1

Toxicologie Objet Dfinition

I. Objet de la toxicologie
Les substances chimiques naturelles et produites par l homme entre en interaction avec l homme. La toxicologie est l tude des effets nfastes des substances chimiques sur les organismes pour prvenir et protger la sante

II.

Toxicologie : science des toxiques

1. Cause de intoxication
Origine des produits (naturels, synthse ou se formant par des ractions combines) Proprits physico chimiques (structure chimique, tat physique (agit sur les conditions d exposition), solubilit, volatilit, couleur, gout) : ractivit dans l organisme Mthodes de recherche et dosage : identification et quantification de la substance

2. Effets biologiques : lors de l interaction de toxiques avec l homme

Toxico-cintique : dcrit l volution du devenir d un toxique (ADME) Doses toxiques : dose qui entraine la toxicit Mcanisme d action Nature des effets symptomatologie

3. Lutte
Thrapeutique : traitement des intoxications Prvention : diminution de la frquence des intoxications grce aux rglementations qui dfinissent des restrictions voir des interdictions d utilisations,

III.

Toxique ou poison

Intoxication ou empoisonnement ? Toxon : arc, flche Potio : potion, poison Une substance toxique est une substance qui provoque soit dans l immdiat soit aprs une phase de latence plus ou moins longue des effet biologiques nfastes rversibles ou non pouvant aller d effets minimes jusqu' des troubles majeurs et mme provoquer la mort. Tout produit peut tre nfaste si la dose est trop importante. Paracelse (1493-1541) Tout est poison, rien n est poison c est la dose qui fait le poison Aspect quantitatif et qualitatif relation dose effet : un toxique est dfini par sa dose mais pas par sa nature

IV.
-

Xnobiotique : substance trangre a la vie

xeno : tranger bio : la vie Attention un Xnobiotique n est pas forcement toxique

V.

Risque toxique

Probabilit qu il survienne une intoxication, le plus souvent lis aux facteurs d exposition Ex : moins toxique mais plus volatile = plus toxique

Etiologie des intoxications

Etiologie : tude des causes

I.

Intoxication volontaires ou intentionnelles

1. Empoisonnement criminel

1-1 Dfinition juridique : cf. code pnal Art 221-5 : Le fait d attenter la vie d autrui par l emploi ou l administration de substance de nature entrainer la mort constitue un empoissonnement 1-2 Les produits Facilit d obtention Facilit d administration Recherche d impunit : pour que le produit ne soit pas dtectable

2. Suicide
Ordre de grandeur : 10 000 12 000 par an en France (dclars) Tentatives : multipli par 10 voir 15 Intoxication : 1 sur 7 Les produits : o Mort douce : toxique : plutt mdicament psychotropes o Facilit d obtention Poly-intoxication Autolyse : suicide selon mdecins Intoxication volontaires

II.

Intoxication involontaires
1. Origine domestique
Produit mnager : eau de javel, alcool, antirouille, Produit cosmtique : lotions, teintures, Produits phytosanitaires : dsherbants, insecticides, raticide, Monoxyde de carbone : mauvaise combustion Facteurs favorisants : o Ressemblance o Mauvais stockage o Proximit des enfants (50% des intoxications) o Entretient des installations

2. Origine mdicale
2-1 Malade ou entourage Erreur de posologie Erreur de mode d administration Prise accidentelle

2-2 Mdical ou paramdical : infirmier, mdecin, pharmacien,

3. Origine professionnelle
3-1 Milieu industriel et artisanal Vapeurs Particules, poussiere Projection, contact cutann

3-2 Milieu agricole Pesticides Tableau de maladies professionnelles (rgime gnral, agricole) Valeurs limite d exposition professionnelles (VLEP) Valeur limite d exposition : a en pas dpasser sur une courte dure (15min) (VLE) Valeur moyenne d exposition : sur une journe de 8h (VME)

4. Alimentaires
4-1 Aliments naturellement toxiques oseille : insuffisance rnale Grande consommation d eau riche en fluore : fluorose Htroside cyanognes Alcool Muscade (hallucination)

4-2 Micro-organisme : enterotoxines Toxine botulique : volution en milieu anarobie des bacilles botuliques Aspergillus : aflatoxines se retrouvent dans les rgions tropicales (contamination arachide) : produit cancrogne

5 4-3 Rsidus produits qui persistent Vgtaux : pesticides des cultures Animaux : traitement par produit favorisant l engraissement : hormones sexuels, antibiotiques (interdits en 2006)

4-4 Additifs : produit qu on ajoute volontairement : coloration, conservation 4-5 Rcipient, contenant, emballages Proprits xeno- strognes : rle nfaste sur la perturbation hormonale Nitrosamines : retrait de ttines en contenant trop Certaines substances appartenant aux imprims des laits pour bb se sont retrouvs dans le lait

4-6 Contamination accidentelle 4 vagues d intoxication (800 personnes atteintes, 12 morts) dans du pain contenant des pesticides organochlors car la farine avait t transporte dans un bateau avec des containers contenant des pesticides proche de ceux de la farine Huile frelate d Espagne (25 000 intoxication, 1 200 morts) huiles contamins par es huiles industrielles mais enfaite trace d organophosphors

4-7 Fraude Alcool mthylique au lieu de propanol Mlamine dans le lait chinois permettant d augmenter la teneur en azote (296 000 intoxications, 1 200 morts)

4-8 Pollution environnement 4-9 Substances toxiques (champignons, ) Aujourd hui on utilise des listes positives : produits autoriss. Avant on utilisait des listes ngatives, problme, tout ceux qui n tait pas sur la liste taient autoriss.

5. Environnement : Ecotoxicologie
Pollution de l air, de l eau, des aliments par oxyde ce Carbonne et d azote, hydrocarbures volatiles, nitrates, mtaux lourd. Actuellement la pollution interne la maison est le fer de lance.

Diffrent types de toxicit

I. Toxicit aigue
Effet toxique qui rsulte de la pntration de doses uniques ou trs rapprochs + rapidit des effets Ex : Oxyde de carbone, thanol, paractamol, Doses capables d entrainer la mort Il existe aussi une notion de toxicit Suraige : Doses massives Subaige : doses fortes sur une dure de plusieurs jours, semaines

II.
-

Toxicit a long terme (chronique)

Dose faible ou trs faibles Rptition sur de longues dures (mois ou annes) o Longue latence o Evolution insidieuse

Ex : fluorures, benznes, HCH (isomre du lindane)

III.

Relation Effet-Concentration

Limite de toxicit = limite d exposition

IV.

Relation Effet-Temps

Sommation des effets : seuil de toxicit trs difficile fixer (statistique des populations)

V.

Cumulation des doses

HCH : 6g/kg (dose toxique aigue) Doses 600 fous plus faibles en administration quotidienne : manifestation d une toxicit hpatique aprs 1 an

Cancrogense Mutagense Tratogense

I. Cancrogense
Toxiques capables d induire des tumeurs malignes Initiation promotion o Initiation : cration de la lsion initiale par des initiateurs  Substances chimiques modifiant l ADN : mutation  ADN -> interaction -> mutations

ADN, site lectrophiles pouvant ragir avec des atomes portant des lectrons : modifications Corrlation cancrogense/mutagense Oncognes Seuil de toxicit : dans l absolu une seule interaction peut modifier une cellule : lsion initiale  Rparation de l ADN ou pas du tout  Mais entre les deux il peut rester une lsion dans une cellule normale (cellule initie) -> transmission de l anomalie Promotion  Une cellule initie peut rester latente c est sous l action de promoteurs (substance promotrice) quelle se multiplie.  Doses assez forte et rptition de dose ncessaire  Un produit peut tre initiateur et promoteur : cancrogne complet  Multiplication contrle Progression  Etape de prolifration, multiplication incontrle Cancrognes gnotoxiques (agit sur l ADN) / pigntique (n agit pas sur l ADN)
  

o o

9 Co-cancrognes

Peut augmenter l effet cancrogne d autres substance (augmente absorption, augmenteles transformations mtabolique) mais lui n est pas cancrigne. Il peut parfois aussi designer en plus les promoteurs cancrogne ultime produit final qui agit (aprs dgradation ou mtabolisme)

Classification des cancrognes CIRC (IARC) : centre international de recherche sur le cancer (appartient a l OMS) Groupe 1 : cancrogne pour l homme Groupe 2A : probablement cancrogne pour l homme (action cancrogne prouve chez l animal) Groupe 2B : cancrogne possible pour l homme (fortement suspect mais pas prouv) Groupe 3 : non classables Groupe 4 : probablement non cancrogne pour l homme Parfois classification de process industriel et de mlange de solution

Europe Catgorie 1 (C1) : cancrogne pour l homme Catgorie 2 (C2) : devant tre assimil (effet probable) Catgorie 3 (C3) : proccupant (effet cancrogne possible)

II.

Mutagense

ADN -> interaction -> mutation Cellules somatiques : cancrisation Cellules germinales : mutation hrditaire (jamais prouv)

Classification des toxiques mutagnes en Europe Catgorie 1 (C1) : mutagne pour l homme Catgorie 2 (C2) : devant tre assimil (effet probable) Catgorie 3 (C3) : proccupant (effet mutagne possible)

10

III.

Tratogense

Tratogne substance capable d induire des malformations congnitales Ex : thalidomide (sdatif, anti nauseux) : malformation des membres Diethylstilboestrol (DES) (Traitement des menace d avortement) : observation de 8 cas en mme temps dans une population restreinte d une tumeur trs peu rpandue. Anomalies de l utrus, difficult avoir des enfants chez les femmes. Anomalies de disposition de l appareil urinaire chez les hommes Methylmercure

IV.
-

Stade du dveloppement
Pr-implantation ou blastogense J0 a J14

Sensibilit rpond la loi du tout ou rien : uf meurt ou certaines cellules meurent mais pas de diffrenciation donc l uf peut continuer se dvelopper Priode embryonnaire : embryogense J15 J60

Organogense : action irrversible : malformation physiques Priode f tale : foeto-gnse J60 fin

Maturation dveloppement : risque de malformations fonctionnelles Classification des toxiques sur la reproduction en Europe Catgorie 1 (C1) : reprotoxiques pour l homme Catgorie 2 (C2) : devant tre assimil (effet probable) Catgorie 3 (C3) : proccupant (effet reprotoxiques possible)

Substance CMR : Cancrogne Mutagne Reprotoxiques

11

Toxico-cintique

Passage au niveau de la bicouche phospholipidique, diffusion passive ou diffusion simple. Passage de substance toxiques le plus frquent o Loi de Fick

o D dpend de la taille, l ionisation, pH, pK : les molcules lipophiles passent mieux Passage au niveau des protines transmembranaires o Canaux protiques :  Pores  Transport passif selon le sens du gradient o Protines porteuses : liaison, conformation, saturables  Transport passif (sans nergie, uniquement dans le sens du gradient)  Transport actif (ncessite de l nergie, sens inverse du gradient possible)

Ex : le Pb2+ peut utiliser le systme du calcium Endocytose (pinocytose, phagocytose) Exocytose

12

I.

Absorption
1. Voie digestive
Solides et liquides Estomac intestin +++ Absorption passive +++ o Gradient de concentration o Liposolubilit o Ionisation (pH du milieu) o Surface, vascularisation o Transporteurs : peut rpandus Voie trs importante

2. Voie respiratoire
Toxiques gazeux Toxiques liquides : vapeurs Toxiques solides : vapeurs

Membrane alvolo-capillaire : diffusion passive. Membrane trs fine (0,2 0,4 m) permettant une diffusion passive facile (dpend de la diffrence de pression partielle, Liposolubilit / hydrodrosolubilit, surface & paisseur de la membrane) Particules solides ou liquides en suspension dans l air : arosols

Absorption dpendante de la taille des particules. Il faut des particules trs petite de l ordre du m. L absorption se fait par liposolubilit pour les particules aqueuses et par phagocytose pour les solides Voie importante qui dpend des circonstances d exposition (grandes quantits d air absorbes. C est un court circuit du systme hpatique avec une grande rapidit d action.

3. Voie cutane
Liquides ++ Solides

Epiderme : couche corne difficilement traversable (kratine+lipophile) constitue de cellules mortes Substance lipophiles passent mieux -> arriv dans le derme -> vaisseaux sanguins

Appareil pilo-sbac : zone de faible paisseur. Interruption dans la zone protectrice au niveau du poil mais prsence de glandes sbacs (sbum : substance trs grasse, lipophile) Absorption passive selon le gradient de concentration, la liposolubilit/hydro solubilit, taille des membranes

13

4. Voie muqueuse
Buccale Oculaire Rhinopharynge Rectale Gnitale

5. Voie transcutane (injectables)

Sous cutane Intramusculaire

II.

Distribution
1. Principaux facteurs
Diffusion passives (parfois transporteurs) Liposolubilit, ionisation Schma Fixation protine (affinit trs variable/saturables) Irrigation, dbit sanguin Cas particulier : SNC : difficult de passage (trs lipophile + passage des cellules gliales)

2. Principal paramtre
Vd = volume de distribution (volume fictif ncessaire a avoir la mme concentration du produit que dans le sang)

3. Fixation stockage
Foie, rein

14 Os Graisses

Lorsque le produit s accumule dans les tissus : toxicit Stockage de protection : Pb2+ dans les os

4. Redistribution
Thiopental (srum de vrit) : anesthsie. Action trs rapide sur le SNC car trs lipophile mais la concentration diminue trs rapidement dans le SNC car il y a une redistribution au niveau des graisses

15

III.

Elimination ou excrtion
1. Voie rnale
Filtration glomrulaire Passage capillaire (capsule de Bowman) Passage dpend de la largeur du trou & de la pression de filtration Scrtion tubulaire : mcanisme actif sang -> tubule Rabsorption tubulaire o rabsorption de l eau -> augmentation de la concentration de la substance o si substance toxique peu polaire -> peut repasser dans la circulation sanguine

2. Voie digestive
Salive Estomac, intestin Bile +++ (cycle entrohepatique)

3. Voie pulmonaire
Inverse de l absorption qui se produit dans une atmosphre ne contenant plus e toxique (le toxique peut avoir pntr par une autre voie) si il possde une certaine volatilit (ex : alcool)

4. Autres voies
Lait Sueurs Phanres

IV.

Biotransformations

Ractions essentiellement enzymatiques : transformation mtaboliques qui donnent des mtabolites

5. Localisation
Au niveau des organes et des tissus y Foie +++

16 Extra-hpatiques o Muqueuse digestive, rein peau, poumon, o Sang Au niveau subcellulaire y Rticulum endoplasmique microsomes (fragment de la membrane du RE) y Cytosol ou solubles (fraction surnageant aprs centrifugation) y Autres : mitochondries
y

6. Ractions de biotransformations
Ractions de la phase 1 ou de fonctionnalisation : elles font apparaitre des groupements polaires ou fonctionnels. y Augmentation de la polarit (hydrosolubilit) y Base des ractions de phase 2 Mono oxygnases cytochrome P450 y Localisation o Rticulum endoplasmique o Foie +++ (et autres tissus) y Structure o Hmoprotines (groupement prosthtique drivant de l hme + partie protique) o Si le CO se fixe sur ces cytochromes : absorption a 450 nm (P pour pigment) o PM d environ 50 000 Dalton o Famille d iso enzymes (ou isozymes) dont les proprits sont trs proches mais non identiques  PM 47 000 56 000  Maximum d absorption 447 452 nm  Affinit diffrentes vis--vis des substrats y Nomenclature (CYP2C9) o CYP : cytP450 o 2 : Famille o C : sous famille o 9 : numrotation y 4 familles impliques dans les transformations des xenobiotiques

Fonctionnement y Oxydation d un substrat : RH + O2 + 2H+ + 2e- = R-OH + H2O y Necessite : Cyt P450 + cyt P450 reductase + NADPH + matrice lipidique

17

y y y y y y y y

Le substrat se fixe sur la partie protique de l enzyme Incorporation d un lectron cd par le NADP rduit grce la CYT p450 rductase -> Rduction du fer en fer II Le fer ferreux peut fixer l O2 On obtient un complexe Enzyme substrat oxygn Fixation d un lectron cd par le NADP ou le CYT p5 On obtient une forme en quilibre avec une charge ngative Le systme devient instable, il se fragmente Formation d H2O avec 2 H+ et de R-OH & reformation de l enzyme

Ce sont des mono-oxygnase car 1 seul O se fixe sur le substrat Principales ractions o Hydroxylation aliphatiques -> alcool o Hydroxylation aromatique -> phnol o Hydroxylation alcne (poxydation) -> Epoxyde o Hydroxylation aromatique insatur (poxydation) -> Epoxyde (instable) -> phnol o Dalkylation oxydative (N, O, S dalkylation) -> amine, alcool, thiol R-NH-CH3 -> R-NH-CH2OH -> R-NH2 + HCHO R-O-CH3 -> R-O-CH2OH -> R-OH + HCHO o N hydroxylation et N oxidation R-NH2 -> RNHOH (hydroxylamine)

18 R2-N-CH3 -> R2-NO-CH3 (N oxyde) S Oxydation R2S -> R2S-O (sulfoxyde) -> R2S-O2 (sulfone) o Deshalogenation oxidative R2-CH-X -> R2-COH-X -> R2-C=O + HX Reductions
o

Ex : drivs nitrs, N oxydes Ex : composs halognes : deshalogenation rductive R-CX3 -> R-CHX2 + HX L norme intrt suscit par le CYT P450 est li sa polyvalence : capable de transformer de trs nombreuses substances mais il peut gnrer comme sous produits des espces ractives de l oxygne

19 Mono oxygnases flaviniques o Enzymes FAD o RE o Substrats : n oxydent pas sur les atomes de carbones  Amines y N Oxydes y Hydroxylamines  Groupes sulfurs Epoxydes hydrolases o RE o Substrats : poxydes + H2 O -> diols Les poxydes sont trs ractifs en diols qui sont beaucoup moins ractifs !!! Dshydrognases a NAD o Cytosoliques o Oxydation ou rductions o Substrats : alcools, aldhydes, ctones, acides Ex : alcool primaire -> aldhyde (par l alcool deshydrogenase avec NAD+ -> NADH+H +) Mais la raction peut aussi se faire dans l autre sens acide -> aldhyde -> alcool Estrases et amidases o Cytosolique et microsomales o Tissus, sang, tube digestif o Hydrolyses d esters ou d amide Ex : estrases (arylesterases, cholinestrases, acetylesterases) : R-COOR + H2O -> RCOOH + R OH Ex : amidases : R-CONHR + H2O -> RCOOH + R NH2 Autre o Peroxydase o amine oxydases

7. Raction de phase 2 ou de conjugaison

Mtabolite de phase 1 + molcule endogne -> Conjugu (inactif et plus soluble) -> Elimination 7 grands types de conjugaison que l on dnomme en fonction d la molcule endogne qui sert a la conjugaison Glucuroconjugaison o Enzymes : glucuronyltransferases dans le RE o Substrats : OH (phnol et alcool) +++ & COOH, NH2, SH o Donneur : acide UDP (uridine di phosphate) glucuronique o R-OH + acide UDPglucuronique -> R-Oglucuronide + UDP (via glucuronyl transfrase) o Forme conjugu qui s limine par les urines, la bile (il peut y avoir des enzymes dans l intestin qui coupent cette conjugaison et qu il y est rabsorption du driv)

20 Sulfoconjugaison o Enzymes : sulfotransferases (cytosoliques) o Substrats : OH phnols +++ (& alcool) o Donneur phosphoadenosinephosphosulfate (PAPS = sulfate+ ATP) o R-OH +PAPS -> R-Osulfate + PAP o Elimination urinaire +++ (&biliaire) o Si trop de substrat, plus vite limit que la glucurogonjugaison par manque de substrat Acetylconjugaison o Enzymes : N-acetyltransferases (NAT1 et NAT2) (cytosoliques) o Substrats : NH2 (amines, hydrazines, sulfamide, ) o Donneur Actyl CoA o R-NH2 + ActylCoA -> R-NH-CO-CH3 + CoA Conjugaison au glutathione ou mercapturique o Enzymes glutathione transferases (cytosoliques) o Substrats : molecules electrophiles  Noyaux aromatiques, doules liaisons  Epoxydes  Derives halogens, nitrs, quinoniques o Glutation : tripeptide  1) RH + glutathione -> glutamine-R-cysteine-glycine liaison par le S de la cysteine !!  Action de peptidases -> R-cysteines  Conjugaison acetiques -> R-cysteine N-actyle (deriv de la N acetylcysteine ou derives mercapturique)  R-S-CH2-CH-COOH-NH-CO-CH3  Surtout dans l elimination renale pour le dernier et billiaire pour les 2 premier Conjugaison aux acide amines o Enzymes  Ligases (CoA) + acyltransferases (cytosoliques (mitochrondiral) o Substrats : COOH aromatiques o Glycine principalement : glycine conjugaison o Ar-COOH + NH2 -CH2-COOH -> Ar-CO-NH-CH2 -COOH (acide hippurique) Methylation o Enzymes : methyltransferases (cytosoliques) o Substrats :  OH penoliques,  N amines heterocycles,  SH o Donneur : S-adenosylmethionine o R-Ar-OH -> R-Ar-OCH3 o Ex : catchol o.methyltransferase, thiopurine methyltransferase Mode actif plutot sur les molecules endogene, masque plutt des molecules endogenes Thiocyanate conjugaison

21 Cf CN-

4-3 Voies metaboliques Schema general : Molecule intiale -> phase 1 -> metabolite -> phase 2 -> metabolite conjugu -> elimination 1 voie metabolique est le chemi parcouru par une molecule justqu a l limination Il peut arriver arriver que des molecules soit suffisament polaires pour se conjuguer directemnt sans tre transforme par la phase 1. Mais aussi que le metabolite non conjugu soit asssez soluble pour tre elimin. La molecule initiale peut aussi etr eliminer directement (sous forme inchanger ou en nature) car assez polaire et hydrosoluble. Les voies prinipales ou majeur et les secondaires ou mineurs sont class en fonction du nombre de molecules suivant cette voie mais les voies secondaires peuvent quand memetre importante au niveau de la toxicologie. Les voies majeurs peuvent tre satur, il y a deplacement vers des voies secondaires, il y a donc une modification des metabolites elimins. 4-4 consequence toxicologiques Inactivation : detoxication

Il arrive que les reaction genere des metabolites plus tociques que la molecule initiale voir tre les seuls toxiques Activation, bioactivation, toxication : metabolites actifs, reactivit chimique : toxique ultimes, toxicophores Metabolites reactifs o Electrophiles  Epoxydes  N hydroxyls et quinones  Aldhydes  Ions o Radicaux libres R peuvent reagir avec l oxygene o Derives reactifs de l oygene  Radical superoxyde O2-  Ions peroxydes O22 Radical hydroxyle HO Mecanimes d action o Liaison covalente aux macromolecules o Peroxydation des lipides membranaires

22

R + LH -> L + RH (L : lipide membranaire) L + O2 -> LOO LOO + L H -> LOOH + L L + L -> L-L LOO + L -> LOOL mecanisme de protection o voies conduisant a des metabolites stables o detoxication des electrophiles  epoxyde hydrolase  gluthation conjugaison o destruction des radicau libres et des derives reactifs de l oxygene  superoxyde dismutase  catalase  gluthation peroxydase et glutathion  Vit E  Vit C  Mecanismes de reparation

23
o Rparation moleculaires ex : acide nucleiques o Rparation cellulaire et tissulaire Notion d equilibre

Facteurs de variation de la toxicit

I. Facteurs lies au sujet
1. Espce
Ex : toxine botulique peut toxique chez le chat et les bovins Morphine : excitation chez certaines espces Atropine : les lapins rsistent la belladone Thalidomide : pas d action tratogne chez le rat

Biotransformation : quipement enzymatiques Autres : distribution, excrtion, rcepteurs, etc.

2. Individu
Polymorphisme gntique : population distinctes (>1%) Variations gntiques rares (<1%) Rpartition dans population diffre souvent selon ethnies Enzymes des biotransformation (les plus reprsentatives des polymorphismes) o Mtaboliseurs lents, rapides (et parfois intermdiaire, ultra rapides Consquences : augmentation ou diminution des effets toxiques o Polymorphismes :  CYTP450  Dshydrognase (alcool et aldhyde dshydrognases, dihydropyrimidine dshydrognases (5FU))  Estrases  Acethyltransferase  Methyltransferase - Autres enzymes Ex : dficit en G6PD

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Favisme (recherche sur net) Concerne les populations mditerrane, recouvre un peut les zone impalude Apparemment ce dficit permettrait une destruction plus rapide des hmaties infectes Aussi : rcepteurs, transporteurs

3. Sexe
Rat Ex : CCl4 : plus toxique chez le male Parathion : plus toxique chez la femelle (limination plus longue) Dioxine : plus toxique chez la femelle Rle des hormones

Souris Ex : chloroforme : plus toxique chez le male Nicotine : plus toxique chez la femelle Dioxine : plus toxique chez le male

Homme Ex : Alcool : plus toxique chez les femmes Mais trs peu de donne a ce sujet

4. L ge
Nouveau-n et jeune enfant Absorption : digestive (pH plus faible, moins de bactries), cutane (barrire plus faible) Distribution : plus faible affinit pour les protines, volume hydrique plus important que chez l adulte, BHE plus permable Biotransformation : conjugaison glucuronique et CYT P450 moins fonctionnels que chez l adulte

25 Elimination

Sujet gs Distribution : diminution masse musculaire et de certains tissus Biotransformation : activit de CYTP450 diminues avec le temps Elimination plus faible due la diminution des fonctions rnales

5. Le poids
2 Administration par unit de poids (approximation masse maigre/masse grasse) ou par m de surface corporelle

6. Facteurs nutritionnels
Dficits vitaminiques, en minraux, peuvent diminuer l activit enzymatique et donc des diffrences de vitesse de mtabolisation

7. Etat motionnel Stress

Cf. tudes exprimentales chez l animal

8. Etat pathologique
affections hpatiques affection rnales

II.

Facteurs lis aux conditions d administration

1. Voie d administration
Joue sur - la quantit absorbe - la vitesse d absorption - les biotransformations

2. Rythme d administration
Toxicit aigue / long terme Tolrance (mithridatisation : diminution de l effet) Sensibilisation : allergie

26

3. Heure d administration
Rythmes biologiques (circadiens, ) : chronobiologie Chrono toxicologie Exprience de Halberg (1958) Endotoxine E.coli Survie 20% 90% Mortalit 80% 10%

16h Minuit

Ouabane Survie 20% 80% Mortalit 80% 20%

9h 20h

Chrono cintique + chronesthsie (sensibilit diffrente a l action du produit) = chronergie (chrono-efficacit pour un mdicament)

4. Substances associes
Absorption d une substance concomitante : toxique, mdicament, aliment, excipient, Augmentation toxicit : synergie, potentialisation Diminution toxicit : antagonisme 4-1 Interaction toxicocinetique Absorption : fonction de la forme du toxique (sulfate de barium prcipite : pas toxique) Ne pas donner des lipides en cas d intoxication car favorisation de l absorption des toxiques lipophiles. Substance qui augmentent le transite intestinal Distribution Complexation d une substance peut l amener tre absorb alors que sous forme ionis il ne le serait pas. Sous nitrate de bismuth donnait des encphalopathies. Augmentation de l absorption et distribution (passage BHE) par Complexation avec des groupements thiols

Elimination Modification du pH urinaire. Augmentation du temps d limination si on alcalinise les pH urinaire car on a une ionisation plus importante.

27 Biotransformation a) Induction enzymatique : inducteurs Augmentation quantit d enzyme de biotransformation : CYP450, autres Lent et progressif Rversible Diminution de la demi-vie Exemple d inducteurs o Hydrocarbures polycycliques aromatiques o Phnobarbital o Rifampicine, millepertuis o Ethanol Un inducteur peut indure plusieurs iso enzymes mais toutes ne sont pas inductibles (ex : CYP2D6) Un inducteur n est pas ncessairement un substrat Auto-induction

b) Inhibition enzymatique - Par diminution de synthse - Par comptition (effet immdiat) o Substrat o Non substrat (ex : quinidine, CO (se fixe sur le fer du CYP450), pamplemousse) - Par inactivation de l enzyme (irrversible) o Inhibiteurs suicides (mtabolites suicides) o Combinaison stable avec l enzyme qui les transforme 4-2 Interaction toxicodynamique Augmentation de la toxicit par synergie Diminution de la toxicit par opposition des effets

28

Traitement des intoxications

I. Traitement d limination (vacuateur/purateur)
1. Avant absorption (vacuateur/dcontamination)
1-1 Evacuation gastrique Elimination de substance pas encore absorb Vomissements provoqus o Sirop d ipca : deux flacon (de 15ml unitaire) d un coup dilu dans de litre d eau 1g/kg chez l enfant et pas en dessous de 6 mois action central (CTZ) et excitation des nerfs priphriques, dlais d action de 15 a 20 min, efficacit vomitive est trs bonne. o Apomorphine : ampoules injectables, posologie ??? action centrale, action trs rapide moins de 5 min. trs efficace en terme de vomissement. Mais inconvnient il peut induire une dpression respiratoire usage uniquement par des quipes mdicales - Lavage gastrique : introduction d eau pour laver l estomac patient couch sur le cote avec la tte un peu plus basse. Introduction d un tube de Faucher par la bouche jusqu' l estomac. Vidage de l estomac par aspiration puis lavage. Tube termin son extrmit par un entonnoir, introduction d eau sale un peu tide de litre inject a chaque fois. Puis brassage travers la peau de l estomac. Puis tube plus bas que le patient, vidage puis recommencement. 10 ou 20 litres de liquide pour laver. Une fois que le liquide rcupr est bien clair on considre que le lavage est termin. - Contre indication des l vacuation gastrique en fonction de certains lments qui tiennent aux produits. o Nature du toxique  Caustiques : risque d aggravation des lsions  Solvant volatiles ou moussant : risque passage respiratoire et dclenchement de pneumopathies o Etat clinique  Coma : perte du reflexe de dglutition : risque de passage dans les voies respiratoires du contenu gastrique qui est trs acide qui provoque des destructions dans le parenchyme pulmonaire : syndrome de Mendelson (pneumopathie)  Convulsions : idem Intubation endotrachale qui peut comporter a sont extrmit un ballonnet aprs introduction qui bloque la trache. Le lavage gastrique peut alors tre pratiqu - Indications o Gravit : infection potentiellement graves o Dlai : plus le dlai est court plus les chances d efficacits sont importantes (idale dans l heure voir un peu plus aprs l ingestion)

29 Mais bnfice trs faible : trs peu utiliss de nos jours

1-2 Evacuation intestinale : acclration du transit intestinale Laxatifs, purgatifs : sorbitol, sulfate Na, sulfate Mg Faible efficacit - Contre indication : caustiques, pas de purgatifs huileux (caustiques souvent lipophiles d o augmentation de l absorption) - Irrigation intestinale : PEG de haut poids molculaire (non absorbables) qui cre un lavage intestinal qui va permettre de vider l intestin. Jusqu' vidage complet de l intestin

1-3 Evacuation cutane Lavage a l eau, enlever les vtements souills Pour projection oculaire : lavage pendant au moins 15 min

2. Aprs absorption (purateur)

2-1 Elimination pulmonaire Toxiques qui sont gazeux ou suffisamment volatiles pour prsenter une limination importante Ventilation artificielle mcanique (double la ventilation normale augmentation frquence et volume) insufflation car air puls, force la dilatation de la cage thoracique. Parfois on rajoute une pression ngative au moment de l expiration

2-2 Elimination rnale (diurse force) Diurtiques (osmotiques ou autres) Diurse saline NaCl isotonique Diurse alcalinisante bicarbonate de Na : modifie l ionisation des toxiques acides plus hydrosolubles et donc moins rabsorbs. (14 pour 1000)

2-3 Elimination extrarnale Dialyse pritonale et hmodialyse (rein artificiel) Exsanguino-transfusion Hemoperfusion hemofiltration

II.
-

Traitement antidotique (traitement spcifique)

Antidote : substance utilise pour neutraliser le toxique ou ses effets empcher ou rduire la toxicit Contrepoison Efficacit variable Antidotes sont des mdicaments Classification : principe d action

30

1. Action sur l absorption du toxique

Mcanisme (afin de le rendre non absorbable) Par fixation Par insolubilisation Par transformation chimique

Action au niveau Digestif +++ (VO ou sonde digestive) Cutan

Charbon activ (Carbomix*, Toxicarb*) Adsorption des toxiques Actif sur de trs nombreuses substances Administration per os o 50 100g d une suspension dans 250 ml d eau o Puis 25 50g toutes les 4 heures Entrodialyse : adsorber les toxiques qui suivent un cycle hpatique et les substances partir du sang (sortie des toxiques vers la lumire intestinale) - Intrt o Efficacit +++ o Dlai d utilisation (dans l heure qui suit l ingestion) o Prcaution pas de charbon dans le cas de produit caustiques o Assimil mthode d limination digestive Terre foulon Argile Bdlix* (montmorillonite)

Rsines changeuses d ions Questran* (rsine changeuse d anion) (Colestyramine) utilis dans les hypercholestrolmies -> intoxication aux digitaliques Kayexalte* (rsine changeuse de cation) (polystyrne sulfonate de Na) utilis pour les hyperkalimies -> intoxication au Lithium

Sulfate de Mg, sulfate de Na Gluconate de Ca, Chlorure de Ca Prcipite sous forme de sel insoluble Ferrocyanure ferrique (bleu de Prusse) Intoxication au thallium ou csium (lment radioactifs) : fixent sous forme de complexe les lments et les soustrait a l absorption

31 Thiosulfate de Na Mcanisme d oxydorduction : intoxication par teinture d iode ou hypochlorites (solution dilues d eau de javel car pas dilu caustique il ne faut rien faire) on donne 2 5g dans 100 ml. Iode -> Iodure

2. Action sur le toxique adsorb

Interaction directe avec le toxique : combinaison Stable, inactive Hydrosoluble Eliminable

2-1 Les chlateurs Molcules capables de fixer les molcules chimiques pour former des complexes avec les lments minraux et ainsi les inactiver, Dimercaprol : BAL* (British Anti Lewisite) : antidote de l arsenic et du mercure

Il fixe le mercure sur les groupe SH pour former un chlate et inactive le mercure. Solution huileuse pour IM (200 mg/ ampoule de 2ml) Calcium dtate de sodium (calcittracmate di sodique / EDTA calcique) Problme peut chlater d autre lment en particulier le Calcium. On l utilise donc comme sel de calcium, le plomb ayant une affinit plus importante que le calcium il est chlat. Ampoules injectables (500 mg/ ampoule 10 ml) Perfusion IV lente sol glucos ou sal isotonique 20 mg / kg /24h cures de 5j - 1 semaines d arrt

Pnicillamine (Trolovol*) Intoxication au plomb et au cuivre mais elle peut produire des accidents allergiques et sanguin. Actif per os (comprim)

Dfroxamine (Desferal*) Isol d un streptomyces qui produit la ferrioxamine laquelle on peut enlever le fer et il devient alors un excellent chlateur du fer mais aussi de l aluminium Ampoules injectables Voie IV/IM

32 Succimer (Succicaptal*) Acide dimercaptosuccinique (DMSA), chlateur du plomb, du mercure et arsenic Voie orale (glules 200 mg) Posologie 10mg/kg 2 3 fois par jour

2-2 Complexes de cobalt Complexent le cyanure Klocyanor* Cyanokit

2-3 Anticorps Immunothrapie antidigitalique (Digidot*, Digibind*) Fragment Fab utilis capable de fixer les digitaliques sous une forme stable et liminable Perfusion IV dans 250 ml de solution isotonique de NaCl

Immunothrapie antivenimeuse VIPERFAV* Fragments F(ab )2 Flacon de 4 ml diluer dans 100 ml de solution isotonique de NaCl en perfusion IV inject en 1 heure, 2me dose possible aprs 5 heures

3. Action sur les biotransformations

3-1 Rduction formation mtabolite toxique Ethanol Fompizole cf. mthanol thylne glycol empche la formation du mtabolite toxique 3-2 Activation du mcanisme de dtoxification Thiosulfate de sodium (cyanure) Actylcystine (paractamol) cf. ED

4. Activit sur le site action

4-1 Comptition Oxygne (cf. CO) Naloxone (cf. morphine) Flumaznil (cf. benzodiazpines) Iodure de potassium (intoxication par iode radioactif 131I) 4-2 Autres mcanismes

33 Pralidoxime (Contrathion*) Intoxication par organophosphors (gaz de guerre et produits de jardin) Inhibiteurs des cholinestrases Dplace l organophosphor de sa liaison avec le rcepteur de la cholinestrase

Actylcholinestrase Site cationique (+)

Site anionique (-) Actylcholine

Actylcholinestrase Site cationique (+) Organophosphors

Site anionique (-) Pralidoxime

Le pralidoxime engage une liaison avec l organophosphor qui ractive l enzyme et le complexe se dtache Ampoule injectable (200mg / flacon) Perfusion IV (IM, sous cutan)

Vitamine C & bleu de mthylne cf. mthmoglobinmies (mcanisme d oxydorduction)

5. Action sur les effets du toxique (en aval du site d action)

Soit corrige un tat de carence ou en opposant des effets diffrents que celui du toxique Calcium (gluconate ou chlorure) Intoxication aux fluorures et oxalates qui font prcipiter le calcium et provoquer une hypocalcmie Apport de calcium pour contre carrer Pyridoxine (Vit B6) Intoxication a isoniazide qui bloque la vit B6 qui bloque de nombreuses activits enzymatiques Apport de Vit B6 Phytomnadione (Vitamine K1) Intoxication aux raticides coumariniques (anticoagulants) qui empche la rgnration de la vitamine K1 dans l organisme Apport de Vit K1 par IV, IM ou voie orale Glucagon Intoxication par les bloquants qui bloquent l adnyl cyclases Glucagon restaure un taux AMPc en en synthtisant une autre adnyl cyclase

34 Atropine Ampoules de 1mg/ ml en IV lente Atropine peut se fixer sur rcepteur cholinergique et empche les effets de l actyl choline dans les intoxications aux organophosphors

III.
-

Traitement symptomatique
Traite les symptmes Est tabli d aprs l tat clinique et biologique Sans spcificit toxicologiques Rle trs important, primordial en urgence Patient o Asymptomatique o Symptomatique : ncessit traitement d urgence ?? fonction respiratoire, circulatoire et neurologique

Fonction respiratoire Librer les voies ariennes Canule de Gudel (empche la chute de la langue chez le sujet inconscient) Oxygne pur avec ventilation manuelle Si besoin intubation et ventilation mcanique

Fonction circulatoire (pouls, TA) Oxygne Collapsus : voie veineuse, remplissage vasculaire, mdicament Arrt cardiaque : massage cardiaque externe, intubation, ventilation

Fonction neurologique Etat de conscience (ex score de Glasgow) Traitement convulsion

Autre aspect du traitement symptomatique

35

Mthode d valuation de la toxicit

But : tude de toxicit : scurit o Information qualitatives o Information quantitatives Rglementation o Selon nature des produits o Mdicament : dossier toxicologique AMM Qualit des rsultats o Bonne pratiques de laboratoire BPL Harmonisation

I.

Mthode d tude
1. Toxicit par administration unique (toxicit aigue)
But : dterminer la DL50 ou la CL50 ( dose ltale 50 : quantit de substance (mg/kg) qui en administration provoque la mort de 50% des animaux concentration ltale 50 : gaz et vapeurs (mg/ml ou mg/m3) dure d exposition (4H en standard) nature des effets toxiques doses pour autres tudes

Mthodologie 2 espces de mammifres (rat, souris) Animaux par lots (5 10) Dose administre (dose de plus en plus forte sur chaque lot : but couvrir l ventail qui contient la dl50) 2 voies : IV + voie prvue chez l homme Observation animaux : 14 jours o Mortalit o Evolution pondrale, symptmes,

36

DL50 courbe la plus droite, pour une petite incertitude sur la mortalit, petite incertitude sur la dose (plus prcise que DL100) Commentaires Causes multiples de variation : mauvaise reproductibilit intra et inter-laboratoires Nombre d animaux lev Donnes de base (nature des effets, relation dose-effet) Comparaison entre substances Seul l ordre de grandeur de la toxicit est important

Mthodes rcentes Fixed dose procedure (FDP) : mthode de la dose prdtermine : dose qui provoque une toxicit aigue manifeste Acute toxic class method (ATC) : methode par classe de toxicit Up and down procedure (UDP) : ou methode de l ajustement des doses (6 ou 7 animaux pour obtenir la DL50)

2. Toxicit par administration ritre

But Mettre en vidence une toxicit conscutive une administration rpte Nature des effets, des organes cible Dlai, rversibilit qualitatif

Etablir une relation dose-effet Dose toxique / non toxique Aspect cumulatif Quantitatif

Mthodologie 2 espces mammifres dont 1 non rongeur Voie prvue chez l homme

37 3 niveaux doses (faible, moyen, fort) mais toujours suprieur a dose thrapeutique Dure o A court terme : toxicit subaige (2-4 semaines ou plus) o A long terme : toxicit chronique (3, 6, 12 mois) La dure d administration doit tre notifie !!

Pour les mdicaments la dure de l tude animale dpend de la dure d utilisation chez l homme et doit toujours y tre suprieure Observation effectues En cours d tude : prise alimentaire, volution pondrale, comportement, paramtre biochimique & hmatologiques, tat clinique, mortalit A la fin de l tude : examen anatomo-pathologique, rversibilit

3. Etudes de cancrogense
But Mettre en vidence effet cancrogne Induire des tumeurs Augmenter frquence ou rduire le dlai de latence

Mthodologie Nombre d animaux lev, 2 espces, 2 sexes Voie prvue chez l homme 3 niveaux de dose Dure : trs long terme (18 30 mois) -> trs long et trs couteux Trs long et trs couteux

Exig pour mdicament si Administration humaine de longue ure (> 6 mois) Analogie structurale avec cancrogne connu Manifestations suspectes dans les autres tudes

4. Etudes de gnotoxicit
But Dceler les substances mutagnes mais aussi la potentialit cancrogne en dmontrant l activit mutagne (= tude de cancrogense cout terme) Types de tests D apures le type de cellules ou d organismes tudis Tests in vitro : cultures de bactries, levures, cellules

38 Tests in vivo

D aprs le type d effets tudis Mutation gnique Mutation chromosomiques

Test de mutation gnique Mutation gnique : petite modification de l ADN o Substitution de base (ponctuelle) o Addition ou perte de base (dcalage) Apparition ou disparition d un caractre spcifique li a la mutation Sens direct Type sauvage (normaux) Mutation Sens rverse Type mutant

Ex : test d Ames (test in vitro de mutation reverse sur bactries) Salmonella typhimurium HisType mutant mutation reverse His+ Type sauvage

Le produit tester peut rgnrer le gne de l histidine et repousser sur des milieux ne contenant pas d histidine Rapide et peu couteux Tests de mutation chromosomiques Mutation chromosomique : suppression, addition ou rarrangement de chromosomes (effet clastogne) observation directe caractre spcifique

Ex test du micronoyau (in-vivo) : petit fragment externe au noyau ppal Ex analyse de mtaphases (in-vivo ou in-vitro) Batterie standard (mdicaments) 1 test de mutation gnique in vitro 1 test de mutation chromosome in vitro 1 test de mutation chromosome in vivo

39

5. Toxicit sur les fonctions de reproduction

But Action sur les fonctions de reproduction (6 stades) A : avant accouplement jusqu' conception B : conception implantation C : implantation fermeture du palais D : fermeture du palais fin gestation E : naissance au sevrage F sevrage maturit sexuelle

Type d tudes (mdicaments) Etudes fractionnes (segments) Fertilit et dveloppement embryonnaire prcoce [A-B] o 1espece de rongeur o Traitement avant accouplement o Poursuivi femelles jusqu' implantation Dveloppement embryo-f tal [C] o 2 espces : rongeur et non rongeur o De l implantation fermeture du palais Dveloppement pr et post-natal [C-D-E-(F)] o 1 espce de rongeur o De l implantation au sevrage

Etudes globales multi gnration 128 traitements en continu sur au moins 3 gnration

6. Autres tudes
Toxicocintique : rpartition des toxiques, Tolrance locale cutane, oculaire Sensibilisation Ecotoxicit

7. Mthodes alternatives
Rgle de 3 R (rduire, optimiser (en anglais), remplacer) pour diminuer les animaux

II.

Extrapolation l homme

Ncessit des tudes exprimentales de toxicit mais difficults d extrapolation l homme Facteurs limitants

40
o Diffrence de sensibilit entre les espces o Variation individuelles o Longvit o Condition d administration o Taille de l chantillon Extrapolation incertaine

Facteurs de scurit : 10 2000 (+) Typiquement 100 variabilit inter-espces et intra-espces Peut tre moduls selon diffrent facteurs

Exemple Produits susceptibles d tre ingrs toute la vie Etudes toxicologiques DES : Dose Sans Effet NOEL : No Observed Effect Level NOAEL ; No Observed Adverse Effet Level DJA Dose Journalire Admissible DJA = DSE / Facteur de scurit

Ex mdicament La premire dose administrer l homme pourra tre calcule selon l quation suivante 1ere dose = estimation dose humaine / facteur de scurit Le facteur de scurit, sauf justification contraire est >= 10 Bnfice/Risque Etude pidmiologiques lors de la mise sur le march du produit (pharmacovigilance) Rglement europen REACH (Registration, Evaluation, Authorization and Restriction of Chemicals) Adopt le 18 decembre 2006 Applicable au 1 juillet 2007

Coucou loulette je t aime :-*