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ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA Nº 10
Recuento e Identificación de
Enterococcus
ASIGNATURA :

Microbiología de los Alimentos I

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo

ALUMNO :

Rómulo Aycachi Inga

CICLO :

2007 - II

Lambayeque, 13 de marzo de 2008.

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PRACTICA Nº 10
RECUENTO E IDENTIFICACIÓN DE
Enterococcus.
I. Introducción:

Los enterococos son cocos gram positivos, que se encuentran aislados, de a pares, o
formando cadenas cortas. Ellos pertenecieron, clásicamente, a los Streptococcus grupo
D de Lancefield; sin embargo, a mediados de la década de 1980 fueron oficialmente
clasificados en su propio género. Son catalasa negativa, anaerobios facultativos, capaces
de crecer en condiciones un tanto extremas. Las características bioquímicas
sobresalientes incluyen: la habilidad de crecer en presencia de NaCl al 6,5%, a
temperaturas entre 10°C y 45°C, y hasta en un pH de 9,6. Tienen la capacidad de
hidrolizar la esculina, crecer en presencia de bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60°C e
hidrolizar la L-pirrolidonil ß-naftil-amida (PYR); esta habilidad ha sido usada como
parte de un test rápido para detección de enterococos en el laboratorio.
Las especies de enterococos clínicamente importante son: E faecalis, E faecium, E
durans, E avium, E gallinarum, E casseliflavus, E raffinosus, E malodoratus, E hirae, E
mundtii, E solitarius, E pseudoavium.
E faecalis es el patógeno humano más frecuente representando el 60% al 90% de los
aislamientos clínicos de enterococos. E faecium es la segunda especie aislada en
frecuencia, representando el 5% al 16% de los aislamientos clínicos.

II. Objetivos:

- Familiarizarse con la técnica de aislamiento de Enterococcus a partir de


alimentos.
- Efectuar una numeración e identificar Enterococcus a partir de alimentos.
- Conocer la metodología mas adecuada para análisis.

III. Materiales:

- Muestras: Aguas de diferentes - Medio para aislamiento: Agar


tipos, leche deshidratada a Barnes (a base de
granel. Trifeniltetrazolium- TTC).
- Medio para detección - Tubos de dilución
presuntiva: Caldo Glucosa - Placas de Petri
Azida. - Pipetas de 10 y 5 mL.
- Medio de detección - Mechero Bunsen
confirmativa: Caldo EVA. - Asas microbiológicas
- Frascos estériles

IV. Procedimiento:

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- Muestra de agua:

Muestra: agua
de noria

10 mL
0.1 mL

Caldo Glucosa
Azida

1 mL

PRUEBA
PRESUNTIVA

Incubar de 35 a 37 ºC por 18 a 24 h.
De los tubos positivos se los pasa a caldo EVA

Caldo EVA
PRUEBA
CONFIRMATIVA

Incubar de 35 a 37 ºC por 18 a 24 h.

- La positividad de la prueba en el caldo EVA se ve cuando se presenta turbidez y


sedimento de color rojo a rojizo.
- De los tubos positivos hay que realizar el aislamiento en agar Barnes.
- Luego realizar la identificación de las colonias a través de coloración Gram y
otras como catalasa, crecimiento a 45 ºC, crecimiento en NaCl 6.5%, resistencia
bilis 40%, crecimiento a pH 9.6 y otros de ser necesarios.

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- Muestra de leche deshidratada:

Pesamos 3 g de la muestra
(leche en polvo)

Realizamos tres diluciones

Diluyente:
Agua
peptonada
al 0.1%

10-1 10-2 10-3


1 mL 1 mL 1 mL

Agar
Barnes

Incubar a 35-37 ºC por 24-48 h.

- Pasado el tiempo de incubación se leen las placas. Si se observan colonias con el


centro rojo, es muy posible que corresponda a E. faecalis, colonias blancas es
posible que sean E. faecium y si son colonias de color rojo intenso, puede que
sea Lactococcus lactis.
- Seleccionamos las colonias características, luego realizamos las pruebas
necesarias para su identificación final.

V. Resultados:
- De las colonias sospechosas obtenidas de las placas anteriormente observadas se
pasó a sembrarlas en caldo EVA, para ello se escogieron tres colonias (las cuales
se aislaron en viales).

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- Se sembró a 37 ºC por 24 horas. Después de lo cual nos dio la coloración
característica de la positividad en el caldo (sedimento rojo-violáceo).

- Luego de la confirmación de que las colonias aisladas pertenecen al género


Enterococcus se pasó a desarrolar las pruebas bioquímicas respectivas (para
esto sólo se escogió una cepa):

Catalasa Negativo
Crecim. pH 9.6 Positivo
Crecim. NaCl 6.5% Positivo
Superv. 60 ºC x 30’ Positivo

- Como las pruebas realizadas no pueden diferenciarnos la especie de


Enterococcus aislado y además, la colonia escogida para las pruebas
bioquímicas era una colonia con centro color rojo en el agar Agar TTC, es muy
probable que sea E. faecalis.

VI. Preguntas:
- Describir la composición de los medios utilizados.

Agar Barnes (TTC) Caldo EVA Caldo glucosa azida


Triptosa 1g Triptosa 20 g Tripteína 15 g
Glucosa 0,1 g Dextrosa 5g Extracto de carne 4.8 g
NaCl 0,5 g Dipotasio fosfato 2,7 g Glucosa 7.5 g
TTC 0,01 g Monopotasio fosfato 2,7 g NaCl 7,5 g
Agar 0.4 g NaCl 5g Azida sódica 0,2 g
Agua destilada 1 000 mL Azida de sodio 0.4 g Agua destilada 1 000 mL
Agua destilada 1 000 mL

VII. Referencias:

- ACOSTA G., S. I. (2005). Enterococcus. Obtenido el 29 de febrero de 2008 en


www.codeinep.org/control/Enterococcus.doc
- L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiología de Alimentos:
Investigación de streptococos fecales. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en
http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_m
icrolimentos.htm
- FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en
Microbiología: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3º Edic. Lima.