TCNICAS DE CULTURA EM MICOLOGIA

Prof. Carlos Fernando dos Santos CRBM 3158

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Sabouraud Clorafenicol (SAB)

Meio de enriquecimento - Semeia vrios tipos de fungos. Na microbiologia meio seletivo

gua destilada.......1000ml
(isentas de elementos nutricionais)

Peptona................10g
carne degradados)

(Peptona de carne pedaos de

Dextrose...............40g (Carboidratos) gar-gar.............20g (15 a 20g, por litro) Clorafenicol...........50mg* pH.......................4,0 a 5,0

(Antibitico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 60mg)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Sabouraud Clorafenicol (SAB)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Batata Dextrose (BDA)

(Meio de enriquecimento, infuso da batata, no bom usar quando se quer crescimento de microorganismo)

gua destilada.........500ml Infuso de batata.....500ml Glicose....................10g (Fonte de carboidrato) gar-gar.............15g (Dar consistncia) Clorafenicol...........50mg* (Inibir o crescimento
bacteriano)

pH.......................4,0 a 5,0

(pH cido)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Batata Dextrose (BDA)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Czapek (CZK)

(Enriquecimento, para fungos presentes no solo e diferencial, quando quer crescer fungos geoflico(afinidade com a terra))

gua destilada.............................1000ml Sacarose......................................30g (fonte de

carboidrato)

Nitrato de sdio...........................3g Fosfato dibsico de potssio........1,0g Sulfato de magnsio....................0,5g Cloreto de potssio......................0,5g Sulfato de ferro............................0,01g gar-gar....................................15g Clorafenicol.................................50mg/L* pH...............................................4,0 a 5,0

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
gar

Czapek (CZK)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Mycosel (MYC)

(Seletivo para dermatfilos)

gua destilada...................1000ml Peptona.............................10g Glicose...............................10g gar-gar..........................15g Ciclo-heximida...................0,4g (Inibe o

crescimento de fungos saprofitos)

Clorafenicol.......................0,05g pH.....................................4,0 a 5,0

(cido)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Mycosel (MYC)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Infuso de Crebro e Corao Bovino (BHI)

(Meio seletivo, para fungos que crescem em tecidos profuntos)

gua destilada............................1000ml Infuso de Crebro e Corao(Difco)............................37g gar-gar...................................20g Clorafenicol.................................0,05g pH...............................................7,4 (pH

bsico)

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

gar Infuso de Crebro e Corao Bovino (BHI)

IMPORTANTE Incubao a 35C!

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Meios Semi-slidos Caldos

Semi-slidos

Caldos

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PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Observaes Importantes

Ferver meios que contm gar-gar Adicionar o antibitico somente aps fervura do meio. Desprezar meios que queimarem Autoclavao ideal =121C por 20 min.

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ASSEPSIA E ESTERILIZAO Vidrarias Detergentes neutros Autoclave 121C/20min Meios de cultura Autoclave 121C/20min Bancadas lcool 70% Hipoclorito de sdio Cmara de fluxo laminar lcool 70%, Luz UV 20 min. Filtro de ar milipore*

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ASSEPSIA E ESTERILIZAO

Hipoclorito de Sdio

Desinfeco Pervia da Bancada Bico de Bunsein

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DESINFECO

Vidrarias Meios de cultura utilizados Filtro milipore Caixas de descarte (Descarpack)* Autoclave 121C durante 20 minutos.

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DESINFECO E ESTERILIZAO

Autoclave 121C durante 20 minutos

Interior do Autoclave

Termmetro Barmetro

Autoclave Vertical

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CINTICA DO CRESCIMENTO FNGICO
Leveduras
Fisso binria / Gemulao Colnias circulares com bordas variveis

Cicatriz gemular

Bordos Diferencialdos

Fisso binria / Gemulao

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CINTICA DO CRESCIMENTO FNGICO
Fungos

Filamentosos
de maturao distintas

Centrfugo
Zonas

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ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SLIDAS

Caldo YG 25ml Balo de 250ml Rolha de gaze + algodo 25g da amostra a ser analisada Crescimento de 5-7 dias Agitao constante(*) Temperatura ambiente(*)

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ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SLIDAS

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SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS

Tcnica de pique central em placa de petri Tcnica de piques em gradiente em PP. Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado

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SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS

Pique Central

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SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS

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ISOLAMENTO DE FUNGOS PS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO

Placas de petri com gar SAB ou BDA Ala de platina em alquota Cmara de fluxo laminar esterilizada
lcool 70% Luz UV 20 min.

Piques em gradiente na placa de petri

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SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Piques em Gradiente

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SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Pique em Meio Inclinado

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SEMEIO DE LEVEDURAS

Tcnica de estrias em placa de petri Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado

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SEMEIO DE LEVEDURAS

Tcnica de estrias em placa de petri Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado

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ISOLAMENTO DE FUNGOS PS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO

Cmara de fluxo laminar esterilizada

lcool 70% Luz UV 20 min.

OBRIGADO!

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