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HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

Interno CAMILO BECERRA MARTINEZ


Servicio de Hematología General
INEN
HISTORIA
 En los últimos 30 años se usaron distintos
equipos que ovolucionaron desde los
sistemas semiautomatizados de un solo
canal hasta los de multiples canales.
Capaces de evluar hasta 20 parámetros
hematológicos
AUTOMATIZADOS
 Los contadores electronicos son más
precisosque las técnicas manuales.
 Se dispone de varios modelos de equipos.
 Miden diversos parámetros hematológicos.
 Analizan en forma comparativas las
muestras, rápido y con poco error.
TIPOS PRINCIPALES
 IMPEDANCIA DEL FLUJO ELECTRICO
 DISPERCIÓN DE LUZ PARA CONTAR
LAS CELULAS
Todo conteo celular comparte tres pasos
básicos :

1. Dilución de la sangre
2. Toma de muestra de una cantidad medida
3. Enumeración de partículas

Ventajas de los métodos electrónicos :

1. Velocidad
2. Precisión
3. Cálculo automatizado del Hematocrito y
constantes
4. Impresión de resultados
El conteo diferencial manual está
sujeto a varios errores
 Errores en la preparación del frotis
 Errores en la tinción del frotis
 Distribución celular
 Interpretación celular
 Número de células contadas
Un buen diferencial automatizado debe ser capaz
de :

1. Identificar células normales y anormales


2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos
3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 –
32,000 cel. )
al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células )
1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo
lapso
de tiempo
1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de
datos
TECNOLOGIA UTILIZADA
 Impedancia Eléctrica :
Contaje total de hematíes (RBC)
Contaje total de leucocitos (WIC)
Contaje total de plaquetas (PLT)
VCM y VPM.
El sistema de impedancia eléctrica cuenta y
detecta el tamaño de los eritrocitos,
plaquetas y leucocitos. Este se basa en la
detección de los cambios en la resistencia
eléctrica producidos por
una partícula suspendida en un diluyente
conductor a su paso por una abertura.
TECNOLOGIA UTILIZADA
 Colorimetría
La medición directa de hemoglobina
(HGB), se realiza por el método
modificado de la cianmetahemoglobina,
utilizando como fuente
lumínica un diodo emisor de baja
energía, a 540 nm.
TECNOLOGIA UTILIZADA
 MPASS (Multi Angle Polarized Scatter
Separation) :
Contaje total de leucocitos (WOC)
Diferencial de 5 poblaciones (fórmula)
Reticulocitos
El MPASS es un sistema de citometría de
flujo y láser He/Ne.
PRINCIPIO DE MEDICIÓN
POR EL MÉTODO
DE LA
IMPEDANCIA ELÉCTRICA
Estos equipos cuentan las células en una abertura
pequeña, por registro de la modificación de la
resistencia eléctrica provocada por su pasaje. La
corriente continua regulada se desplaza entre dos
electrodos de platino sumergidos en un diluyente
conductor de electricidad, se coloca un puente
aislado con una abertura entre los electrodos. Se
suspenden as células en el diluyente y se movilizan
a través del orificio a velosidad constante

Apertura
VOLUMETRIA

No se puede obtener el recuento celular


absoluto a menos que se conozca el volumen
preciso de sangre total diluida que atraviesa la
abertura durante el ciclo de recuento
Método de Conteo Celular por
Dispersión de la Luz
 La snagre diluida pasa a través de un
detector de flujo celular colocado en el
trayecto de un rayo luminoso de foco
cercano (láser).
 Cada célula provoca un cambio en el rayo y
que genera un impulso eléctrico que se
registra.
Método de Conteo Celular por
Dispersión de la Luz
 En algunos equipos el rayo crea patrones de
dispersión que se emplean para definir el
tamaño de la célula, volumen, la
configuración e indice de refracción.
 Technicon H-6000 y H-1
 Medida a 0º  Medida a 90º mide la superficie
celular y la estructura interna
sirve para medir el
tamaño celular ( granularidad )
 Medida a 10º  Medida a 90ºD mide
mide la complejidad determinados tipos de
celular granularidad celular
FOCALIZACIÓN DE CORRIENTE
HIDRODINÁMICA

 A medida que las células


penetran en el área de
visualización específica, se
produce la interacción con
el rayo láser con ángulos
diferentes, que suministran
información sobre el tamaño
de la célula, la estructura
interna, la granularidad y la
morfología de la superficie.
 Equipos Ortho
 Indice de Refracción
RADIOFRECUENCIA
(Conductividad )
La conductividad de las ondas
de radio a través de las células,
nos revelan su composición
interna
TECNOLOGIA VCS
 La tecnología VCS es el mecanismo por la
cual los analizadores de hematología
COULTER realizan la diferenciación de los
diferentes tipos de leucocitos en 5 tipos:
Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos,
Eosinófilos y Basófilos
TECNOLOGIA VCS
 La muestra (sangre) es mezclada con el rectivo, lo
cual produce una rápida lisis de los eritrocitos y
reduce los restos celulares sin alterar los
leucocitos. Posterior a esta reacción se agrega el
preservante de los leucocitos a fin de que resistan
en su estado casi nativo las mediciones
subsecuentes (Volumen, Conductividad y Scatter)
PRINCIPIOS VCS
 FLOWCELL:
La muestra una vez tratada es dirigida
a una celda de flujo (Flow cell) en la
cual por el diseño hidrodinámico, los
leucocitos se alinean y pasan
formados uno a uno y en donde se
realizan las siguientes mediciones
PRINCIPIO VCS

 VOLUMEN:
Mediante impedancia de
baja frecuencia se
determina el volumen de
la célula
PRINCIPIO VCS
 CONDUCTIVIDAD:
La conductividad de alta
frecuencia de
Radiofrecuencia (RF)
determina la conductividad
interna de la célula
PRINCIPIOS VCS
 SCATTER:
La dispersión (scatter)
de luz láser indica la
estructura y forma de
la célula
Las lecturas de estas 3 señales análogas es enviadas
al analizador para su amplificación y proceso, luego
el sistema genera 3 gráficos

 DF1: Volumen vs. Scatter


 DF2: Volumen vs.
Conductividad
 DF3: Volumen vs.
Conductividad extrayendo las
señales de Neutrófilos y
Eosinófilos
Eosinófilos

Neutrófilos
Polinucleados

Monocítos
Basófilos
Linfocítos
DF1
DF2
DF3
RF Centroide inicial
De los granulocitos

Centroide
Inicial de
Linfocitos
Centroide inicial de
Monocitos

DC
Centroide inicial
Del estroma
PARAMETRO PRINCIPIO

WBC Impedancia
RBC/PLT Corriente Directa/ enfoque hidrodinámico

HGB Lauril Sulfato de sodio (SLS )


Cianmetahemoglobia. Fotométrico
HCT Acumulación de la altura de los pulsos
LY, MO, GRAN Citometria ( MAPSS ), CD,
Radiofrecuencia ( RF )- VCS
EO CD
BASO CD
IMI RF, DC, RF
Retic % Citometria de flujo & fluorescencia
• El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la
altura de
los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G.R.

• El volumen del paquete celular es calculado del MCV


multiplicado por
el conteo de células rojas

• El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo


de G.R.

• El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el


Hematocrito
1. La turbidez producida por conteos elevados de células
blancas,
pueden alterar el valor de la Hemoglobina, MVC, y Hto.

2. En LLC y otras leucemias las células son fácilmente dañadas


por la
apertura, pudiendo aparecer falsos conteos bajos de
leucocitos
( WIC / WOC )

3. Títulos altos de aglutininas frías, que agregan los GR a


temperatura
ambiente, son responsables de macrocitosis y valores altos
de MCHM
1. Hematocrito :
se mide en % y representa la proporción total de GR en la
sangre.
no se mide directamente con los citómetros de flujo y se
calcula a
partir del VCM y en número de GR. Tiene menor presición
2. El hematocrito es medido electrónicamente :
“ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de
la
abertura es proporcional a su volumen “. Se determina
comparando el
volumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre
en los
11.7ul de la dilución 1:500
Gráfica de Control de los Indices Eritrocitarios

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
+3%

VCM 0%

- 3%

+ 3%

HCM 0%

-3%

+ 3%

CCMH 0%

-3%
Desplazamiento del VCM yHCM en la misma dirección, signo de
obturación parcial del orificio de recuento

+3%

VCM 0%

- 3%

+ 3%

HCM 0%

-3%

+ 3%

CCMH 0%

-3%
Desviación de la HCM y CCMH en el mismo sentido decreciente,
causada por desajustes en la calibración de la Hb o recuento de hematíes
+3%

VCM 0%

- 3%

+ 3%

HCM 0%

-3%

+ 3%

CCMH 0%

-3%
Patrón con un pico de desviación positiva del VCM
y HCM, causada por la incorporación de muestras
de enfermos con marcada macrocitosis.
+3%

VCM 0%

- 3%

+ 3%

HCM 0%

-3%

+ 3%

CCMH 0%

-3%
Effect of specimen storage at room temperature ( 18º - 20ºC ) 0n the complete
blood count parameters of the Abbott CD 3500 blood analyzer.

10 -

8-
Change ( % )

6-

4-

2-

0-
WBC
-2 -
RBC
-4 - HB

MCV
-6 -
PLT
-8 -
HCT
-10 -
Time ( h )
- 12 -

0 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 12.0 24.0 48.0


Efecto del almacenamiento a temperatura ambiente ( 18 -20 ºC ) sobre el conteo
diferencial de leucocítos, resultados del autoanalizador hematológico Abbott CD 3500

20

10

0 Linfocitos
v
Change ( % )

Neutrófilos
-10
Eosinófilos
-20
Monocitos

-30
Basófilos

-40

-50

-60

0 0.5 1 2 4 8 12 24 48
Time ( h )
Sismex SF - 3000

SX - 21
COULTER
CELL DYN 3500
 El equipo autoanalizador realiza la medición de 22
parámetros hematológicos de la sangre.
 Utiliza la medición por impedancia y dispersión de
luz láser.
 Algunos parámetros son medidos directamente y
algunos son calculados.
 Los leucocitos, hematíes y plaquetas se miden por
impedancia eléctrica, la fórmula diferencial por flujo
óptico. La hemoglobina por espectrofotometría.
 En cada ciclo la muestra es aspirada, diluida y
mezclada y se realizan las mediciones de cada
parámetro.
SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO
CELL DYN 4000, CON EL LAMINADOR SMS – 5H2901
CELL DYN 4000
 El Cell-Dyn 4000 es el primer analizados
hematológico automatizado para ofrecer el análisis
de anticuerpos monoclonales. A través del uso de un
láser de un Ion de Argón.
 el CD4000 es único manteniendo el descubrimiento
fluorescente NRBCs, reticulocítos y viabilidad de
WBC.
 Además, el análisis de plaqueta óptico y el linealidad
de WBC extendido
CELL DYN 4000
 La citometría de flujo fluorescente.
 el ADN-ARN marcado.
 la medida de la impedancia del flujo.
 Los datos automáticamente generados
incluyen la nuclealidad en la cuenta de
la célula de serie roja, reticulocítos con
la razón de inmadurez y el factor de
viabilidad celular blanco.