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IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA


DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LIC. EN QUÍMICA
ANÁLISIS QUÍMICO

DETERMINACION DE NITROGENO EN UNA MUESTRA DE HIGADO CON ORTO-


FENANTROLINA

IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

Jennifer Bocanegra y Deissy Sánchez

RESUMEN
En el presente artículo se presentarán las observaciones y datos obtenidos a partir
de la determinación de hierro en una muestra de hígado la cual se trato con orto-
fenantrolina, produciendo un complejo de color rojo llamado ferroína. A partir de
este complejo que se formó también en la muestra patrón se realizaron todos los
pasos de validación de un proceso analítico como son: curva de calibración, límites
de detección y cuantificación, precisión, sensibilidad, exactitud, carta de control y
cantidad de hierro presente en la muestra.

Anterior a esto se hizo la respectiva calibración de los equipos y materiales a usar


durante la práctica, además de ello se trabajó con una muestra patrón (sal de Mohr)
utilizando 10 concentraciones distintas que luego fueron analizadas en 4 equipos de
marca diferente en donde se tomaron las respectivas absorbancias haciendo el
barrido espectral para localizar la longitud de onda a trabajar durante el proceso
analítico.

PALABRAS CLAVE

Método Orto-fenantrolina, Calibración, Hierro, Espectrofotometría, ley de Beer,


Absorbancia, Análisis, Curvas, Precisión, exactitud, sensibilidad

ABSTRACT

In this article we present the observations and data obtained from the
determination of iron in a liver sample which was treated with ortho-
phenanthroline, producing a red complex called ferroin. From this complex is also
formed in the standard sample were carried out all steps of validation of an
analytical process such as: calibration curve, detection and quantification limits,
precision, sensitivity, accuracy, control chart and quantity of iron present in the
sample

This was done before the respective calibration of equipment and materials to use
during practice, it also worked with a sample (Mohr salt) using 10 different
concentrations were then analyzed in 4 different brand teams where absorbance by
taking the respective spectral scanning to find the length of walk to work during
the analytical process.

KEY WORDS
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

Ortho-phenanthroline method, Calibration, Iron, Spectrophotometry, Beer's law,


absorbance, Analysis, Curve, Precision, accuracy, sensitivity
__________________________________________________________________________

INTRODUCCIÓN están representados con sombras


grises. Los átomos de N están
La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+, representados en blanco
originando un complejo de color rojo (http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/ManualdeFun
característico (ferroína) que absorbe damentosyTecnicasdeAnalisisdeAlimentos_6501.pdf )
notablemente en las regiones del espectro
visible de alrededor de 505 nm. El Fe3+ no
presenta absorción a esa longitud de onda MATERIALES Y MÉTODO
y debe ser reducido a Fe2+ mediante un
agente reductor apropiado, como la MATERIALES Y REACTIVOS
hidroxilamina, (en forma de clorato para  Hidroxilamina
incrementar su solubilidad). (Boumans,  Sal de Mohr
1997)  Solución reguladora de acetato
La reducción cuantitativa de Fe3+ a Fe2+ amoniacal
ocurre en pocos minutos en un medio  O-fenantrolina
ácido (pH 3-4) de acuerdo a la siguiente  Agua destilada
ecuación:  Matraz aforado de 250 ml
 Matraz aforado de 50 ml
 Espectrofotómetro
 Hígado
Después de la reducción del Fe 3+ a Fe  Espátula, vidrio de reloj
2+, se da la formación de un complejo con  Capsula de porcelana
la adición de ortofenantrolina. En un medio  Crisol
acido la ortofenantrolina se encuentra en  Mechero
su forma protonada como ion 1,10-  Bureta
fenantrolin (FenH+).  Pinzas para crisol
La reacción de complejación puede ser
descrita por la siguiente ecuación: (La MÉTODO
estructura química del complejo se
muestra en la figura 2) Se realizaron tres laboratorios para
calibrar los quipos y materiales, para
definir la longitud de onda a trabajar y
para realizar un barrido espectral en los
cuatro equipos a trabajar, para determinar
la sensibilidad del método y por último la
determinación de hierro en la muestra
problema.

Procedimiento:

Laboratorio No 1 de Orto- Fenantrolina


Fig. 2. Estructura química de la
ferroína. Consiste en 3 moléculas Este laboratorio se llevo a cabo con el fin
de OP (ortofenantrolina) alrededor de fijar la longitud de onda de trabajo y
de un átomo central de Fe. Los determinar la absorbancia de 10
átomos de carbono de la ferroína
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

concentraciones conocidas en 4 equipos


diferentes.
Preparar un sln de 5 ppm

Pesar 0,35g de sal de Mohr


A partir de la anterior sln
Distribuir en 4 balones a concentraciones
2ml HCl diferentes

Aforar a un balón de 250ml A cada concentración

Preparar un sln de 200ppm Adicionar 1ml de hidroxilamina

A partir de la anterior sln 10ml sln reguladora


Preparar una sln de 10ppm

Distribuir en 10 balones a 4ml Orto- fenantrolina


concentraciones diferentes

Aforar con H2O 50ml


A cada concentración

Almacenar en oscuridad 10min


Adicionar 1ml de hidroxilamina

Leer absorbancia
10ml sln reguladora

Preparación de la muestra
4ml Orto- fenantrolina
Muestra

Aforar con H2O 50ml Homogeneizar

Pesar X g en un crisol
Almacenar en oscuridad 10min
Carbonizar en mechero
Leer absorbancia
Calcinar 600°C

Laboratorio No 2 Orto-Fenantrolina Obtener cenizas blancas

Este laboratorio se tomaron 4 muestras a


diferentes concentraciones se realizo
Laboratorio No 3 Orto-Fenantrolina
lecturas de absorbancia a una longitud de
onda de 500nm para posteriormente Determinación de hierro en la muestra
determinar la sensibilidad del método. problema

Por otro lado se procedió a preparar la Muestra calcinada


muestra problema para la determinación
de hierro. Enfriar

Pesar 0,175g de sal de Mohr Adicionar 5ml HCl y 1ml HNO3


concentrados
2ml HCl
Transferir a una capsula de porcelana

Aforar a un balón de 250ml Evaporar a sequedad


IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

Comentario [JB1]: EL PUNTO DE


Adicionar 3ml HCl BARRIDO ESPECTRAL COLOR AMARILLO INDICA LA REGIÓN DE
MAXIMA ABSORBANCIA ( 520 nm).
0,1
Evaporar a sequedad 400
0,08
430
Adicionar aprox

ABSORBANCIA
0,06 460
20ml de H2O
0,04 490
Diluir a 50ml 520
0,02
610
*Tomar alícuota de 10ml* 0
640
0 200 400 600 800
-0,02
Desarrollar color completando a vol. de LONGITUD DE ONDA 670
50ml
Grafica 1
Leer absorbancia

Con la longitud de onda definida solo se


*La alícuota depende de la dio lectura de absorbancia a las primeras
muestra* cinco concentraciones en el visible, puesto
que las 10 concentraciones se
distribuyeron por grupos.
RESULTADOS Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS A a 520 nm
TABLA 2: (5/10) concentraciones de la sal
Inicialmente y como se muestra en el y sus respectivas absorbancias.
procedimiento, se tomó una muestra
patrón de sal de Mohr para realizar el CONCENTRACION ABSORBANCIA
barrido espectral cuyos datos fueron los SAL ppm
siguientes: 1 0,073
0,5 0,039
BARRIDO ESPECTRAL SAL DE MOHR 0,2 0,037
1ppm 0,1 0,031
0,02 0,031
TABLA 1
CONCENTRACION:
1ppm
Una vez evaluada la longitud de onda
λ ABSORBANCIA
analítica se unieron los datos de
400 0,029 absorbancia de los respectivos equipos y
430 0,053 se construyeron las respectivas curvas de
460 0,066 Ringbom.
490 0,072
520 0,073 CURVA DE RINGBOM HITACHI:
610 -0,003
640 0,013 A continuación se mostraran las graficas
670 0,013 correspondientes de cada uno de los
700 0,013 equipos utilizados en el laboratorio.

GRAFICA 2: ABSORTANCIA Vs LOG DE


LA CONCENTRACIÓN
En la grafica No 1 se observan los datos
de absorbancia a diferentes longitudes de
onda realizadas en la primera práctica, en
donde claramente el espectro muestra la
longitud de onda de máxima absorbancia
que esta a 520 nm.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

Comentario [JB4]: Esta es la gráfica


HITACHI: 100-%T vs lOG [sal de HITACHI: A Vs C con los datos que no cumplen la Ley de
Beer
mohr]
100,00 1,5
Comentario [JB10]: ESTE EQUIPO
90,00 y = 0,0705x + 0,3622 PRESENTA UNA DESVIACIÓN MUCHO
80,00

ABSORBANCIA
R² = 0,6814 MAYOR EN TODOS SUS DATOS EN
70,00 1 COMPARACIÓN CON LOS OTROS TRES.
100-%T

60,00 PUEDE DEBERSE A UNA MALA


50,00 CALIBRACIÓN DEL EQUIPO ANTES DE
40,00 0,5 USARSE O AL MANEJO DE LAS
30,00 CONCENTRACIONES O DE TRAZAS
20,00 PRESENTES EN LAS MUESTRAS A
10,00 0 ANALIZAR.
0,00
0 5 10 15 20
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50
CONCENTRACIÓN
LOG [ ]

GRAFICA 3: % TRANSMITANCIA Vs LOG


DE LA SAL
Comentario [JB2]: Los datos de color
rojo son los que no cumplen la ley de Beer.
HITACHI: %T vs LOG [sal de mohr]
100,00
80,00
60,00
%T

40,00
20,00
0,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00 CURVA DE RINGBOM BECKMAN
LOG [ ]
GRAFICA 6: ABSORTANCIA Vs LOG DE
LA CONCENTRACIÓN
Comentario [JB5]: Los puntos
GRÁFICA 4: RESIDUOS BECKMAN: 100-%T vs lOG [sal coloreados corresponden a las
desviaciones a la ley de Beer.
HITACHI: GRAFICA DE RESIDUOS de mohr]
100,00 Comentario [JB3]: La gráfica de
0,60 90,00 residuos nos muestra la dispersión de los
0,36 datos, los más alejados son los que no
80,00 cumplen la ley de Beer.
0,40 0,37 70,00
60,00
100-%T

0,38
0,20 50,00
A-A'

0,40 40,00
0,00 30,00
0,43
0,00 0,50 1,00 1,50 20,00
-0,20 0,50 10,00
0,54 0,00
-0,40 -2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50
A' 0,71
LOG [ ]

GRAFICA 7: % TRANSMITANCIA Vs LOG


GRAFICA 5: ABSORBANCIA Vs DE LA SAL
CONCENTRACIÓN
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

GRAFICA 10: ABSORTANCIA Vs LOG DE


BECKMAN: %T vs LOG [sal de LA CONCENTRACIÓN
mohr]
100,00 SPECTRONIC 20: 100-%T vs lOG [sal
80,00 de100,00
mohr]
60,00 90,00
%T

80,00
40,00 70,00
60,00

100-%T
20,00 50,00
0,00 40,00
30,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00 20,00
10,00
LOG [ ] 0,00
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,00 0,30 0,60 0,90 1,20 1,50
LOG [ ]

GRÁFICA 8: RESIDUOS
GRAFICA 11: % TRANSMITANCIA Vs LOG
BECKMAN: GRAFICA DE RESIDUOS DE LA SAL

0,50 Comentario [JB6]: AL IGUAL QUE LAS


0,45
0,40 SPECTRONIC 20: %T vs LOG [sal OTRAS GRAFICAS, LOS PUNTOS
COLOREADOS REPRESENTAN LAS
0,35 de mohr] DESVIACIONES A LA LEY DE BEER.
0,30
0,25 120,00
0,20
A-A'

0,15 100,00
0,10
0,05
0,00 80,00
-0,05
%T

-0,10 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80 60,00
-0,15
-0,20 40,00
A'
20,00

0,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
LOG [ ]

GRAFICA 9: ABSORBANCIA Vs
CONCENTRACIÓN

GRÁFICA 8: RESIDUOS
BECKMAN: A Vs C
2
SPECTRONIC 20: GRAFICA DE
y = 0,1095x + 0,0909
1,5 R² = 0,9047
0,50 RESIDUOS
ABSORBANCIA

0,45
0,40
0,35
1 0,30
0,25
0,20
A-A'

0,5 0,15
0,10
0,05
0 0,00
0 5 10 15 20 -0,05
-0,10 0,000,200,400,600,801,001,201,401,601,80
-0,15
CONCENTRACIÓN -0,20
A'

CURVA DE RINGBOM SPECTRONIC 20 GRAFICA 13: ABSORBANCIA Vs


CONCENTRACIÓN
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

SHIMADZU: %T vs LOG [sal de Comentario [JB7]: CONCENTRACIONES


SPECTRONIC 20: A Vs C mohr] QUE NO CUMPLEN LA LEY DE BEER

2 120,0
y = 0,1186x + 0,0856 100,0
1,5 R² = 0,8845 80,0
ABSORBANCIA

%T
60,0
1 40,0
20,0
0,5 0,0
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
0
LOG [ ]
0 5 10 15 20
-0,5
CONCENTRACIÓN GRÁFICA 16: RESIDUOS

SHIMADZU: GRAFICA DE RESIDUOS


5,0E-01
4,5E-01
4,0E-01
CURVA DE RINGBOM SHIMADZU 3,5E-01
3,0E-01
GRAFICA 14: ABSORTANCIA Vs LOG DE 2,5E-01
2,0E-01
A-A'

LA CONCENTRACIÓN 1,5E-01
1,0E-01
5,0E-02
0,0E+00
SHIMADZU: 100-%T vs lOG [sal -5,0E-02
-1,0E-01 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80
de 100,0
mohr] -1,5E-01
-2,0E-01
90,0
80,0 A'
70,0
100-%T

60,0
50,0 GRAFICA 17: ABSORBANCIA Vs
40,0
30,0 CONCENTRACIÓN
20,0
10,0 Comentario [JB8]: CONCENTRACIONES
0,0 SHIMADZU: A Vs C EN DONDE NO SE CUMPLE LA LEY DE BEER

-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50 2,00E+00
LOG [ ] y = 0,1095x + 0,102
ABSORBANCIA

1,50E+00 R² = 0,9066

1,00E+00
GRAFICA 15: % TRANSMITANCIA Vs LOG
DE LA SAL 5,00E-01

0,00E+00
0 5 10 15 20
CONCENTRACIÓN

CURVA DE CALIBRACIÓN DE LAS GRÁFICAS DE LOS 4 EQUIPOS


A partir de las curvas de Ringbom, se realizaron las curvas de calibración en donde se
muestran únicamente los datos; en este caso, las concentraciones que si cumplen la Ley de
Beer, para ello se calcula la ecuación de la recta, en donde se espera que el valor de r sea
muy próximo a 1.
DATOS
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

CURVA DE CALIBRACION BECKMAN CURVA DE CALIBRACION HITACHI


Concentración Absorbancia Concentración Absorbancia
0,02 0,031 0,2 0,22
0,1 0,031 10 1,032
2,5 0,456 15 1,356
5 0,883
10 1,475 CURVA DE CALIBRACIÓN SPECTRONIC
20
CURVA DE CALIBRACION SHIMADZU Concentración Absorbancia
Concentración Absorbancia 0,02 0,013
1 0,175 0,1 0,017
2 0,38 2 0,475
2,5 0,436 5 1
10 1,431 10 1,602

Comentario [JB9]: EL SPECTRONIC,


SHIMADZU: A vs C SHIMADZU Y BECKMAN PRESENTARON
MAYOR LINEALIDAD, ES DECIR UNA
1,8 MENOR DESVIACIÓN EN LOS DATOS EN
1,7 COMPARACION CON EL HITACHI, SIENDO
1,6
1,5 LOS DOS ULTIMOS LOS QUE PRESENTARON
1,4
ABSORBANCIA

1,3 MAYOR NUMERO DE CONCENTRACIONES


1,2 EN DONDE SE CUMPLIA LA LEY DE BEER.
1,1
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
CONCENTRACIÓN

HITACHI: A vs C
1,6
1,4
1,2
ABSORBANCIA

1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 5 10 15 20
CONCENTRACIÓN

BECKMAN: A vs C SPECTRONIC 20: A vs C


1,8 1,8
1,7 1,7
1,6 1,6
1,5 1,5
1,4 1,4
1,3
ABSORBANCIA

ABSORBANCIA

1,3 1,2
1,2 1,1
1,1 1
1 0,9
0,9 0,8
0,8 0,7
0,7 0,6
0,6
0,5 0,5
0,4 0,4
0,3 0,3
0,2 0,2
0,1 0,1
0 0
-0,1 -0,1
-1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 -0,2
-1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
CONCENTRACIÓN CONCENTRACIÓN
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

TABLA 3: DATOS CURVA DE RINGBOM


CON LO
CEN MARCA DEL EQUIPO Y G[
TRA RESPECTIVAS SAL
CIÓN ABSORBANCIAS TRANSMITANCIAS % ] ABSORTANCIA A' A-A'
BE SHI SPEC HI BE SHI SPEC HI BE SHI SPEC HI BE SHI SPEC HI BE SHI SPEC
HIT CK MA TRO TA CK MA TRO DA TA CK MA TRO TA CK MA TRO TA CK MA TRO
(ppm AC MA DZ NIC CH MA DZ NIC TO CH MA DZ NIC CH MA DZ NIC CH MA DZ NIC
) HI N U 20 I N U 20 S I N U 20 I N U 20 I N U 20
-
8,7 89 - 10 - - 8,0
0,0 1E- ,1 93, 98, 1,7 ,8 6,8 0, 0,0 0,1 0, 0,0 E-
0,02 0,05 31 03 0,013 3 11 0 97,05 0 7 9 2,0 2,95 36 9 0 0,09 31 6 02 -0,08
-
9,2 73 - 26 - - 8,9
0,13 0,0 1E- ,7 93, 97, 1,0 ,2 6,8 2,1 0, 0,1 0,1 0, 0,0 E-
0,1 2 31 03 0,017 9 11 90 96,16 0 1 9 0 3,84 37 0 1 0,10 24 7 02 -0,08
-
60 - 39 - - 8,6
0,0 0,0 ,2 91, 94, 0,7 ,7 8,1 5,3 0, 0,1 0,1 0, 0,0 E-
0,2 0,22 37 24 0,022 6 83 62 95,06 0 4 7 8 4,94 38 1 2 0,11 16 7 02 -0,09
-
30 - 69 - 5,9
0,52 0,0 0,0 ,1 91, 82, 0,3 ,8 8,5 17, 0, 0,1 0,1 0, 0,1 E-
0,5 1 39 86 0,031 3 41 04 93,11 0 7 9 96 6,89 40 4 6 0,15 12 1 02 -0,11
-
10 89 - 2,9
0,97 0,0 0,1 ,5 84, 66, 0,0 ,4 15, 33, 0, 0,2 0,2 0, 0,1 E-
1 8 73 75 0,026 2 53 83 94,19 0 8 47 17 5,81 43 0 1 0,20 55 3 02 -0,18
38 61 - 5,8
0,41 0,4 0,3 ,6 38, 41, 0,3 ,3 61, 58, 0, 0,3 0,3 0, 0,1 E-
2 3 18 8 0,475 4 19 69 33,50 0 6 81 31 66,50 50 1 2 0,32 09 1 02 0,15
24 75 5,5
0,61 0,4 0,4 ,2 34, 36, 0,4 ,7 65, 63, 0, 0,3 0,3 0, 0,0 E-
2,5 5 56 36 0,456 7 99 64 34,99 0 3 01 36 65,01 54 6 8 0,38 08 9 02 0,08
13 86 3,0
0,86 0,8 0,9 ,6 13, 10, 0,7 ,3 86, 89, 0, 0,6 0,6 0, 0,2 E-
5 6 83 8 1 1 09 47 10,00 0 9 91 53 90,00 71 4 5 0,68 15 5 01 0,32
90 - 1,7
1,03 1,4 1,4 9, 3,3 3,7 1,0 ,7 96, 96, 1, 1,1 1,2 0, 0,2 E-
10 2 75 31 1,602 29 5 1 2,50 0 1 65 29 97,50 06 9 0 1,27 03 9 01 0,34
-
95 - - 3,9
1,35 1,4 1,4 4, 3,6 3,4 1,1 ,5 96, 96, 1, 1,7 1,7 0, 0,2 E-
15 6 43 68 1,523 41 1 0 3,00 8 9 39 60 97,00 41 3 4 1,86 06 9 01 -0,33
ppm CIA
TABLA 4: DATOS PARA GRAFICAR 0,1 0,0 98, 1,6 -1 0, - 0,032
CURVA DE RINGBOM Y CALIBRACION 07 40 0 2 0,23
3
0,2 0,0 91, 8,5 - 0, - 0,069
En la tabla No 4 se observan los datos de 39 41 9 0,7 2 0,19
absorción correspondiente para el 0 3
segundo laboratorio. 0,5 0,1 77, 22, - 0, - 0,11
Para poder determinar la sensibilidad del 08 98 02 0,3 2 0,13
método se tomaron cuatro muestras con 0 4
1 0,2 60, 39, 0 0, -
diferentes concentraciones y se leyeron
18 53 47 2 0,02
en el equipo de marca Beckman a 500 4
nm.

GRAFICA 18: TRANSMITANCIA Vs LOG DE LA SAL


CON Aa %T AB LO A' A-A' ∆ABS DE MOHR
CEN 500 SO G[ ORBA
TRA nm RT ] NCIA
CION AN S
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

En las graficas anteriores 18 y 19 se


TRANSMITANCIA Vs LOG [ SAL DE
MOHR] puede observar que las concentraciones
150,00 utilizadas cumplen la ley de Beer, puesto
TRANSMITANCIA

100,00 que estos valores no tienen ningún dato


50,00 anómalo, sino valores con una distribución
0,00 lineal lo que indica que no están sujetos a
-1,5 -1 -0,5 0 errores sistemáticos, esto se puede
observar en la ecuación de la recta
LOG [ SAL DE MOHR]
mostrada en la siguiente gráfica.

Comentario [JB11]: Los datos


A Vs C a 500 nm presentados en esta gráfica corresponden
a los de la tabla numero 4; aquí podemos
GRAFICA 19: ABSORBANCIA Vs LOG DE LA SAL
observar mediante la ecuación de la recta
DE MOHR 0,25 que no hay desviaciones aparentes a la Ley
absorbancia a 500 nm

0,2 y = 0,2308x - 0,0109 de Beer.


0,15 R² = 0,9978
ABSORTANCIA Vs LOG[SAL DE MOHR]
0,1
50,00 0,05
40,00
0
ABSORTANCIA

30,00
20,00 0 0,5 1 1,5
10,00 concentración sal de mohr
0,00
-1,5 -1 -0,5 0
LOG [SAL DE MOHR]

CALCULO DE SENSIBILIDAD
Para determinar los limites de detección y
cuantificación se tomo una solución de 0
ppm.
ó
TABLA 6: ABSORBANCIAS DEL BLANCO
TABLA 5: DATOS PARA DETERMINAR
SENSIBILIDAD DEL MÉTODO A 0 ppm
-0,019
CONCENTRACIO A a 500 ∆ABSORBAN -0,037
N ppm nm CIAS -0,039
0,1 0,007 0,032 -0,038 Comentario [JB12]: PARA
DETERMINAR LA SENSIBILIDAD SE TOMA EL
0,2 0,039 0,069 -0,033 VALOR MENOR DE LOS ∆ABSORBANCIAS
0,5 0,108 0,11
1 0,218
DESVIACIÓN ESTANDAR =0,0083

Ecuación de la recta:

a=-0,011 Comentario [JB13]: Como se puede


observar (siguiendo el hipervínculo), el
b= 0,231 valor de sensibilidad es mucho menor al
r= 0,9989 limite de cuantificación, por lo tanto no es
PENDIENTE = 0,231 COEFICIENTE DE VARIACIÓN necesario regresar al laboratorio a
preparar soluciones más próximas, puesto
que con las que se trabajaron fueron las
= adecuadas para generar sensibilidad en el
equipo.
C.V= = 0,25
A esta concentración el equipo va a
generar un cambio en la lectura de Para la cantidad mínima detectable y
cuantificable se obtuvieron los datos así
absorbancia
LD=0,0107ppm siendo la mínima cantidad
LIMITES DE DETECCION Y de analito que puede ser detectado y
CUANTIFICACIÓN LC=0,358ppm limite donde empieza a ser
cuantificable.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

Si se observa que existe coherencia con la


sensibilidad del método pues el dato de CARTA DE CONTROL
sensibilidad esta dentro del rango de los 0,190
límites de detección y cuantificación esto
0,180
significa que la realización del método fue
0,170 x+3d
la adecuada
0,160 x+2d
PRECISION 0,150 x+d
TABLA 7: DATOS DE ABSORBANCIA DEL 0,140 x
PATRON (SAL DE MOHR) 0,130 x-d
Aa 0,120
[0,5ppm]500 x-2d
0,110
nm x-3d
0,100
0,139
1 2 3 4 5 6 7 8 9
0,128
0,13
0,134 CANTIDAD DE HIERRO EN LA MUESTRA:
0,159 Para la determinación hierro, se utilizo
0,157 hígado de res.
0,156
DESTAN: Peso de la muestra= 0,536 g
0,014 TABLA 9. ABSORBANCIA DE LA
PROMEDIO: MUESTRA A 500nm
0,143 N° DE Aa
REPLICAS 500nm
1 0,035
2 0,036
3 0,037
4 0,038
5 0,038
6 0,038
El método fue preciso en un 9%. 7 0,039
8 0,039
CARTA DE CONTROL 9 0,039
TABLA 8: DATOS DE LA CARTA DE
10 0,039
CONTROL
PROMEDIO DE 0,0378
x+3d 0,184 A
x+2d 0,171
x+d 0,157 Absorbancia = 0,0378
x 0,143 Como conocemos el valor de A entonces
x-d 0,130 se despeja C
x-2d 0,116
x-3d 0,102

La carta de control indica las zonas en las


que el método resulta confiable, si se sale
de las zonas de confiabilidad se necesitará
volver al laboratorio y realizar la práctica
de nuevo.

í
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE

 Para evitar la existencia de


cantidades de materia orgánica o
colorante, es mejor evaporar la
Sin embargo el resultado fue muy bajo, tan muestra, llevar el residuo a
solo de 0,0000197 mg, lo que indicaría combustión seca suave, y volver a
que el pedazo de hígado utilizado no disolver en ácido. La presencia de
contiene casi hierro. cantidades excesivas de materia
EXACTITUD orgánica puede hacer necesaria una
digestión.
E=  El procedimiento del método de la
fenantrolina tiene cierta limitación
en su aplicabilidad, ha de evitarse
un almacenamiento prolongado o la
exposición a la luz.

El hígado de cerdo tiene 10,2 mg de hierro


por cada 100 gramos y el hígado de
ternera tiene 7,9 mg. cada 100 gramos. El BIBLIOGRAFÍA
de hígado de res el cual fue utilizado en la  BOUMANS, H., Van Gaalen, M.C.M.,
práctica tiene 6,0 mg. de hierro cada 100 Grivell, L.A. y Berden, A. 1997.
Differential Inhibition of the Yeast
gramos. (FENNEMA, 1993)
bc1 Complex by Phenanthrolines
and Ferroin. The Journal of
Biological Chemistry. 272, 2,
CONCLUSIONES 19753-19760.(PDF)
 FENNEMA O.; Química de
 El mal manejo de un equipo puede alimentos; Acribia, segunda edición;
conllevar a resultados poco España 1993.
precisos y exactos, por ello es  HART F. L; Análisis moderno de los
necesario que antes de usarse, se alimentos; Acribia. Zaragoza
calibre con un blanco, y si es (España), 1991.
necesario que este proceso se haga  Skoog D.A, West D.M. 2001.
más de dos veces debe realizarse Química analítica, séptima edición,
para mayor confiabilidad. Mc Graw Hill. México.
 En la determinación de hierro, el  Skoog D.A, Holler J.F, Nieman
complejo rojo-naranja que se forma T.A.2001. Principios de análisis
es un quelato de tres moléculas de instrumental, quinta edición, Mc
fenantrolina por átomo de Fe Graw Hill/ Interamericana
(ferroína). La solución coloreada
obedece a la ley de Beer, su
intensidad es independiente del pH
entre 3 y 9, aunque un pH ácido
(2,9 - 3,4) asegura un rápido
desarrollo del color por esto es
importante la adición de HCl y
HNO3. (Skoog,2001)
 Cualquiera de estos oxidantes
fuertes, cianuro, nitrito, fosfatos,
cromo, zinc, cobalto y cobre,
bismuto, el cadmio, el mercurio, el
molibdato y la plata precipitan la
fenantrolina. La adición de un
exceso de hidroxilamina elimina los
errores causados por exceso de
reactivos oxidantes.(Skoog, 2001)
 La presencia de iones metálicos, es
necesario utilizar exceso de
fenantrolina, aunque también se
puede realizar una extracción.