CARACTERIZACIN QUIMICA DE GLCIDOS: UNA PRCTICA DE LABORATORIO CHEMICAL CHARACTERITATION OF CARBOHYDRATES: A PRACTICAL OF LABORATORY Guzmn-Soto CJ, Padilla-Garca CA &

Julio-Gaviria YP. Estudiantes de Biologa, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad del Magdalena.

RESUMEN Con el propsito de caracterizar las propiedades qumicas y fsicas de los carbohidratos se realizaron diferentes procedimientos bioqumicos, en los cuales se emplearon algunos reactivos indicadores de la presencia-ausencia y del tipo de carbohidratos. Logrndose la observacin e ilustracin de las estructuras cristalinas de la Glucosa, Fructosa y Sacarosa; de la misma manera se determino a cual clase de carbohidratos pertenecen (Monosacridos, Disacridos, Oligosacridos y Polisacridos). Mediante esto se corroboro que la sacarosa es un polisacrido que puede disociarse en dos monosacridos, Glucosa y Fructosa; debido esto fundamentalmente a su estructura molecular. Palabras Claves: carbohidratos, monosacridos, polisacridos, aldosas y cetosas.

INTRODUCCIN Los carbohidratos son los compuestos ms abundantes y ampliamente distribuidos en la naturaleza, se hallan en todos los tejidos de animales como en vegetales. Las plantas verdes y algunas algas sintetizan la glucosa (carbohidrato) por medio del proceso denominado Fotosntesis, a partir de dixido de carbono y agua. Tambin pueden formar parte de la estructura de soporte, como en el caso de la celulosa o la quitina. Aunque el hombre puede sintetizar la mayor parte de carbohidratos, una buena parte los obtiene de fuentes vegetales. Por su estructura qumica, los carbohidratos pueden considerarse derivados aldehdicos o cetnicos de polialcoholes o alcoholes polihidroxlicos. Su frmula general es Cn(H2O)n, indicando que existe una molcula de agua por tomo de carbono. Esto origin la aceptacin del nombre de hidratos de carbono o carbohidratos. No obstante, un hidrato por definicin es un compuesto al que se fija una molcula de agua, pero esto no corresponde a las propiedades de estos compuestos, ya que los resultados de los espectros indican que no se hallan molculas de agua individualizadas en la estructura del carbohidrato. Adems, existen compuestos que siguen esa relacin y no son carbohidratos, como el formol C(H2O) o el cido actico C2(H2O)2 (Pacheco, 2001). La denominacin de azcares, sacridos o glcidos (del latn glykos, que significa dulce) no son del todo acertada, debido a que no todos estos compuestos son dulces. Como es caso del almidn, que es inspido. A partir del dixido de carbono y agua, las plantas sintetizan los carbohidratos, en un proceso denominado fotosntesis. Tal como se ilustra en la siguiente ecuacin:

nC O

nH 2 O

C l o r o fi l a L u z s o la r

C n (H 2 O )n

nC O

El pigmento verde de las plantas, la clorofila, pone a disposicin del vegetal, la energa que absorbe de la luz solar. En este proceso tienen lugar numerosas reacciones catalizadas por enzimas, no todas se comprenden, queda el CO2 reducido como carbohidrato y a su vez se libera oxgeno. La energa solar qued transformada en energa qumica a disposicin de las plantas y de animales, los cuales metabolizan los carbohidratos realizando la operacin inversa y utilizando la energa para diversos fines. El mecanismo por el que los animales producimos CO2 y consumimos oxigeno se ilustra en la ecuacin siguiente:
Cn(H2O)n
+

nO2

nCO2

n(H2O)

energa

Un ismero es un compuesto con igual formula molecular a otro, pero que difiere solo en la secuencia de los enlaces que forman al compuesto o en la orientacin en el espacio de los tomos. La presencia de tomos de carbono Asimtricos o Quirales (tomo de carbono al cual estn unidos 4 tomos o grupos diferentes) en las molculas de los carbohidratos, hace posible la formacin de ismeros. Los compuestos que poseen la misma secuencia de enlaces, pero que difieren en la orientacin de algunos tomos en el espacio, se conocen como Estereoismeros o Ismeros Geomtricos (Wade, 2004). El concepto de ismeros es relevante ya que muchas molculas de carbohidratos se estructuran segn sus caractersticas. El objetivo de esta prctica fue caracterizar y describir las propiedades fsicas y qumicas de los carbohidratos.

MATERIALES Y MTODOS Para la realizacin de esta prctica el experimento se dividi en siete partes como se describen a continuacin. 1. Determinacin De La Estructura Cristalina De Glcidos: Se tomaron pequeas muestras slidas de sacarosa, glucosa y fructosa; las cuales se observaron en microscopio a objetivo de 10X para as esquematizar su forma fsica. 2. Formacin De Ozasonas: en un tubo de ensayo se agreg 0.1 g sacarosa, 0.2 g de clorhidrato de fenilhidrazina, 0.3 g de acetato de sodio cristalizado previamente pesados en balanza analtica, y por ltimo se adicion 4 mL de agua destilada, para as agitar hasta homogeneizar la muestra. Este procedimiento se repiti con fructosa y ambas muestras fueron sometidas a calentamiento por 20 minutos, bajo observacin. Una vez terminado el tiempo de no haber observado cristalizacin se procedi a colocarlas en un recipiente con hielo. 3. Reaccin De Molisch/Udransky: En seis tubos de ensayo se coloc 3mL de glucosa, fructosa, arabinosa, sacarosa, almidn y agua; a las cuales para cada uno se le aadi seis gotas del reactivo de Molisch/Udransky, agitando suavemente para homogeneizar la mezcla. Por ltimo a cada tubo se le agreg 1 mL de cido sulfrico concentrado procurando que resbale por la pared del tubo, una vez inclinado 4. Reaccin De Benedict: en seis tubos de ensayo se aadi 4 mL del reactivo de Benedict, a los cuales tambin se les agreg tres gotas de glucosa, fructosa, arabinosa, sacarosa,

almidn y agua (un reactivo por tubo). Luego se pasaron a bao mara por 3 minutos bajo observacin. 5. Reaccin De Barfoed: se utilizaron los glcidos glucosa, fructosa, arabinosa, sacarosa, almidn por otro lado el agua, como control; de las cuales se agregaron 1 mL en seis tubos de ensayo ms 3 mL del reactivo de Barfoed y por ltimo se pas a calentar en bao mara hasta ebullicin. Observando constantemente 6. Reaccin De Seliwanoff: en esta parte experimental se utiliz glucosa, fructosa y agua de las cuales se tom 1 mL que se coloc en un tubo de ensayo por separado y a cada uno se le agreg 0.5 mL del reactivo de Seliwanoff, estos tubos de ensayo se pasaron a calentar en bao mara por 60 segundos bajo observacin constante, al no notar cambio se continu por 5 minutos igualmente bajo observacin. 7. Reaccin De Lugol: a seis tubos de ensayo se aadi una gota de lugol luego de haber agregado 2 mL de glucosa, fructosa, arabinosa, sacarosa, almidn y agua (un reactivo por tubo). Luego se pasaron a bao mara hasta ebullicin observndose constantemente. Una vez se observ la ebullicin en cada uno de los tubos se dejaron reposar y enfriar en un recipiente con hielo.

RESULTADOS Y DISCUSIN 1. Determinacin De La Estructura Cristalina De Glcidos

Figura 1. Representacin esquemtica de los tres carbohidratos observados a vista microscpica. La estructura cristalina de la glucosa result ser de forma rectangular, mientras que la de la fructosa tiende a una forma cbica y la de la sacarosa a un trapecio en 3D

2. Formacin De Ozasonas: durante el tiempo de calentamiento no se observ ningn cambio a simple vista e igualmente durante la exposicin al hielo. Se esperaba observar cristales en ambas muestras ya que ambas tenan la propiedad de reaccionar con la fenilhidrazina por contener grupos aldehdos y cetonas, los cristales a observar corresponderan a cristales de clorhidratos de fenilhidrazonas. 3. Reaccin De Molisch/Udransky: una vez se homogeneiz la mezcla al agregarle el cido se observ la aparicin de un anillo color violeta en la muestra de almidn nicamente, mientras que en las otras no se observ. Era de esperarse que el resultado solo fuera positivo en sacarosa y almidn pues el anillo indica enlaces glucosdicos, que es propio de carbohidratos no reductores y solo estos dos cumplen esta propiedad. La nica explicacin que se atribuye a este resultados es la contaminacin de la muestra

4. Reaccin De Benedict: en esta parte del experimento solo los glcidos glucosa, fructosa y arabinosa dieron positivo; observndose que estos durante el calentamiento se present un precipitado de color rojo ladrillo, siendo este el Cu2O que se forma tras la reaccin; tambin se forma una sal para cada caso. los reactivos de Fehling, Tollens y Benedict, son agentes oxidantes moderados, oxidando a los grupos aldehdos al mismo tiempo que estos se reducen. El reactivo de Benedict est constituido por citrato y cobre, este ltimo es oxidado y existe un intercambio de uno de los compuestos del grupo carboxlico del carbohidrato, en el caso de la glucosa se sustituye un hidrogeno por un oxigeno, en ultima instancia el carbohidrato es oxidado por el reactivo. Al mezclar cantidades iguales de estas dos soluciones, se forma un complejo soluble de Tartrato Cprico, de color oscuro, el cual proporciona una pequea concentracin de iones Cprico (Brewster, 1977). La presencia de carbohidratos reductores queda evidenciada, ya que el grupo aldehdo reduce la solucin de Benedict y forman un precipitado rojo ladrillo de xido Cuproso. 5. Reaccin De Barfoed: como en el caso del reactivo de Benedict con el de Barfoed los resultados fueron iguales ya que este tambin es especfico para azucares reductores, este reactivo consiste en acetato cprico diluido en cido actico, lo que permite que se pueda distinguir entre azucares reductores y no reductores. 6. Reaccin De Seliwanoff: con esta prueba se pudo identificar muestras de cetosas y aldosas. Este reactivo est constituido por m-dihidroxibenceno disuelto en acido clorhdrico concentrado. Al aadir el reactivo a las tres muestras no hubo cambio alguno, luego de terminar el primer minuto las condiciones fueron iguales, pero despus de 3 minutos y 40 segundos se present una tonalidad rojo en la muestra de la fructosa indicando que est en comparacin a la glucosa, posee un grupo cetona. El cido clorhdrico del reactivo deshidrat ms rpido la cetohexosa (fructosa) que a la aldohexosa (glucosa), ya que stas ltimas deben isomerizarse a aquellas, para formar el Hidroximetilfurfural por deshidratacin (Velzquez, 2008). 7. Reaccin De Lugol: solo se observ un cambio de coloracin en la muestra del almidon, la cual se torn marrn. Este reactivo est constituido de yodo disuelto en yoduro de potasio, lo cual hace que se forme un complejo fsico de iones triyoduro (I3-), que durante el proceso se situaron dentro de los espacios helicoidales que presenta el almidn. Pese a que este reactivo permite diferenciar polisacridos de monosacridos, no result positivo en la muestra de la sacarosa precisamente porque esta carece de los espacios helicoidales que si se presentan en el almidn. (Flores, 2002).
Tabla 1. Resultados obtenidos de cada una de las reacciones realizadas. Donde ( + ) representa la afinidad del reactivo por el glcido ( ) la ausencia de esta afinidad.

REACTIVO GLCIDO GLUCOSA FRUCTOSA ARABINOSA SACAROSA ALMIDON AGUA** Molisch/Udransky + Benedict + + + Barfoed + + + Seliwanoff 60 5 +* Lugol + -

**El agua es la muestra control; * el cambio de coloracin se observ a los 2 minutos con 40 segundos.

BIBLIOGRAFA y y Mc. Murry John. Organuc chemistry JTP. An International Thomson Publisking Compary 1984. Pacheco, D. (2001). Bioqumica Estructural y Aplicada a la Medicina. Instituto Politcnico Nacional.

Flores, J. (2002). Reacciones de Identificacin de Carbohidratos. [Gua de Estudio]. Caracas: UPEL.

Rodrguez, G. Len, P. L. (1984). Bioqumica. Buenos Aires: Lizar

Wingrove , A. y R. Covet., 1999. Qumica Orgnica. Primera edicin. Oxford University Press. Mxico, S.A. ISBN: 968-6034-36-G. Edit Mexicana.

Velsquez, M. y Ordorica, M. (2008). Estructura de Glcidos. [Documento en Lnea]. Disponible: http://ww.ugr.es/~quiored/espec/ms1.htm.

Brewster, R. Q. y McEwen, W, E. (1977). Qumica Orgnica: Un Curso Breve (2 ed). Mxico: C.E.C.S.A