Вы находитесь на странице: 1из 50

А.С.

Спирин

2006 г.

Лекция 10

Терминация трансляции,
котрансляционное сворачивание белка
и трансмембранная транслокация
ЭЛО Н ГАЦ И Я

мРН К мРН К
5' 3'

ТЕРМ И Н А
П ОЛ И РИ БО С О М А

ЦИ
Я
ЗА В Е РШ Ё Н Н Ы Й
БЕЛО К

С В О БОД Н Ы Е РИ БО С О М Ы
ТРАНСЛЯЦИОННЫЕ ПАУЗЫ
НЕРАВНОМЕРНОСТЬ ЭЛОНГАЦИИ –
ТРАНСЛЯЦИОННЫЕ ПАУЗЫ

(1) Модулирующие кодоны:


кодоны редких синонимных тРНК, особенно их тандемы.
(2) Структурные барьеры на мРНК
(стабильные шпильки, псевдоузлы, третичная структура).
(3) Ингибиторные аминокислотные последовательности
растущих пептидов.
РЕДКИЕ («МИНОРНЫЕ») тРНК И
РЕДКО ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ («МОДУЛИРУЮШИЕ») КОДОНЫ

Escherichia coli:
Антикодон: Кодоны:
tRNAArg U*CG CGA, CGG
tRNAArg U*CU AGA, AGG
tRNAIle C*AU AUA
tRNALeu U*AA UUA, UUG
tRNAPro GGG CCC, CCU
РАБОЧИЙ (ЭЛОНГАЦИОННЫЙ) ЦИКЛ РИБОСОМЫ
ОСТАНОВКА НА ТАНДЕМЕ КОДОНОВ CGA-CGG ВСЛЕДСТВИЕ ДEФИЦИТА РЕДКОЙ тРНК

tRNAUCGArg

Arg-tRNAUCG ?
РАБОЧИЙ (ЭЛОНГАЦИОННЫЙ) ЦИКЛ РИБОСОМЫ
ОСТАНОВКА НА ПЕПТИДЕ, ИНГИБИРУЮЩЕМ ПЕПТИДИЛ-ТРАНСФЕРАЗНЫЙ ЦЕНТР

LysLysLysLysLysLys
MetValLysThrAsp
MetSerThrSerLysAsnAlaAsp
РАБОЧИЙ (ЭЛОНГАЦИОННЫЙ) ЦИКЛ РИБОСОМЫ
СТРУКТУРНЫЙ БАРЬЕР НА мРНК

Очень стабильная шпилька,


псевдоузел или
третичеая структура
ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
ЭЛО Н ГАЦ И Я

мРН К мРН К
5' 3'

ТЕРМ И Н А
П ОЛ И РИ БО С О М А

ЦИ
Я
ЗА В Е РШ Ё Н Н Ы Й
БЕЛО К

С В О БОД Н Ы Е РИ БО С О М Ы
ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ:
ТРИ ЭТАПА

(3) Узнавание терминирующего кодона в А-участке рибосомы:


связывание терминирующих факторов.
(4) Освобождение полипептида:
гидролиз сложно-эфирной связи между тРНК и С-концом
пептида.
(5) Эвакуация деацилированной тРНК из Р-участка рибосомы и
терминирующих факторов из А-участка.
БЕЛКОВЫЕ ФАКТОРЫ ТЕРМИНАЦИИ
И ИХ «КОДОНЫ»

Прокариоты Эукариоты и археи


Class 1:
RF1 UAA eRF1 UAA
UAG UAG
RF2 UAA UGA
UGA

Class 2:
RF3 eRF3
Схема третичной структуры фактора терминации 1-го класса
(eRF1)

Взаимодействие
Взаимодействие
с eRF3
с А-участком
на 40S

Взаимодействие
с ПТЦ на 60S
Схема третичной структуры фактора терминации 2-го класса
(eRF3)
eRF3 EF1
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
(ЭУКАРИОТЫ)

(1) Связывание ГТФ


Конформационная перестройка
(2) Гидролиз ГТФ
Освобождение eRF3
(3) Гидролиз сложноэфирной связи
Освобождение полипептида
(4) Освобождение eRF1
Диссоциация рибосомы
Уход (вытеснение) тРНК из 40S
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
(ПРОКАРИОТЫ)
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
(ПРОКАРИОТЫ)

RF3
+
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
(ПРОКАРИОТЫ)
ПУТИ РАСТУЩЕГО ПОЛИПЕПТИДА
ЭЛО Н ГАЦ И Я

мРН К мРН К
5' 3'

ТЕРМ И Н А
П ОЛ И РИ БО С О М А

ЦИ
Я
ЗА В Е РШ Ё Н Н Ы Й
БЕЛО К

С В О БОД Н Ы Е РИ БО С О М Ы
ТРИ ПУТИ РАСТУЩЕГО ПОЛИПЕПТИДА:

• Ко-трансляционное сворачивание в компактную глобулу.

• Взаимодействие недосвернутого или неправильно


свернутого полипептида с шаперонами.

• Ко-трансляционная трансмембранная транслокация.


ЭЛО Н ГАЦ И Я

мРН К мРН К
5' 3'

ТЕРМ И Н А
П О Л И РИ БО С О М А

ЦИ
Я
ЗА В Е РШ Ё Н Н Ы Й
БЕЛО К

С В О БОД Н Ы Е РИ БО С О М Ы
Котрансляционное сворачивание глобина
и связывание гема
А Р И БО С О М А

N -ко н е ц

Б Р И БО С О М А

F
E

В Р И БО С О М А
ШАПЕРОНЫ И ШАПЕРОНИНЫ

Прокариоты Эукариоты

Система Hsp70/DnaK шаперонов:

Dna K Hsp70

Dna J Hsp40

GrpE

Шаперониновая система:

Gro EL: (60 kDa)14 TRiC: (55 kDa)16

Gro ES: (10 kDa)7


Связывание растущего пептида с шаперонами
ТРАНСМЕМБРАННАЯ ТРАНСЛОКАЦИЯ РАСТУЩЕГО ПОЛИПЕПТИДА
СИГНАЛЬНЫЙ ПЕПТИД

Отщепляемая сигнальная последовательность (n – h – c):


N-конец растущего полипептида, 15 – 30 аминокислотных остатков.
Короткий «+»-участок (группа Lys, Arg, His) –
– гидрофобный участок (7 - 13 остатков, Leu, Ile, Phe, Trp, Ala) –
– консервативный участок (5 - 7остатков, место расщепления).
СИГНАЛЬНЫЙ ПЕПТИД

Отщепляемая сигнальная последовательность (n – h – c):


N-конец растущего полипептида, 15 – 30 аминокислотных остатков.
Короткий «+»-участок (группа Lys, Arg, His) –
– гидрофобный участок (7 - 13 остатков, Leu, Ile, Phe, Trp, Ala) –
– консервативный участок (5 - 7остатков, место расщепления).

Не отщепляемая сигнальная последовательность:


Внутренняя часть растущего полипептида.
Группа «+»-аминокислот (Lys, Arg, His) –
– гидрофобный участок (20 - 25 остатков).
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ СОБЫТИЙ В ПРОЦЕССЕ
КОТРАНСЛЯЦИОННОГО ПРИКРЕПЛЕНИЯ РАСТУЩЕГО ПОЛИПЕПТИДА К
МЕМБРАНЕ ЭНДОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО РЕТИКУЛУМА

Arrest of
elongation!
СХЕМА СУБЪЕДИНИЧНОЙ СТРУКТУРЫ
СИГНАЛ-УЗНАЮЩЕЙ РНП-ЧАСТИЦЫ

+ SIX
PROTEIN
SRP = SUBUNITS
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ СОБЫТИЙ ИНИЦИАЦИИ
ТРАНСМЕМБРАННОЙ ТРАНСЛОКАЦИИ
Место выхода N-конца растущего полипептида из рибосомы
по данным иммуно-электронной микроскопии
L.A. Ryabova, O.M. Selivanova, V.I. Baranov, V.D. Vasiliev and A.S. Spirin (1988)
FEBS Letters 226: 255-260.
Трансмембранный пептид-проводящий канал
(вид с торца, со стороны цитоплазмы)

Латеральные
ворота Пробка

B. van den Berg, W.M. Clemons, I. Collinson, Y. Modls, E. Hartmann, S.C. Harrison and T.A. Rapoport (2004)
Nature 427: 36-44.
Трансмембранный пептид-проводящий канал
(вид боку, со стороны, противоположной латеральным воротам)

B. van den Berg, W.M. Clemons, I. Collinson, Y. Modls, E. Hartmann, S.C. Harrison and T.A. Rapoport (2004)
Nature 427: 36-44.
Стадии котрансляционной трансмембранной транслокации
секреторного белка

B. van den Berg, W.M. Clemons, I. Collinson, Y. Modls, E. Hartmann, S.C. Harrison and T.A. Rapoport (2004)
Nature 427: 36-44.
Котрансляционная и посттрансляционная трансмембранная транслокация
новосинтезированного белка у грам-отрицательных бактерий
КОНЕЦ.

ДО СВИДАНИЯ!
Терминация трансляции
A

5’ C G UUAA 3’
G C A*

P A
Г
5’ C G UU AA 3’

R F1

G C A*
R F3

Б
5’ C G UU AA 3’
G C A*
R F1
P
R F3

H 20
Д
5’ C G UUAA 3’

R F1

В R F3
5’ C G UUAA 3’
G C A*
R F1
P
R F3
СТРУКТУРНЫЙ БАРЬЕР НА мРНК
ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ eEF2

Something bad!
Mitogenic stimulation

2+
Elevation of cytoplasmic Ca concentration

Activation of eEF-2 kinase

Phosphorylation of eEF-2

Arrest of translation

Disappearance of short-lived proteins


Death!

Induction of immediate-early genes

Transition to proliferative state


EF-Tu (EF1A)

GDP Form GTP Form


СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
У ПРОКАРИОТ
СХЕМА ТЕРМИНАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
У ЭУКАРИОТ
ШАПЕРОНЫ И ШАПЕРОНИНЫ

Прокариоты Эукариоты

[Trigger factor = TF] [NAC]

DnaK Hsp70
DnaJ Hsp40
GrpE (20 kDa)

GroEL (60 kDa)14 TRiC = CCT


GroES (10 kDa)7

[Hsp90]

Оценить