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Goyanes
Hasta casi la mitad del siglo XX una de las preguntas que mantenía ocupados a los
investigadores en el campo de la Biología Molecular y Celular era ¿Qué molécula posee
la información genética? La mirada apuntaba principalmente a dos macromoléculas: las
Proteínas y el ADN.
La molécula de ADN, por ese entonces, parecía demasiado simple para “encargarse” de
tamaña tarea, ya que estaba constituida por solo cuatro componentes. El mismo Levene
en la década del ´20 había aseverado que, como las muestras de ADN estudiadas
poseían proporciones casi iguales de las cuatro Bases nitrogenadas, el ADN debía
comportarse como un tetranucleótido, en el cual los ramilletes de a cuatro nucleótidos se
repetían a lo largo de la molécula de manera más que monótona. Una molécula tan
monótona y repetitiva no se acercaba en lo más mínimo a la idea de una verdadera
portadora de la información genética.
Fue hasta la década del ´50 que gracias a las experiencias y trabajos de Alfred D.
Hershey y su colega Martha Chase se pudo comprobar, a través de estudios realizados
con virus Bacterianos, que la información genética era portada por la molécula de
ADN.
El broche de oro lo constituye el trabajo realizado por James Watson y Francis Crick
quienes realizan el modelo del ADN que concordaba perfectamente con los hechos
conocidos y ayudaría a explicar el papel biológico de esta molécula. No nos olvidemos
que los dos jóvenes investigadores contaban ya con una suma de información más que
relevante e imprescindible para el armado del modelo. Entre los datos más importantes
con los que contaban podemos rescatar:
Con todos estos datos, Watson y Crick intentaron construir el modelo de ADN.
Para llevar la gran cantidad de información genética el modelo debía considerar dos
aspectos fundamentales: ser heterogéneo y variado. Armaron así el modelo en hojalata
y alambre y, como quien arma un rompecabezas, encajaron cada pieza en su lugar.
Biología Molecular Lic. Marcelo F. Goyanes
A medida que armaban el modelo, se dieron cuenta que los nucleótidos que
conformaban la molécula de ADN podían encajarse en cualquier orden. Dado que la
molécula de ADN posee miles de nucleótidos de largo, la variabilidad y la
heterogeneidad estaban aseguradas, puesto que la combinación de las bases se volvía
incalculable.
Otra de las conclusiones a las que arribaron fue que la cadena poseía una dirección, ya
que cada grupo fosfato está unido a un azúcar en la posición 5´ (el quinto carbono en el
anillo de azúcar) y al otro azúcar en la posición 3´ (el tercer carbono en el anillo del
azúcar). Así la cadena tiene un extremo 5´ y otro 3´.
Lo interesante del trabajo fue el armado de la cadena complementaria. Las Adeninas
únicamente podían aparearse con las Timinas y las Guaninas con las Citosinas. Pero,
para que esto ocurra, la dirección de las cadenas debía ser inversa. Es así como el
extremo 5´ se aparea con el 3´, vale decir que ambas cadenas son Antiparalelas.
Los estudios de Watson y Crick determinaron que la conformación tridimensional del
ADN consiste en dos cadenas enrolladas de tal manera que se constituye una doble
Hélice. Las Bases Nitrogenadas están agrupadas unas sobre otras constituyendo lo que
se conoce como Ordenamiento de Apilamiento.
Si la cadena gira conformando una hélice, debe de existir un eje de rotación. El mismo
está conformado por las desoxirribosas que están unidas entre sí por una molécula de
Fosfato constituyendo entonces un enlace 3´- 5´ fosfodiester. Este eje azúcar - fosfato se
encuentra en la parte externa de la molécula, mientras que las Bases Nitrogenadas
quedan dispuestas hacia el lado interno de la misma.
La doble hélice exige que cada una de las Bases Nitrogenadas de una cadena se aparee
en forma complementaria con la base de la otra cadena. Este apareamiento tiene lugar
mediante las uniones Puente de Hidrógeno que se forman entre las mismas. Entre las
Bases Adenina y Timina se forman dos uniones Puente de Hidrógeno, mientras que
entre la Guanina y la Citosina se establecen tres uniones de la misma naturaleza. No esta
demás aclarar que la unión entre las Bases Citosina y Guanina será, en consecuencia,
más fuerte que la que se establece entre la Adenina y la Timina.
Biología Molecular Lic. Marcelo F. Goyanes
Topología de ADN
Las cadenas de ADN pueden enrollarse una sobre otra de dos formas: en sentido horario
o en sentido antihorario. Es decir que si las cadenas giran a favor del movimiento de las
agujas del reloj diremos que lo hacen en sentido horario, de lo contrario el sentido que
adquiere el giro será denominado antihorario. Esto determina que existan dos variantes
de AND, el que se enrolla en sentido horario se denomina Right Handed ADN y el que
lo hace en forma contraria se denomina Left Handed ADN o ADN Z.
2. ADN B:
Las bases nitrogenadas forman un ángulo de 90° con el eje azúcar
fosfato.
Por cada vuelta de la Hélice encontraremos 10 pb.
Es el tipo de ADN más frecuentemente encontrado.
Este tipo de ADN, como indicábamos arriba, gira en sentido antihorario. Esta
disposición en el giro hace que el ADN adquiera forma de ZIG ZAG, de ahí su nombre.
Por cada vuelta de hélice hay 12 pb.
El ADN Z se encuentra acompañado de la unión de grupos metilo (-CH3) y juega un rol
importante en la regulación de la expresión génica. Generalmente las zonas metiladas
del ADN no se transcriben, es así como la distinta disposición del ADN Z en el
genoma de una célula intervendrá en forma activa en la diferenciación de la misma.
Superenrollamiento:
La mayoría de los esquemas que podemos llegar a visualizar del ADN lo muestran
como una molécula lineal y con una estructura de doble hélice. En realidad la
conformación que adquiere en el espacio dista de ello, ya que el mismo posee una
estructura cerrada, constituyendo bucles. Esta estructura la adopta ya que le son
agregadas fuerzas adicionales que lo mantienen empaquetado.
Si además del giro que presenta (horario u antihorario) le agregamos otro giro alrededor
de su eje, obtendremos una idea más acertada de su verdadera conformación. Este giro
adicional, con el que se encuentra dispuesto en el espacio, se lo denomina
Superenrollamiento. Ahora bien, si a algo que ya posee un giro le agregamos otro, este
puede o no coincidir en su dirección con el anterior. Es así como nos veremos ante la
presencia de dos tipos de Superenrollamiento: el Positivo y el Negativo.
Biología Molecular Lic. Marcelo F. Goyanes
Superenrollamiento Positivo:
Superenrollamiento Negativo:
En este caso, el ADN gira en sentido antihorario. De esta forma, la tensión del ADN
baja y la cantidad de pb por vuelta de la hélice se hace menor. Es sumamente importante
ya que, disminuyendo la tensión de la doble hélice, se hace factible la separación de las
dos cadenas.
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Enzimología de la Replicación:
Helicasas: Son las enzimas encargadas de separar las dos hebras del ADN. Estas
enzimas son responsables de la ruptura de las uniones puente de Hidrógeno que se
establecen entre las bases de las dos cadenas del ADN. Para poder separar las dos
hebras del ADN se necesitará energía, que es obtenida de la hidrólisis del ATP. Por
cada dos pares de bases que separan, se gastan dos moléculas de ATP.
Proteínas estabilizadoras de la cadena: Una vez que las cadenas del ADN son
separadas, la estabilidad de las mismas disminuye considerablemente. El ADN
tiende a reasociarse y, son estas proteínas quienes impiden que el ADN vuelva a su
conformación inicial. Su presencia es fundamental para mantener las cadenas
estiradas.
Mecanismo de la Replicación:
Ya dijimos que la duplicación se llevará a cabo durante el período S del ciclo celular y
que es un proceso fundamental para que la célula pueda dividirse.
El ADN actuará como patrón, ya que la ADN polimerasa agregará los nucleótidos de las
nuevas cadenas por complementariedad de bases. El lugar donde transcurre la
replicación se denomina Horquilla de Replicación, esta estructura tiene forma de “Y”, y
es la zona donde se sintetiza el ADN para formar las dos moléculas hijas (Ver figuras
Nº 4 y 5). Las horquillas de replicación se originan en una estructura denominada
Burbuja de Replicación, una región en la que las cadenas de la hélice de ADN se
separan una de otra, actuando como patrón para la síntesis de las nuevas cadenas de
ADN. Las zonas donde se producen las Burbujas de replicación no son aleatorias, se ha
demostrado que existen secuencias de bases que indican los lugares precisos donde la
replicación ha de comenzar. Cada Burbuja de Replicación posee dos Horquillas de
Replicación, una de las cuales se desplaza hacia la derecha y otra hacia la izquierda.
Este proceso necesita, en primera instancia, que las dos cadenas del ADN se separen.
Para esto, las Helicasas se unirán a la cadena de ADN e hidrolizarán las uniones Puente
de Hidrógeno que las mantienen unidas. La consecuente apertura de la doble hélice hace
que las cadenas simples adquieran inestabilidad, esta es compensada por la unión de las
proteínas estabilizadoras de la cadena simple.
La ADN polimerasa no es capaz de iniciar la síntesis a partir de los
desoxirribonucleótidos libres, por lo tanto necesitará que la Primasa sintetice en forma
previa el Primer o Cebador. Una vez incorporado el Cebador, la ADN polimerasa
incorporará los nucleótidos en forma complementaria a las bases de la cadena patrón.
Una vez que la Horquilla
avance, la tensión por
delante de la misma
aumentará, para evitar esto
las Topoisomerasas cortarán
la doble hélice, la rotarán y
volverán a unirla.
Debido a la orientación
antiparalela del ADN, una de
las cadenas de la horquilla de
replicación quedará en
sentido 3´a 5´, por lo cual la
ADN polimerasa podrá
trabajar en forma continua
(recordemos que esta enzima
leía en dirección 3´a 5´y Figura N° 4: Horquilla de replicación. Síntesis de la
cadena continua y de la discontinua.
polimerizaba en dirección
5´a 3´).
En cambio, la otra cadena de la Horquilla, quedará orientada en la dirección inversa
(5´a 3´), por lo cual en cada Horquilla de Replicación deberán actuar al menos dos
ADN polimerasas. Una de ellas podrá actuar en forma contínua, puesto que, a medida
que se abra la doble hélice se encontrará con el extremo 3´ de la cadena patrón,
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Energética de la Replicación:
Ya hemos mencionado que las unidades estructurales utilizadas en este proceso son los
desoxirribonucleótidos. También se dijo que los mismos debían encontrarse
trifosfatados para poder ser utilizados por la ADN polimerasa. Es así como se utilizarán
Desoxiadenina trifosfato (dATP), Desoxiguanina trifosfato (dGTP), Desoxicitosina
trifosfato (dCTP) y Desoxitimina trifosfato (dTTP). Antes de incorporar el nucleótido a
la cadena patrón, la ADN polimerasa escinde dos de los tres grupos fosfato de los
mismos, quedando así monofosfatados y liberándose por cada uno un PPi. Esta ruptura
de los enlaces de alta energía que mantenía unidos a los P libera energía, que es
utilizada para impulsar las reacciones catalizadas por la ADN polimerasa.