Вы находитесь на странице: 1из 5

БИОЛОГИЯ

КРЕАТИНФОСФОКИНАЗНЫЙ ПУТЬ ТРАНСПОРТА ЭНЕРГИИ


В МЫШЕЧНЫХ КЛЕТКАХ

В. И. КАПЕЛЬКО
Московский государственный институт радиоэлектроники и автоматики (технический университет)

ВВЕДЕНИЕ
CREATINEPHOSPHATE KINASE Функция всех клеток в организме зависит от адекватно-
го энергообеспечения. Эта потребность особенно высо-
ENERGY TRANSPORT
ка в таких интенсивно работающих органах, как голо-
IN MUSCLE CELLS вной мозг, сердце, почки, скелетные мышцы. Именно в
тканях этих органов наряду с молекулами АТФ, являю-
V. I. KAPEL’KO
щимися субстратом для различных АТФаз, обнаружено
высокое содержание креатинфосфата (Кф) – другого
Main stages of the development of the “crea- фосфорного соединения с макроэргической фосфор-
tine phosphate shuttle” concept as an alterna- ной связью. Молекулы Кф были идентифицированы
tive way of transport in phosphate bonds in даже несколько раньше, чем АТФ, и их роль казалась
cells are discussed. Taking cardiomyocytes as вполне понятной после обнаружения реакции Ломана
(1934 год):
an example, the crucial role of this route
toward ensuring the fulfillment of the cardiac АТФ + креатин Кф + АДФ (1)
pump function is shown. или

Рассмотрены основные стадии формирова- H CH3


ния концепции “креатинфосфатного чел- ATФ +H N C N CH2 C O−
нока” как альтернативного пути транс- NH2 O
порта фосфатных связей в клетках. На Креатин

примере сердечных клеток показана веду- O− H CH3


щая роль данного пути в обеспечении на- O P N C N CH2 C O− + AДФ

сосной функции сердца.


O NH2 O
Креатинфосфат

Избыток АТФ, синтезируемого в клетке, использу-


ется ферментом креатинфосфокиназой (КФК) для за-
пасания энергии в форме Кф, рассматриваемого таким
образом как резервная форма запаса энергии в клетках.
Такая точка зрения была доминирующей в течение де-
© Капелько В.И., 2000

сятилетий и до сих пор представлена в некоторых учеб-


никах. Однако достижения биохимиков в 70-х годах
потребовали пересмотра этой традиционной концеп-
ции, и после длительной дискуссии доминирующим
стало представление о том, что Кф служит удобной
www.issep.rssi.ru формой не только запасания, но и транспорта энергии
в клетках.

8 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 1 1 , 2 0 0 0
БИОЛОГИЯ
ТРАНСПОРТ ЭНЕРГИИ В КЛЕТКАХ ток АДФ от миофибрилл к митохондриям вряд ли мо-
Согласно традиционной концепции, реакция (1) долж- жет обеспечить высокую скорость использования энер-
на находиться в состоянии кинетического равновесия гии в сократительном аппарате.
и не должно существовать серьезных ограничений В отличие от этого коэффициент диффузии Кф и
диффузии молекул внутри клеток. В таком случае уско- креатина примерно вдвое выше, чем АТФ, и скорость
ренное использование молекул АТФ, например в со- потока в связи с более высокими концентрациями этих
кратительном процессе, будет сопровождаться сниже- соединений еще выше – 122 и 103 мМ/мин/г. Эти вели-
нием концентрации АТФ, что создаст условия для чины примерно на три порядка выше, чем для АДФ, что
протекания обратной реакции, то есть ресинтеза АТФ. заведомо превышает максимальную скорость использо-
При этом допускается, что высокие концентрации вания АТФ. Кроме того, АТФ и АДФ на пути диффузии
АТФ и Кф сохраняются именно вблизи сократительно- могут легко связываться с различными белками – мио-
го аппарата. Однако в большинстве скелетных мышц, а зином и другими АТФазами, в то время как Кф и креатин
также в сердечной мышце и нейронах головного мозга являются субстратом только одного фермента – КФК.
источником АТФ являются митохондрии. Хотя они В биохимических исследованиях было обнаружено
расположены вблизи миофибрилл, но все же молекулы существование различных изоферментов КФК не толь-
АТФ должны преодолевать определенный путь не ко в разных органах, но и в одной и той же клетке. В ча-
только к миофибриллам, но и проникать внутрь них стности, в мышечных клетках идентифицированы четы-
(рис. 1), а молекулы АДФ, в свою очередь, двигаться в ре изофермента – в митохондриях, миофибриллах,
обратном направлении. мембранах саркоплазматического ретикулума, а также в
Скорость диффузии макромолекул в миоплазме за- комплексе с мембранными транспортными белками.
висит прямо от разницы концентраций и обратно от Наличие разных кинетических характеристик изофер-
размеров молекул. Расчетная величина потока АТФ для ментов в зависимости от их локализации позволило
сердечной мышцы определена как 35 мМ/мин/г, и эта предположить, что в митохондриях преимущественно
величина примерно в 250 раз превышает измеренную происходит прямая реакция, то есть превращение АТФ в
скорость использования АТФ. Расчетная величина по- Кф, а в местах использования энергии — обратная реак-
тока АДФ составляет 0,1 мМ/мин/г, что на 20% меньше ция. Такое предположение основано на допущении, что
измеренной скорости использования АДФ. Столь зна- концентрации АТФ и креатина высоки вблизи митохон-
чительная разница скорости потока двух близких по дрий и низки вблизи миофибрилл. Этого не допускала
размеру молекул обусловлена крайне низкой концент- традиционная концепция, постулировавшая равномер-
рацией свободного АДФ (порядка 0,04 мМ), обуслов- ное распределение соединений по миоплазме. Данный
ленной тем, что подавляющее большинство молекул постулат был подвергнут сомнению еще в 1966 году Бес-
АДФ находится в связанном состоянии. Поэтому по- сманом и Фонио, допустившими существование отсе-
ков, компартментов в клетке, в каждом из которых про-
исходит либо прямая, либо обратная реакции. А вскоре
традиционной концепции был нанесен серьезный удар,
АТФ когда С. Гудбьярнассон и соавторы (1970 год) установи-
ли, что при ишемии (прекращении кровотока) сокраще-
АДФ ния сердца останавливаются через 1–2 мин, когда запа-
сы АТФ снижаются всего лишь на 20%, а содержание Кф
гораздо более значительно. Эти результаты заставляли
АДФ допустить, что лишь небольшой запас АТФ в клетке мо-
жет быть использован для сокращения, в то время как
АТФ основной запас АТФ остается невостребованным.
На основании этих данных стала утверждаться
Мх Мф иная точка зрения на Кф, а именно ему стали приписы-
вать транспортную функцию переноса фосфатных
групп из митохондрий к миофибриллам. Молекула Кф
Рис. 1. Схема части мышечной клетки, представляю-
щая традиционную концепцию транспорта энергии –
выполняет таким образом роль челнока, позволяюще-
аденилатный путь. Молекулы АТФ (синие), синтези- го быстро и плавно пополнять расходуемые запасы
рованные в митохондриях (Мх), диффундируют в АТФ без существенного повышения ее концентрации.
глубь миофибрилл (Мф). После гидролиза АТФ мио- Эту ситуацию С. Бессман образно назвал «беседой»
зиновой АТФазой образующиеся молекулы АДФ
(голубые) диффундируют в обратном направлении между двумя изоэнзимами КФК. Общая схема данного
(пунктирные линии) представления дана на рис. 2.

К А П Е Л Ь К О В . И . К Р Е А Т И Н Ф О С Ф О К И Н А З Н Ы Й П У Т Ь Т РА Н С П О Р ТА Э Н Е Р Г И И В М Ы Ш Е Ч Н Ы Х К Л Е Т К А Х 9
БИОЛОГИЯ
Образованная в процессе окислительного фосфо- функции содержание АТФ не меняется, а также почему
рилирования молекула АТФ переносится через внут- при внезапной гипоксии или ишемии снижается сна-
реннюю мембрану митохондрий посредством специа- чала содержание Кф, а затем АТФ. Можно полагать,
лизированной молекулы – АТФ/АДФ-транслоказы, что сам креатинфосфатный путь транспорта энергии
одновременно вносящей АДФ в матрикс митохондрий формируется в онтогенезе под влиянием значительно-
го повышения уровня функции. Так, известно, что в
сердце плода имеется только аденилатный путь транс-
порта, то есть транспорт АТФ, а Кф-путь возникает
только после рождения, когда резко возрастает нагруз-

АТФаза
ка на сердце. У многих беспозвоночных функцию Кф
выполняет другой фосфаген – аргининфосфат.
ААТ
Кф ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ФУНКЦИИ МЫШЦ
АТФ КФК
По мере утверждения данной концепции в среде био-
КФК химиков к ней стали проявлять интерес и физиологи,
старавшиеся внести свою лепту в дискуссию. Первые
К обнадеживающие данные были получены на препара-
Митохондрия Миофибрилла тах изолированных миофибрилл, когда оказалось, что
их расслабление в присутствии Кф происходит быстрее
и полнее, чем при наличии высокой концентрации
Рис. 2. Схема креатинфосфатного челнока между АТФ. Это хорошо согласовалось с наличием диффузи-
митохондрией и миофибриллой. Молекулы АТФ, об-
разованные в реакциях окислительного фосфори- онных ограничений для АТФ и существованием в мио-
лирования, выносятся из матрикса митохондрии фибриллах изофермента КФК. Известно, что при недо-
молекулой АТФ/АДФ-транслоказы (ААТ) в межмем- статочном рефосфорилировании АДФ в миофибриллах
бранное пространство, где одна фосфатная связь
(синий кружок) улавливается молекулой креатинфо-
возникает контрактура – состояние повышенной упру-
сфокиназы (КФК) и переносится на креатин (К). Но- гости, обусловленное неразмыканием части актомио-
вообразованная молекула креатинфосфата (Кф) зиновых связей.
диффундирует к миофибрилле или другим участкам
клетки, где расположены молекулы КФК. Миофиб- Функциональные исследования концепции транс-
риллярный изофермент КФК переносит фосфатную порта энергии на изолированных мышцах или сердцах
связь на молекулу миозиновой АТФазы, где уже на- затруднены в связи с необходимостью поиска адекват-
ходится АДФ (два синих кружка), и молекула АТФ ных подходов для воздействия на тот или иной вид
подвергается гидролизу, а освободившаяся моле-
кула креатина возвращается к митохондрии транспорта. Были отработаны два приема, снижающие
креатинкиназный поток, – ингибирование активности
для рефосфорилирования. Попадая в межмембранное КФК в условиях острого опыта, а также снижение со-
пространство, молекула АТФ улавливается близко рас- держания креатина в клетках в хроническом опыте.
положенной молекулой КФК, и одна фосфатная связь Для снижения активности КФК применяли неспеци-
переносится на креатин. Молекула образованного Кф фический ингибитор иодацетамид (0,5 мМ), который
свободно диффундирует в миоплазме, достигая мест помимо почти полного подавления активности КФК
локализации других изоферментов КФК, где фосфат- (до 1%) ингибировал также активность ферментов гли-
колиза, хотя в значительно меньшей степени, но не
ная связь вновь переносится на имеющиеся вокруг мо-
влиял на окислительное фосфорилирование. Действие
лекулы АДФ. Чем интенсивнее происходит гидролиз
иодацетамида сопровождалось умеренным снижением
АТФ, например в миофибриллах, тем большее количе-
как АТФ, так и Кф на 31 и 44% соответственно [1].
ство молекул АДФ может служить акцепторами фос-
фатной связи, тем сильнее ускоряется распад Кф и ос- Сократительную функцию изолированного сердца
вобождающийся креатин возвращается назад к крыс оценивали в двух режимах: изоволюмическом, ког-
митохондриям, стимулируя новообразование Кф. да левый желудочек при сокращении создавал давление
в баллончике постоянного объема, введенном в его по-
Концепция Кф-челнока позволяет успешно объяс- лость, и в естественном режиме, когда желудочек напол-
нить, почему Кф находится в столь высокой концент- нялся перфузатом из левого предсердия и изгонял его в
рации (в 2–4 раза выше, чем АТФ) в сердечной и крас- аорту. Первый режим позволял оценить способность ми-
ных скелетных мышцах, работающих или способных окарда к развитию силы, а второй – к выполнению на-
работать с высокой интенсивностью в течение дли- сосной функции, зависевшей от всех основных свойств
тельного времени, почему при высокой интенсивности сердца: растяжимости, сократимости и расслабимости.

10 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 1 1 , 2 0 0 0
БИОЛОГИЯ
После добавления к перфузату иодацетамида спо- КДД, мм рт. ст.
собность сердец развивать давление в изоволюмичес-
ких условиях сохранялась, но они оказались неспособ- 16
ными к выполнению насосной функции (рис. 3). Эти
результаты позволяли предполагать нарушение про- 12
цессов расслабления и растяжения сердца. Действи-
тельно, диастолическое давление в левом желудочке
8
сердец, обработанных иодацетамидом, возрастало зна-
чительно круче даже при меньшей степени наполнения
сердца (рис. 4). Следствием недостаточного наполне- 4
ния левого желудочка является и недостаточное растя-
жение мышечных волокон, что ограничивает как раз- 0
витие давления, так и выброс жидкости из желудочка. 0,08 0,16 0,24 0,32
Этот результат согласуется с упомянутыми выше опы- Объем наполнения ЛЖ, мл
тами на изолированных миофибриллах.
Рис. 4. Влияние иодацетамида на растяжимость
В тех же условиях опыта была проведена оценка изолированного сердца крыс. Характеристика рас-
деятельности сердца после ингибирования не креатин- тяжимости получена во время объемной нагрузки на
фосфатного, а аденилатного пути транспорта. Это до- сердце (см. рис. 3) и представляет собой соотноше-
ние между степенью наполнения сердца и конечно-
стигалось применением 2-деоксиглюкозы (ДОГ), оста- диастолическим давлением (КДД) в левом желудоч-
навливающей гликолиз на уровне глюкозо-6-фосфата ке, отражающим упругость миокарда. Данные пред-
и создающей так называемую фосфатную ловушку. ставляют собой средние величины из 8–10 опытов и
их средние ошибки. Сдвиг кривой вверх и влево под
Вследствие прогрессирующего дефицита фосфата со- влиянием иодацетамида (квадраты) характеризует
держание АТФ снижалось примерно в три раза, в то снижение растяжимости
время как содержание Кф снижалось всего на треть.
Соответственно на 30% уменьшалась интенсивность которой был снижен всего на 30% (см. рис. 3), а макси-
потока через креатинфосфокиназу. мальная работа – на 20%. В изоволюмических условиях
После обработки ДОГ сердца были способны осу- различий с контрольной группой не было отмечено.
ществлять насосную функцию, максимальный уровень
Сравнение этих результатов показывает, что инги-
бирование креатинфосфатного пути транспорта энер-
Сердечный выброс, мл/мин гии посредством иодацетамида сопровождается значи-
50
тельно более глубокой депрессией насосной функции
сердца, чем ингибирование аденилатного пути транс-
40 Контроль порта посредством ДОГ. В первом случае, при домини-
ровании аденилатного пути, сократительная функция
30 сердца остается неизменной только в изоволюмических
ДОГ условиях (при постоянной степени растяжения) и невы-
соком уровне функции. В этих условиях энергетический
20 запрос миофибрилл, по-видимому, может вполне быть
удовлетворен прямой диффузией АТФ, поскольку сни-
10 женная скорость потока через КФК все же выше, чем
скорость гидролиза АТФ. Однако даже в этих условиях
ИАА насосная функция сердца резко нарушена из-за непол-
0 5 10 15 20 25 ного расслабления и ухудшенного наполнения сердца.
ДН, см водного столба
Во втором случае, при доминировании креатинфос-
Рис. 3. Насосная функция изолированного сердца фатного пути, умеренно сниженная скорость потока че-
крыс при действии иодацетамида (ИАА) или 2-деок- рез КФК заведомо превышает скорость гидролиза АТФ,
сиглюкозы (ДОГ). Результаты получены в группах из
7–10 опытов и представляют собой средние величи-
и энергоснабжение миофибрилл оказывается достаточ-
ны и их средние ошибки. Увеличение давления на- ным для поддержания нормальной расслабимости и
полнения (ДН, см водного столба) усиливает приток растяжимости сердца. Это позволяет полагать, что кре-
к левому желудочку, и в результате возрастает сер-
атинфосфокиназная система является жизненно необхо-
дечный выброс (СВ) в группах контроля и ДОГ, а в
группе ИАА выброс практически отсутствует димой для осуществления полного расслабления миофи-

К А П Е Л Ь К О В . И . К Р Е А Т И Н Ф О С Ф О К И Н А З Н Ы Й П У Т Ь Т РА Н С П О Р ТА Э Н Е Р Г И И В М Ы Ш Е Ч Н Ы Х К Л Е Т К А Х 11
БИОЛОГИЯ
брилл и их адекватного растяжения в диастоле, а также зования и распада актомиозиновых связей в миофиб-
для поддержания высокой работоспособности сердца. риллах сочеталось со снижением АТФазной активности
Другой подход к оценке функционального значе- миозина, что означает снижение потребления энергии.
ния Кф-пути был основан на применении β-гуанидин- Одновременно развивалась гипертрофия миокарда, не-
пропионата (ГП) – конкурентного ингибитора транс- обходимая для поддержания прежнего уровня сократи-
порта креатина в клетки. Добавление его к пищевому тельной функции сердца. Близкие к этим данные были
рациону крыс в течение нескольких недель сопровож- получены при клинических обследованиях людей с сер-
далось значительным снижением содержания креатина дечной патологией: оказалось, что гипертрофия сердца
в мышцах и сердце до 5–10%. Поскольку ГП лишь в ог- у людей сочетается со сниженной КФК-активностью.
раниченной степени мог заменить креатин в качестве Креатинфосфокиназный путь транспорта имеет
акцептора фосфата, указанная ситуация значительно важное значение не только для сократительной актив-
ослабляла функцию Кф-челнока. Первые исследова- ности сердца, но и для обеспечения энергией работы
ния в 1984–1985 годах на изолированных сердцах или мембранных насосов и синтеза белка. В опытах с ис-
выделенных из них папиллярных мышцах показали, пользованием ядерно-магнитного резонанса было по-
что максимальный уровень функции сохранялся таким казано, что поток через КФК усиливается при растяже-
же, как и в контрольной группе, что позволило авторам нии даже несокращающегося изолированного сердца.
поддержать тех биохимиков, которые отвергали кон- В целом функциональные исследования подтверди-
цепцию Кф-челнока. Однако более поздние исследова- ли концепцию КФ-челнока, сформулированную биохи-
ния показали неправомерность такого заключения. миками, и позволили полагать, что функциональное
Действительно, было обнаружено, что, несмотря на значение креатинфосфокиназного пути транспорта со-
девятикратное снижение содержания Кф после шести- стоит в эффективной трансляции высокого отношения
недельного добавления к пище ГП, работа сердца в изо- АТФ/АДФ, существующего в межмембранном отсеке
волюмических условиях не изменялась [2]. Скорость митохондрий, к миофибриллам, мембранным ионным
потока через КФК составляла около 50% контрольной насосам и другим местам использования энергии в клет-
величины, то есть даже при низком уровне Кф скорость ках. Ограничение роста АДФ при функциональных на-
ресинтеза АТФ была достаточной для восполнения грузках предохраняет запас АТФ от распада с образова-
энергорасхода при данной нагрузке. Однако при макси- нием АМФ и аденозина, что имеет место при гипоксии.
мальной нагрузке на сердце его работа и поглощение Одновременно происходит закономерное накопление
кислорода оказались на 30% ниже контрольного уровня. АДФ в миофибриллах, повышается их ригидность, за-
Как и при действии иодацетамида, снижение насосной трудняющая наполнение сердца, падает его насосная
функции было связано с недостаточным наполнением функция. Сопоставление данных о сравнительном ин-
ЛЖ и растяжением мышечных волокон. Подобное сни- гибировании двух путей транспорта энергии позволяет
жение максимальной работоспособности было отмече- заключить, что креатинфосфокиназный путь является
но при исследовании функции медленных скелетных основным для энергоснабжения миофибрилл миокарда
мышц животных с дефицитом креатина. и поддержания нормальной насосной функции сердца.
Таким образом, как в острых, так и в хронических
опытах было установлено, что искусственно вызванное СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
снижение потока через КФК неизбежно сопровожда- 1. Капелько В.И., Куприянов В.В., Новикова Н.А. и др. Функ-
ется снижением максимальной работоспособности циональное значение двух путей транспорта энергии в кар-
сердца и медленных скелетных мышц. Степень этого диомиоцитах // Кардиология. 1992. № 32 (4). С. 71–74.
снижения примерно соответствовала степени умень- 2. Капелько В.И., Куприянов В.В., Новикова Н.А. и др. Механиз-
мы приспособления сократительной функции и энергетичес-
шения креатинкиназного потока. Значительное его кого метаболизма сердца к условиям хронического дефицита
снижение при ингибировании функции КФК в острых фосфокреатина // Физиол. журн. 1988. № 34 (1). С. 3–11.
опытах сопровождалось развитием острой сердечной
недостаточности. В хроническом опыте, при меньшей Рецензент статьи А.Н. Тихонов
степени снижения потока и мобилизации некоторых ***
компенсаторных факторов, нарушалась лишь макси-
мальная работоспособность. Валерий Игнатьевич Капелько, доктор медицинских
наук, профессор, руководитель лаборатории экспери-
Дальнейшие исследования позволили выявить не- ментальной патологии сердца Российского кардиоло-
которые компенсаторные возможности кардиомиоци- гического научно-производственного комплекса МЗ.
тов, которые могли быть мобилизованы при умеренном Область научных интересов – сократительная функция
и длительном ограничении поступления креатина в ми- сердца и ее энергообеспечение в норме и при заболе-
окард молодых животных. Замедление скорости обра- ваниях сердца. Автор 240 статей и одной монографии.

12 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 1 1 , 2 0 0 0