Informe de Pruebas Realizadas en el

Examen Práctico

Análisis de
Alimentos
• Objetivo:

a) Determinación de coliformes totales en una muestra de pepino

sospechosa de una intoxicación.
b) Determinación de Enterococos fecales en una muestra de mosto
comercial.

Para la realización de la prueba a), en lugar de seguir el procedimiento de

determinación de coliformes totales, he seguido el de Enterobacteriaceae sin
revivificación, correspondiente al PNT- AL-9, que se basa en la norma NF V 08-054 (Octubre
1993). El motivo por el que decidí realizar esta prueba en lugar de la de coliformes totales, fue
que los coliformes totales están incluídos en las Enterobacterias.

Para la realización de la prueba b), a causa de un error, en lugar de determinar los Enterococos
fecales, he determinado coliformes fecales. Siguiendo la técnica de filtración por membrana.

• Muestras de las que disponemos:

a) Muestra de pepino distribuidas en bolsas estériles, conservado en la

nevera a 5ºC.
- Fecha de entrega: 30/05/2011
- Fecha de análisis: 01/06/2011

b) Muestra de mosto en tetrabrick, conservado a Tª ambiente.

- Fecha de entrega: 30/05/2011
- Fecha de análisis: 31/05/2011

• Medios de cultivo:

- Prueba a): Medio VRBG para sembrar. Sin confirmación, solo

recuento.
Agua de peptona para realizar la dilución madre.
- Prueba b): Agar FC para siembra de c. fecales. Sin confirmación,
solo recuento.

• Reactivos:

- No he utilizado ningún reactivo para estas pruebas.

• Expresión de Resultados:

Prueba a): Para la prueba a), el recuento de enterobacterias ha dado como

resultado 0 UFC. Por tanto, se demuestra que la muestra de pepino no
contenía Enterobacterias, por lo que tampoco estaba contaminada con
Coliformes totales.

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Examen Práctico

Prueba b): para la prueba b), el recuento de coliformes fecales, da como

resultado que no hai contaminación por coliformes fecales en la muestra
de mosto.

Aislamiento y Pruebas Bioquímicas de la Cepa 245:

Micrococcus luteus
• Objetivo:

a) Pruebas bioquímicas:

- Indol: Se usa para identificar bacterias capaces de producir indol a

partir del triptófano.

- Manitol: Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de

fermentar el manitol liberando productos ácidos que serán
detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color
amarillo.

- Movilidad: Se usa para identificar bacterias capaces de desplazarse

en un medio semisólido.

b) Aislamiento por estría:

- Se trata de aislar la cepa, para demostrar que continua estando en

condiciones de asepticidad.

c) Tinción de Gram:

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Examen Práctico

- Se trata de realizar una tinción de la cepa microbiana para

determinar bacterias según sean Gram positivas o Gram negativas.

• Muestra de la que disponemos:

Cepa bacteriana 245 correspondiente a la bacteria Micrococcus luteus.

• Medios de Cultivo:

a) Pruebas bioquímicas:

- Indol: Caldo de triptona, en el que se siembra la bacteria y después

de incubar, se le añade el reactivo de Covacs para confirmar si
produce indol.
- Manitol-Movilidad: Agar manitol-movilidad, en el que se siembra la
cepa mediante la técnica de picadura.

b) Siembra por agotamiento por estría:

- Placa de agar nutritivo de 90 mm. Se siembra por estrías sucesivas

partiendo de la estrían anterior sin reccargar de nuevo el asa de
siembra y quemandola entre estría y estría.

c) Tinción de Gram:

- No se necesitan medios para realizar la tinción.

• Reactivos:

- Se utiliza el reactivo de Covacs para comprobar si en la prueba del

indol, las bacterias analizadas producen indol o no.
- Para la tinción de Gram s han utilizado los siguientes reactivos:
Cristal violeta, para teñir, el Lugol como solución mordiente para
aumentar la afinidad entre colorante y células, alcohol al 95% para
decolorar y finalmente safranina como colorante de contraste.

• Expresión de Resultados:

- Indol: Negativo, despues de utilizar el reactivo de Covacs, no se

aprecia el cambio de color del reactivo a rojo, por lo que se
demuestra que la bacteria no produce indol.
- Manitol-Movilidad: negativo para manitol, debido a que el medio
lleva incorporado un reactivo q cambia de color rojo a amarillo si se
produce manitol, y positivo para movilidad, la bacteria muestra
movilidad en un medio semisólido.
- Siembra por agotamiento por estría: solo pressenta crecimiento el
cuadrante número 1, en los demas no se aprecia ningún cambio.
- Tinción de Gram: se observan cocos Gram positivos, mostrados bajo
el microscopio con un tono azul. A pesar de que el frotis microbiano,

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Examen Práctico

estaba demasiado cargado, se pudieron observar zonas en las que

había cocos facilmente visibles.

Análisis de
Superficies
• Objetivo:

- Determinar levaduras y mohos en las manos y las uñas del analista.

• Muestra de la que disponemos:

- Manos y uñas del analista.

• Medios de Cultivo:

- Agar CGA para siembra

- Ringer para lavar las manos. En esta prueba se sigue el método de
análisis de superficies del enjuague.

• Reactivos:

- No se utilizan reactivos para realizar esta prueba.

• Expresión de resultados:

- La muestra ha sido tomada en una superficie de aproximadamente

180 cm2, es decir en una mano, debido a que no disponíamos de
una persona q nos pudiese ayudar a hacer el enjuague de la forma
explicada en la guía técnica sobre criterios y procedimientos para el
examen microbiológico de superficies. Como resultado de esta
prueba, se determina que en las manos del analista, había ausencia
de mohos y levaduras.

Caracterización de la Cepa a lo
Largo del Curso

Cepa: 245 Micrococcus luteus

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Examen Práctico

Prueba nº 1, Citrato: Siembra en medio Citrato de Simmons. No se aprecia

crecimiento, por lo tanto, es citrato negativa.

Pueba nº 2, Indol: Siembra en caldo de triptona y despues de incubar se le añade

reactivo de Covacs. Sin cambio de color en el reactivo, por tanto, negativo en
indol.

Prueba nº 3, RMVP: Siembra en caldo MRVP. Despues de incubar, se le añade

alfa naftol y KOH. Da positivo en R.M. y negativo en V.P.

Prueba nº4, Manitol Movilidad: Siembra en agar manitol-movilidad. Da como

resultado negativo en ambas pruebas.

Prueba nº5, DNAsa: Siembra en medio DNAsa. Resultado de la cepa, sin

crecimiento, por tanto negativo.

Prueba nº6, McConkey: Siembra en medio McConkey. Resultado negativo, debido

a que no hay crecimiento.

Prueba nº7, test de Kligler: Sembrado en KIA. Fermentación de glucosa y de

lactosa negativo, producción de gas positivo y producción de ácido negativo.

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