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ESTANDARIZACION DE UNA TECNICA ANALITICA

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ESTANDARIZACION DE UNA TECNICA ANALITICA

Revisin N Elaborado por: Jefe laboratorio Revisado por: Encargado de Calidad Aprobado por: Director Tcnico

0 Elkin Bernal Macson Daz David Parra

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ESTANDARIZACION DOCUMENTACION Y MONTAJE DE LA METODOLOGIA Seleccin del mtodo: Determinacin de Nitrgeno Total para el almidn de yuca Protocolo del mtodo: NITRGENO TOTAL Tcnica usada (AOAC, 2000) El nitrgeno de las protenas y otros compuestos se transforman a sulfato de amonio por medio de la digestin con acido sulfrico en ebullicin. El residuo se enfra, se diluye con agua y se le agrega hidrxido de sodio. El amonio presente se desprende, se destila y se recibe en una solucin de acido brico que luego es titulada con acido clorhdrico estandarizado. Preparacin de la muestra Cada cinco costales de 25 kg tomar muestras al azar, mezclar bien, moler la muestra hasta obtener un polvo muy fino, cuartear y tomar 20 g de almidn. Materiales y equipos Molino Balanza analtica con una precisin de 0,001 g Aparato de digestin y destilacin micro-Kjeldahl Tubos Kjeldahl Frascos Erlenmeyer de 250 mL Buretas Baln volumtrico de 100 y1 000 mL Pipetas de 2 mL Agua destilada Etanol al 95 por ciento (v/v) Rojo de metilo Verde de bromocresol Sulfato de cobre Sulfato de potasio Acido brico 4 %
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Acido clorhdrico (36%) Acido sulfrico concentrado (93-98%) Hidrxido de sodio 1 N Hidrxido de sodio 40 por ciento (libre de nitrgeno)

Solucin indicadora
0,1 por ciento rojo de metilo y 0,2 por ciento verde de bromocresol en alcohol al 95%,

Solucin estandarizada de cido clorhdrico 0,02N


Tomar 1,6 mL de acido clorhdrico en un baln volumtrico de 1 L y titular con una solucin de hidrxido de sodio 1 N, tener en cuenta la nueva normalidad.

Mezcla catalizadora
Mezclar 7 por ciento de sulfato de cobre y sulfato de potasio. Anlisis Pesar por duplicado 0,1 g de almidn en polvo en los tubos Kjeldahl. Agregar 2 g de la mezcla catalizador y 4 mL de acido sulfrico concentrado. Calentar los tubos en el equipo Kjeldahl durante 30-45 minutos. Agregar 50 mL de agua destilada a los tubos antes de que se solidifique el residuo digerido. Recibir el destilado en frascos Erlenmeyer de 250 mL que contengan 100 mL dela solucin de acido brico 4 por ciento. Agregar con cuidado 25 mL de hidrxido de sodio 40 por ciento (p/v) a cada tubo. Destilar 2/3 partes del contenido del tubo o hasta que se hayan recogido 100 mL del destilado. Titular el amonio recogido con acido clorhdrico estandarizado, hasta obtener un color morado o que desaparezca del todo el color. Analizar simultneamente con las muestras dos blancos. Clculos e interpretacin de los resultados
Nitrogenototal % = (mLacidogastadoenmuestra mL acidogastadoenblanco) x1.4 NHCL Pesomuestra ( g )

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NHCl = Normalidad del acido clorhdrico Protena cruda (%) = nitrgeno total (%) 6.25 Valores altos en el contenido de nitrgeno total, indican un proceso de extraccin de almidn no eficiente y puede afectar en la funcionalidad del producto final. Valores de referencia El contenido de nitrgeno total en el almidn no debe exceder de 0,064 por ciento.

FUNDAMENTO FISICO Y QUIMICO Se caracteriza por el uso de ebullicin, cido sulfrico concentrado que efecta la destruccin oxidativa de la materia orgnica de la muestra y la reduccin del nitrgeno orgnico a amonaco el amonio es retenido como bisulfato de amonio y puede ser determinado in situ o por destilacin alcalina y titulacin. DIGESTIN El sulfato de amonio no voltil se forma de la reaccin del nitrgeno y el cido sulfrico. Durante la digestin se libera el nitrgeno proteico para formar iones de amonio. El cido sulfrico oxida la materia orgnica y se combina con el amonio formado.
LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRGENO SE CONVIERTEN EN DIXIDO DE CARBONO Y AGUA

NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
La muestra digerida se diluye con agua. Se aade el lcali que contiene tiosulfato de sodio para neutralizar al cido sulfrico.

El amonaco formado se destila en una solucin de cido brico que contiene los indicadores azul de metileno y rojo de metilo
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Dificultades qumicas y prcticas Digestin prolongada. Conversin cuantitativa de nitrgeno a amonaco. Espumosidad excesiva. Accin corrosiva de cido sulfrico sobre el sistema de extraccin de humos. Consideraciones ambientales respecto a descarga de humos y contaminacin de aguas con catalizadores metlicos Mide el nitrgeno orgnico total, no slo el nitrgeno protico Consume mucho tiempo (al menos 2 horas para completarse) Precisin ms pobre que el mtodo de biuret Usa reactivos corrosivos

FUNCIONAMIENTO DEL EQUIPO 1. Observe las condiciones de cmo encuentra el equipo de medicin y aprecie sus diferentes componentes (resistencias, agua de refrigeracin, encendido, botones de control , trampas para destilacin, campana extractora, tacos arriba (parte izquierda e inferior) y ductos para gases) 2. Monte su baln de digestin con la muestra (0,20 a 0,50 g) sobre una de las seis (6) resistencias de trabajo ubicadas en la parte inferior. Tenga los cuidados y recomendaciones de manejo del acido sulfrico, cantidad del catalizador y las condiciones anhidras del recipiente. 3. Prenda en interruptor ubicado en la parte derecha e inferior a On, es el ventilador. 4. Coloque el sistema de refrigeracin abriendo la vlvula roja del agua (tubera verde) y colocando la manguera en el desage indicado sobre el mesn. 5. Encienda la campana extractora. Controles a la izquierda. 6. Encienda la resistencia de la parte inferior en bajo (control 2 o 3) e inmediatamente el piloto queda encendido. 7. Caliente suavemente la muestra y paulatinamente se va incrementado el calor hasta llegar a alto o HI. 8. Continu el calentamiento y realice peridicamente movimientos de rotacin del baln mientras se efecta la digestin.(utilice guantes de asbesto) 9. Se termina la digestin despus de 1- 2 horas cuando se aprecia que la solucin quede translucida y homognea (color verdoso, azuloso o amarillo) 10. Despus de disminuye el calentamiento, se apagan las resistencias y se continua con la siguiente fase del proceso que es la destilacin por arrastre de vapor igualmente teniendo
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los cuidados y recomendaciones dadas por su instructor. Si continua en la fase semi automtica de destilacin en el Buchi realice el paso 17 y continu. 11. Si desea continuar en el proceso manual siga al paso 12. 12. Dejar enfriar el producto de la digestin y se diluye cuidadosamente con agua destilada (200 ml). 13. A continuacin se agrega soda custica (50 ml) al 40 % y unas perlas de vidrio para regular la ebullicin. 14. Acondicione 50,0 ml de muestra en un baln de digestin en la resistencia superior con la trampa respectiva y caliente suavemente la muestra recogiendo el destilado sobre 50,0 ml de una solucin de acido brico al 4-5% que se encuentran en un Erlenmeyer con indicador tashiro. 15. Recoja cerca de 100 -120 ml de destilado hasta cuando el indicador vire de morado a verde. 16. Desconectar el sistema (refrigerante) y lavar con agua recogiendo estos lavados en el Erlenmeyer. Tenga cuidado de que no se reabsorba el destilado. 17. Se continua con la tercera fase que es la titulacin con HCl 0,1 N 18. Apagar el equipo (off), cerrar la vlvula del agua y apagar la campana extractora. 19. Dejar bien limpio y registrar sus datos en la hoja de control del equipo. NOTAS - Se puede realizar la digestin en la campana extractora utilizando el mismo montaje cuando no hay resistencias o electricidad; se cambia por gas y se realiza el mismo proceso. - Se recomienda como mezcla catalizadora la siguiente: Sulfato de sodio o de potasio anhidro 97,53 %, Sulfato cprico pentahidratado 2,03%, Selenio en polvo 0,44 %. Se homogenizan los componentes en un mortero y se utiliza mas o menos una relacin de 2,5- 3,0 g de mezcla catalizadora por cada 20,0 ml de H2SO4 que se usen. Esta mezcla tiene la ventaja de elevar el punto de ebullicin del acido sulfrico debido a la presencia del sulfato de sodio. - En esta primera operacin el nitrgeno se mineraliza transformndose en sulfato acido de amonio. - Se debe aadir pequeas cantidades de parafina slida cuando las muestras son de alta concentracin de protena ya que producen bastante espuma.
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REACTIVOS ELABORACION DE REACTIVOS 1.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores verde de bromocresol al 0.1% y el rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al 95%. Mezcle 10 ml. de verde de bromocresol con 2 ml. de la solucin de rojo de metilo en un frasco gotero. 2.- cido Brico al 2%.- Disuelva 10 g de cido brico (en cristales) en 500 ml. de agua destilada hirviendo. Despus de que se enfre transfiera la solucin a un frasco tapado. Se conserva indefinidamente. 3.- cido Clorhdrico 0.01N.- Prepare un litro y valrela con una solucin de NaOH de la misma normalidad. 4.- Hidrxido de Sodio al 30%.- Disuelva 150g de perlas de hidrxido de sodio en 350 ml. de agua destilada. Almacene la solucin en un frasco mbar con tapn de vidrio. 5.- H2SO4 concentrado. 6.- Catalizadores para la Digestin.- Mezcle 2.5g de dixido de selenio (SeO2), 100g de sulfato de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4 . 5H2O). RECUPERACIN DEL AMONACO Una posible fuente de variacin en este mtodo es la prdida del gas amonaco o una falla en atrapar el amonaco en el cido brico. Esto puede ocurrir en diferentes pasos del proceso. Una tcnica para buscar la recuperacin del amonaco consiste en destilar cantidades conocidas de amonaco lquido y titularlo con HCl. Se obtendr otra vez el color prpura en el cido brico. Mientras se digieren las muestras, se puede destilar una solucin de sulfato de amonio. Aada 5, 10 15 ml (mediante una pipeta) de solucin de sulfato de amonio a la cmara de ebullicin de la unidad destiladora. Enjuguela despus con agua destilada y, si es posible, desionizada. Coloque inmediatamente la punta de la unidad destiladora en 10 ml de cido brico + indicador. Colecte aproximadamente 20 ml. de destilado.
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Titule la muestra con el HCl estandarizado, registre los ml. de HCl empleados y calcule el peso del nitrgeno en el (NH4)2SO4. BIBLIOGRAFA A.O.A.C. 2000. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis. Washington, D.C. Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212. Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi. Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2. Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.

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