotic resistance assay, there were found 8 isolates are resistant ampicillin, 7 isolates are resistant
chloramphenicol, 17 isolates are resistant tetracycline, and 18 isolated are sensitive rifampicin.

Keywords: Enterobacter hafniae, Enterobacter cloacae, mercury, organomercury

PENDAHULUAN katalisator merkuri dan penambangan emas yang

Pencemaran logam berat merkuri (Hg) pada
tanah dan air sangat membahayakan lingkungan dan
kesehatan manusia. Senyawa merkuri dalam bentuk
Hg(II) dapat terikat pada residu sistein protein/enzim
manusia/binatang sehingga protein/enzim kehilangan
aktivitasnya. Selain Hg(II), senyawa merkuri paling
berbahaya bagi kesehatan manusia adalah senyawa
organomerkuri, khususnya metilmerkuri dan
fenilmerkuri. Senyawa ini bersifat sangat reaktif dan
mempunyai mobilitas tinggi dibanding dengan Hg(O)
atau Hg(II). Hal ini disebabkan gastrointestine
manusia dapat menyerap sekitar 95% senyawa
metilmerkuri (Rugh et al, 2000), dan senyawa ini juga
dapat menyerang syaraf manusia melalui peredaran
darah (Bizily et al, 2000). Pada lingkungan perairan
(aquatic) atau laut (marine) senyawa metilmerkuri
mengalami biomagnification melalui jaringan
makanan, khususnya untuk jaringan makanan di air
(Bizily et al, 2000). Biomagnification terjadi jika
metilmerkuri mencemari perairan atau laut.
Sumber pencemaran merkuri dapat disebabkan
oleh proses geologi dan biologi. Senyawa merkuri
yang terdapat pada batu dan tanah dikikis oleh hujan
dan angin. Meskipun demikian, hal itu tidak sebanding
jumlahnya bila dibandingkan dengan pencemaran
merkuri yang disebabkan oleh aktivitas manusia,
seperti: pembakaran batubara, beberapa jenis produk
minyak bumi, penggunaan fungisida merkuri,
menggunakan merkuri untuk ekstraksi partikel emas.
Salah satu usaha untuk detoksifikasi merkuri
dapat dilakukan menggunakan mikroorgansime
resisten merkuri, misalnya bakteri resisten merkuri.
Detoksifikasi merkuri oleh bakteri resisten merkuri
terjadi karena bakteri resisten merkuri memiliki gen
resisten merkuri, mer operon (Silver & Phung 1998).
Struktur mer operon berbeda untuk tiap jenis bakteri.
Umumnya struktur mer operon terdiri dari gen
metaloregulator (merR), gen transpor merkuri (merT,
merP, merC), gen merkuri reduktase (merA) dan
organomerkuri liase (merB). Menurut Liebert et al,
(1999), model mekanisme resisten merkuri bakteri
gram negatip adalah sebagai berikut Hg(II) yang
masuk periplasma terikat ke pasangan residu sistein
MerP. Selanjutnya MerP mentransfer Hg(II) ke residu
sistein MerT atau MerC. Akhirnya ion Hg
menyeberang membran sitoplasma melalui proses
reaksi pertukaran ligan menuju sisi aktif flavin disulfida
oksidoreduktase, merkuri reduktase (MerA). Merkuri
reduktase mengkatalisis reduksi Hg(II) menjadi Hg(0)
volatil dan sedikit reaktif. Akhirnya Hg(0) berdifusi
dilingkungan sel untuk selanjutnya dikeluarkan dari
sel. Bakteri yang hanya memiliki protein merkuri
reduktase (MerA) disebut dengan bakteri resisten
merkuri spektrum sempit. Beberapa bakteri selain
memiliki protein merkuri reduktase (MerA) juga
memiliki protein organomerkuri liase (MerB). MerB
68 Jurnal Natur Indonesia 6(2): 67-74 (2004)
berfungsi dalam mengkatalisis pemutusan ikatan
merkuri-karbon sehingga dihasilkan senyawa organik
dan ion Hg yang berupa garam tiol. Bakteri yang
memiliki kedua protein merkuri reduktase (MerA) dan
organomerkuri liase (MerB) disebut dengan bakteri
resisten merkuri spektrum luas.
Mikroorganisme yang terdapat pada daerah
tercemar merkuri berperan utama untuk detoksifikasi
merkuri. Oleh karena itu, mikroorganisme yang
terdapat pada daerah tercemar merkuri merupakan
sumber untuk isolasi bakteri resisten merkuri. Adapun
tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi bakteri
resisten merkuri spektrum sempit dari daerah
tercemar merkuri yaitu penembangan emas tanpa izin
(PETI) Mandor, Kalimantan Barat. Strain yang
menunjukkan resiten merkuri dengan konsentrasi
tertinggi selanjutnya diidentifikasi dan diuji
resistensinya terhadap antibiotik ampisilin, rifampisin,
tetrasiklin dan klorampenikol. Pengujian resistensi
bakteri resisten merkuri terhadap antibiotik dilakukan
untuk mengetahui fenotipe setiap bakteri resisten
merkuri. Pada penelitian berikutnya, fenotipe ini akan
digunakan sebagai marka untuk mengetahui
kemungkinan lokasi gen mer operon bakteri resisten
merkuri dengan mengunakan metode mating.
BAHAN DAN METODE
Sampling dilakukan dengan mengambil
sedimen 1-5 cm dari permukaan tanah pada bulan
September 2002 dari daerah bekas penambangan
emas tanpa izin (PETI) Mandor, Kalimantan Barat.
Sampel sedimen diambil pada 3 lokasi, yaitu: lokasi I
dengan lama penambangan 1 tahun (1S), lokasi II
dengan lama penambangan 3 tahun (3S), dan lokasi
III dengan lama penambangan 6 tahun (6S). Setiap
lokasi, sedimen diambil pada 3 titik. Jumlah sedimen
yang diambil pada setiap titik kira-kira 2 kg.
Sampel sedimen setiap titik pada lokasi 1S
dicampur sehingga diperoleh sampel komposit.
Sampel komposit disuspensikan ke dalam bufer salin
0,9%. Sebanyak 100¼L larutan jernih sampel yang
telah disuspensi dalam buffer salin diinokulasi pada
media nutrient broth (yeast extract 2 g/L, bacto pepton
5 g/L, NaCl 5 g/L) dan diinkubasi pada temperatur 30
o
C selama 12-16 jam. Teknik perbanyakan kultur
bakteri 1S digunakan juga untuk perbanyakan kultur
bakteri 3S dan 6S. Selanjutnya kultur bakteri 1S, 3S,
Nofiani & Gusrizal.
dan 6S digunakan untuk isolasi bakteri resisten
merkuri pada tahap berikutnya.
Media seleksi padat yang digunakan untuk
isolasi bakteri resisten merkuri adalah media seleksi
padat yang digunakan oleh Canstein et al, (2002)
dengan variasi konsentrasi HgCl2. Komposisi media
seleksi Canstein et al. (2002) terdiri dari NaCl 15 g/L,
sukrosa 4 g/L dan yeast extract 2 g/L. Variasi
konsentrasi HgCl2 yang digunakan adalah 1¼ g/mL,
5¼ g/mL, dan 10¼ g/mL.
Sebelum dilakukan isolasi bakteri resisten
merkuri maka dilakukan seleksi kultur bakteri yang
akan digunakan untuk isolasi bakteri resisten merkuri.
Seleksi ini dilakukan dengan cara inokulasi 100 ¼L
kultur bakteri 1S dalam media seleksi padat yang
mengandung HgCl2 1¼ g/mL dan diinkubasi pada
temperatur 30oC selama 16-24 jam. Kultur bakteri 1S
juga diinokulasi pada media seleksi padat yang
mengandung HgCl 2 5¼ g/mL dan 10¼ g/mL.
Selanjutnya diamati jumlah koloni yang tumbuh.
Sebagai kontrol kultur bakteri 1S ditumbuhkan pada
media seleksi padat tanpa penambahan HgCl2. Setiap
tahap seleksi kultur bakteri ini dilakukan triplo. Selain
kultur bakteri 1S, seleksi ini dilakukan juga untuk kultur
bakteri 3S dan 6S. Kultur bakteri yang tumbuh dalam
media seleksi padat yang mengandung HgCl2 dengan
konsentrasi paling tinggi akan diisolasi untuk
memperoleh isolat bakteri resisten merkuri. Hal ini
dilakukan dengan cara kultur bakteri yang dapat
tumbuh pada media seleksi dengan konsentrasi HgCl2
tertinggi diencerkan 10 kali. Selanjutnya 100¼ L kultur
bakteri yang telah diencerkan diinokulasi triplo pada
media seleksi padat dengan konsentrasi HgCl 2
tertinggi dan diisolasi secara acak untuk memperoleh
isolat bakteri resisten merkuri. Isolat bakteri resisten
diberi kode RG1. Untuk isolat bakteri resisten merkuri
selanjutnya diberi kode RG2, RG3, dan seterusnya.
Identifikasi bakteri dilakukan di Unit
Laboratorium Kesehatan Propinsi Kalimantan Barat
dengan sistem Bergey’s Manual of Determinative
Bacteriology. Pada tahap awal identifikasi, bakteri
resisten merkuri dilakukan uji morfologi dengan
pewarnaan gram (Cappuccino & Sherman 1983).
Isolat bakteri resisten merkuri dioles pada kaca slide
dan ditambahkan 1 tetes kristal violet selama 1 menit
kemudian dicuci dengan air mengalir. Isolat bakteri
ditambahkan 1 tetes Gram’s iodine mordant (Emerck)

selama 1 menit, kemudian dicuci dengan air mengalir.
Selanjutnya isolat bakteri ditambah etil alkohol 95%
sampai kristal violet tidak larut lagi dan dicuci dengan
air mengalir kembali. Akhirnya isolat bakteri
ditambahkan safranin selama 45 detik dan dicuci
dengan air mengalir, kemudian dikeringkan dan
diperiksa dengan mikroskop.
Uji biokimia yang dilakukan meliputi tes
fermentasi karbohidrat, tes pembentukan indol, tes
produksi H2S, tes penggunaan sitrat, tes urease, tes
dekarboksilase dan tes ONPG. Substrat yang
digunakan untuk tes fermentasi karbohidrat adalah
glukosa, laktosa, manitol, maltosa, dan sakarosa. Tes
fermentasi karbohidrat dengan substrat glukosa
dilakukan dengan menginokulasi bakteri resisten
merkuri ke 50 mL media pepton water (Kia Difco) yang
mengandung 0,5 mL bromthymol blue 0,4% dan
glukosa 1%, diinkubasi 24-48 jam pada temperatur
300C (Collins & Lyne 1985). Tes positif ditandai dengan
terbentuk warna kuning dan tes negatif ditandai
dengan warna biru. Hal yang sama dilakukan juga
untuk tes fermentasi karbohidrat dengan substrat
laktosa, manitol, maltosa dan sakarosa. Konsentrasi
substrat yang digunakan adalah laktosa 0,5%, manitol
0,5%, maltosa 1%, dan sakarosa 2%. Tes
pembentukan indol dilakukan dengan menginokulasi
bakteri resisten merkuri ke media water pepton
selama 24-48 jam pada temperatur 300C selanjutnya
ditambah 0,5 mL Kovac’s reagent (Emerck)
(Cappuccino & Sherman 1983; Collins & Lyne 1985).
Tes positif ditandai dengan terbentuknya warna
merah. Tes produksi H 2 S dilakukan dengan
menginokulasi bakteri resisten merkuri ke media SIM
(pepton 30 g/L, beef extract 3 g/L, fero amonium sulfat
0,2 g/L dan natrium tiosulfat 0,025 g/L, agar 3 g/L)
selama 24-48 jam pada temperatur 300C (Cappuccino
& Sherman 1983).
Tes positif ditandai dengan terbentuknya endapan
hitam. Hasil tes ini dapat juga digunakan untuk tes
motilitas. Bakteri motil ditandai dengan bentuk koloni
yang lebih besar dan keruh jika dibandingkan dengan
koloni tidak motil. Tes penggunaan sitrat dilakukan
dengan menginokulasi bakteri resisten merkuri ke
media Simmon’s citrate agar (Sigma) dan diinkubasi
24-48 jam pada temperatur 30 0C (Cappuccino &
Sherman 1983). Tes positif ditandai dengan
terbentuknya warna biru. Tes urease dilakukan
dengan menginokulasi bakteri resisten merkuri ke
Bakteri resisten merkuri dari PETI Kalimantan Barat 69
media padat urea Christensen (Sigma) selama 24-
48 jam pada temperatur 300C (Cappuccino & Sherman
1983). Tes positif ditandai dengan terbentuknya warna
merah. Tes dekarboksilase dengan substrat DL-lisin
dilakukan dengan menginokulasi bakteri resisten
merkuri ke media Decarboxylase broth base Moeller
(Sigma) yang mengandung DL-lisin 2% dan diatur pH
= 8 dengan penambahan NaOH 0,1 N selanjutnya
diinkubasi selama 24-48 jam pada temperatur 300C
(Collins & Lyne 1985). Tes positif ditandai dengan
terbentuknya warna ungu. Hal yang sama juga
dilakukan untuk tes dekarboksilase dengan substrat
DL-arginin dan DL-ornithin dengan konsentrasi 2%
dan 2% secara berturut-turut. Tes ONPG dilakukan
dengan menginokulasi bakteri resisten merkuri ke
media ONPG broth selama 24 jam pada temperatur
300C (Collins & Lyne 1985). Tes positif ditandai dengan
terbentuknya warna kuning.
Uji resisten antibiotik dilakukan dengan
menginokulasi 18 bakteri resisten merkuri spektrum
sempit pada 2 macam media seleksi padat. Pertama,
media seleksi padat yang mengandung antibiotik dan
diinkubasi pada suhu 300C selama 16-24 jam. Kedua.
media seleksi padat yang mengandung antibiotik dan
HgCl2 10¼ g/mL dan diinkubasi pada suhu 30 0C
selama 16-24 jam. Antibiotik yang digunakan untuk
uji resisten antibiotik pada kedua media adalah:
ampicillin dengan konsentrasi 50¼ g/mL (Ausubel et
al, 1995), tetracyclin dengan konsentrasi 200¼ g/mL
(Smit et al, 1998), chloramphenicol dengan
konsentrasi 50¼ g/mL (Smit et al, 1998) dan
rifampicin dengan konsentrasi 150¼ g/mL (Smit et
al, 1998) .
HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi Bakteri Resisten Merkuri Spektrum
Sempit. Media seleksi yang digunakan untuk isolasi
bakteri resisten merkuri spektrum sempit adalah
media seleksi menurut Canstein et al, (2002). Media
selaksi ini dapat mengurangi penggunaan konsentrasi
HgCl2 dibandingkan dengan penggunaan media kaya
lain seperti media Luria Bertani (LB). Hal ini
disebabkan media seleksi Canstein et al. (2002) tidak
mengurangi toksisitas Hg terhadap sel bakteri. Pada
media kaya asam amino terutama asam amino sistein,
toksisitas Hg berkurang, karena gugus sulfihidril
sistein dapat mengikat Hg.
70 Jurnal Natur Indonesia 6(2): 67-74 (2004)
Isolasi bakteri resisten merkuri spektrum sempit
diawali dengan menginokulasi kultur bakteri 1S, 3S,
dan 6S pada media seleksi padat dengan variasi
konsentrasi HgCl2. Hasil inokulasi menunjukkan 6S
tumbuh paling cepat pada media seleksi padat
dengan konsentrasi HgCl2 tertinggi yaitu 10¼ g/mL
(Tabel 1). Hal ini menunjukkan bahwa bakteri 6S yang
tumbuh pada media seleksi diduga adalah bakteri
Tabel 1. Kemampuan tumbuh kultur bakteri dalam media seleksi
padat dengan variasi konsentrasi HgCl2.
Jumlah koloni rata-rata yang tumbuh dalam media
Stok
seleksi padat yang mengandung HgCl2
Bakteri
Kontrol 1 µg/mL 5 µg/mL
1S >500 >500 >500
3S >500 >500 6 koloni
6S >500 >500 >500
Negatip: tidak ada koloni yang tumbuh.
resisten merkuri dengan tingkat ketahanan merkuri
yang tinggi. Hal ini berdasarkan hasil penelitian
Canstein et al, (2002) yang menyatakan bahwa isolat
bakteri resisten merkuri yang dapat tumbuh pada
media seleksi padat dengan konsentrasi HgCl2 5¼ g/
mL dapat dikatakan bahwa bakteri tersebut memiliki
tingkat ketahanan merkuri yang tinggi. Beberapa isolat
bakteri resisten merkuri dengan tingkat ketahanan
merkuri yang tinggi yaitu HgCl 2 5¼ g/mL adalah
Pseudomonas stutzeri Ibu8, Pseudomonas putida
Spi3, Psedomonas putida Spi4, Pseudomonas putida
Elb2, Pseudomonas putida Kon12, dan Pseudomonas
aeruginosa Bro12 (Canstein et al, 2002).
Hasil inokulasi bakteri resisten merkuri dari
kultur bakteri 6S yang telah diencerkan 10 kali
diperoleh kira-kira 50 koloni/cawan petri. Tiap cawan
petri diisolasi secara acak sebanyak ±7 koloni
sehingga diperoleh 18 isolat bakteri resisten merkuri.
Resistensi kultur bakteri 1S, 3S, dan 6S
terhadap merkuri anorganik berbeda. Menurut Smit
et al, (1998), perbedaan resistensi ini berhubungan
dengan mekanisme respon populasi bakteri terhadap
merkuri. Ada 3 mekanisme respon terhadap stres
merkuri. Pertama, dengan cara menghambat
metabolisme sel sehingga pertumbuhan sel lambat
atau sel mati. Kedua, menginduksi sistem operon
resisten merkuri untuk bekerja sehingga sel tetap
hidup dalam kondisi stres. Ketiga, adanya plasmid
yang mengandung gen resisten merkuri yang masuk
ke dalam sel.
Kultur bakteri 1S dan 3S menunjukkan
resistensi merkuri anorganik lebih rendah
Nofiani & Gusrizal.
dibandingkan dengan 6S. Kemungkinan kultur bakteri
1S dan 3S hanya memiliki mekanisme respon dengan
cara menghambat metabolisme sel (Smit et al, 1998)
atau dengan sistem multidrug, multication, atau
nodulation signal efflux complexes (Nikaido 1996)
sehingga kultur bakteri 1S dan 3S masih dapat hidup
pada konsentrasi HgCl 2 1 dan 5¼ g/mL. Sistem
multidrug, multication, atau nodulation signal efflux
complexes merupakan system yang dapat memompa
keluar beberapa jenis obat-obatan, kation divalent
atau nodulationsiganal lipooligosakarida. Pada
konsentrasi lebih besar atau sama dengan HgCl2 10¼
10 µg/mL
g/mL kultur bakteri 1S dan 3S tidak dapat mentelorir
Negatip
Negatip keberadaan HgCl2. Bakteri yang dapat hidup untuk
>500 konsentrasi HgCl2 10¼ g/mL diduga hanya bakteri
yang mengandung gen resisten merkuri. Oleh karena
itu, diduga kultur bakteri 6S mengandung gen resisten
merkuri spektrum sempit.
Keberadaan gen resisten merkuri sampel
bakteri 6S diduga berhubungan langsung dengan
lamanya kandungan Hg pada lokasi penambangan.
Tingginya kontaminasi Hg pada daerah tersebut akan
menginduksi sel bakteri untuk menerima gen resisten
merkuri dari lingkungan (Smit et al, 1998).
Identifikasi Bakteri Resisten Merkuri.
Delapan belas isolat bakteri resisten merkuri
diidentifikasi dengan sistem Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology. Identifikasi dilakukan
dengan uji morfologi dan aktivitas biokimia. Uji
morfologi dilakukan dengan tes pewarnaan gram dan
tes motilitas. Hasil pewarnaan gram delapan belas
bakteri resisten merkuri dengan kode RG1, RG2,
RG3, RG4, RG5, RG6, RG7, RG8, RG9, RG10,
RG12, RG13, RG16, RG17, RG19, RG20, RG21, dan
RG22 yang diperiksa dengan mikroskop
menunjukkan sel bewarna merah sehingga semua sel
bakteri dikategorikan bakteri gram negatif (Tabel 2).
Delapan belas bakteri resisten merkuri berbentuk
batang (Tabel 2). Uji motilitas dengan menggunakan
Tabel 2. Uji morfologi bakteri resisten merkuri.
Hasil Uji Morfologi
Kode Isolat Pewarnaan Bentuk Sel Motilitas
Gram
RG1, RG2, RG3,
RG4, RG5, RG6,
RG7, RG8, RG9, Bakteri Gram
Batang Motil
RG10, RG12, RG13, Negatip
RG16, RG17, RG19,
RG20, RG21, RG22
 Bakteri resisten merkuri dari PETI Kalimantan Barat 71

media semipadat SIM menunjukkan 18 bakteri menyebabkan pH media fermentasi menurun

resisten merkuri adalah motil (Tabel 2). Motilitas
bakteri resisten merkuri disebabkan karena sel bakteri
memiliki flagela.
Identifikasi bakteri berdasarkan uji aktivitas
biokimia dilakukan dengan cara membandingkan
aktivitas biokimia setiap bakteri. Aktivitas biokimia
setiap jenis bakteri berbeda. Hal ini disebabkan
karena setiap bakteri mempunyai akivitas enzimatik
yang berbeda. Tes fermentasi karbohidrat
menunjukkan 4 bakteri resisten merkuri dengan kode
RG4, RG9, RG10 dan RG17 mampu melakukan
fermentasi karbohidrat dengan substrat glukosa,
laktosa, manitol, maltosa dan sakarosa tetapi 14 isolat
bakteri resisten merkuri dengan kode RG1, RG2,
RG3, RG5, RG6, RG7, RG8, RG12, RG13, RG16,
RG19, RG20, RG21, dan RG22 hanya mampu
melakukan fermentasi karbohidrat dengan substrat
glukosa, manitol, maltosa dan sakarosa (Tabel 3).
sehingga indikator bromthymol blue yang terdapat
pada media berubah dari biru menjadi kuning.
Tes produksi indol bakteri bertujuan untuk
memeriksa kemampuan bakteri mendegradasi asam
amino esensial triptopan (Cappuccino & Sherman
1983). Enzim yang berperan dalam proses ini adalah
triptopanase. Produk metabolit triptopan adalah indol,
asam piruvat dan amonia. Keberadaan indol dideteksi
dengan Kovac’s reagent yang menyebabkan
terbentuknya warna merah. Warna merah terjadi
karena terbentuknya komplek antara indol dan p-
dimetilaminobenzaldehid dari Kovac’s reagent.
Delapan belas bakteri resisten merkuri menunjukkan
bakteri tersebut tidak mampu mendegradasi triptopan
atau tes negatif (Tabel 3).
Beberapa bakteri mampu mereduksi sulfur
organik yang terdapat pada asam amino sistein.
Reaksi ini dibantu oleh enzim sistein desulferase

Tabel 3. Uji biokimia bakteri resisten merkuri.

Hasil Uji Biokimia

Fermentasi Karbohidrat Pemben Pro Penggu Dekarbok ON
Kode
tukan duksi naan silase PG Kesimpulan
Isolat Urease
Glukosa Lak Mani Mal Saka Indol H2S Sitrat Lisin Arginin Orni
tosa tol tosa rosa thin
RG1 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG1
RG2 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG2
RG3 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG3
RG4 +, gas + + + + - - +, lambat + - + + + E. cloacae RG4
RG5 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG5
RG6 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG6
RG7 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG7
RG8 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG8
RG9 +, gas + + + + - - +, lambat + - + + + E. cloacae RG9
RG10 +, gas + + + + - - +, lambat + - + + + E. cloacae RG10
RG12 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG12
RG13 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG13
RG16 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG16
RG17 +, gas + + + + - - +, lambat + - + + + E. cloacae RG17
RG19 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG19
RG20 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG20
RG21 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG21
RG22 +, gas - + + + - - - + + - + + E. hafniae RG22

(+): hasil tes positif; (-): hasil tes negatif.

Kemampuan bakteri resisten merkuri
melakukan fermentasi karbohidrat ditandai dengan
adanya produksi asam organik (asam asetat, asam
laktat, asam formiat dan asam suksinat) dan gas
(karbon dioksida dan hidrogen) (Cappuccino &
Sherman 1983). Produksi asam organik
(Cappuccino & Sherman 1983). Kemampuan bakteri
menghasilkan H 2S digunakan juga untuk melihat
aktivitas biokimia bakteri resisten merkuri. Hasil tes
produksi H2S pada 18 isolat bakteri resisten merkuri
menunjukkan bakteri resisten merkuri tidak memiliki
enzim sistein desulferase sehingga tidak mampu
menghasilkan H2S atau tes negatif (Tabel 3).
72 Jurnal Natur Indonesia 6(2): 67-74 (2004)
Bakteri coliform dapat meggunakan sitrat
sebagai sumber energi apabila tidak ada glukosa atau
laktosa. Hal ini dapat terjadi jika bakteri coliform
memiliki enzim sitrat permease (Cappuccino &
Sherman 1983; Barnet & Venghaus 1989). Sitrat
permease berperan dalam membawa sitrat dari luar
sel ke dalam sel. Sitrat yang telah berada di dalam
sel akan masuk ke dalam siklus Krebs. Sitrat
merupakan intermediet utama siklus Krebs. Pada
siklus Krebs, sitrat akan diubah menjadi asam
oksaloasetat dan asam asetat dengan bantuan enzim
sitrase. Selanjutnya asam oksaloasetat dan asam
asetat dirubah menjadi asam piruvat dan karbon
dioksida. Karbon dioksida bereaksi dengan air dan
natrium yang terdapat pada media Simmons citrate
agar sehingga membentuk natrium bikarbonat.
Keberadaan natrium bikarbonat mengakibatkan
media bersifat basa sehingga merubah warna
indikator bromthymol blue dari hijau menjadi biru. Tes
penggunaan sitrat positif ditandai dengan adanya
enzim sitrat permease pada bakteri. Hasil tes
penggunaan sitrat menunjukkan bahwa 18 isolat
bakteri resisten merkuri memiliki enzim sitrat
permease atau tes positif (Tabel 3).
Urease merupakan suatu enzim pemecah
ikatan karbon dan nitrogen pada senyawa amida.
Senyawa amida yang dapat digunakan untuk tes
urease adalah urea (Cappucino & Sherman 1983;
Barnett & Venghaus 1988). Urea dengan adanya
enzim urease akan diubah menjadi karbon dioksida
dan amoniak. Keberadaan enzim dideteksi dengan
berubah warna media cair urea menjadi merah. Hasil
tes urease untuk 18 bakteri resisten merkuri
menunjukkan 4 bakteri resisten merkuri dengan kode
RG4, RG9, RG10 dan RG17 memiliki enzim urease
tes positip dan 14 bakteri resisten merkuri dengan
kode RG1, RG2, RG3, RG5, RG6, RG7, RG8, RG12,
RG13, RG16, RG19, RG20, RG21, dan RG22 tidak
memiliki enzim urease atau tes negatif (Tabel 3)
Reaksi dekarboksilasi dari suatu asam amino
merupakan reaksi pemecahan gugus karboksil oleh
enzim dekarboksilase, sehingga dihasilkan amin dan
karbon dioksida (Collin & Lyne 1985). Keberadaan
amin menyebabkan warna media dekarboksilasi
Moeller menjadi warna ungu (tes positif). Tes
dekarboksilasi asam amino dilakukan dengan
menggunakan 3 substrat asam amino yaitu lisin,
Nofiani & Gusrizal.
arginin, dan ornithin. Tes dekarboksilasi lisin negatif
untuk bakteri resisten merkuri dengan kode RG4,
RG9, RG10 dan RG17 dan positif untuk bakteri
resisten merkuri dengan kode RG1, RG2, RG3, RG5,
RG6, RG7, RG8, RG12, RG13, RG16, RG19, RG20,
RG21 dan RG22 (Tabel 3). Tes dekarboksilasi arginin
positif untuk bakteri resisten merkuri dengan kode
RG4, RG9, RG10 dan RG17 dan negatif untuk bakteri
resisten merkuri dengan kode RG1, RG2, RG3, RG5,
RG6, RG7, RG8, RG12, RG13, RG16, RG19, RG20,
RG21 dan RG22 (Tabel 3). Tes dekarboksilasi ornithin
positif untuk 18 bakteri resisten merkuri (Tabel 3).
Keberadaan enzim β-galaktosidase pada
bakteri dapat dideteksi apabila bakteri diinokulasi
dalam media cair ONPG. Bakteri yang mengandung
β-galaktosidase dapat menghidrolisa o-nitrofenil-D-
galaktopiranosida (ONPG) sehingga dihasilkan o-
nitrofenil yang bewarna kuning (Collins & Lyne 1985;
Barnett & Venghaus 1988). Tes ONPG 18 bakteri
resisten merkuri menunjukkan 18 bakteri resisten
merkuri positip memiliki enzim β-galaktosidase.
Identifikasi spesies dari 18 bakteri resisten
merkuri dilakukan dengan cara mencocokkan hasil
uji morfologi dan uji aktivitas biokimia 18 bakteri
resisten merkuri dengan tabel uji morfologi dan uji
aktivitas biokimia spesies yang terdapat pada
Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. Hasil
identifikasi 18 bakteri resisten merkuri menunjukkan
bahwa 4 bakteri resisten merkuri dengan kode RG4,
RG9, RG10 dan RG17 diduga adalah bakteri jenis
Enterobacter cloacae dan 14 bakteri resisten merkuri
dengan kode RG1, RG2, RG3, RG5, RG6, RG7, RG8,
RG12, RG13, RG16, RG19, RG20, RG21 dan RG22
diduga adalah bakteri Enterobacter hafniae (Tabel 3).
Uji Resistensi Antibiotik Bakteri Resisten
Merkuri Spektrum Sempit. Hasil uji resisten antibiotik
dengan dua jenis media seleksi yang mengandung
antibiotik dan media seleksi yang mengandung
antibiotik dan HgCl 2 menunjukkan tidak ada
perbedaan (Tabel 4). Strain bakteri yang resisten
terhadap ampicillin dalam media seleksi yang
mengandung ampicillin menunjukkan resisten
ampicillin juga terhadap media seleksi yang
mengandung HgCl2 10¼ g/mL dan ampicillin.
Hasil uji resisten antibiotik menunjukkan
bahwa 9 isolat resisten terhadap ampicillin, 7 isolat
resisten terhadap chloramphenicol, dan 17 strain
 Bakteri resisten merkuri dari PETI Kalimantan Barat 73

resisten terhadap tetracycilin tetapi semua strain diduga karena E. cloacae RG9 mengandung plasmid
sensitif terhadap antibiotik rifampicin (Tabel 4). yang tidak mengandung gen resisten antibiotik atau
Tujuh belas bakteri resisten merkuri spektrum E. cloacae RG9 tidak mengandung plasmid. Jika E.
sempit resisten terhadap tetracyclin. Resistensi ini cloacae RG9 tidak memiliki plasmid berkemungkinan
kemungkinan disebabkan karena jenis bakteri yang besar mer operon bakteri ini terletak pada kromosom.
Tabel 4. Uji resistensi antibiotik beberapa strain bakteri resisten merkuri.

Resistensi
Strain
Amp Tet Rif Chlo HgCl2 +Amp HgCl2 + Tet HgCl2 + Rif HgCl2 + Chlo
E. hafniae RG1 - + - - - + - -
E. hafniae RG2 - + - - - + - -
E. hafniae RG3 + + - + + + - +
E. cloacae RG4 + + - + + + - +
E. hafniae RG5 + + - + + + - +
E. hafniae RG6 - + - - - + - -
E. hafniae RG7 - + - - - + - -
E. hafniae RG8 + + - - + + - -
E. cloacae RG9 - - - - - - - -
E. clacaae RG10 + + - + + + - +
E. hafniae RG12 + + - + + + - +
E. hafniae RG13 - + - - - + - -
E. hafniae RG16 - + - + - + - +
E. cloacae RG17 + + - - + + - -
E. hafniae RG19 + + - + + + - +
E. hafniae RG20 - + - - - + - -
E. hafniae RG21 - + - - - + - -
E. hafniae RG22 + + - - + + - -
Amp: ampicillin, Tet: tetracyclin, Rif: rifampicin, Chlo: chloramphenicol, +: resisten terhadap antibiotik, -: sensitif terhadap antibiotik.

diperoleh adalah bakteri gram negatif yaitu genus KESIMPULAN

Enterobacter. Menurut Nikaido (1996) dan Hernandez
et al, (1998), bakteri gram negatif lebih resisten
terhadap obat-obatan dibandingkan dengan bakteri
gram positip. Karena bakteri gram negatif mempunyai
sistem efflux aktif untuk obat-obatan, yaitu multidrug,
multication, atau nodulation signal efflux complexes.
Kemungkinan lain adalah adanya gen resisten
tetracyclin yang terdapat di dalam sel. Gen ini masuk
ke dalam sel bersamaan dengan mer operon (Liebert
et al, 1999). Contoh plasmid NR1 yang membawa
mer operon dan bermacam-macam gen resisten
antibiotik.
Dari hasil penelitian ini ternyata isolat yang
berasal dari spesies yang sama menunjukkan
resistensi yang berbeda terhadap antibiotik
chloramphenicol dan ampicillin. Hal ini kemungkinan
disebabkan adanya perbedaan jenis plasmid yang
masuk ke dalam sel. Perbedaan jenis plasmid yang
masuk biasanya ditandai dengan adanya penanda
berupa antibiotik.
E. cloacae RG9 menunjukan fenotipe resisten
terhadap merkuri spektrum sempit tetapi sensitif
terhadap semua jenis antibiotik yang diuji. Hal ini
Bakteri resisten merkuri telah diisolasi dari
daerah bekas penambangan emas tanpa izin (PETI)
yang berumur 6 tahun dari daerah Mandor,
Kalimantan Barat. Media seleksi yang digunakan
isolasi bakteri resisten merkuri adalah media seleksi
padat Canstein et al, (2002) yang mengandung HgCl2
10¼ g/mL. Hasil isolasi bakteri resisten merkuri
diperoleh 18 isolat bakteri resisten merkuri spektrum
sempit. Hasil identifikasi 18 bakteri resisten merkuri
spektrum sempit diperoleh 2 spesies bakteri, yaitu:
E. cloacae untuk kode strain RG4, RG9, RG10, dan
RG17, dan E. hafniae untuk strain RG1, RG2, RG3,
RG5, RG6, RG7, RG8, RG12, RG13, RG16, RG19,
RG20, RG21 dan RG22. Uji resistensi antibiotik
terhadap 18 bakteri resisten merkuri spektrum sempit
menunjukkan 17 bakteri resisten terhadap tetracyclin
100¼ g/mL , yaitu E. hafniae RG1, E. hafniae RG2,
E. hafniae RG3, E. cloacae RG4, E. hafniae RG5, E.
hafniae RG6, E. hafniae RG7, E. hafniae RG8, E.
cloacae RG10, E. hafniae RG12, E. hafniae RG16,
E. cloacae RG17, E. hafniae RG19, E. hafniae RG20,
E. hafniae RG21 dan E. hafniae RG22. Semua bakteri
sensitif terhadap rifampicin 150¼ g/mL. Sembilan
74 Jurnal Natur Indonesia 6(2): 67-74 (2004)
strain resisten merkuri menunjukkan resisten terhadap
ampicillin 50¼ g/mL, yaitu: E. hafniae RG3, E. cloacae
RG4, E. hafniae RG5, E. hafniae RG8, E. cloacae
RG10, E. hafniae RG12, E. cloacae RG17, E. hafniae
RG19 dan E. hafniae RG22. Tujuh bakteri
menunjukkan resisten terhadap chloramphenicol 25¼
g/mL, yaitu E. hafniae RG3, E. cloacae RG4, E.
hafniae RG5, E. cloacae RG10, E. hafniae RG12, E.
hafniae RG16 dan E. cloacae RG19.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini di danai oleh Proyek Pengembangan
Diri Forum HEDS tahun 2002. Penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada Bapak Fadjar
Riyanto dan Harald von Canstein atas saran yang
diberikan pada penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA.
Ausubel, F., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman,
J.G., Sith, J.A. & Struhl, K. 1995. Short Protocols in
Molecular Biology. New York: John Wiley.
Barnet, M.E. & Venghaus, J.D. 1989. Microbiology Laboratory
Exercise. Lowa: Brown Publisher
Bizily, S.P., Rugh, C.H. & Meagher, R.C. 2000. Phytodetoxification
of hazardous organomercurials by genetically engineered
Plants. Nat. Biotechnol. 18: 213-217.
Nofiani & Gusrizal.
Buchanan, R.E. & Gibbons, N.E. 1974. Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology. Baltimore: The William and
Wilkins.
Canstein, H.V., Li, Y., Leonhauser, J., Haase, E., Felske, A.,
Deckwer, W.D. & Dobler, I.W. 2002. Spatially oscillating
activity and microbial succession of mercury-reducing
biofilms in a technical-scale bioremediation system. Appl.
Environ. Microbiol. 68: 1938-1946.
Cappuccino, J.G. & Sherman, N. 1983. Microbiology: A Laboratory
Manual. California: Addison-Wesley.
Collins, C.H. & Lyne, P.M. 1985. Microbiological Methods. London:
Butterworth & Co.
Hernandez, A., Mellado, R.P. & Martinez, J.L. 1998. Metal
accumulation and vanadium-induced multidrug resistance
by environmental isolates of Escherichia hermanii and
Enterobacter cloacae. Appl. Environ. Microbiol. 64: 4317-
4320.
Liebert, C.A., Hall, R.M. & Summers, A.O. 1999. Transposon
Tn21, flagship of the floating genome. Microbiol.Mol. Biol.
Rev. 63: 507-522.
Nikaido, H. 1996. Multidrug efflux pumps of gram-negative
bacteria. J. Bacteriol. 178: 5853-5859.
Rugh, C.L., Bizily, S.P. & Meagher, R.B. 2000. Phytoreduction of
Environmental Mercury Pollution. New York: John Wiley
and Sons.
Smit, E., Wolters, A. & Elsas, J.D.V. 1998. Self-transmissible
mercury resistance plamids with gene mobilizing capacity
in soil bacterial populations: influence of wheat roots and
mercury addition. Appl. Environ. Microbiol. 64: 1210-1219.
Silver, S. & Phung, L.T. 1996. Bacterial heavy metal resistance:
new suprises. Annu. Rev. Microbiol. 50: 753-789.