Tipos y estructura de las ATPasas

2.1. Tipos de ATPasas

Las ATPasas cumplen diferentes funciones dependiendo de la clula a la que pertenezcan, pero esta funcin est determinada por la estrcutura de la ATPasa y sus componentes. Existen ATPasas que transportan protones y otras que transportan iones, siempre con consumo de ATP, pero se pueden dividir en tres grandes grupos:

F-ATPasas V-ATPasas P-ATPAsas

1) F-ATPasas Son enzimas muy complejas con ms de ocho subunidades distintas, que estn encargadas de catalizar el paso reversible transmembrana de protones (exclusivamente), impulsado por la hidrlisis de ATP. Esta ATPasa juega un papel importante dentro de los cloroplastos y las mitocondrias, ya que el flujo de protones a favor del gradiente es acompaado por la sntesis de ATP. En este papel, la ATPasa tipo F se denomina de manera ms correcta comomATPsintetasa. Este tipo de ATPasa no forma un intermediario fosforilado durante la hidrlisis del ATP, por lo cual no pueden ser inhibidas por el vanadato. 2) V-ATPasa Es responsable de la acidificacin de compartimientos en muchos organismos, lo que permite el correcto funcionamiento de proteasa y otras enzimas hidrolticas. Por ejemplo, dentro de las vacuolas de las plantas superiores y los hongos el pH se mantiene muy por debajo del del citoplasma circundante por accin de esta ATPasa (cuya denominacin proviene de "vacuola"). Son tambin responsables de la acidificacin de lisosomas, endosomas, complejo de Golgi y vesculas secretoras en clulas animales. No experimentan fosforilacin ni desfosforilacin, por locual tampoco son inhibidas por el vanadato. An no se conoce le mecanismo por el cual acoplan la hidrlisis del ATP al transporte de protones. 3) P-ATPasas La denominacin de esta ATPasa se debe a que forma un intermediario fosforilado al obtener energa del ATP. Todas las ATPasas de tipo P comparten homologa en la secuencia de aminocidos y todas son sensibles a la inhibicin pr el vanadato, que es similar al fosfato y toma su lugar en una de las fases del funcionamineto de la enzima. Este tipo es muy importante por su amplia distribucin y son protenas integrales. Por ejemplo, en las plantas hay una P-ATPasa que bombea protones al exterior de la clula, estableciendo una diferenciad e hasta 2 unidades de pH y 250 mV a travs de la membrana plasmtica, consumiendo un ATP por cada protn transportado. Un ejemplo en clulas animales es la P-ATPasa responsable en el bombeo de protones en la

neurospora y del bombeo de iones H+ y K+ a travs de la membrana plasmtica de clulas que recubren el estmago de los maferos, acidificando su contenido. Aqu se presenta un cuadro con todos los tipos de ATPasas y sus respectivas funciones Ion(es) transportados Organismo Tipo de membrana P-ATPasas
Na+K+ Eucariotas superiores Plasmtica Mantiene baja [Na+] y alta [K+] en el interior de la clula. Crea potencial transmembrana Acidifica el contenido del estmago Eliminan protones hacia la matriz extracelular, aumentando el pH del interior Mantiene baja [Ca2+] en el citosol

Papel de la ATPasa

H+K+ H+ H+ Ca2+ Ca2+

Clulas secretoras de cido en mamferos Hongos (Neurospora) Plantas superiores Eucariotas superiores Clulas musculares en animales

Plasmtica Plasmtica Plasmtica Plasmtica

Retculo sarcoplasmtico Secuestra el Ca2+ intracelular manteniendo baja la [Ca2+]

V-ATPasas
H+ Animales Vesculas secretoras lisosmicas y endosmicas Vacuolar Vacuolar Crea un bajo pH en el compartimiento activando proteasas y otras enzimas hidrolticas.

H+ H+

Plantas superiores Hongos

F-ATPasas
H+ H+ H+ Eucariotas Plantas superiores Procariotas Mitocondrial interna Tilacoides Pasmtica Cataliza la formacin de ATP a partir de ADP + Pi

Dada la importancia de la P-ATPasa, la siguiente seccin sobre la estructura de las ATPasas se centrar principalmente en esta enzima.

2.2. Estructura de las ATPasas

Las ATPasas son enzimas muy complejas, conformadas por cadenas de aminocidos muy largas, que pueden ir desde los 600 a los 1200 aminocidos. Estas cadenas de

aminocidos se pliegan para formar la estrcutura tridimensional de la ATPasa, la cual va insertada en la membrana plasmtica a manera de protena integral. Pero el estudio de enzimas de mebrana es muy complicado, dad la dificultad para obtener muestras puras de estas protenas. Por ejemplo, se ha conseguido resolver la estructura de dos protenas de membrana bacterianas (bacteriorrodopsina y centro de reaccin de la fotosntesis), pero no se conoce la estructura atmica de ninguna ATPasa. Para lograr encontra la estructura de las ATPasas, se estn utilizando tcnicas de difraccin de rayos X en cristales tridimensionales de protenas de membrana solubilizadas y la difraccin de electrones en cristales bidimensionales en membranas con alta concentracin de protena. Ests tcnicas proveeran en un futuro cercano la informacin estructural de las distintas conformaciones de las ATPasas. Para esto es necesario al estabilizacin de las ATPasas con ligandos especficos como el vanadato y el Ca2+. Actualmente la nica informacin directa que se posee sobre la estructura de las ATPasas es la secuencia de la cadena de aminocidos que las conforman, deducida de las secuencias de los genescorrespondientes a dichas protenas.

Imagen de una ATPasa obtenida por difraccin de rayos X

Pasaremos ahora a explicar la estructuar conocida de una P-ATPasa, la cual puede contener entre 920 a 950 aminocidos. Esta cadena en su estado #in vivo" se pliega, dando como resultado una conformacin muy compleja. Dentro de las secuencia de aminocidos, se encuentran regiones hidrofbicas, que por ende se ubican en la parte interior de la membrana, junto a las colas hidrofbicas de los fosfolpidos. Estas regiones estn compuestas por unos 17 a 24 residuos, que atraviesan la membrana en forma de -hlice, que corresponde a una estrcutura protenica secundaria. Se postula que de estas regiones, 6 a 12 interactan directamente con la membrana.

Con respectoal plegamiento de la cadena de aminocidos, se acepta que los extremos aminoterminales y carboxiterminales se encuentran en la parte intracelular, por lo cual las regiones transmembranosas dberan ser de nmero par. Existen entonces 4 dominios principales en la ATPasa, el dominio transmembranoso, ya explicado y los dominios kinasa, fosfatasa e inhibidor, que serpan tocados a continuacin. Los dominios kinasa y fosfatasa son los responsables de la obtencin de energa del ATP, cumpliendo funciones complementarias para el ciclo. El dominio kinasa se cree que es responsable de catalizar la formacin del intermediario fosforilado, arrancando el ltimo fosfato (gamma-fosfato) al ATP. La ATPasa entonces se fosforila y el papel del domini fosfatasa es hidrolizar este intermediario para obtener la energa necesaria para empujar a un protn en contra de la gradiente electroqumica. El dominio inhibidor es el extreo carboxiterminal de la ATPasa, que segn su posicin permite o impide la activacin de la enzima. Cuando la enzima estpa activa, este autoinhibidor se desplaza impidiendo que un nuevo ATP sea usado para formar el intermedio fosforilado, hasta que se cumpla el ciclo. A continuacin se muestra una imagen esquemtica de la P-ATPasa con sus dominios:

</FONT

Transporte mediado por protenas

El agua y otras molculas hidroflicas excluyen a los lpidos y a otras molculas hidrofbicas . Las molculas hidrofbicas excluyen a las hidroflicas. Este comportamiento de las molculas, determinado por la presencia o ausencia de regiones polares o cargadas, es de importancia fundamental en la capacidad de las membranas celulares para regular el pasaje de materiales hacia dentro y hacia fuera de las clulas y de las organelas. Las membranas celulares estn formadas por una bicapa lipdica, en cuyo interior confluyen las colas hidrofbicas de las molculas de lpidos. Este mar lipdico interior es una barrera formidable para los iones y la mayora de las molculas hidroflicas, pero permite el pasaje fcil de molculas hidrofbicas, tales como las hormonas esteroides . As, la composicin fisicoqumica de la membrana celular es la que determina qu molculas pueden atravesarla libremente y qu molculas no. Las molculas no polares pequeas atraviesan libremente una bicapa lipdica. Las molculas polares relativamente grandes sin carga, o los pequeos iones (con carga) no pueden atravesar el interior hidrofbico. El agua y otras molculas polares pequeas y sin carga difunden a travs de la bicapa. La mayora de las molculas orgnicas de importancia biolgica tienen grupos funcionales polares y, por lo tanto, son hidroflicas; a diferencia del dixido de carbono, el oxgeno y el agua, ellas no

pueden atravesar libremente la barrera lipdica por difusin simple. De modo similar, los iones que son de importancia crucial en la vida de la clula no pueden difundir a travs de la membrana. Aunque los iones individuales, como el sodio (Na+) y el cloruro (Cl-), son bastante pequeos, en solucin acuosa se encuentran rodeados por molculas de agua y, tanto el tamao como las cargas de los agregados resultantes impiden que los iones se deslicen a travs de las aberturas momentneas que s permiten el pasaje de las molculas de agua. El transporte de estos agregados y de todas las molculas hidroflicas, excepto las muy pequeas, depende de protenas integrales de membrana que actan como transportadores, transfiriendo a las molculas hacia uno y otro lado de la membrana sin que entren en contacto con su interior hidrofbico.

Permeabilidad de una bicapa lipdica.

Se pueden distinguir dos tipos principales de protenas de transporte: las llamadas protenas transportadoras o "carrier" y las protenas

formadoras de canales (canales inicos). Las protenas "carrier" que se encuentran en la membrana plasmtica o en la membrana que rodea a las organelas son altamente selectivas. Lo que determina qu molculas puede transportar es la configuracin de la protena, o sea, su estructura terciaria o, en algunos casos, cuaternaria. Aunque en el curso del proceso del transporte la protena sufre tpicamente cambios en la configuracin, esa alteracin no es permanente. Las protenas "carrier" son muy similares a las enzimas , que son tambin altamente selectivas en cuanto a las molculas con las que interactan y no se alteran permanentemente por esas interacciones. El modelo actual del mecanismo de transporte llevado a cabo por protenas carrier sugiere que la protena transportadora se une especficamente a la molcula a transportar y sufre cambios temporales en su configuracin provocados, en general, por la unin misma del soluto. Son estos cambios conformacionales los que permiten la transferencia del soluto a travs de la membrana. La dilisis es un proceso por medio del cual se produce un filtrado artificial de la sangre. En ste, se retiran los elementos txicos del torrente sanguneo cuando los riones han perdido su capacidad. Este sistema suele utilizarse en pacientes que padecen de insuficiencia renal, pero tambin sirve para remover de manera ms rpida las drogas o sustancias txicas en situaciones agudas. Cuando una persona ha perdido el 90 por ciento de la funcin renal, se le considera un enfermo de insuficiencia renal crnica. Para este caso existen dos tipos de dilisis: la hemodilisis y la dilisis peritoneal. La dilisis peritoneal elimina las toxinas del organismo por medio de una membrana que recubre los rganos de la cavidad abdominal llamada peritoneo. En este tipo, se le infunden soluciones especiales que contribuyen con la eliminacin de las toxinas, se mantienen ah por un lapso de tiempo y luego son drenadas. Este tipo de dilisis puede hacerse desde la casa, pero debe realizarse todos los das. En la hemodilisis, la sangre pasa a travs de un aparato que realiza el filtrado. La mayora de los pacientes se someten a hemodilisis durante 3 sesiones cada semana y cada sesin dura de 3 a 4 horas. En cuanto a su efectividad, ambos sistemas son iguales, sin embargo los pacientes tienden a preferir este ltimo. Antes de realizar una dilisis es fundamental controlar: la presin sangunea, la temperatura, la frecuencia cardaca, la frecuencia respiratoria, el peso, hacer una evaluacin del trax y un examen del acceso venoso. Es importante tener en consideracin que el proceso es bastante largo y tedioso. En el caso de los nios es especialmente necesario disponer de juegos o elementos que los distraigan como libros o programas de televisin.

Los riesgos inmediatos que implica la dilisis son: hipotensin, infecciones, desequilibrio de electrolitos, sangrado en el sitio del acceso, nuseas y vmitos, calambres, reaccin al dializador, embolia gaseosa, e isquemia o arritmia cardaca (se refiere a los latidos cardacos irregulares)

6. Osmosis y presin osmtica

Se define smosis como una difusin pasiva, caracterizada por el paso del agua, disolvente, a travs de la membrana semipermeable, desde la solucin ms diluida a la ms concentrada.

Y entendemos por presin osmtica, a aquella que seria necesaria para detener el flujo de agua a travs de la membrana semipermeable. Al considerar como semipermeable a la membrana plasmtica, las clulas de los organismos pluricelulares deben permanecer en equilibrio osmtico con los lquidos tisulares que los baan.

Si los lquidos extracelulares aumentan su concentracin de solutos, se hara hipertnica respecto a las clulas, como consecuencia se originan prdida de agua y deshidratacin (plasmlisis) De igual forma, si los lquidos extracelulares se diluyen, se hacen hipotnicos respecto a las clulas. El agua tiende a pasar al protoplasma y las clulas se hinchan y se vuelven turgentes, pudiendo estallar (en el caso de clulas vegetales la pared de celulosa lo impedira), por un proceso de turgescencia.

En el caso de los eritrocitos sanguneos la plasmlisis se denomina crenacin y la turgescencia el de hemlisis.

Lquido "del" mosaico flido " de la diseccin " = movimiento soluble, constantemente que cambia. " mosaico " = integrado por una pltora de diversas macromolculas (protenas, phospholipids, y grasas del IE). Caractersticas Importantes
1. selectivamente permeable

Si fuera totalmente permeable, los productos hechos en la clula no podran ser salvados en la clula, porque no podra mantener un especfico interno ambiente. Las grasas no saturadas permiten ms fluidez porque los cidos grasos siguen separados y no enredados con los de otros phospholipids (que acerca los phospholipids uno a uno). 1. criterios para la seleccin

1. solubilidad 2. talla 3. carga (compatibilidad o atraccin entre la membrana y la molcula o el ion) 2. cargado 1. las membranas tienen siempre una carga y la carga cambia siempre

Este modelo bsico fue desarrollado para substituir el Davson-Danielli modelo del emparedado. Problemas con el modelo del emparedado incluido 1. la generalizacin que todas las membranas de una clula eran iguales. Fue desafiada (las membranas son diferentes en estructura y la funcin: las membranas de los mitochondria son 1-2 nanmetros -- nm -- de ms pequeo que la membrana del plasma) 2. las protenas de la membrana SON amphipathic. Si las protenas fueran acodadas en la superficie de la membrana (por lo tanto el " modelo conocido del emparedado"), las piezas hidrofbicas seran expuestas a HOH y las partes hidroflicas de los phospholipids no estaran en contacto con HOH.

DD=Davson-Danielli Qu afecta la " fluidez " de la membrana? (ms Caractersticas) 1. La membrana es ligada por la interaccin hidrofbica (los cidos grasos y las piezas de la protena) que es mucho ms dbil que la vinculacin covalente. 2. Los lpidos mandilan lateralmente y el mover de un tirn-tirarse (aunque ocurre) es raro porque los ' encadenamientos phobic del cido graso tocaran HOH (y ellos resiste esto). l movimientos lateralmente en 2 micrmetros por segundo. Algunas protenas de la membrana mandile tambin, pero se aseguran ms en la membrana. 3. la membrana sigue siendo flida mientras que la temperatura baja hasta que (@ una temperatura crtica) solidifica. Si no solidifica en esta temperatura, entonces es rica en los phospholipids no saturados (razn: el unsat no pila de discos tan

cerca junto como lo hacen los encadenamientos sentados o rectos del hidrocarburo). 4. El Cholestoral Esteroide 1. ayudas estabilice la fluidez. 2. en la temperatura del cuerpo, refrena los movimientos de phospholipids porque obstaculiza el embalaje cercano junto por su presencia; 3. por lo tanto, levanta la tolerancia de las membranas de temperaturas ms fras. 5. Si solidifica, las protenas llegan a ser inactivas. 6. Una clula PUEDE alterar la composicin de lpido (sentada al unsat y viceversa). ejemplo: trigo de invierno 1. es protenas el consistir en de una pelcula lquida disueltas en un bilayer del lpido. 2. es alrededor tan flido como el aceite de la ensalada. Qu constituye " mozaic"-ness? 1. muchas diversas protenas en el bilayer las protenas determinan funciones especficas 2. Tipos de protenas 1. integral puede estar el trans-membrane o apenas hasta cierto punto 2. perifrico no embutido en la membrana asociado a la superficie de la membrana; a veces a las protenas integrales

" las caras interiores y exteriores " de membranas 1. diversas piezas de membranas tienen composicin de lpido que diferencia 2. Tambin dependiendo de esta composicin y de la protena s mismo, la protena tiene una orientacin direccional. 3. los carbos se restringen al exterior de la membrana 4. se determina esta distribucin asimtrica mientras que es la membrana sintetiza por ER