GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA.

OBJETIVO:

Determinaciòn de la Hormona Gonadotropina Coriónica Humana (HCG) en orina por

medio de una reacción inmunológica.

INTRODUCCIÓN.

El término ‘‘prueba de embarazo’’ es de hecho un término erróneo, ya que la mayoría

de estos procedimientos lo que miden es la presencia de Gonadotropina Coriónica Humana

(HGC) y no la de un feto

La HGC es una glucoproteína producida por las células trofoblásticas después de

aproximadamente 10 días de la concepción. Recientemente se ha eludido la estructura y su

secuencia de aminoácidos: la HGC es un dímero de peso molecualar aproximadamente de

28.000, compuesto de subunidades, a y b. Las subunidades a no son específicas, siendo

compartidas con la de la hormona luteinizante (LH), la hormona estimulante del folículo (FSH) y

la hormona estimulante del tiroides (TSH). Las subunidades b son únicas en la HCG.

Después de la concepción, se produce un rápido aumento en la cantidad de HCG en la

orina aproximadamente a las 5 semanas de gestación (5 semanas después del último periodo

menstrual), que alcanza los niveles máximos en un tiempo aproximado de 10 semanas de

gestación.

Pregnosticon “All-in” 1000M es un equipo de diagnóstico para la detección inmunoquímica de

gonadotrofina coriónica humana (hCG) en la orina. La adición simultánea de hCG libre, que

está presenta en la orina de mujeres embarazadas, bloquea los anticuerpos y evita la reacción

con los eritrocitos. En tal caso, los eritrocitos sedimentarán en el fondo del tubo formando un

dibujo característico en forma de anillo (reacción positiva). Si en la orina no hay hCG o está en

pequeñas cantidades, se verá un dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). Los

eritrocitos usados proceden de ovejas y se han estabilizado. Los anticuerpos son de origen

monoclonal.
La sensibilidad de la prueba es de 1000 UI de hCG/L. Con esta prueba es posible detectar los

niveles de hCG que se encuentran normalmente en las mujeres embarazadas a partir del 8º

dìa de la menstruaciòn esperada en adelante.

Neo-Planotest 200 es una prueba de aglutinación de látex directa sobre portaobjetos para la

detecciòn de la gonadotropina coriónica humana (hCG) en orina.

FUNDAMENTO.

Método en placa: La prueba esta basada en una reacciòn de aglutinación de látex directa,

utilizando partículas de látex recubiertas con anti-hCG. La hGC, que se encuentra en la orina

de mujeres embarazadas, se mezcla con el reactivo de látex y los anticuerpos reacionarán

con la hCG para formar un patrón de aglutinación de látex granulosa (reaccón positiva). Si la

hCG no está presente en la orina, no se producirá ninguna aglutinación al mezclarla con el

reactivo de látex (reacción negativa).

Método en tubo: El test se basa en la reacción de inhibición de la hemaglutinación. Se han

revestido eritrocitos con hCG. Al añadirse anticuerpos contra hCG a este reactivo tiene lugar

una reacción de aglutinación y se forma un dibujo de sedimentación difuso en el fondo del

tubo. La adición simultánea de hCG libre, que está presente en la orina de las mujeres

embarazadas, bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los eritrocitos. En tal caso los

eritrocitos se sedimentarán en el fondo del tubo formando un dibujo característico en forma de

anillo (reacción positiva). Si en la orina no hay hGC o está en pequeña cantidad, se verá un

dibujo de sedimentación difuso (reacción negativa). Los eritrocitos usados proceden de ovejas

y se han estabilizado. Los anticuerpos son de origen monoclonal.

MATERIAL

1. Pipeta serológica de 0.1mL

2. Tubo de ensaye de 13X100mm

3. Gradilla metálica
APARATOS

1. Centrífuga

2. Refrigerador

REACTIVOS.

Reactivo de látex (monoclonal)

Tubo con anti hCG y glóbulos rojos

MUESTRA.

Orina

DESARROLLO (MÉTODO EN PLACA)

1. Colocar el portaobjetos sobre una superficie horizontal.

2. Agitar suavemente el reactivo de látex durante 15 segundos para obtener una suspensión

homogénea (no es necesario llevar el reactivo a temperatura ambiente antes del uso).

3. Aspirar lentamente con una pipeta y una cápsula para succionar la cantidad suficiente del

reactivo de látex y transferir una gota cayendo libremente (25ml), sobre el área de prueba del

portaobjetos.

4. Devolver al vial el reactivo de látex restante de la pipeta.

5. Utilizando la misma pipeta, apirar lentamente la muestra de orina y transferir dos gotas,

cayendo libremente (50ml), a la misma área de prueba.

6. Mezclar con un aplicador el reactivo de látex y la orina, y esparcir la mezcla sobre toda el

área de prueba.
7. Balancear suavemente el portaobjetos dejando que la mezcla fluya lentamente dentro del

circulo de prueba hasta 2 minutos

8. Colocar el portaobjetos sobre una superficie orizontal bien iluminada para la lectura del

resultado.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

a) Una reacciòn positiva viene indicada por la producción de una aglutinación de látex

granulosa y roja, en el plazo de 2 minutos.

b) Una reacción negativa corresponde al mantenimiento de una suspensión de látex

uniforme y roja al final del periódo de 2 minutos.

c) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones elevadas de hCG, la

aglutinación ocurrirá en el plazo de un minuto y, por tanto, no es necesario continuar el

balanceo hasta el final del periódo de 2 minutos

d) En el caso de muestras de orina conteniendo concentraciones bajas de hCG, o en el

caso de orinas negativas, el balanceo debe continuarse hasta 2 minutos.

DESARROLLO (MÉTODO EN TUBO)

1. Fitrar por lomenos 5-8mL de orina (de preferencia una muestra de las primeras horas de

la mañana) a través de papel de filtro suave o centrifugar durante 5-10 minutos.

2. Abrir el tubo y colocar en una gradilla para la prueba con el espejo adecuado.

3. Pipetear 400ml de agua destilada en el tubo.

4. Añadir 100 ml de la orina centrifugada o filtrada en el tubo.

5. Agitar suavente la gradilla para la prueba (unos 30 segundos) para conseguir un

mezclado a fondo y colocar el tubo fuera de vibraciones o del calor.

6. Efectuar la lectura del punto final precisamente dos horas más tarde.
Punto final.

El espejo inclinado en la base de la gradilla de prueba permite que el resultado pueda leerse

sin perturbar los dibujos de sedimentación . Un anillo pardo clara mente definido indica que el

resultado es positivo. Un sedimento pardo amarillento difuso indica que el resultado es

negativo.

Si el diámetro del anillo es mayor o dicho anillo es más vago y está menos claramente

definido, el resultado debe considerarse negativa y la prueba debe repetirse unos dìas depués.

Diagnóstico del embarazo

La sensibilidad de Pregnosticon ‘All-in’1000M de 1000Ul de hCG/l, lo cual significa que

puede esperarse un resultado positivo, en la mayoría de los embarazos, a partir del 8° dìa de la

menstruación esperada en adelante. Todas las pruebas con resultados negativos deben

repetirse unos días después a no ser que se presente la menstruación.

Método semicuantitativo

La concentraciòn dehCG puede medirse semicuantitativamente prepararando una serie de

diluciones usando agua destilada y ensayar cada diluciòn de la forma descrita en el

procedimento para la prueba. La dilución superior de la serie, con la que se sigue obteniendo

un resultado positivo, se usa para medir el nivel de hCG en la orina. La sensibilidad de la

prueba es de 1000Ul/l. El nivel de hCG puede calcularse a partir de la fórmula. X = 1000N, en

que N es el factor de diluciòn y X es el nivel mínimo de hCG en la orina sin diluir.

El siguiente esquema ofrece un ejemplo de una determinación semicuantitativa:

Dilución. En caso de ser necesario repetir la prueba

con dilución

1:8(N=8) no se forma

anillo <8 000 lU /l 1:2 1:4

 orina anillo >8 000 lU/l 1:16 1:32

1:64(N=64) no se forma

anillo <64 000lU/l

anillo >64 000lU/l 1:128 1:256

1:512 1:1024

Si se realiza esta análisis semicuantitativo con una muestra de la orina recogida en 24 horas.

Se obtiene una idea de la eliminaciòn diaria de gonadotrofina coriónica.