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Ciclo del Acido Cítrico

Ciclo de “Krebs”

Principales reacciones constituyentes


Puntos de regulación
El ciclo de Krebs (CK) como vía común a varias
vías metabólicas

Roma-2007
Bibliografía

McKee, J. y J. McKee. 2003. Cap. 9.

Voet, D., J. Voet y Pratt, C. 2006. Cap 16.

Champe et al, 2005. Cap 9. Tricarboxylic Acid Cyle

Harper, 2004. Cap. 16. Ciclo del ácido cítrico y catabolismo


de Ac-CoA

Ligas de interés recomendadas a lo largo de la presentación

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Glucólisis y CAC

Al centro de los procesos


metabólicos celulares.

En estas rutas se completan


procesos catabólicos que
representan:
- la fuente de energía para
procesos anabólicos
- La fuente de compuestos de
carbono para otros procesos de
biosíntesis

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Ciclo de Krebs

Hans Adolf Krebs. Premio Nóbel de Fisiología y


Medicina en 1953. Sheffield Univ. UK. Por
haber descrito el ciclo del ácido cítrico. Nació en
Alemania en 1900 y se nacionalizó en UK

Fritz Albert Lipmann. Premio Nóbel de Fisiología y


Medicina en 1953. Harvard Medical School. Por
haber descubierto la Co-A y su importancia en el
metabolismo intermediario. Nació en 1896 en
Alemania y se nacionalizó en EUA

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Ligas de interés

OJO….!!! Revisarlo previo a clase


http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/stude
nt/animations/citric_acid_cycle/index.html

Dr. Mallery. Revisión general


http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/255/255atp/255mak
eatp.htm

Revisión general del ciclo y producción de energía


http://media.pearsoncmg.com/bc/bc_campbell_biology_
7/media/interactivemedia/activities/load.html?9&D

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¿Dónde
estamos en
las rutas?

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¿Dónde estamos en la célula?

En la matriz mitocondrial

http://porpax.bio.miami.edu/~cmallery/255/255atp/gk5x5.gif Roma-2007
Introducción
Combustibles metabólicos. Glucosa, pero no es
el único combustible

Ruta de glucosa a lactato o etanol: un proceso


anaeróbico (moléculas relativamente
reducidas) y abandonan la célula

Si el producto de la glucólisis continúa su


oxidación completa (aeróbico), la célula puede
recuperar más energía

El Ciclo del ácido cítrico (CAC) representa una


vía central para la recuperación de energía a
partir de los combustibles metabólicos:
carbohidratos, acidos grasos y aminoácidos
que se degradan a Acetil-CoA por oxidación

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Introducción

La glucólisis extrae una fracción muy pequeña de ATP de la glucosa.

El procesamiento aeróbico
la oxidación completa hasta a CO2 y agua.
se genera la mayor cantidad de ATP.

El ciclo del ácido cítrico (CAC) es la ruta final de oxidación común


para aminoácidos, ácidos grasos y carbohidratos.

La mayoría de las moléculas entran al ciclo como acetil coenzima A


(Ac-CoA).

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Destinos del piruvato

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Origen del acetil-CoA

El acetil-CoA: combustible CAC.


Se forma a partir del desdoblamiento del
glucógeno (forma de almacenamiento de la
glucosa en animales), las grasas, y la
mayoría de los amino ácidos
El piruvato, al entrar a la mitocondria,
pierde un C (CO2) y se asocia con la Co-A
Æ Acetil-CoA
Pir + CoA Æ Acetil-CoA

De 3C a 2 C
http://www.citruscollege.edu/pic/46/c07_06.jpg
http://www.library.csi.cuny.edu/~davis/Biochem_3521/lect15/acetylCoAProd.GIF Roma-2007
Función del ciclo

Fuente de precursores (o intermediarios metabólicos) que


funcionan como:
Almacenes de energía
Bloques de construcción de otras moléculas como:
aminoácidos, bases de nucleótidos, colesterol y porfirina
(el componente orgánico del grupo. hemo)
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Función del Ciclo
Generación de energía:

„Las moléculas carbonadas se


oxidan (pierden electrones)

„Los electrones se transfieren a


moléculas transportadoras de
electrones (NAD+ y FAD).

„La energía de los electrones es


utilizada posteriormente para la
síntesis de ATP en la siguiente
fase donde termina la oxidación
(fosforilación oxidativa).
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Destino de e-: Respiración celular en mito.

•En CAC
electrones del •Cadena de transpsorte de e- Los •Los H+ retornan a la
acetyl CoA se e- fluyen dentro de complejos matriz, a través de la
transfieren y se enzimáticos de la mb interna, que ATP sintasa que genera
utilizan para
sintetizar NADH generan un gradiente de H+ entre ATP a partir de ADP y
y FADH2. la mb interna y la matriz Pi
mitocondrial

Fosforilación oxidativa
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Respiración celular

CAC
Cadena de
transporte de e-
Síntesis de ATP

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Oxígeno: aceptor final de electrones

El oxígeno es el aceptor de electrones al final


electrones:
½ O2 + 2e- + 2H+ Æ H2O

El oxígeno es

El CAC y la fosforilación oxidativa proveen la mayor


parte de la energía utilizada en células aeróbicas (en
los humanos >95%)

Un 1/3 (aprox.) se consume en la bomba Na+-K+

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De glucólisis al ciclo del ácido cítrico

Dentro de la matriz mitocondrial

Inicia con piruvato que proviene


de la glucólisis

Matriz mitocondrial:
Piruvato → acetil-CoA por el
complejo multienzimático:
piruvato deshidrogenasa

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Eventos en la mitocondria
Estructura:
Mb externa, mb interna y matriz
mitocondrial

Ci-is-ke su-su fu-ma-o


http://www.cartage.org.lb/en/themes/sciences/zoology/AnimalPhysiology/Anatomy/AnimalCellStructure/Mitochondria/Mitochondria.htm Roma-2007
Ciclo completo

Lo que cambia
está en azul

Nombre de
la enzima
en amarillo

http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/ecb/complete_citric_acid_cycle.html Roma-2007
Ciclo de Krebs

http://www.sp.uconn.edu/~terry/images/anim/ATPmito.html
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Pasos del ciclo a
continuación
Intermediario
Cis-aconitato

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Complejo
Piruvato deshidrogenasa (PDH)
Estructura multienzimática: Con tres actividades
enzimáticas: piruvato deshidrogenasa (E1), dihidrolipoil
transacetilasa (E2) y dihidrolipoil deshidrogenasa (E3).

La reacción del complejo piruvato


deshidrogenasa requiere la participación de 5
coenzimas.

Su regulación no se conoce a fondo, se sabe


que Mg2+ y Ca2+ activan la enzima.

Aaron Klug. (Premio Nóbel Química 1982-


cristalografía del nucleosoma) desarrolló las
técnicas para describir la estructura de la PDH

http://sandwalk.blogspot.com/2007/08/theme-pyruvate-dehydrogenase.html
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Complejo PDH

Complejo de TRES enzimas con numerosas subunidades

E1 = Piruvato deshidrogenasa
E2 = Dihidrolipoil transacetilasa
E3 = Dihidrolipoil deshidrogenasa

E1-amarillo
E3-rojo
E2-verde

http://sandwalk.blogspot.com/2007/04/structure-of-pyruvate-dehydrogenase.html Roma-2007
Rxn’s de la Piruvato deshidrogenasa

TRES transformaciones químicas principales:


1. Decarboxilación (pierde CP2)
2. Oxidación del grupo ceto a grupo carboxilo
3. Activación al enlazarla a Co-A con un enlace tioéster

Utiliza cinco Co-enzimas:


1. Tiamina pirofosfato (TPP) Gpo. Prostético de E1
2. Lipoamida – Grupo prostético de E2
3. Coenzima A (Co-A)
4. FAD – Grupo prostético de E3
5. NAD+

VER ANIMACION de la PDH:


http://www.wiley.com/legacy/college/boyer/0470003790/animation
s/pdc/pdc.htm
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Coenzimas del complejo piruvato deshidrogenasa

Coenzima/enlace Funciones
Descarboxilación y
Tiamina pirofosfato (TPP)-unido
transferencia de grupos
a E1
aldehído
Acido lipoico-unido a Lys en E2 Transportador de grupos
(lipoamida) hidrógeno y acetilo

NADH-sustrato para E3 Transportador electrónico

FAD-unido a E3 Transportador electrónico

Coenzima A (CoA-SH)-sustrato Transportador de grupos


para E2 acetilo

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Complejo piruvato deshidrogenasa de E.
coli

Actividad
Función Coenzimas
enzimática

Piruvato
Descarboxila al piruvato TPP
deshidrogenasa (E1)

Dihidrolipoil Cataliza la transferencia del Ácido lipoico


transacetilasa (E2) grupo acetilo a la CoASH CoASH

Dihidrolipoil Oxida de nuevo a la


NAD+, FAD
deshidrogenasa (E3) dihidrolipoamida

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De piruvato en acetil CoA (PDH)
Descarboxilación del piruvato. Se forma un
nucleófilo. Un residuo básico de la enzima
extrae un protón del anillo de tiazol de la
tiamina-pirofosfato (TPP). Se forma el
intermediario, hidoxietil-TPP (HETPP), tras
el ataque del anillo nucleófilo de tiazol al
grupo carbonilo del piruvato con la pérdida
de CO2.
En los siguientes pasos, el grupo hidoxietilo del
HETPP se convierte en acetil-CoA por la
dihidrolipoil transacetilasa.
El ácido lipoico está unido a la enzima a través
de un enlace amida. Reacciona con el HETPP
para formar un ácido lipoico acetilado y TPP
libre.
El grupo acetilo se transfiere a continuación al
grupo sulfhidrilo de la coenzima A.
Posteriormente, el ácido lipoico reducido se
vuelve a oxidar por la dihidrolipoil
deshidrogenasa. El FADH2 se oxida por el
NAD+ y forma el FAD que se requiere para
la oxidación del siguiente residuo de ácido
lipoico reducido.
FIGURA 9-8 del McKee2
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De piruvato a acetil CoA (PDH)

Figura 16.6, Voet.

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Regulación de PDH

El complejo enzimático se activa alostéricamente por:


„NAD
+

„CoA-SH y

„AMP

Se inhibe por:
„concentraciones elevadas de ATP

„los productos de la reacción: acetil-CoA

„NADH

La inhibición es por producto por NADH y Acetil-CoA


Modificación covalente por la fosforilación de la subunidad E1
(sólo en eucariontes)
En tejido adiposo, la insulina incrementa la actividad de la piruvato
deshidrogenasaactivate mientras que en el músculo cardiaco su
actividad es incrementada por catecolaminas

(Derivados de Phe y Tyr: Ej. norepinefrina, epinefrina y dopamina)


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Ciclo del ácido cítrico

… ya dentro de la mitocondria…

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Revisar esta liga

Ciclo del ácido cítrico

Reguladores del ciclo

http://www.wiley.com/legacy/college/boyer/0470003790/animatio
ns/tca/tca.htm

Let´s play…!!

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Ciclo del ácido cítrico

*
*

NOTAR LOS TIPOS DE RXN EN CADA PASO


Deshidratación, oxidación, etc…
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Ciclo del ácido cítrico

Reacciones individuales

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Paso 1: Acetil CoA a Citrato

La enzima saca un protón del grupo CH3 de Ac-CoA Æ( CH2)– (negativo)

(CH2)- forma un enlace con el carbonilo del oxaloacetato (intermediario)

Hidrólisis del enlace de la CoA. Es una rxn muy favorable

Enzima: Citrato sintasa

http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/ecb/complete_citric_acid_cycle.html Roma-2007
Citrato: acetil CoA a + oxalacetato

Rxn de condensación aldólica seguida por una hidrólisis


Catalizada por citrato sintasa.
El oxalacetato se condensa con acetil CoA Æ citril CoA que luego es
hidrolizado Æ citrato y CoA.

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Paso 2: Citrato a Isocitrato

Isomerización. Primero sale un H2O y se agrega posteriormente


Mueve un grupo OH de un carbono a otro
Enzima: Aconitasa contiene un conjunto hierro-azufre (4Fe-4S)

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Isocitrato por isomerización

Se forma un alcohol secundario que puede oxidarse fácilmente

Rxn de deshidratación seguida por una hidratación: intercambio de


un hidrógeno y un grupo hidroxilo

Enzima: aconitasa por ser cis-aconitato un intermediario

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Paso 3: Isocitrato a α-cetoglutarato

Primera de cuatro pasos de oxidación del ciclo


El carbono con el grupo OH Æ grupo carbonilo con un intermediario
inestable
Pérdida subsecuente de CO2 (aún enlazado a la enzima)
Enzima: Isocitrato deshidrogenasa

http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/ecb/complete_citric_acid_cycle_part2.html Roma-2007
α-cetoglutarato: de isocitrato (se oxida y
se descarboxila)

1a. Rxn redox del ácido cítrico

Enzima de descarboxilación: isocitrato deshidrogenasa.


Intermediario: oxalosuccinato, que pierde CO2 para formar α-cetoglutarato

La tasa de formación del α-cetoglutarato define la tasa del ciclo del ácido
cítrico

La oxidación genera NADH. Primer enlace con la cadena de transporte de


electrones (CTE)
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Paso 4: α-ketoglutarato a succinil CoA

La enzima cataliza la oxidación que produce NADH, CO2 y un enlace


tioester a una molécula de CoA
Enzima: COMPLEJO a-ketoglutarato desidrogenasa (similar a la que
convierte el piruvato a acetil-CoA –piruvato deshidrogenasa)

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Succinil-CoA: a partir de α-cetoglutarato (se oxida y se
descarboxila)

Enzimas del complejo α-cetoglutarato deshidrogenasa: α-cetoglutarato


deshidrogenasa, dihidrolipoil transsuccinilasa y dihidolipoil deshidrogenasa

Rxn de descarboxilación oxidativa (análoga a la conversión del piruvato en acetil-


CoA, por la piruvato deshidrogenasa. Forma NADH y CO2

Productos (ambas) moléculas de tioéster con energía abundante, esto es, acetil-CoA
y succinil-CoA

Requieren los mismos cofactores (TPP, CoASH, ácido lipoico, NAD+ y FAD)
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Paso 5: Succinil CoA a Succinato

Un grupo Pi desplaza a la CoA.


Se forma un enlace fosfato de alta energía al succinato
El grupo fosfato es transferido a GDP para formar GTP (en plantas y
bacterias se forma ATP a partir de ADP y Pi)
Enzima: Succinil CoA sintetasa ó succinato tiocinasa

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Succinato: a partir de succinil-CoA (acoplada a una
fosforilación a nivel de sustrato)

Rxn: ruptura del enlace tioéster de alta energía de la succinil-CoA

Enzima: succinato tiocinasa está acoplada en los mamíferos a la


fosforilación a nivel sustrato de GDP

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Paso 6: Succinato a Fumarato

Tercer paso de oxidación.


El FAD acepta dos átomos de H del succinato
Enzima: Succinato deshidrogenasa

http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/ecb/complete_citric_acid_cycle_part2.html Roma-2007
Paso 7: Fumarato a Malato

Adición de agua al fumarato ubica un grupo OH enseguida del grupo


carbonilo
Enzima: Fumarasa

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Síntesis de ATP
Nucleósido Difosfato cinasa
GTP + ADP GDP + ATP

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Paso 8: Malato a Oxaloacetato

La última de las cuatro oxidaciones del ciclo


El C que lleva el grupo OH es convertido a un grupo carbonilo (=) lo que
regenera el oxaloacetato
Enzima: Malato deshidrogenasa

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Oxalacetato: regeneración

Enzimas:
Succinato deshidrogenasa: oxidación del succinato Æ
fumarato. Utiliza FAD

Fumarasa: convierte en malato por hidratación

Malato deshidrogenasa: regenera oxaloacetato (OAA)


oxidación dependiente de NAD+. Se forma un tercer
NADH

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Resumen

El compuesto de 4 carbonos OAA se


condensa con una molécula de dos
carbones de un grupo acetilo y forma una
molécula de 6 carbonos (6C): citrato

El citrato se descarboxila oxidativamente:


forma α-cetoglutarato (5C)

El α-cetoglutarato se descarboxila
oxidativamente: forma succinato (4C)

El oxalacetato se regenera a partir del


succinato.
(contnúa →

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Resumen

Una unidad de 2 carbonos entra al ciclo


(grupo acetilo). Se liberan dos átomos de
carbono (CO2)

3 iones Hidruros (6 electrones) se


transfieren a 3 moléculas de NAD+

Un par de átomos de hidrógeno (2


electrones) se transfieren a una molécula
de FAD

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Control del ciclo del ácido
cítrico

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Control

La disponibilidad de sustratos

La necesidad de intermediarios del CAA


como precursores biosintéticos

La demanda de ATP

Influyen en la operación del CAA

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Piruvato dehidrogenasa: regulada alostéricamente y
fosforilación reversible

PASO IRREVERSIBLE:
En animales, la formación de acetil CoA a
partir de piruvato

La decarboxilación oxidativa del piruvato a


acetil CoA conduce los átomos de carbón de
la glucosa a dos destinos principales:

„Oxidación a CO2 por el ácido cítrico


(genera energía) o

„ Síntesis de lípidos

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Pir-deshidrogenasa: punto de control
Cuando ↑ los niveles de acetil CoA,
NADH y ATP, se promueve la
fosforilación y por tanto se inhibe
la actividad de la enzima
„(la actividad de piruvato
dehidrogenasa se inhibe cuando la
carga de energía es alta y los
intermediarios biosintéticos son
abundantes)

De modo contrario, la presencia de


piruvato y ADP (signo de baja
energía) activan la dehidrogenasa al
inhibir la acción de la cinasa.

El los iones de calcio, también


regulan la actividad
http://www.uaf.edu/chem/451f00D/ExamIIa_key.htm
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Control hormonal de la PDH

Incremento en vasopresina

Incremento en el Ca2+ citosólico

Incremento en el Ca2+ mitocondrial

Se activa la fosfatasa
(se inhibe la fosforilación de la enzima)

Se activa el complejo de la piruvato


deshidrogenasa
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Control hormonal de la PDH

Incremento en insulina

Se estimula la defosforilación del complejo

Se incrementa la conversión de
piruvato a acetil CoA

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Control: reacciones irreversibles
ENZIMA CLASIFICACION ES IREVERSIBLE?

Citrato sintasa Transferasa SI

Aconitasa Hidatasa NO

Isocitrato Ox-reductasa SI
deshidrogenasa
Complejo α- Ox-reductasa SI
Cetoglutarato
deshidrogenasa
Succinil CoA sintasa Ligasa NO

Succinato Ox-reductasa NO
deshidrogenasa
Fumarasa Hidratasa NO

Malato deshidrogenasa Ox-reductasa NO

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Regulación del ciclo

Puntos de inhibición ¤
Intermediarios inhibidores
Activadores_ ADP y Ca2+

1. Piruvato deshidrogenasa:
NADH y Ac-CoA
2. Citrato sintasa:
NADH , citrato y succinil-Co-A
3. Isocitrato deshidrogensa:
NADH y ATP
4. α-cetoglutarato deshidrogenasa:
NADH y succinil-Co-A

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El ciclo del ácido cítrico se controla en
diferentes puntos

La tasa del ciclo depende de:


„disponibilidad de sustratos

„necesidad de intermediarios y

„la demanda de ATP

Los puntos principales de control lo constituyen las


enzimas alostéricas:
„isocitrato deshidrogenasa y

„α-cetoglutarato deshidrogenasa

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Isocitrato deshidrogenasa

La actividad de la enzima se estimula por:


„ incrementos de ADP y NAD
+

La actividad de la enzima se inhibe por:


„incrementos en la concentración de ATP y NADH.

(Es importante notar que varios pasos del ciclo


requieren NAD+ o FAD, los cuales son abundantes
solo cuando la carga de energía es baja).

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α-cetoglutarato deshidrogenasa

α-cetoglutarato deshidrogenasa se inhibe por:

„succinil CoA y NADH (los productos de la reacción que


cataliza)

„ y ATP.

En resumen la tasa del ciclo se reduce por


un nivel alto de ATP.

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El ciclo del ácido cítrico como
fuente de precursores
biosínteticos

http://www.bmb.leeds.ac.uk/teaching/icu3/lecture/14/index.htm Roma-2007
Fuente de precursores biosintéticos

Además de ser una ruta degradativa para la síntesis de ATP, también es


fuente de intermediarios para biosíntesis

Ej.: la mayoría de los átomos de carbón en porfirinas se derivan de succinil


Co-A

Muchos aminoácidos se derivan del α-cetoglutarato y del oxalacetato así


como bases púricas y pirimídicas.

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El ciclo debe de mantenerse

Si los intermediarios se desvían a otras rutas, deben de


ser re-incorporados para que el ciclo siga funcionando

Por ejemplo, si se desvía el OAA hacia aa para la síntesis


de proteínas:
„ se incrementa la necesidad de energía celular,

„la tasa del ciclo del ácido cítrico se reduce debido a


que acetil CoA no puede entrar al ciclo sin condensarse
con el oxalacetato

Para que el ciclo siga funcionando se debe de mantener


un nivel mínimo de oxalacetato.

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Cómo es re-incorporado el oxalacetato?

Los intermediarios del ciclo que se usan para biosíntesis


son recuperados por medio de la formación de
oxalacetato a partir de piruvato

El oxalacetato se forma por medio de la carboxilación


del piruvato en una reacción catalizada por la enzima
piruvato carboxilasa (que depende de biotina)

Esta enzima se activa solo en presencia de Acetil Co-A.

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Destinos del oxalacetato en base a requerimientos
energéticos de la célula

Si la carga de energía es alta, el oxalacetato se


desvía hacia la formación de glucosa.

Si la demanda de energía es baja el oxalacetato se


reincorpora al ciclo del ácido cítrico.

Clase: porqué..??

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Ubicación donde se requiere…

www.sirinet.net/~jgjohnso/ reproduction.html Roma-2007


Producción de ATP en procariontes

Durante la respiración aeróbica, a partir de una molécula de glucosa

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap05/lecture4.htm
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Producción de energía
Oxidación de azúcares y grasas

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Animaciones:

MUY DIDACTICO…!!!!!!!!
http://www.johnkyrk.com/krebs.html

Otra versión light…


http://www.science.smith.edu/departments/Biology/Bio231/krebs.
html

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Para recordar…

Compuesto Porqué necesito saberlo? Características

Glucosa Principal fuente de energía Se almacena en


(como almidón) cantidades limitadas
Triglicéridos Principal almacén de energía Su hidrólisis libera
ácidos grasos y glicerol
Lactato Producto glucolítico del músculo Recicla hacia glucosa en
blanco el hígado
Alanina Principal aa liverado durante Estructuralmente
periodos de hambruna relacionado a lactato y
piruvato
Glutamina Principal aa en sangre Estructuralmente
relacionado a glutamato
y oxoglutarato
Aceto-acetato Peligro de muerte si está en Importante fuente de
exceso en cuadro de diabetes energía durante
aguda periodos de hambruna
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