Вы находитесь на странице: 1из 56

А.С.

Спирин

2006 г.

Лекция 9:
Регуляция трансляции у
эукариот
ТОТАЛЬНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
Регуляция доступности
активного Met-РНКi-связывающего фактора инициации eIF2
путем его фосфорилирования
eIF2P:GTP:eIF2B
e IF 2 : G T P : e IF 2 B M e t-tR N A i

G TP
eIF2P:eIF2B M e t-tR N A i : e IF 2 : G T P : e IF 2 B
e IF 2 : e IF 2 B

G D P 4 0 S S U B U N IT

e IF 2 B
eIF2P:GDP
e IF 2 : G D P 4 0 S : M e t-tR N A i : e IF 2 : G T P
P

8 0 S : M e t-tR N A i 6 0 S S U B U N IT
IN IT IA T IO N C O M P L E X
eIF2-киназы:
фосфорилирование Ser51 α-субъединицы eIF2

Индукторы eIF2-киназ:
• Недостаток Fe3+ и/или гема
• Вирусная инфекция
• Голодание
• Недостаток ростовых
факторов
• Тепловой шок
АКТИВАЦИЯ ГЕМ-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ (“HCR”):
ДВА АЛЬТЕРНАТИВНЫХ МЕХАНИЗМА

A HCR B HCR

S S
Индуктор: Inactive S S Inactive
Fe Fe
dimer S S heterodimer

Недостаток Fe3+ и/или S S

гема HCR hsp90

heme heme
heme heme

HCR
HCR
S S

S S
SH SH ATP

hsp90 ADP
Active
monomer
SH SH P
HCR
HCR

S S
HCR
S S

hsp90
hsp90 P
АКТИВАЦИЯ ГЕМ-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ (HCR):

Индуктор: Недостаток Fe3+ и/или гема


АКТИВАЦИЯ dsRNA-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ (“PKR”)

Индуктор:
Вирусная инфекция
АКТИВАЦИЯ dsRNA-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ (PKR)

Индуктор: Вирусная инфекция


АКТИВАЦИЯ тРНК-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ GCN2

Индуктор: Голодание по аминокислоте


АКТИВАЦИЯ тРНК-РЕГУЛИРУЕМОЙ eIF2-КИНАЗЫ GCN2

Индукторы:
(2) Голодание
(3) Недостаток
ростовых
факторов
АКТИВАЦИЯ МЕМБРАННОЙ eIF2-КИНАЗЫ (PERK)

Индуктор: Стресс
МЕХАНИЗМ ТОТАЛЬНОГО ПОДАВЛЕНИЯ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
eIF2-КИНАЗАМИ
РЕГУЛЯЦИЯ ДОСТУПНОСТИ ЛИМИТИРУЮЩЕГО
мРНК-СВЯЗЫВАЮЩЕГО ФАКТОРА ИНИЦИАЦИИ (eIF4)

eIF4E + eIF4A + eIF4G eIF4F


+
4E-BP eIF4E:4E-BP (inactive)
+ATP
фосфорилирование 4Е-ВР
ТОТАЛЬНАЯ ГЕГУЛЯЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
eIF4E-СВЯЗЫВАЮЩИМ БЕЛКОМ

40S
eIF4E:4E-BP

5'-UTR

eIF4E
CAP

POLY(A)
40S
60S

CODING REGION
3'-UTR

60S
ЦИРКУЛЯРИЗАЦИЯ ПОЛИРИБОСОМЫ

40S

5'-UTR

CAP

POLY(A)
40S
60S
CODING REGION
3'-UTR

60S
мРНК-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
ТРАНСЛЯЦИОННАЯ РЕПРЕССИЯ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ мРНК

Прокариоты

Эукариоты
ТРАНСЛЯЦИОННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ФЕРРИТИНА

IRE

Ferritin mRNA Ferritin coding sequence


5' Cap 3'

3+ +Fe 3+
-Fe
IRE-BP aconitase (4Fe-4S)
Translation initiation
blocked by IRE-BP IRE unoccupied allowing
bound to IRE initiation and ferritin synthesis

43S
preinitiation
complex

60S
МАСКИРОВАНИЕ мРНК
МАСКИРОВАННАЯ мРНК

(1) Запасенная в процессе оогенеза мРНК ооцитов,


а также запасенная в сперматогенезе мРНК сперматоцитов.
(2) Маскирование-демаскирование мРНК в процессе эмбриогенеза и
клеточной дифференцировки.
(3) Маскирование-демаскирование мРНК в ответ на физиологические
и гормональные воздействия.
(4) Транспорт маскированной мРНК внутри клетки и
ее демаскирование в местах внутриклеточной локализации.

Особенности маскированных мРНК:


нетранслируемость;
стабильность, неатакуемость нуклеазами;
неподверженность полиаденилированию-деаденилированию.
сновные физико-химические свойства
цитоплазматических информационных рибонуклеопротеидов (информосом)

1) Гетерогенность размеров,
линейная корреляция коэффициентов седиментации частиц
с коэффициентами седиментации их изолированной РНК.

2) Плотностная гомогенность (т. е. все частицы, не зависимо от размера, имеют одинаковое


соотношение белок : РНК).

3) Высокое соотношение белка к РНК (около 3 : 1)


и соответственно низкая плавучая плотность (1,4 г/см3 в CsCl).
(Рибосомы имеют соотношение 1 : 1 и плавучую плотность 1,55 г/см3).

4) Устойчивость к удалению ионов магния.


(Рибосомы при удалении магния диссоциируют
сначала на субчастицы, а затем на РНК и белок).

5) Чувствительность к рибонуклеазам.
(Рибосомы относительно устойчивы к рибонуклеазной обработке).
итоплазматические
информационные рибонуклеопротеиды (информосомы)
в животных клетках

. Свободные нетранслируемые мРНП-частицы


как форма существования маскированных мРНК.
Стабильны в клетке, не подвержены деградации и
полиаденилированию/деаденилированию,
не способны взаимодействовать с факторами инициации трансляции и рибосомами.

I. Свободные мРНП-частицы
как фонд транслируемых мРНК.
Подвержены как деаденилированию и деградации,
так и полиаденилированию и взаимодействию с рибосомами.
Могут либо находиться в равновесии с полисомами,
либо быть временно выключены из трансляции репрессорами.

II. Транслируемые мРНП, входящие в состав полисом и


освобождаемые при диссоциации рибосом.
Белки, связанные с мРНК в полисомах, позволяют рибосомам беспрепятственно транслировать
кодирующие последовательности, а возможно и способствовать трансляции.
Spisula solidissima

Оогенез:
Синтез и маскирование мРНК, кодирующих
малую субъединицу рибонуклеотид-редуктазы,
циклин А, etc.,
накопление мРНП (информосом) в цитоплазме.

Оплодотворение:
Демаскирование этих мРНК в цитоплазме,
переход из информосом в полисомы.

мРНП in vitro:
Демаскирование путем обработки солью
(диссоциация белка мРНП).
Демаскирование с помощью антисмысловых РНК
(“competitive unmasking assay”).
Открытие «маскирующего элемента» (“masking box”)
в 3’-НТО:
N. Standart et al. (1990) Genes Dev. 4: 2157-2168.
Открытие маскирующего белка,
специфически связывающегося с 3’-НТО:
N. Standart (1992) Semin. Dev. Biol. 3: 367-379.
Открытие «маскирующего элемента» в 3'-НТО и
первичного «маскирующего белка»
в мРНК рибонуклеотид-редуктазы
ооцитов моллюска Spisula solidissima
Схема маскирования-демаскирования материнских мРНК
в оогенезе и после оплодотворения Xenopus laevis
коди ру ю щ ая
п о сл ед о вател ьн о сть

A U G
5' блокада
ини циаци и
U A A
бло када
деградаци и
3'

н екоди ру ю щ ая
п о сл ед о вател ьн о сть
(3 '- U T R )

с егм ен т м аски ро ван и я

м аски р о ван и е дем аск и ровани е

м аски ру ю щ и й бело к
Схема инициации маскирования эукариотической мРНК

коди ру ю щ ая
п о сл ед о вател ьн о сть

A U G
5' блокада
eIF4E ини циаци и
U A A
бло када
деградаци и
3'

н екоди ру ю щ ая
4E-BP п о сл ед о вател ьн о сть
(3 '- U T R )
Maskin

с егм ен т м аски ро ван и я

м аски р о ван и е дем аск и ровани е

м аски ру ю щ и й бело к
КРУГОВАЯ ТРАНСЛЯЦИЯ
В СФОРМИРОВАННЫХ ПОЛИСОМАХ

40S

5'-UTR

CAP

eIF3, eIF4
PABP
POLY(A)
40S
60S
CODING REGION
3'-UTR

60S
СХЕМА МАСКИРОВАНИЯ мРНК
СХЕМА МАСКИРОВАНИЯ мРНК

4E-BP
Эукариотические мРНК-связывающие белки
Эукариотические мРНК-связывающие белки

eIF4
Drosophila
Оогенез и ранний эмбриогенез:
детерминация передне-задней оси эмбриона

огенез:
Синтез, импорт в яйцо и маскирование мРНК, кодирующих
постериоральные и антериоральные детерминанты – белки
Nos (nanos мРНК) - постериоральный детерминант,
Bicoid (bicoid мРНК) - антериоральный детерминант,
Hunchback (hunchback мРНК), Caudal (caudal мРНК), и др.
Накопление маскированных мРНП (информосом) в яйце.

плодотворение:
Демаскирование nanos мРНК в заднем отделе яйца,
синтез Nos в заднем отделе яйца,
диффузия Nos и установление задне-переднего градиента
вдоль яйца и затем вдоль передне-задней оси эмбриона.

Демаскирование нелокализованной hunchback мРНК,


ее маскирование белком Nos по его градиенту,
установление передне-заднего градиента белка Hunchback.

азвитие:
МОДЕЛЬ УСИЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ПОЛИ(А)-ХВОСТА
НА КЭП-ЗАВИСИМУЮ ИНИЦИАЦИЮ ТРАНСЛЯЦИИ

40S

5'-UTR

CAP

POLY(A)
40S
60S
CODING REGION
3'-UTR

60S
СХЕМА МАСКИРОВАНИЯ мРНК
СХЕМА МАСКИРОВАНИЯ мРНК
(начальная стадия)

YB

ПЕРВИЧНЫЙ