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PRACTICA N 4

PERFIL LIPDICO MINIMO

1. COLESTEROL

FUNDAMENTO DEL METODO Tanto el colesterol libre como el esterificado presente en la muestra originan, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.

Colesterol esterasa Colesterol esterificado Colesterol + Acido Graso

Colesterol + O2

Colesterol oxidasa

Colestenona + H2O2

Peroxidasa 2 H2O2 + 4 aminoantipirina + Fenol Quinonaimina + 4 H2O

REACTIVOS.: a.- Reactivo de trabajo constituido por: Colato sdico, Fenol, Colesterol esterasa, Colesterol oxidasa, Peroxidasa y 4-aminoantipirina b.- Patrn de colesterol: colesterol 200 mg/dL

MUESTRAS: Suero plasma, estable 7 das a 28C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.

MATERIAL ADICIONAL. Bao de agua a 37C. Espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 500 nm.

PROCEDIMIENTO Dejar atemperar el reactivo de trabajo durante unos minutos a temperatura ambiente o bao de agua. Pipetear en tubos de ensayo lo siguiente.

SUERO MUESTRA PATRON DE COLESTEROL REACTIVO DE TRABAJO

MUESTRA 0.02 2.0 cc

PATRON 0.02 2.0 cc

BLANCO 2.0 cc

Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente o durante 5 minutos a 37C. Leer la absorbancia del patrn y de la muestra frente al blanco a 500 nm. El color es estable al menos durante 2 horas.

CLCULOS Absorbancia de la muestra Niveles de colesterol = Concentracin del patrn Absorbancia del patrn Concentracin del patrn =200 mg/dL

VALORES NORMALES O DE REFERENCIA.: Niveles de colesterol normales < 200 mg/dL (Menor de 200 mg/dL) Niveles de colesterol dudoso estn entre 200 300 mg/dL

2. COLESTEROL HDL

FUNDAMENTO DEL METODO: Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) se separan de los quilomicrones, de las protenas de muy baja densidad (VLDL) y de las protenas de baja densidad ( LDL) por la adicin de un reactivo de precipitacin (cido Fosfotungstico cloruro de magnesio) al suero o plasma. Despus de centrifugar, se determina el contenido de colesterol en la fraccin HDL que permanece en el sobrenadante, por el mtodo colorimtrico enzimtico utilizado colesterol esterasa, colesterol oxidasa, peroxidasa y un sistema cromgeno.

REACTIVOS: Reactivo de precipitacin: constituido por cido Fosfotungstico y Cloruro de Magnesio. Patrn de HDL: Colesterol 50 mg/dL Reactivo de trabajo: El mismo utilizado para la determinacin de colesterol total.

MUESTRA: Suero o plasma.

PROCEDIMIENTO: Para la precipitacin pipeteamos en un tubo de centrfuga 0.50 mL de muestra y 0.50 mL de reactivo de precipitacin, mezclamos bien y centrifugamos entre 3500-4000 rpm durante 10 minutos aproximadamente. Asegurarse de que el sobrenadante que se obtiene sea claro. Luego adicionamos en tres tubos de ensayo: MUESTRA PATRON BLANCO 0.10 mL 0.10 mL 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL

SOBRENADANTE PATRON HDL REACTIVO DE TRABAJO

Mezclar e incubar a 37C durante 5 minutos o dejar en reposo a temperatura ambiente durante 30 minutos por lo menos. Leer la absorbancia de la muestra y la del patrn contra el blanco a 510 nm ( 500-530 nm).

CALCULOS:

Absorbancia de la muestra Niveles de colesterol HDL = CP fd Absorbancia del patrn

CP: Concentracin del patrn = 50 mg de colesterol HDL/dL fd: Factor de dilucin

Volumen final fd (factor de dilucin) = Volumen inicial

1 mL fd (factor de dilucin) = = 2 0.5 mL

INTERPRETACIN CLNICA: Estudios epidemiolgicos indican que valores bajos de colesterol-HDL, de forma indicativa < 35 mg/dL para los hombres y < 45 mg/dL para las mujeres, estn asociados con un riesgo ms alto de enfermedades del corazn de tipo coronario. Valores superiores a 55 mg/dL para hombres y 65 mg/dL para mujeres estn asociados con un riesgo menor que el del promedio.

3. TRIGLICERIDOS

METODO: Los triglicridos son determinados despus de una hidrlisis enzimtica con lipasa El indicador es la quinoneimina, formado por la reaccin del peroxido de hidrgeno, 4aminoantispirina, y 4aminofenol bajo la influencia cataltica de la peroxidasa.

PRINCIPIO DEL METODO:

Lipasa Triglicridos Glicerol + cidos grasos.

Glucoquinasa Glicerol + ATP Glicerol 3 Fosfato + ADP.

Glicerol 3-Fosfato oxidasa Glicerol -3-Fosfato + O2 Dihidroxiacetona Fosfato + H2O2 Peroxidasa H2O2 + 4Aminoantispirina + 4Clorofenol Quinoneimina + HCl + H2O

REACTIVOS: Reactivo de trabajo: Buffer de fosfato pH 7.5, 4Clorofenol, Lipasa, peroxidasa Glicerol quinasa, 4 aminoantipirina, Glicerol3 Fosfato oxidasa. Concentracin del patrn de Triglicridos: 200 mg Triglicridos/dL

MUESTRA: Suero sanguneo o plasma con heparina o EDTA.

PROCEDIMIENTO: Pipetear en 3 tubos de ensayo, marcados como muestra, patrn y blanco lo siguiente:

SUERO O PLASMA PATRON DE TRIGLICRIDOS. REACTIVO DE TRABAJO

MUESTRA PATRON 0.01cc -0.01cc 1.0cc 1.0cc

BLANCO --1.0cc

Mezclar e incubar durante 5 minutos a 37C o a temperatura ambiente durante 10 minutos leer la muestra y el patrn contra el blanco a 546 nm antes de 60 minutos.

CALCULOS:

Absorbancia de la muestra Niveles de triglicridos = Concentracin del patrn Absorbancia del patrn

Concentracin del patrn = 200 mg de triglicridos/dL

VALORES NORMALES O DE REFERENCIA:

Niveles de triglicridos normales: 150 200 mg/dL

PREGUNTAS SOBRE PERFIL LIPIDICO 1. Que es colesterol y donde se encuentra? 2. Que es una lipoprotena cuales son Como se clasifican? 3. Cual es la relacin entre tamao y densidad? 4. Donde se sintetizan 5. Cual es el porcentaje de colesterol HDL lo mismo que de los triglicridos. 6. Cual es el porcentaje de colesterol y triglicridos en las LDL. 7. Cual es el porcentaje de colesterol y triglicridos en las VLDL 8. Cual es el porcentaje de colesterol y triglicridos en las HDL. 9. Que es la lipoprotena (a) 10. Propiedades de la lipoprotena (a) 11. Conoce usted algn otro mtodo para determinar colesterol, mencinelo. 12. Establezca diferencias o ventajas entre un mtodo enzimtico y uno qumico en la determinacin de colesterol. 13. Que es un perfil lipdico mnimo (PLM) 14. Valores normales de colesterol en sangre. 15. Valores normales de triglicridos en sangre 16. Valores normales de HDL en sangre 17. Que es el ndice arterial o el ndice de riesgo de E:C. 18. Que es la enfermedad coronaria ( algo breve y conciso) 19. Repercusiones de un colesterol elevado en sangre. 20. Catabolismo de cada una de las lipoprotenas 21. Que es la Apoprotena A y B. 22. Que relacin hay entre el ejercicio y los niveles de colesterol 23. Qu es dislipidemia? 24. Relacin entre el cido ascrbico y los niveles de colesterol 25. Que le recomendara usted a un individuo con niveles elevados de colesterol? 26. Que es hipolipemiante?

HOJA DE REPORTE

Titulo de la Prctica. ____________________________________________

Nombre de los alumnos

Muestra Colesterol Colesterol-HDL Trigliceridos

Absorbancia muestra

Absorbancia del patrn

Concentracin del patrn

Niveles encontrados

OBSERVACIONES. ________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________

CONCLUSIONES. ______________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________

FECHA.___________________

VoBo DOCENTE.________________________