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PRÁCTICA Nº 09
Recuento e Identificación de
Staphylococcus aureus
ASIGNATURA :
DOCENTE :
ALUMNO :
CICLO :
2007 - II
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PRÁCTICA Nº 09
RECUENTO E IDENTIFICACION DE
Staphylococcus aureus
I. Introducción:
II. Objetivos:
III. Materiales:
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- Diluyente: agua peptonada con - Gradillas
2% de citrato de sodio. - Mechero Bunsen
- Plasma sanguíneo (para prueba - Placas de Petri
de coagulasa)
IV. Procedimiento:
Diluciones
3 g de muestra 9 mL 9 mL
+ diluyente diluyente
27 mL agua pept. con
2% de citrato de Na
Incubar a 35 – 37 ºC por 24 h
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V. Resultados:
10 -1 A 10 -1 B
10 -2 A 10 -2 B 10 -3 A 10 -3 B
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- Se obtuvo el sgte. recuento:
DILUCIONES
-1
10 10-2 10-3
A B A B A B
NN NN 1148 1320 572 372
- Entonces, las colonias obtenidas son coagulasa positiva, lo que quiere decir que
lo más seguro es que sean S. aureus positiva
VI. Preguntas:
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o Agar yema de huevo sal
o Agar sangre
o Agar yema de huevo telurito polimixina
VII. Referencias:
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- CHANS R., G. (2002). Estafilococos. Obtenido el 22 de febrero de 2008 en
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2017.pdf
- BECQUER L., A. y otros (1996). Detección de la desoxirribonucleasa
termoestable (termonucleasa) directamente del alimento. Obtenido el 22 de
febrero de 2008 en http://bvs.sld.cu/revistas/ali/vol10_2_96/ali05296.htm
- FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en
Microbiología: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3º Edic. Lima.
- L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de Alimentos:
Investigación y Recuento de Staphylococcus aureus. Obtenido el 01 de febrero
de 2008 en
http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_m
icrolimentos.htm
- THATCHER, F. S. y D. S., CLARK (1993) Análisis Microbiológico de los
Alimentos. Edit. Acribia. Zaragoza.
RESULTADOS FINALES
- Recuento de colonias:
En el recuento de colonias de las diluciones realizadas nos dio los sgtes. resultados:
Dividimos los promedios de las diluciones 10-2 y 10-3 y obtenemos los sgtes. resultados:
10-2 → 1234
= 2.6
10-3 → 472
- Prueba de termonucleasa:
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De las colonias positivas para la prueba de coagulasa, se les pasó a realizar la prueba de
termonucleasa. Para esto se emplea agar DNasa, al cual, después de servir en placas de
Petri y dejar solidificar, se les hace dos agujeros en la parte media y separados uno del
otro.
Luego, de la cepa de S. aureus, a la cual hemos sembrado en caldo nutritivo
previamente, se pone en agua hervida por 5 min. , luego lo ponemos a enfriar en agua.
Después, inoculamos en los orificios hechos en el agar pequeñas cantidades del caldo
con S. aureus de tal manera que quede de forma convexa.
Luego ponemos a incubar la placa a 37 ºC por 2-4 h. Pasado el tiempo leemos las
placas. Una coloración rosada a guinda en la zona de la inoculación es una reacción
positiva para la prueba.
Pasado el tiempo de espera las oquedades en las que sembramos no mostraron ningún
cambio, como se puede mostrar en la fotografía adjunta.